## JBIO: JURNAL BIOSAINS
(The Journal of Biosciences)
http://jurnal.unimed.ac.id/2012/index.php/biosains email : jbiosains@unimed.ac.id
KEMANJURAN IgY KUNING TELUR AYAM YANG TELAH MEMPEROLEH SUPLEMENTASI PIRIDOKSIN MENCEGAH KELAINAN OLEH Salmonella enteritidis
1 Pasar Maulim Silitonga, 2 Melva Silitonga dan 2 Meida Nugrahalia
1 Jurusan Kimia FMIPA Universitas Negeri Medan
2 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Negeri Medan Jln. Willem Iskandar Pasar V,Medan 20221
Email korespondensi: pasar.silitonga@gmail.com
Diterima:  September 2019; Direvisi: Oktober 2019; Disetujui: Desember 2019

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  untuk  menguji  kemanjuran  IgY  kuning  telur  ayam  yang telah memperoleh suplementasi piridoksin dalam mencegah kelainan yang diakibatkan oleh infeksi bakteri S .Enteritidis. Telur dikoleksi dari ayam petelur yang telah diberi suplementasi piridoksin dosis  3  mg/kg  dan  diinjeksi  dengan S. Enteritidis  sebanyak  1,0  ml    (109sel/ml).    Pada  uji  kemanjuran  IgY digunakan  10  ekor  tikus  putih  dewasa  yang  dibagi  menjadi  2  kelompok  yang  terdiri  dari  lima  ekor  setiap kelompok. Kelompok P diberi kuning telur selama 31 hari , kelompok K  (control)  tidak diberi kuning telur. Setelah perlakuan kuning telur selesai, semua tikus putih disuntik dengan S.Enteritidis 1,0 ml  (109sel/ml). Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  IgY  antidiare  yang  terkandung  dalam  kuning  telur  ayam  yang  telah memperoleh  suplementasi  piridoksin,  cukup  efektif  mempertahankan  kadar  kalium  dan  albumin  serum sebagaimana pada kondisi normal.
Kata Kunci: Piridoksin, IgY, Immunoglobulin

## EFFICACY OF EGG YOLK IGY FROM CHICKEN SUPPLEMENTED WITH PYRIDOXINE AGAINST Salmonella enteritidis

## ABSTRACT
Efficacy of egg yolk (IgY) from chicken supplemented  with pyridoxine on Salmonella Enteritidis has been investigated. The eggs were collected from chicken supplemented with pyridoxine (3 mg/kg food) and has injected with 1,0 mL S. Enteritidis. The efficacy test was carried out using 10 mice The mice were divided in to two groups and each group consists of 5 mice. Each mouse in Experiment (P) group was given egg yolk for 31 days. K group was the control group. All mice in all groups was then injected with  1  mL Salmonella Enteritidis.  The  result  showed  that  the  egg  yolk  IgY  which  produced  by  chicken    supplemented        with pyridoxine    was effective for  maintaining potasium and albumin serum level as in normal mice.
Keywords : Pyridoxine, Immunoglobulin, IgY
Pendahuluan Pencegahan  berbagai  jenis  penyakit  yang ditimbulkan  oleh  mikroorganisme  patogen seperti  virus  dan  bakteri,  sangat  perlu dilakukan. Pencegahan dapat dilakukan dengan cara  menyuntikkan  antigen  tertentu  ke  dalam tubuh  sehingga  tubuh  akan  membentuk antibodi  spesifik  (imunisasi  aktip)  dan  dapat juga  dilakukan  dengan  cara  mengkonsumsi
bahan  makanan  yang  telah  mengandung antibodi  spesifik  terhadap  antigen  tertentu sehingga  tubuh  akan  kebal  terhadap  serangan antigen tersebut (imunisasi pasif).
Ayam telah dikenal sebagai pabrik biologis penghasil  antibodi  yaitu  immunoglobulin  Y (IgY)  dalam  kuning  telur  [1]  ;  [2];  [3].  Apabila ayam  diimunisasi  dengan  antigen  tertentu, maka  biosintesis  antibodi  akan  berlangsung
dalam  sistem  imun  dan  selanjutnya  ditransfer ke embrio melalui telur sehingga antibodi dapat ditemukan  dalam  telur  ayam.  Selanjutnya,  jika kuning  telur  tersebut  dikonsumsi,  maka konsumen  akan  memperoleh  imunisasi  pasif sehingga  kebal  terhadap  antigen  spesifik tersebut. Berbagai penelitian telah memproduksi  antibodi  dengan  memanfaatkan ayam  sebagai  pabrik  biologis  dan  telah diaplikasikan untuk pengobatan dan pencegahan  penyakit  seperti  Marek  [4],  flu burung  [5],  dan  tetanus  [6].  Namun  demikian, permasalahan  hingga  saat  ini  adalah  jumlah produk  IgY  yang  diperoleh  dari  setiap  butir telur masih rendah sehingga belum menguntungkan dari  segi  komersil.  Ayam yang diimunisasi  empat  kali  dengan  25-100  µg antigen hanya mampu menghasilkan 40-100 mg IgY per butir telur [7].
Salah  satu  upaya  untuk  meningkatkan produksi  antibodi  dalam  kuning  telur  adalah dengan cara suplementasi piridoksin pada ayam petelur. Piridoksin atau vitamin B6, merupakan vitamin  yang  sangat  penting  dalam  proses metabolisme.  Piridoksal  posfat  (PLP)  sebagai bentuk  aktif  dari  vitamin  B6  merupakan koenzim yang berperan  mengkatalisis berbagai reaksi  metabolisme  asam  amino  dan  protein dan  terlibat  juga  dalam  aspek  pembentukan sistem pertahanan tubuh.  Upaya meningkatkan produksi  IgY  kuning  telur  spesifik  anti  tetanus dengan suplementasi piridoksin telah dilaporkan.  Suplementasi  piridoksin  dosis  3,0 mg/kg ransum pada ayam petelur memberikan IgY  anti  tetanus  sebesar  106,1  mg/  butir  telur atau  meningkat  sekitar  enam  persen  [8]. Walaupun  produksi  IgY  anti  tetanus  telah meningkat  dengan  suplementasi  piridoksin, tetapi masalahnya apakah peningkatan tersebut berlaku  umum  untuk  bakteri  patogen  atau antigen  lainnya  ?.  Apakah  suplementasi piridoksin  dapat  diimplementasikan  untuk optimalisasi  produksi  IgY  anti  diare  dan penyakit lainnya?. Hal ini merupakan tantangan yang  sangat menarik untuk diverifikasi.
Diare merupakan salah satu jenis penyakit infeksi  usus    yang  disebabkan  oleh  invasi bakteri S. Enteritidis atau S. Typhimurium yang sering  terjadi  di  Indonesia  dengan  kejadian penyakit  400  per  1000  penduduk  [9].  Secara biokimiawi,  penyakit  ini  mengakibatkan menurunnya  kadar  albumin  serum  hingga dibawah normal (hipoalbuminnemia) dan kadar
kalium  darah  berada  dibawah  normal (hipokalemia)  [10].  Mengingat  bahwa  penyakit diare  sangat  berbahaya  bagi  masyarakat, sementara  fakta  telah  menunjukkan  bahwa suplementasi  piridoksin  dapat  meningkatkan produksi IgY, maka penelitian untuk memproduksi  IgY  kuning  telur  spesifik  anti diare  seoptimal  mungkin  dengan  suplementasi piridoksin sangat perlu dilakukan. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  IgY yang terkandung dalam kuning telur mencegah kelainan  yang  diakibatkan  oleh  bakteri S.Enteritidis pada tikus putih. Melalui penelitian ini  diharapkan  akan  diperoleh  metode  praktis yang dapat digunakan untuk meningkatkan dan mengoptimalkan  jumlah  produksi  IgY  untuk berbagai jenis penyakit.

## Bahan dan Metode
Penelitian  ini  dilakukan  dalam  dua  tahap yaitu: (1) Memproduksi IgY kuning telur dengan cara memberi perlakuan suplementasi piridoksin  pada  ayam  petelur  dengan  dosis  3 mg/kg  ransum,  dan  (2)  Melakukan  Uji kemanjuran IgY kuning telur pada tikus putih.
Produksi IgY pada Telur Ayam Bakteri S. Enteritidis rujukan ATCC 130706 dan lokal 821/94 ditumbuhkan pada media BHI dan diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 18 jam. Suspensi  disentrifugasi  pada  kecepatan  10  000 rpm  selama  10  menit.  Pelet  diresuspensikan dua  kali,  dengan    5  ml  NaCl  fisiologis  lalu disentrifugasi seperti sebelumnya.  Pelet dilarutkan  dalam  5  ml  NaCl  fisiologis, dihomogenkan  dan  diukur  konsentrasi  selnya pada  λ  620  nm  untuk  menentukan  kandungan bakteri      109  sel/ml.  Suspensi  diinaktifkan dalam penangas air pada suhu 56 0 C selama 60 menit,  didinginkan  dan  siap digunakan  sebagai vaksin untuk produksi antibodi [11].
Untuk produksi IgY anti diare dalam kuning telur  ayam  dilakukan  sesuai  prosedur  [11]. Digunakan  12  ekor  ayam  betina  dewasa  (jenis Isa brown) siap bertelur dan dimasukkan dalam kandang yang berbentuk sangkar empat persegi panjang  ukuran  45  x  30  x  45  cm  yang  disusun berderet memanjang saling bertolakan. Pemeliharaan dilakukan dalam kandang baterai selama  10  minggu.  Selama  percobaan  semua ayam  diberi  air  minum  secara  ad  libitum  dan ransum  komersil  yang  telah  mengandung piridoksin dengan dosis normal.  Setelah 12 hari
adaptasi,  ayam  diberi  perlakuan  suplementasi piridoksin  dosis  3,0  mg/kg  ransum  via  air minum.  Satu  minggu  setelah  pemberian perlakuan  suplementasi,  semua  ayam  diinjeksi dengan  0.5  ml  (109sel/ml)  suspensi  S. Enteritidis  secara  intravena  selama  tiga  hari berturut-turut.  Immunisasi  ulang  dilakukan pada  minggu  kedua  dengan  S.  Enteritidis sebanyak 1,0 ml  (109sel/ml) yang diemulsikan dalam  Freund’s  adjuvant  complete.  Pada minggu  ketiga  dan  keempat,  suntikan  ulang dilakukan  dengan  antigen  S.  Enteritidis sebanyak 1,0 ml  (109sel/ml) yang diemulsikan dalam  Freund’s  adjuvant  incomplete.  Sampel telur  diambil    setelah  2  minggu  injeksi  antigen S.  Enteritidis  yang  terakhir  untuk  uji kemanjuran  IgY  kuning  telur  pada  tikus percobaan.
Uji  Kemanjuran  IgY  kuning  Telur  Ayam  pada Tikus Putih
Untuk  tahap  uji  kemanjuran  IgY  kuning telur,  digunakan  10  ekor  tikus  putih  dewasa berumur  2-3  bulan  dengan  berat  badan  140- 200  gram.  Pemeliharaan  dilakukan  dalam kandang  yang  telah  disediakan  sebelumnya. Tikus  dikelompokkan  menjadi  2  (dua  ) kelompok masing-masing 5 ekor tiap kelompok. Untuk  kelompok  I  (eksperimen)  tikus  diberi kuning  telur  yang  telah  diperoleh  pada prosedur sebelumnya dengan cara mencampurkannya dalam ransum. Kelompok II (Kontrol)  tidak  diberi  tambahan  makanan kuning  telur.  Selama  pemeliharaan  dan perlakuan,  tikus  percobaan  diberi  makan  dan minum ad libitum. Pada hari ke 31, semua tikus disuntik  dengan  S.  Enteritidis  aktif.  Tiga  hari setelah  suntikan,  dilakukan  pengamatan terhadap  setiap  tikus  percobaan  terutama mengenai  kelainan-kelainan  yang  terjadi  dan gejala penyakit yang timbul. Pengambilan darah dilakukan  seminggu  setelah  suntikan  S. Enteritidis  aktif    untuk  analisis  kadar  albumin serum  dan  kadar  kalium  darah.  Kadar  kalium serum ditentukan dengan metode
kompleksometri    dan  kadar  albumin  serum ditentukan dengan Metoda Bromo Cresol Green (BCG) [10].

## Hasil Dan Pembahasan
Gejala Klinis dan Tingkat Kematian Kemampuan  IgY  kuning  telur  mencegah kelainan    pada  tikus  putih  dilihat  dari  ada
tidaknya  gejala  khas  yang  ditimbulkan  oleh S.Enteritidis  yaitu  meningkatnya  frequensi buang  air  besar  disertai  tinja yang  lembek  dan berair dimana  tubuh mengeluarkan cairan dan badan lemas.
Pada  hari  pertama  pasca  injeksi  toksin, gejala klinis khas diare muncul pada tikus putih kelompok  kontrol  (kelompok  yang  tidak diberi kunibg  telur  ayam).  Gejala  klinis  yang  pertama muncul adalah semakin meningkatnya frequensi  buang  air  besar  yang  lembek  dan berair.  Gejala  ini  semakin  parah  hingga  hari keempat  pasca  injeksi  bakteri  S.Enteritidis namun  tidak  sampai  menimbulkan  kematian. Pada  kelompok  tikus  yang  diberi  perlakuan kuning  telur  ayam  yang  telah  memperoleh suplementasi  piridoksin,  gejala  klinis khas  dire seperti  diatas  muncul  pada  hari  ketiga  pasca injeksi  bakteri  S.Enteritidis,  tetapi  kemudian berangsur  berkurang  bahkan    hilang  pada  hari keempat dan tidak ada menimbulkan kematian.

## Kadar Kalium Serum Tikus Putih
Pemberian kuning telur produk ayam yang telah  memperoleh  suplementasi  piridoksin pada  tikus  putih  memberikan  rataan  kadar kalium  serum  sebesar  5,376  ±  0,18  mEq/  liter, sementara tikus putih yang tidak diberi kuning telur  ayam  memberikan  rataan  kadar  kalium serum sebesar 3,64 ± 0,59 mEq/ liter (Tabel 1). Dari hasil uji beda rataan dengan uji t diperoleh kesimpulan  bahwa  pemberian  kuning  telur produk  ayam  yang  telah  memperoleh suplementasi  piridoksin  memberikan  rataan kadar kalium serum yang berbeda nyata dengan tikus putih yang tidak diberi kuning telur ayam.
Tabel  1 .  Rataan  Kadar  Kalium  Serum  Tikus Putih  Yang  Diberi  Kuning  Telur  Ayam yang  telah  memperoleh  suplementasi piridoksin Peubah Perlakuan Diberi Kuning Telur Tidak Diberi Kuning Telur Kadar Kalium Serum (mEq/liter) 5,376 ± 0,18 a 3,64 ± 0,59 b
Ket : Superskrip yang berbeda pada baris yang sama,menunjukkan  pe rbedaan  yang  nyata  (P˂ 0,01).
Pada  keadaan  normal,  kadar  kalium serum tikus putih adalah 4,85 – 5,85 mEq/ liter [10]. Dalam penelitian ini, pada tikus putih yang diberi  kuning  telur  ayam  yang  telah memperoleh suplementasi piridoksin diperoleh kadar  kalium  serum  tetap  dalam  keadaan normal walaupun telah disuntik dengan bakteri S.Enteritidis.  Sebaliknya  rataan  kadar  kalium serum tikus putih yang tidak diberi kuning telur berada di bawah normal.  Disimpulkan bahwa Ig Y  kuning  telur  yang  diproduksi  dengan pemberian  suplementasi  piridoksin  pada  ayam petelur  cukup  efektif  mempertahankan  kadar kalium    serum  tikus  putih  sebagaimana  pada kondisi normal.

## Kadar Albumin Serum Tikus Putih
Dari  hasil  analisis  kadar  albumin  serum tikus putih  diperoleh bahwa pemberian kuning telur  produk  ayam  yang  telah  memperoleh suplementasi  piridoksin  pada  tikus  putih memberikan  rataan  kadar  albumin  serum sebesar 4,69 ± 0,10 mg/100ml, sementara tikus putih  yang  tidak  diberi  kuning  telur  ayam memberikan  rataan  kadar  albumin  serum sebesar 2,34 ± 0,16 mg/100ml.
Dari  hasil  uji  beda  rataan  dengan  uji  t diperoleh kesimpulan bahwa pemberian kuning telur  produk  ayam  yang  telah  memperoleh suplementasi  piridoksin  memberikan  rataan kadar  albumin  serum  yang  berbeda  nyata dengan  tikus  putih  yang  tidak  diberi  kuning telur ayam.
Tabel  2 .Rataan  Kadar  Albumin  Serum  Tikus
Putih  Yang  Diberi  Kuning  Telur  Ayam yang  telah  memperoleh  suplementasi piridoksin Peubah Perlakuan Diberi Kuning Telur Tidak Diberi Kuning Telur Kadar Albumin Serum (mg/100ml) 4,69 ± 0,10 a 2,34 ± 0,16 b
Ket : Superskrip yang berbeda pada baris yang sama,menunjukkan  perbedaan  yang nyata  (P˂ 0,01).
Pada  keadaan  normal,  kadar  albumin serum tikus putih adalah 2,70 – 5,10 mg/100ml
[10]. Pada semua sampel tikus putih yang diberi kuning  telur  produk  ayam  yang  telah memperoleh suplementasi piridoksin ditemukan  bahwa  kadar  albumin  serum  tetap dalam keadaan normal walaupun telah disuntik dengan  bakteri  S.Enteritidis,  sebaliknya  rataan kadar  albumin  serum  tikus  putih  yang  tidak diberi  kuning  telur  berada  di  bawah  normal. Berdasarkan  data  tersebut  dapat  disimpulkan bahwa  Ig  Y  kuning  telur  yang  diproduksi dengan  pemberian  suplementasi  piridoksin pada ayam petelur cukup efektif mempertahankan  kadar  albumin    serum  tikus putih  sebagaimana  pada  kondisi  normal. Dengan  kata  lain  IgY  yang  diproduksi  cukup efektip mencegah timbulnya kelainan /penyakit akibat serangan antigen S,Enteritidis.
Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan penelitian  Coleman  yang  mengemukakan bahwa  pemberian  IgY  memberikan  dampak sistemik  sehingga  mampu  menggertak  sistem immun  humoral  dan  selular  [12]  Immunisasi pasif  melalui  pemberian  IgY  sangat  efektip dalam  pencegahan  karies  gigi  dan  diare  [13] Hasil  penelitian  ini  juga  mendukung  penelitian Tamilzarasan  yang  mengemukakan  bahwa immunoterapy passif dengan menggunakan IgY spesifik  dari  kuning  telur  dapat  mencegah penyakit  akibat  serangan  bakteri E.coli, Salmonella  pulporum,  Clostridium  perfringens dan  C.jejuni. [14].  Immunisasi  passif  pada  tikus percobaan  dengan  pemberian  secara  oral  IgY kuning  telur  spesifik  terhadap Vibriocholerae secara  efektip  dapat  mencegah  timbulnya penyakit  kolera  [15].  Dari  hasil  penelitian sebelumnya yang telah kami lakukan menyimpulkan  bahwa  IgY  antitetanus  yang terkandung dalam kuning telur ayam yang telah memperoleh  suplementasi  piridoksin,  cukup efektif  mencegah  kelainan  yang  diakibatkan oleh  toksin  tetanus  pada  tikus  putih  yang utamanya  dapat  mempertahankan  kadar hemoglobin  darah  dan  kadar  globulin  serum sebagaimana  pada  kondisi  normal  [16]. Berdasarkan temuan-temuan ini maka suplementasi  piridoksin  pada  ayam  petelur direkomendasikan  sebagai  suatu  metode praktis,murah dan efektip untuk meningkatkan produksi berbagai jenis antibodi / immunoglobulin  yolk  (IgY)  spesifik  dalam kuning  telur  ayam  yang  cukup  efektip  untuk pencegahan  penyakit  diare  dan  berbagai  jenis
penyakit yang ditimbulkan oleh mikroorganisme patogen. Ucapan Terima Kasih Ucapan terimakasih disampaikan kepada  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian Masyarakat Direktorat Jenderal Penguatan Riset dan Pengembangan Kementerian Riset,Teknologi dan Pendidikan Tinggi
Repubulik  Indonesia  yang  telah  menyediakan dana untuk pelaksanaan penelitian ini.

## Daftar Pustaka
Carlander,  D.  2002.  Avian  IgY  antibody,  invitro and invivo. Dissertation.  Acta Universitatis Upsaliensis. Upsala
Coleman,M.A.    2000.    Using  eggs  antibodies  to treat  desease.  In  Eggs  nutrition  and technology.  Sim JS, Nakai  S and Gueter W (Eds). CABI Publishing Wallingford, UK.
Efrizal.    2007.    Peran  Immunoglobulin  Y  (IgY) sebagai  Anti  Adhesi  dan  Opsonin  untuk Pencegahan Serangan Salmonella Enteritidis .    Tesis:  Sekolah  Pascasarjana Institut Pertanian Bogor
Girindra, A. 1989. Petunjuk Praktikum Biokimia Patologi PAU -Hayati. IPB Bogor.
Hirai,  K.,  H.  Arimitsu.,  K.  Umeda.,  K.  Yokota.,  L.
Shen.,  K.  Ayada.,  Y.  Kodama.,      T.  Tsuji.,  Y. Hirai  and.  K.  Oguma.    2010.    Passive  oral immunization by egg yolk immunoglobulin (IgY) to Vibrio cholerae efectively prevents cholera.    Acta  Med.  Okayama.  64  (3)  163- 170 Juneja, L.R.   2000.  Biological Characteristics of Eggs Components, Specifically Sialyloligosaccharides  in  Egg  Yolk.    Egg Nutrition and Biotchenology.    Pp.234-242 Kermani,  AV.,  T.  Moll.,  BR.  Cho.,  WC.  Davis  and
YS. Lu.  2001.  Effects of IgY antibodi on the deve lopment of marek’s disease.  Avian Dis. 20: 32-41 Nurhalimah,H., N.Wijayanti dan T.D.Widyaningsih.    2015.    Efek  Antidiare Ekstrak  Daun  Beluntas  ( Pluchea  indica L) Terhadap  Mencit  Jantan  yang  diinduksi Bakteri  Salmonella  thypimurium.    Jurnal Pangan dan Agrobisnis. 3 (3) : 1083-1094 Selim,A.M.,  E.M.Ibrahim,  A.H.El  Meshad  and FK.Hamouda.    2015.    Development  of  IgY Antibodies  for  Control  of  Tetanus. Biotechnology  in  Animal  Husbandry.  31 (1): 109-122
Silitonga,P.M  dan  M.Silitonga.    2013.  Upaya Meningkatkan Produksi Immunoglobulin Y (IgY)  Kuning  Telur  dengan  Suplementasi Piridoksin.    Prosiding  Semirata  FMIPA Universitas Lampung hal. 325-328. Silitonga,P.M.dan M.Silitonga. 2015. Kemanjuran  Immunoglobulin  Y  (IgY) Kuning Telur Ayam yang telah Memperoleh Suplementasi Piridoksin Mencegah  Kelainan  oleh  Toksin  Tetanus. Prosiding  SEMIRATA  Bidang  MIPA  BKS- PTN Barat,Universitas Tanjung Pura,Pontianak ,hal.171-179 Soejoedono,  RD.,  Z.hayati  dan  IWT.Wibawan. 2005.    Pemanfaatan  Telur  Ayam  Sebagai Pabrik Biologis: Produksi Yolk Immunoglobulin  (IgY)  anti  plaque  dan diare  dengan  Titik  Berat  pada  Anti Streptococcus  mutan,  Escherichia  coli  dan Salmonella  Enteridis.    Laporan  RUT  XII Kerjasama Lembaga Penelitian dan Pengabdian  Masyarakat  IPB  dengan Kementerian Riset dan Tehnologi RI
Suartha, IN., IWT. Wibawan., dan IBP. Darmono. 2006.    Produksi  imunoglobulin  Y  spesifik antitetanus pada ayam. J. Vet. 7 (1) : 21-28 Tamilzarasan, K.B., A.M. Dinakaran., G. Sevaraju and  N.  Dorairajan.    2009.  Efficacy  of  egg yolk immunoglobulins (IgY) against enteric pathogens  in  poultry.      Tamilnadu  J. Veterinary  &  Animal  Sciences  5  (6)  264- 268
Wibawan,  IWT.    2008.    Pemanfaatan  Telur Ayam  Sebagai  Pabrik  Biologis.    Majalah Ilmiah Veternakan. 11 (1); 36-40 Wibawan,  IWT.,  S.Murtini.,  RD.Soejoedono  dan IGNK.Mahardika    2009.    Produksi  IgY Antivirus  Avian  Influenza  H5N1  dan Prospek Pemanfaatannya dalam Pengebalan Pasif.  J. Vet. 10 (3): 118-124