Potensi  Daya  Hambat  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Saluran  Pencernaan  Ikan Bawal Bintang Trachinotus blochii Terhadap Bakteri Vibrio harveyi Secara In- Vitro
Juni Dinda Fransiska¹, Tengku Said Raza’i², Rika Wulandari 2
¹ Alumni Jurusan Budidaya Perairan, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Maritim Raja Ali Haji ² Jurusan Budidaya Perairan, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Maritim Raja Ali Haji
INFO NASKAH ABSTRAK Kata Kunci: Bakteri Asam Laktat,Uji Daya Hambat,Isolasi Bakteri asam laktat (BAL) merupakan mikroflora alami yang terdapat di dalam saluran pencernaan organisme. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui isolat BAL yang  mampu  menghambat  perkembangan  bakteri V.  harveyi .  Metode  penelitian terdiri dari isolasi bakteri, uji morfologi, uji biokimia dan uji fisiologi (uji ketahanan pH,uji  daya  hambat  dan  uji  BSLT).  Hasil  penelitian  mendapatkan  total  isolat sebanyak 10 isolat dengan 4 isolat terpilih. uji daya hambat mendapatkan aktivitas hambat tertinggi terhadap bakteri uji V. harveyi ditunjukkan oleh isolat B1.P4, B2.P4 dan  B4.P4  sebesar  10  mm.  uji  BSLT  mendapatkan  isolate  dengan  nilai  toksisitas terendah ditunjukkan oleh isolat B2.P4 dan B5.P4 dengan nilai regresi sebesar 880, 71. Hasil identifikasi menunjukkan isolat B1.P4 adalah jenis bakteri Leuconostoc sp, isolate  B2.P4  adalah Bacillus sp.  dan  isolat  B4.P4  dan  B5,P4  adalah  jenis Lactococcus sp. Berdasarkan hasil uji daya hambat dan uji BSLT dapat disimpulkan bahwa B4.P4 dan B5.P4 memiki potensi terbaik sebagai probiotik.
Gedung  FIKP Lt.II Jl. Politeknik Senggarang, 29115, Tanjungpinang,Telp: (0771- 8041766, Fax. 0771-7004642. Email: dindafransiska1000@gmail.com , tengku.saidrazai@gmail.com , rika.wulandaridwan@umrah.ac.id

## Inhibitory Effect Of  Lactic Acid Bacteria From Digestive Tract Of
Trachinotus blochii Againts Vibrio harveyi In In- Vitro
Juni Dinda Fransiska¹, Tengku Said Raza’i², Rika Wulandari 2
¹ Alumnus of Aquaculture Department, Faculty of Marine and Fisheries, Raja Ali Haji Maritime University ² Department of Aquaculture, Faculty of Marine and Fisheries, Raja Ali Haji Maritime University
ARTICLE INFO ABSTRACT Keywords: lactic acid bacteria, inhibitory power, isolates Lactic  acid bacteria  (LAB)  was  a  microfolora  found  in  the  digestive  intestinal tract of organisms. The purpose of this study was to determine LAB isolates that have the  inhibitor  effect  againt V.  harveyi .  The  methods  of  this  research  consisted isolation of bacteria, morphology test, biochemical test, and physiological test ( pH resistense test , antibacterial activity assay and BSLT test). The results of the research obtained 10 isolates and 4 selected bacteria. The highest inhibitory activity against V. harveyi test bacteria showed by  isolates B1.P4, B2.P4 and B4.P4 with 10 mm. BSLT test obtained isolates with the lowest toxicity showed by isolates  B2.P4 and B5.P4  isolates  with  the  regression  value  were  880,  71.  The  identification  results showed that B1.P4 were Leuconostoc sp, B2.P4 were Bacillus sp, B4.P4  and B5.P4 were Lactococcus sp.  Based  on  the  results  of  the  test  series,  B4.P4  and  B5.P4 candidats had the potential as probiotic.
Gedung  FIKP Lt.II Jl. Politeknik Senggarang, 29115, Tanjungpinang,Telp: (0771- 8041766, Fax. 0771-7004642. Email: dindafransiska1000@gmail.com , tengku.saidrazai@gmail.com , rika.wulandaridwan@umrah.ac.id
PENDAHULUAN
Intek Akuakultur. Volume 3. Nomor 1. Tahun 2019. E-ISSN 2579-6291. Halaman 57-65
Budidaya ikan laut di Indonesia pada dasarnya memiliki potensi yang cukup besar karena  Indonesia  merupakan  negara  maritim  yang  dikelilingi  oleh  lautan. Komoditas  perikanan  laut  yang  telah  banyak  di  budidayakan  adalah  ikan  bawal bintang, kerapu macan, kerapu tikus, kakap putih dan kakap merah. Hasil budidaya laut  ini  dipasarkan  di  dalam  negeri  maupun  diluar  negeri  seperti  Singapura  dan Hongkong.
Dalam rangkaian kegiatan budidaya ,tidak lepas dari  adalah infeksi penyakit. Kasus penyakit pada kegiatan budidaya ikan ini  mengakibatkan penurunan hasil produksi, dimana  hal  ini  terjadi  akibat  infeksi  mikroorganisme.  Mikroorganisme  penyebab infeksi dapat berasal dari virus, jamur, parasit dan bakteri.
Infeksi bakteri pada ikan laut yang telah teridentifikasi menjadi salah satu penyebab timbulnya penyakit ialah genus Vibrio sp. Bakteri ini memiliki tingkat patogenitas tinggi.  Serangan  bakteri    ini  dikenal  dengan  istilah  Vibriosis.  Vibriosis  timbul akibat  virulensi  bakteri  di  alam  dan  asupan  nutrisi  yang  kurang  baik  sehingga kurang merangsang sistem imun alami pada ikan (innate imunity).
Tindakan  penanganan  penyakit  infeksi  selama  ini  hanya  tergantung  pada penggunaan  antibiotik.  Tindakan  pencegahan  penyakit  dengan  meningkatkan system kekebalan ikan itu sendiri masih kurang. Terdapat beberapa jenis ikan yang dikenal  tahan  akan  infeksi  penyakit,  seperti  ikan  nila,  ikan  lele  dan  ikan  bawal bintang. Jenis ikan laut seperti ikan bawal bintang ( Trachinotus blochii) nantinya diharapkan mampu menghambat populasi bakteri vibrio yang menginfeksi ikan laut atas dasar kesamaan salinitas hidup. Selain itu, diduga di dalam sistem pencernaan ikan bawal bintang juga mengandung mikroba hidup sebagai mikroflora alami yang potensial  sebagai  probiotik  yang  mampu  memberikan  keuntungan  dengan memudahkan  penyerapan  nutrisi  pakan,  mampu  memodifikasi  mikroba,  atau berasosiasi  dengan  inang  danmeningkatkan  respon  inang  terhadap  sumber penyakit.
Salah satu upaya untuk mencegah infeksi bakteri ini adalah dengan penggunaan probiotik. Probiotik diperoleh dari pemanfaatan bakteri asam laktat yang di isolasi dari  usus  ikan,  salah  satunya  dari  ikan  bawal  bintang  karena  diduga  ikan  ini memiliki  koloni  mikroflora  alami  yang  dapat  meningkatkan  kekebalan  tubuh oeganisme.Namun efektifitas daya hambatnya masih belum diketahui.
Tujuan penelitian ini yaitu untuk mengetahui daya hambat bakteri asam laktat yang diisolasi dari saluran pencernaan ikan bawal bintang terhadap bakteri vibrio harveyi  yang ditumbuhkan pada media MRSA dengan melihat zona hambat atau zona bening yang terbentuk pada sekitaran koloni.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Oktober-November  2018  di  balai  karantina ikan, pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan (BKIPM) Tanjungpinang dan  di  laboratorium  fakultas  ilmu  kelautan  dan  perikanan  (FIKP)  Universitas Maritime Raja Ali Haji (UMRAH). Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  6  perlakuan  yang  masing-masing perlakuan  terdiri  dari  3  ulangan.  6  perlakuan  terdiri  dari  2  kontrol  yaitu  kontrol positif  (yakult)  dan  kontrol  negatif  (aquadest)  sedangkan  untuk  4  perlakuan
Intek Akuakultur. Volume 3. Nomor 1. Tahun 2019. E-ISSN 2579-6291. Halaman 57-65
disesuaikan dengan isolat yang didapat dari proses isolasi dari saluran pencernaan ikan bawal bintang.

## Prosedur Kerja 1.Persiapan   Alat dan Bahan
Persiapan alat dan bahan penelitian dilakukan sebelum penelitian dimulai. Alat dan bahan yang harus dipersiapkan seperti :
Alat  :  mikroskop,  autoclave,  incubator,  vortex,  pHmeter,coolbox,  freezer, magnetic stirrer/hot plate, tabung reaksi, cawan petri, pipet tetes, jarum inoculum, mikropipet, Bunsen, alat tulis dan handphone.
Bahan  :    isolat  BAL,bakteri Vibrio  harveyi ,  TSA,  TSB,  NaCl,  kertas  cakram aquadest, media gula,MRSA,CaCO3, Artemia salina , dan SIM.
2. Sterilisasi
Sterilisasi merupakan kegiatan membersihkan suatu benda baik itu alat maupun bahan dari segala jenis  sumber kontaminan dengan menggunakan autoklaf   yang dilakukan selama 15-20 menit pada suhu 121ºC.

## 3. Pengadaan Ikan Sampel
Ikan sampel diperoleh dari desa madong,kecamatan tanjungpinang timur, kota tanjungpinang yang diambil sebanyak 5 ekor.

## 4. Isolasi Bakteri Asam Laktat
Isolasi diawali dengan membedah bagian perut ikan sampel dilanjutkan dengan mengambil  dan  membersihkan  saluran  pencernaan.  Kemudian  usus  tersebut dikeruk sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam larutan fisiologis sebanyak 9 ml sehingga menjadi 10 ml. selanjutnya pengenceran dilakukan dengan mengambil 1 ml dari 10 -1 dan begitu seterusnya hingga pengenceran ke 10 -5 .

## 5. Uji Morfologi

## a. Pewarnaan Gram
Pewarnaan gram diawali dengan membersihkan kaca preparat dengan alkohol 70% dan kemudian teteskan aquaeest pada kaca preparat. Selanjutnya ambil 1 ose bakteri dan homogenkan dengan aquadest pada kaca preparat. Setelah itu difiksasi hingga  kering.  setelah  itu  dilakukan  dengan  meneteskan  larutan-larutan  sesuai urutan  dengan  selang  waktu  yang  berbeda.  Diawali  dengan  meneteskan Crystal violet,  Lugol  iodine,  Alkohol  96%, dan Safranin .  Selanjutnya  dibilas  dengan  air bersih dan diamati dibawah mikroskop.

## b. Uji Katalase
Pengujian  ini  dilakukan  dengan  mengambil  1  ose  bakteri  yang  kemudian  di letakkan  di  atas  kaca  preparat  yang  telah  di  tetesi  dengan  larutan  H2O2  3%. Kemudian amati perubahan yang terjadi pada sampel. Apakah bergelembung atau tidak.

## c. Uji Motilitas
Intek Akuakultur. Volume 3. Nomor 1. Tahun 2019. E-ISSN 2579-6291. Halaman 57-65
Uji motil dilakukan untuk melihat pergerakan bakteri dengan cara mengambil 1 ose bakteri yang kemudian diisolasi pada media SIM selama 24 jam. Bakteri dikatakan motil apabila terdapat pergerakan pada media dan begitu pula sebaliknya.

## 6. Uji Biokimia
Uji biokimia dilakukan dengan cara mengisolasi 1 ose bakteri pada media gula- gula selama 24 jam inkubasi. Hasil diamati dengan melihat perubahan warna media tersebut. Uji biokimia terdiri dari uji indol,uji MR-VP dan uji fermnetasi gula.

## 7. Identifikasi Bakteri
Identifikasi  bakteri  pada  kegiatan  penelitian  ini  dilakukan  dengan membandingkan hasil dari pewarnaan,uji katalase, uji biokimia dan uji fermentasi gula  dengan  merujuk  pada  buku  panduan Bergey’s  Manual  Of    Determinative Bacteriology ( Holt et al 1994).

## 8. Uji Fisiologi

## a. Uji Ketahanan pH
Uji  ini  dilakukan  dengan  mengkultur  isolat  BAL  pada  media  TSB  dengan tingkatan pH yang berbeda yaitu pH 3, 5  7. dan dilakukan dengan 3 kali ulangan pada tiap-tiap jenis BAL

## b. Uji Daya Hambat
Pengujian daya hambat dilakukan dengan meletakkan kertas cakram yang telah di tetesi supernatan BAL pada cawan petri yang berisi media TSA yang didalamnya telah ditanami bakteri Vibrio harveyi. Lalu di inkubasi selama 48 jam.

## c. Uji BSLT (Brine shrimp lethality test)
Uji  BSLT  diawali  dengan  memasukkan Artemia  salina yang  telah  menetas kedalam vial ukuran 5 ml yang telah diisi dengan air laut steril dengan konsentrasi isolate bakteri probiotik yang berbeda yaitu 5 ppm, 10 ppm dan 15 ppm. Setelah itu dibiarkan selama 24 jam kemudian di hitung berapa total Artemia salina yang mati (Wulandari 2014).

## HASIL
1. Uji morfologi
a. Pewarnaan Gram dan Uji Katalase
Adapun  hasil  yang  di  dapat  dari  isolasi  bakteri  dari  saluran  pencernaan  ikan bawal bintang adalah sebagai berikut :
Kode Isolat Sifat Gram Katalase Bentuk Sel B1.P4 + - Bulat B2.P4 + - Batang B3.P4 + + Bulat B4.P4 + - Bulat B5.P4 + - Bulat B1.P5 - + Bulat
B2.P5 + + Batang B3.P5 + + Bulat B4.P5 + + Bulat B5.P5 + + Batang
Hasil  pewarnaan  Gram  yang  dilakukan  terhadap  10  jenis  isolat  dapat  dilihat pada  10  jenis  isolat  yang  berhasil  diisolasi  mendapatkan  9  isolat  Gram  positif (B1.P4, B2.4, B3.P4, B4.P4, B5.P4, B2.P5, B3.P5, B4.P5 dan B5.P5) dan 1 isolat Gram negatif (B1.P5). hasil pewarnaan Gram  dari 10 isolat dengan hasil berwarna ungu  (Gram+)  dan  bewarna  merah  (Gram-).  Dinding  sel  bakteri  gram  negatif mengandung  lipopolisakarida  sehingga  pewarna  iodin  tidak  mampu  diikat  oleh lapisan  tersebut  yang  menyebabkan  hasil  pewarnaan  hanya  mampu  mengikat safranin  di    akhir  tahapan  tanpa  pembilasan.  Hal  inilah  yang  menyebabkan perbedaan warna pada sel bakteri gram positif dan bakteri gram negatif (Pelczar et al (1986) dan Mustafa (2014). Hasil penelitian serupa juga didapat oleh penelitian Kumar Dan  Kumar  (2014) dimana sel  yang diperoleh dengan morfologi  rod dan kokus  pada  18  isolat  terbagi  menjadi  2  kelompok  Gram  berdasarkan  hasil  akhir pewarnaan.
Hasil  uji  katalase  yang  dilakukan  selama  penelitian  mendapatkan  4  isolat katalase  negatif  (B1.P4,  B2.P4,  B4.P4  dan  B5.P4)  dan  6  isolat  katalase  positif (B3.P4, B1.P5, B2.P5, B3.P5, B4.P5 dan B5.P5). Hasil penelitian yang sama juga ditemukan  pada  penelitian  Laily  (2013),  Aditi  (2016)  dan  ismail  (2018).  Bakteri asam  laktat  tidak memproduksi enzim katalase  yang mampu  memecah hydrogen peroksida menjadi air dan oksigen. Beberapa bakteri memanfaatkan oksigen untuk membentuk  hydrogen  peroksida  dimana  produk  tersebut  adalah  hasil  sampingan dari metabolisme aerob yang beracun.

## b. Uji Motilitas
Hasil penelitian yang telah dilakukan mendapatkan isolat B1.P4, B2.P4, B4.P4 dan B5.P4 menunjukkan tidak adanya pergerakan pada media uji. Sehingga ditarik kesimpulan  bahwa  isolate  tersebut  bersifat  non  motil.  Karakter  unik  ini  umum ditemukan  pada  bakteri  asam  laktat  kandidat  probiotik  Penelitian  serupa  juga didapatkan oleh Forouhandeh (2010) dan Thakur et al (2017) dimana isolate yang diperoleh bersifat  non motil.  Bakteri  non motil disebut juga dengan bakteri atrik yaitu bakteri yang bergerak tanpa menggunakan flagel. Bakteri ini bergerak dengan getaran  yang  disebut  gerak  brown  (gerakan  yang  terjadi  karena  adanya  energi kinetik) yaitu gerak getar laju yang sama dengan menjaga ruang antara satu sama lain.

## 2. Uji Biokimia
Hasil  uji  indol  pada  penelitian  mendapatkan  hasil  negatif  dimana  tidak terbentuk lingkar merah pada setiap tabung uji.  Parameter penelitian serupa juga didapatkan  oleh  Sawian et  al (2018)  dimana  uji  indol  dilakukan  terhadap  isolate BAL  yang  diisolasi  dari  bahan  herbal.  Hasil  uji  indol  positif  mengindikasikan
Intek Akuakultur. Volume 3. Nomor 1. Tahun 2019. E-ISSN 2579-6291. Halaman 57-65
isolate mampu mengoksidasi tryptophan menggunakan enzim tryptophanase untuk membentuk indol, asam piruvat dan amoniak.
Uji  MR  merupakan  uji  yang  dilakukan  untuk  mengetahui  adanya  asam campuran  oleh  bakteri.  Beberapa  bakteri  memiliki  kemampuan  untuk memfermentasikan glukosa dan mampu memproduksi asam. Uji ini menggunakan reagent MR sebagai pereaksi. Hasil penelitian menunjukkan isolat B1.P4,B4.P4 dan B5.P4 memiliki reaksi positif sedangkan isolat B2.P4 menunjukkan reaksi positif. Reaksi  positif  menunjukkan  adanya  perubahan  warna  media  uji  dan  negatif  jika tidak terjadi perubahan warna.
Uji  VP  merupakan  uji  yang  dilakukan  untuk  mengetahui  pembentukan  metil asetil  karbinol  dari  hasil  fermentasi  glukosa,  pengujian  ini  dilakukan  dengan menambahkan KOH 40% kedalam tabung reaksi yang didalamnya telah ditanami bakteri  selama 24 inkubasi.  Hasil penelitian pada isolat  B1.P4, B2.P4,B4.P4 dan B5.P4  menunjukkan  hasil  negatif  yang  berarti  bahwa  ke  4  isolat  ini  tidak  dapat membentuk metil asetil karbinol dari hasil fermentasi glukosa. Menurut Reimena et  al (2017)  warna  merah  yang  terjadi  pada  media  MR  mengindikasikan  bahwa terjadinya penurunan pH oleh asam yang dihasilkan dari fermentasi gula. Uji VP dilakukan untuk mengetahui produksi asetil metil karbinol dari proses fermentasi glukosa.  Hasil  penelitian  yang  diperoleh  serupa  dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan oleh Reimena et al (2017) yaitu  tidak terjadi pembentukan cincin merah pada media atau hasil yang di dapat adalah negatif. Hasil penelitian fermentasi gula menunjukkan bahwa ke 4 jenis isolate memiliki reaksi yang berbeda- beda terhadap jenis gula. Ada yang menunjukkan reaksi negatif dan positif. Reaksi yang terjadi ditunjukkan dengan adanya perubahan warna dan keberadaan gas pada tabung uji (Thakur et al 2017).

## 3. Identifikasi Bakteri
Berdasarkan  hasil  identifikasi  dari  4  isolat  bakteri  asam  laktat  kandidat probiotik maka dapat digolongkan bahwa isolat B1.P4 memiliki tipe pergandengan stapilococus dengan  genus leuconostoc  sp ,  isolat  B2.P4  memiliki  tipe pergandengan diplobasil dengan genus bacillus sp , sedangkan untuk isolat B4.P4 dan  isolat  B5.P4  memiliki  tipe  pergandengan  yang  sama  yaitu stapilococus dan termasuk kedalam genus yang sama yaitu genus lactococus sp .  Berikut merupakan uraian bakteri genus leuconostoc sp , bacillus sp dan lactococus dp.
4. Uji fisiologi
a. Uji Ketahanan pH
Hasil uji ketahanan pH mendapatkan keempat jenis isolat mampu tumbuh pada rentang pH berkisar antara 3-7, dimvna pertumbuhan sel optimum berada pada pH 5. Ketahanan isolate pada kondisi asam menjadi tolak ukur kualitas bakteri untuk dijadikan sebagai probiotik. Hasil penelitian serupa juga didapat oleh Adamberg et al (2003)  dan  Menconi  (2014)  dimana  bakteri  asam  laktat  yang  dapat  dijadikan probiotik    adalah  bakteri  yang  toleran  pada  kondisi  asam.  Bakteri  yang  mereka
probiotik yang mereka peroleh merupakan isolat yang diisolasi dari saluran cerna organisme dengan indikator seleksi adalah mampu tumbuh pada kondisi asam.

## b. Uji Daya Hambat
Uji  daya  hambat  dilakukan  untuk  melihat  kemampuan  isolat  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen.  Pengujian  ini  dilakukan  dengan  cara menumbuhkan isolate BAL yaitu isolate B1.P, B2.P4, B4.P4 dan B5.P4 pada media TSB selama 24 jam yang kemudian di sentrifuge dengan kecepatan rotasi 5000 rpm. Selanjutnya isolat di teteskan pada kertas cakram steril, dan diletakkan pada media TSA yang telah di gores bakteri vibrio harveyi .
Hasil penelitian yang telah di lakukan menunjukkan bahwa ke 4 isolat memiliki kemampuan  daya  hambat  kategori  sedang  yaitu  dengan  kisaran  9  mm  –  10  mm. berdasarkan tabel 4 menunjukkan bahwa ke 4 bakteri ini masuk ke dalam kategori sedang  untuk  menghambat  bakteri vibrio  harveyi. Balcazar  (2006)  dalam penelitiannya menyebutkan cara kerja senyawa antibakteri terhadap bakteri patogen adalah mengganggu komponen penyusun dinding sel  sehingga terjadi penurunan permeabilitas  sel  yang  menyebabkan  hilangnya  komponen  penyusun  sel  dan destruksi  material  genetik.  Menurut  ikeda et  al (2013)  menyebutkan  produk metabolik sekunder yang dihasilkan oleh bakteri asam laktat terdiri dari beberapa jenis  seperti  bakteriosin,HPO,  reuterecyclin,  nisin  dan  kelompok  asam  organik. Senyawa-senyawa  tersebut  mampu  mengendalikan  gangguan  usus  dan  memicu sekresi mukosa sehingga mencegah infeksi dan meningkatkan imunitas.
c. Uji BSLT (Brine shrimp lethality test)
Uji  BSLT dilakukan untuk mengetahui tingkat  toksisitas suatu  bahan dengan menggunakan  hewan  uji  berupa artemia  salina dengan  indikator  persen  tingkat kematian hewan uji sebesar 50%. Uji BSLT dilakukan dengan cara mengkultur 4 jenis  isolate  BAL  yaitu  isolat  B1.P4,  B2.P4,  B4.P4  dan  B5.P4  pada  media  TSB selama  24  jam.  Kemudian  pertambahan  jumlah  sel  bakteri  diukur  menggunakan spektrofotometer yang kemudian isolat dibuat menjadi 3 konsentrasi yaitu 5 ppm,10 ppm dan 15 ppm untuk 3 kali ulangan. 4 jenis isolat ini dimasukkan ke vial yang berisi air laut sebanyak 5 ml dengan hewan uji sebanyak 10 ekor.
Hasil uji BSLT mendapatkan nilai toksik yang tertinggi yaitu  isolat B1.P4  (R =  0,61  dan  LC 50 =  164,59)    dan  isolat  B4.P4  (R =  0,82  dan  LC 50 =  19,57).Isolat dengan nilai toksik yang terendah yaitu B2.P4 dan B5.P4 (R = 0,00013 dan LC 50 = 880,71). hal ini menunjukkan bahwa isolat B2.P4 dan B5.P4 aman dikonsumsi.
Penelitian serupa juga dilakukan oleh Zainuddin (2010) dan Wulandari (2012) yang mendapatkan nilai lc50 24 jam isolate uji terhadap kematian artemia salina berada pada kategori tidak toksik karena dalam konsentrasi tertentu nilai koefisien probit yang tinggi tidak mnyebabkan 50% populasi hewan uji.  Dari tabel 16, konsentrasi isolat  yang  menyebabkan  kematian  50%  hewan  uji  dipengaruhi  oleh  tingkat konsentrasi  atau  kepadatan  sel  bakteri.  Menurut  Zainuddin  (2010)  mekanisme kematian artemia salina terjadi ketika dalam konsentrasi tertentu pada media terjadi kompetisi  bakteri  untuk  bertahan  hidup.  Bakteri  mensekresikan  eksotoksin  yang
Intek Akuakultur. Volume 3. Nomor 1. Tahun 2019. E-ISSN 2579-6291. Halaman 57-65
dilepaskan  ke  media  air  hingga  menyebabkan  hewan  uji  terpapar  oleh  racun tersebut.  Menurut  Wulandari  (2012)  eksotoksin  yang  disekresikan  oleh  bakteri diserap oleh naupli melalui pori- pori, sistem pernapasan dan pencernaan. Racun diangkut oleh darah dan getah bening kemudian menyerang jaringan dan organ vital artemia salina hingga terjadi kematian.

## KESIMPULAN
Dari berbagai macam uji yang telah dilakukan yaitu uji ketahanan pH, uji daya hambat dan uji BSLT bakteri asam laktat yang paling potensial dijadikan probiotik yaitu pada isolat B4.P4 dan B5.P4 yang merupakan genus lactococus . Bakteri dari genus  ini  dikatakan  potensial  untuk  dijadikan  probiotik  karena  memiliki pertumbuhan  yang baik  pada setiap kondisi pH, dan memiliki daya hambat yang baik. Pada saat uji BSLT yang dilakukan, bakteri genus lactococus tidak bersifat toksik.

## DAFTAR PUSTAKA
Adamberg,K.,Kask,S.,Laht,T,M.,Palmee,T.,2003. The effect of temperature and pH on the growth of lactic acid bacteria: a pH-auxostat study. 171– 183
Aditi,Y,F., Rahman,S,S., Hossain,M.,2017. Astudy on The Microbiological Status Of Mineral Dirinking Water. The Open Microbiology Journal.11. 31-44
Ismail,Y.S.,Yulvizar,C.,Mazhitov,B.,2018. Characterization of lactic acid bacteria from local cow´s milk kefir. (2018) 012019
Laily, I,N., Utami, R., Widowati, E. 2013. Isolasi Dan Karakterisasi Bakteri Asam Laktat Penghasil Riboflavin Dari Produk Fermentasi Sawi Asin. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan 2(4), 179-184.
Kumar, A., Kumar, D. 2014. Isolation and characterization of bacteria from dairy samples of Solan in Himachal Pradesh for identification of Lactobacillus spp. 25(2), Mar – Apr 2014; Article No. 21, Pages: 110-114 ISSN 0976 – 044X.
Mustafa, H,S,I. 2014. Staphylococcus aureus Can Produce Catalase Enzyme When
Adding to Human WBCs as Source of H2O2 Productions in Human
Plasma or Serum in the Laboratory. 249-251. Reimena,R.,Erina.,Darniati.,Fakhurrazi.,Darmawi.,Budiman.H., Isolation and Identification  of  Lactic  Acid  Bacteria  Genus Pediococcus from  Sumatran Orangutan  ( Pongo  abelii )  faeces  at  Kandi  Zoo  and  Kinantan  Zoo  West Sumatera. 11 (1): 59-65
Sawian, P., Nongkynrih, K, J., Anand, U., Charan, A, A. 2017. Biochemical Tests Performed For The Identification Of The Isolates Collected From Local Rice
Intek Akuakultur. Volume 3. Nomor 1. Tahun 2019. E-ISSN 2579-6291. Halaman 57-65
Beer  (Kiad).  Journal  Of  Pharmacognost  add  Phytochemistry  2018;7(1):  395- 397.
Thakur,M.,Desphande,H.W.,Bhate,M.A.,2017. Isolation  and  Identification  of Lactic Acid Bacteria and their Exploration in Non-Dairy Probiotic Drink. 6(4): 1023-1030
Wulandari,R.,2012.Isolasi  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Usus  Ikan  Lele  Untuk Pengendalian  Bakteri  Streptococcus  Pada  Ikan  Nila.Universitas  Hasanuddin. Makassar.