## EFIKASI RUTE VAKSIN Aeromonas hydrophila ASB-01
PADA  IKAN GABUS ( Ophiocephalus striatus )

## ROUTE OF VACCINE EFFICACY Aeromonas hydrophila ASB-01 ON SNAKEHEAD FISH (Ophiocephalus striatus)
1) Olga dan 2) Fatmawaty
1). 2) Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Perikanan Universitas Lambung Mangkurat e-mail: olgarahman@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui rute pemberian vaksin A.hydrophila ASB-01  yang  efektif  untuk  mengendalikan  MAS  pada  ikan  gabus.    Efektivitas  rute vaksinasi  dievaluasi  melalui  titer  antibodi,  sintasan,  RPS  (relative  percent  survival) dan RWK (Rerata waktu kematian).  Penelitian ini terdiri dari 5 perlakuan (vaksinasi secara rendaman (R), oral (O), injeksi intramuscular (IM), injeksi intraperitoneal (IP) dan  Kontrol  (PBS  pH  7,0)  dengan    3  ulangan.  Dosis  vaksinasi  sebanyak  10 7 sel/ml. Vaksinasi  booster  dilakukan  setelah  14  hari  kemudian,  dosisnya  sama  dengan vaksinasi awal.  Selanjutnya, 14 hari  berikutnya  ikan ditantang dengan A.hydrophila ASB-01.  Untuk  memperoleh  data  titer  antibodi  dilakukan  pengambilan  darah  pada saat  sebelum  divaksinasi,  sesaat  sebelum  vaksinasi  booster  dan  14  hari  setelah vaksinasi  booster.  Ikan  tantang  diamati  selama  14  hari  untuk  memperoleh  data sintasan,  RPS  dan  RWK.  Hasil  menunjukkan  bahwa  semua  rute  pemberian  vaksin dapat  meningkatkan  titer  antibodi,  akan  tetapi  titer  antibodi  tertinggi  diperoleh  dari ikan  yang  divaksinasi  secara  injeksi.    Sintasan  gabus  yang  divaksinasi  secara  IM (84,47%), IP (82,20%), R (42,27%), O (42,20%) dan kontrol (13,13 %). RPS gabus yang  divaksinasi  melalui  rute  IM  (82,08%),  IP  (79,46%),  R  (33,38%),  O  (33,31%), sedangkan RWK gabus melalui rute IP (3,63 hari), IM (79,46 3,57 hari), R (2,46 hari), O  (1,85  hari)  dan  kontrol  (1,03  hari).  Rute  vaksinasi  yang  efektif  adalah  melalui injeksi.
Kata kunci: Aeromonas hydrophila , Ophiocephalus striatus , rute, vaksin
Olga, dkk :  Efikasi Rute Vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01.....

## ABSTRACT
This study aims to determine the vaccine A.hydrophila ASB-01 is effective for the  control  of  MAS  on  snakehead  fish.  Effectiveness  of  vaccination  was  evaluated through the antibody titer, survival, RPS (relative percent survival) and  RWK (mean time  of death).  The study consisted  of  5 treatments  (immersion  vaccination  (R), oral (O), intramuscular  injection  (IM),  intraperitoneal  injection  (IP)  and  control  (PBS pH 7.0)  with  3  replications.  Vaccination  doses  were  107  cells  /  ml.  Booster  vaccination after 14 days later. Dose is equal to the initial vaccination. Furthermore, the next day 14  fish were challenged with A.hydrophila ASB-01. To obtain data on antibody titer blood  draw  done  at  the  time  before  being  vaccinated,  shortly  before  the  booster vaccination and 14 days after the booster vaccination. Challenged fish were observed for  14  days  to  obtain  data  on  survival,  RPS  and  RWK.    The  result  showed  that  all these vaccines may increase the antibody titer, but the highest antibody titers obtained from  fish  vaccinated  injection.  Survival  rates  were  vaccinated  IM  (84.47%),  IP (82.20%), R  (42.27%), O  (42.20%) and  controls  (13.13%). RPS to  IM  (82.08%), IP (79.46%),  R  (33.38%),  O  (33.31%),  while  RWK  through  the  IP  (3.63  days),  IM (79.46  3.57  days),  R  (2.46  days),  O  (1.85  days)  and  controls  (1.03  days).  Effective vaccination route is through injection.
Keywords: Aeromonas hydrophila , Ophiocephalus striatus , route, vaccine

## PENDAHULUAN
Keberlanjutan akuakultur sangat  tergantung  pada  pencegahan penyakit.
Dengan intensifikasi akuakultur,  risiko  terjadinya  penyakit dan penyebaran wabah penyakit semakin  meningkat.  Salah  satunya adalah MAS ( Motile Aeromonas Septicemia )  yang    disebabkan  oleh
Aeromonas hydrophila . Menurut
Nitimulyo et  al. (1997)  kerugian  yang
diakibatkannya sangat besar dan berpotensi  menghambat  usaha  pe- ngembangan akuakultur.
Bakteri  penyebab  MAS  ini hidup di air dan ditemukan menyerang berbagai jenis ikan air tawar di seluruh dunia  dan  adakalanya  pada  ikan  laut (Hayes,  2000).  MAS  pernah  mewabah menyerang  ikan  gabus  di  perairan umum Kalimantan Selatan yang menyebabkan  harga  jual  ikan  gabus
Olga, dkk :  Efikasi Rute Vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01.....
merosot tajam di pasaran lokal (Olga & Fatmawati, 2008).
Penyakit  ini  dapat  mewabah dikarenakan perubahan kondisi lingkungan, stress, overcrowding (populasinya padat), suhu tinggi, perubahan  suhu  secara  mendadak, penanganan  yang  kasar,  transfortasi ikan, rendahnya oksigen terlarut. Selain itu, rendahnya persediaan makanan dan infeksi fungi atau parasit juga  berpengaruh  pada  perubahan fisiologis  dan  menambah  kerentanan terhadap infeksi.
Terdapat pandangan yang berbeda  tentang  peran  yang  tepat  dari A.hydrophila sebagai  patogen  ikan.
Beberapa peneliti menetapkannya sebagai  penyerang  sekunder  pada inang  yang  dalam  kondisi  lemah  atau stress (patogen opportunistik), sedangkan  yang  lain  menyatakan bahwa  bakteri  ini  adalah  patogen utama ikan air tawar (Hayes, 2000).
Ikan  gabus  yang  diinfeksi
A.hydrophila secara  eksternal  menun- jukkan  sisik/kulit  yang  pucat,  terjadi pembengkakan  dan  luka  pada  bekas injeksi  di  bagian  dorsal  tubuh  ikan. Hari berikutnya mulai terjadi hemorhagik  pada  tubuh,  sirip  patah-
patah  dan  berwarna  pucat,  serta keseimbangan  tubuh  ikan  terganggu, sehingga  ikan  sering  berenang  lemah ke  permukaan  air  dan  cenderung menyendiri.    Gejala  internal  pada  ikan yang mati menunjukkan empedu lembek  dan  mudah  pecah,  saluran pencernaan  kosong  berisi  cairan,  hati merah kecoklatan, ginjal merah dengan tepi kehitaman, atau ginjal merah pucat pada  ikan  gabus  mati  lainnya  (Olga, 2012). Menurut Miyazaki & Jo (1985), bakteri  ini  memperbanyak  diri  dalam usus menyebabkan suatu radang haemorrhagic  mucuous-desquamative (pengeluaran lendir berlebihan).
Metabolit  beracun  bakteri  ini  diserap dari  usus  dan  menginduksi  keracunan. Pendarahan  pada  kapiler  terjadi  di permukaan  sirip  dan  di  submukosa perut.    Sel  hepatik  dan  epitel  dari tubulus  ginjal  menunjukkan  adanya degenerasi.    Glomeruli  dihancurkan dan  jaringan  menjadi  berdarah  dengan eksudat dari serum dan fibrin.
Ikan,  seperti  mamalia  juga memiliki  sistem  pertahanan  yang memungkinkan mereka untuk bertahan hidup dan menjaga integritasnya dalam lingkungan  yang  ekstrim.  Jaringan limfoid  utama  dalam  ikan  teleostei
Olga, dkk :  Efikasi Rute Vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01.....
adalah  ginjal  bagian  posterior,  timus, limpa  dan  mukosa-terkait  jaringan limfoid,  termasuk  kulit  dan  insang (Press & Evensen, 1999), dan perbedaan  jelas  dari  sistem  kekebalan tubuh  mamalia  bahwa  ikan  tidak memiliki  sumsum tulang  belakang dan kelenjar  getah  bening.    Mekanisme perlindungan  terhadap  benda  asing, termasuk  patogen  dan  sel-sel  ganas dilakukan  oleh  reaksi  bawaan  dan adaptif  dari  tubuh  ikan  (Evensen, 2009).
Usaha penanggulangan penyakit yang disebabkan
A.hydrophila pada  ikan  gabus  dapat diupayakan  melalui  stimulasi  sistem pertahanan adaptif ikan, yaitu vaksinasi.  Dampak  positif secara
keseluruhan  dari  vaksinasi  pada  ikan budidaya adalah menurunnya kematian ikan yang disebabkan penyakit tertentu. Vaksinasi tidak seperti antibiotik yang membunuh dan menghentikan penyakit yang
disebabkan bakteri, vaksin merangsang sistem  imun  ikan  untuk  memproduksi antibodi yang membantu dan melindungi  ikan  dari  penyakit  tertentu (Osman et  al ,  2009).  Ke  depannya,
vaksinasi mampu memberikan
kontribusi  untuk  produksi  akuakultur secara  berkelanjutan,  dan  menekan penggunaan  antibiotik  (Gudding et  al , 1999).  Menurut  Kambalapally  (2013) ada  tiga  rute  yang  layak  untuk penerapan  vaksin  dalam  akuakultur, yaitu vaksinasi melalui injeksi, perendaman dan oral.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  rute  pemberian  vaksin A.hydrophila ASB-01  yang  efektif untuk  mengendalikan  MAS  pada  ikan gabus.

## METODE  PENELITIAN

## Alat dan Bahan
1. ikan uji
Hewan  uji  yang  digunakan adalah  ikan  gabus  yang  berukuran panjang  total  13  –  15  cm,  berat  15-20 g,  yang  diperoleh  dari  petani  ikan  di desa Sungai Rangas, Kabupaten Banjar,  Kalimantan  Selatan.    Ikan  ini dipelihara dalam baskom plastik berkapasitas  volume  25  l  dengan kepadatan 15 ekor/baskom.
Olga, dkk :  Efikasi Rute Vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01.....
2. Peningkatan Virulensi Isolat A.hydrophila ASB-01
Isolat  bakteri  yang  digunakan untuk  membuat  vaksin  adalah  bakteri Aeromonas  hydrophila ASB-01  yang merupakan  isolat  lokal  hasil  isolasi dari  ikan  gabus  sakit  yang  diperoleh dari  desa  Sungai  Buluh  Kabupaten Hulu  Sungai  Tengah Kalimantan Selatan.
Bakteri Aeromonas  hydrophila
ASB-01 ditingkatkan virulensinya dengan menyuntikan
secara intramuskular  suspensi  bakteri  dengan kepadatan  10 12 CFU/ml  pada  3  ekor ikan gabus berukuran panjang total 13- 15  cm.    Bakteri  diisolasi  dari  ikan  uji yang  telah  diinfeksi  dan  menunjukkan gejala terinfeksi
A.hydrophila , kemudian dikultur di medium Glutamate  Starch  Phenol-red  Agar (GSPA,  Merck-Germany),  selanjutnya satu  koloni  yang  berwarna  kuning dikultur  ke  medium Trypticase  Soy Broth (TSB,  Oxoid-England),  setelah diinkubasi  pada T 37 o C selama 18-24 jam  diinfeksi  kembali  ke  ikan  sehat.
Peningkatan virulensi dilakukan dengan  tahapan  kerja  yang  berulang sebanyak 3 kali.
3. Pembuatan Vaksin
Vaksin  dibuat  dengan  cara bakteri  dikultur  ke  dalam  10  ml medium TSB dan diinkubasi selama 18 -  24  jam  pada  suhu  37 o C.    Setelah diinkubasi, kultur cair tersebut dipindahkan ke 70 ml medium Trypticase  Soy  Agar (TSA,  Oxoid- England) pada cawan petri berdiameter 15  cm  dan  diinkubasi  selama  18-  24 jam pada T 37 o C.  Selanjutnya, kultur dipanen dan diinaktivasi dengan formalin 1,5 % (Formalin  pekat 37%), dihomogenkan  di  atas  shaker  dengan kecepatan  125  rpm  selama overnight . Pencucian menggunakan larutan Phosphat  Buffer  Saline  pH  7,0  dan disentrifugasi  dengan  kecepatan  3000 rpm  selama  15  menit  dilakukan sebanyak  tiga  kali.  Untuk  mengetahui apakah  sel  tersebut  benar-benar  telah diinaktifkan, maka dilakukan uji viabilitas pada medium  GSPA (Merck, Germany).
4. Vaksinasi
Ikan  gabus  uji  yang  akan
divaksinasi maupun kontrol diadaptasikan dalam baskom pemeliharaan selama 2 minggu.
Olga, dkk :  Efikasi Rute Vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01.....
Vaksinasi  dilakukan  secara  rendaman
(ikan  direndam  selama  15  menit dengan  vaksin),  oral  (ikan  diberi vaksin  secara  cekok  tidak  melalui pakan dengan tujuan agar vaksin dapat terserap merata  masuk ke dalam tubuh ikan uji),  injeksi  melalui  intramuscular dan  intraperitoneal.  Dosis  vaksin  0,1 ml/ikan  dengan  kepadatan  bakteri  10 7 sel/ml  (untuk  perlakuan  oral,  injeksi secara intramuscular
dan
intraperitoneal),  sedangkan  untuk  ikan kontrol  diinjeksi  dengan  PBS  pH  7,0. Dua minggu setelah vaksinasi dilakukan booster.  Sebelum vaksinasi, 14  hari  setelah  vaksinasi  (sesaat sebelum  booster),    dan  14  hari  setelah booster  dilakukan  pengambilan  darah ikan  untuk  uji  titer  antibodi.  Uji tantang  dengan A.hydrophila ASB-01 yang  telah  ditingkatkan  virulensinya dilakukan  14  hari  setelah  booster. Kepadatan  bakteri tantang  berdasarkan hasil LD 50 (2,69 x 10 5 cfu/ml).  Setelah uji  tantang,  ikan  dipelihara  selama  14 hari  untuk  mengamati  sintasan,  RPS dan  rerata  waktu  kematian.    Selama penelitian, ikan diberi pakan ikan rucah segar  yang  diberikan  sebanyak  2  kali secara adlibitum ,  yaitu  pagi  dan  sore hari.

## Analisis Data
Penelitian  ini  menggunakan metode  eksperimen  Rancangan  Acak Lengkap ( Completely Randomized Design ) (Gomez & Gomez, 1995) yang terdiri  dari  5  perlakuan  3  ulangan. Kelima perlakuan tersebut terdiri dari 4 perlakuan  vaksin  dan  1  perlakuan kontrol, Perlakuan  vaksinasi dilakukan secara  rendaman  (R),  oral  (O),  injeksi melalui intramuscular (IM) dan intraperitoneal (IP), sedangkan perlakuan  kontrol,  yaitu  ikan  diinjeksi dengan PBS pH 7,0.

## Parameter  dan Analisis Data
Parameter yang diamati meliputi  titer  antibodi,  sintasan,  RPS, dan  RWK.  Pengamatan  titer  antibodi dilakukan  dengan  metode  mikrotiter, diamati sebanyak 3 kali, yaitu sebelum vaksinasi, 14 hari setelah vaksinasi dan 14  hari  setelah  booster.  Adapun  data sintasan,  RPS  dan  RWK  diamati setelah  uji  tantang.  Rumus  yang digunakan untuk perhitungan adalah:
Sintasan dihitung sebagai berikut:
S  =       N1     x   100%

## N0
Keterangan:
S     =    Sintasan N0  =    Jumlah ikan pada awal penelitian Nt  =    Jumlah  ikan  yang  hidup  pada  akhir
penelitian
Tingkat  Perlindungan  Relatif  ( Relative Percent Survival /RPS) dihitung sebagai berikut:
Rerata Waktu
Kematian/RWK dihitung sebagai berikut:
Keterangan: a = waktu kematian (hari) b = jumlah ikan yang mati (ekor)
Parameter  penunjang  lainnya  yang diamati  adalah  kualitas  air  (DO,  CO 2 ,
NH 3 , pH dan suhu) dilakukan setiap 14
hari selama penelitian,  yaitu pada pagi hari.
Titer  antibodi  diamati  dengan metode deskriptif.
Data yang terkumpul  dari  uji  titer  antibodi ditansformasikan  ke  dalam  bentuk logaritma  (data  log  2),  kemudian dianalisis  dengan  analisis  sidik  ragam (ANOVA/ Analysis  of  Variance ).  Data lainnya  yang  diperoleh  setelah  uji tantang  seperti  sintasan,  RPS  dan RWK    juga    dianalisis  dengan ANOVA.  Apabila berbeda nyata akan dilanjutkan dengan uji Duncan
Multiple  Range  Test  (DMRT)  pada taraf uji 5 % dan 1 %.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Hasil Penelitian terhadap Efikasi rute vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01  pada    ikan  gabus
( Ophiocephalus  striatus ),  disajikan pada  Tabel  1,  Tabel  2  dan  Tabel3 berikut :
RPS = 1  -  % kematian ikan yang divaksin  x100%
% kematian ikan yang tidak divaksin n RWK = ∑ a1b1 i=1 n ∑ b1 i = 1

## Tabel 1. Rerata titer antibodi ikan gabus selama penelitian
Keterangan:  Rerata  yang  diikuti  dengan  huruf superscript yang  sama  tidak  berbeda  nyata  (P>0,01). Sampling-0  =  sesaat  akan  divaksinasi,  sampling  ke-1=  14  hari  setelah  vaksinasi  (sesaat akan dibooster), sampling ke -2 = 14 hari setelah booster.
Tabel 2. Rerata Sintasan dan RPS ikan gabus  yang ditantang A.hydrophila ASB-01
Perlakuan Sintasan (%) RPS (%) Rendaman (R) 42,27 a 33,38 a Oral (O) 42,20 a 33,31 a Injeksi intramuscular (IM) 84,47 b 82,08 b Injeksi intraperitoneal (IP) 82,20 b 79,46 b Kontrol 13,33 c
Keterangan: Rerata yang diikuti dengan huruf superscript yang sama tidak berbeda nyata (P>0,01).
Tabel 3.  Rerata Waktu Kematian ikan gabus yang ditantang A.hydrohila ASB-01
Perlakuan Rerata Waktu Kematian (hari) Rendaman  (R) 2,46 a Oral (O) 1,85 a Injeksi intramuscular (IM) 3,57 b Injeksi intraperitoneal (IP) 3,63 b Kontrol 1,03 c
Keterangan: Rerata yang diikuti dengan huruf superscript yang sama tidak berbeda nyata (P>0,01).

## Pembahasan
Tingkat  keberhasilan  vaksinasi dapat  dilihat  dari  meningkatnya  titer antibodi  pada  ikan  gabus.  Hasil signifikan  dari  rute  pemberian  vaksin A.hydrophila
ASB-01 setelah
divaksinasi  menunjukkan titer antibodi yang  cukup  tinggi  pada  ikan  gabus yang divaksinasi secara injeksi dibandingkan secara oral dan rendaman  (Tabel  1),  yaitu  vaksinasi injeksi  secara  intramuskular  (42,66), injeksi  intraperitoneal  (69,33),    oral (5,33) dan rendaman (21,33),
Rerata titer antibodi sampling ke- Perlakuan 0 1 2 Rendaman (R ) 1,00 a 21,33 a 37,33 a Oral (O) 1,00 a 5,33 b 21,33 a Injeksi intramuscular (IM) 1,00 a 42,66 a 1.194,67 b Injeksi intraperitoneal (IP) 1,00 a 69,33 a 1.536 b Kontrol 1,00 a 1,00 c
1,00 c

## hal. 131-144
sedangkan  pada  kontrol  tidak  terjadi kenaikan  titer  antibodi.    Pada  hari  ke 14  setelah  vaksinasi booster ,  rerata titer antibodi perlakuan injeksi meningkat  dengan  pesat,  yaitu  secara intraperitoneal (1.536), secara intramuskular  (1.194,67),  sedangkan untuk    kenaikan  titer  antibodi  pada perlakuan  rendaman  dan  oral  tidak terlalu  pesat,  yaitu  rendaman    (37,33) dan oral (21,33).  Hasil ANOVA rerata titer  antibodi  menunjukkan  adanya perbedaan  sangat  nyata  (P<0,01)  antar perlakuan  vaksin  maupun  dengan kontrol.  Yin et al ., (1996) melaporkan untuk  jenis  ikan  lain  seperti  lele  yang divaksinasi menunjukkan antibodi humoral pada hari ke-7 yang memuncak  28  hari  pasca  vaksinasi dengan  vaksin  diinaktif  formalin  dari isolat A.hydrophila.
Banyak penelitian yang menyatakan  bahwa  titer  antibodi  yang terbentuk sebagai respon imun tergantung pada cara pemasukan antigen  ke  dalam  tubuh.  Nitimulyo et al (1992 di  dalam Mulia  2003) mengemukakan bahwa pada umumnya efikasi  vaksin  tertinggi  diperoleh dengan  cara  suntik,  disusul  rendaman dan kemudian baru oral.
Vaksinasi  dapat  meningkatkan sintasan  ikan  gabus  dibandingkan kontrol.  Hasil  ANOVA  menunjukkan bahwa    keempat  perlakukan  rute vaksinasi  memberikan  rerata  sintasan yang  berbeda  nyata,  dan  dibandingkan dengan    kontrol    juga  berbeda  nyata (P<0,01).    Selain  itu,  rute  vaksinasi juga memberikan sintasan yang berbeda  antara  perlakuan  IM  dan  IP dengan perlakuan R dan O. Dalam  hal ini  perlakuan  rute  IM      memberikan sintasan yang tertinggi, yaitu 84, 47 % (Tabel 2).
RPS ikan gabus tertinggi terdapat pada perlakuan  IM (82,08%), disusul IP (79,46 %), O (33,31 %), dan R 33,38 %.
Hasil ANOVA
menunjukkan  adanya  perbedaan  nyata (P<0,01) pada nila RPS antar perlakuan vaksin (Tabel 2).
Rerata waktu kematian tercepat pada  kontrol  (1,03  hari),  kemudian diikuti  perlakuan  R  (1,84  hari)  dan  O (1,84  hari).  Rerata  waktu  kematian terlambat  terdapat  pada  perlakuan  IM (3,57  hari)  dan  IP  (3,63  hari).    Hasil ANOVA menunjukkan adanya perbedaan  yang  sangat  nyata  antara perlakuan ikan yang divaksin dan tidak
divaksin  maupun  antar  perlakuan vaksin (P<0,01) (Tabel 3).
Menurut Roberts (1993) efikasi vaksin  sangat  tergantung  pada  tinggi rendahnya  tingkat  stress  yang  dialami ikan.    Efektivitas  vaksinasi  melalui cara  injeksi  dikarenakan  dengan  cara ini  antigen  masuk  ke  dalam  tubuh secara sistemik, yaitu melalui pembuluh darah dan beredar ke seluruh tubuh.   Akan tetapi  harus diperhatikan bahwa  vaksinasi  dengan  cara  injeksi ini dapat menimbulkan immunosupresi,  pengurangan  serapan pakan dan kematian akibat penanganan pada ikan sehingga ikan perlu dianastesi  dan  hanya  cocok  diberikan untuk  ikan  yang  berukuran  >  15  g (Ellis,  1989).  Menurut  Nelson et  al.
(1985) yang telah melakukan penelitian  tentang  vaksin  bakterin  dari Vibrio yang  diberikan  pada  ikan rainbow  trout  dengan  cara  vaksinasi injeksi secara intraperitoneal, rendaman  dan  oral  dan  mengamati lokasi  vaksin  di  dalam  jaringan  tubuh ikan  menyatakan  bahwa  vaksin  yang dimasukkan dengan cara injeksi diketahui  terakumulasi  oleh  makrofag dan berada pada ginjal dan limpa.
Banyak peneliti yang
melaporkan  situs  utama  masuknya antigen yang diberikan secara rendaman adalah insang, selain itu juga kulit, linea lateralis dan usus.  Menurut Nakanishi  &  Ototake  (1997)    kulit adalah situs utama penyerapan antigen. Tidak  hanya  fagosit  tetapi  juga beberapa  sel  epitel  kulit  terlibat  dalam penyerapan antigen. Dalam
kebanyakan uji coba vaksinasi rendaman,  antibodi  tidak  terdeteksi dalam  serum  oleh  mikrotitrasi,  bahkan ketika  antibodi  ditemukan,  titer  tidak selalu berkorelasi dengan perlindungan.  Selanjutnya  Nelson et al. (1985)  menemukan  adanya  vaksin pada permukaan insang, saluran gastrointestinal  dan  ginjal  pada  ikan rainbow  trout  yang  telah  divaksin secara  rendaman.    Meskipun  vaksinasi secara  rendaman  tidak  memberikan hasil  yang  lebih  baik  dari  vaksinasi secara  injeksi,  Thune  (1980 di  dalam Pasaribu et  al. 1990)  menyatakan bahwa metode rendaman menyebabkan proses  imunitas  yang  lebih  efektif, karena  antigen  lebih  lama  kontak dengan ikan.  Ellis (1989) menyatakan bahwa  keuntungan  lain  dari  vaksinasi secara rendaman, yaitu dapat
diterapkan  pada  semua  ukuran  ikan serta  stress  yang  ditimbulkan  tidak terlalu  besar.  Apabila  ikan  yang divaksinasi  berukuran  kecil  (<  10  g) dalam  jumlah  yang  sangat  besar, vaksinasi  dengan  cara  rendaman  dapat dijadikan pilihan.
Menurut Ellis (1989)
menyatakan  bahwa  vaksinasi  secara oral  memberikan  perlindungan  dengan potensi  rendah  dan  membutuhkan sejumlah  besar vaksin untuk  mencapai perlindungan  pada  ikan.  Menurut Muiswinkel  (1995 di  dalam Mulia 2003), vaksinasi secara oral tidak dapat menghasilkan titer antibodi yang tinggi karena  antigen  yang  diberikan  secara oral akan menghasilkan antibodi dalam skin  mucus dan  empedu,  bukan  pada serum.    Sementara  itu,  Nelson et  al (1985)  menyatakan  bahwa  respon imun  yang  terbentuk  melalui  cara vaksinasi  oral  diduga  bukan  secara sistemik,  melainkan  karena  induksi respon  mucosal.    Pernyataan  ini didasarkan  pada  hasil  penelitian  yang menunjukkan  bahwa  tidak  ditemukan vaksin  dalam  jaringan  internal  ikan maupun  dalam  organ  tubuh,  kecuali ditemukan pada usus.  Anderson (1974 di  dalam Mulia  2003)  menyatakan
bahwa  respon  imun  terbentuk,  karena adanya  antigen  yang  sampai  ke  dalam rongga usus  yang  merangsang  limfosit dalam jaringan usus untuk
memproduksi antibodi. Menurut
Kambalapally et al. (2013) meski tidak menghasilkan titer antibodi yang tinggi dibandingkan  dengan  vaksinasi  secara injeksi  dan  rendaman,  vaksinasi  oral mempunyai beberapa keuntungan, karena  dapat  diterapkan  pada  hampir semua  ukuran  ikan.    Metode  ini  bebas stress  pada  ikan  dan  cara  vaksinasi ikan  yang  murah  di  lingkungan akuakultur.  Agar  vaksinasi  secara  oral ini  berhasil,  dibutuhkan  teknologi pengemasan vaksin yang dapat bertahan  lama  ketika  kontak  dengan air,  mampu  bertahan  pada  jaringan mukosa  usus  dan  mengatasi  tantangan dalam  lingkungan  pencernaan  ikan, karena  pH  rendah  dalam  lingkungan pencernaan,  enzim  pencernaan  dan asam  empedu.  Akan  tetapi  untuk  ikan gabus yang bersifat karnivor, vaksinasi secara oral  yang dikemas dalam pakan sulit dilakukan.
Pengamatan terhadap parameter kualitas air selama penelitian menunjukkan suhu air berkisar  antara  26,00  –  29,50 o C,  pH
hal. 122-135
Olga, dkk :  Efikasi Rute Vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01.....
7,00  –  7,100,  DO  3,40  –  7,20  ppm, CO2  5,00  –  20,00  ppm  dan  NH3-N
0,029 – 0,038 ppm.  Menurut  Anonim
(1991 di dalam Nurajimah, 1999), ikan gabus  dapat tumbuh  dengan  baik  pada suhu air berkisar antara 28 – 31 o C, pH perairan  di  alam  yang  cocok  untuk kehidupannya  adalah  4,5  –  6,0 (Asmawi,  1993 di  dalam Nurajimah, 1999),  kandungan  ammoniak  berkisar antara  0,014  –  0,074  ppm  (Anonim, 1983 di  dalam Nurajimah,  1999).
Selain  itu,  ikan  ini  dapat  bertahan hidup  pada  perairan  yang  kandungan oksigennya  rendah,  yaitu  <  5  ppm (Nurajimah,  1999).  Temperatur  air, ukuran  dan  spesies  ikan  memiliki pengaruh  langsung  pada  respon  imun ikan dan  harus  selalu dipertimbangkan pada  saat  vaksinasi.    Amend  & Eshenour  (1980)  menyatakan  bahwa ikan merespon lebih cepat dan
mempertahankan
imunitas kekebalannya  lagi  secara  langsung sebanding dengan meningkatnya temperatur  air  dan  ukuran  ikan. Menurut (Boyd, 1990 di dalam Olga & Rini, 2006) kisaran suhu 25,00 – 32,00 o C,  pH  6,50  –  9,00,  DO  minimal  2,00 ppm dan ammoniak 0,005 – 1,00 ppm
masih normal untuk kehidupan ikan air tawar.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Tingkat  keberhasilan  vaksinasi dapat  dilihat  dari  meningkatnya  titer antibodi  pada  ikan  gabus.  Hasil signifikan  dari  rute  pemberian  vaksin A.hydrophila ASB-01 setelah divaksinasi  menunjukkan titer antibodi yang  cukup  tinggi  pada  ikan  gabus yang divaksinasi secara injeksi dibandingkan secara oral dan rendaman,  yaitu  vaksinasi  injeksi secara  intramuskular  (42,66),  injeksi intraperitoneal (69,33),  oral (5,33) dan rendaman  (21,33),  sedangkan  pada kontrol  tidak  terjadi  kenaikan  titer antibodi.    Pada  hari  ke  14  setelah vaksinasi booster ,  rerata  titer  antibodi perlakuan  injeksi  meningkat  dengan pesat,  yaitu  secara  intraperitoneal (1.536), secara intramuskular (1.194,67), sedangkan untuk  kenaikan titer antibodi pada perlakuan rendaman dan  oral  tidak  terlalu  pesat,  yaitu rendaman  (37,33) dan oral (21,33).

## Saran
-

## DAFTAR PUSTAKA
Amend,  D.F.,  and  R.W.  Eshenour.  1980.  Development  and  use  of  commercial  fish vaccines. Salmonid. 3(6):5-12
Ellis,A.E.,1989.    Fish  Vaccination.    Departement  of  Agriculture  and  Fiheries  for Scotland Marine Laboratory.  PO Box 101. Victoria road Aberdeen  AB9 8DB. Aquaculture Information Series No.4. 5 pages.
Evensen,  O.,  2009.    Development  in  fish  vaccinology  with  focus  delivery methodologies, adjuvants and formulations. In: Rogers C.(ed), Basurco B. (ed).
The  use  of  veterinary  drugs  and  vaccines  in  Mediterranean  aquaculture . Zaragoza:CIHEAM,  2009.  p.177-186  (Options  Méditerranéesses:  Séries  A. Séminaires Méditerranéens ; n.86
Gudding,  R.,  A.Lillehaug  &  O.Evensen,  1999.  Recent  developments  in  fish vaccinology. Vet Immunol Immunopathol , 72(1-2):203-212
Gomez,  K.A  &  A.A  Gomez.  1995.  Statistical  procedures  for  agricultural  research. (Prosedur  statistik  untuk  penelitian  pertanian.  Diterjemahkan  oleh  E.Samsudin & J.S Baharsah). Universitas Indonesia Press. Jakarta.689 halaman.
Hayes, J., 2000. Aeromonas hydrophila . Oregon State University. http://hmsc.oregonstate.edu/classes/MB492/hydrophilahayes .
Kambalapally,  S.,  M.Harel,  &  J.A.Tobar,  2013.    Oral  Vaccine  Delivery  Proves Effective  In  Reducing  Diseases  In  Salmon. Global  Aquaculture  Advocate . January/February 2013  p. 70-71.
Mulia,  D.S.,  2003.    Pengaruh  Vaksin  Debris  Sel Aeromonas  hydrophila Dengan kombinasi  cara  vaksinasi  dan  booster  terhadap  respon  imun  dan  tingkat perlindungan  relative  pada  lele  dumbo  ( Clarias  gariepinus Burchell).    (Tesis). PPs Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Miyazaki, T. & Jo, Y. 1985. A histopathological study on motile aeromonad disease in ayu. Fish Pathology. 20:55-59
Nakanishi  T  &  Ototake  M.,  1997.    Antigen  uptake  and  immune  resposes  after immersion vaccination. Dev.Biol.Stand . 90:59-68.
Olga, dkk :  Efikasi Rute Vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01.....
Nelson, J.S; J.S. Rohovec & J.L.Fryer., 1985.  Tissue  localization of Vibrio bacterin delivered  by  intraperitoneal  injection,  immersion  and  oral  routes  to Salmo gairdneri . Fish Pathology . 19:263-269
Nitimulyo, K.H, Triyanto & S.Hartati. 1997. Uji antigenisitas dan efikasi Aeromonas hydrophila pada lele dumbo ( Clarias gariepinus ). J.Perikanan UGM. 1(2):9-16
Nurajimah,  1999.  Pemeliharaan  burayak  ikan  gabus  ( Channa  striata )  dengan pemberian  pakan  yang  berbeda  dalam  hapa.    (Skripsi).    Fakultas  Perikanan Unlam, Banjarbaru.
Olga  &  R.K.Rini. 2006. Penggunaan  vaksin whole cell untuk pengendalian penyakit MAS  ( Motile  Aeromonas  Septicemia )  pada  ikan  patin  ( Pangasius hypophthalamus ). Agroscientiae 13(1):48-54
Olga & Fatmawati, 2008.   Penyediaan ikan gabus ( Channa striata ) Bebas Aeromonas hydrophila melalui  vaksinasi.    Hibah  Penelitian.Program  I-MHERE  B.1. Batch  II  Unlam.    Fakultas  Perikanan  Prodi  Budidaya  Perairan.Unlam Banjarbaru. 54 Hal.
Olga,  2012.    Patogenisitas  Bakteri Aeromonas  hydrophila ASB01  pada  ikan  gabus ( Ophiocephalus striatus ). Sains Akuatik 14 (1):33-39
Osman,  K.M;  L.A.Mohamed;  E.H.A.Rahman  &  W.S.Soliman,  2009.  Trials  for vaccination  of  Tilapian  fish  against Aeromonas and Pseudomonas infections using monovalent, bivalent and polyvalent vaccines. Word Journal of Fish and Marine Sciences 1(4):297-304
Pasaribu,F.H.,  N.Dalimunthe  &  M.Poeloengan,  1990.    Pengobatan  dan  pencegahan penyakit ikan bercak merah.  Prosiding Seminar Nasional II Penyakit Ikan dan udang 16-18 Januari.  Badan Penelitian Pengembangan Pertanian:143-152.
Roberts,  R.J.,  1993.    Motile  Aeromonas  Septicemia.    In: Bacterial  Disease  of  Fish (Inglis.V., R.J.Robert and N.R.Bromage, eds). Blackwell Scientific Publication, London, pp. 143 – 155
Press, C.McL & Evensen, O., 1999. The morphology of the immune system in teleost fishes. Fish Shellfish Immunol , 9:309-318
Yin,  Z.,  T.  J.  Lam  and  K.  M.  Sin.  1996.  The  role  of  specific  antiserum  of  catfish ( Clarias  gariepinus )  as  a  defense  against Aeromonas  hydrophila . Fish  Shell Fish Immunol . 6: 57 – 69.
Olga, dkk :  Efikasi Rute Vaksin Aeromonas hydrophila ASB-01.....