Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185

## KANDUNGAN PIPERIN DALAM EKSTRAK BUAH LADA HITAM DAN BUAH LADA PUTIH (Piper nigrum L.) YANG DIEKSTRAKSI DENGAN VARIASI KONSENTRASI ETANOL MENGGUNAKAN METODE KLT-DENSITOMETRI

## THE CONTENT OF PIPERINE IN BLACK AND WHITE
PEPPER FRUITS ( Piper nigrum L.) EXTRACTED

## WITH VARIATION OF ETHANOL CONCENTRATIONS USING TLC-DENSITOMETRY METHOD
Ni Putu Ermi Hikmawanti, Hariyanti, Cahya Aulia, Vesya Putri Viransa
Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi dan Sains, Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka, Jakarta Email : ermy0907@gmail.com

## ABSTRAK
Kualitas  ekstrak  buah  lada  ( Piper  nigrum L.)  dipengaruhi  oleh  komponen  dan kadar  senyawa  didalamnya.  Piperin  merupakan  senyawa  alkaloid  utama  dalam buah  lada.    Banyaknya  piperin  yang  larut  selama  proses  ekstraksi  dipengaruhi oleh jenis pelarut yang digunakan. Penelitian ini didesain untuk mengetahui kadar piperin  dalam  ekstrak  buah  lada  hitam  dan  lada  putih  yang  diekstraksi  dengan variasi konsentrasi etanol. Ekstraksi buah lada dilakukan dengan metode ekstraksi sokhlet  menggunakan  variasi  konsentrasi  etanol  (60%,  70%  dan  96%)  dan kemudian  dilanjutkan  dengan  teknik  ekstraksi  asam-basa  untuk  mendapatkan ekstrak  alkaloidnya.  Ekstrak  alkaloid  masing-masing  dianalisis  pada  plat  KLT silika  gel  60  F 254 sebagai  fase  diam  dan  campuran n -heksana:etil  asetat  (1:1) sebagai  fase  gerak.  Kadar  piperin  ditetapkan  menggunakan  metode  KLT- densitometri  pada  panjang  gelombang  254  nm.  Hasil  menunjukkan  bahwa  kadar piperin  tertinggi  diperoleh  dari  ekstrak  buah  lada  hitam  menggunakan  pelarut etanol  60%  sebagai  pelarut  pengekstraksi  dengan  kadar  52,81±4,66  (%b/v) terhadap ekstrak alkaloidnya. Kadar piperin tertinggi diperoleh dari ekstrak buah lada  putih  menggunakan  pelarut  etanol  dengan  konsentrasi  96%  sebagai  pelarut pengekstraksi dengan kadar 38,72±8,28 (%b/v) terhadap ekstrak alkaloidnya.
Kata Kunci: etanol, piperin, lada, Piper nigrum L., KLT-densitometri

## ABSTRACT
Quality of pepper fruit extracts ( Piper nigrum L.) is influenced by its components and  concentration  of  compounds.  Piperine  is  a  major  alkaloid  compound  in pepper  fruits.The  level  of  piperine  that  dissolved  during  extraction  process  was influenced  by  the  type  of  solvent  used.This  research  was  designed  to  know  the
174 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk
level  of  piperine  in  black  and  white  pepper  fruits  extracted  with  variation  of ethanol  concentrations.  Extraction  of  pepper  fruits  was  performed  with  soxhlet apparatus  using  variation  of  ethanol  concentration  (60%,  70%,  and  96%)  and then  continued  withacid-base  extraction  technique  to  get  its  alkaloids  fraction. Each  of  alkaloids  fractions  was  analyzed  on  silica  gel  60  F 254 TLC  plate  as stationary phase and mixture of n-hexane:etyl acetate (1:1) as mobile phase. The level of piperine was determined using TLC-densitometry at wavelength 254 nm. The results showed that highest level of piperine obtained from black pepper fruit extract  using  ethanol  60%  as  extraction  solvent  with  rate  of  52.81±4.66(%w/v) toward its alkaloids fraction. While highest level of piperine obtained from white pepper  fruit  extract  using  ethanol  96%  as  extraction  solvent  with  rate  of 38.72±8.28(%w/v) toward its alkaloids fraction.
Keywords: ethanol, piperine, pepper, Piper nigrum L., TLC-densitometry

## PENDAHULUAN
Lada  atau  yang  disebut  juga  merica  ( Piper  nigrum L.)  berasal  dari  famili Piperaceae  (Vasavirama  dan  Upender,  2014).  Pada  umumnya  lada  hitam  ( black pepper )  dimanfaatkan  sebagai  bumbu  dapur,  sama  halnya  dengan  lada  putih ( white  pepper ).  Lada  putih  diperoleh  dari  buah  lada  hitam  yang  buah-buahnya dipetik  selagi  masih  hijau  atau  hampir  masak,  direndam  untuk  memudahkan pengupasan  lapisan  luar  perikarp,  lalu  dijemur  sampai  kering  (Kartasapoetra, 2004).
Buah lada hitam mengandung alkaloid dan minyak atsiri dengan komponen felandren, dipenten, kariopilen, entoksilen, dan limonen (Depkes RI, 1980). Lada hitam  juga  mengandung  antara  lain  alkaloid  piperin  (5,3-9,2%),  kavisin  (sampai 1%) dan metil-pirolin; minyak atsiri (1,2-3,5%); lemak (6,5-7,5%); pati (36-37%) dan serat kasar (±14%) (Loo, 1987). Buah lada putih mengandung alkaloid seperti piperin, kavisin, dan metilpirolin, serta minyak atsiri, lemak dan pati. Kandungan utama  dalam  lada  adalah  alkaloid  piperin.  Piperin  memiliki  rumus  molekul C17H19NO3 atau (E,E)-1-[5-(1,3-benzodioksol-5-il)-1-okso-2,4-pentadienil] piperidin,  diperoleh  dalam  bentuk  prisma  monosiklik  dari  alkohol  dengan  titik lebur 130°C, 1 g piperin larut dalam 15 mL etanol, 36 mL eter dan hampir tidak larut dalam air (Kar, 2014). Piperin berbentuk kristal berwarna putih kekuningan dan merupakan alkaloid dari golongan piperidin yang memiliki sifat hampir tidak
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185
larut dalam air (40 mg/L pada suhu 18°C), namun mudah larut dalam alkohol (1 g/15 mL) dan eter (1 g/1,7 mL) (Vasavirama dan Upender, 2014).
Piperin  memiliki  khasiat  sebagai  antiinflamasi,  antimalaria,  menurunkan berat  badan,  menurunkan  demam,  menetralkan  racun  bisa  ular,  antiepilepsi, membantu  meningkatkan  penyerapan  vitamin  tertentu  (Kolhe et  al .,  2009). Piperin  memiliki  aktivitas  sebagai  analgesik  dan  antipiretik  pada  tikus,  dan menunjukkan  hasil  yang  sebanding  dengan  indometasin  sebagai  obat  standar (Sabina et al. , 2013). Kualitas ekstrak buah lada dipengaruhi oleh kandungan dan kadar senyawa kimia di  dalamnya.  Proses ekstraksi buah lada hitam dalam skala industri  digunakan  pelarut  etanol  60%  (Agoes,  2009).  Senyawa  piperin merupakan  senyawa  identitas  yang  paling  banyak  terkandung  dalam  buah  lada serta memiliki beragam khasiat pengobatan, maka perlu dipisahkan secara selektif melalui penyarian atau ekstraksi.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  sebelumnya,  metode  ekstraksi yang paling baik digunakan untuk mengisolasi piperin dari buah cabe jawa adalah ekstraksi  dengan  alat  sokhlet  jika  dibandingkan  dengan  metode  maserasi  yang dianalisis  menggunakan  metode  KLT-densitometri.  Hasil  yang  diperoleh menunjukkan  bahwa  kadar  piperin  pada  ekstrak  cabe  jawa  yang  diekstraksi dengan  alat  sokhlet  dengan  pelarut  etanol  95%  lebih  tinggi  yaitu  15,75% dibandingkan dengan kadar piperin pada ekstrak cabe jawa menggunakan metode maserasi yaitu sebesar 8,83% (Istiqomah, 2013).
Penelitian ini didesain  untuk  mengetahui kadar piperin  dalam ekstrak buah lada  hitam  dan  lada  putih  yang  diekstraksi  dengan  alat  sokhlet  menggunakan variasi  konsentrasi  etanol  sehingga  diharapkan  dapat  diperoleh  informasi mengenai  konsentrasi  etanol  yang  dapat  menghasilkan  kadar  piperin  tertinggi pada ekstrak buah lada dan bermanfaat untuk pengembangan obat tradisional.

## METODE PENELITIAN
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  adalah  ayakan mesh  40,  timbangan  analitik  (PIONEER),  perangkat  alat  soxhlet, rotary evaporator (EYELA), water bath , indikator pH universal (NESCO), kertas saring, mikropipet, plat KLT silika gel 60 F 254 (MERCK), chamber , UV- Box (CAMAG),
176 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak
Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk
perangkat alat Kromatografi Lapis Tipis (KLT)-Densitometri (CAMAG) dan alat- alat gelas lain.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  simplisia  buah lada putih ( Piper nigrum L.) diperoleh dari Balai Penelitian Tanaman Rempah dan Obat (BALITTRO), Bogor, Jawa Barat pada bulan Maret 2016 dan diidentifikasi di  Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)  Pusat  Konservasi  Tumbuhan Kebun Raya, Bogor, Indonesia. Standar piperin diperoleh dari UPT Sumber Daya Hayati,  Padang  pada  bulan  Juni  2016.  Pelarut  etanol  (teknis),  akuades,  H 2 SO 4 (Merck),  eter  (Merck),  NH 4 OH  (Merck),  kloroform  (Merck),  etanol  pro  analisis (Merck), n -heksana (Merck) dan etil asetat (Merck).
JalannyaPenelitian
A. Pembuatan Serbuk Simplisia
Serbuk simplisia buah lada dibuat dari simplisia utuh  yang diperoleh dari BALITTRO  dengan  cara  diblender  dan  kemudian  diayak  dengan  menggunakan ayakan mesh no.40.
B. Pembuatan Ekstrak Etanol
Serbuk  simplisia  sebanyak  kurang  lebih  50,0  g  ditimbang  seksama, kemudian  diekstraksi  dengan  alat  sokhlet  menggunakan  pelarut  etanol  dengan berbagai  variasi  konsentrasi  60%,  70%,  dan  96%.  Ekstraksi  dilakukan  sampai tetesan  siklus  tidak  berwarna  lagi.  Ekstrak  cair  yang  diperoleh  kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50°C.
C. Pembuatan Fraksi Alkaloid
Ekstrak  etanol  yang  diperoleh  dilarutkan  kembali  dengan  H 2 SO 4 2% hingga  pH  3-4,  kemudian  ditambahkan  eter  hingga  lemak  menghilang. Selanjutnya fraksi eter dipisahkan dan fraksi asam dibasakan dengan NH 4 OH 25% sampai pH 9-10 dan diekstraksi kembali dengan kloroform sampai tidak berwarna (Abraham  dkk.,  2014).  Fraksi  kloroform  selanjutnya  disebut  sebagai  fraksi alkaloid.
D. Uji Kualitatif Keberadaan Senyawa Alkaloid dengan Metode KLT
Diambil cuplikan standar piperin, fraksi alkaloid buah lada, fraksi eter dan fraksi  asam  lalu  dilarutkan  dengan  etanol.  Ditotolkan  masing-masing  cuplikan
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185
pada  plat  KLT  silika  gel  60  F 254 menggunakan  pipa  kapiler,  kemudian  dielusi menggunakan fase gerak campuran n -heksana : etil asetat (1:1). Noda diamati di bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm. Keberadaan alkaloid dideteksi dengan  cara  menyemprot  plat  menggunakan  pereaksi  Dragendorff  dan  dihitung masing-masing nilai R f -nya.
E. Pembuatan Larutan Baku Standar Piperin
Larutan induk (2000 µg/mL) dibuat dengan menimbang seksama 50,0 mg standar piperin, kemudian dilarutkan dalam etanol p.a sampai tanda batas 25 mL. Dibuat  larutan  deret  standar  piperin  dengan  5  tingkat  konsentrasi  berbeda  yaitu 200, 400,  600, 800 dan 1000 µg/mL dengan cara memipet sejumlah larutan dari larutan induk standar piperin dan dicukupkan dengan etanol p.a dalam labu ukur (Istiqomah, 2013).
F. Pembuatan Kurva Kalibrasi Standar Piperin
Larutan  deret  standar  piperin  kemudian  ditotolkan  masing-masing  5  µl pada plat KLT silika gel 60 F 254 . Plat KLT selanjutnya dielusi dengan fase gerak campuran n -heksana  :  etil  asetat  (1:1)  dan  di- scanning sehingga  dihasilkan  data area  standar  piperin.  Berdasarkan  area  terukur  (y)  pada  berbagai  baku  kerja piperin  (x),  maka  dapat  dihitung  harga  koefisien  korelasi  (r).  Bila  ada  hubungan linear antara y dengan x maka dihitung persamaan garis regresi y= bx+a (Harmita, 2004).

## G. Pembuatan Larutan Uji
Ditimbang  seksama  kurang  lebih  50  mg  ekstrak  buah  lada  hitam, dilarutkan dengan etanol dalam labu ukur 50 mL sehingga diperoleh konsentrasi 1000 µg/mL.  Dibuat larutan uji konsentrasi 800 µg/mL, dengan memipet 20 mL dalam labu terukur 25 mL lalu ditambahkan etanol p.a hingga tanda batas.
H. Pengukuran Kadar Piperin
Ditotolkan masing-masing 5 µL larutan standar yang telah diencerkan dan larutan uji pada plat KLT silika gel  60 F 254 . Plat selanjutnya  dielusi dengan fase gerak n -heksana : etil asetat (1:1), dan diukur dengan densitometer pada panjang gelombang  254  nm.  Data  luas  area  yang  didapatkan  dari  baku  standar  piperin kemudian  dibuat  persamaan  kurva  baku  dengan  bantuan  Microsoft  Excel  2007. Persamaan  kurva  baku  yaitu  y=  bx  +  a  dengan  y=  luas  area,  x=  kadar  piperin
178 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak
Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk
(µg/mL). Luas area sampel yang didapatkan dari hasil scan pada alat densitometer kemudian  dimasukkan  ke  dalam  persamaan  garis  kurva  baku,  maka  didapatkan masing-masing  persentase  kadar  piperin  pada  ekstrak  buah  lada  hitam (Murrukmihadi dkk., 2013).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Ekstraksi
Metode  ekstraksi  yang  dipilih  untuk  mengekstraksi  adalah  metode  yang cocok  dengan  sifat  bahan  yang  digunakan.  Metode  ekstraksi  dengan  alat  sokhlet merupakan salah satu metode yang cocok untuk mengekstraksi alkaloid (Harbone, 1996).  Penggunaan  pelarut  yang  ideal  untuk  mengekstraksi  adalah  pelarut  yang menunjukkan  selektivitas  maksimal,  mempunyai  kapasitas  terbaik,  dan kompatibel dengan sifat bahan yang diekstraksi (Agoes, 2007). Penggunaan cairan pelarut  pengekstraksi  berupa  campuran  etanol-air  mengandung  air  yang  cukup untuk  membantu  proses  difusi  pelarut  ke  dalam  sel.  Proses  difusi  biasanya  akan ditingkatkan  apabila  sel  tanaman  mengalami  perlakuan  dengan  air,  atau  pelarut yang  mengandung  air,  yang  akan  menyebabkan  terjadinya  pengembangan ( swelling )  sel  sehingga  terjadi  peningkatan  permeabilitas  atau  pecahnya  dinding sel (Agoes, 2009).
Tabel I. Hasil rendemen ekstrak etanol buah lada terhadap simplisia kering*
Pelarut pengekstraksi Rerata rendemen ekstrak etanol (%) ± SD Buah lada hitam Buah lada putih Etanol 60% 40,82±1,07 20,10±0,44 Etanol 70% 14,85±0,91 22,46±1,64 Etanol 96% 11,98±1,29 36,10±1,29
*pengujian dilakukan dengan 3 kali pengulangan
Berdasarkan hasil ekstraksi dengan pelarut etanol pada Tabel I, perbedaan rendemen  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  dengan  adanya  perbedaan konsentrasi etanol yang digunakan untuk ekstraksi dapat mempengaruhi rendemen yang  dihasilkan.  Besar  kecilnya  persentase  rendemen  ekstrak  menunjukkan keefektifan  proses  ekstraksi,  artinya  banyaknya  zat  aktif  yang  ikut  terekstraksi juga  dapat  dilihat  dari  besarnya  nilai  rendemen  ini.  Pada  ekstraksi  buah  lada
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185
hitam,  pelarut  etanol  60%  merupakan  pelarut  yang  paling  banyak  menghasilkan rendemen ekstrak, sedangkan pada ekstraksi  buah lada putih, pelarut  etanol 96% merupakan pelarut yang paling banyak menghasilkan rendemen ekstrak.
Selanjutnya,  pembuatan  fraksi  alkaloid  dilakukan  untuk  menghindari gangguan selama penetapan kadar piperin dari metabolit sekunder selain alkaloid yang  terdapat  pada  bahan.  Fraksi  alkaloid  diperoleh  melalui  proses  ekstraksi dengan  teknik  ekstraksi  asam-basa.  Alkaloid  mudah  larut  dalam  air  jika  berupa garam,  dengan  penambahan  asam.  Alkaloid  dalam  bentuk  bebas  atau  bentuk basanya  mudah  larut  dalam  pelarut  organik  namun  sukar  larut  dalam  air  (Sirait 2007). Berdasarkan hasil pada Tabel II, baik pada buah lada hitam maupun buah lada  putih  yang  diekstraksi  dengan  pelarut  pengesktraksi  etanol  96% menghasilkan rendemen fraksi alkaloid paling besar.
Tabel II. Hasil rendemen fraksi alkaloid dari ekstrak etanol buah lada*
Pelarut pengekstraksi Rerata rendemen fraksi alkaloid terhadap ekstrak etanol (%) ± SD Buah lada hitam Buah lada putih 60% 18,25±0,78 17,01±0,49 70% 20,46±1,69 18,46±0,48 96% 28,22±1,16 20,31±0,58 *pengujian dilakukan dengan 3 replikasi

## B. Uji Kualitatif Keberadaan Senyawa Alkaloid dengan Metode KLT
Proses  identifikasi  keberadaan  senyawa  alkaloid  yang  terkandung  dalam ekstrak  dilakukan  dengan  uji  kualitatif  menggunakan  metode  KLT.  Pada pengujian  ini,  keberadaan  senyawa  alkaloid  tidak  hanya  diujikan  untuk  sampel fraksi alkaloid dari ekstrak etanolnya saja, tetapi juga fraksi eter dan fraksi asam. Pada  Gambar  1,  dapat  dilihat  bahwa  sampel  ekstrak  menunjukkan  keberadaan piperin karena sampel memberikan noda pada nilai R f yang mirip dengan standar piperin,  yaitu  sekitar  0,6  dengan  deteksi  menggunakan  sinar  UV  254  nm, sedangkan  pada  fraksi  eter  dan  fraksi  asam  tidak  tampak  noda.  Hal  ini  berarti bahwa  proses  ekstraksi  asam-basa  yang  dilakukan  untuk  menarik  alkaloid, termasuk piperin, dalam ekstrak etanol sudah maksimal.
Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk
Gambar 1. Hasil  identifikasi  keberadaan  senyawa  alkaloid  pada  fraksi  alkaloid dari  ekstrak  etanol  lada  hitam  (a)  dan  lada  putih  (b)  pada  plat  KLT

## dengan pengamatan di bawah sinar UV 254 nm
Keterangan:
P= Standar piperin
S1= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 60% S2= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 70% S3= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 96% F1= Fraksi eter dari ekstrak etanol 60% F2= Fraksi eter dari ekstrak etanol 70% F3= Fraksi eter dari ekstrak etanol 96% F4= Fraksi asam dari ekstrak etanol 60% F5= Fraksi asam dari ekstrak etanol 70%
F6= Fraksi asam dari ekstrak etanol 96%
Pada  Gambar  2,  deteksi  dilanjutkan  dengan  menggunakan  pereaksi Dragendorff  untuk  memastikan  bahwa  bercak  tersebut  adalah  senyawa  alkaloid. Keberadaan senyawa alkaloid ditegaskan jika hasil penyemprotan terbentuk noda berwarna jingga pada plat. Hasil menunjukkan, standar piperin dan sampel ekstrak alkaloid  dari  ekstrak  etanol  memberikan  bercak  berwarna  jingga  setelah penotolan, sedangkan pada fraksi  eter dan fraksi  asam  sudah tidak menimbulkan bercak,  yang  menandakan  proses  ekstraksi  alkaloid  telah  dilakukan  dengan maksimal.
Berdasarkan  Gambar  1  dan  2,  jarak  noda  yang  diperoleh  antara  standar piperin  dengan  sampel  tidak  jauh  berbeda,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak buah  lada  putih  positif  mengandung  senyawa  aktif  piperin.  Penegasan  adanya senyawa alkaloid dilakukan menggunakan pereaksi semprot Dragendorff, dimana terdapat  bercak  jingga  di  plat  pada  penotolan  standar  piperin  dan  sampel  fraksi alkaloid dari ekstrak etanol sedangkan pada fraksi eter dan fraksi  air sudah tidak menimbulkan  bercak,  yang  menandakan  proses  ekstraksi  alkaloid  dengan  teknik ekstraksi asam basa telah dilakukan dengan maksimal.
(a) (b)
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185
Gambar 2. Hasil  identifikasi  keberadaan  senyawa  alkaloid  pada  fraksi  alkaloid dari  ekstrak  etanol  lada  hitam  (a)  dan  lada  putih  (b)  pada  plat  KLT

## setelah disemprot dengan pereaksi Dragendorff
Keterangan:
P= Standar Piperin
S1= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 60% S2= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 70% S3= Fraksi alkaloid dari ekstrak etanol 96% F1= Fraksi eter dari ekstrak etanol 60% F2= Fraksi eter dari ekstrak etanol 70% F3= Fraksi eter dari ekstrak etanol 96% F4= Fraksi asam dari ekstrak etanol 60% F5= Fraksi asam dari ekstrak etanol 70%
F6= Fraksi asam dari ekstrak etanol 96%

## C. Penetapan Kadar Piperin
Penetapan  kadar  piperin  dapat  dilakukan  menggunakan  metode  KLT- densitometri. Metode tersebut banyak digunakan dalam analisis kualitatif ataupun kuantitatif di bidang farmasi terutama di bidang analisis obat bahan alam. Analisis kuantitatif  yaitu  dengan  cara  penentuan  luas  area  atau  luas  bercak  kromatogram yang dapat dilakukan dengan menggunakan baku pembanding dan menggunakan kurva kalibrasi baku pembanding (Redja dkk., 2009).
A B (a) (b)
Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk
Pada  penelitian  ini,  digunakan  plat  KLT  silika  gel  60  F 254 sebagai  fase diam  dan  fase  geraknya  menggunakan n -heksana  :  etil  asetat  (1:1).  Menurut Rohman (2009) fase  gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga  R f solut terletak antara 0,2-0,8 untuk  memaksimalkan pemisahan. Fase  gerak n -heksana : etil  asetat  digunakan  karena  bersifat  semi  polar  sehingga  dapat  memisahkan piperin yang juga bersifat semipolar dari kandungan ekstrak lainnya. Selain itu, n - heksana:etil  asetat  (1:1)  memiliki  nilai  R f yang  memenuhi  syarat  sebagai  fase gerak yang optimal.

## Tabel III. Luas area standar piperin
Konsentrasi piperin (µg/mL) Luas Area 200 6691,9 400 12448,0 600 17138,8 800 19082,6 1000 22384,7
Gambar 3. Hubungan  konsentrasi  piperin  dengan  luas  area  yang  diukur dengan KLT-densitometri
Hasil  pembuatan  kurva  kalibrasi  piperin  menunjukkan  adanya  hubungan linear  antara  kadar  piperin  dengan  luas  area  yaitu  semakin  tinggi  konsentrasi
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185
piperin  maka  semakin  besar  luas  area  yang  terbaca  pada  alat  densitometer. Persamaan  garis  linear  yang  diperoleh  adalah  y  =  19,0101x  +  4143,14  dengan nilai  koefisien  korelasi  sebesar  0,9823,    seperti  yang  terlihat  pada  Tabel  III  dan Gambar 3.
Menggunakan persamaan tersebut, luas area sampel dari hasil pengukuran masing-masing  sampel  dimasukkan  ke  dalam  persamaan  garis  linear  sehingga diperoleh kadar piperin dalam fraksi alkaloid dari ekstrak etanol buah lada. Hasil penetapan  kadar  piperin  pada  sampel  ekstrak  buah  lada  ditunjukkan  pada  Tabel IV.
Tabel IV. Hasil kadar piperin dalam fraksialkaloid dari ekstrak etanol buah lada
Ekstrak etanol Buah lada hitam Rata-rata kadar piperin (%) ± SD Ekstrak etanol Buah lada putih Rata-rata kadar piperin (%) ± SD 60% 52,81 ± 4,66 60% 27,12 ± 4,59 70% 47,06 ± 2,46 70% 30,57 ± 12,81 96% 36,97 ± 11,95 96% 38,72 ± 8,28
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  pada  penentuan  kadar  piperin  dalam fraksi  alkaloid  buah  lada  hitam  menggunakan  metode  KLT-densitometri  terlihat bahwa  kadar  piperin  tertinggi  pada  fraksi  alkaloid  dari  ekstrak  etanol  buah  lada hitam  yang  diekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol  60%  yaitu  sebesar  52,81%. Semakin besar konsentrasi etanol maka semakin kecil kadar piperin dalam ekstrak buah lada hitam. Kadar piperin tertinggi diperoleh dari fraksi alkaloid dari ekstrak etanol  buah  lada  putih  yang  diekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol  96%  yaitu sebesar  38,72%.  Semakin  besar  konsentrasi  etanol  maka  semakin  besar  kadar piperin  dalam  ekstrak  buah  lada  putih.  Hal  ini  membuktikan  bahwa  perbedaan konsentrasi pelarut pengekstraksi berpengaruh pada kadar piperin yang ikut tersari selama proses ekstraksi.
Angka  persentase  kadar  piperin  dalam  sampel  cukup  besar  karena penentuan  kadar  piperin  dilakukan  pada  fraksi  alkaloid  dari  ekstrak  etanolnya, dengan  kata  lain  kadar  piperin  tersebut  menunjukkan  jumlah  kandungan  piperin dari  jumlah  alkaloid  keseluruhan  dalam  ekstrak  buah  lada.  Buah  lada  hitam mengandung piperin yang lebih banyak dibanding dengan buah lada putih. Hal ini diduga  karena  asal  simplisia  keduanya  sehingga  mempengaruhi  kadar  piperin  di
184 Kandungan Piperidin dalam Ekstrak
Ni Putu Ermi Hikmawanti, dkk
dalamnya, dimana lada  putih diperoleh dari buah lada hitam  yang buah-buahnya dipetik  selagi  masih  hijau  atau  hampir  masak,  direndam  untuk  memudahkan pengupasan  lapisan  luar  perikarp,  lalu  dijemur  sampai  kering  (Kartasapoetra, 2004).

## KESIMPULAN
Kadar piperin tertinggi diperoleh dari ekstrak buah lada hitam menggunakan pelarut etanol 60% sebagai pelarut pengekstraksi dengan kadar 52,81±4,66 (%b/v) terhadap  fraksi  alkaloidnya.  Kadar  piperin  tertinggi  diperoleh  dari  ekstrak  buah lada  putih  menggunakan  pelarut  etanol  dengan  konsentrasi  96%  sebagai  pelarut pengekstraksi dengan kadar 38,72±8,28 (%b/v) terhadap fraksi alkaloidnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Abraham,  A.,  Fauziyah,  B.,  Fasya,  A.G.,  dan  Adi,  T.K.,  2014,  Uji Antitoksoplasma  Ekstrak  Kasar  Alkaloid  Daun  Pulai  ( Alstonia  scholaris , (L.)  R.  BR)  terhadap  Mencit  ( Mus  musculus )  BALB/C  yang  Terinfeksi Toxoplasma Gondii Strain Rh. Alchemy . 3 (1): 67-75.
Agoes, G., 2007, Teknologi Bahan Alam , Penerbit ITB, Bandung, 32-35.
Agoes, G., 2009, Teknologi Bahan Alam , Edisi revisi, Penerbit ITB, Bandung, 37 dan 85.
Depkes RI., 1980, Materia Medika Indonesia. Jilid  IV, Jakarta: Badan Pengawas Obat dan Makanan, 99-108.
Harborne,  J.B.,  1996, Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisa Tumbuhan, Terjemahan:  Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang  Soediro. Penerbit ITB, Bandung.
Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya, Majalah Ilmu Kefarmasian , 1 (3): 117-135.
Istiqomah, 2013, Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi terhadap Kadar  Piperin  Buah  Cabe  Jawa  ( Piperis  retfofracti  fructus ), Skripsi, Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan,  UIN  Syarif  Hidayatullah, Jakarta.
Kar,  A.,  2014, Farmakognosi  dan  Farmakobioteknologi, Terjemahan:  July Manurung dkk., Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. 2 (2): 503-504.
Media Farmasi Vol. 13 No. 2 September 2016 : 173-185
Kartasapoetra, G., 2004, Budidaya Tanaman Berkhasiat Obat, Jakarta: PT Rineka Cipta, 50-51.
Kolhe, S.R., Borole, P., and Patel, U., 2011, Extraction and Evaluation of Piperine from Piper  nigrum , Internasional  Journal  of  Applied  Biology  and Pharmaceutical Technology , 144-149.
Loo,  T.,  1987, Ikhtisar  Ringkas  dari  Dasar-Dasar  Farmakognosi, Bunda  Karya, Jakarta, 181.
Murrukmihadi, M., Wahyuono, S., Marchaban, dan Martono, S., 2013, Penetapan Kadar  Alkaloid  dari  Ekstrak  Etanolik  Bunga  Kembang  Sepatu  ( Hibiscus rosa-sinensis L.), Traditional Medicine Journal, 18 (2): 118-120.
Redja,  I.W.,  Aziz,  Z.,  Yantih,  N.,  2009, Analisis  Instrumental, Jakarta:  Fakultas Farmasi Universitas Pancasila, 133-140.
Rohman,  A.,  2009, Kromatografi  Untuk  Analisis  Obat ,  Edisi  Ke-1,  Graha  Ilmu, Yogyakarta. 47, 49, 56.
Sabina, E.P., Nasreen, A., Vedi, M., and Rasool, M., 2013, Analgesic, Antipyretic and  Ulcerogenic  Effects  of  Piperine:  An  Active  Ingredient  of  Pepper, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research , 5 (10): 203-206.
Sirait, M., 2007, Penuntunan Fitokimia dalam Farmasi , Bandung: ITB, 60-61.
Vasavirama, K.and Upender, M., 2014, Piperine: A Valuable Alkaloid from Piper Species, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 6 (4): 34-38.