## SKRINING DAN UJI DAYA HAMBAT ACTINOMYCETES DARI RIZOSFER TANAMAN KOPI ARABIKA DI KABUPATEN BENER MERIAH TERHADAP Collecotrichum coffeanum
Screening and Testing of The Inhibitory Power of Actinomycetes from The Rhizosphere of Arabica Coffee Plants in Bener Meriah District Against Collecotrichum coffeanum
Yusnizar Yusnizar *1 , Fikrinda Fikrinda 1 , Syafruddin Syafruddin 2 , Hifnalisa Hifnalisa 1 , Khairini Simahtuah 1
1 Program Studi Ilmu Tanah, Fakultas Pertanian, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh, 23111, Indonesia
2 Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh, 23111, Indonesia
3 Pusat Riset Kopi dan Kakao Aceh, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh, 23111, Indonesia
* e-mail: nizaribr17@usk.ac.id

## ABSTRACT
Actinomycetes  are  microorganisms  of  a  group  of  gram-positive  bacteria  that  produce  uniseluser mycelium.    Colonies  of  Actinomycetes  grow  slowly,  are  attached  to  the  substrate  and  can  produce spores. Actinomycetes are known to be able to control plant pathogens. This study aims to screen and study the inhibitory power of Actinomycetes from the rhizosphere of Arabica coffee rhizosphere against Collecotrichum coffeanum. This study found Actinomycetes in the rhizosphere of Arabika coffee plants from Bener Meriah. There were 80 Actinomycetes isolates. Eight of the 21 isolates selected isolate were against  Collecotrichum  coffeanum  with  different  inhibitory  ratios  from  each  isolate.  There  were 1 PRG/RR/10 -3 /2-1, 2 PRG/WP/10 -4 /1-1-1, 2 PRG/AG/10 -4 /3-1-1, 1 M/SR/10 -3 /2-1, 2 M/SR/10 -3 /2-1,
1 M/JAJ/10 -3 /2-1, 1 B//KR/10 -3 /2, 2 B/KR/10 -4 /1. Keywords: Screening; Actinomycetes; rhizosphere; Collecotrichum coffeanum

## PENDAHULUAN
Kopi arabika merupakan jenis kopi yang  berpotensi  menjadi  kopi  berkulitas tinggi karena memiliki beberapa persyaratan  khusus  bagi  pertumbuhannya. Kopi  arabika  Indonesia  sudah  lama dikenal  di  pasar  Internasional  dan memiliki harga yang lebih mahal dibandingkan  dengan  jenis  kopi  lainnya (Kusmiati  dan  Nursamsiyah,  2015).  Kopi arabika  akan  tumbuh  dan  berproduksi dengan  baik  di  dataran  tinggi  tropis (Sihalolo,  2009).  Daerah  penghasil  kopi utama  di  Indonesia  adalah  Provinsi Sumatera  Selatan,  Lampung  dan  Aceh. Daerah penghasil kopi terbesar di Provinsi Aceh adalah Kabupaten Aceh Tengah dan Bener  Meriah  (Ulya  et  al.,  2016). Kabupaten  ini  memiliki  luas  ±1.  919,  69 km 2 , terdiri dari 10 kecamatan diantaranya  adalah  Pintu  Rime  Gayo, Gajah  Putih,  Timang  Gajah,  Bukit,  Wih Pesam,  Bandar,  Permata,  Syiah  Utama,
Bener  Kelipah,  dan  Mesidah.  Bener Meriah memiliki perkebunan kopi dengan luas tanam seluas 39. 533 ha (Wahyuni et al.,  2013).  Secara  geografis  Kabupaten Bener  Meriah  memiliki  ketinggiann  rata- rata  1000-2500  m  dpl  (Putri  et  al,  2015). Tempat  yang  sesuai  bagi  pertumbuhan kopi arabika berkisar antara 1000-1700 m dpl.  Pada  lokasi  tersebut,  tanaman  kopi arabika  mudah  terserang  penyakit  karena memiliki  iklim  yang  tidak  menentu (Syakir dan Surmaini, 2017).
Kondisi  iklim  yang  tidak  menentu seperti  musim  hujan  yang  intensitasnya terlalu  tinggi  meningkatkan kelembaban dan  merupakan  salah  satu  faktor  yang dapat  memicu  tumbuhnya  patogen  seperti bakteri,  fungi,  dan  virus.  Menurut Semangun (1989), penyebab paling umum penyakit pada tanaman kopi adalah fungi. Penyakit  pada  tanaman  kopi yang disebabkan  oleh  fungi  antara  lain  busuk buah  dan  daun  yang  disebabkan  oleh
Collecotrichum  coffeanum, karat  daun disebabkan oleh Hemileia  vastatrix , bercak buah disebabkan oleh Cercospora , Jamur  Upas  disebabkan  oleh Corticium salmonicolor dan  akar  putih  disebabkan oleh Rigidoporus sp.
Sebagian besar petani kopi menggunakan bahan kimia seperti fungisida  untuk  mengatasi  masalah  ini. Upaya pengendalian patogen sering dilakukan dengan menggunakan fungisida, namun hal tersebut tidak efektif karena  penggunaan  fungisida  yang  terus menerus  dapat  menyebabkan  resistensi patogen.  Oleh  karena  itu,  alternatif pengendalian  penyakit  adalah  dengan menggunakan agen hayati. Menurut
Oedjijono  (2019)  salah  satu  bakteri  yang berpotensi  sebagai  agen  hayati  adalah
Actinomycetes. Actinomycetes ialah mikroorganisme  kelompok  bakteri  gram positif  yang  menghasilkan  miselium uniseluser sehingga
mempunyai kenampakan seperti fungi. Koloni Actinomycetes tumbuh  perlahan,  melekat di  substrat  serta  mempunyai  kemampuan memproduksi spora. Actinomycetes melakukan reproduksi melalui pembelahan  sel. Actinomycetes dikenal mampu  mengendalikan  patogen  dan menginduksi  ketahanan  tanaman  (Rusli, 2016).  Metabolit  yang  dihasilkan  oleh
Actinomycetes memiliki aktivitas
antagonis  terhadap  bakteri  dan  fungi. Beberapa Actinomycetes juga dapat menghasilkan  senyawa  herbisida  dan insektisida yang terdiri dari amfoterisin B, nistatin  dan  natamistin  sebagai  anti  fungi yang dapat mengurangi penggunaan bahan kimia  untuk  melindungi  lingkungan  dari efek  negatif  bahan  kimia  beracun  (Sahur, 2021).
Keberhasilan  pengendalian  hayati dengan memanfaatkan Actinomycetes terhadap  patogen  tanaman  sudah  banyak diteliti. Diantaranya penggunaan Actinomycetes yang  berpotensi  sebagai
agen  pengendali  hayati  yang  dapat menghambat pertumbuhan patogen Rhizoctoni  solani dan  meningkatkan pertumbuhan  tanaman  jagung  (Wisdawati et  al,  2015).  Penggunaan Streptomyces griseus strain 5406 yang dapat menghambat  pertumbuhan  patogen  tular tanah  oleh Rhizoctonia  solani dan
Verticillum  alboatrum sebagai  penyakit busuk akar pada tanaman kapas (Sastrahidayat,  2011).  Yusnizar  (2001), berhasil  mengisolasi Actinomycetes dari Ekosistem  Air  Hitam  Kalimantan  Tengah dan  23  dari  isolat  tersebut  dapat menghambat  pertumbuhan Rhizoctonia solani dan Helminthosporium  oryzae . Farahdilla  (2018)  menemukan  isolat Actinomycetes dari  rizosfer  tanaman  kopi arabika yang memiliki kemampuan antagonis  dengan  daya  hambat  lemah hingga sedang terhadap patogen Cercospora  coffeicola penyebab  penyakit bercak  daun  pada  tanaman  kopi  arabika dengan  menghambat  laju  pertumbuhan Cercospora coffeicola .
Berdasarkan  uraian  tersebut  maka perlu dilakukan penelitian skrining dan uji daya  hambat Actinomycetes dari  rizosfer tanaman kopi arabika di Kabupaten Bener Meriah terhadap Collecotrichum coffeanum .

## BAHAN DAN METODE
Skrining Actinomycetes dilakukan di
Laboraturium  Biologi  Tanah  Fakultas Pertanian Universitas Syiah Kuala. Sampel tanah yang digunakan berasal dari kebun  kopi  arabika  Kabupaten  Bener Meriah.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  GPS,  bor  tanah, kantong  plastik,  karet  gelang,  spidol, label, erlenmeyer, spatula, kompor, tabung reaksi,  rak  tabung  reaksi,  cawan  petri, gelas  ukur,  inkubator,  shaker,  alumunium foil,  kapas,  tissue,  spatula,  jarum  ose,
bunsen,  botol,  timbangan  analitik  dan penggaris.
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  sampel  tanah  yang berasal dari kebun kopi arabika
Kabupaten Bener Meriah, aquadest, NaCl, alkohol, media isolasi Actinomycetes yaitu
Starch casein agar (SCA), fungi Collecotrichum coffeanum yang diperoleh dari  March  Galery,  Perum  Puri  Astapada Indah  RT  02  R  Kabupaten  Lumajang, Jawa  Timur,  dan Potato  Dextrose  Agar (PDA).

## Metode Penelitian
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  metode  eksploratif. Adapun  tahapan-tahapan  yang  dilakukan yaiti pengambilan sampel, isolasi Actinomycetes , pemurnian koloni Actinomycetes ,  dan  uji  daya  hambat Actinomycetes terhadap Collecotrichum coffeanum kemudian  dilakukan  analisis data secara deskriptif.

## Pengambilan Sampel
Pengambilan  sampel  dilakukan  pada 6 kecamatan yang ada di Kabupaten Bener Meriah  yaitu  di  kecamatan  Pintu  Rime Gayo,  Gajah  Putih,  Bukit,  Bandar,  Bener Kelipah, dan Mesidah. Dasar pengambilan sampel pertama kali yaitu dengan melihat Kecamatan  yang  memiliki  tanaman  kopi, kemudian  dari  kecamatan  tersebut  dipilih desa  yang  dapat  mewakili  beberapa  desa lain  di  kecamatan  tersebut.  Total  jumlah desa  tempat  pengambilan  sampel  adalah 20  desa.  Sampel  tanah  diambil  pada rizosfer  tanaman  kopi  yang  berumur antara  antara  15-25  tahun.  Adapun langkah-langkah pengambilan sampel
adalah: 1. Sampel  tanah  diambil  pada  area rizosfer tanaman kopi arabika
menggunakan bor tanah pada kedalaman 0 - 20 cm.
2. Setiap titik lokasi pengambilan sampel, diambil  tanah  sebanyak  4  titik  di  satu tanaman  kopi  tepat  di  tengah  kanopi
tanaman  (dari  batang  sampai  ujung kanopi  terluar)  yaitu  sekitar  60  –  75 cm.
3. Satu  titik  diambil  250  g  tanah, kemudian dikompositkan dengan tanah dari  titik  lainnya  di  satu  tanaman  kopi arabika  sehingga  pada  satu  sampel diperoleh kurang lebih 1 kg tanah.
4. Sampel  tanah  dimasukkan  ke  dalam kantong  plastik  dan  disimpan  dalam kulkas dengan suhu 4 o C.
Isolasi Actinomycetes
Isolasi Actinomycetes dilakukan menggunakan  metode  cawan  agar  tuang dari  sampel  tanah  yang  berasal  dari Kabupaten  Bener  Meriah.  Sampel  tanah diambil sebanyak 10 g lalu dimasukkan ke dalam  erlenmeyer  yang  berisi  larutan fisiologis (larutan NaCl 0,85 %) sebanyak 90  ml  dan  dikocok  dengan  shaker  pada kecepatan  150  rpm  selama  30  menit. Kemudian  dilakukan  pengenceran  sampai 10 -4 . Sebanyak  1  ml  suspensi  dari  seri pengenceran  10 -3 dan  10 -4 dipipet  dengan pipet  steril  ke  cawan  petri  kemudian dituangkan  media Starch  Casein  Agar (SCA)  yang  sudah  disterilkan  (±12 ml/cawan  petri).  Media  SCA  dibuat dengan melarutkan 10 g Soluble Starch; 2 g  KNO3;  2  g  K 2 HPO 4 ;  0,3  Kasein;    0,05 MgSO₄.7H₂O;  dan  15  ml  agar  dalam  1  L aquades.
Kemudian  putar  cawan  petri  tersebut  tiga kali  ke  kiri  dan  tiga  kali  ke  kanan  agar suspensi  tersebar  merata  di  dalam  agar dan dibiarkan sampai mengeras, kemudian inkubasi selama 7 hari pada suhu 32 o C.
Pemurnian Koloni Actinomycetes Actinomycetes yang  telah  diisolasi dilakukan  pemurninan  dari  setiap  koloni yang  berbeda  berdasarkan  pengamatan makroskopis  dengan  melihat  warna  dan bentuk  koloni  (Susilowati  et  al.,  2007). Koloni Actinomycetes tersebut  diambil menggunakan jarum ose kemudian dipindahkan  ke  media  SCA  yang  telah
padat  dengan  metode  goresan  kuadran ( steak  quadrant )  untuk  mendapatkan isolat murni (Sembiring et al., 2000).
Pemurnian dilakukan dengan mengambil  isolat Actinomycetes hasil isolasi  dengan  jarum  ose  lalu  di  gores pada media SCA yang telah padat dengan metode goresan kuadran ( steak quadrant ), kemudian inkubasi selama 7 hari. Pemurnian  dilakukan  dua  kali  sampai didapatkan  isolat  tunggal.  Kemudian koloni  tunggal  digores  pada  agar  miring dengan media SCA lalu diinkubasi selama 7  hari,  kemudian  isolat  pada  agar  miring ini disimpan di dalam kulkas dengan suhu 4 o C.
Uji Daya Hambat Actinomycetes terhadap Collecotrichum coffeanum Patogen uji yang digunakan adalah fungi  yang  menyebabkan  penyakit  busuk buah kopi yaitu Collecotrichum coffeanum . Isolat Collecotrichum coffeanum diremajakan  dengan  cara mengikis  spora  dengan  menggunakan jarum  ose  dan  dimasukkan  ke  dalam media  PDA  yang  telah  disterilkan  (20 cm/100 ml media PDA), media PDA yang telah  berisi  patogen  uji  dikocok  sampai spora  merata  di  dalam  media,  kemudian tuang  ke  dalam  cawan  petri  dan  di inkubasi  pada  suhu  32 o C  selama  7  hari (Yusnizar, 2001).
Uji  daya  hambat Actinomycetes
terhadap Collecotrichum coffeanum dilakukan  sebanyak  2  tahap.  Patogen  uji dan Actinomycetes
ditumbuhkan seiringan,  meskipun  pada  umumnya pertumbuhan Actinomycetes lebih  lambat daripada Collecotrichum coffeanum , tetapi pertumbuhan fungi mampu dihambat oleh Actinomycetes (Yusnizar, 2001).
Tahap  pertama  adalah  uji  daya hambat dilakukan terhadap 80 isolat yang telah  berhasil  diisolasi  dan  disimpan. Masing-masing isolat diuji daya hambatnya terhadap Collecotrichum coffeanum pada  media  PDA.  Dalam  satu
cawan  petri  diisi  ±12  ml  media  PDA, kemudian dibiarkan sampai mengeras lalu diambil isolat Actinomycetes menggunakan jarum ose dari botol simpan masing-masing  4  isolat  dalam  satu  cawan petri dan ditotolkan pada media PDA yang telah mengeras. Kemudian diambil Collecotrichum coffeanum sebagai patogen  uji  sebesar  0,5  cm 2 lalu diletakkan di tengah-tengah Actinomycetes dengan  jarak  2  cm  dari Actinomycetes ke Collecotrichum coffeanum sebagai  patogen  uji,  kemudian inkubasi  selama  7  hari  pada  suhu  32 o C. Pengamatan  dilakukan  pada  7  HSI  yaitu dengan  mengamati Actinomycetes yang menghambat pertumbuhan Collecotrichum coffeanum sebagai patogen  uji.  Kemudian Actinomycetes yang  mampu  menghambat  pertumbuhan Collecotrichum  coffeanum tersebut  diuji lagi  daya  hambatnya    pada  tahap  kedua dengan menggunakan metode pour plate. Uji  daya  hambat Actinomycetes terhadap Collecotrichum  coffeanum pada tahap  kedua  dilakukan  dengan  metode pour plate. Spora
Collecotrichum coffeanum dikikis  menggunakan  jarum ose lalu dimasukkan ke dalam media PDA yang  telah  disterilkan.  Media  PDA  yang telah  berisi  patogen  uji  dikocok  sampai spora  merata  di  dalam  media,  kemudian media  yang  telah  berisi Collecotrichum coffeanum sebagai  patogen  uji  tersebut dituang  ke  dalam  cawan  petri  (±12 ml/cawan petri).  Kemudian diambil isolat Actinomycetes yang  sudah  ditentukan pada tahap uji daya hambat pertama  yaitu yang menghambat pertumbuhan Collecotrichum  coffeanum lalu  ditotolkan di  tengah  petri  yang  berisi  media  yang telah diinokulasikan dengan fungi Collecotrichum  coffeanum yang  telah mengeras.  Kemudian  diinkubasi  selama  7 hari  pada  suhu  32 o C.  Pengamatan  daya hambat  dilakukan  pada  7  HSI  dengan mengukur  ratio  zona  bening  sebagai indicator  daya hambat pertumbuhan
Collecotrichum coffeanum oleh Actinomycetes yang  ditandai  dengan terbentuknya zona bening di  sekitar isolat Actinomycetes. Pengamatan  dilakukan dengan mengukur diameter Actinomycetes dan  diameter  zona  bening,  kemudian dihitung  ratio  zona  bening  dengan membagi  diameter  zona  bening  dengan diameter Actinomycetes. Diameter  isolat dan diameter zona hambat diukur menggunakan penggaris (Yusnizar, 2001).

## Analisis Data
Analisis  data  dilakukan  berdasarkan pengamatan  makroskopik  daya  hambat pertumbuhan Collecotrichum  coffeanum
berupa  ratio  zona  bening  yang  dihasilkan isolat Actinomycetes terhadap Collecotrichum coffeanum . HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Skrining Actinomycetes dari
Rizosfer Tanaman Kopi Arabika Habitat Actinomycetes umumnya terdapat  pada  daerah  perairan  dan  tanah (Nurkanto, 2007). Actinomycetes merupakan  salah  satu  mikroorganisme tanah yang paling melimpah (Umrah et al,
2012).  Hasil  isolasi Actinomycetes dari rizosfer  tanaman  kopi  arabika  diperoleh dari  tingkat  pengenceran  10 -3 dan  10 -4 pada media SCA.
Tahap isolasi berhasil diisolasi dan disimpan  80  isolat Actinomycetes dari rizosfer  tanaman  kopi  yang  berasal  dari Kabupaten  Bener  Meriah.  Jumlah  isolat
Actinomycetes yang  ditemukan  berbeda antar sampel berdasarkan tingkat pengenceran,  lebih  banyak Actinomycetes ditemukan pada tingkat pengeceran rendah  dibandingkan  tingkat  pengenceran tinggi.  Contoh  koloni Actinomycetes hasil pemurnian dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Isolat Actinomycetes hasil pemurnian
Koloni Actinomycetes akan
tumbuh  dengan  permukaan  cembung, konsistensi  keras,    dan  kenampakan permukaan  koloni  kasar  atau  halus  pada media padat (Sastrahidayat, 2011).
Actinomycetes juga  menghasilkan antibiotik  yang  digunakan  luas  oleh masyarakat  sebagai  obat  untuk  kesehatan,
peternakan,  hortikultura  dan  agribiologi lainnya (Nurkanto et al, 2008).
Actinomycetes yang  diisolasi  dari  sampel tanah berbagai tipe subtrat dan habitat asal Ternate  memiliki  kelimpahan  yang  cukup tinggi dan ditemukan 2 strain Actinomycetes yang  memiliki  aktivitas antibiotik  sangat  kuat  bahkan  lebih  kuat
dari  antibiotik  komersial  (Nurkanto  et  al, 2010). Tidak hanya dalam bidang kesehatan, Actinomycetes juga  memiliki peranan  penting  dalam  bidang  pertanian, Yusnizar  (2001)  berhasil  mengisolasi  14 isolat Actinomycetes
yang dapat menghambat Rhizoctonia  solani dan Helminthosporium  oryzae , diantaranya ada 4 isolat yang hanya dapat
menghambat Rhizoctonia  solani (ICBB 247, 313, 797, 1198), 4 isolat yang hanya menghambat Helminthosporium  oryzae (ICBB  307,  359,  796  dan  1197)  dan  6 isolat yang dapat menghambat pertumbuhan  kedua  patogen  uji  (ICBB
304,  345,  346,  353,  365,  dan  1226.
Pandey et al (2002) berhasil membuktikan Actinomycetes memiliki aktivitas antibakteri  dari  isolat  asal  tanah  di  Nepal terhadap bakteri patogen Bacillus subtilis, Sthapylococcus aures dan Eschericia coli . Menurut  Prescott  (2008)  mikroorganisme ini tidak hanya ditemukan di tanah, tetapi juga  di  ekosistem  laut,  kompos,  lumpur, dasar danau dan ekosistem lainnya.
Dari  hasil  isolasi  ini  ditemukan beberapa isolat Actinomycetes yang secara alami menghambat pertumbuhan mikoorganisme lain, penyebab kontaminasi. Isolat yang dapat menghambat  mikroorganisme  penyebab kontaminasi dapat dilihat pada Gambar  2.
Gambar 2. Koloni Actinomycetes yang mampu menghambat pertumbuhan mikroorganisme penyebab kontaminasi
Hasil  Uji  Daya  Hambat Actinomycetes terhadap Collecotrichum coffeanum Berdasarkan  Tabel  2  dapat  dilihat bahwa  isolat Actinomycetes memiliki kemampuan  daya  hambat  yang  berbeda- beda  terhadap Collecotrichum  coffeanum . Dari  21  isolat  yang  diuji  terdapat  8  isolat yang  mampu  menghambat  pertumbuhan Collecotrichum  coffeanum dengan  rasio daya  hambat  yang  berbeda  dari  masing- masing  isolat.  Isolat Actinomycetes yang
menghasilkan  zona  bening  yang  sangat jelas  dihasilkan  oleh  isolat 2 B/KR/10 -4 /1 dengan rasio daya hambat sebesar 3,3 cm, 2 PRG/AG/10 -4 /3-1-1dengan  rasio  daya hambat  sebesar  3,14  cm, 1 M/JAJ/10 -3 /2-1 dengan rasio daya hambat sebesar 1,9 cm, dan  isolat 2 M/SR/10 -3 /2-1  dengan  rasio daya  hambat  sebesar  1,41  cm.  Kemudian isolat  yang  menghasilkan  zona  bening jelas  dihasilkan  oleh  isolat 1 B/KR/10 -3 /2 dengan rasio daya hambat sebesar 3,1 cm,
isolat 1 PRG/3R/10 -3 /2-1 dengan rasio daya hambat  sebesar  2,13  cm,  dan  isolat 1 M//SR/10 -3 /2-1 dengan rasio daya hambat sebesar  1,4  cm  serta  isolat  yang menghasilkan  zobna  bening  kurang    jelas yaitu  isolat 2 PRG/WP/10 -4 /1-1-1  dengan rasio  daya  hambat    sebesar  1,92  cm  dan isolat 1 M/SR/10 -3 /2-1 dengan daya hambat sangat jelas sebesar 1,3 cm. Ketidakseragaman isolat yang menghasilkan diameter daya hambat pada fungi  patogen  uji  dapat  disebabkan  oleh jenis metabolit antimikroba yang
dihasilkan  dari  masing-masing  isolat  juga berbeda. Hasil uji Actinomycetes terhadap Collecotrichum  coffeanum dapat  dilihat pada Gambar 3.
Tabel 1. Hasil Uji Daya Hambat Actinomycetes terhadap Collecotrichum coffeanum Kode Isolat Diameter Isolat (cm) Diameter Zona Hambat (cm) Rasio Daya Hambat 1 PRG/RR/10 -3 /2-1 0,75 1,6 2,13 1 PRG/WP/10 -3 /2-1-1 - - - 1 PRG/WP/10 -3 /3-1-1 - - - 2 PRG/WP/10 -4 /1-1-1 0,7 1,35 1,92 2 PRG/AG/10 -3 /1-1-1 - - - 2 PRG/AG/10 -4 /3-1-1 2,6 8,2 3,14 1 M/SR/10 -3 /2-1 0,9 1,3 1,4 2 M/SR/10 -3 /2-1 6,2 8,8 1,41 1 M/JAJ/10 -3 /2-1 4,06 7,6 1,9 2 M/JAJ/10 -3 /1-1 - - - 1 M/JAJ/10 -4 /1-1 - - - 2 M/JAJ/10 -4 /2-1 - - - 1 B/HWI/10 -3 /2-1 - - - 1 B/HWI/10 -3 /2-2 - - - 1 B//KR/10 -3 /2 0,45 1,4 3,1 2 B/KR/10 -3 /3 - - - 2 B/KR/10 -4 /1 0,45 1,5 3,3 2 B/KR/10 -4 /2 - - - 1 B/K/10 -3 /2 - - - 2 B/K/10 -3 /2 - - - 2 B/K/10 -4 /2 - - -
Gambar 3 . Isolat Actinomycetes mampu menghambat pertumbuhan Collecotrichum coffeanum
Isolat Actinomycetes yang  berhasil diisolasi  menunjukkan  kemampuan  untuk menghambat  pertumbuhan  fungi  patogen yaitu Collecotrichum  coffeanum yang ditandai dengan terbentuknya zona bening di  sekitar  isolat  seperti  pada  Gambar  3. Menurut  Ramadhan  (2011)  hal  ini disebabkan  adanya  metabolit  sekunder yang  bersifat  antibateri  dan  antifungi berdifusi  kedalam  media  agar  dan mencegah pertumbuhan patogen. Menurut Rao  (1994)  senyawa  metabolit  sekunder yang dihasilkan oleh Actinomycetes merupakan  senyawa  kimia  yang  memiliki kemampuan bioaktivitas bagi pertumbuhan  mikrorganisme.  Metabolit sekunder berfungsi untuk mempertahankan diri dari kondisi lingkungan  yang  kurang  menguntungkan dan  digunakan  oleh  organisme  untuk berinteraksi dengan lingkungannya.
Menurut  Pelczar  (1988)  cara  kerja zat  antimikroba  pada  mikroorganisme yaitu  pertama  merusak  dinding  sel. Umumnya,  bakteri  memiliki  lapisan  luar keras  yang  disebut  dinding  sel.  Fungsi dinding sel ini adalah untuk mempertahankan bentuk sel dan menahan sel.  Dinding  sel  bakteri  tersusun  atas lapisan  peptidoglikan,  yaitu  polimer komplek  terdiri  dari  rangkaian  susunan asam  N-asetil  glukosamin  dan  asam  N- asetilmuramat yang tersusun secara bergantian.  Adanya  lapisan  peptidoglikan
ini  mengakibatkan  dinding  sel  menjadi keras dan kuat, sehingga mampu menahan tekanan  osmotik  dalam  sel  yang  keras. Pada  konsentrasi  rendah,  zat  antimikroba mampu  menghambat  pembentukan  ikatan glikosida  sehingga  dapat  mengganggu pembentukan  dinding  sel  baru.  Kedua, kelangsungan  hidup  sel  sangat  tergantung pada  protein  dan  molekul  asam  nukleat. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  gangguan dalam  pembentukan  atau  fungsi  zat tersebut  dapat  menyebabkan  kerusakan total  pada  sel.  Bahan  antimikroba  yang dapat  mendenaturasi  protein  dan  asam nukleat,  dapat merusak  sel  sehingga  tidak dapat  diperbaiki.  Ketiga,  sitoplasma dikelilingi  oleh  membran  sel  yang mempunyai  permeabilitas  selektif  yang terdiri  dari  fosfolipid  dan  protein.  Fungsi membran  plasma  adalah  untuk  mengatur keluar masuknya zat tertentu di dalam sel. Proses  pengangkutan  zat  yang  lebih dibutuhkan  ke  dalam  maupun  ke  luar  sel kemungkinan  karena  adanya  protein pembawa  (carrier),  di  dalam  membran sitoplasma  dan  adanya  enzim  protein  di membran plasma yang mensintesis komponen  peptidoglikan  dari  membran luar. Apabila fungsi membran sel terganggu oleh adanya bahan antimikroba, maka  permeabilitas  sel  bakteri  akan mengalami  perubahan,  sehingga  akan mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau kematian sel. Tabel 3. Bentuk dan warna isolat yang dapat menghambat pertumbuhan Collecotichum coffeanum No Kode Isolat Bentuk Permukaan Warna 1 1 PRG/RR/10 -3 /2-1 Bulat Bertepung Putih 2 2 PRG/WP/10 -4 /1-1-1 Bulat Bertepung Kuning 3 2 PRG/AG/10 -4 /3-1-1 Bulat Berlendir Putih 4 1 M/SR/10 -3 /2-1 Bulat Bertepung Kuning 5 2 M/SR/10 -3 /2-1 Bulat Berlendir Putih 6 1 M/JAJ/10 -3 /2-1 Bulat Berlendir Putih 7 1 B//KR/10 -3 /2 Bulat Bertepung Putih 8 2 B/KR/10 -4 /1 Bulat Bertepung Putih Jumlah 8 Isolate Pengamatan  bentuk  dan  warna koloni dilakukan pada isolat Actinomycetes yang  menghasilkan  daya
hambat terhadap
Collecotrichum coffeanum yang telah di inkubasi selama 7 hari pada suhu 32 o C. Dari hasil
pengamatan  menunjukkan  bahwa  tidak semua  isolat  memiliki  warna  dan  bentuk permukaan yang sama. Koloni isolat yang muncul  pada  umumnya  memiliki  bentuk bulat  dengan  tepian  rata  dan  tidak beraturan,  serta  permukaan  yang  licin, kasar, dan keriput. Berdasarkan penelitian Sulistyanti  dan  Akbar  (2014)  permukaan bertepung merupakan kumpulan hifa yang terdiri  dari  banyaknya  spora.  Menurut Nurkanto  (2007) Actinomycetes memiliki warna  koloni  yang  berbeda  karena kandungan pigmen setiap sel penyusunnya berbeda-beda.  Warna  setiap  miselium antara  lain:  putih,  abu-abu,  coklat,  hijau, merah muda, kuning dan lainnya.

## KESIMPULAN
1. Isolat yang berperan antagonis terhadap pertumbuhan  jamur Collecotrichum coffeanum antara lain 1 PRG/RR/10 -3 /2- 1, 2 PRG/WP/10 -4 /1-1-1, 2 PRG/AG/10 - 4 /3-1-1, 1 M/SR/10 -3 /2-1, 2 M/SR/10 -3 /2-
1, 1 M/JAJ/10 -3 /2-1, 1 B//KR/10 -3 /2, 2 B/KR/10 -4 /1. 2. Isolat Actinomycetes yang menghasilkan zona hambatan atau zona bening  yang  paling  besar  di  sekitaran jamur patogen Collecotrichum coffeanum adalah  isolat  dengan  kode 2 M/SR/10 -3 /2-1.
3. Isolat  yang  menghasilkan  zona  bening yang  terlihat  sangat  jelas  didapat  pada isolat 2 B/KR/10 -4 /1  dengan  rasio  zona hambat  sebesar  3,3  cm, 2 PRG/AG/10 - 4 /3-1-1  dengan  rasio  zona  hambat sebesar  3,14  cm, 1 M/JAJ/10 -3 /2-1 dengan  rasio  zona  hambat  sebesar  1,9 cm,  dan  isolat 2 M/SR/10 -3 /2-1  dengan rasio zona hambat sebesar 1,41 cm.

## DAFTAR PUSTAKA
Farahdilla, D., 2018. Potensi Antagonisme
Actinomycetes dari Rizosfer Tanaman Kopi ( Coffea sp .) terhadap Patogen Cercospora coffeicola
Penyebab Bercak Daun pada
Tanaman  Kopi.  Skripsi.  Universitas Brawijaya. Kusmiati, A., dan Nursamsiyah, D., 2015. Kelayakan  Finansial  Usaha  Tani Kopi Arabika dan Prospek Pengembangannya  di  Ketinggian Sedang. Agriekonomika .  4(1),  pp. 221-234. Nurkanto, A., 2007. Identifikasi Actinomycetes Tanah  Hutan  Pasca Kebakaran Bukit Bangkirai Kalimantan  Timur  dan  Potensinya sebagai  Pendegradasi  Selulosa  dan Pelarut  Posfat. Biodiversitas .  8(1), pp. 314-319.
Nurkanto,  A.,  Rahmansyah,  M.,  dan
Kanti,  A.,  2008.  Teknik  Isolasi Aktinomisetes . LIPI Press. Jakarta. Nurkanto, A., Listyaningsih, F., Julistiono, H., dan Agusta, A.. 2010. Eksplorasi Keanekaragaman Aktinomisetes Tanah Ternate sebagai  Sumber  Antibiotik.    Jurnal Biologi Indonesia 6 (3): pp. 325-339 Oedjijono, A.A., 2019. Eksplorasi Aktinomisetes di Kawasan Mangrove Segara Anakan. Universitas  Jenderal  Soedirman.
Jawa Tengah.
Pelczar, M.J., Martikno, J.M., and Parker,
J., 1997. Biology of Microorganism . Prentice  Hall  International.  New Jersey.
Putri,  T.  P.,  Marpaung  dan  Razali.,  2015.
Klasifikasi  Tanah  di  Lereng  Selatan Gunung  Burni  Telong  Kecamatan Bukit  Kabupaten  Bener  Meriah. Jurnal Online Agroteknologi . Universitas Sumatra Utara. 3(1), pp.
264 - 275.
Prescott.,  2008. Microbiology  7 th Edition .
McGraw-Hill  Book  Company.  The USA. Ramadhan, H., 2011. Isolasi Actinomycetes Penghasil  Antibiotik terhadap Escherichia  Coli dan Staphylococcus  Aureus dari  Tanah
Sawah. Jurnal  Agro .  2(1),  pp.  50-
64.
Rao,  S.,  1994. Mikroorganisme  Tanah dan  Pertumbuhan  Tanaman. Edisi Kedua. Universitas Indonesia.
Jakarta. Rusli,  E.,  2016.  Uji  Antagonis  Cendawan Rhizosfer Kentang ( Solanum tuberosum L.) dari Pertanian Bulluballea  Kelurahan  Pattapang Kecamatan Tinggimoncong Kabupaten Gowa terhadap Cendawan Patogen. Skripsi. Universitas  Islam  Negeri  Alauddin. Makasar. Sahur,  A.,  2021. Actinomycetes dan Rhizobium untuk Perbaikan Pertumbuhan dan Produksi Tanaman  Kedelai.  Ficus  Press. Makasar. Sastrahidayat,  I.  R.,  2011. Tanaman Kentang dan Pengendalian Penyakitnya .  Universitas  Brawijaya Press. Malang. Semangun,  H.,  1989.  Penyakit-penyakit
Tanaman  Hortikultura  di  Indonesia.
Gajah Mada University Press. Yogyakarta.
Sembiring,  Ward,  and  Goodfellow,  C., 2000. Selective Isolation and Characterisation  of  Member  of  the Streptomyces  violaceus  niger Clade
Associated  with  the  Roots  of
Paraserian  the  Sfalcataria. Anton Lewan Int . 78(3), pp. 353-366. Sihaloho, T. M., 2009. Strategi Pengembangan  Agribisnis  Kopi  di Kabupaten  Humbang  Hasundutan Sumatera  Utara.  Skripsi.  Institut
Pertanian Bogor.
Sulistyani, N. dan Akbar., 2014. Aktivitas Isolat Actinomycetes dari  Rumput Laut  ( Eucheuma  cottonii )  sebagai Penghasil Antibiotik terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Jurnal Ilmu
Kefarmasian Indonesia . 12(1), pp. 4 - 12. Susilowati,  Hastuti  and  Yuniarti.,  2007. Isolasi dan Karakterisasi Actinomycetes Penghasil Antibakteri Enteropatogen Escherichia coli K1.1, Pseudomonas  pseudomallei
0205  dan  Lestari Amonocytogenes
5407.  Jurnal  Agro  Biogen.  3(1),  pp.
15-23.
Syakir,  M.  dan  Surmaini,  E.,  2017. Perubahan  Iklim  dalam  Konteks Sistem Produksi dan Pengembangan
Kopi  di  Indonesia. Jurnal  Litbang Pertanian . 2(36), pp. 77-90. Ulya,  Z.  N.,  Kusnadi  dan  Burhanuddin., 2016. Perilaku Kewirausahaan Petani  Kopi  Arabika  Gayo  di Kabupaten  Bener  Meriah  Provinsi
Aceh. Jurnal  Penyuluhan. Institut Pertanian  Bogor . 2(12),  pp.  126  - 143.
Umrah.,  Merdekawaty.  L.  dan  Alwi,  M., 2012.  Identifikasi Actinomycetes yang  terdapat  pada Tanah  di  sekitar Danau  Lindu  Sulawesi  Tengah.
Biocelebes . 3(1), pp. 1-10. Wahyuni,  E.,  Karim,  A.  dan  Anhar,  A., 2013. Analisis Citarasa Kopi Arabika  Organik  pada  beberapa Ketinggian Tempat dan Cara Pengelolahannya  di  Dataran  Tinggi Gayo. Jurnal  Manajemen  Sumber Daya Lahan . 3(2), pp. 261-269.
Wisdawati,  E.,  Inderiati,  S.,  and  Muliani, S.,  2015.  Pemanfaatan  Endofitik Actinomycetes dan  Mikoriza  untuk
Menginduksi  Ketahanan  terhadap Rhizoctonia  solani  dan  Promosi Pertumbuhan Tanaman. Jurnal Agrotan . 1(1), pp. 15-24. Yusnizar.,  2001.  Skrining  Aktinomisetes dari  Ekosistem  Air  Hitam  yang Menghambat Pertumbuhan Rhizoctonia solani dan Helmithonsporium oryzae serta Spektrum Aktivitasnya terhadap Mikrob lain. Thesis. Institut Pertanian Bogor. Bogor.