Kombinasi ekstrak jeruk nipis dan madu dalam meningkatkan daya hambat Staphylococcus aureus
The combination of lime extract and honey in increasing the inhibition of Staphylococcus aureus
Fitriana 1 , Safridha Kemala Putri 2* , Darmawati 3

## Abstract
Background: Staphylococcus aureus ( S. aureus ) is one of the bacteria that contribute to the occurrence of infectious diseases, such as mastitis, dermatitis, respiratory tract infections, and toxic shock syndrome. Therapy that can be given to patients with Staphylococcus aureus infection is antibiotics, but inappropriate antibiotics can cause resistance. Using herbal ingredients is an effort to deal with resistance due to the incompatibility of antibiotic administration. The essential herbal ingredients for therapy, namely lime extract ( Citrus aurantifolia ) and honey, have antibacterial substances such as flavonoids and essential oils. Objectives: The  study  aims  to  measure  the  combination  of  lime  extract  and  honey  in  increasing  the  inhibition  of Staphylococcus aureus bacteria.
Methods: Experimental research using a combination of lime and honey extracts, single preparation of lime juice ( Citrus aurantifolia ), and single preparation of honey with concentrations of 100%, 75%, 50%, and 25%, as well as gentamycin antibiotics as positive control and NaCl 0,85% as a negative control. The research was conducted at the Microbiology Laboratory, Department of Medical Laboratory Technology, Aceh Health Polytechnic, Ministry of Health, in May 2021. The experimental method used in this study is the diffusion method. Data were obtained by observing the study's results of increasing the inhibition of the combination of lime juice and honey against the growth of Staphylococcus aureus bacteria. Data analysis by measuring the average diameter of the antimicrobial inhibition zone against the growth of Staphylococcus aureus bacteria.
Results: The  combination  of  lime  extract  and  honey  can  form  a  more  significant  inhibition  against  the  growth  of Staphylococcus aureus compared to a single preparation of lime juice at concentrations of 100% and 75%. While at concentrations of 50% and 25%, no more significant inhibition was formed than in the single preparation. Conclusion: The combination of lime extract and honey can inhibit the growth of Staphylococcus aureus .

## Keywords
Inhibition, lime, honey, Staphylococcus aureus

## Abstrak
Latar  Belakang: Bakteri Staphylococcus  aureus  (S.  aureus) merupakan  salah  satu  bakteri  yang  berperan  terhadap terjadinya penyakit infeksi, seperti mastitis, dermatitis, infeksi saluran pernapasan, dan sindrom syok toksik. Terapi yang bisa diberikan pada penderita infeksi Staphylococcus aureus adalah antibiotik, akan tetapi antibiotik yang tidak sesuai dapat menimbulkan terjadinya resistensi.  Penggunaan bahan herbal merupakan upaya untuk penanganan resistensi akibat  ketidaksesuaian  pemberian  antibiotic.  Bahan  herbal  dasar  untuk  terapi  yaitu  ekstrak  jeruk    nipis (Citrus aurantifolia) dan madu  mempunyai  zat  antibakteri  seperti flvonoid  dan  minyak  atsiri.
Tujuan: Penelitian  bertujuan  untuk  mengukur  kombinasi  ekstrak  jeruk  nipis  dan  madu  dalam  meningkatkan  daya hambat bakteri Staphylococcus aureus.
Metode: Penelitian eksperimen dengan  menggunakan  kombinasi  ekstrak jeruk  nipis  dan madu, sediaan tunggal perasan
1 Program Studi D-III Teknologi Laboratorium Medik, Jurusan Teknologi Laboraotorium Medik, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Aceh, Indonesia. E-mail: fitrianayusuf.65@gmail.com
2 Program Studi D-III Teknologi Laboratorium Medik, Jurusan Teknologi Laboraotorium Medik, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Aceh, Indonesia. E-mail: safridhakemalaputri@gmail.com
3 Program Studi D-III Teknologi Laboratorium Medik, Jurusan Teknologi Laboraotorium Medik, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Aceh, Indonesia. E-mail: darmawati0304@gmail.com
Penulis Koresponding: Safridha Kemala Putri: Jurusan Teknologi Laboratorium Medis, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh. Jln. Tgk. Mohd. Daud Beureueh, No.168 A, Kuta Alam, Kota Banda Aceh 24415, Aceh, Indonesia. E-mail: safridhakemalaputri@gmail.com
SAGO: Gizi dan Kesehatan 2022, Vol. 4(1) 72-80
© The Author(s) 2022
DOI: http://dx.doi.org/10.30867/gikes.v4i1.1065 https://ejournal.poltekkesaceh.ac.id/index.php/
gikes
Poltekkes Kemenkes Aceh
Disetujui: 18/11/2022 Diterbitkan: 17/12/2022
Kombinasi ekstrak jeruk nipis dan madu dalam meningkatkan....
jeruk nipis (Citrus aurantifolia) dan sediaan tunggal madu dengan konsentrasi 100%, 75%, 50% dan 25% serta antibiotik gentamycin sebagai  kontrol  positif  dan  NaCl  0,85%  sebagai  kontrol  negatif.  Penelitian  telah  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi, Jurusan Teknologi Laboratorium Medis, Politeknik Kesehatan Aceh, Kemenkes pada bulan Mei 2021. Metode percobaan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode  difusi.  Data  diperoleh  dengan  cara  pengamatan  hasil penelitian peningkatan daya hambat kombinasi perasan jeruk nipis dan madu terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Analisis  data  dengan  mengukur  rata-rata  diameter  zona  hambat  antimikroba  terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus . Hasil: Kombinasi ekstrak jeruk nipis dan madu dapat membentuk daya hambat yang lebih besar terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus , dibandingkan  sediaan  tunggal  perasan  jeruk  nipis  pada konsentrasi 100% dan 75%. Sedangkan pada konsentrasi 50% dan 25% tidak terbentuk daya hambat yang lebih besar dari sediaan tunggalnya.
Kesimpulan: Kombinasi  ekstrak  jeruk  nipis  dan  madu  dapat  menghambat  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus aureus.

## Kata Kunci
Daya hambat, jeruk nipis, madu, Stapyhlococcus aureus

## Pendahuluan
bat  tradisional  atau  yang  biasa  disebut dengan  obat  herbal  adalah  bahan  atau ramuan  yang  berasal  dari  tumbuhan, hewan,  ataupun  campuran  dari  bahan-bahan tersebut (Sumarya et al., 2020). Bahan-bahan yang digunakan sebagai obat herbal adalah bahan-bahan yang  dapat  ditemukan  di  alam,  bukan  buatan manusia  sehingga  relatif  lebih  mudah  diperoleh (Sumarni  et  al.,  2022).      Sedangkan      teknik pengolahannya   juga   umumnya   lebih   sederhana, misalnya  ditumbuk,  direbus,  diperas  sarinya,  atau dikonsumsi    secara    langsung.  Madu    merupakan salah  satu  obat  tradisional  yang  telah  digunakan sejak  zaman dahulu (Ninla et al., 2014). Obat herbal dari tumbuhan misalnya dapat dibuat dari berbagai macam  bagian  tumbuhan  seperti  daun,  batang, akar, bunga dan buahnya seperti jeruk nipis (Citrus aurantifolia) (Yusro et al., 2019) . Jeruk  nipis (Citrus  aurantifolia) merupakan salah satu tumbuhan yang bisa digunakan sebagai obat.  Bagian  utama  yang  digunakan  adalah buahnya. Selain itu daun, bunga, dan akar juga bisa digunakan sebagai  obat. Jeruk  nipis  mengandung minyak esensial dari golongan monoterpene yaitu limonene  dan  linalool.  Selain  itu  jeruk  nipis juga mengandung  minyak  atsiri,  senyawa  flavonoids, seperti  flavanones,  limonoids  dan  hesperidin (Prastiwi & Ferdiansyah, 2017). Efek farmakologis yang  dimiliki  oleh  jeruk  nipis  diantaranya antidemam, mengurangi batuk, anti-inflamasi dan antibakteri  (Hidayat  &  Napitupulu,  2015). Penelitian  yang  dilakukan  (Razak  et  al.,  2013) menyatakan  bahwa  perasan  jeruk  nipis  dapat memiliki  daya  hambat  terhadap  pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Madu  mengandung  antibiotik  yang  aktif melawan  serangan  patogen  penyebab  penyakit. Beberapa  penyakit  infeksi  yang  dapat  disembuhkan dengan  mengkonsumsi  madu  secara  teratur  adalah batuk,  demam,  gangguan  hati,  paru-paru,  penyakit yang dapat mengganggu fungsi mata, saraf dan telinga (Sakri, 2012).
Madu adalah cairan kental yang dihasilkan oleh lebah  madu  (genus: Apis ),  yang  berasal  dari  nektar bunga.  Rasa  manis  madu  lebih  manis  dibandingkan dengan  gula  (sakarosa)  yang  disebabkan  adanya kandungan  fruktosa  (gula  buah),  glukosa,  dan sakarosa.  Selain  adanya  kandungan  utama,  dalam madu  terdapat  pula  senyawa-  senyawa  lain  yang dapat  dikatakan  menjadi  sumber  munculnya kemampuan  antibakteri    madu,    senyawa    tersebut seperti  asam  organik,  minyak  atsiri,  dan flavonoid (Ninla et al., 2014). Madu memiliki aktivitas senyawa antibakteri  terutama  pada  bakteri  gram  (+),  yakni bakteri Bacillus  cereus dan Staphylococcus  aureus (Astrini et al., 2014).
Staphylococcus aureus adalah kuman berbentuk  bulat,  bergerombol,  bila  bergerombol dalam  susunan      yang  tidak  teratur  mungkin  sisinya agak  rata  karena  tertekan.  Diameter  kuman  antara 0,8-1,0  mikron.  Pada  sediaan  langsung  yang  berasal dari  nanah  dapat  terlihat  sendiri,  berpasangan, menggerombol  dan  bahkan  dapat  tersusun  seperti rantai  pendek.  Kuman  ini  tidak  bergerak,  tidak berspora  dan  positif  gram.    Kuman    ini    sering ditemukan  sebagai  kuman  flora  normal  pada  kulit dan selaput lendir pada manusia (Brook et al., 2015).
Staphylococcus  aureus adalah  patogen  utama pada  manusia.  Hampir  setiap  orang  pernah mengalami berbagai infeksi oleh kuman Staphylococcus  aureus selama  hidupnya,  dari keracunan makanan yang berat atau infeksi kulit yang
O
kecil,  sampai  infeksi  yang  tidak  bisa  disembuhkan (Brook  et  al.,  2015).  Infeksi  oleh  jenis  kuman  ini menyebabkan  timbulnya  penyakit  dengan  tanda- tanda  yang  khas,  yaitu  peradangan,  nekrosis  dan pembentukan abses   (Syahrurachman et al., 2010).

## Metode
Metode  penelitian  yang  dilakukan  adalah  metode eksperimen  dengan  pendekatan  deskriptif.  Dalam penelitian  ini  ingin  melihat  peningkatan  daya hambat  kombinasi  perasan  jeruk  nipis (Citrus aurantifolia) dan  madu  dari  sediaan  tunggal  jeruk nipis, sediaan tunggal madu terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dengan konsentrasi 100%, 75%,50% dan 25%.
Pemeriksaan  sampel  dengan  metode  difusi dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Prodi Teknologi  Laboratorium  Medik  Poltekkes  Kemenkes Aceh pada bulan Mei 2021. Populasi  pada  penelitian ini  adalah  jeruk  nipis (Citrus  aurantifolia) dan madu. Adapun sampel yang diteliti yaitu kombinasi perasan jeruk nipis dan madu dengan konsentrasi 100%, 75%, 50% dan 25%.
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  dalam penelitian adalah Alat yang digunakan adalah oven, inkubator,  autoklaf, erlenmaye r, corong, pemanas, pipet  ukur,  gelas  ukur,    mikroskop,  tangkai pengaduk, petridish ,  tabung  reaksi,  rak  tabung, beaker  glass ,  gelas  ukur,  ose  bulat,  mikro  pipet, penggaris,    dan  timbangan.  kapas    lidi    steril, antibiotik    gentamicin,  tali  jagung,  saringan,  dan kertas saring.
Media  yang  digunakan  yaitu Media  MHA ( Mueller  hinton  agar ),BA  ( Blood agar ), BHIB ( Brain Heart Infusion Broth ), NA (Nutrient Agar). Reagensia yang digunakan adalah BSS (Barium sulfat standar),
NaCl (Natrium clorida) 0,85%, aquadest, ammonium kristal violet, alkohol 96%, lugol, karbol fukhsin, H 2 O 2 5%, PADAM H 1%.

## Pembuatan Perasan Jeruk Nipis (Hidana, 2015)
1. Ditimbang  sebanyak  500  gram  jeruk  nipis selanjutnya  dicuci  hingga  bersih  lalu  kering anginkan. Kemudian  buah  jeruk  nipis  diperas sambil disaring dengan kain kasa steril, diambil air perasan sebanyak 4 ml.
2. Diambil  1  ml  perasan  buah  jeruk  nipis  yang sudah  diperas  maka  diperoleh  konsentrasi 100%, lalu dimasukkan dalam tabung reaksi I.
3. Pada tabung  reaksi  II  diisi  0,75  ml  perasan
jeruk  nipis,  lalu  ditambah  0,25  ml NaCl 0,85% (konsentrasi 75%).
4. Pada tabung  reaksi  III  diisi  0,50  ml  perasan jeruk  nipis,  lalu  ditambah  0,50  ml NaCl 0,85% (konsentrasi 50%).
5. Pada tabung  reaksi  IV  diisi  0,25  ml  perasan jeruk  nipis,  lalu  ditambah  0,75  ml NaCl 0,85% (konsentrasi 25%).
Pembuatan Larutan Madu (Dewi et al., 2017).
1. Dipipet  1 ml  madu maka diperoleh  konsentrasi 100%,  lalu  dimasukkan dalam tabung reaksi I.
2. Pada tabung  reaksi  II  diisi  0,75  ml  madu,  lalu ditambah  0,25  ml  NaCl  0,85% (konsentrasi 75%).
3. Pada  tabung  reaksi  III  diisi  0,50  ml  madu,  lalu ditambah 0,50 ml NaCl 0,85% (konsentrasi 50%).
4. Pada  tabung  reaksi  IV  diisi  0,25  ml  madu,  lalu ditambah 0,75 ml NaCl 0,85% (konsentrasi 25%) .

## Pembuatan  Kombinasi  Perasan  Jeruk  Nipis  dan Madu
1. Diambil  masing-masing  4   ml  perasan  jeruk nipis    dan    4    ml    madu,    lalu  dimasukkan  ke dalam beaker glass , lalu dicampur.
2. Dipipet 1 ml  campuran perasan jeruk nipis dan madu  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  I sehingga diperoleh konsentrasi 100%.
3. Pada  tabung  II  masing-masing  diisi  0,75  ml campuran  perasan  jeruk  nipis  dan  madu,  lalu ditambah 0,25 ml NaCl 0,85% (konsentrasi 75%).
4. Pada  tabung  III  masing-masing  diisi  0,50  ml campuran  perasan  jeruk  nipis  dan  madu,  lalu ditambah 0,50 ml NaCl 0,85% (konsentrasi 50%).
5. Pada  tabung  IV  masing-masing  diisi  0,25  ml campuran perasan jeruk nipis dan madu, lalu di tambah 0,25 ml NaCl 0,85% (konsentrasi 25%).

## Perlakuan Kuman
Disiapkan  media enrichment yaitu  BHIB,  diambil kuman    Staphylococcus  aureus  dari  stam  kuman menggunakan ose bulat steril. Selanjutnya ditanam ke  media  tersebut  lalu  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C selama 6-8 jam.
Kemudian kuman  yang  tumbuh  pada  media BHIB    dilanjutkan    dengan    penanaman  kembali  ke media  isolasi  BA  (Blood  agar)  dengan  menggunakan ose bulat steril oles secara zikzak, dan diinkubasi pada suhu  37 0 C  selama  1x24  jam.  Setelah  diinkubasi, dilakukan penilaian koloni, DP gram (Direct Perparat), tes katalase, tes oksidase, dan koagulase.
Kombinasi ekstrak jeruk nipis dan madu dalam meningkatkan....
Bakteri  pada  BA  (Blood  agar)  ditanam kembali  pada  media  NA  (Nutrient  agar)  untuk melihat pigmen berwarna kuning emas, dengan ose bulat steril, Lalu  bakteri   dioleskan   secara    zikzak dan  diinkubasi  pada  safety cabinet  selama 1x24 jam.

## Uji Sensitivitas Metode Difusi
Dipipet  5  ml  NaCl  0,85%  ke  dalam  tabung  reaksi yang bersih dan steril. Lalu dibuat suspensi kuman, dengan  cara  kuman  diambil  dari  media  BA  (Blood agar) dan diencerkan ke dalam NaCl 0,85% tersebut dengan  menggunakan  kapas  lidi  steril.  Lalu kekeruhan  larutan  tesebut  dibandingkan  dengan larutan  BSS  (Barium  sulfatstandar)  dengan  tingkat kekeruhannya harus sama.
Selanjutnya  disediakan    III    buah    petridish yang    diberi    label    I,    II    dan    III  yang    telah dimasukkan media MHA (Muller hinton agar). Lalu dengan  menggunakan  kapas  lidi  steril,  suspensi kuman dioleskan secara merata pada semua media tersebut.  Sterilkan  kembali  kapas  lidi  tersebut dengan api bunsen. Kemudian dengan menggunakan    pipet    tetes    steril    buat    empat lubang  pada media I, II dan III dengan diameter 5 mm dan kedalaman ± 5 mm.
Pada petridish  I,  di lubang  I dimasukkan 100  µl    perasan    jeruk    nipis    dengan  konsentrasi 100%.  Lubang  II  dimasukkan  100  µl  perasan  jeruk nipis  dengan  konsentrasi  75%.  Pada  lubang  III dimasukkan  100  µl  perasan  jeruk  nipis  dengan konsentrasi 50%. Pada lubang IV dimasukkan 100 µl perasan  jeruk  nipis  dengan  konsentrasi  25%. Selanjutnya  pada  petridish    II,    di    lubang    I dimasukkan    100    µl    madu    dengan    konsentrasi 100%.  Pada  lubang  II  dimasukkan  100  µl  madu dengan  konsentrasi  75%.  Pada  lubang  III dimasukkan 100µ l madu dengan konsentrasi 50%. Pada  lubang  IV  dimasukkan  100  µl  madu  dengan konsentrasi 25%.
Petridish III, pada lubang I dimasukkan 100 µl kombinasi  perasan  jeruk  nipis  dan  madu  dengan konsentrasi 100% Pada lubang II dimasukkan 100 µl kombinasi  perasan  jeruk  nipis  dan  madu  dengan konsentrasi 75%. Pada lubang III dimasukkan 100 µl kombinasi  perasan  jeruk  nipis  dan  madu  dengan konsentrasi 50%. Pada lubang IV dimasukkan 100 µl kombinasi  perasan  jeruk  nipis  dan  madu  dengan konsentrasi  25%.  Inkubasi  pada  inkubator  dengan suhu  37 0 C  selama  1x24  jam.    Selanjutnya  diukur zona hambat yang terbentuk dengan menggunakan penggaris. Dilakukan penggulangan 3 kali.

## Pembuatan Kontrol MHA
Dimasukkan media MHA ke dalam petridish sebanyak 20  ml  tanpa  diolesi  suspensi  kuman.  Inkubasi  pada inkubator pada suhu 37 0 C. selama 1x24 jam. Jika media tidak tumbuh koloni, maka media dinyatakan steril.

## Pembuatan Kontrol Positif
Dimasukkan  media  MHA (Muller  Hinton  Agar) ke dalam petridish sebanyak  20  ml  oleskan  suspensi kuman  dengan  mengunakan  kapas  lidi  steril  pada media tersebut.
Kemudian  buat  satu  lubang  pada  bagian tengah  media  dengan  diameter  5  mm  dan kedalaman  ±  5  mm.  Lalu  masukkan  antibiotik Gentamicin  sebanyak  100  µl  ke  dalam  lubang tersebut.  Diinkubasi  pada  inkubator  dengan  suhu 37 0 C  selama  1x24  jam.  Hitung  zona  hambat  yang terbentuk dengan menggunakan penggaris.

## Pembuatan Kontrol Negatif
Dimasukkan  media  MHA (Muller  Hinton  Agar) ke dalam petridish sebanyak  20  ml  oleskan  suspensi kuman  dengan  mengunakan  kapas  lidi  steril  pada media tersebut.
Kemudian  buat  satu  lubang  pada  bagian tengah  media  dengan  diameter  5  mm  dan kedalaman  ±  5  mm.  Kemudian  dimasukkan  NaCl 0,85%  sebanyak  100  µl  ke  dalam  lubang  tersebut. Diinkubasi  pada  inkubator  dengan  suhu  37 0 C selama  1x24  jam.  Hitung  zona  hambat  yang terbentuk dengan menggunakan penggaris.

## Pengumpulan Data dan Analisa Data
Data  diperoleh  dengan  cara  pengamatan hasil  penelitian  peningkatan  daya  hambat kombinasi  perasan  jeruk  nipisdan  madu  pada konsentrasi  100%,  75%,  50%  dan  25%  terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus . Selanjutnya  dianalisa  dengan  mengukur  rata-rata diameter  zona  hambat  antimikroba  terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus .

## Hasil
Setelah dilakukan penelitian terhadap uji peningkatan daya hambat kombinasi perasan  jeruk nipis (Citrus    aurantifolia) dan    madu    terhadap Staphylococcus aureus dengan berbagai konsentrasi, maka hasilnya dapat dilihat pada Tabel 1, 2 dan 3 dan Gambar 1,2,3. Sedangkan Gambar 4, merupakan kelompok kontrol penelitian.
Tabel 1. Nilai rata-rata daya hambat ekstrak jeruk nipis terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus No.  Kosentrasi Daya Hambat (mm) Rata-rata Daya Hambat (mm) Keterangan P1 P2 P3 1 100% 18 17 19 18,0 Sensitif 2 75% 17 16 16 16,3 Sensitif 3 50% 14 15 14 14,3 Intermediate 4 25% 13 14 13 13,3 Intermediate 5 Gentamycin > 15 > 15 > 15 32,0 Sensitif 6 NaCl 0,85% 0 0 0 0,0 Resisten Keterangan: Gentamicin = Kontrol positif (+); NaCl 0,85% = Kontrol negatif (-); P1, P2, P3 = Kelompok Percobaan 1,2,3
P1                                                        P2                                                    P3 Gambar 1 . Daya hambat perasan jeruk nipis terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus
Tabel 2. Nilai rata-rata daya hambat madu terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus No.  Kosentrasi Daya Hambat (mm) Rata-rata Daya Hambat (mm) Keterangan P1 P2 P3 1 100% 13 14 12 13 mm Intermediate 2 75% 12 12 10 11,3 mm Intermediate 3 50% 0 0 0 0 mm Resisten 4 25% 0 0 0 0 mm Resisten 5 Gentamycin ≥ 15 ≥ 15 ≥ 15 32mm Sensitif 6 NaCl 0,85% 0 0 0 0 mm Resisten Keterangan: Gentamicin = Kontrol positif (+); NaCl 0,85% = Kontrol negatif (-); P1, P2, P3 = Kelompok Percobaan 1,2,3
P1                                                      P2                                                      P3 Gambar 2 . Daya hambat madu terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus
Hasil  penelitian  (Tabel  1)  menunjukkan  hasil bahwa  perasan  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia ) membentuk  daya hambat terhadap Staphylococcus aureus .  Pada  konsentrasi    100%  membentuk    daya
Kombinasi ekstrak jeruk nipis dan madu dalam meningkatkan....
hambat  sebesar 18  mm,  konsentrasi  75% sebesar 16,3  mm,  konsentrasi  50%  sebesar  14,3  mm, konsentrasi 25% sebesar 13,3 mm sedangkan kontrol positif gentamycin membentuk daya hambat 32 mm dan kontrol negatif NaCl 0,85% yaitu 0.
Selanjutnya,  hasil  penelitian  (Tabel  2) menunjukkan  hasil  bahwa  madu  membentuk daya  hambat  terhadap Staphylococcus  aureus
tetapi  hanya  pada  konsentrasi  100%  dan  75%. Pada  kosnsentrasi  100%  membentuk  daya hambat sebesar 13 mm, konsentrasi 75% sebesar 11,3  mm,  konsentrasi  50%  dan  25%  tidak membentuk  daya  hambat  atau  0,  sedangkan kontrol  positif  gentamycin  membentuk  daya hambat  32  mm  dan  kontrol  negatif  NaCl  0,85% yaitu 0.
Tabel  3. Nilai rata-rata daya hambat kombinasi ekstrak jeruk nipis dan madu terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus No.  Kosentrasi Daya Hambat (mm) Rata-rata Daya Hambat (mm) Keterangan P1 P2 P3 1 100% 19 18 18 18,3 mm Sensitif 2 75% 16 18 16 16,6 mm Sensitif 3 50% 15 12 14 13,6 mm Intermediate 4 25% 14 10 11 11,6 mm Resisten 5 Gentamycin ≥ 15 ≥ 15 ≥ 15 32 mm Sensitif 6 NaCl 0,85% 0 0 0 0 mm Resisten Keterangan: Gentamicin = Kontrol positif (+); NaCl 0,85% = Kontrol negatif (-); P1, P2, P3 = Kelompok Percobaan 1,2,3
P1                                                    P2                                                             P3 Gambar 3 .  Daya  hambat  kombinasi  ekstrak  jeruk  nipis  dan  madu  terhadap  pertumbuhan

## Staphylococcus aureus
Kombinasi  ekstrak  jeruk  nipis  dan  madu, berdasarkan hasil penelitian (Tabel 3) menunjukkan hasil,  bahwa kombinasi perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia) dan  madu  membentuk  daya  hambat terhadap Staphylococcus aureus. Pada konsentrasi 100% membentuk daya hambat sebesar 18,3 mm, konsentrasi 75% sebesar 16,6 mm, konsentrasi 50% sebesar  13,6  mm,  konsentrasi  25%  sebesar  11,6 mm,  sedangkan  kontrol  positif  gentamycin membentuk  daya  hambat  32  mm  dan  kontrol negatif NaCl 0,85% yaitu 0.
Hasil  tersebut  juga  mengidentifikasi  bahwa, kombinasi ekstrak jeruk dan madu mempunyai daya hambat  bakteri Staphylococcus  aureus pada kosentrasi 100% dan 75% sangat kuat (sensitif). Juga sesuai pada kelompok kontrol positif ( Gentamycin ).

## Pembahasan
Menurut  Fitriani  et  al.,  (2016),  air  perasan  jeruk nipis mempunyai senyawa aktif yaitu flavonoid dan minyak  atsiri  yang  bersifat  sebagai  antibakteri. Mekanisme  flavonoid  sebagai  antibakteri  adalah meracuni  protoplasma,  merusak  dan  menembus dinding  serta  mengendapkan  protein  sel  bakteri, menginaktifkan enzim esensial di dalam sel bakteri. Akibat mekanisme flavonoid terjadi denaturasi dan kerusakan sel bakteri.
Madu  merupakan  herbal  alami  yang mempunyai  kandungan  senyawa  aktif  yang  sama dengan  air  perasan  jeruk  nipis  yaitu  flavonoid (Kusumawati et al., 2018). Pada penelitian ini bakteri yang digunakan adalah Staphylococcus aureus.
Juli – Desember 2022
Staphylococcus aureus adalah kuman berbentuk  bulat,  bergerombol.  Kuman  ini  tidak bergerak, tidak  berspora dan  positif gram. Kuman ini  sering  ditemukan  sebagai  kuman  flora  normal pada kulit dan selaput lendir pada manusia (Brook et al., 2015).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian  perasan  jeruk  nipis ( Citrus aurantifolia ) terhadap Staphylococcus aureus dapat membentuk daya hambat pada setiap masing-masing konsentrasi  100%,  75%,  50%,  dan  25%.
Pemberian  madu  terhadap Staphylococcus aureus dengan  berbagai  konsentrasi  dapat membentuk daya hambat, akan tetapi daya hambat yang terbentuk  hanya pada konsentrasi 100%  dan 75%    sedangkan  pada  konsentrasi  50%  dan  25% tidak  terbentuk  daya  hambat,  hal  ini  disebabkan madu yang mengalami proses pengenceran dengan konsentrasi kecil dari 50% dapat menurunkan kadar glukosa oksidase.  Enzim  glukosa  oksidase  dapat menurunkan  kadar  dari  hidrogen perokside yang memiliki antibakteri (Wineri et al., 2014).
Pemberian  kombinasi  perasan  jeruk  nipis (Citrus aurantifolia) dan madu terhadap Staphylococcus  aureus  dapat  membentuk  daya hambat  yang  lebih  besar  dari  sediaan  tunggalnya pada setiap masing-masing konsentrasi 100%, 75%, 50%, dan 25%. Kombinasi perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia) dan  madu  membentuk  daya  hambat yang lebih besar dari pada sediaan tunggal perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia) terhadap Staphylococcus aureus pada konsentrasi 100% dan 75%  sedangkan  pada  konsentrasi  50%  dan  25% tidak terbentuk daya hambat yang lebih besar dari sedian tunggalnya.
Menurut  Fitriani  et  al.  (2016),  Sinergisme adalah interaksi antara dua atau lebih bahan yang menghasilkan  suatu  peningkatan  kuantitatif  dari efeknya  dibandingkan  bila  diberikan  bahan  secara sendiri.  Sinergisme  antar  bahan  dalam  obatan herbal  terjadi  ketika  dua  atau  lebih  bahan  saling meningkatkan  atau  menurunkan  efek  dalam aktivitas.  Efek  dari  interaksi  dapat  meningkatkan atau  menurunkan  hasil  yang  ada  bervariasi tergantung faktor yang ada, hal yang dapat diduga dapat  menyebabkan  efek  sinergisme  adalah  dosis yang digunakan.
Hal ini juga menunjukkan adanya senyawa aktif antibakteri yang terdapat dalam perasan jeruk nipis,  seperti  minyak  atsiri  diantarnya  terdapat fenol  yang  mempunyai  sifat  bakterisidal  yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus. Selain itu, kandungan asam sitrat  jeruk  nipis  juga  menjadi  salah  satu  faktor penghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus (Adrah, 2021).
Kemampuan madu
menghambat pertumbuhan  kuman  dikarenakan  terdapatnya enzim glukosa oksidase yang ada pada madu. Enzim glukosa oksidase ini sanggup menambah kemampuan  antibakteri  dengan  teknik  merubah glukosa  yang  terdapat  pada  madu  jadi  asam glikonat  serta  hydrogen  peroksida.  Kemampuan hydrogen  peroksida  mendenaturasi  protein  serta membatasi  sintesis  atau  fungsi  asam  nukleat  yang terdapat pada kuman Staphylococcus aureus hingga perkembangan  kuman  tersebut  bisa  terhambat (Aryanto, 2021).
Rata-rata  kadar  gula  dari  madu  yang  tinggi sanggup menghalangi perkembangan serta pertumbuhan  dari  kuman  disebabkan    tekanan osmosis (pergerakan air dari konsentrasi rendah ke konsentrasi  tinggi)  Interaksi  yang  kuat  antara molekul  gula  dengan  molekul  air  meninggalkan molekul air yang sangat sedikit yang tersedia buat kuman  Pada  saat  air  menyusut  hingga  tingkat minimum  untuk  perkembangan  sel  kuman  tetap hidup.  Namun  bila  air  menyusut  secara  ekstrem kuman  bakal  kehabisan  kemampuan  hidupnya (Zulhawa et al., 2014).

## Kesimpulan
Kombinasi perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia ) dan madu membentuk daya hambat yang  lebih  besar  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus aureus dari  pada sediaan  tunggal perasan  jeruk  nipis   pada konsentrasi 100% dan 75%  sedangkan  pada  konsentrasi  50%  dan  25% tidak  terbentuk  daya  hambat  yang  lebih  besar dari sediaan tunggalnya.
Dengan  demikian,  kombinasi      perasan jeruk  nipis  dan  madu      dapat  menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus .

## Deklarasi Konflik Kepentingan
Penulis  telah  menyatakan  bahwa  pada  artikel  ini tidak  ada  maupun  terdapat  potensi  konflik kepentingan  baik  dari  penulis  maupun  instansi sehubungan  dengan  penelitian  yang  telah dilakukan,  baik  berdasarkan  kepengarangan, maupun publikasi.
Kombinasi ekstrak jeruk nipis dan madu dalam meningkatkan....

## Ucapan Terima Kasih
Terima  kasih  disampaikan  kepada  Direktur Politeknik  Kesehatan  Kemenkes  Aceh,  Ketua Jurusan Teknologi Laboratorium Medik, Dosen dan Staf  prodi  Teknologi  Laboratorium  Medik  dan Koordinator  Laboratorium  Mikrobiologi  yang  juga telah memberikan izin dalam melakukan penelitian ini.

## Daftar Rujukan
Aryanto,  M.  (2021).  Daya  hambat  perasan  jeruk nipis (Citrus aurantifolia) terhadap pertumbuhan  bakteri  Enterococcus  faecalis.
Jurnal Ilmiah Dan Teknologi Kedokteran Gigi , 17 (1),
16 – 19. https://doi.org/10.32509/jitekgi.v17i1.1071
Astrini, D., Wibowo, M. S., & Nugrahani, I. (2014).
Aktivitas  antibakteri  madu  pahit  terhadap bakteri  gram  negatif  dan  gram  positif  serta potensinya dibandingkan terhadap antibiotik kloramfenikol, oksitetrasiklin dan gentamisin. Acta Pharmaceutica Indonesia , 39 (3 & 4), 75 – 83.
Brook, G. F., Carroll, K. C., Butel, J. S., Morse, S. A.,
&  Mietzner,  T.  A.  (2015).  Mikrobiologi Kedokteran: Jawetz, Melnick, & Adelberg. In 27th ed .
Dewi, M. A., Kartasasmita, R. E., & Wibowo, M. S.
(2017).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Beberapa Madu  Asli  Lebah  Asal  Indonesia  Terhadap Staphylococcus Aureus Dan Escherichia Coli. Kartika  Jurnal  Ilmiah  Farmasi , 5 (1),  27 – 30. https://doi.org/10.26874/kjif.v5i1.86
Fitriani, A., Dewi, N., & Budiarti,  L.  Y. (2016).  Efek antibakteri sediaan tunggal dan kombinasi air perasan  jeruk  nipis  dan  madu  terhadap Streptococcus  mutans. Jurnal  Kedokteran Gigii , I (2), 146 – 150.
Hidana, R. (2015). Daya hambat ekstrak daun sirsak terhadap  pertumbuhan  bakteri  Escherichia coli. Jurnal  Kesehatan  Bakti  Tunas  Husada: Jurnal Ilmu-Ilmu Keperawatan, Analis Kesehatan  Dan  Farmasi , 11 (1),  156.
https://doi.org/10.36465/jkbth.v11i1.55
Hidayat,  S.,  &  Napitupulu,  R.  M.  (2015).  Kitab Tumbuhan Obat. In Kitab Tumbuhan Obat . Kusumawati, N., Estikomah, S. A., & Amal, S. (2018).
Uji Efektivitas Air Perasan Jeruk Nipis (Citrus Aurantifolia)  Dan  Madu  Randu  Dalam
Menghambat Pertumbuhan Bakteri
Propionibacterium acnes. Pharmasipha:
Pharmaceutical Journal of Islamic Pharmacy , 2 (2), 17 – 22.
Ninla,  E.  F.,  Anggaran,  W.,  Mayssara  A.  Abo Hassanin  Supervised,  A.,  Wiyono,  B.  .,  Ninla Elmawati Falabiba, Zhang, Y. J., Li, Y., & Chen, X. (2014). Khasiat dan manfaat madu herbal. Paper Knowledge . Toward a Media History of Documents , 5 (2).
Paath, S. L., Aryanto, M., & Putri, D. C. K. A. (2021).
Daya  hambat  perasan  jeruk  nipis  (Citrus aurantifolia)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Enterococcus  faecalis. Jurnal  Ilmiah  Dan Teknologi Kedokteran Gigi , 17 (1), 16 – 19. Prastiwi, S. S., & Ferdiansyah, F. (2017). Kandungan dan  aktivitas  farmakologi  jeruk  nipis  (Citrus aurantifolia s.). Dalam Jurnal Farmaka , 15 (2),
1 – 7.
Razak, A., Djamal, A., & Revilla, G. (2013). Uji Daya Hambat Air Perasan Buah Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia  s.)  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri  Staphylococcus  Aureus  Secara  In Vitro. Jurnal Kesehatan Andalas , 2 (1), 05 – 08. https://doi.org/10.25077/jka.v2i1.54 Sakri,  F.  (2012).  Madu  dan  Khasiatnya:  Suplemen Sehat  tanpa  Efek  Samping.  In Diandra Pustaka Indonesia . Sumarni,  W.,  Sudarmin,  S.,  Sumarti,  S.  S.,  & Kadarwati,  S.  (2022).  Indigenous  knowledge of Indonesian traditional medicines in science teaching  and  learning  using  a  science – technology – engineering – mathematics (STEM) approach. Cultural Studies of Science Education , 17 (2), 467 – 510.
Sumarya, I. M., Suarda, I. W., Sudaryati, N. L. G., & Sitepu,  I.  (2020).  Benefits  of  biopharmaca products towards healthy Indonesia. Journal of Physics: Conference Series , 1469 (1), 12133. Syahrurachman,  A.,  Triyatni,  R.  M.,  Chatim,  A., Asmono, N., Soebandrio, W. K. A., & Pratiwi, S. (2010). Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran Edisi  Revisi. Buku  STAF  Pengajar  Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia .
Wineri,  E.,  Rasyid,  R.,  &  Alioes,  Y.  (2014).
Perbandingan  daya  hambat  madu  alami dengan  madu  kemasan  secara  in  vitro terhadap  Streptococcus  beta  hemoliticus Group  A  sebagai  penyebab  faringitis. Jurnal
Kesehatan Andalas , 3 (3), 1 – 5.
https://doi.org/10.25077/jka.v3i3.140
Yusro,  F.,  Mariani,  Y.,  &  Wardenaar,  E.  (2019).
Pemanfaatan tumbuhan obat untuk
Juli – Desember 2022
mengatasi gangguan sistem pencernaan oleh suku  Dayak  Iban:  Studi  Kasus  di  Kabupaten Kapuas Hulu Kalimantan Barat. Jurnal Borneo Akcaya , 5 (1), 58 – 72. https://doi.org/10.51266/borneoakcaya.v5i1 .120 Zulhawa, D. J., Maryani, & Dewi, N. H. (2014). Daya hambat madu Sumbawa terhadap pertumbuhan  Staphylococcus  aureus  isolat infeksi  luka  operasi. Journal  of  Natural Product Biochemistry , 12 (1), 40 – 44.