Jurnal Teknik Kimia Vol. 29, No. 2, 2023, 79-86 e-ISSN: 2721-4885
DOI: https://doi.org/10.36706/jtk.v29i2.1462
Online at http://ejournal.ft.unsri.ac.id/index.php/jtk

## Studi eksperimen isolasi fukoidan dari rumput laut Sargassum binderi Sonder: Efek suhu dan waktu ekstraksi

## Experimental study of isolation fucoidan from seaweed of Sargassum binderi Sonder: The effect of temperature and extraction time
Herti Utami 1,* , Zulaikha S.M. Sari 1 , Muhammad Hanif 1,2 , Yuli Darni 1 , Simparmin br Ginting 1 , dan Elida Purba 1
1 Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Lampung, Bandar Lampung – Indonesia
2 Department of Chemical Engineering, National Tsing Hua University, Hsinchu City – Taiwan
* Email: herti.utami@eng.unila.ac.id

## Abstrak
Fukoidan adalah senyawa bioaktif yang merupakan polisakarida sulfat dengan penyusun utamanya yaitu L-fukosa dan sulfat.  Fukoidan  ini terdapat  pada rumput laut  coklat jenis Sargassum binderi  Sonder . Fukoidan  berfungsi sebagai  antikoagulan,  antioksidan,  antikomplementari,  anti  pembengkakan,  pelindung  lambung,  anti  kanker, immunostimulan  dan  pengatur  kadar  lipid  darah.  Terdapat  berbagai  pelarut  untuk  mengekstrak  fukoidan  dari rumput  laut  coklat,  diantaranya  memakai  pelarut  etanol,  HCl,  air,  CaCl 2 ,  dan  asam  etilen  diamin  tetra  asetat. Tujuan dari penelitian ini adalah  mendapatkan pengaruh suhu serta waktu ekstraksi dengan pelarut asam etilen diamin tetra asetat dalam ekstraksi rumput laut coklat jenis Sargasum binderi Sonder . Proses ekstraksi dilakukan pada  suhu  50 o C,  60 o C,  70 o C,  dan  90 o C,  dan  waktu  1  jam,  2  jam,  3  jam,  4  jam  dan  5  jam.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa yield crude fucoidan tertinggi yaitu pada suhu 90 o C dan waktu 2 jam sebesar 8,19 %, namun yield tertinggi dengan karakteristik terbaik pada suhu 70 o C dan waktu 2 jam sebesar 7,98 %. Berdasarkan hasil analisis didapatkan total kandungan gula sebesar 38,54 % dan kandungan sulfat sebanyak 13,91 %.
Kata Kunci : fukoidan, rumput laut coklat, crude fucoidan , asam etilen diamin tetra asetat

## Abstract
Fucoidan  is  bioactive  compound  that  it’s  sulphate  polysaccharide  which  substantially  consists  L-fucosa  and sulphate group. Fucoidan is in brown seaweed Sargassum binderi Sonder . Fucoidan exhibits various bioactivities such  as  anticoagulant,  antioxidant,  anticomplementary,  anti  inflamation,  gastric  protector,  anti-cancer, immunostimulant  and blood lipid level control. There are various  solvents  for extracting fucoidan from brown seaweed,  such  as  using  ethanol,  HCl,  water,  CaCl 2 ,  and  ethylenediaminetetraacetic  acid  as  solvents.  This research aimed to determine the influence of temperature and time with ethylenediaminetetraacetic acid as solvent in extracting Sargassum binderi Sonder brown seaweed. The temperatures used are 50 o C, 60 o C, 70 o C, and 90 o C and extraction times used are 1 hour, 2 hours, 3 hours, 4 hours and 5 hours. The results showed that crude fucoidan yield was highest at 90 o C and 2 hours. The highest crude fucoidan yield was obtained 8.19 %, but the crude fucoidan yield with the best characteristic was at 70 o C and 2 hours. The crude fucoidan yield was obtained 7.98 %. Based on the results of the analysis, the total sugar content was 38.54 % and sulfate content was 13.91 %.
Keywords: fucoidan, brown seaweed, crude fucoidan, ethylenediamintetraacetic acid

## 1.   PENDAHULUAN
Sebagai  negara  dengan  kepulauan  terbesar  di dunia, 77 % luas wilayah Indonesia adalah perairan. Makro alga atau disebut dengan rumput laut adalah cukup  banyak  sebagai  sumber  daya  hayati  yang terdapat  di  sepanjang  garis  pantai  di  Indonesia. Makro alga ini mengandung berbagai zat yang dapat dimanfaatkan bagi kehidupan manusia yaitu sebagai bahan makanan, kosmetik, maupun untuk kesehatan. Senyawa  bioaktif  dari  rumput  laut  yang  telah digunakan  dalam  bidang  kesehatan  salah  satunya yaitu fukoidan yang terdapat pada rumput laut jenis Sargassum . Sargassum termasuk  makro  alga  yang klasifikasinya  masuk  dalam  kelas Phaeophyceae. Makro alga coklat diketahui mengandung beberapa polisakarida  yang  bersifat  bioaktif. Sargassum  sp. adalah makro alga yang banyak ditemui di perariran Indonesia (Puspita, dkk., 2020). Polisakarida paling dominan  pada  rumput  laut  coklat  ada  3  jenis  yaitu alginat,  laminaran  dan  fukoidan  (Fauziee,  dkk., 2021).  Rumput  laut  coklat  mengandung  sejumlah besar  polisakarida  alginat,  laminaran  dan  fukoidan dalam rentang 40-80 % dari berat rumput laut kering (Sinurat,  dkk.,  2015).  Beberapa  jenis  rumput  laut coklat  telah  dilaporkan  mengandung  senyawa fukoidan, yang konsentrasinya bervariasi yaitu 19 % dalam Ecklonia  radiata sampai  dengan  51,2  % dalam Cladosiphon  sp. Di  antara  jenis  rumput  laut yang  mengandung  fukoidan  ini  salah satunya  yaitu jenis Sargassum binderi Sonder (Latif, dkk., 2022). Fukoidan  adalah  suatu  polisakarida  sulfat  yang komponen  penyusun  yang  paling  dominan  adalah fukosa  yang  mengandung  sulfat  dan  yang  lainnya adalah  monosakarida  diantaranya  yaitu:  galaktosa, manosa,  xilosa  dan  glukosa.  Fukoidan  tersebut terkandung dalam rumput laut coklat dan timun laut (Sinurat, dkk., 2015).
Studi  yang  berkaitan  dengan  bioaktivitas senyawa  fukoidan  sudah  banyak  dilakukan,  antara lain fukoidan sebagai antioksidan, antikoagulan, anti kanker,  antikomplementari,  anti  pembengkakan, pelindung  lambung,  immunostimulan  dan pengatur kadar  lipid  dalam  darah.  Selain  manfaat  fukoidan yang berkaitan dengan kesehatan seperti yang sudah disebutkan,  ternyata  fukoidan  juga  dapat  berfungsi sebagai biofertilizer (Yang dan Koo, 2021). Cabral, dkk.  (2021)  telah  meneliti  pengaruh  fraksi  berat molekul fukoidan dari makroalga Fucus vesiculosus sebagai  anti  mikroba  dan  antikanker.  Sung,  dkk (2022)  telah  melakukan  penelitian  mengekstraksi fukoidan dari Sargassum hemiphyllum dan membuktikan  fukoidan  berpotensi  sebagai  terapi antikanker. Wang, dkk. (2022) telah meneliti bahwa fukoidan  dari Sargassum  fusiforme dapat  sebagai antiinflamasi (anti pembengkakan). Lin, dkk. (2022) telah  mengekstrak  fukoidan  dari  rumput  laut  jenis Sargassum  cristaefolium dan  fukoidan  yang didapatkan dengan berat molekul yang lebih rendah. Hasil ini  lebih baik digunakan  sebagai antioksidan,
anti pembengkakan dan anti photoaging , dan dapat diaplikasikan sebagai krim untuk obat kulit. Sinurat dan Kusumawati (2017) sudah meneliti dan menguji bioaktivitas dari fukoidan yang diektrak dari rumput laut  di  Indonesia  sebagai  anti  koagulan  pada  jenis Sargassum  crassifolium .  Dan juga menguji bioativitas  fukoidan  sebagai  immunostimulan  dari jenis rumput laut Sargassum binderi Sonder .
Penelitian  yang  berkaitan  dengan  ekstraksi fukoidan  dari  berbagai  jenis  rumput  laut  telah dilakukan beberapa peneliti. Sinurat dan Kusumawati  (2017)  telah  melakukan  optimasi ekstraksi  fukoidan  dari  makro  alga  coklat  jenis Sargassum binderi Sonder dengan berbagai pelarut yaitu air, asam, dan larutan CaCl 2 2 %. Kandungan fukoidan  yang  paling  optimum  didapatkan  dengan mengekstrak fukoidan dengan beberapa pelarut atau pelarut.  Pada  ekstraksi  yang  pertama  HCl  0,1  N digunakan sebagai pelarut pada suhu kamar selama 6  jam.  Hasil  penelitian  menunjukkan yield  crude fucoidan sebesar 3,23 %, dan hasil analisis total gula 64,85 %, kandungan sulfat 5,55 % serta asam uronat 0,36  %.  Ekstraksi  kedua  HCl  0,1  N  digunakan sebagai pelarut  namun pada suhu 85 o C dan waktu ekstraksi 4 jam. Diperoleh hasil yield crude fucoidan sebesar  6  %,  dan  hasil  analisis  total  gula  55,40 %, kandungan sulfat 6,64 % serta asam uronat 2,68 %. Ekstraksi  ketiga  dengan  menggunakan  pelarut akuades  pada  suhu  85 o C.  Hasil  penelitian menunjukkan yield crude fucoidan yang dihasilkan yield  crude  fucoidan sebesar  3,36  %,  dan  hasil analisis total gula 76,25 %, kandungan sulfat 8,1 % serta  asam  uronat  0,48  %.  Ektraksi  keempat menggunakan larutan CaCl 2 2 %. Hasil yang didapat yaitu yield crude fucoidan sebesar 2,57 %, total gula 64,19 %, kandungan sulfat 8,69 % serta asam uronat 0,58  %.  Dari  hasil  yang  didapatkan  dapat menunjukkan  bahwa  ekstraksi  memakai  HCl sebagai pelarut pada kondisi suhu 85 o C dan waktu 4 jam didapatkan yield tertinggi, tetapi cukup rendah kandungan  sulfatnya.  Bioaktivitas  fukoidan  ini sangat dipengaruhi oleh kandungan sulfat. Dari hasil penelitian  tersebut  dengan  menggunakan  pelarut CaCl 2 pada konsentrasi 2 % didapatkan kandungan sulfat tertinggi.  Pelarut  asam  yang  digunakan  pada proses  ekstraksi,  menjadikan  gugus  sulfat  pada polisakarida dapat terputus. Hal ini akan menyebabkan  turunnya  bioaktivitas  dari  fukoidan (Pomin dkk . , 2005).
Proses  ekstraksi  sangat  dipengaruhi  oleh beberapa  parameter,  dan  akan  mempengaruhi  hasil ekstrak yang diperoleh. Pengaturan parameter yang benar  seperti  suhu,  pH  dan  waktu  ekstraksi berpengaruh  besar  pada yield fukoidan  dan  akan mencegah  kemungkinan  terjadinya  penggantian struktur dari polisakarida sulfat (Hahn, dkk., 2012). Zhao, dkk.  (2018) telah  melakukan penelitian yaitu  mendapatkan  fukoidan  dari  makro  alga  jenis Laminaria japonica dengan asam etilen diamin tetra asetat atau ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) sebagai pelarut, dengan konsentrasi 0,5 % pada suhu
70 o C , diperoleh yield  crude  fucoidan yang  cukup besar,  yaitu  16  %  dengan  lama  ekstraksi  adalah  3 jam.  Hasil ini juga menunjukkan bahwa kandungan sulfat  pada  fukoidan  tetap  bisa  dipertahankan. Aktivitas fukoidan sebagai antioksidan cukup besar, dan  ini  berkaitan  adanya  komposisi  monosakarida, sulfat,  serta  berat  molekul  dari  fukoidan.  Ekstraksi menggunakan pelarut asam etilen diamin tetra asetat merupakan  prosedur  yang  lebih  efisien  karena proses  ekstraksi  dan  penghilangan  pigmen  rumput laut coklat bisa dilakukan dalam satu langkah.
Liu,  dkk.  (2020)  membandingkan  beberapa pelarut ekstraksi fukoidan dari Sargassum fusiforme yaitu air panas, HCl dan CaCl 2 . Hasil penelitian ini yield tertinggi  dengan  pelarut  HCl  (11,24  %). Komposisi monosakarida dari ketiganya menunjukkan  hasil  sama,  hanya  berbeda  molar rasionya. Hasil analisis menunjukkan bahwa dengan pelarut  HCl  berat  molekul,  kandungan  sulfat  dan asam uronat lebih rendah dibanding dengan pelarut lainnya.  Knudsen, dkk.  (2023) telah  mengekstraksi fukoidan  dengan  teknik  ekstraksi  enzimatis diperoleh jumlah fukosa dan sulfat yang tinggi serta kandungan  glukosa,  laminaran  dan  alginate  yang rendah. Devi, dkk. (2022) mengisolasi fukoidan dari rumput  laut Sargassum  ilicifolium dengan  metode sonifikasi  dengan microwave dan  air  panas.  Hasil fukoidan  yang  diperoleh  dan  studi  aplikasinya mengindikasikan bahwa fucoidan berpotensi sebagai biomaterial untuk regenerasi tulang.
Studi pada penelitian  ini  terfokus pada  proses ekstraksi  fukoidan  dari  rumput  laut  coklat  jenis Sargassum  binderi  Sonder .  Pelarut  yang  dipilih adalah  asam  etilen  diamin  tetra  asetat  dan  yang divariasikan pada proses ekstraksi adalah waktu dan suhu  ekstraksi.  Bahan  baku  rumput  laut  jenis Sargassum binderi Sonder ini terdapat di sepanjang perairan Sebalang, Lampung.

## 2.   METODOLOGI PENELITIAN
Pada penelitian ini menggunakan bahan-bahan antara  lain  yaitu  rumput  laut  jenis Sargassum binderi  Sonder yang  berasal  dari  pantai  Sebalang, akuades  dari  Laboratorium  Terpadu  dan  Sentra Inovasi  Teknologi  (LTSIT)  Universitas  Lampung, asam  etilen  diamin  tetra  asetat  konsentrasi  0,5  % (b/v),  NaOH  padat  (Merck)  dan  etanol  anhidrat  96 % (v/v) dari dari Bratachem Bandar Lampung
Pada  penelitian  ini  menggunakan  peralatan diantaranya  yaitu:  alat  penggiling hammer  mill , neraca digital ,  cawan  petri, erlenmeyer ,  gelas beaker, gelas ukur, waterbath shaker Julabo SW22, kertas saring, baskom, kertas pH, corong, pipet tetes, centrifuge Hitachi CF16RX II, stopwatch, evaporator dan freeze dryer .
2.1. Persiapan Bahan dan Proses Ekstraksi Fukoidan.
Makro  alga  jenis Sargassum  binderi  Sonder atau  rumput  laut  basah  dicuci  dengan  air  sampai
bersih  dari  kemungkinan  kotoran  yang  masih terikut.  Setelah  itu  rumput  laut  tersebut  dilakukan pengeringan dengan cara penjemuran sinar matahari,  selama  2  hari.  Rumput  laut  kering  lalu dihaluskan dan diambil berat 50 g dimasukkan pada erlenmeyer  Duran  1000  mL  dan  diberikan  pelarut asam  etilen  diamin  tetra  asetat  dengan  konsentrasi 0,5 % dan rasio bahan rumput laut dan pelarut adalah 1:30.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  variasi  waktu  1 jam, 2 jam, 3 jam, 4 jam, dan 5 jam dan variasi suhu 50 o C,  60 o C,  70 o C,  dan  90 o C.  Erlenmeyer dimasukkan ke dalam water bath, setelah mencapai suhu  yang  diinginkan,  mulai  dihitung  waktu ekstraksi dengan stopwatch. Hal ini dilakukan untuk setiap  variasi  waktu  dan  suhu  ekstraksi.  Setelah tercapai  waktu  ekstraksi  erlenmeyer  diambil  lalu diletakkan pada suhu ruang.

## 2.2. Isolasi Fukoidan
Pada  penelitian  ini  mengambil  metode  yang dilakukan  oleh  Zhao,  dkk.,  yaitu  menggunakan pelarut  asam etilen diamin tetra asetat (Zhao, dkk., 2018).  Larutan  hasil  ekstraksi  yang  sudah  dingin kemudian  disaring  dengan  menggunakan  kertas saring.  Lalu  filtrat  diperoleh  dan  diberikan  larutan 0,1  M  NaOH  sampai  diperoleh  pH-nya  7.  Etanol anhidrat lalu dimasukkan sampai jumlah etanol yang ada  di  filtrat  sebanyak  20  %.  Tujuan  penambahan etanol anhidrat tersebut untuk mendapatkan endapan alginat.  Endapan  dari  campuran  tersebut  lalu disentrifugasi  dengan  kecepatan  putaran  6000  rpm dalam  waktu  10  menit.  Supernatan  yang  diperoleh dipisahkan  lalu  ditambahkan  etanol  anhidrat sehingga  jumlah  etanol  menjadi  60  %  yang bertujuan  agar  fukoidan  terendapkan.  Setelah sentrifugasi dilakukan, maka endapan fukoidan bisa diperoleh. Tetapi endapan ini masih ada larutannya, dan  dapat  dipisahkan  dengan  proses  evaporasi. Langkah evaporasi  ini dilakukan pada suhu 100 o C dan  memiliki  tujuan  untuk menguapkan  etanol dan air yang masih ada dalam endapan fukoidan. Proses freeze  drying selanjutnya  akan  lebih  mudah dilakukan . Lama  proses freeze  drying berlangsung selama  36  jam  sehingga  diperoleh  fukoidan  kering dan  ketika  ditimbang  beratnya  sudah  konstan. Fukoidan  yang  didapat  ini  lalu  bisa  disimpan  pada suhu kamar. Fukoidan yang sudah ditimbang inilah yang  dinyatakan  sebagai  hasil  fukoidan  mentah ( crude  fucoidan ).  Produk crude  fucoidan dihitung yield -nya dengan menggunakan persamaan berikut.
Yield = berat kering fukoidan (g) berat kering rumput laut (g) ×100% (1)

## 2.3. Analisis
Produk crude  fucoidan dianalisis  untuk menentukan  total  gula,  menentukan  kandungan sulfat,  dan  juga  menentukan  gugus  fungsi  dengan FT-IR.  Pada  analisis  total  gula  memakai  cara phenol-asam sulfat sederhana (Dubois, dkk., 1956).
Sebanyak  10  mg  fukoidan  setiap  sampel dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian dituang 1 mL akuades, dan dikocok. Pengukuran kadar total gula  memakai  uji  phenol-sulfat,  caranya  yaitu menambahkan  2,5  mL  H 2 SO 4 pekat  kemudian dibiarkan  dalam  waktu  20  menit.  Langkah berikutnya 0,5 mL phenol ditambahkan, lalu larutan tersebut  didinginkan  dan  dalam  waktu  30  menit diletakkan  masuk  air  es.  Pengadukan  sampel dilakukan dan absorbansinya dihitung pada panjang 490 nm dengan memakai spectrofotometer UV-Vis Cary  100  dan  menggunakan  larutan  standar D- Glucose .  Analisis  ini  memiliki  tujuan  untuk mendapatkan kadar D-Glucose pada sampel, karena D-Glucose merupakan  kandungan  dari  fukoidan. Kandungan  sulfat  pada  fukoidan  perlu  diketahui karena ini sangat berpengaruh pada bioaktivitasnya (Ale,  dkk . ,  2011).  Untuk  menentukan  kandungan sulfat  ini  dengan  metode  menggunakan  BaCl 2 - gelatin. Metode ini sudah digunakan oleh Dodgson dan  Price  (1962).  Langkah  yang  dilakukan  adalah menyiapkan  dua preparasi. Preparasi  yang pertama yaitu barium chloride-gelatin reagent . Sebanyak 2 g gelatin  ditambahkan  sebanyak  400  mL  air  panas agar  larut  pada  suhu  sekitar  60-70 o C,  kemudian didinginkan selama semalam suhu pada 4 °C. BaCl 2 sejumlah  2  g lalu  ditambahkan  semigelatin  dalam bentuk  cairan  agar  larut.  Hasilnya  akan  diperoleh larutan  keruh  dan  ini  didiamkan  selama  2  jam sebelum  dipakai.  Preparasi  kedua  yaitu  preparasi sampel dengan mengambil ekstrak crude fucoidan 2 mg  ditambahkan  dengan  2  mL  akuades  agar  larut dan  diletakkan  dalam  tabung  tertutup.  Kemudian asam  trikhloro  asetat  (TCA)  4  %  ditambahkan sebanyak  5  mL  dan  pemanasan  dilakukan  dalam waterbath pada suhu 100 o C dan dalam waktu 4 jam. Kemudian  didinginkan  pada  suhu  ruang,  sebelum dibuka tabung digoyang-goyangkan. Hasil hidrolisis diambil  1  mL  dan  ditambahkan  larutan  BaCl 2 - gelatin  sebanyak  1  mL  serta  asam  trikhloro  asetat 1,4 mL lalu diaduk secara mekanik selama 60 detik dan pengukuran dilakukan pada panjang gelombang (λ)  360  nm.  Analisis  sampel  dilakukan  dengan
spectrofotometer UV-Vis Cary 100 sebagai standar digunakan K 2 SO 4 . Kandungan sulfat ini menentukan adanya  bioaktifitas  pada  rumput  laut  (Kim  dkk . , 2007).
Analisis  gugus  fungsi  dilakukan  dengan Fourier  Transmission  Infrared (FT-IR)  Cary  360.
FT-IR  adalah  teknik  yang  digunakan  untuk mempelajari  perubahan  komposisi  kimia  dalam tumbuhan  antara  lain  rumput  laut  coklat  (Sheng, dkk.,  2004).  Untuk  menentukan  posisi  sulfat digunakan  metode  yang  sering  digunakan  yaitu spektrum  infra  merah.  Sejumlah  1  mg  sampel  dan kalium  bromida  sebanyak  200  mg  digerus  atau dihaluskan  sehingga  tercampur  merata.  Langkah berikutnya  serbuk  sampel  dapat  dibuat  tablet  tipis yang  kondisi  tekanannya  7000  Pa,  kemudian diletakkan  pada sample pan.  Dapat  diperoleh rekaman  spektrum  infra  merah  di  rentang  panjang gelombang 4000-500 cm -1 .

## 3.   HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1.  Hasil Ekstraksi Crude Fucoidan
Pelarut  yang  digunakan  pada  eksperimen  di laboratorium adalah asam etilen diamin tetra asetat dengan  konsentrasi  0,5  %  dan  rasio  bahan  rumput laut  jenis Sargassum  binderi  Sonder dan  pelarut adalah 1:30. Variasi suhu proses ekstraksi dilakukan pada suhu 50 o C, 60 o C, 70 o C, dan 90 o C, dan waktu 1  jam,  2  jam,  3  jam,  4  jam  dan  5  jam.  Pada  hasil ekstrak yield  crude  fucoidan yang  terbanyak  dan terbaik  kemudian  dianalisis.  Karakteristik  mutu fukoidan yang ditinjau yaitu dengan penentuan total gula,  penentuan  sulfat,  dan  analisis  gugus  fungsi. Hasil yield  crude  fucoidan yang  didapatkan  bisa ditunjukkan pada Gambar 1. Sedangkan pada waktu ekstraksi  2  jam  dapat  dilihat  hasil yield  crude fucoidan seperti pada Gambar 2.
Gambar 1. Pengaruh waktu dan suhu terhadap yield crude fucoidan dengan pelarut asam etilen diamin tetra asetat konsentrasi 0,5 %
0 2 4 6 8 10 0 1 2 3 4 5 Y ield C rude F uc oidan (% ) Waktu, jam Suhu 50 °C Suhu 60 °C Suhu 70 °C
Berdasarkan  hasil  ekstraksi  seperti  pada Gambar  1  dan  Gambar  2, yield  crude  fucoidan terbesar terdapat pada suhu 90 o C dan lama ekstraksi 2  jam  sebesar  8,19  %.  Berdasarkan  pengamatan, ekstrak  yang  diperoleh  berwarna  coklat  kehitaman yang  diduga  karena  suhu  tinggi  mengakibatkan fukoidan  mengalami kerusakan.  Analisis dilakukan pada  produk crude  fucoidan saat yield terbesar kedua  dengan  karakteristik  terbaik  yaitu  berwarna coklat yang menunjukkan yield crude fucoidan pada suhu 70 o C serta waktu 2 jam sebanyak 7,98 %.
Dari  Gambar  1  dapat  diketahui  bahwa  suhu serta  waktu  mempengaruhi yield  crude  fucoidan . Berdasarkan  grafik  tersebut  terlihat  bahwa  ketika suhu 50 o C dan 60 o C  makin  lama proses ekstraksi berlangsung yield  crude  fucoidan yang  didapatkan semakin  besar,  namun  pada  suhu  70 o C  dan  90 o C pada  waktu  antara  1  jam  ke  2  jam  mengalami peningkatan  yang  cukup  signifikan  dan  kemudian setelah  lebih  dari  2  jam, yield  crude  fucoidan mengalami  penurunan.  Semakin  lama  waktu ekstraksi dan suhu di bawah 70 o C maka yield crude fucoidan semakin besar. Pada suhu lebih dari 70 o C dan  waktu  2  jam  merupakan  titik  maksimum perolehan  peningkatan yield  crude  fucoidan .  Pada hasil eksperimen, suhu lebih dari 70 o C dan waktu 2 jam  maka  perolehan yield  crude  fucoidan semakin sedikit.  Hal  ini  disebabkan  kemungkinan  ada fukoidan yang sudah mengalami degradasi dan tidak terekstrak.
Secara teori pada proses ekstraksi makin tinggi suhu  maka yield ekstrak semakin  besar.  Suhu ekstraksi  yang  lebih  tinggi  akan  memudahkan pecahnya  dinding  sel  pada  bahan,  dalam  hal  ini rumput  laut  sehingga  zat  yang  terkandung  di dalamnya akan lebih mudah terekstrak keluar. Efek kenaikan suhu membuat pori-pori pada rumput laut lebih  terbuka  sehingga  pelarut  dapat  mendifusi  ke dalam  bahan  dan  selanjutnya  fukoidan  dilarutkan oleh pelarut ini. Ekstrak fukoidan  yang larut dalam pelarut  lalu  mendifusi  melalui  dinding  sel  rumput
laut  dan  menuju  ke bulk larutan.  Semakin  lama waktu ekstraksi berlangsung, maka semakin banyak jumlah fukoidan yang terekstrak dan terlarut dalam larutan.  Dari  Gambar  1  menunjukkan  pada  waktu ekstraksi  lebih  dari  2  jam  terjadi  pengurangan jumlah yield cukup signifikan. Zhao dan Xu (2018) telah meneliti dan mengambil fukoidan dari rumput laut coklat jenis Laminaria japonica dengan pelarut yang sama yaitu asam etilen diamin tetra asetat dan mengalami  peningkatan yield pada  waktu  6  jam, namun yield berkurang pada proses ekstraksi selama 9  jam.  Zhao  dan  Xu  (2018)  mengamati  penurunan yield yang disebabkan ada ikatan rantai karbohidrat atau  polisakarida  pada  polisakarida  sulfat  yang mengalami degradasi. Pengurangan hasil yield crude fucoidan juga  terjadi  pada  penelitian  ini,  dan memiliki trend yang sama.

## 3.2.  Analisis Crude Fucoidan
Kandungan total gula dianalisis dengan tujuan untuk  mengetahui  total  kandungan  polisakarida pada ekstrak yang diperoleh pada ekstrak fukoidan. Total kandungan gula dari hasil analisis didapatkan sebesar  38,54  %,  ini  menyatakan  persentase kandungan  polisakarida  dalam crude  fucoidan penelitian ini. Nilai tersebut lebih rendah dari hasil penelitian sebelumnya yang juga meneliti fukoidan dari  makro  alga  coklat Sargassum  binderi  Sonder dan  menggunakan  bermacam  pelarut  (Sinurat  dan Kusumawati,  2017).  Hasil  analisis  diperoleh  hasil total gula sebesar 64,85 % dengan pelarut HCl; hasil 76,25 % dengan pelarut akuades; dan hasil 64,19 % dengan  pelarut  CaCl 2 .  Hasil  analisis  total  gula berbeda  untuk  setiap  pelarut,  karena  kemampuan kelarutan polisakarida berbeda untuk setiap pelarut. Kandungan  total  gula  ini  dipengaruhi  oleh  metode ekstraksi,  perbedaan  spesies,  variasi  musim,  masa tumbuh/panen,  lingkungan  tempat  tumbuh,  dan pelarut (Sinurat, dkk., 2015).
Gambar 2. Pengaruh suhu terhadap yield crude fucoidan pada waktu ekstraksi 2 jam
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 50 60 70 80 90 Y ie ld c ru de f u coi da n ( % ) Suhu  ( o C)
Gambar 3. Spektra FT-IR fukoidan
Kandungan  sulfat  diukur  karena  menentukan adanya bioaktifitas fukoidan pada rumput laut (Kim, dkk.,  2007).  Ini  sudah  diuji  pada  uji  bioaktivitas fukoidan sebagai imunostimulan dengan konsentrasi fukoidan  yang  sama  dan  kandungan  sulfat  yang berbeda,  menunjukkan  bahwa  kandungan  sulfat yang lebih tinggi memiliki bioaktivitas imunostimulan yang lebih tinggi juga (Sinurat, dkk., 2016). Hasil analisis kadar sulfat pada penelitian ini didapatkan  sebesar  13,91  %.  Jika  dibandingkan dengan  penelitian  sebelumnya,  kadar  tersebut tersebut  lebih  tinggi  meskipun  jenis  pelarutnya berbeda  (Sinurat  dan  Kusumawati,  2017).  Dari penelitian tersebut, kandungan sulfat dengan pelarut HCl  sebanyak  6,64  %;  hasil  8,1  %  dengan  pelarut akuades;  dan  hasil  8,69  %  dengan  pelarut  CaCl 2 . Diperoleh  hasil  kandungan  sulfat  yang  berbeda untuk  pelarut  yang  berbeda,  karena  kemungkinan pelarut  asam  selain  mengekstrak  fukoidan,  juga mendegradasi sulfat yang terikat pada fukoidan.
Analisis  FTIR  dilakukan  pada  rentang gelombang  4000-650  cm -1 tertera  pada  Gambar  3. Spektrum  IR  yang  dihasilkan  dapat  memberikan informasi  keberadaan  gugus  sulfat  (S=O)  yang terdapat  di  sampel  fukoidan.  Didapatkan  pita serapan  pada  rentang  panjang  gelombang  1260- 1240 cm -1 . Spektrum menunjukkan beberapa puncak untuk  mengetahui  beberapa  gugus  fungsi  dalam sampel  fukoidan.  Keberadaan  polisakarida  mayor pada  campuran  polisakarida  kompleks  ditunjukkan pada  rentang  panjang  gelombang  1200-800  cm -1 (Kacurakova,  dkk.,  2000).   Puncak  serapan  1617,6 cm -1 dan  1625  cm -1 merupakan  kelompok karboksilat  dari  asam  uronat  (Hifney,  dkk.,  2016).
Hasil  dari  golongan  O-sulfat  ditunjukkan  pada kedua puncak serapan 1222,7 dan 1244, 9 cm -1 , ini menyatakan  karakteristik  polisakarida  sulfat  serta senyawa  fukoidan  pada  rumput  laut  (Pereira,  dkk., 2009).  Serapan  pada  gelombang  2700-3000  cm -1
didominasi vibrasi ulur dari gugus fungsi C-H untuk CH 3, CH 2 dan  CHO.  Serapan  3429  cm -1 mengindikasikan  O-H  (Zhao,  dkk.,  2018).  Serapan 1259,8 cm -1 mengindikasikan grup sulfat (Immanuel, dkk., 2012).
Hasil  analisis  FT-IR  pada  serapan  panjang gelombang  1620 - 1700  cm −1 merupakan  C=O  yang berasal  dari  gugus  karbonat,  serapan  lebar  3100- 3400 cm -1 merupakan vibrasi dari OH dapat berasal dari  senyawa  polifenol,  polisakarida  atau  adanya serapan  air.  Gugus  sulfat  C-O-S  and  S-O  berupa stretching vibration pada sekitar 800 and 1250 cm −1 . Pada  bilangan  gelombang  sekitar  2800-2900  cm -1 merupakan streching  vibration dari  gugus  C-H alifatik.
Hasil analisis dari penelitian ini dibandingkan dengan  hasil  penelitian  Sinurat  dan  Kusumawati (Sinurat  dan  Kusumawati,  2017).  Pada  penelitian ini,  pelarut  yang  digunakan  adalah  asam  etilen diamin  tetra  asetat  sedangkan  pada  penelitian tersebut,  pelarut  yang  digunakan  adalah  HCl, akuades dan CaCl 2 . Secara keseluruhan, perbandingan  hasil  yang  diperoleh  pada  penelitian ini dan penelitian tersebut dapat dilihat  pada Tabel 1.  Dari hasil penelitian ini, yield crude fucoidan dan kadar sulfat  lebih tinggi sedangkan kadar gula jauh lebih rendah.
Tabel 1. Perbandingan Penelitian ini dengan Penelitian Terdahulu (Sinurat dan Kusumawati, 2017) Analisis Sinurat dan Kusumawati (2017) Penelitian ini Yield (%) 6 7,98 Gula (%) 76,25 38,54 Sulfat (%) 8,69 13,91

## 4.   KESIMPULAN
Dari hasil penelitian, diperoleh bahwa semakin tinggi  suhu  maka  perolehan  y ield  crude  fucoidan semakin besar, dan maksimum pada suhu 70 o C pada waktu  2  jam.  Semakin  lama  waktu  ekstraksi,  y ield crude  fucoidan semakin  besar  dan  kemudian mengalami  penurunan.  Diperoleh yield  crude fucoidan terbesar pada suhu 90 o C dan waktu 2 jam adalah  sebanyakr  8,19  %,  tetapi  secara  fisik penampakan  ekstrak  kurang  baik.  Ekstrak  dengan hasil terbaik yaitu pada suhu 70 o C dan waktu 2 jam dengan yield  crude  fucoidan sebesar  7,98  %. Penggunaan  suhu  yang  lebih  tinggi  menghasilkan yield lebih  tinggi  dari  hasil  ekstraksi.  Hasil  uji statistik  diperoleh  variabel  yang  lebih  berpengaruh adalah variabel suhu. Hasil analisis total kandungan gula  didapatkan  sebesar  38,54  %  dan  kandungan sulfat yang didapatkan sebesar 13,91 %.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  menyampaikan  terimakasih  kepada Kepala  UPT  Laboratorium  Terpadu  dan  Sentra Inovasi  Teknologi  Universitas  Lampung  dan laboran  yang  telah  mendukung  pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Ale, M. T., Mikkelsen, J. D., dan Meyer, A. S. 2011. Important determinants for fucoidan bioactivity:  A  critical  review  of  structure- function  relations  and  extraction  methods  for fucose-containing  sulfated  polysaccharides from brown seaweeds. Marine Drugs . 9: 2106- 2130.
Cabral,  E.M.,  Mondala,  J.R.M.,  Oliveira,  M., Przyborska,  J.,  Fitzpatrick,  S.,  Rai,  D.K., Sivagnanam, S.P., Vaquero, M.G., O’shea, D., Devereux,  M.,  Tiwari,  B.K.,  dan  Vurtin,  J. 2021. Influence of molecular weight fractionation on  the antimicrobial and anticancer properties of a fucoidan rich-extract from  the  macroalgae  Fucus  vesiculosus. International Journal of Biological Macromolecules . 186: 994-1002.
Devi  G.V.,  Y.,  Nagendra,  A.H.,  Shenoy  P.,  S., Chatterjee,  K.,  dan  Venkatesan,  J.  2022. Isolation  and  purification  of  fucoidan  from Sargassum ilicifolium: Osteogenic differentiation potential  in  mesenchymal  stem cells for bone tissue engineering. Journal of the Taiwan Institute of Chemical  Engineers . 136: 104418.
Dodgson, K. S., dan Price, R. G. 1962. A note on the determination  of  the  ester  sulphate  content  of suplhated  polysaccharides. Biochemistry .  84: 106-110.
Dubois, M., Gilles, K. A., Hamilton, J. K., Rebers, P. A., dan Smith F. 1956. Colorimetric method for  determination  of  sugars  and  related
substances. Analytical  Chemistry .  28(3):  350- 356.
Fauziee,  N.A.,  Chang,  L.S.,  Mustapha,  W.A.W., Nor,  A.R.M.,  dan  Lim,  S.J.  2021.  Functional polysaccharides  of  fucoidan,  laminaran  and alginate  from  Malaysian  brown  seaweeds (Sargassum polycystum, Turbinaria ornate and Padina  boryana) .  International  Journal  of Biological Macromolecules . 167: 1135-1145.
Hahn, T., Lang, S., Ulber, R., dan Muffler, K. 2012. Novel  procedures  for  the  extraction  of fucoidan from brown algae. Process Biochemistry . 47: 1691-1698.
Hifney, A. F., Fawzy, M. A., Abdel-Gawad, K. M., dan Gomaa, M. 2016. Industrial Optimization of fucoidan extraction from Sargassum SP. and its  potential  antioxidant  and  emulsifying activities. Food Hydrocolloids . 54: 77-88.
Immanuel, G., Sivagnanavelmurugan, M., Marudhupandi,  T.,  Radhakrishnan,  S.,  dan Palavesam,  A.  2012.  The  effect  of  fucoidan from  brown  seaweed  Sargassum  wightii  on WSSV  resistance  and  immune  activity  in shrimp  Penaeus  monodon  (Fab ).  Fish  and Shellfish Immunology . 32: 551-564.
Kacurakova, M., Capek, P., Sasinkova, V., Wellner,
N., dan Ebringerova, A. 2000. FT-IR study of plant  cell  wall  model  compounds:  pectic polysaccharides and hemicelluloses.
Carbohydrate Polymers . 43: 195–203. Kim  W.J..,  Kim,  S.M.,  Kim,  H.G.,  Oh,  H.R.,  Lee, K.B.,  Lee,  Y.K.,  dan  Park,  Y.I.  2007. Purification  and  anticoagulant  activity  of fucoidan  from  Korean  Undaria  pinnatifida Sporophyl. Journal Algae . 2 (3): 247-252.
Knudsen,  N.R.,  Weiss,  D.R.,  dan  Horn,  S.J.  2023. Extraction  of  high  purity  fucoidans  from brown seaweeds using cellulases and  alginate  lyases.  International  Journal  of Biological Macromolecules. 229: 199-209.
Latif, H.M.R.A., Dawood, M.AO., Alagawany, M., Faggio,  C.,  Nowosad,  J.,  dan  Kucharczyk,  D. 2022. Health benefits and potential applications of fucoidan (FCD) extracted from brown  seaweeds  in  aquaculture:  An  updated review. Fish  and  Shellfish  Immunology .  122: 115–130.
Lin,  E.T.,  Lee,  Y.C.,  Wang,  H.M.D.,  Chiu,  C.Y., Chang, Y.K., Huang, C.Y., Chang, C.C., Tsai, P.C., dan Chang, J.S. 2022. Efficient fucoidan extraction  and  purification  from  Sargassum cristaefolium and preclinical dermal biological activity assessments of the purified fucoidans. Jounal  of  the  Taiwan  Institute  of  Chemical Engineering , 137:104294.
Liu, J., Wu, S.Y., Chen, L., Juan Li, Q., Shen, Y.Z., Jin, L., Zhang, X., Chen, P.C., Wu, M.J., Choi, J.,  dan  Tong,  H.B.  2020.  Different  extraction methods bring about  distinct physicochemical properties  and  antioxidant  activities  of
Sargassum  fusiforme  fucoidans. International Journal of Biological of Macromolecules . 155: 1385-1392.
Pereira, L., Amando, A.M., Critchley, A.T., van de Velde,  F.,  dan  Ribeiro-Claro,  P.J.A.  2009.
Identification of selected seaweed
polysaccharides (phycocolloids) by vibrational spectroscopy (FTIR-ATR and FTRaman. Food Hydrocolloids . 23:1903-1909.
Pomin,  V.H.  Valente,  A.P.,  Pereira,  M.S.,  dan Mourao, P.A. S. 2005. Mild acid hydrolysis of sulfated  fucans:  A  Selective  2-desulfation reaction  and  an  alternative  approach  for preparing  tailored  sulfated  oligosaccharide, Glycobiology. 15: 1376-1385.
Puspita,  M.,  Setyawidati,  N.A.R.,  Pouvreau,  V.S., Vandanjon,  L.,  Widowati,  I.,  Radjasa,  O.K., Bedoux,  G.,  dan  Bourgougnon,  N.  2020. Chapter  Five  -  Indonesian  Sargassum  species bioprospecting:  potential  applications  of bioactive  compounds  and  challenge  for sustainable development, Advances in Botanical Research . 95: 113-161.
Sheng,  P.  X.,  Ting,  Y.P.,  Chen,  J.P.  dan  Hong,  L. 2004. Sorption of lead copper, cadmium, Zinc and  nickel  by  marine  algal  biomass: characterization  of  biosorptive  capacity  and investigation  of  mechanisms. J.  Coll.  Inter. Sci ., 275: 131-41.
Sinurat,  E.,  Peranginangin,  R.,  dan  Saepudin,  E. 2015.  Purification  and  characterization  of fucoidan  from  the  brown  seaweed  Sargassum binderi  Sonder.  Squalen, Bulletin  of  Marine and Fisheries Post harvest and Biotechnology . 10 (2): 79-87.
Sinurat,  E.,  Saepudin,  E.,  Peranginangin,  R.,  dan Hudiyono, S..2016. Immunostimulatory activity of brown seaweed-derived fucoidans at different  molecular  weights  and  purity  levels towards white spot syndrome virus (WSSV) in shrimp  Litopenaeus  vannamei. Journal  of Applied  Pharmaceutical  Science ,  6(10),  082- 091.
Sinurat,  E.,  dan  Kusumawati,  R.  2017.  Optimasi Metode  Ekstraksi  dari  Rumput  Laut  Cokelat Sargassum  binderi  Sonder.  Balai  Besar  Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan.
Sung,  J.C.,  Wang,  H.H.,  Sun,  K.H.,  Hsieh,  C.C., Huang,  R.,  Sun,  G.H.,  dan  Tang,  S.J.  2022. Fucoidan  from  Sargassum  hemiphyllum inhibits the stemness of cancer stem cells and epithelial  mesenchymal  transitions  in  bladder cancer cells. International Journal of Biological of Macromolecules . 221: 623-633. Wang, L., Cui, Y.R., Wang, K., Fu, X., Xu, J., Gao, X.,  dan  Jeon,  Y.J.  2022.  Anti-inflammatory effect  of  fucoidan  isolated from  fermented Sargassum  fusiforme  in  in  vitro  and  in  vivo model. International  Journal  of  Biological  of Macromolecules . 222: 2065-2071.
Yang, S.H., Seo, J., dan Koo, Y. 2021. Alginate and fucoidan  changes  the  bacterial  community  in different  directions  and  the  alginate  or fucoidan degrading bacteria isolated from  paddy  soil  promotes  the  plant  growth.
Archives of Microbiology . 203:5183–519. Zhao,  D.,  Xu,  J.,  dan  Xu,  X.  2018.  Bioactivity  of Fucoidan  Extracted  from  Laminaria  Japonica Using  a  Novel  Procedure  with  High  Crude fucoidan. Food Chemistry . 245: 911-918.