UJI ANTITOKSOPLASMA EKSTRAK KASAR ALKALOID DAUN PULAI (Alstonia scholaris, (L.) R. BR) TERHADAP MENCIT (Mus musculus) BALB/C YANG

## TERINFEKSI Toxoplasma Gondii STRAIN RH

## Ali Abraham, Begum Fauziyah, A.Ghanaim Fasya, Tri Kustono Adi
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Pulai  (Alstonia  scholaris,  L.R.Br)  is  a  plant  with  whole  part,  especially  the  leaf,  contains  many compounds  of  alkaloid.  The  compounds  has  been  widely  used  as  drug.  This  research  was  aimed  to  know  the effectiveness of the alkaloid crude extract of Pulai’s leaf  in prolonging lifespan of mice infected by Toxoplasma gondii.
The  alkaloid  crude  exctract  was  yielded  through  maseration  and  acid-base  extraction  using  ethanol solvent. The antitoxoplasma assay was performed using male mice Balb/C with dose variations of 25 mg/Kg,  50 mg/Kg and 75 mg/Kg of mice bodyweight (bw). The data was also supported by observation of the amount of intraperitoneal takizoit in 8 days period of treatment. The identification and separation of the extracted alkaloids was applied using phytochemical tests and Tin Layer Chromatography (TLC).
The result showed that the alkaloid crude extract was succesfully generated with 0.37% yield. Result of research shows of alkaloid content of ethanol condensed extract equal to 0,368 % and phytochemical test results showed positive extract contains alkaloids. All dose variation of the crude extract had succesfully prolonged the lifespan of the infected mice during 8 days of treatment. The amount of takizoit intraperitoneal was counted as 7.375  x  10 5 .  The  separation  of  the  crude  extract  by  TLC  using  etil  asetat  :  methanol  :  water  (6  :  4  :  2)  eluen generated 6 spots.
Key word: antitoxsoplasma, leaf Alstonia scholaris, L.R.Br, taxoplasma gondii.

## ABSTRAK
Tumbuhan  pulai  (Alstonia  scholaris,  L.R.Br)  merupakan  salah  satu  tumbuhan  yang  dimanfaatkan sebagai obat. Hampir seluruh bagian dari tumbuhan pulai  mengandung senyawa alkaloid. Ekstraksi daun pulai bertujuan  unutk  mengambil  senyawa  alkaloid  yang  telah  diketahui  sebagai  antitoksoplasma.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui efektivitas dan dosis terbaik dari ekstrak alkaloid terhadap daya hidup mencit yang terinfeksi parasit serta mereduksi Toxoplasma gondii yang nantinya berpotensi sebagai obat antitoksoplasma.
Ekstraksi  dilakukan  secara  maserasi  dan  ekstraksi  asam  basa  untuk  pengambilan  senyawa  alkaloid dalam  ekstrak  etanol.  Hasil  ekstrak  dilakukan  Uji  antitoksoplasma  menggunakan  mencit  Balb/C  jantan  dengan variasi dosis yaitu 25 mg/Kg BB, 50 mg/Kg BB dan 75 mg/Kg BB mencit dengan melihat parameter daya hidup mencit  yang didukung dengan jumlah takizoit intraperitoneal selama  masa terapi 8 hari. Ekstrak kasar alkaloid selanjutnya di uji fitokimia serta diidentifikasi dengan KLT.
Hasil  penelitian  menunjukan  kadar  alkaloid  dari  ekstrak  etanol  sebesar  0,37  %  dan  hasil  uji  fitokimia menunjukan  ekstrak  positif  mengandung  alkaloid.  Ekstrak  kasar  alkaloid  baik  pada  dosis  25  mg/Kg  BB,  50 mg/Kg BB dan 75 mg/Kg BB dapat memperpanjang daya hidup mencit hingga hari terapi ke-8. Dosis 25 mg/Kg BB memberikan daya hidup dengan sisa mencit 3 ekor dengan didukung jumlah takizoit intraperitoneal sebesar 737,5  x  10 3 .  Ekstrak  kasar  alkaloid  diidentifikasi  dengan  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dengan eluen etil asetat : metanol : air (6 : 4 : 2) yang menghasilkan 6 noda .
Kata Kunci: antitoksoplasma, Alstonia scholaris, L.R.Br, toxoplasma gondii

## I. PENDAHULUAN
Toksoplasmosis  merupakan  salah satu  penyakit  yang  menjadi  masalah  serius di  berbagai  belahan  dunia.  Toksoplasmosis adalah  penyakit  zoonis  yang  disebabkan oleh  parasit  Toxoplasma  gondii  yang
merupakan  protozoa  golongan  koksidia yang  menyerang  hewan  dan  manusia (Iskandar  dkk.,  2006).  Infeksi  Toxoplasma gondii akut  yang menginfeksi wanita hamil akan mengakibatkan toksoplasmosis kongenital  pada  bayi,  seperti  lahir  dengan
kecacatan, hingga kematian pada janin yang mengakibatkan  keguguran  (Dubey  and Weiss,  2009).  Kasus  toksoplasmosis  pada manusia  mengalami  peningkatan  di  setiap tahunnya.  Prevalensi  toksoplasmosis  pada manusia  di  Indonesia  sekitar  2-63  % (Susanto  dkk.,  2002)  dan  mengalami peningkatan  menjadi  43-88  %  pada  tahun 2006  (Subekti  dan  Arrasyid,  2006).  Salah satu pengobatan bagi pasien yang terjangkit kasus  toksoplasmosis  ibu  hamil  dengan pemberian  obat  sintesis  pirimetamin  yang menjadi  pilihan  utama  dalam  pengobatan toksoplasmosis. Namun pemberian pirimetamine  memberikan  efek  samping bagi  penderita  karena  dianggap  bersifat teratogenik. Mengenai efek samping bahaya obat  sintesis  seperti  pirimetamine  telah dibuktikan  oleh  Kumolosasi  dkk.,  (2004), yaitu pemberian obat pembanding pirimetamine  dan  sulfadoksin  dengan  dosis terapi  6,75  mg/Kg  bb  dan  235  mg/Kg  bb menyebabkan keguguran pada 100 % induk tikus,  sedangkan  seperempat  dosis  terapi tersebut  tidak  menyebabkan  keguguran, tetapi  menyebabkan  hidrosefalus  ringan pada  30,4  %  janin.  Berdasarkan  paparan mengenai  efek  samping  serta  bahaya  dari obat sintetis di atas maka perlu dikembangkan upaya penelitian dan pencarian  obat-obatan  alami  atau  herbal dari  tumbuhan  sebagai  pengganti  obat sintesis.
Masyarakat dahulu hingga sekarang  meggunakan  obat  tradisional sebagai    warisan  budaya  masyarakat terdahulu.  Hal  ini  didorong  pula  oleh keanekargaman  hayati  di  Indonesia  yang pemanfaatannya  oleh  masyarakat  terdahulu dengan  mengkaitkan  konsep  sakit,  sehat dan  macam  keanekaragaman  tumbuhan yang  telah  terbentuk  dari  proses  sosialisasi yang  secara  turun  temurun  dipercaya kebenarannya untuk digunakan sebagai obat tradisional (Mulyati dkk., 2006).
Hal  ini  dapat  dilakukan  pengkajian penelitian dalam bidang pengobatan alternatif yang berasal dari berbagai macam tumbuh-tumbuhan yang selama ini berkembang  di  masyarakat.  Indonesia merupakan  negara  tropis  yang  kaya
sumberdaya  hayati.  Hampir  ±30.000  ribu spesies  tanaman  tumbuh  di  Indonesia,  ± 7000 diantaranya berkhasiat sebagai tanaman  obat  (Supriadi,  2001).  Salah  satu tumbuhan  yang  ada  di  Indonesia  yang dimanfaatkan sebagai tumbuhan obat adalah  tumbuhan  pulai.  Hampir  semua bagian dari tumbuhan yang dapat dimanfaatkan  sebagai  obat  adalah  bagian daun,  batang,  akar,  rimpang,  bunga,  buah dan  bijinya  (Savitri,  2008).  Kandungan yang paling dominan pada beberapa bagian tumbuhan  pulai  adalah  alkaloid  (Kulsum dan Gusmailina,
2003).
Hampir keseluruhan  hasil  penelitian  dari  tumbuhan pulai  baik  pada  daun,  akar  dan  kulit batangnya terdapat alkaloid. Sehingga dapat diduga  bahwa  senyawaan  yang  berpotensi sebagai antitoksoplasma berasal dari golongan  alkaloid.  Penelitian  mengenai golongan senyawa alkaloid yang berpotensi sebagai  antitoksoplasma  telah  dibuktikan oleh  Lee  dkk.,  (2012)  yang  menyatakan alkaloid  pada  ekstrak  metanol  kasar  jambu biji  (Psidium  guajava  L.)  dan  brotowali (Tinospora crispa) aktif sebagai antitoksoplasma. Hal ini juga telah dibuktikan  oleh  Ronize  dkk,  (2012) alkaloid turunan naftoquinon dan liriodenine  dapat  menghambat  aktivitas replikasi  dari  Toxoplasma  gondii  dengan nilai  IC 50 yang  diperoleh  adalah  0,32  dan 0,07 µM (yaitu, 0,1 dan 0,02 mg / mL).
Ekstrak kasar alkaloid yang diperoleh
akan dilakukan uji antitoksoplasma  terhadap  mencit  Balb/C yang  terinfeksi  Toxoplasma  gondii  serta  di uji  fitokimia  dengan  menggunakan  uji reagen  dan  kromatografi  lapis  tipis  untuk mengetahui  dugaan  kandungan  senyawaan alkaloid  yang  ada  dan  berpotensi  sebagai antitoksoplasma. Hasil penelitian ini diharapkan  dapat  mengetahui  efektivitas ekstrak  kasar  alkaloid  dari  daun  pulai sebagai antitoksoplasma.

## II. METODOLOGI PENELITIAN Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  bagian  tanaman  yakni
daun  pulai  (Alstonia  scholaris  (L)  R.  Br). Bahan-bahan  kimia  yang  digunakan  dalam penelitian ini antara lain: pelarut etanol p.a, etil  asetat  p.a,  H 2 SO 4 2  %  amonium hidroksida  (NH 4 OH  25  %),  kloroform  p.a, aseton  p.a,  metanol  p.a,  n-heksana  p.a,. Bahan lain yang digunakan adalah akuades, reagen  mayer,  reagen  dragendroff,  HCl (asam  klorida)  1  %  dan  gas  N 2, NaCl fisiologis  0,9  %,  spiramicin,  ekstrak  daun pulai (Alstonia scholaris (L) R. Br), mencit jantan  galur  Balb/C  CMC-Na  (Sodium Carboxyl  Methyl  Cellulose)  dan  parasit Toxoplasma gondii galur RH.

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  melalui pengujian  eksperimental  di  laboratorium. Sampel  daun  pulai  diambil,  dibersihkan dari debu dan kotoran, dicuci, dikeringanginkan, ditumbuk kasar, kemudian ditentukan kadar airnya. Selanjutnya  daun  pulai  dihaluskan  dengan blender  lalu  diayak  menggunakan  ayakan dengan  rentang  20  mesh  hingga  diperoleh serbuk  yang  halus  (berukuran  20  mesh), kemudian  ditentukan  kadar  airnya  kembali hingga kurang dari 10 %.  Sejumlah serbuk sampel masing-masing diekstraksi maserasi dengan  mengunakan  pelarut  etanol  (1:10) sampai diperoleh filtrat yang pucat.
Filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan menggunakan  rotary  evaporator  vakum pada suhu 40 ℃ dan dialiri gas N 2 . Ekstrak kental yang diperoleh kemudian dilanjutkan dengan  fraksinasi  alkaloid  sebelum  di fraksinasi  ekstrak  etanol  95  %  di  lakukan pengujian  fitokimia  untuk  mengetahui golongan  senyawa  alkaloid.  Hasil  Fraksi alkaloid  selanjutnya  di  gunakan  untuk  uji antitoksoplasma  untuk  mengetahui  daya hidup  mencit  selama  terinfeksi  takizoit Toxoplasma  gondii  dengan  dosis  terapi yang  diberikan  yaitu  dosis  25  mg/Kg  BB, 50  mg/Kg  BB  dan  75  mg/Kg  BB. Selanjutnya  diuji  fitokimia  kedua  dengan menggunkan reagen dan dilanjutkan identifikasi senyawa alkaloid dengan menggunakan  kromatografi  lapis  tipis (KLT).

## Analisis Kadar Air
Tahap  pertama  yang  dilakukan untuk  menganalisis  kadar  air  adalah mengeringkan  cawan  porselen  dalam  oven pada  suhu  105 o C  selama  1  jam.    Cawan tersebut  diletakkan  ke  dalam  desikator (kurang  lebih  15  menit)  dan  dibiarkan sampai dingin kemudian ditimbang. Cawan tersebut ditimbang kembali hingga beratnya konstan,  sebanyak  5  gram  sampel  daun pulai  (masing-masing  basah  dan  kering) dimasukkan  ke  dalam  cawan  tersebut, kemudian  dikeringkan  dengan  oven  pada suhu  105 o C  selama  5  jam  atau  hingga beratnya konstan.
Setelah  selesai  proses  kemudian cawan  tersebut  dimasukkan  ke  dalam desikator  dan  dibiarkan  sampai  dingin  dan selanjutnya  ditimbang  kembali.  Uji  kadar air  masing-masing  dilakukan  pada  sampel basah dan sampel kering. Perhitungan kadar air :
%Kadar air % 100 x A B C B    .....(3.1)
Keterangan: A = Berat cawan kosong (gram)
B = Berat cawan yang diisi dengan sampel (gram) C  =  Berat  cawan  dengan  sampel  yang  sudah dikeringkan (gram)

## Ekstraksi Alkaloid Daun Pulai
Serbuk daun pulai ditimbang sebanyak  100  gram  dan  perlakuan  dibagi menjadi dua masing-masing 50 gram untuk proses  maserasi.  Kemudian  diekstraksi secara maserasi masing-masing menggunakan  pelarut  etanol  (1:10)  selama 24  jam.  Pengadukannya  dibantu  dengan shaker  selama  3  jam,  kemudian  disaring dan  ampas  yang  diperoleh  dimaserasi kembali  dengan  pelarut  etanol,  dengan perlakuan  yang  sama  sampai  diperoleh filtra tidak berwarna.
Selanjutnya disaring sampai diperoleh  residu  (ampas)  dan  filtrat, kemudian  residu  dibuang,  ekstrak  etanol yang  diperoleh  dipekatkan  dengan  rotary evaporator  vakum  dan  di  aliri  gas  N 2 . Ekstrak  yang  didapat  dilarutkan  kembali dalam  H 2 SO 4 2  %  kemudian  ditambahkan
dietil  eter  untuk  menghilangkan  lemak. Selanjutnya  fraksi  dietil  eter  dibuang,  dan fraksi  air  dibasakan  dengan  NH 4 OH  25  % sampai  pH  9-10  dan  diekstraksi  dengan kloroform  sampai  tidak  berwarna.  ekstrak pekat    yang    diperoleh    ditimbang    dan dihitung rendemennya.

## Uji Antitoksoplasma
Penelitian  ini  menggunakan  hewan mencit  (Mus  musculus)  galur  Balb/C  jenis betina  yang  berumur  8-10  minggu  dengan berat  badan  rata-rata  16-20  gram/ekor. Sebelum  perlakuan,  mencit  dipelihara dalam  kandang  yang  diberi  alas  serbuk kayu  dan  anyaman  kawat  sebagai  penutup. Pemberian  makan  dan  minum  dilakukan setiap  hari  secara  ad  libitum.  Penelitian dilakukan  dengan  5  kelompok  perlakuan. Dengan masing-masing kelompok menggunakan  6  ekor  hewan  uji.  Adapun  5 kelompok  tersebut yaitu  terdiri  dari kelompok  kontrol  positif  (kontrol  obat spiramicin  +  infeksi),  kelompok  kontrol negative  (infeksi  +  CMCNa  1%),  dan kelompok perlakuan ekstrak dengan masing-masing  dosis  yaitu  25  mg/Kg  BB, 50  mg/Kg  BB  dan  75  mg/Kg  BB. Pengobatan  dilakukan  sejak  hari  ke-1, sampai  ke-8.  Proses  pengamatan  daya hidup mencit diamati setiap hari dan jumlah takizoit diamati pada hari ke-5.
Perhitungan Jumlah Takizoit Intraperitoneal Perhitungan jumlah takizoit
dilakukan berdasarkan kontrol negatif  yang diamati setiap hari sekali dengan mengambil  satu  mencit  sebagai  sampel. Perhitungan  dilakukan  dihari  ke-5  dengan cara  mengorbankan  masing-masing  mencit per-kelompok  perlakuan.  Kemudian  cairan peritoneum  atau  intraperitoneal  kemudian ditampung  di  tabung  ependroff.  Larutan diambil  dengan  mikropipet  dan  hitung jumlah takizoit dengan alat Hemisitometer.
100 µL, kemudian larutan diinkubasikan  selama  90  menit.  Nilai absorbansi diukur pada panjang gelombang 655  nm  menggunakan  spektrofotometri Bio-Rad Model 680. Sampel diuji sebanyak 2 kali ulangan.
Uji  Alkaloid  (Harbone,  1987;  Saxena dkk., 2012) Sebanyak 0,5 gr ekstrak
ditambahkan  5  ml  HCl  1  %  kemudian disaring.  Filtrat  yang  diperoleh  dibagi menjadi 2 dimasukkan dalam tabung reaksi. Tabung  reaksi  I  ditambahkan  2-3  tetes reagen  Dragendorff,  sedangkan  tabung reaksi  II  ditambahkan  2-3  tetes  pereaksi Mayer.  Jika  pada  tabung  I  terbentuk endapan  merah,  jingga  dan  pada  tabung  II terbentuk  endapan  putih  atau  kekuning- kuningan maka ekstrak menunjukkan adanya alkaloid.
Identifikasi  Senyawa  Alkaloid  dengan Kromatografi Lapis Tipis
Uji senyawa aktif alkaloid dilakukan dengan  KLT  dengan  menggunakan  eluen Kloroform : Aseton (1:3) dengan
penyemprot  Dragendorf    menghasilkan  5 noda (Diah, 2012). Etil Asetat : Etanol : n- Heksan (2:1:30) dengan penyemprot Dragendorf  menghasilkan  5  noda  (Kusrini, 2013).  Kloroform  :  Etanol  (9:1)  dengan penyemprot  Dragendorf  menghasilkan  4 noda (Ekasari dkk., 2005).
Etanol  :  Metanol  :  Air  (6:4:2)  dengan penyemprot  Dragendorf  menghasilkan  6 noda  (Marliana,  2007).  Aseton  :  Metanol (9:1) dengan penyemprot Dragendorf menghasilkan 5 noda (Lusiana, 2009).
Analisi Data
Data  yang  diperoleh  dibuat  dalam bentuk tabel dan grafik, kemudian dideskripsikan  hasilnya.  Adapun  data  yang diperoleh % daya hidup dan Jumlah takizoit intraperitoneal terhadap  ekstrak  kasar alkaloid yang diberikan.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis Kadar Air
Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji analisis  kadar  air  dari  sampel  daun  Sirsak pada  sampel  segar  dan  serbuk  kering. Penentuan kadar air berguna untuk menyatakan kandungan zat dalam tumbuhan  sebagai  persen  bahan  kering. .Kadar  air  suatu  sampel  erat  kaitannya dengan  mutu  sampel  dan  kecepatan kerusakan  sampel,  baik  yang  sifatnya
mikrobiologi  ataupun  kimia  (Krismawati, 2007).
Adapun hasil kadar air sampel daun pulai  segar  dan  serbuk  daun  kering, sebagaimana pada Tabel 1.
Tabel 1. Kadar air sampel Sampel Kadar Air (% b/b) Segar 68,90 % Serbuk kering   8,34 % Sampel daun Pulai segar
mengandung kadar air sebesar 68,90 % dan sampel  serbuk  daun  kering  mengandung kadar  air  sebesar  8,34  %.  Sampel  tersebut telah memenuhi standar aturan penyimpanan yang aman terhadap pertumbuhan  jamur  ataupun  mikroba.  Hal ini sesuai dengan pernyataan yang dikemukakan  oleh  Winarto  (2007)  bahwa sampel  dikatakan  baik  dan  dapat  disimpan dalam  jangka  waktu  yang  lama  apabila memiliki kadar air kurang dari 10 %, karena pada tingkat kadar air tersebut sampel dapat terhindar  dari  pertumbuhan  jamur  yang cepat.

## Ekstraksi Alkaloid Daun Pulai
Ekstraksi  merupakan  pengambilan zat  aktif  yang  semula  berada  dalam  sel tanaman  dengan  menggunakan  pelarut tertentu.  Pada  penelitian  ini  digunakan metode  ekstraksi  secara  maserasi  dan ekstraksi asam basa.
Penggunaan  pelarut  etanol  95  % sebagai  pelarut  pengekstraksi  pada  proses maserasi  karena  menurut  Harbone  (1987) alkaloid  dari  tumbuhan  bersifat  basa sehingga untuk melarutkannya dapat dilakukan  dengan  alkohol  yang  bersifat asam lemah.
Hasil  rendemen  ekstraksi  maserasi daun pulai ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2  Hasil  rendemen  ekstraksi  maserasi daun pulai Berat sampel (g) Berat ekstrak (g) Rendemen (%) (b/b) 100 22,57 22,57
Hasil  ekstrak  kemudian  ditimbang sebanyak  20  gr  lalu  di  asamkan  dengan H 2 SO 4 2  %.  Penambahan  asam  bertujuan untuk  menarik  alkaloid  dan  membentuk garam  alkaloid/amina  serta  memperbesar kelarutan  alkaloid  dalam  air  (Robinson, 1995).    Adapun  reaksi  yang  terjadi  saat penambahan asam kuat yaitu :
R 3 N H X R 3 N H X
Gambar 1  Reaksi  Amina  dengan  Asam Kuat
Setelah  diasamkan  lalu  diekstraksi ditambahkan dengan dietil eter sebanyak 15 mL dan diulangi sebanyak 5x. penambahan dietil  eter  bertujuan  untuk  mengambil senyawaan  lemak  dan  lilin  yang  bersifat non polar. Hasil ekstraksi dengan dietil eter terbentuk  dua  fraksi  yaitu  fraksi  asam (diatas) dan fraksi dietil eter (dibawah).
Hasil kedua fraksi tersebut masing2dipisahkan.  Fraksi  asam  kemudian dibasakan  dengan  NH 4 OH  (p.a)  25  % hingga pH mencapai kisaran rentang 9 – 10 hingga membentuk endapan. Fungsi penambahan  basa  untuk  membebaskan alkaloid  dari  garamnya  agar terbentuk  basa alkaloid yang bebas.
Adapun  rekasi  yang  terjadi  saat penambahan basa yaitu :
R H N R R Cl NH 4 OH R N R R H 2 O NH 4 Cl
Gambar  2  Reaksi  pembasaan  asam  Amina dengan asa lemah.
Fraksi  asam  yang  telah  dibasakan hingga  pH  menjadi  9-10  lalu  diekstraksi dengan ditambahkan klorofom sebanyak 15 mL.  Penambahan  kloroform  ini  berfungsi untuk  menarik  dan  mengambil  alkaloid yang  sudah  bebas  dari  garamnya,  karena alkaloid  bebas  mudah  larut  dalam  pelarut organik  sedangkan  garam  alkaloid  tidak larut.
Hasil  penambahan  kloroform  ini terbentuk dua fraksi yaitu fraksi air (diatas) dan  fraksi  klorofom  (dibawah).  Fraksi
klorofom  diambil  dan  selanjutnya  pisahkan ekstrak dengan pelarutnya dengan menggunakan  rotary  evaporator  vacuum lalu  ekstrak  kental  yang  didapat  dialiri  gas N 2 .
Hasil  rendemen  ekstraksi  maserasi daun pulai ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil  rendemen  ekstraksi  maserasi daun pulai ditunjukkan pada
Warna ekstrak Berat ekstrak (g) Rendemen (%) (b/b) Coklat 0,37 gr 0,37 %

## Uji Antitoksoplasma
Penelitian  uji  antitoksoplasma  in vivo  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  efek dari  ekstrak  kasar  alkaloid  dari  daun  Pulai dengan berbagai variasi dosis bertingkat (25 mg/kg  BB;  50  mg/kg  BB;  75  mg/kg  BB) terhadap  hewan  uji  dengan  melihat  daya hidup hewan uji (mencit) terhadap pertumbuhan  parasit  yang  menginfeksi tubuh  hewan  uji  serta  persen  jumlah takizoit dalam intraperitonel hewan uji.
Adapun hasil pengamatan gambaran daya hidup mencit ditunjukan pada Tabel 4.
Terapi  diberikan  selama  8  hari dengan  tujuan  diharapkan  pada  hari  ke-8 sudah dapat menghambat pertumbuhan parasit secara efektif serta memperpanjang daya hidup mencit. Efektif atau tidaknya ekstrak terhadap mencit yang terinfeksi parasit Toxoplasma gondii dilihat dari  ketahanan  daya  hidup  mencit  jika dalam  waktu  minimal  6  -  7  hari  mencit masih dalam keadaan hidup dapat diindikasikan  bahwasannya  ekstrak  kasar alkaloid  mampu  sebagai  antitoksoplasma. Dalam  penelitian  Subekti  dkk,  (2005) menyatakan  bahwa  infeksi  dengan  dosis 1x10 3 takizoit per mencit, terjadi perpanjangan usia hidup yang sesungguhnya  yaitu  terjadi  pada  hari  ke-4 paska infeksi.
Tabel 4. Hasil  pengamatan  gambaran  daya hidup mencit Kelompok perlakuan Jumlah mencit yang hidup/ekor Hari ke- 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Kontrol  negatif + CMC-Na 1 % 6 6 5 5 4 3 1 0 0 0 0 Kontrol  positif + spiramycin 6 6 6 6 6 5 4 4 4 3 3 Perlakuan  dosis 25 mg/Kg BB 6 6 6 6 6 5 5 4 3 1 1 Perlakuan  dosis 50 mg/Kg BB 6 6 6 6 6 5 3 3 2 2 0 Perlakuan 3 dosis 75 mg/Kg BB 6 6 6 6 6 4 3 2 1 1 0
Perhitungan jumlah takizoit
intraperitoneal  dilakukan  pada  hari  ke-5 dimana hari ke -5 merupakan acuan kontrol sebagai  perhitungan  takizoit  dikarenakan pada hari ke-5 kontrol negatif mencit sudah ada  yang  mati.  Adapun  hasil  perhitungan takizoit Toxoplasma gondii yaitu ditunjukan pada Tabel 5.
Tabel 5 Hasil perhitungan takizoit Toxoplasma gondii Kelompok perlakuan Rerata jumlah takizoit Kontrol negatif + CMC-Na 1 % 957,5 x 10 3
Kontrol positif + Obat 702,5 x 10 3 Perlakuan dosis 25 mg/Kg BB alkaloid% 737,5 x 10 3 Perlakuan dosis 50 mg/Kg BB alkaloid 787,5 x 10 3 Perlakuan dosis 75 mg/Kg BB alkaloid 817,5 x 10 3
Dari data penelitian di atas membuktikan  bahwa  ekstrak  kasar  alkaloid memperpanjang  usia  mencit  hingga  hari terapi  terakhir  ke-8  serta  menghambat reduksi  pertumbuhan  takizoit  Toxoplasma gondii. Dari keseluruhan variasi konsentrasi dosis  terapi  ekstrak  kasar  alkaloid  yang diberikan  keseluruhannya  memiliki  potensi sebagai  antitoksoplasmosis  akan  tetapi kenyataannya ketika konsentrasi meningkat dari  25  mg/Kg  BB  –  75  mg/Kg  BB mengalami kenaikan jumlah takizoit
intraperitonealnya  hal  ini  dapat  dikatakan
antara dosis dengan efek terhadap perkembangan  takizoit  dapat  dikatakan tidak signifikan akan tetapi tetap berkorelasi. Ketidaksignifikan tersebut dapat  disebabkan  adanya  jumlah  parasit yang  diinjeksi  di  awal  perlakuan  memiliki selisih  yang  sangat  kecil  atau  memiliki perbedaan jumlah dengan injeksi tidak tepat 10 3 . Proses replikasi perkembangan takizoit pada setiap mencit juga memiliki perbedaan hal ini dimungkinkan pengaruh dari kondisi biologis  dan  fisiologis  dari  masing-masing mencit  yang  memiliki  imunitas  yang berbeda.

## Uji Alkaloid
Hasil uji positif alkaloid ditunjukkan dengan  terbentuknya  endapan  berwarna jingga terhadap reagen Dragendorff (kalium tetraiodobismutat) dan endapan putih terhadap reagen Mayer (kalium
tetraiodomerkurat).
Menurut Harbone
(1987)  ekstrak  yang  positif  alkaloid  akan membentuk  endapan  jingga  dengan  reagen Dragendorff dan membentuk endapan putih dengan  reagen  Mayer.  Endapan  terbentuk karena  adanya  pembentukan  senyawa kompleks  antara  ion  logam  dari  reagen dengan  senyawa  alkaloid.  Selanjutnya tujuan  penambahan    HCl  2  %  dalam  uji alkaloid adalah untuk mengekstrak alkaloid karena  alkaloid  bersifat  basa  sehingga biasanya  diekstrak  dengan  pelarut  yang mengandung asam.
Hasil  analisis  kualitatif  golongan senyawa  alkaloid  yang  terdapat  dalam ekstrak kasar alkaloid daun Pulai
ditunjukkan pada Tabel 6.
Tabel 6 Hasil analisis kualitatif golongan  senyawa  alkaloid  yang  terdapat dalam ekstrak kasar alkaloid daun Pulai Golongan Senyawa Reagen Hasil Reaksi Warna Alkaloid Dragendorf Endapan jingga Mayer Endapan putih
Prinsip  uji  alkaloid  pada  dasarnya ialah  adalah  pengendapan  alkaloid  dengan logam-logam  berat.  Pereaksi  Dragendorff
digunakan untuk mendeteksi adanya alkaloid dikarenakan pereaksi ini mengandung  bismut  yang  merupakan logam  berat  atom  tinggi  (Sirait,  2007). Alkaloid adalah senyawa yang tersusun dari atom  nitrogen  yang  PEB  (Pasangan Elektron  Bebas)  yang  dapat  digunakan untuk membnetuk ikatan kovalen koordinat dengan  ion  logam  (Mc  Murry,  2004  dalam Marliana, 2005).

## Identifikasi  Senyawa  Alkaloid  dengan KLT
Identifikasi senyawa alkaloid
dilakukan pengamatan di bawah lampu UV dengan panjang gelombang 366 nm. Dari 5 macam  eluen  yang  digunakan  eluen  etil asetat  :  metanol  :  air  (6  :  4  :  2) menunjukkan hasil pemisahan paling bagus dengan  menghasilkan  6  buah  spot  deng nilai  Rf  (0,08-0,76)  dengan  warna  yang muncul pada pengamatan panjang gelombang  366  nm  ialah  jingga,  ungu kebiruan  dan  coklat.  seperti  ditunjukkan pada Gambar 3:
Gambar 3 Hasil  KLTA  ekstrak  kasar alkaloid  dengan  eluen  etil asetat : metanol : air (6 : 4 : 2).
Dugaan tersebut didukung oleh hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Marliana (2007)  bahwa  pemisahan  senyawa  alkaloid dengan  variasi  eluen  etil  asetat  :  metanol  : air  (6  :  4  :  2)  dengan  pereaksi  penyemprot reagen  Dragendorff  menunjukkan  adanya alkaloid  jika  timbul  warna  coklat  atau jingga setelah penyemprotan dalam ekstrak. Bila  tanpa  pereaksi  kimia,  di  bawah  lampu UV  366  nm,  alkaloid  akan  berfluoresens biru, biru-hijau  atau ungu (Marliana, 2007) serta  Lusiana  (2009),  dan  Aripin  (2007) yang menunjukkan adanya senyawa
alkaloid  dengan  spot  berwarna  jingga kecoklatan.

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN KESIMPULAN
1. Ekstrak  kasar  alkaloid  daun  pulai (Alstonia scholaris L.R.Br) pada semua dosis  yaitu  pada  dosis  25  mg/Kg  BB; 50 mg/Kg BB dan dosis 75 mg/Kg BB dapat  memperpanjang  daya  hidup mencit yang terinfeksi takizoit Toksoplasma  gondii  strain  RH  cukup baik dibandingkan pada kontrol negatif.
2. Ekstrak  kasar  alkaloid  daun  pulai (Alstonia  scholaris  L.R.Br)  efektif mengurangi kecepatan replikasi
takizoit  Toxoplasma  gondii  strain  RH pada  hari  ke-5  dengan  hasil  jumlah takizoit  737,5  x  10 3 pada  dosis  25 mg/Kg  BB,  787,5  x  10 3 pada  dosis  50 mg/Kg BB dan 817,5 x 10 3 pada dosis 75  mg/Kg  BB  yang  keseluruhan memberikan penghambatan yang cukup  baik dibandingkan  dengan
kontrol negatif.
3. Eluen terbaik dalam pemisahan senyawa  alkaloid  dalam  ekstrak  kasar alkaloid  yaitu etil asetat : metanol : air (6 : 4 : 2).

## SARAN
1. Perlu dilakukan identifikasi lebih lanjut untuk  mengetahui  dugaan  struktur senyawa  yang  berpotensi  sebagai antitoksoplasma  dengan  menggunakan LC-MS dan H-NMR.
2. Perlu  dilakukan  perhitungan  jumlah takizoit intraperitoneal pada hari
sebelum dan sesudah mencit
dinyatakan  mati  keseluruhan  pada kontrol negative.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Arifin,  H.;  Anggraini,  N.;  Dian,  H.  dan
Rasyid, R. 2006. Standarisasi Ekstrak Etanol  Daun  Eugina  cumini  Merr. Jurnal. Jakarta:  Jurusan  Farmasi Fakultas MIPA Universitas Andalas. Diah,  Daru  Asih.P.  2012.  Potensi  Ekstrak Umbi  dan  Daun  Ubi  Jalar  Ungu
sebagai Inhibitor α-glukosidase.
Departmen  Kimia  FMIPA  Institut Pertanian Bogor. Skripsi diterbitkan.
Ekasari,  W.,  Widyawaruyanti,  A.,    Fuad, A.,  Hafid.  2005.  Uji  Antimalaria Hasil  Fraksinasi  Ekstrak  Kloroform
Daun Cassia  siamea Pada  Mencit Terinfeksi Plasmodium berghei . Fakultas Farmasi.
Dubey  J.P    dan  Weiss  Louis  M.  2009.
Toxoplasmosis:  a  History  of  Clinical Observations. Departments of Medicine  (Division  of  Infectious Diseases)  and  Pathology  (Division  of Parasitology),  AlbertEinstein  College of Medicine, Animal Parasitic Diseases  Laboratory,  Animal  and Natural Resources Institute Agricultural  ResearchService,  United States Department of Agriculture. Harbone,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia Penentuan Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan. Penerjemah
Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang Soediro.  Bandung:  Institut  Teknologi Bogor.
Iskandar  T,  Didik  T.S,  dan  Eka  F.D.  2006. Gambaran  Splenosit,  Limpa  dan Kekebalan  pada  Mencit  Galur  Balb/c Yang  Diberi  Alantoin  dan  Dinfeksi Toxoplasma  gondii .  Bogor.  Seminar
Nasional  Teknologi  Peternakan  dan Veteriner.
Krismawati, Agnes. 2007. Pengaruh
Ekstrak  Tanaman  Ceremai,  Delima Putih, Jati Belanda, Kecombrang, dan
Kemuning  secara Invitro terhadap Proliferasi  Sel  Limfosit  Manusia. Departmen  Ilmu  Teknologi  Pangan Fakultas  Teknologi  Pertanian  Institut Pertanian Bogor . Skripsi diterbitkan
Kulsum, U. dan Gusmailina. 2003.
Tanaman  Obat  Asal  Hutan  Sebagai Komoditi  Hasil  Hutan  Bukan  Kayu (HHBK)  Potensial  (Bagian  I). Info hasil hutan. Vol.10. No.2. hal: 83-96.
Bogor: Pusat Penelitian Dan
Pengembangan Teknologi Hasil Hutan.
Kumolosasi,  E.,  Soemardji,  A,.  Ruslan,  K,. dan  Yuliani.  2004.  Efek  Teratogenik Ekstrak  Etanol  Kulit  Batang  Pule  ( Alstonia  scholaris  R.Br)  pada  Tikus Wistar. Jurnal  Matematika  dan  Sains Vol.  9  No.  2  Juni  2004.  Departemen
Farmasi FMIPA-ITB: Bandung. Kusrini, Dewi., Muhammad Titis B.M., dan Fachriyah, Enny.
2013.
Isolasi,Identifikasi  dan  Uji  Aktifitas Senyawa  Alkaloid  Daun  Binahong
( Anredera cordifolia (Tenore) Stenis).
Jurnal  Chemistry  Vol  1.  Jurusan Kimia  FSM  Universitas  Diponegoro . Semarang.
Lee,  dkk.  2012.  Alkaloids  Contents,
Cytotoxity and Anti- Toxoplasma gondii Activity  of Psidium  Guajava L. and Tinospora Crispa . Bangladesh
J Pharmacol. Vol. 7: 272-276.
Lusiana,  Helen.  2009.  Isolasi  dan  Uji  Anti Plasmodium secara In Vitro Senyawa Alkaloid  dari  Albertisia  papuana BECC.  Sekolah  Pascasarjana  Institut Pertanian  Bogor.  Bogor. Skripsi diterbitkan.
Marliana  E.  2007.  Analisis  Senyawa Metabolit  Sekunder  Dari  Batang Spatholobus  ferrugineus  ( Zoll  & Moritzi ) Benth yang Berfungsi Sebagai Antioksidan. Jurnal Penelitian MIPA , 1 (1): 23-29.
Marliana,  S.D.;  Suryanti,  V.  dan  Suyono. 2005. Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatogrfi  Lapis  Tipis  Komponen Kimia  Buah  Labu  Siam  (Sechium edule  Jacq.  Swartz.)  dalam  Ekstrak Etanol.  Surakarta:  Jurusan  Biologi FMIPA  UNS. Jurnal  Biofarmasi  3 (1): 26-31 ISSN: 1693-2242 .
Mulyati.  R,  Sunarti.  S,  Diah.  S,  dan Suhardjono.  P.  2006.    Pemanfaatan Tumbuhan  Obat  secara  Tradisional oleh  Masyarakat  Lokal  di  Pulau Wawonii,  Sulawesi  Tenggara.  Bogor. Jurnal  Biodiversitas  Vol.  7  No.  3. Pusat Penelitian Biologi, LIPI, Bogor. Ronize  Andreia  F,  Alaide  Braga  de
Oliveira,  Simone  A.G,  Jose  M,
Ricardo  T.F,  Pedro  Henrique  and
Ricardo Wgner. 2012. New
napthoquinones  and  alkaloid  with  in vitro  activity  against Toxoplasma gondii  RH  and  EGS  strains .  Journal
Experimental Parasitology. Laboratório  de  Microscopia,  Instituto de  Ciências  Agrárias,  Faculdade  de Estudos Administrativos, FEAD,

## Brazil
Savitri,  E.S.  2008. Rahasia  Tumbuhan Berkhasiat  Obat  Perspektif  Islam .
Malang: UIN Malang Press.
Sirait,  Median.  2007. Penuntun  Fitokimia dalam Farmasi. Bandung: ITB. Subekti,  Didik  T.  2005.  efek  pemberian ekstrak  etanol  buah  mengkudu  pada mencit  setelah  diinfeksi Toxoplasma gondii galur  RH.  JITV.  Volume  10. No. 4. Hal: 305-314.
Subekti,  D.  T.,  dan  Arrasyid,  N,  K.  2006.
Imunopatogenesis
Toxoplasma Gondii Berdasarkan Perbedaan Galur. Wartazoa . Vol.6. No. 3: 128-145. Supriadi.  2001. Tumbuhan Obat Indonesia. Penggunaan dan Khasiatnya. Pustaka
Populer Obor .  145 hal. Susanto,  L.  Supali,  T  dan  Gandahusada,  S. 2002. Penentuan Konsentrasi Minimal  Gen  B1  dan  Gen  P30 Toxoplasma  gondii Yang  Masih Terdeteksi Dengan Reaksi Polimerase  Jurnal  Kesehatan  Vol.  6 Bagian Parasitologi , Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Teguh,Wahju.S.  Supranowo,  dan  Akhmad Fariz  N.2008.  Pengaruh  Peningkatan Dosis  dan  Lama  Infeksi  Toxoplasma gondii  Galur  RH  terhadap  Perubahan Patologis  Jaringan  Otot  Bergaris Menct (Mus musculus) Galur Balb/C.
Jurnal Department Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas
Brawijaya .