## PENGARUH INTERVENSI TAHU KEDELAI HITAM KAYA SERAT TERHADAP GLUKOSA DARAH DAN INFLAMASI RESPONDEN DIABETES TIPE 2

## [Effect of Dietary Fiber Rich-Tofu from Black Soybean on Bloods Glucose and Inflammatory Syndrom of Type 2 Diabetes Mellitus Subjects]
Nela Eska Putri 1,3) *, Fransiska R. Zakaria 2) , Endang Prangdimurti 2) , dan Nanda Triandita 1,3)
1) Program Studi Ilmu Pangan, Sekolah Pasca Sarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor
2) Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor
3) Program Studi Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Pertanian, Universitas Garut, Garut
Diterima 09 Juni 2016 / Disetujui 09 Agustus 2016

## ABSTRACT
Type 2 diabetes mellitus (T2DM) subjects have a hyperglycemia condition. Hyperglycemia can cause oxidative stress that trigger glucose autooxidation and reactive oxygen species (ROS). ROS also triggers the inflammation and induces the cytokine signalling from cells and body tissues, such as interleukin and prostaglandin enzyme (COX-2). The purpose of this research was to analyze the effect of dietary fiber rich- tofu from black soybean (DFT) on bloods glucose and inflammations of T2DM patients. Intervention group (n=9)  was  given  80  grams  DFT  during  30  days  and  control  group  (n=9)  was  not.  Blood  collections  were conducted  before  and  after  intervention  by  certified  nurses  for  all  groups  for  analysis  in  the  laboratory. Fasting Blood Glucose (FBG) was measured by glucometer, while the plasma was analyzed with ELISA to measure the optical density value of IL-6 and COX-2 enzyme. Consumption of DFT resulted in the decline of the optical density of IL-6 value (p=0.00), but DFT could not reduce the FBG and optical density of COX- 2  enzyme  (p=0.22  and  p=0.51).  Therefore  DFT  can  be  considered  as  an  effective  food  for  reduction  of T2DM inflammatory.
Keywords: black soybean tofu, bloods glucose, inflammations, type 2 DM

## ABSTRAK
Penderita  diabetes  melitus  tipe  2  mengalami  kondisi  hiperglikemik.  Hiperglikemik  dapat  menyebab- kan  stres  oksidatif  dan  timbulnya reactive  oxygen species  (ROS).  ROS  dapat  meningkatkan  sekresi marker inflamasi seperti senyawa IL-6 dan enzim COX-2 oleh jaringan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh intervensi tahu kedelai hitam kaya serat (DFT) terhadap glukosa darah dan status inflamasi  penderita  diabetes  melitus  tipe  2.  Responden  dibagi  menjadi  2  kelompok  yaitu  kelompok perlakuan  (n=9)  yang  diintervensikan  80  g  DFT  selama  30  hari  dan  kelompok  kontrol  (n=9)  yang  tidak diberikan  DFT.  Glukosa  darah  puasa  (GDP)  dan  parameter  inflamasi  (IL-6  dan  enzim  COX-2)  dianalisis pada hari ke-0 dan hari ke-30. GDP dianalisis menggunakan glukometer, sedangkan nilai optical density IL-6 dan enzim COX-2 dianalisis dari plasma menggunakan metode ELISA. Hasil penelitian menunjukkan bahwa intervensi DFT mampu menurunkan nilai OD IL-6 (p=0,00) sebesar 22,82%, namun belum mampu menurunkan kadar GDP dan nilai OD enzim COX-2 (p=0,22 dan p=0,51) secara statistik. DFT berpotensi dalam menurunkan senyawa pro-inflamasi IL-6 responden diabetes melitus tipe 2.
Kata kunci: diabetes melitus tipe 2, glukosa darah, inflamasi, tahu kedelai hitam

## PENDAHULUAN
1
Diabetes  melitus  termasuk  salah  satu  penyakit tidak menular utama yang jumlah penderitanya terus meningkat  terutama  di  131  negara-negara  berkem- bang  seperti  Indonesia.  WHO  (2014)  mengemuka- kan  bahwa  pada  tahun  2012  diabetes  131  melitus telah  menyebabkan  kematian  1,5  juta  jiwa  di  dunia
*Penulis Korespondensi: E-mail: nelaeskaputri@gmail.com
atau sekitar 4% dari total kematian yang disebabkan oleh  penyakit  tidak  menular  lainnya.  Pada  tahun 2015,  total  kematian  akibat  diabetes  melitus  me- nurut International Diabetes Federation (IDF) adalah sebanyak  5  juta  jiwa.  Jumlah  penderita  diabetes melitus  berdasarkan  data IDF  2015  adalah  415  juta orang  dewasa  dan  318  juta  orang  dewasa  lainnya mengalami  gangguan  toleransi  glukosa  darah  yang berpotensi  dalam  meningkatkan  jumlah  penderita diabetes.  Indonesia  sendiri  menempati  urutan
ketujuh  penderita  diabetes  melitus  tertinggi  di  dunia dengan jumlah 10 juta jiwa pada tingkat umur 20-79 tahun.  Penderita  diabetes  melitus  tipe  2  mengalami gangguan  sekresi  insulin,  yaitu  sel  beta  pankreas tidak  menghasilkan  hormon  insulin  dalam  jumlah yang cukup sehingga terjadi penumpukan glukosa di dalam  darah,  atau  mengalami  resistensi  insulin, yaitu  insulin  tidak  mampu  menstimulasikan  glukosa di  dalam  darah  menuju  sel  karena  reseptor  insulin mengalami kerusakan. Hal ini menyebabkan terjadi- nya  penumpukan  glukosa  di  dalam  darah.  Kondisi ini disebut juga dengan hiperglikemik.
Hiperglikemik  cenderung  menimbulkan  stres oksidatif  yang  memicu  autooksidasi  glukosa  se- hingga  terbentuk  oksigen  radikal  atau Reactive Oxygen  Spesies (ROS)  (Monroy  dan  Mejia,  2013). Autooksidasi  glukosa  terjadi  pada  proses  glikasi nonenzimatik  dengan  protein  yang  menghasilkan hidrogen peroksida dan superoksida sebagai radikal bebas.  Radikal  bebas  ini  akan  merusak  DNA  inti sehingga proses glikolisis terganggu dan menyebab- kan  munculnya  jalur Advanced  glycation  end  pro- ducts (AGE)  yang  ditandai  dengan  meningkatnya HbA 1c pada darah. ROS juga merupakan salah satu pemicu timbulnya inflamasi atau peradangan.
Inflamasi  dapat  mengaktivasi  pelepasan  sitokin oleh  sel  dan  jaringan  tubuh,  seperti  IL-6  yang  di- lepaskan  oleh  makrofag  (Hurst et  al., 2001).  Pro- duksi  sitokin  oleh  makrofag  132  bisa  memberikan efek negatif terhadap sensitivitas insulin (Hussain et al., 2010). Pada penderita diabetes, inflamasi terjadi setelah  terjadinya  peningkatan  glukosa  darah  yang ditandai  dengan  meningkatnya  marker  inflamasi seperti  Interleukin. IL-6  merupakan  salah  satu  pe- nanda  inflamasi  yang  berperan  penting  dalam patogenesis  diabetes  melitus. Single  Nucleotida Pholimorphism (SNP)-G174C  merupakan  promotor gen pada IL-6 yang berasosiasi dengan T2DM, yang terkait  juga  dengan  level  dan  resistensi  insulin.  IL-6 dapat menghambat auto-posporilasi reseptor insulin, menghambat  transkripsi  gen  IRS,  GLUT-4,  dan PPAR- γ,  serta  mengaktifkan  degradasi  IRS-1  dan IRS-2  di  dalam  proteasom (Nadeem et  al., 2013). Selain  itu,  saat  terjadi  inflamasi  maka  sel-sel  akan menginduksi  enzim  siklooksigenase  (COX-2)  dan enzim  tersebut  akan  beredar  di  daerah  tempat terjadinya  inflamasi  (Persaud et  al., 2004).  Hiper- glikemik  dapat  meningkatkan  sekresi  insulin  yang berlebihan  oleh  sel  beta  pankreas.  Menurut  Rachel et  al. (2016),  glukosa  dapat  menyebabkan  mening- katnya  ekspresi  COX-2  yang  dapat  menurunkan bioavalibilitas nitrit oksida vasodilator dan kemundu- ran fungsi endotel pada penderita DM tipe 2.
Pengendalian  glukosa  darah  dapat  dilakukan dengan  diet  dan  memodifikasi  gaya  hidup,  seperti mengonsumsi  makanan  sehat,  melakukan  olahraga teratur  dan  tidak  merokok.  Makanan  sehat  yang  di- butuhkan untuk mengontrol glukosa darah penderita
diabetes  melitus  adalah  makanan  yang  menge- nyangkan,  memiliki  indeks  glikemik  rendah,  kaya protein,  serat  dan  antioksidan  serta  rendah kolesterol.
Kacang  kedelai  memiliki  protein  yang  tinggi serta  isoflavon  yang  berfungsi  sebagai  antioksidan. Menurut  Muchtadi  (2010),  tahu  merupakan  bahan pangan  yang  diproduksi  dengan  cara  mengendap- kan  susu  kedelai  menggunakan  suatu  koagulan. Koagulasi  susu  kedelai  tersebut  merupakan  bentuk pengendapan  protein,  sehingga  tahu  memiliki protein yang tinggi. Tahu tidak mengandung pati dan memiliki  indeks  glikemik  yang  rendah  serta  mem- bawa  zat-zat  gizi  dan  non-gizi  seperti  komponen bioaktif. Oleh karena itu tahu cocok untuk penderita diabetes.  Menurut  Nurrahman  (2015),  kedelai  hitam memiliki  protein  yang  hampir  sama  dengan  kedelai kuning,  selain  itu  kandungan  antosianin  sebagai antioksidan  yang  terdapat  pada  kulitnya  menyebab- kan kedelai hitam lebih unggul dibandingkan kedelai kuning,  sehingga  tahu  kedelai  hitam  tentunya  me- miliki antioksidan yang juga lebih baik daripada tahu yang diolah dari kedelai kuning.
Pada  proses  pengolahan  tahu  kedelai  hitam dihasilkan  ampas  kedelai  yang  kaya  akan  serat pangan,  protein  dan  antioksidan.  Pemberian  tahu kedelai  hitam  yang  diperkaya  dengan  serat  (ampas kedelai)  diharapkan  dapat  mengendalikan  kadar glukosa  darah  serta  menurunkan  terjadinya  infla- masi di  dalam tubuh  penderita  diabetes melitus tipe 2.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat  pengaruh intervensi  tahu  kedelai  hitam  kaya  serat  terhadap glukosa  darah  dan  senyawa  pro-inflamasi  respon- den diabetes melitus tipe 2.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  kedelai  hitam  varietas  Detam  1  yang  di- peroleh  dari  Balai  Penelitian  Kacang-kacangan  dan Umbi-umbian  (Balitkabi)  Malang,  air,  dan  kalsium sulfat (sioko). Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Oktober 2015 hingga Februari 2016 yang bertempat di  Laboratorium  Technopark  dan  Seafast  Centre (produksi tahu), Klinik dr. Katili-Dramaga (sosialisasi program  dan  pengambilan  darah  responden), Laboratorium  Analisis  Biokimia  ITP  dan  Laborato- rium Biomedik FKH Institut Pertanian Bogor.

## Seleksi responden dan sosialisasi
Penelitian  ini  dilakukan  atas  persetujuan  dari Komisi  Etika  Penelitian  Unika  Atma  Jaya  melalui ethical  clearance No:  1154/III/LPPM-PM.10.05/10/ 2015.  Skrining  awal  adalah  mencari  calon  respon- den  diabetes  melitus  tipe  2  di  sekitar  Kampus  IPB Dramaga.  Kriteria  responden  adalah  memiliki  kadar
glukosa  darah  puasa  pada  darah  kapiler  ≥126 mg/dL  ataupun  memiliki  kadar  glukosa  darah sewaktu pada darah kapiler ≥200 mg/dL, berusia 40- 70  tahun,  tidak  menderita  gangren  dan  penyakit kronis  lainnya,  dan  pasien  tidak  dalam  keadaan hamil.  Penjajakan  responden  dilakukan  dengan pemeriksaan  glukosa  darah  gratis.  Berdasarkan rumus  Lameshow et  al .  (1997)  dan  hasil  penelitian Chang et  al .  (2008)  tentang  kadar  glukosa  darah penderita  diabetes melitus  tipe  2  setelah  suplemen- tasi  protein  kedelai,  maka  jumlah  responden  (n) untuk penelitian ini dihitung berdasarkan rumus:
n 2 S 2 2 1 2
2
Keterangan:
n : jumlah responden
S   :  standar  deviasi  =  42  mg/dL  (Chang et  al., 2008)
α  : 1,64  α = 5%
: 1,28    = 10% , power of test X 1 : mean kadar  glukosa  darah  setelah  intervensi = 110 mg/dL (Chang et al., 2008)
X 2 : mean kadar glukosa darah sebelum intervensi = 170 mg/dL (Chang et al., 2008)
Berdasarkan  rumus  di  atas  diperoleh  nilai  n adalah  8,77  atau  setara  dengan  9.  Selanjutnya  res- ponden  dibagi  menjadi  2  kelompok  yaitu  kelompok responden  intervensi  DFT  (perlakuan)  sebanyak  9 orang  (4  orang  laki-laki  dan  5  orang  perempuan) dan  kelompok  kontrol  sebanyak  9  orang  (4  orang laki-laki dan 5 perempuan).

## Pembuatan produk tahu kedelai hitam kaya serat (DFT) (Muchtadi, 2010 dengan modifikasi)
Kedelai  hitam  disortasi  untuk  memperoleh  biji kedelai yang baik dengan cara memisahkan biji dari kotoran  serta  memilih  biji  yang  utuh.  Selanjutnya dilakukan  perendaman  selama  12  jam  dengan perbandingan  berat  biji  kedelai  dengan  air  adalah 1:3  (b/v).  Setelah  itu  biji  kedelai  dibersihkan  dan dicuci dengan perbandingan air 1:3 (b/v) sebanyak 3 kali  sehingga  diperoleh  kedelai  basah  yang  bersih. Kedelai  yang  sudah  dicuci  dihancurkan  dengan menggunakan blender dengan  perbandingan  biji kedelai  dan  air  adalah  1:8  (b/v).  Bubur  kedelai  lalu disaring  dengan  saringan  dan  kain  saring  60  mesh sehingga  diperoleh  susu  kedelai  (yang  akan  di- masak)  serta  ampas  kedelai.  Masing-masing  filtrat maupun  ampas  ditimbang.  Bubur  kedelai  mentah yang  dihasilkan  dididihkan  selama  10  menit  pada suhu  100°C.  Selanjutnya  dilakukan  penggumpalan (koagulasi).  Koagulan  yang  dipakai  adalah  kalsium sulfat  (Sioko)  sebanyak  0,27%  dari  volume  susu kedelai.  Penggumpalan  dilakukan  pada  suhu  70 – 75°C,  dimana  terlebih  dahulu  dilakukan  penam- bahan ampas kedelai (serat) sebanyak 2% (b/v) dari
volume  susu  kedelai,  lalu  ditambahkan  koagulan. Tahap  selanjutnya  adalah  pemisahan  cairan  dan crude. Selanjutnya  dilakukan  pengepresan crude untuk  membentuk  tahu  menggunakan  alat  peng- epres  pada  skala pilot  plant ,  dengan  tekanan  2 kg/cm 2 selama  15  menit.  Selanjutnya  dilakukan pemotongan dan perebusan tahu.

## Intervensi produk
Tahap  intervensi  merupakan  tahap  pemberian produk secara rutin ke rumah responden selama 30 hari  kecuali  kepada  kelompok  kontrol.  Produk  yang diberikan  berupa  tahu  kedelai  hitam  kaya  serat (DFT)  dalam  bentuk  sup  tahu  yang  diberikan  setiap sore  (pukul  16.00-17.00  WIB)  kepada  masing- masing  responden.  Jumlah  DFT  yang  diberikan adalah  sebanyak  ±80  g  (mengandung  42,29% protein  bk  dan  9,17%  serat  bk).  Produk  diantar menggunakan  kemasan tupperware yang  bisa digunakan kembali.

## Pengambilan darah
Pengambilan  darah  dilakukan  sebanyak  dua kali yaitu pada tahap awal (pada hari ke-0, sebelum percobaan  dimulai)  dan  pada  akhir  kegiatan  (hari ke-30).  Pada  setiap  tahap  diambil  darah  vena. Darah diambil oleh tenaga medis yang berkompeten (di Klinik dr. Katili-Dramaga) sebanyak 8 mL dengan menggunakan syringe (Kendall Monoject 3 cc, USA) dan  ditampung  pada vacutainer (BD  Vacutainer, USA) yang berisi antikoagulan EDTA.

## Analisis biokimia darah
Analisis  dilakukan  pada  plasma  yang  diperoleh melalui  pemisahan  darah  responden  sebelum  dan sesudah  intervensi.  Darah  yang  diperoleh  segera dibawa  ke  laboratorium  untuk  analisis  IL-6  dan COX-2.

## Analisis kadar glukosa darah puasa
Kadar  glukosa  darah  ditentukan  menggunakan metode glucose  oxidase  sensor menggunakan glukometer  (Accu-chek  performa , Brasil).  Darah diambil dari jari dengan cara jari dibersihkan dengan kapas  beralkohol,  lalu  dipijat  atau  diurut  perlahan- lahan,  kemudian  bagian  ujung  jari  ditusuk  dengan jarum  ( lancet ).  Tetesan  darah  ditempelkan  pada strip  glukometer.  Kadar  glukosa  darah  akan  terukur pada  alat  setelah  5  detik  dan  dinyatakan  dalam satuan  mg/dL,  setelah  itu  dikonversikan  menjadi mmol/L.
Analisis  kadar  IL-6  dan  COX-2  dengan  metode Elisa (Zakaria et al., 2014 dengan modifikasi) Sebanyak  100  µL  plasma  darah  diencerkan dengan bicarbonat  buffer (Sigma  Aldrich  C3041, Singapore) (untuk IL-6=1:1.000; untuk COX- 2=1:500)  dan  dimasukkan  ke  dalam microplate  96
well (NUNC  96  Maxisorp)  kemudian  diinkubasikan pada  suhu  4°C  selama  semalam.  Cairan  di  dalam well dibuang  dan  dicuci  dengan  larutan  PBST  pH 7,4  (larutan  PBS:  Sigma  Aldrich  P4417,  USA; dengan  0,05%  Tween  20:  Sigma  Aldrich  P1379, USA)  sebanyak  250  µL  untuk  setiap well selama  5 menit  sebanyak  tiga  kali.  Sebanyak  100  µL  susu skim (Sunnlac Low Fat) 5% ditambahkan ke masing- masing well dan  diinkubasikan  pada  suhu  37°C selama  1  jam.  Setelah  itu well dicuci  lagi  dengan larutan PBST 250 µL selama 5 menit sebanyak tiga kali. Sebanyak 100 µl antibodi primer (IL-6: Antibodi monoklonal  anti  IL-6  (Fitzgerald  10R-1787)  = 1:8.000;  COX-2:  Antibodi  monoklonal  anti  COX-2 (GeneTex GTX20701 = 1:600.000)) ditambahkan ke masing-masing well dan  diinkubasikan  pada  suhu 37°C  selama  1  jam.  Setelah  itu well dicuci  lagi dengan  larutan  PBST  250  µL  selama  5  menit sebanyak  tiga  kali.  Sebanyak  100  µL  antibodi sekunder  HRP  IgG anti-mouse (GeneTex  GTX 26278)  (1:10.000)  ditambahkan  ke  masing-masing well dan  diinkubasikan  pada  suhu  37°C  selama  1 jam.  Setelah  itu well dicuci  lagi  dengan  larutan  250 ml  selama  5  menit  sebanyak  tiga  kali.  Dilakukan penambahan  50  µL  TMB  (Sigma  Aldrich  T4444, USA)  ke  masing-masing well dan  diinkubasikan  di ruangan gelap selama 15 menit. Setelah diinkubasi- kan,  ditambahkan  larutan  H 2 SO 4 50  mL  (Sigma Aldrich,  Singapore)  ke  masing-masing well lalu diukur  absorbansinya  dengan elisa  reader (BIO- RAD  Banchmark,  Japan)  pada  panjang  gelombang 450 nm.

## Analisis statistik
Analisis  134  statistik  dilakukan  dengan  meng- gunakan  uji t-student  independent pada  selang kepercayaan  95%  menggunakan  SPSS  Statistik  22 untuk melihat perbedaan data kadar GDP, IL-6, dan enzim  COX-2  antara  kelompok  perlakuan  dengan kelompok kontrol. Jika data tidak terdistribusi normal maka  dilakukan  uji  non-parametrik  Man-Whitney menggunakan SPSS Statistik 22.

## Analisis  kadar  air  dengan  metode  oven, mengacu pada AOAC (1995)
Kadar  air  diukur  dengan  metode  oven  biasa karena  kandungan  bahan  volatil  pada  sampel rendah  dan  sampel  tidak  terdegradasi  pada  suhu 100°C. Cawan aluminium kosong dikeringkan dalam oven  bersuhu  105°C  selama  15  menit  lalu  didingin- kan  dalam  desikator  selama  5  menit  atau  sampai tidak  panas  lagi.  Cawan  ditimbang  dan  dicatat beratnya.  Lalu  ditimbang  sampel  sebanyak  5  g  di dalam  cawan  tersebut.  Sampel  dikeringkan  dalam oven  sampai  beratnya  konstan  (perubahan  berat tidak  lebih  dari  0,003  g).  Setelah  itu  cawan  di- dinginkan  di  dalam  desikator  lalu  ditimbang  berat
akhirnya.  Dihitung  kadar  air  dengan  persamaan sebagai berikut:
adar  ir  % b/b = ( ) 100%
a
Keterangan: x : berat cawan dan sampel sebelum dikeringkan (g) y : berat cawan dan sampel setelah dikeringkan (g) a : berat cawan kosong (g)
Analisis  kadar  abu  dengan  metode  oven, mengacu pada AOAC (1995)
Cawan porselen dibakar dalam tanur selama 15 menit  kemudian  didinginkan  di  dalam  desikator (Duran,  USA).  Setelah  dingin  lalu  cawan  ditimbang. Kemudian sampel sebanyak 5 g ditimbang di dalam cawan tersebut lalu diabukan di dalam tanur hingga diperoleh  abu  berwarna  putih  dan  beratnya  tetap. Pengabuan  dilakukan  dalam  dua  tahap  yaitu  tahap pertama  pada  suhu  400°C  lalu  dilanjutkan  pada suhu  550°C,  kemudian  didinginkan  di  dalam  eksi- kator  lalu  ditimbang.  Kadar  abu  dihitung  dengan rumus:
adar  bu  % b/b = 1 100%
Keterangan:
W  : berat sampel (g) W 1 : berat abu (g)
Analisis  kadar  protein  dengan  metode  kjeldahl, mengacu pada AOAC (1995)
Sampel  sebanyak  0,1-0,2  g  dimasukkan  ke dalam labu kjedahl (Sigma, Singapore) 100 mL, lalu ditambahkan 2 g K 2 SO 4 (Sigma Aldrich, Singapore), 40 mg HgO (Sigma Aldrich, Singapore), dan 2,5 mL H 2 SO 4 pekat (Sigma Aldrich, Singapore). Setelah itu sampel  didestruksi  selama  30  menit  sampai  cairan berwarna  jernih  dan  dibiarkan  sampai  dingin.  Di- tambahkan air suling secukupnya dan 10 mL NaOH pekat  (Sigma  Aldrich,  Singapore)  ke  dalam  cairan sampai  berwarna  coklat  kehitaman  lalu  didestilasi. Hasil  destilasi  ditampung  dalam  Erlenmeyer  (Pyrex, Indonesia)  125  mL  yang  berisi  H 2 BO 3 (Sigma Aldrich,  Singapore)  dan  indikator,  kemudian  dititrasi dengan  HCl  (Sigma  Aldrich,  Singapore)  0,02  N. Larutan blanko juga dianalisis seperti sampel. Kadar nitrogen dihitung berdasarkan rumus:
% Nitrogen = H L balnko  mL   N H l   14,007   100% mg contoh
adar Protein  %  = % Nitrogen   6,25
Analisis  kadar  lemak  dengan  metode  soxhlet, mengacu pada AOAC (1995)
Labu  lemak  yang  telah  bebas  lemak  dikering- kan  di  dalam  oven  kemudian  ditimbang  setelah didinginkan. Sampel sebanyak 5 g dibungkus dalam kertas  saring  kemudian  ditutup  dengan  kapas  yang bebas  lemak.  Sampel  dimasukkan  ke  dalam  alat ekstraksi soxhlet (Sigma,  Singapore),  kemudian dipasang kondensor dan labu pada ujung-ujungnya. Pelarut  heksana  dimasukkan  ke  dalam  alat  lalu sampel  direfluks  selama  5  jam.  Setelah  itu,  pelarut didestilasi  dan  ditampung  pada  wadah  lain.  Labu lemak  dikeringkan  di  dalam  oven  pada  suhu  105°C sampai  diperoleh  berat tetap.  Kemudian  labu  lemak dipindahkan  ke  desikator,  didinginkan,  dan  ditim- bang.
adar Lemak  % b/b = 1 100%
Keterangan:
W  : berat sampel (g) W 1 : berat lemak (g)
Analisis  kadar  karbohidrat by  difference ,  me- ngacu pada AOAC (1995)
Pengukuran  kadar  karbohidrat  menggunakan metode by difference dilakukan dengan rumus:
Kadar  karbohidrat  (%  b/b)  =  100%  -  (kadar  air  + kadar protein + kadar lemak + kadar abu).
Serat  larut  dan  serat  tidak  larut,  mengacu  pada AOAC official method 991.43
Sampel  sebanyak  0,5  g  ditimbang  lalu  ditam- bahkan 40 mL MES-TRIS (Sigma, Singapore) (bufer pH  8,2)  dan  distirer  sampai  homogen.  Larutan ditambah  dengan  50  µL  enzim  α-amilase  (Sigma, Singapore) lalu disimpan di penangas air pada suhu 95-100°C  selama  35  menit.  Larutan  didinginkan sampai  suhu  60°C,  lalu  dinding  wadah  piala  dibilas dengan 10 mL air. Larutan ditambah dengan 100 µL enzim  protease  (Sigma,  Singapore)  dan  diinkubasi- kan  pada  suhu  60°C  selama  30  menit.  Larutan  lalu ditambah dengan HCl 0,561 N sampai mencapai pH 4,1-4,8 dan ditambahkan 200 µL enzim amylogluko- sidase  (Sigma,  Singapore),  lalu  diinkubasikan  pada suhu  60°C  selama  30  menit.  Larutan  lalu  disaring dan  dicuci  dengan  10  mL  air  bersuhu  70°C  se- banyak  dua  kali,  sehingga  diperoleh  filtrat  dan  air pencuci  (A)  serta  residu  (B).  A  dipindahkan  ke dalam  gelas  piala  dan  ditambahkan  etanol  95% bersuhu  60°C  sebanyak  4x  volume  larutan  awal. Larutan  diendapkan  selama  1  jam  lalu  disaring. Setelah  itu  residu  dikeringkan.  Kadar  serat  larut diperoleh  dari  total  residu  dikurangi  dengan  kadar protein dan kadar abu. Sementara itu serat tak larut diperoleh  dari  total  residu  B  dikurangi  kadar  protein dan kadar abu.
Serat total, mengacu pada AOAC official method 991.43
Sampel  sebanyak  0,5  g  ditimbang  lalu  ditam- bahkan 40 mL MES-TRIS (bufer pH 8,2) dan distirer sampai  homogen.  Larutan  ditambah  dengan  50  µL enzim α-amilase lalu disimpan di penangas air pada suhu  95-100°C  selama  35  menit.  Larutan  didingin- kan  sampai  suhu  60°C,  lalu  dinding  wadah  piala dibilas dengan 10 mL air. Larutan ditambah dengan 100  µL  enzim  protease  dan  diinkubasikan  pada suhu  60°C  selama  30  menit.  Larutan  ditambah dengan HCl 0,561  N sampai mencapai pH 4,5 (4,1- 4,6)  lalu  ditambahkan  200  µL  enzim  amylogluko- sidase.  Larutan  selanjutnya  diinkubasikan  pada suhu 60°C selama 30 menit dan diendapkan dengan 225  mL  etanol  95%  bersuhu  60°C,  lalu  dibiarkan mengendap  selama  1  jam pada  suhu  kamar.  Enda- pan  lalu  disaring  dengan  kertas  saring  tak  berabu No.  42  yang  telah  diketahui  bobotnya.  Larutan selanjutnya dicuci dengan 15 mL etanol 78%, 15 mL etanol  95%  dan  15  mL  aseton  sebanyak  dua  kali. Lalu  dikeringkan  pada  oven  vakum  70°C  atau  pada suhu  105°C.  Selanjutnya  didapatkan  residu.  Total serat pangan dihitung dengan rumus:
Serat Pangan Total = bobot residu    g protein   g abu    100% g contoh
Catatan:  kadar  protein  dihitung  sesuai  dengan  SNI 01-2891-1992 butir 7.1, kadar yang diperoleh dikon- versi  ke  gram  dengan  mengalikan  6,25,  sedangkan kadar  abu  dikerjakan  sesuai  dengan  SNI  01-2891- 1992 butir 6.1

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik bahan baku dan produk intervensi
Kedelai  hitam  lokal  yang  digunakan  dalam pembuatan  tahu  kedelai  hitam  kaya  serat  adalah varietas  Detam  1  yang  komposisinya  dapat  dilihat pada  Tabel  1.  Tahu  kedelai  hitam  kaya  serat memiliki  kadar  protein  yang  tinggi  (52,86%)  serta serat  total  yang  juga  tinggi,  yakni  sebesar  11,46% dalam  basis kering.  Menurut BPOM  (2011),  pangan yang  memiliki  kadar  protein  >35%  disebut  sebagai pangan berprotein tinggi, dan pangan  yang memiliki serat sebanyak >6 g/100 g termasuk pada golongan pangan  berserat  tinggi.  Tahu  kedelai  hitam  yang ditambahkan  dengan  ampas  kedelai  memiliki kandungan  serat  yang  tinggi,  selanjutnya  disebut sebagai tahu kedelai hitam kaya serat.
Menurut  Setiawan  dan  Suhartono  (2005), penderita diabetes tipe 2 membutuhkan diet dengan pangan  berserat  tinggi  serta  memiliki  antioksidan untuk  menghambat  kerusakan  oksidatif  di  dalam tubuh.  Menurut  Ascencio et  al. (2004),  mengon- sumsi  protein  kedelai  dapat  memperbaiki  kadar lemak  darah  dan  mengatur  insulin  dalam  keadaan
9,9 9,9 9,8 8,7 7,9 7,7 0 2 4 6 8 10 12 0 6 12 18 24 30 Ka d a r G DP (m m o l/L )
Waktu Pengukuran (Hari ke-)
normal. Wardani dan Wardani (2014) menambahkan bahwa kedelai hitam berpotensi sebagai bahan baku minuman  fungsional  karena  memiliki  asam  amino esensial,  vitamin  E,  saponin  dan  kaya  akan  anti- oksidan  misalnya  flavonoid,  isoflavon  dan  anto- sianin.
Tabel 1.  Kandungan  metabolit  primer  bahan  baku kedelai hitam varietas Detam 1 dan produk DFT Parameter Kedelai Hitam DFT bb bk bb bk Rendemen (g/100 g kedelai) 210 43,66 Kadar air (%) 9,78 10,84 78,17 Kadar abu (%) 5,24 5,81 1,56 7,15 Protein (%) 32,93 36,50 11,54 52,86 Lemak (%) 13,16 14,59 0,79 3,62 Karbohidrat ( by different ) (%) 38,89 43,11 7,96 36,46 Serat larut (SDF) (%) Td. Td. Td. 5,04 Serat tak larut (IDF) (%) Td. Td. Td. 6,42 Kadar serat total (TDF) (%) Td. Td. Td. 11,46
Keterangan:  bb:  basis  basah;  bk:  basis  kering;  Td:  Tidak dianalisis

## Pengaruh terhadap glukosa darah puasa (GDP)
Menurut  ADA  2014  diabetes  melitus  ditandai dengan  kandungan  glukosa  darah  yang  tinggi  saat puasa,   aitu  ≥7  mmol/L  atau  setara  dengan  ≥126 mg/dL.  Pada  penelitian  ini  responden  yang  biasa mengonsumsi  obat  antidiabetes  tidak  disarankan untuk  menghentikan  pengobatannya.  Pada  Tabel  2 terlihat  bahwa  rata-rata  responden  memiliki  kadar GDP  yang  tinggi  pada  hari  ke-0,  yaitu  9,90±3,43 mmol/L  untuk  kelompok  perlakuan  dan  10,51±6,48 mmol/L  untuk  kelompok  kontrol.  Berdasarkan  hasil pengecekan  rutin  terlihat  bahwa  kelompok  respon- den yang mengonsumsi DFT mengalami penurunan kadar  GDP  setiap  minggunya  (Gambar  1),  sedang- kan pada responden kontrol kadar glukosa darahnya mengalami  penurunan  yang  tidak  teratur  (Gambar 2).  Namun,  intervensi  DFT  kepada  9  orang  respon- den  diabetes  melitus    tipe  2  selama  30  hari  belum mampu  menurunkan  kadar  GDP  responden  secara statistik.
Penderita diabetes melitus tipe 2 membutuhkan diet  dengan  pangan  berprotein  dan  berserat  tinggi yang  dapat  menekan  rasa  lapar.  DFT  merupakan produk pangan yang memiliki protein dan serat yang tinggi, selain itu juga memiliki pati yang yang rendah sehingga  tidak  cepat  menaikkan  glukosa  darah. Menurut  Santoso  (2011)  serat  pangan  mampu  me- ngikat air dan glukosa sehingga daya cerna glukosa berkurang dan  menurunkan  kadar  glukosa  di  dalam
darah.  Thondre  (2013)  juga  mengemukakan  bahwa serat  dapat  menurunkan  glukosa  darah  karena memperlambat  penyerapan  glukosa postprandial dan  waktu  pengosongan  lambung.  Serat  yang  ter- dapat  dalam  DFT  terdiri  dari  serat  larut  dan  serat tidak larut. Menurut Takano et al. (2013), serat tidak larut  dapat  menekan  kenaikan  glukosa postprandial pada  tikus  dengan  meningkatkan  viskositas  maka- nan di saluran cerna. Menurut Lu et al. (2013), serat larut  berfungsi  memperlambat  pengosongan  lam- bung  sehingga  memperlambat  pencernaan  dan  pe- nyerapan glukosa. Lebih jauh menurut Maulida et al. (2014)  polisakarida  larut  air  dapat  menurunkan resistensi  insulin  dan  mengurangi  stres  pada  reti- kulum endoplasma pada tikus.
Tabel 2.  Nilai  rata-rata  kadar  glukosa  darah  puasa (mmol/L) ± SD setelah intervensi DFT (hari ke-30) Perlakuan Kontrol p- value GDP (mmol/L) Sebelum (hari ke-0) 9,90±3,43 10,51±6,48 0,91* Sesudah (hari ke-30) 7,69±1,41 10,52±6,46 0,22* Perubahan  ∆ -2,21 0,01 % Perubahan 22,32 0,09 Keterangan:  Nilai P >0,05  adalah  tidak  berbeda nyata  berdasarkan  uji  t- student  independent . Tanda  (-)  artinya  terjadi  penurunan.  *uji  non- parametrik Man-Whitney
Penelitian  preklinis  Handayani et  al .  (2009) mengemukakan  bahwa  pemberian  susu  kedelai dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah postpran- dial tikus  jantan  secara  signifikan,  dimana  poli- sakarida  dan  asam  lemak  omega-3  pada  kedelai berperan  dalam  mengatur  homeostatis  glukosa darah.  Menurut  Ebrahimi et  al. (2015),  asam  lemak omega-3 dapat meningkatkan regulasi PPAR- γ  ang dapat  meningkatkan  ekspresi  gen  yang  mengkode GLUT-4 (tempat masuknya glukosa ke dalam sel).
Gambar 1.  Kadar  glukosa  darah  puasa  kelompok perlakuan selama 30 hari
10,5 10,2 8,6 11 8,8 10,5 0 2 4 6 8 10 12 0 6 12 18 24 30 Ka d a r G DP (m m o l/L )
Waktu Pengukuran (Hari ke-)
Selain protein, serat dan asam lemak esensial, lesitin  kedelai  juga  berfungsi  menurunkan  kadar glukosa  darah.  Menurut  Cahyono  (2011),  kandu- ngan  lesitin  kedelai  bertindak  sebagai  antioksidan yang mampu melindungi dan meregenerasi sel beta pankreas  yang  mengalami  kerusakan,  sehingga dapat  menghasilkan  insulin  kembali.  Dengan  demi- kian  glukosa  darah  dapat  distimulasikan  ke  dalam sel.  Selain  itu,  Kurimoto et  al. (2013)  mengemuka- kan  fungsi  lain  dari  kandungan  kedelai,  yaitu  diet ekstrak  kulit  biji  kedelai  yang  mengandung  anto- sianin  dan  prosianidin  pada  tikus  diabetes  dapat memperbaiki  kondisi  hiperglikemik  dan  sensitivitas insulin melalui aktivasi AMP-kinase.
Gambar 2.  Kadar  glukosa  darah  puasa  kelompok kontrol selama 30 hari

## Penurunan inflamasi
Responden  dalam  penelitian  ini  mengalami kondisi  hiperglikemik  (Tabel  2).  Kondisi  hiper- glikemik dapat menimbulkan  terjadinya  autooksidasi glukosa,  sehingga  menghasilkan  oksigen  radikal yang  berlebih  di  dalam  tubuh  yang  disebut  juga dengan  stres  oksidatif.  Menurut  Monroy  dan  Mejia (2013)  serta  Zatalia  dan  Sanusi  (2013),  stres oksidatif  dapat  menimbulkan  inflamasi  atau  pera- dangan  yang  juga  berakibat  pada  resistensi  insulin. Stres  oksidatif  berperan  pada  inflamasi  sistemik, disfungsi  endotel,  gangguan  sekresi  sel  beta  pan- kreas  dan  gangguan  utilisasi  glukosa  pada  jaringan perifer.  Menurut  Hussain et  al. (2010),  inflamasi dapat  menginduksi  dikeluarkannya  sitokin  dari jaringan  seperti  IL-6,  TNF- α,  dan  leptin.  Sitokin adiposit  tersebut  dapat  menginduksi  terjadinya resistensi  insulin.  Menurut  Dandona et  al. (2006), tingginya asupan makronutrisi dan glukosa ke dalam tubuh  dapat  menyebabkan  stres  oksidatif  dan  me- ningkatkan  sitokin  pro-inflamasi  seperti  IL-6  dan TNF- α.   eberadaan  IL-6  dan  TNF-α  dapat  meng- ganggu  kerja  insulin  dengan  cara  menekan  sinyal transduksi insulin.
Fungsi  utama  interleukin  adalah  sebagai respon  imun  awal  yang  dapat  mengikat  reseptor berafinitas  tinggi  pada  permukaan  sel  (Febbraio, 2014). IL-6 terlibat dalam regulasi respon imun, fase akut,  hematopoisis  dan  inflamasi.  Sitokin  IL-6
diproduksi  oleh  sel-sel  endothel,  fibroblast,  monosit dan  makrofag  selama  inflamasi  (Akdis et al., 2011). Keadaan  hiperglikemik  pada  penderita  diabetes melitus  dapat  memicu  terbentuknya  radikal  bebas yang  juga  dapat  meningkatkan  terjadinya  inflamasi. Menurut  Delichatsios  dan  Welty  (2005),  mengon- sumsi  makanan  tinggi  lemak  jenuh  dan  glukosa dapat  meningkatkan  inflamasi  dan  adhesi  molekul serta resistensi insulin.
Intervensi  DFT  belum  mampu  menurunkan kadar  GDP  responden  DM  tipe  2  (Tabel  2)  namun dapat menurunkan inflamasi melalui penurunan nilai OD  sitokin  IL-6,  yakni  sebesar  22,27%  (Tabel  3). Penurunan  ini  lebih  tinggi  jika  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  (p=0,00),  dimana  penurunan  nilai OD  IL-6  yang  terjadi  pada  kelompok  kontrol  adalah sebesar  12,59%.  Penurunan  sitokin  IL-6  di  dalam darah  semua  responden  (n=9)  menandakan  terjadi- nya pengurangan peradangan dan penurunan kepa- rahan  penyakit  pada  penderita  diabetes  melitus. Komposisi protein dan serat yang tinggi pada produk DFT  dapat  mencegah  terjadinya  autooksidasi glukosa  dan  mengurangi  produksi  radikal  bebas  di dalam  tubuh.  Selain  itu,  komponen  bioaktif  kedelai juga  berperan  sebagai  antioksidan  yang  dapat menstabilkan  radikal  bebas  sehingga  menurunkan terjadinya peradangan atau inflamasi.
Tabel 3.  Nilai optical density (OD) sitokin dan enzim pro-inflamasi  ±  SD  setelah  intervensi  DFT (hari ke-30) Perlakuan Kontrol p- value Sitokin IL-6 Sebelum (hari ke-0) 0,238±0,021  0,366±0,056 0,00 Sesudah (hari ke-30) 0,185±0,014  0,319±0,040 0,00 Perubahan  ∆ -0,053 -0,046 % Perubahan 22,27 12,59 Enzim COX-2 Sebelum (hari ke-0) 0,180±0,023  0,176±0,043 0,31* Sesudah (hari ke-30) 0,170±0,021  0,199±0,083 0,51* Perubahan  ∆ -0,010 0,024 % Perubahan 5,56 13,64 Keterangan:  Nilai P >0,05  adalah  tidak  berbeda  nyata berdasarkan  uji  t- student  independent. Tanda  (-) artinya  terjadi  penurunan.  *uji  non-parametrik  Man- Whitney
Penanda inflamasi selain IL-6 adalah diinduksi- nya enzim siklooksigenase (COX-2). Keadaan hiper- glikemik  dapat  memicu  dikeluarkannya  enzim  siklo- oksigenase  (Persaud et  al., 2004),  selain  itu  enzim COX-2  juga  diinduksi  pada  bagian  tubuh  yang  luka sebagai  respon  terjadinya  inflamasi  (Gupta  dan Yadav,  2011).  Siklooksigenase  akan  berada  pada
jaringan  yang  mengalami  inflamasi  (Adelin et  al., 2013).  Sama  halnya  dengan  IL-6,  penurunan  nilai OD enzim COX-2 sebagai penanda inflamasi terjadi setelah  mengonsumsi  DFT  pada  kelompok  per- lakuan ∆=5,56%).  Sedangkan  pada  kelompok kontrol  terjadi  peningkatan  produksi  enzim  COX-2 sebesar  13,64%  (Tabel  3).  Namun  secara  statistik DFT  tidak  mampu  menurunkan  inflamasi  pada penderita DM tipe 2 melalui jalur COX-2.
Penelitian  Jeon et  al. (2011)  menyatakan bahwa  ekstrak  kulit  biji  kedelai  yang  kaya  akan antosianin  dapat  menekan  sekresi  enzim  siklo- oksigenase  (COX-2)  sebagai  pro-inflamasi  pada tikus.  Selain  itu  kedelai  memiliki  komponen  bioaktif seperti  isoflavon  yang  termasuk  dalam  golongan flavonoid.  Hasil  penelitian  Chahyadi et  al. (2014) menyatakan  bahwa  kandungan  flavonoid  yang diekstraksi  dari  tanaman Boesenbergia  pandurata Roxb  memiliki  aktivitas  antioksidan  dan  anti- inflamasi,  yaitu  dapat  menekan  ekspresi  iNOS  dan enzim  COX-2  serta  aktivasi  NF-KB.  Setiawan  dan Suhartono  (2005)  menambahkan  bahwa  pangan yang  memiliki  antioksidan  dapat  menghambat  ke- rusakan  oksidatif  di  dalam  tubuh  penderita  diabetes melitus tipe 2.

## KESIMPULAN
Intervensi  tahu  kedelai  hitam  kaya  serat  (DFT) mampu menurunkan nilai  OD IL-6 (p=0,00) sebesar 22,82%,  namun  belum  mampu  menurunkan  kadar GDP  dan  nilai  OD  enzim  COX-2  secara  signifikan (p=0,22  dan  p=0,51). Walaupun  mengonsumsi  DFT tidak signifikan menurunkan kadar gula darah  tetapi tetap  bermanfaat  bagi  penderita  diabetes  terkait kemampuannya menurunkan resiko inflamasi dengan memperngaruhi level IL-6 tapi bukan melalui jalur Cox-2.

## DAFTAR PUSTAKA
[ADA]  American  Diabetes  Association.  2014. Standards  of  medical  care  in  diabetes  2014. Diabetes  Care  37:  S14-S80.  DOI:  10.2337/ dc14-S014.
Adelin  T,  Frengki,  Aliza  O.  2013.  Penambatan molekuler kurkumin dan analognya pada enzim siklooksigenase-2. J Medika Vet 7: 30-34. DOI: 10.21157/j.med.vet..v7i1.2916.
Akdis M, Burgler S, Crameri R, Eiwegger T, Fujita H, Gomez  E,   lunker  S,  Me er  N,  O’Mahon   L, Palomares  O,  Rhyner  C,  Quaked  N,  Schaffar- tzik  A,  Veen  WVD,  Zeller  S,  Zimmermann  M, Akdis CA. 2011. Interleukins, from 1 to 37, and interferon- γ:  receptors,  functions,  and  roles  in
diseases.  J  Allergy  Clin  Immun  127:  701-721. DOI: 10.1016/j.jaci.2010.11.050.
[AOAC]  Association  of  Analitycal  Communities. 1995. Official  Methods  of  Analysis  of  the Association  of  Official  Analytical  Chemistry. 16th  Ed.,  AOAC  International,  Washington, USA. Pages: 1141.
Ascencio  C,  Torres  N,  Isoard-Acosta  F,  Gomez- Perez  FJ,  Hernandez-Pando  R,  Tovar  AR. 2004.  Soy  protein  affects  serum  insulin  and hepatic SREBP-1 mRNA and reduces fatty liver in rats. J Nutr 134: 522-529.
[BPOM]  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan Republik  Indonesia.  Pengawasan  Klaim  dalam Label dan Iklan Pangan Olahan. 2011. Jakarta. Nomor HK.03.1.23.12.11.09909 hal. 18.
Cahyono  AD.  2011.  Manfaat  susu  kedelai  sebagai terapi  penurun  kadar  glukosa  darah  pada  klien diabetes  mellitus  (Study  eksperimental  di  poli penyakit  dalam  RSUD  Pare  Kabupaten  Kediri tahun  2010).  J  Akademi  Keperawatan  Pame- nang 4: 28-37
Chahyadi  A,  Hartatia  R,  Wirasutisna  KR,  Elfahmi. 2014. Boesenbergia pandurata Roxb.,  an Indo- nesian  medicinal  plant:  phytochemistry,  biolo- gical activity, plant biotechnology. Proced Chem 13: 13-37. DOI: 10.1016/j.proche.2014. 12.003. Chang JH, Kim MS, Lii SS. 2008. Effects of soybean supplementation on blood glucose, plasma lipid levels,  and  erythtrocyte  antioxidant  enzyme activity in type 2 diabetes mellitus patients. Nutr Res  Practice  2:  152-157.  DOI:  10.4162/nrp.20 08.2.3.152.
Dandona  P,  Ghanim  H,  Mohanty  P,  Chaudhuri  A. 2006.  The  metabolic  syndrome:  Linking  oxi- dative  stress  and  inflammation  to  obesity,  type 2  diabetes,  and  the  syndrome.  Drug  Develop Res 67: 619-626. DOI: 10.1002/ddr.20137.
Delichatsios  H ,   elt   F .  2005.  Inﬂuence  of  the DASH diet and other low-fat, high carbohydrate diets  on  blood  pressure.  Curr  Ather  Report  7: 446-454. DOI: 10.1007/s11883-005-0061-x. Ebrahimi  M,  Rajion  MA,  Meng  GY,  Farjam  AS, Oskoueian  E,  Jafari  S.  2015. Diet  high  in  α- linolenic acid up-regulate PPAR- α gene e pres- sion  in  the  liver  of  goats.  Electronic  J  Biotech 18: 210-214. DOI: 10.1016/j.ejbt.2015. 03.009.
Febbraio  MA.  2014.  Role  of  Interleukins  in  obesity: implications  for  metabolic  disease.  Trends Inendocrinol  Metabolism  25:  312-319. DOI:  10. 1016/j.tem.2014.02.004.
Gupta  V,  Yadav  SK.  2011.  Cyclooxygenase-2: pathway  form  anti-inflammatory  to  anticancer drugs –  a  review.  Int  J  Pharm  Life  Sci  2:  571- 582I.
Handayani  W,  Rudijanto  A,  Indra  MR.  2009. Soybeen milk reduce  insulin resistant in Rattus norvegicus of  type  2  model  diabetes  mellitus 139. J Kedokteran Brawijaya XXV: 60-66.
Hurst  SM,  Wilkinson  TS,  McLoughlin  RM,  Jones  S, Horiuchi  S,  Yamamoto  N.  2001.  IL-6  and  its soluble  receptor  orchestrate  a  temporal  switch in  the  pattern  of  leukocyte  recruitment  SEEN during  acute  Inﬂammation.  Immunit   14:  705- 714. DOI: 10.1016/S1074-7613(01)00151-0.
Hussain  A,  Hydrie  MZI,  Claussen  B,  Asghar  S.
2010. Type 2 diabetes and obesity: a review of current trends. J Diabetol 2: 1-7.
[IDF]  International  Diabetes  Federation.  2015.  IDF Diabetes  Atlas  7 th Edition.  www.idf.org/diabetes atlas. [September  2015].
Jeon AJ, Lim TG, Jung SK, Lee EJ, Yeom MH, Park JS, Choung MG, Lee HJ, Lim Y, Lee KW. 2011. Black  soybean  ( Glycine  max cv.  Heugmi)  seed coat  extract  suppresses  tpa  or  uvb-induced cox-2 expression by blocking mitogen activated protein  kinases  pathway  in  mouse  skin  epi- thelial  cells.  Food  Sci  Biotechnol  20:  1735- 1741. DOI: 10.1007/s10068-011-0239-7.
Kurimoto  Y,  Shibayama  Y,  Inoue  S,  Soga  M, Takikawa  M,  Ito  C,  Nanba  F,  Yoshida  T, Yamashita  Y,  Ashida  H,  Tsuda  T.  2013.  Black soybean  seed  coat  extract  ameliorates  hyper- glycemia  and  insulin  sensitivity  via  the activation  of  AMP-Activated  protein  kinase  in diabetic mice. J Agr Food Chem 61: 5558-5564. DOI: 10.1021/jf401190y.
Lameshow  S,  Hosmer  Jr  DW,  Klar  J,  Lwanga  SK. 1997.  Adequacy  of  Sample  Size  in  Health Studies.  36 –40.  John Wiley  and  Son  Ltd.,  Chi- chester (UK).
Lu  F,  Liu  Y,  Li  B.  2013.  Okara  dietar   ﬁber  and hypoglycemic  effect  of  okara  foods.  Bio  Carbo Dietary  Fiber  2:  126-132.  DOI:  10.1016/j.bcdf. 2013.10.002.
Maulida  D,  Estiasih  T.  2014.  Efek  hipoglikemik polisakarida  larut  air  umbi  gadung  ( Dioscorea hispida )  dan  alginat:  kajian  pustaka.  J  Pangan Agroindustri 2:136-140.
Monroy  MLLV,  Mejia  CF.  2013.  Oxidative  Stress  in Diabetes Mellitus and the Role of Vitamins with Antioxidant  Actions.  209-232.  DOI:  10.5772/ 51788. Intech. Rijeka, Croatia. European Union.
Muchtadi  D.  2010.  Kedelai  Komponen  untuk  Kese- hatan. 39-49. Alfabeta: Bandung.
Nadeem  A,  Naveed  AK,  Hussain  MM,  Aslam  M, Siddiqui  A,  Saeed  SA.  2013.  Variations  in association  of  Interleukin  6  -G174C  single nucleotide  polymorphism  with  type  2  diabetes
mellitus-a  review.  Int  J  Diabetes  Dev  C  33: 186 –191. DOI: 10.1007/s13410-013-0147-x.
Nurrahman.  2015.  Evaluasi  komposisi  zat  gizi  dan senyawa antioksidan kedelai hitam dan kedelai kuning.  J  Aplikasi  Teknol  Pangan  4:  89-93. DOI: 10.17728/jatp.v4i3.133.
Persaud  SJ,  Burns  CJ,  Belin  VD,  Jones  PM.  2004. Glucose-induced regulation of cox-2 expression in  human  islets  of  langerhans.  Diabetes 53: S190-S192.
Rachel  C,  Thomas  O,  Steven  H,  Steve  EH,  Jeffrey WS,  Sarah  LP.  2016.  The  -765G>C  cyclooxy- genase-2 promoter polymorphism is associated with  type  2  diabetes  mellitus,  low  high-density lipoprotein  and  manifest  angina.  J  Diabetes Metab  7:  686.  DOI:  10.4172/2155-6156.1000 686.
Santoso  A.  2011.  Serat  pangan (dietary  fiber) dan manfaatnya  bagi  kesehatan.  Magistra  23:    35- 40.
Setiawan  B,  Suhartono  E.  2005.  Stres  oksidatif  dan peran  antioksidan  pada  diabetes  melitus. Majalah Kedokteran Indonesia 55: 86 –90.
Takano  A,  Kamiya  T,  Tomozawa  H,  Ueno  S, Tsubata M, Ikeguchi  M, Takagaki K, Okushima A, Miyata Y, Tamaru S, Tanaka K, Takahashi T. 2013.  Insoluble  fiber  in  young  barley  leaf suppresses the increment of postprandial blood glucose  level  by  increasing  the  digesta viscosity.  Evid-Based  Comp  Alt  2013:  1-10. DOI: 10.1155/2013/137871.
Thondre  PS.  2013.  Food  base  ingredients  to modulate  blood  glucose.  Adv  Food  Nutr  Res 70: 181 –227. DOI: 10.1016/B978-0-12-416555- 7.00005-9.
Wardani  AK,  Wardani  IR.  2014.  Eksplorasi  potensi kedelai  hitam  untuk  produksi  minuman  fung- sional  sebagai  upaya  meningkatkan  kesehatan masyarakat. J Pangan Agroin 2: 58-67.
[WHO]  World  Health  Organization.  2014.  Global Status Report on Communicable Disease 2014. Attaining  the  Nine  Global  Noncommunicable Diseases  Targets;  A  Shared  Responsibility. Hal.28. WHO: Switzerland
Zakaria FR, Azni IN, Syamsir E, Amalia KM, Yamani C. 2014. Pengaruh konsumsi minuman beroksigen  terhadap  inflamasi  dan  kapasitas antioksidan  penderita  penyakit  paru  obstruktif kronik  (PPOK).  J  Teknol  Industri  Pangan  25: 31-38. DOI: 10.6066/jtip.2014.25.1.31.
Zatalia SR, Sanusi H. 2013. The role of antioxidants in  the  pathophysiology,  complications,  and management  of  diabetes  mellitus.  Acta  Medica Indonesiana 45: 141-147.