Raya et al.:Uji patogenitas jamur Beauveria bassiana yang diisolasi dari 115
J.  Agrotek    Tropika.    ISSN  2337-4993 Vol.  2,    No.  1:  115  –  118,    Januari  2014

## UJI  PATOGENISITAS  JAMUR  Beauveria  bassiana YANG  DIISOLASI  DARI
Hypothenemus  hampei PADA  Sitophilus  oryzae DI TINGKAT  LABORATORIUM
Yosua Adi Aeng Raya,  I Gede  Swibawa &  Indriyati
Jurusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Lampung Jl. Prof. Soemantri Brodjonegoro, No. 1, Bandar Lampung 35145
E-mail: raya.yosua@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Dampak  negatif  pestisida  yang  merugikan  kesehatan  masyarakat  dan  lingkungan  hidup  mendorong  berkembangnya pengendalian hama secara hayati.  Pengendalian hama menggunakan musuh alami, seperti jamur patogen serangga diketahui efektif dan aman bagi lingkungan.  Salah satu spesies jamur patogen serangga yang potensial  sebagai agen pengendali hayati hama adalah Beauveria bassiana Balsamo.  Penelitian ini bertujuan untuk menguji patogenisitas jamur entomopatogen B. bassiana yang diisolasi dari hama penggerek buah kopi sakit terhadap Sitophilus oryzae. Pengujian terpisah dilakukan di laboratorium, yaitu pengujian  isolat jamur dari Lampung Barat dan isolat dari Tanggamus, menggunakan 4 perlakuan dan 5 ulangan yaitu kontrol (akuades), suspensi jamur pada tingkat pengenceran 10 -2 , 10 -3 , dan10 -4 .  Satuan percobaan yaitu 20 individu kumbang S. oryzae disusun menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL).  Hasil penelitian menunjukkan bahwa daya patogenisitas jamur B. bassiana pada S. oryzae masih rendah.  Persentase mortalitas S.oryzae sebesar 52% tersebab B. bassiana isolat Lampung Barat pada konsentrasi spora 24,6x10 6 spora ml -1 dan sebesar 59% tersebab isolat Tanggamus pada konsentrasi spora 64,8x10 6 spora ml -1 . Periode letal serangga uji terinfeksi B. bassiana isolat Lampung Barat yaitu 5,38 hari dengan virulensi 0,24  pada konsentrasi spora 24,6x10 6 spora ml -1 dan pada isolat Tanggamus yaitu 7,42 hari dengan virulensi 0,23 pada konsentrasi spora 64,8x10 6 spora ml -1 .
Kata Kunci: Beauveria bassiana, Patogenisitas, Sitophilus oryzae.

## PENDAHULUAN
Dampak  negatif  pestisida  yang  merugikan kesehatan  masyarakat  dan  lingkungan  hidup  semakin lama semakin menonjol.  Selain itu, penggunaan pestisida juga menyebabkan resistensi, resurgensi, dan peledakan hama sekunder (Untung, 1993).  Dampak negatif inilah yang mendorong berkembangnya pengendalian hayati, yaitu  pengendalian hama dengan menggunakan musuh alami.  Salah satu spesies jamur patogen serangga yang potensial sebagai pengendali beberapa spesies serangga hama adalah Beauveria bassiana Balsamo.  Cendawan ini dilaporkan sebagai agensia hayati yang sangat efektif mengendalikan  sejumlah  spesies  serangga  hama termasuk rayap, kutu putih, dan beberapa jenis kumbang (Gillespie, 1988 dalam Soetopo dan Indrayani, 2007 ). Dari hasil penelitian Maharani (2013), keberadaan jamur patogen serangga dalam perkebunan kopi mampu menyebabkan penyakit pada hama penggerek buah kopi ( Hypothenemus  hampei ).    Persentase  keterjadian penyakit pada hama PBKo yang ditemukan pada buah kopi rusak bertanda adanya infeksi jamur di Sumberjaya, Lampung  Barat  mencapai  45,79  %  pada  kebun agroforestri kompleks dan sebesar 27,23% pada kebun agroforestri sederhana.  Jamur patogen yang menginfeksi
PBKo  ini  memiliki  ciri  yang  mirip  dengan Beauveria bassiana.
Jamur B.  bassiana yang  ditemukan  dari  PBKo tersebut perlu dipelajari lebih lanjut.  Hal ini dilakukan agar dapat diketahui keefektifan setiap isolat jamur yang ditemukan.  Oleh karena itu, maka dalam penelitian ini dilakukan  uji  patogenisitas  isolat B.bassiana yang diisolasi  dari H.  hampei pada  serangga  uji S.  oryzae . Dengan penelitian ini diharapkan dapat diketahui daya patogenisitas B. bassiana yang diisolasi dari H. hampei . Penelitian ini bertujuan untuk menguji patogenisitas jamur B.  bassiana yang  diisolasi  dari H.  hampei pada S. oryzae di tingkat laboratorium.

## BAHAN  DAN  METODE
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Penyakit Tumbuhan  Fakultas  Pertanian  Universitas  Lampung. Perbanyakan  isolat  jamur B.  bassiana dilaksanakan pada  bulan  Juni  2012  sampai  Agustus  2012,  dan aplikasinya pada bulan September sampai Oktober 2012.
Pada  penelitian  ini  digunakan  2  jenis  isolat B. bassiana , yaitu isolat Lampung Barat dan Tanggamus. Setiap  isolat  diujikan  pada  serangga S.  oryzae secara terpisah.  Setiap set percobaan disusun dalam rancangan
acak lengkap (RAL) yang terdiri dari 4 perlakuan dan 5 ulangan.    Perlakuan  yang  dicobakan  adalah  tingkat kerapatan  spora  yang  diperoleh  dengan  membuat suspensi jamur pada tingkat pengenceran 10 -2 ,10 -3 ,10 -4 , dan kontrol (akuades).  Sebagai satuan percobaan adalah 20 ekor kumbang bubuk beras S. oryzae (Coleoptera: Curculionidae) , yang dipelihara pada beras.  Kumbang bubuk  beras  didapatkan  dari  beras  yang  sudah  lama tersimpan.  Kumbang dibiakkan pada beras dalam toples berukuran besar (diameter 30 cm).
Inokulum B. bassiana yang diisolasi dari serangga penggerek bubuk buah kopi ( H. hampei ) sakit berasal dari perkebunan kopi di daerah  Sumberjaya Lampung Barat  dan Tanggamus.    Jamur  yang  telah  dimurnikan dipindahkan ke  cawan petri  yang telah  diisi SDA  dan ditumbuhkan  selama  2  minggu  hingga  mencapai pertumbuhan penuh.  Jamur dipanen dan dipisahkan dari media  SDA,  kemudian  dipindahkan  ke  dalam  tabung reaksi  yang  berisi  aquades  9  ml,  kemudian  di rotary mixer selama 1 menit.  Tahap ini menghasilkan tingkat pengenceran  10 -1 ,  selanjutnya  pengenceran  10 -2 dilakukan  dengan  cara  mengambil  sebanyak  1  ml suspensi 10 -1 dipindahkan ke dalam tabung reaksi yang berisi  9  ml  akuades.    Demikian  seterusnya  dengan tahapan  yang  sama  untuk  mendapatkan  tingkat pengenceran  10 -3 dan  10 -4 .
Kerapatan spora untuk tiap tingkat pengenceran dihitung  menggunakan Haemocytometer di  bawah mikroskop majemuk pada perbesaran 400 x.  Kerapatan spora  per  ml  dihitung  dengan  menggunakan  rumus Gabriel & Riyatno (1989) sebagai berikut :
Keterangan  :
C = kerapatan spora per ml larutan t = jumlah total spora dalam kotak sampel yang
diamati
N = jumlah kotak sampel yang diamati
0,25      = merupakan faktor koreksi penggunaan kotak sampel skala kecil dalam Haemocytometer.
Suspensi B.  bassiana diaplikasikan  dengan menggunakan metode semprot. Serangga uji diletakkan dalam  wadah  dan  disemprot  dengan  5  ml  suspensi patogen  sesuai  perlakuan  tingkat  pengenceran.    Pada perlakuan  kontrol  serangga  hanya  disemprot  dengan aquades.    Serangga  yang  telah  disemprot  dibiarkan tergenang dalam suspensi selama ± 5 detik,  kemudian diletakkan  di permukaan tissue .   Serangga  yang  telah diberi  perlakuan,  diberikan  pakan  beras.  Pengamatan
dilakukan setiap hari untuk melihat tanda adanya infeksi patogen  yaitu  sera ngga  menjadi  sakit  dengan menunjukan gejala tidak aktif bergerak.   Serangga uji yang terindikasi sakit  dikeluarkan dan ditempatkan pada wadah  yang  berbeda  dan  perkembangannya  diamati setiap hari sampai mati.
Peubah patogenisitas yang diamati meliputi tingkat mortalitas, periode letal dan tingkat virulensi.  Tingkat mortalitas dihitung dengan menggunakan rumus :
Periode letal dan tingkat virulensi B. bassiana , dihitung dengan  menggunakan  rumus  Susilo  (1993 dalam Indriyati 2009):
Keterangan  : Hi = Waktu kematian Mi = Jumlah serangga yang mati terinfeksi
Data  hasil  pengamatan  dianalisis  ragam  dan dila njutkan  dengan  uji  pemisahan  nilai  tengah menggunakan  uji  BNT.    Semua  analisis  statistik menggunakan taraf nyata  5% atau 1%.

## HASIL  DAN  PEMBAHASAN
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa perlakuan B.  bassiana isolat  Lampung  Barat berpengaruh nyata terhadap mortalitas S. oryzae . Uji BNT menunjukkan bahwa perlakuan pengenceran 10 -3 atau 24,6 x10 6 spora ml -1 menyebabkan mortalitas 52% yang lebih tinggi dibanding mortalitas pada perlakuan pengenceran  10 -2 atau  10,8  x  10 7 spora  ml -1 dan  10 -4 atau 11,2 x 10 6 spora ml -1 (Tabel 1).
Dari  hasil  analisis  ragam  diketahui    bahwa perlakuan B.  bassiana isolat  Lampung  Barat memberikan  pengaruh  yang  sangat  nyata  terhadap periode letal S. oryzae .  Uji BNT menunjukkan bahwa pada  perlakuan pengenceran  10 -2 atau  10,8x10 7 spora ml -1 menyebabkan  periode  letal  yaitu  5,38  hari,  lebih cepat dibandingkan dengan periode letal pada perlakuan pengenceran 10 -3 atau 24,6x10 6 spora ml -1 yaitu 11,52 hari, dan perlakuan pengenceran 10 -4 atau 11,2x10 6 spora ml -1 yaitu 10,15 hari.  Kedua periode letal yang disebut terakhir ini tidak berbeda nyata (Tabel 1). Analisis ragam,
% 100   serangga seluruh
Jumlah mati serangga Jumlah mortalitas Tingkat F virulensi Tingkat Mi Mi Hi F letal Periode 1 ) ( ) )( ( ) (      6 10 25 , 0    N t C
menunjukkan  bahwa  perlakuan B.  bassiana berpengaruh sangat nyata terhadap virulensi B. bassiana isolat  Lampung  Barat  pada S.  oryzae. Uji  BNT menunjukkan bahwa B. bassiana isolat Lampung Barat pada  perlakuan pengenceran  10 -2 atau  10,8x10 7 spora ml -1 memiliki  virulensi  sebesar  0,24.    Virulensi  pada pengenceran 10 -2 ini  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan virulensi pada perlakuan pengenceran 10 -3 atau 24,6x10 6 spora ml -1 yaitu sebesar 0,09 , tetapi besar virulensi ini tidak berbeda  dengan virulensi  pada pengenceran  10 -4 atau 11,2x10 6 spora ml -1 yaitu sebesar 0,15 (Tabel 1).
Untuk  isolat  Tanggamus,  hasil  analisis  ragam menunjukkan  bahwa  perlakuan B . bassiana nyata mempengaruhi  mortalitas S.  oryzae .    Uji  BNT menunjukkan  bahwa  perlakuan B.  bassiana pada pengenceran 10 -3 atau 64,8 x10 6 spora ml -1 menyebabkan mortalitas paling tinggi yaitu  59% dibandingkan dengan mortalitas  pada  perlakuan  lainnya.     Perlakuan pengenceran 10 -2 atau 11,52x10 7 spora ml -1 dan 10 -4 atau 27,2x10 6 spora  ml -1 menyebabkan  mortalitas  masing- masing 39% dan 46%, kedua tingkat mortalitas ini tidak berbeda nyata (Tabel 2).
Analisis  ragam  juga   menunjukkan  bahwa perlakuan B.  bassiana berpengaruh  sangat  nyata terhadap periode letal S. oryzae . Uji BNT menunjukkan bahwa  periode  letal  pada  semua  tingkat  pengenceran suspensi B.  bassiana tidak  berbeda  kecuali  dengan kontrol.  Periode letal S. oryzae berkisar 7,4 - 8,5 hari (Tabel 2).
Sela in  itu  dari  hasil  analisis  ragam  juga menunjukkan  bahwa  perlakuan B.  bassiana berpengaruh nyata terhadap virulensi B. bassiana pada S.  oryzae .  Uji  BNT  menunjukkan  bahwa  perlakuan pengenceran 10 -2 atau 11,52x10 7 spora ml -1 menyebabkan virulensi jamur patogen uji tinggi mencapai 0,23. Virulensi tersebut  lebih  tinggi  dibanding  dengan  virulensi  pada perlakuan pengenceran 10 -3 atau 64,8x10 6 spora ml -1 dan perlakuan  pengenceran  10 -4 atau  27,2x10 6 spora  ml -1 dengan virulensi masing-masing sebesar 0,14 dan 0,13 (Tabel  2).  Pada  Tabel  1  dan  2,  tampak  bahwa
Tabel 1.  Mortalitas dan periode letal S. oryzae serta virulensi B. bassiana isolat Lampung Barat.
Keterangan : Angka yang diikuti huruf sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata menurut uji BNT pada α 0,01 atau α 0,05 . ** atau * = berbeda nyata menurut uji F pada α 0,01 atau α 0,05 .
Konsentrasi                           Mortalitas (%)                 Periode Letal (hari)                   Virulensi(%)
Kontrol                                       27 b                                    0       c                                0      c 10 -2 atau 10,8x10 -7 31 b                                    5,38  a                                0,24 a 10 -3 atau 24,6x10 -6 52 a                                   11,52 b                                0,09 b 10 -4 atau 11,2x10 -6 29 b                                   10,15 b                                0,15 ab F hitung                                      4,32 *                                15,19 **                              4,71 *
peningkatan  kerapatan  spora  tidak  diikuti  oleh peningkatan  mortalitas  serangga  uji  baik  untuk  isolat Lampung Barat maupun Tanggamus.  Hal tersebut dapat dilihat  dari  persentase  kematian tertinggi  terjadi  pada perlakuan  pengenceran  10 -3 dengan  kerapatan  spora 24,6x10 6 spora ml -1 (isolat Lampung Barat) dan 64,8x10 6 spora ml -1 (isolat Tanggamus). Selain itu, pada kontrol juga  didapati  serangga  yang  mati.  Diduga  pengaruh metode aplikasi yang kurang tepat dan umur S. oryzae yang  tidak  seragam  di  setiap  satuan  percobaan menyebabkan mortalitas tidak konsisten dalam penelitian ini.    Diduga  persentase  mortalitas  setiap  serangga  uji berkaitan  dengan  daya  tahannya  terhadap  patogen. Jumlah  serangga  yang  rentan  pada  satuan  percobaan mempengaruhi  persentase  mortalitas  pada  perlakuan tersebut.
Dari Tabel 1 pada data periode letal B. bassiana Lampung Barat pada konsentrasi 10 -2 dengan kerapatan spora  10,8x10 7 spora  ml -1 menyebabkan  periode  letal pada S. oryzae paling singkat.  Sedangkan dari Tabel 2 untuk  isolat  Tanggamus  periode  letal paling  singkat terjadi pada konsentrasi 10 -3 atau 64,8x10 6 spora ml -1 . Periode  letal  pada S.  oryzae ini,  tidak  jauh  berbeda dengan  periode  letal  kepik  hijau  dan  kutu  daun  yang diberi perlakuan B. bassiana isolat PT GMP dan BVR komersil yaitu masing-masing 5,44 dan 4,58 hari untuk kepik hijau dan masing-masing 3,70 dan 3,72 hari untuk kutu daun (Indriyati, 2009).  Dari informasi ini terdapat indikasi  bahwa  jamur  patogen  serangga B.  bassiana menyebabkan periode letal yang berbeda tergantung jenis serangga uji.
Pada   Tabel  1  dan  2  terliha t  bahwa  pada pengenceran 10 -2 , tingkat virulensi jamur uji lebih tinggi jika dibanding dengan virulensi pada konsentrasi yang lain.  Hal ini disebabkan oleh jumlah spora yang terdapat pada   pengenceran  10 -2 lebih  banyak  daripada pengenceran yang lain. Virulensi tergantung pada jumlah patogen  pada  serangga  inang.    P atogen  yang mempunyai  virulensi  tinggi  biasanya  memiliki  masa inkubasi  yang  pendek  dan  dapat  membunuh  inangnya
Konsentrasi                           Mortalitas (%)               Periode Letal (hari)                   Virulensi(%)
Kontrol                                       32 c                                   0     b                                  0      c 10 -2 atau 11,52x10 -7 39 bc                                 8,46 a                                  0,23 a 10 -3 atau 64,8x10 -6 59 a                                   7,42 a                                  0,14 b 10 -4 atau 27,2x10 -6 46 b                                   8,51 a                                  0,13 b
F hitung                                      4,79 *                                6,19 **                                3,65 *
dengan  cepat  (Tanada  dan  Kaya,  1993).    Dari  hasil penelitian ini, diperoleh informasi bahwa virulensi yang tinggi disertai periode letal yang singkat tidak serta merta diikuti   persentase  mortalitas serangga uji  yang tinggi pula.    Sebab  virulensi  dan  periode  letal  itu  diduga berkaitan dengan karakter biologi suatu jamur patogen. Sedangkan  mortalitas  serangga  uji  berkaitan  dengan ketahanan serangga itu sendiri terhadap suatu patogen.

## KESIMPULAN
Beberapa  kesimpulan  dapat  ditarik  dari  hasil penelitian ini diantaranya adalah daya patogenisitas jamur B. bassiana isolat Lampung Barat dan Tanggamus pada S.  oryzae masih  rendah . Persentase  mortalitas S. oryzae sebesar  52%  tersebab B.  bassiana isolat Lampung Barat pada konsentrasi spora 24,6x10 6 spora ml -1 dan  59%  tersebab  isolat  Tanggamus  pada konsentrasi  spora  64,8x10 6 spora  ml -1 .  Periode  letal serangga  uji  terinfeksi B.  bassiana isolat  Lampung Barat  yaitu  5,38  hari  dengan  virulensi  0,24    pada konsentrasi spora 24,6x10 6 spora ml -1 dan pada isolat Tanggamus yaitu7,42 hari dengan virulensi 0,23  pada konsentrasi spora 64,8x10 6 spora ml -1 .

## SANWACANA
Penelitian  ini  merupakan  bagian  dari  proyek penelitian dosen  yang didanai  oleh Dikti  melalui  dana Hibah Bersaing.  Untuk itu, dalam kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada bapak Dr. Ir. Hamim Sudarsono, M.Sc. selaku ketua peneliti.

## DAFTAR  PUSTAKA
Gabriel,  B.P.  &  Riyanto.    1989. Metarhizium anisopliae  Taksonomi,  Patologi,  Produksi  dan Apli kasinya. Proyek Pengembangan Perlindungan Tanaman Perkebunan.  Direktorat
Perlindungan Tanaman Perkebunan. Departemen Pertanian. Jakarta.  25  hlm.
Indriyati.    2009.    Virulensi  jamur  entomopatogen Beauveria  bassiana (Balsamo)  Vuillemin (Deuteromycotina: Hyphomycetes) terhadap kutu daun  ( Aphis spp.)  dan  kepik  hijau  ( Nezara viridula ). Jurnal HPT Tropika , 9  (2): 92-98.
Maharani, J.S.  2013.  Keterjadian Penyakit Tersebab Jamur Pada Hama Penggerek Buah Kopi (Pbko) di  Pertanaman  Kopi  Agroforestri. Skripsi . Fakultas  Pertanian.    Universitas  Lampung. Bandar Lampung.  56 hlm.
Soetopo,  D.  &  Indrayani,  I.    2007. Status  Teknoogi dan  Prospek    Beauveria  bassiana  Untuk Pengendali an  Serangga  Hama  Tanaman Perkebunan  Yang  Ramah  Lingkungan .    Balai Penelitian  Tanaman  Tembakau  dan  Serat. Malang. 18 hlm.
Tanada,  Y.  &  Kaya,  H.K..  1993. Insect  Pathology . Academic Press. New York. 666  hlm.
Untung,  K.  1993. Pengantar  Pengelolaan  Hama Terpadu . UGM Press, Yogyakarta.  273 hlm.
Tabel 2.  Mortalitas dan periode letal S. oryzae serta virulensi B. bassiana isolat Tanggamus.
Keterangan : Angka yang diikuti huruf sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata menurut uji BNT pada α 0,01 atau α 0,05 . ** atau * = berbeda nyata menurut uji F pada α 0,01 atau α 0,05 .