## TEKNIK DASAR HISTOLOGI PADA IKAN GURAMI (Osphronemus gouramy)
THE BASIC HISTOLOGY TECHNIQUE OF GOURAMY FISH ( Osphronemus gourami )

## Harini Citra Pratiwi dan Abdul Manan
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Histology  is  science  that  learns  about  cell,organ,  and  body  tissues  in  a  microscopic  condition. Whereas science that learns about morbidity or patology of a tissue that’s called as histopatology. Both of normal  tissue’s  structure  and  abnormal  tissue’s  stucturecan  be  learned  by  microscopic  in  a  tissue preparation.  This  preparation  made  through  processing  of  tissue  until  the  preparation  coloured.  Then histology’s structure can be watched clearly so that make it easy to read.
Field  Work  Practice  purpose  (PKL)  this  is  to  know  the  basic  histoloy  technique  in  fish.  This Field  Work  Practice  was  held  in  Balai  Uji  Standar  Karantina  Ikan  Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan Hasil Perikanan (BUSKIPM) Jl. Harapan I No. 01A Cilangkap, East Jakarta on 14th January 2013 until 14th  February  2013.  The  method  of  this  Field  Work  Practice  is  descriptive  method  by  collecting  data through primary data and secondary data.
The  histology  technique  in  fish  are  tissue  fixation,  trimming  (tissue  selection),  tissue dehydration,  the  tissue  block  making,  tissue  cutting,  tissue  colouring,  and  tissue  observation.  From  the result  got  from  the  gourami’s  tissue,  there  are  edema  and  infestation  of  metacercaria  parasites  and myxosporidia in gill normal intestine tissue, normal liver tissue, and normal spleen tissue.
Keywords : histology techniques, tissue, gouramy fish

## Pendahuluan
Hampir  60%  ikan  merupakan  spesies vertebrata dan  mempunyai  nilai ekonomis  yang sangat  penting.  Dalam  perikanan,  kesehatan ikan penting untuk diperhatikan dan tidak selalu mendiagnosa  penyakit  ikan  hanya  dengan melihat berdasarkan tingkah laku dan perubahan fisik  saja.  Pemeriksaan  dan  pengujian  lebih lanjut  sangat  dianjurkan  hal  ini  dilakukan supaya  dapat  mendiagnosa  penyakit  ikan dengan tepat (Genten, dkk. 2009). Setya (1999) dalam Nuryadin  (2010)  menyatakan  bahwa budidaya ikan gurami tidak terlepas dari infeksi penyakit  yang  dampaknya  sangat  merugikan para pembudidaya ikan gurami.
Abnormalitas pada kinerja dari bagian- bagian  tubuh  ikan  yang  terjadi  karena  serangan penyakit  dapat  mempengaruhi  struktur  sel  atau jaringan.  Perubahan  bentuk  atau  struktur  pada bagian  tubuh  ikan  ini  secara  makroskopik  atau kasat  mata  biasanya  sulit  untuk  dilihat. Perubahan  struktur  ini  hanya  dapat  dilihat  bila jaringan  tubuh  ikan  tersebut  diamati  secara detail  dengan  menggunakan  mikroskop  atau diamati secara mikroskopik. Perubahan histologi  lebih  peka  dan  terjadi  lebih  awal.  Hal itu dapat memberikan penilaian yang lebih baik mengenai kesehatan ikan (Rahmana dkk, 2013).
Anatomi  mikro  atau  histologi  adalah ilmu yang mempelajari suatu organ atau bagian tubuh  hewan  atau  tumbuhan  secara  cermat  dan rinci.  Usaha  atau  cara  untuk  dapat  mengamati, mempelajari  dan  meneliti  jaringan-jaringan tertentu  dari  suatu  orgnisme  dapat  ditempuh dengan  jalan  penyiapan  spesimen  histologi (Gunarso 1986 dalam Perceka,2011). Pemeriksaan  ini  dilakukan  melalui pemeriksaan terhadap perubahan-perubahan abnormal pada tingkat jaringan. Pemeriksaan ini hendaknya disertai dengan pengetahuan tentang gambaran  histologi  normal  jaringan,  respon jaringan terhadap etiologi dan patologi komparatif  terhadap  hewan-hewan  kelas  tinggi. Kepentingan  pemeriksaan  histopatologi  dalam diagnosa  penyakit  infeksi  selain  diketahui kemungkinan  penyebab  infeksinya,  juga  dapat dilakukan  klasifikasi  penyakit  berdasarkan waktu dan distribusi penyakit. Dalam penentuan penyebaran infeksi dan tingkat keberlangsungan infeksi  dapat  dilihat  dari  peradangan  dan infiltrasi  sel  radang  yang  ada  (Purnomo,  dkk. 2002).
Tujuan  diadakannya  studi  ini  adalah untuk  mengetahui  teknik  dasar  histologi  pada ikan gurami.

## Materi dan Metode
Studi  ini  dilaksanakan  di    Balai  Uji Standar Karantina Ikan Pengendalian  Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan (BUSKIPM) Jakarta Timur.  Studi  ini  dilaksanakan  mulai  tanggal  14 Januari  sampai 14 Februari 2013. Metode kerja yang  digunakan  adalah  metode  deskriptif dengan  teknik  pengambilan  data  meliputi  data primer  dan  data  sekunder.  Pengambilan  data dilakukan  dengan  cara  observasi,  wawancara, partisipasi aktif dan studi pustaka.

## Hasil dan Pembahasan
Persiapan Sampel Sampel  yang  digunakan  adalah  ikan Gurami.  Ikan  gurami  yang  dijadikan  sampel akan  dilakukan  pengujian  di  laboratorium patologi  karena  mengalami  perubahan  klinis. Perubahan  klinis  yang  terjadi  berupa  warna tubuh  dan  insang  pucat.  Oleh  karena  itu,  organ ikan  gurami  diambil  dan  segera  diawetkan untuk  selanjutnya  dibawa  ke  laboratorium patologi untuk dibuat preparat histologi. Tujuan ikan  gurami  digunakan  untuk  proses  histologi adalah  untuk  dilakukan  diagnosa  lebih  lanjut dari perubahan klinis yang terjadi.
Pengerjaan Pembuatan Preparat Histologi Persiapan Alat dan Bahan Tujuan persiapan alat dan bahan untuk memudahkan langkah-langkah selanjutnya dalam pembuatan preparat histologi.
Fiksasi Jaringan
Fiksatif yang digunakan untuk pengawetan  jaringan  pada  ikan  gurami  adalah larutan  fiksatif  bouin’s.  Digunakan  fiksatif bouin’s  untuk  ikan  gurami  karena  memiliki daya  penetrasi  yang  cepat  dan  merata  tetapi dapat  terjadinya  sedikit  pengerutan.  Proses fiksasi dengan larutan bouin’s dilakukan selama 24  jam.  Menurut  Jusuf  (2009)  apabila  jaringan direndam  terlalu  lama  dapat  menyebabkan kerapuhan  pada  jaringan  sehingga  tidak mungkin  untuk  dipotong  dengan  mikrotom secara baik.
Pemilihan Jaringan ( Trimming ) Jaringan terfiksasi dipotong menggunakan pisau bedah yang tajam dan steril agar jaringan tidak mengalami kerusakan dalam proses  pengerjaan.  Setelah  dilakukan  proses trimming kemudian jaringan yang telah dipotong dimasukkan ke dalam casette . Cassete yang  berisi  jaringan  kemudian  direndam  dalam aquades selama satu menit dengan tujuan untuk menghindari terjadinya pengkerutan pada jaringan akibat terlalu lama terkena udara.
Dehidrasi Jaringan Dehidrasi  jaringan  dilakukan  dengan tujuan  untuk  mengeluarkan seluruh cairan  yang terdapat  dalam  jaringan  yang  telah  difiksasi sehingga  nantinya  dapat  diisi  dengan  parafin atau  zat  lainnya  yang  dipakai  untuk  membuat blok preparat. Hal ini perlu dilakukan karena air tidak  dapat  bercampur  dengan  cairan  parafin atau  zat  lainnya  yang  dipakai  untuk  membuat blok  preparat.  Penarikan  air  keluar  dari sel/jaringan  dilakukan  dengan  cara  merendam jaringan  dalam  bahan  kimia  yang  berfungsi sebagai  dehidrator  (penarik  air)  yang  secara progresif  konsentrasinya  meningkat,  yakni alkohol.
Pembuatan Blok Jaringan Menurut  Kurniasih  (2008)  pembuatan blok jaringan dilakukan untuk menjaga masing- masing  bagian  dari  jaringan  agar  tidak  berubah seperti  pada  kondisi  tahap  awal  pemotongan dengan  menggunakan  alat  yang  disebut tissue embeding (Gambar  9).  Dalam  proses  ini digunakan  cetakan  anti  karat  atau basemold untuk pembuatan blok paraffin yang ditunjukkan  pada  gambar  10.  Pada  proses  ini digunakan  zat  pembenam  yaitu  paraffin  cair panas dengan suhu 70ºC.
Pengirisan Jaringan Pengirisan  jaringan  adalah  proses pemotongan blok jaringan dengan menggunakan mikrotom (Gambar 11).
Mikrotom  merupakan  alat  yang  digunakan untuk memotong tipis atau irisan suatu jaringan. Sampel  jaringan  berparaffin  bergerak  maju secara  manual  menuju  pisau  sesuai  dengan ketebalan  irisan  yang  diinginkan.  Hasil  dari pengirisan  jaringan  ini  berupa  pita  tipis  yang sangat penting karena irisan-irisan tipis ini akan membantu  ketepatan  diagnosa  (Kurniasih, 2008).

## Pewarnaan Jaringan
Pewarnaan  adalah  proses  pemberian warna  pada  jaringan  yang  telah  dipotong sehingga jaringan dapat dikenali dan memudahkan dalam pengamatan jaringan dengan  mikroskop.  Pulasan  (pewarna)  yang sering digunakan secara rutin adalah pewarnaan yang  dapat  digunakan  untuk  memulas  inti  dan sitoplasma  serta  jaringan  penyambungnya  yaitu pulasan  hematoksilin-eosin  (HE).  Pada  pulasan HE  digunakan  2  macam  zat  warna  yaitu hematoksilin yang berfungsi untuk memulas inti sel dan memberikan warna biru (basofilik) serta eosin yang merupakan counterstaining
hematoksilin, digunakan untuk memulas sitoplasma  sel  dan  jaringan  penyambung  dan memberikan warna merah muda dengan nuansa yang  berbeda  (Jusuf,  2009).  Di  lokasi  PKL, hematoksilin yang digunakan adalah hematoksilin  Mayer  dan counterstaining yang digunakan  adalah  eosin.  Pewarnaan  tersebut biasanya  digunakan  pada  semua  jenis  ikan termasuk ikan gurami.
Preparat Hasil Preparat yang telah diwarnai kemudian diamati  dibawah  mikroskop.  Mikroskop  yang
digunakan adalah mikroskop binokuler.
Jaringan  yang  diamati  adalah  insang,  usus,  hati dan limpa.
Insang ikan Gurami dengan perbesaran 100x mengalami edema. Edema
(pembengkakan) adalah suatu bagian yang terisi cairan  sehingga  bagian  tersebut  membesar  dan tidak dapat menjalankan fungsinya dengan baik. Selain  itu  pada  filamen  insang  ikan  Gurami terjadi infeksi oleh Metacercaria.
Usus  merupakan  organ  yang  sering terpapar  oleh  agen-agen  mikroba  dan  organ penting  dalam  hubungannya  dengan  penyakit.
a) Insang
Gambar 1. Metacercaria (a) Degenerasi vakuola (b). Infestasi Myxosporidia pada Insang Ikan Gurami. Myxospora (c). Perbesaran 400x.
Gambar 2. Penampang insang pada ikan Gurami dengan pewarnaan H&E. Edema (a) Perbesaran 100x.
b) Usus
Gambar 3.   Penampang normal organ usus ikan Gurami dengan pewarnaan H&E. Perbesaran 100x (a) perbesaran 400x (b). Sel Goblet (SG)
Patogen dan parasit dapat masuk ke dalam usus melalui oral, khususnya melalui bahan makanan yang  tercemar.  Apabila  terjadi  infeksi,  maka limfosit  akan  menginvasi  lapisan  usus.  Dalam hal ini jaringan usus ikan gurami normal.
Hati  merupakan  kelenjar  pencernaan yang  paling  besar  dan  tersusun  dari  sel parenkim  (hepatosit)  dan  jalinan  serabut. Pembuluh  darah  arteri  hati  dan  vena  bermuara ke  dalam  hati,  sedangkan  saluran  empedu meninggalkan  hati  menuju  usus.  Dengan pengamatan  secara  histologi  saluran  empedu, pembuluh  darah  vena  dan  arteri  membentuk segitiga  kiernan (Panigoro dkk, 2007). Jaringan hati pada ikan gurami normal.
Limpa  merupakan  organ  yang  sangat penting  bagi  ikan.  Darah  dan  substansi  asing yang  melewati  pembuluh  darah  kapiler  masuk ke  rongga  limpa  melalui  kumpulan  pembuluh darah  arteri.  Substansi  ini  digumpalkan  oleh melano makrofaga (Mm) yang berada di sekitar selaput  pembuluh  darah  arteri.  Jaringan  limpa pada  ikan  Gurami  sama  dengan  jaringan  hati dan usus yaitu normal.
Hambatan Pembuatan Preparat Histologi Hambatan  dalam  proses  pembuatan preparat  histologi  antara  lain  adalah  pada  tahap
nekropsi  sampel dibutuhkan  ketelitian dan hati- hati  dalam  pengambilan  organ.  Menurut Junqueira  (2005)  organ  yang  diambil  haruslah dalam keadaan utuh dan segar. Sehingga apabila jaringan telah rusak maka tidak bisa dipakai dan dilanjutkan pada proses selanjutnya.
Pada  tahap  terakhir  proses  pembuatan preparat  histologi  yaitu  pembacaan  jaringan juga  diperlukan  ketelitian.  Hal  ini  dibutuhkan karena  pada  proses  pembacaan  preparat histologi  harus  dapat  membandingkan  bagian jaringan normal dan abnormal serta mengetahui penyebab  dari  jaringan  yang  mengalami gangguan.

## Kesimpulan
Teknik  dasar  histologi  pada  ikan gurami  antara  lain:  Fiksasi  jaringan,  Pemilihan jaringan (trimming), Dehidrasi jaringan, Pembuatan  blok  jaringan,  Pengirisan  jaringan, Pewarnaan jaringan, dan Pengamatan jaringan.

## Daftar Pustaka
Genten, F., Terwinghe, E and Danguy, A., 2009. Atlas  of  Fish  Histology.  Science
Publishers, Enfield, NH, USA. Departemen of Histology and
Biopathology of Fish Fauna Laboratory
c) Hati
Gambar 4. Penampang jaringan hati normal ikan Gurami dengan pewarnaan H&E. Perbesaran 400x
d) Limpa
Gambar  5.  Struktur  Limpa  normal  ikan  Gurami  dengan  pewarnaan  H&E  perbesaran  100x  (a) perbesaran 400x (b)
of  Functional  Morphology,  Universite Libre de Bruxelles (U.L.B), Brussel. Junqueira,  C.L  and  Carneiro,  J.  2005.  Basic Histology  text  and  atlas.  Eleventh edition. United States of America. New York. Jusuf,  A.A.  2009.  Histoteknik  Dasar.  Bagian Histologi Fakultas Kedokteran. Universitas Indonesia. Jakarta.
Kurniasih.  2008.  Histopatologi  Ikan.  Apresiasi
Balai  Uji  Standard  Karantina  Ikan. Pusat Karantina Ikan. Jakarta.
Nuryadin,  2010.  Pola  Larik  Indukan  Gurami yang resisten Terhadap Bakteri Aeromonas  hydrophila  dengan  pola larik  DNA  sampel.  UPI  :  Bandung. http://repository.upi.edu. Diakses pada:
1 Juni 2013.
Panigoro,  N.,  E.  Astuti  I.,  Bahnan,  M., Prayudha,  DC.,  Salfira  dan  Wakita,  K. 2007.  Teknik  Dasar  Histology  dan
Atlas  Dasar-dasar  Histopatologi  Ikan. Balai  Budidaya  Air  Tawar  Jambi  dan Japan International Cooperation Agenci. Jambi.
Perceka,  M.  L.  2011.  Analisis  Deskriptif Kemunduran Mutu Kulit Ikan Bandeng ( Chanos chanos ) Selama Penyimpanan Suhu Chilling Melalui  Pengamatan
Histologis.  Skripsi.  Institut  Pertanian Bogor. Bogor. 52hal. Purnomo,  R.,  Hartono,  P.,  dan  Nirasari. 2002. Pengelolaan Kesehatan Ikan Budidaya  Laut.  Balai  Budidaya  Laut
Lampung. Rahmana,  P.,  Uun,  Y  dan  Asus,  M.,  2013. Perubahan  Struktur  Mata  Dan  Otak Pada Larva Ikan Kerapu Tikus ( Cromileptes altivelis ) Yang Terinfeksi Viral Nervous Necrosis (VNN) Dengan Pemeriksaan Scanning Microscope
(SEM).  Student  Journal.  Vol.I  No.1 pp1-10. Universitas Brawijaya.