## KUALITAS DNA HASIL PURIFIKASI DARI SOSIS SAPI SEBAGAI BAHAN AUTENTIKASI HALAL BERBASIS MARKER GENETIK
(DNA Quality of Purification from Beef Sausage as Halal Authentication Material Based on Genetic Marker)
Nurul Purnomo 1 , Dhian Ramadhanty 1 , Musdalifa Mansur 1 , Maghfira Nur 2 , dan Muhammad Ihsan A. Dagong 2,3 .
1 Program Studi Peternakan , Universitas Muhammadiyah Sidenreng Rappang, Jl. Angkatan 45 No. 1A Lt. Salo Sidenreng Rappang, 91651
2 Laboratorium Bioteknologi Terpadu Fakultas Peternakan Universitas Hasanuddin, Jl. Perintis Kemerdekaan KM. 10, Tamalanrea Indah, Kec. Tamalanrea, Kota Makassar, Sulawesi Selatan 90245 3 Departemen Produksi Ternak Fakutas Peternakan Universitas Hasanuddin, Jl. Perintis Kemerdekaan KM. 10, Tamalanrea Indah, Kec. Tamalanrea, Kota Makassar, Sulawesi Selatan 90245 Email korespondensi: purnomo.nupo@gmail.com

## ABSTRACT
This study aims to determine the effect of the preparation method and the number of samples on the quality of purified DNA from beef sausage. The study was conducted using a Randomized Block Design. The main factor is the sample preparation method which consists of P1: fresh sample; P2: oven-dried sample; and P3: Freeze-drying dry samples. Each treatment consisted of 4 groups, namely K1: sample weight 25 mg; K2: sample weight 50 mg; K3: sample weight 75 mg; and K4: sample weight 100 mg. Each treatment group was repeated 2 times so that the total sample was 24. The results showed that DNA purification using different preparation methods and sample weights was successfully carried out, as seen from the presence of DNA bands visualized on agarose gel with EtBr staining. The average DNA quality of the P1, P2, and P3 preparation methods were 1.60±0.90 ng/μl, 2.63±0.99 ng/μl, and 2.94 ±0.89, ng/μl respectively, with DNA purity 1.023 ±0.165, 0.937±0.148,  and  1.014±0.163.  The  average  DNA  quality  at  K1,  K2,  K3,  and  K4  obtained  DNA concentrations of 3.03±1.64 ng/μl, 3.15±0.74 ng/μl, 2.28± 1.66 ng/μl, and 2.54±1.50 ng/μl with a purity of 1.059±0.142, 0.981±0.130, 0.908±0.061, and 1.061± 0.215. The average total concentration of purified DNA from beef sausage was 2.75±1.28 ng/μl with a purity of 0.991±0.149. The results of variance showed that the treatment did not affect the concentration and purity of purified DNA from beef sausage. This study concludes that DNA purification from beef sausage can be carried out, but the preparation method and number of samples do not affect the quality and quantity of DNA.
Keywords : halal authentication, genetic markers, processed livestock products, DNA purification, halal food

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh metode preparasi dan jumlah sampel terhadap  kualitas  DNA  hasil  purifikasi  dari  sosis  sapi.  Penelitian  dilakukan  menggunakan Rancangan Acak Kelompok. Faktor utama adalah metode preparasi sampel yang terdiri dari P1 : sampel segar; P2 : sampel kering-oven; dan P3 : sampel kering Freeze-drying. Setiap perlakuan terdiri dari empat kelompok, yaitu K1 : berat sampel 25 mg; K2 : berat sampel 50 mg; K3 : berat sampel  75  mg;  dan  K4  :  berat  sampel  100  mg.  Masing-masing  kelompok  perlakuan  diulang sebanyak 2 kali, sehingga total sampel 24. Hasil penelitian menunjukkan bahwa purifikasi DNA menggunakan metode preparasi dan berat sampel yang berbeda berhasil dilakukan, terlihat dari adanya pita DNA hasil visualisasi pada gel agarose dengan pewarnaan EtBr. Rata-rata kualitas DNA  dari  metode  preparasi  P1,  P2  dan  P3    masing-masing  1,60±0,90  ng/μl,  2,63±0,99  ng/μl, dan  2,94±0,89  ng/μl  dengan  kemurnian  DNA  masing-masing  1,023±0,165,  0,937±0,148,  dan 1,014±0,163. Rata-rata kualitas DNA pada K1, K2, K3 dan K4 diperoleh konsentrasi DNA masing- masing 3,03±1,64 ng/μl, 3,15±0,74 ng/μl, 2,28±1,66 ng/μl, dan 2,54±1,50 ng/μl dengan kemurnian masing-masing 1,059±0,142, 0,981±0,130, 0,908± 0,061, dan 1,061± 0,215. Rata-rata total konsentrasi

## PENDAHULUAN
Sosis  adalah  produk  pangan  olahan yang  terbuat  dari  campuran  daging  halus dengan  penambahan  tepung  atau  pati  dan bumbu  tambahan  yang  dimasukkan  kedalam selongsong  sosis  (Herlina et  al .,  2015). Penerimaan  konsumen  terhadap  sosis  di Indonesia cukup baik, terlihat dengan adanya peningkatan konsumsi rata-rata 4,46% pertahun (Santoso et  al .,  2018).  Sama  seperti  produk daging  maupun  olahan  daging  lainya,  sosis juga memiliki kerentanan yang tinggi terhadap pemalsuan dengan daging lain. Daging hewan lain yang umum digunakan untuk memalsukan daging halal adalah daging babi, anjing, kucing dan tikus.
Pemalsuan  daging  halal  pada  olahan daging  seperti  sosis  dengan  daging  hewan non-halal merupakan isu sensitif di Indonesia. Hal  ini  disebabkan  mayoritas  penduduk Indonesia adalah muslim yaitu mencapai 204,8 juta (Charity, 2017) atau 87,18% dari penduduk Indonesia  (Al-Fatih  and  Aditya,  2017),  dan bagi  umat  muslim  memiliki  kewajiban untuk  mengkonsumsi  makanan  yang  halal dan  dilarang  mengkonsumsi  makan  haram sebagaimana  yang  tertuang  dalam  Al-Qur’an Surat  Al-Maaiddah  ayat  88  (Zulaekah  and Kusumawati, 2015). Untuk menjamin kehalalan produk  pangan  termasuk  sosis,  pemerintah telah  menerbitkan  Undang-Undang  No.  33 Tahun 2014 Tentang Jaminan Produk Halal (Al- Fatih and Aditya, 2017), bahwa semua produk yang  beredar  di  Indonesia    terutama  pangan harus  sertifikat  halal.  Sertifikat  dikeluarkan oleh  Badan  Penyelenggara  Jaminan  Produk Halal (BPJPH).
Saat  ini  telah  dikembangkan  beberapa metode  autentikasi  halal,  antara  lain  metode enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (Asensio et  al .,  2008;  Kuswandi et  al .,  2017), electronic  nose  (e-nose),  gas  chromatography mass  spectrometer  with  headspace  analyzer (GCMS-HS) (Nurjuliana et al ., 2011; Kuswandi et  al .,  2017),  imuno-  kromatografi  atau  yang dikenal  sebagai  rapid  test  (Kuswandi et al .,  2017),  polymerase  chain  reaction  (PCR)
(Pestana et al ., 2010; Soares et al ., 2013; Kim et al ., 2016; Al-Kahtani et al ., 2017; Perestam et al .,
2017),  DNA  hybridization  (Ballin et  al .,  2009) dan liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS)  (Klein-nijenhuis et  al .,  2018).  Metode yang  diharapkan  dapat  diandalkan  untuk autentikasi  halal  pada  produk  olahan  daging seperti  sosis  adalah  dengan  menggunakan metode Polymerase Chain Reaction (PCR).  PCR merupakan  metode  ilmiah  dalam  bidang biologi  molekuler  untuk  menggandakan  satu atau  beberapa  salinan  potongan  DNA  pada beberapa  urutan  besarnya,  menghasilkan ribuan  hingga  jutaan  salinan  urutan  DNA tertentu (Joshi and Deshpande, 2011). Metode PCR dapat digunakan untuk mengidentifikasi spesies  makhluk  hidup  menggunakan DNA  Barkode  (Hebert et  al .,  2003).  Dengan kemampuan  mengidentifikasi  spesies  maka kita bisa mengetahui jenis daging apa saja yang digunakan  dalam  pembuatan  sosis,  sehingga jika  ada  campuran  daging  non-halal  bisa diidenfikasi.
Untuk  melakukan  autentikasi  halal menggunakan  metode  PCR  diperlukan  DNA template  yang  berasal  dari  sampel  dengan konsentrasi dan kemurnian yang baik. Namun saat ini belum ada panduan yang jelas tentang metode  preparasi  dan  jumlah  sampel  sosis untuk autentikasi halal menggunakan metode PCR.  Dengan  demikian  diperlukan  penelitian tentang  metode  preparasi  dan  jumlah  sampel sosis  sebagai  bahan  autentikasi  halal  berbasis marker genetik menggunakan PCR. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kualitas DNA hasil purifikasi dari sosis sapi dengan metode preparasi dan jumlah sampel yang berbeda.

## MATERI DAN METODE

## Materi
Penelitian ini dilaksanakan di
Laboratorium  Bioteknologi  Terpadu  Fakultas Peternakan Universitas Hasanuddin, Makassar. Bahan sampel yang digunakan adalah sosis sapi Bernardi®  yang  diproduksi  PT.  Eloda  Mitra. Untuk  ektrasi  DNA  menggunakan  Tia  Namp
DNA hasil purifikasi dari sosis sapi yaitu 2,75±1,28 ng/μl dengan kemurnian 0,991± 0,149. Hasil sidik ragam menunjukkan perlakuan tidak mempengaruhi konsentrasi dan kemurnian DNA hasil purifikasi dari sosis sapi. Kesimpulan penelitian ini yaitu purifikasi DNA dari sosis sapi dapat dilakukan, tetapi perlakuan metode preparasi dan jumlah sampel tidak mempengaruhi kualitas dan kuantitas DNA.
Kata Kunci : autentikasi halal, marker genetik, olahan hasil ternak, purifikasi DNA, pangan halal

## Purnomo, dkk
Genomic  DNA  Kit®  dari  Tiangen  Biotech (Beijing),.Co.LTD.

## Metode
Penelitian ini dilaksanakan menggunakan Rancangan  Acak  Kelompok  yang  terdiri  dari 3  perlakuan  dan  4  kelompok.  Perlakuan  1: sampel segar (P1); perlakuan 2: sampel kering- oven  (P2);  dan  perlakuan  3:  sampel  kering Freeze-drying (P3). Setiap perlakuan terdiri dari 4  kelompok,  yaitu  kelompok  1:  berat  sampel 25  mg  (B1);  kelompok  2:  berat  sampel  50  mg (B2); kelompok 3: berat sampel 75 mg (B3); dan kelompok 4 : berat sampel 100 mg (B4). Masing- masing kelompok perlakuan diulang sebanyak 2 kali, sehingga total sampel menjadi  24.
Prosedur  kerja  penelitian  ini  yaitu: menyiapkan  sampel  sosis  sapi  sesuai kebutuhan.  Sampel  sosis  sapi  kemudian digerus  hingga  halus  menggunakan  mortar. Menimbang  sampel  untuk  perlakuan  1–3 dengan  berat  sesuai  kelompok  perlakuan 1–4  dan  masing-masing  kelompok  perlakuan berjumlah 2 ulangan. Sampel untuk kelompok segar disimpan dalam freezer untuk menunggu sampel  kelompok  lain  siap  dipurifikasi. Sampel  kering-oven  dikeringkan  pada  oven menggunakan suhu 70 0 C selama 20 jam. Sampel kering Freeze-Drying dikeringkan menggunkan mesin Freeze Drying pada suhu -40 0 C tekanan 0,12  mbar  selama  20  jam.  Selanjutnya  sampel dipurifikasi mengikuti petunjuk dari TiaNamp Genomic  DNA  Kit®  yang  diproduksi  oleh Tiangen Biotech (Beijing), Co. LTD. Qualifikasi DNA  hasil  purifikasi  difisualisasi  pada gel  agaros  1,5%  dengan  pewarnaan  EtBr. Quantifikasi  DNA  dilakukan  menggunakan spektrofotometer  UV  VIS  Spectrophotometer, Thermo Spectronic, Genesys 10S UV VIS pada panjang  gelombang  160  dan  180  nm.  Untuk menghitung konsentrasi DNA dan Kemurnian DNA  mengacu  pada  rumus  Sambrook et  al . (1989):
Konsentrasi DNA = A260 x 50 x (faktor pengencer)
Kemurnian DNA  = A260/A280

## Parameter yang diamati
Parameter  yang  diamati  adalah  kualitas DNA  yang  terdiri  dari  konsentrasi  DNA  dan kemurnian  DNA  hasil  purifikasi  dari  sampel sosis  sapi.

## Analisis data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  ragam berdasarkan  Rancangan  Acak  Kelompok (RAK) dengan menggunakan SPSS 16 dari IBM mengacu pada Sudjana (2005).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Visualisasi DNA hasil ekstrak dari sosis sapi pada gel agaros
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa purifikasi  DNA  dari  sosis  sapi  menggunakan TiaNamp  Genomic  DNA  Kit®  dari  Tiangen Biotech  (Beijing),.Co.LTD  berhasil.  Sebagai mana  terihat  pada  Gambar  1  menunjukkan adanya  pita-pita  DNA  dengan  panjang lebih  dari  30  kbp  pada  gel  agarose  1,5% dengan  pewarnaan  EtBr.  Hasil  visualisasi menunjukkan bahwa terdapat kecenderungan sampel yang  dikeringkan  (sampel 5 sampai 8 kering  oven  dan  sampel  9  sampai  12  kering beku / freeze-drying ) menghasikan DNA dengan konsentrasi lebih tinggi yang ditandai dengan ketebalan  pita  yang  lebih  tebal  dan  jelas. Selain itu, jumlah sampel yang lebih besar juga menunjukkan  peningkatan  konsentrasi  DNA. Gel  elektroforesis  adalah  teknik  umum  yang digunakan  untuk  memvisualisasikan  protein dan  DNA.  Elektroforesis  gel  memungkinkan visualisasi DNA dan RNA dengan penggunaan marker . Proses ini dicapai dengan memisahkan sampel  berdasarkan  ukuran  dan  daya  listrik. Semakin tinggi konsentrasinya, semakin rapat matriks pemisahannya. Perbedaan konsentrasi akan  menentukan  panjang  pasangan  kilobase (kbp)  yang  divisualisasikan  melalui slab . (Anderson et al., 2013). Agarose adalah polimer linier alami yang diekstraksi dari rumput laut yang membentuk matriks  gel  dengan  ikatan  hidrogen  setelah dipanaskan  dalam  buffer  dan  dibiarkan dingin.  Secara  umum  aplikasi  tersebut  hanya memerlukan  komponen  agarose  tunggal  dan tidak  diperlukan  katalis  polimerisasi.  Oleh karena  itu,  gel  agarosa  sederhana  dan  cepat dibuat (Chawla, 2004). Gel agarose merupakan media  yang  paling  popular  untuk  pemisahan asam nukleat berukuran sedang dan besar dan memiliki  jarak  pemisahan  yang  luas  tetapi daya  pemisahannya  relatif  rendah,  karena pita  yang  terbentuk  di  dalam  gel  cenderung tidak  jelas  dan  menyebar  terpisah.  Hal  ini adalah  akibat  dari  ukuran  pori  yang  tidak
dapat dikontrol (Stellwagen, 1998). Sementara itu,  Ethidium  Bromida  ditambahkan  ke gel  untuk  meningkatkan  visibilitas  DNA dalam  gel  (Anderson et  al., 2013).  Untuk memvisualisasikan  DNA,  Etidium  Bromida ditambahkan yang memungkinkan visualisasi yang konsisten (Borst, 2005).

## Konsentrasi dan kemurnian DNA hasil purifikasi dari sosis sapi
Hasil  pengukuran  konsentrasi  dan kemurian DNA yang diekstrak dari sosis sapi dapat dilihat pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Tabel  1  menunjukkan  konsentrasi DNA  hasil  purifikasi  dari  sosis  sapi  dengan kombinasi  perlakuan  preparasi  sampel  segar, kering-oven dan freeze-drying dengan perlakuan jumlah sampel 25mg, 50mg, 75mg dan 100mg. Konsentrasi  DNA  hasil  purifikasi  dari  sosis sapi  rata-rata  2,75± 1,28  ng/μl,  konsentrasi DNA  terendah  diperoleh  pada  kombinasi perlakuan  sampel  segar  dengan  berat  sampel
75 mg yaitu 0,90 ng/μl, sedangkan konsentrasi DNA  tertinggi  diperoleh  pada  kombinasi perlakuan freeze - drying dengan jumlah sampel 25 mg yaitu 4,55 ng/μl. Rata-rata konsentrasi DNA  pada  metode  preparasi  sampel  segar, kering-oven  dan freeze-drying masing-masing 1,60± 0,90 ng/μl, 2,63 ± 0,99ng/μl  dan 2,94 ± 0,89 ng/μl,  sedangkan  rata-rata  konsentrasi  DNA pada  berat  sampel  25  mg,  50  mg,  75  mg  dan 100 mg yaitu 3,03± 1,64 ng/μl, 3,15 ± 0,74 ng/μl, 2,28 ± 1,66 ng/μl dan 2,54 ± 1,50) ng/μl. Terdapat kecenderungan bahwa konsentrasi DNA pada metode  preparasi freeze-drying menghasilkan DNA  dengan  konsentrasi  lebih  tinggi dibanding metode preparasi kering-oven  dan sampel segar. Sementara pada jumlah sampel, berat  sampel  50  mg  menghasilkan  DNA dengan  konsentrasi  lebih  tinggi  dibanding jumlah  sampel  25  mg,  75  mg  dan  100  mg. Namun, hasil sidik ragam menunjukkan bahwa perlakuan metode preparasi dan jumlah sampel tidak  berpengaruh  nyata  (P>0,05)  terhadap
Tabel 1. Konsentrasi DNA hasil ekstraksi dari sosis sapi dengan metode preparasi dan  jumlah sampel yang berbeda. Preparasi sampel Berat sampel (mg) Rata-rata 25 50 75 100 Sampel segar 1,30 2,93 0,90 1,27 1,60±0,90 Kering oven 3,25 3,98 1,83 2,15 2,63±0,99 Freeze drying 4,55 2,55 4,13 4,20 2,94±0,89 Rata-rata 3,03±1,64 3,15±0,74 2,28±1,66 2,54±1,50 2,75±1,28 Gambar  1 .  Fisual  DNA  hasil  purifikasi  dari  sosis  sapi  pada  gel  agaros  1,5%  dengan pewarnaan EtBr. Ket : M (DNA ladder 100 bp); 1 (DNA sosis segar 25 mg); 2
(DNA sosis segar 50 mg); 3 (DNA sosis segar 75 mg); 4 (DNA sosis segar 100 mg); 5 (DNA sosis kering oven 25 mg); 6 (DNA sosis kering oven 50 mg); 7 (DNA sosis kering oven 75 mg); 8 (DNA sosis kering oven 100 mg); 9 (DNA sosis freeze drying 25 mg); 10 (DNA sosis freeze drying 50 mg); 11 (DNA sosis freeze drying 75 mg); 12 (DNA sosis freeze drying 100 mg).
konsentrasi  DNA  yang  dipurifikasi  dari  sosis sapi. Tingkat  kemurnian  DNA  hasil  purifikasi dari  sosis  sapi  dengan  metode  preparasi sampel segar, kering-oven dan freeze-drying dan jumlah  sampel  25  mg,  50  mg,  75  mg  dan  100 mg  disajikan  pada  Tabel  2.  Rata-rata  tingkat kemurnian  DNA  hasil  purifikasi  dari  sosis sapi  0,991±0,149,  kemurnian  DNA  terendah 0,800 diperoleh pada preparasi sampel kering- oven dengan jumlah sampel 75 mg, sedangkan kemurnian DNA tertinggi 1,267 diperoleh pada preparasi sampel segar dengan berat sampel 100 mg.  Rata-rata  kemurnian  DNA  pada  metode preparsi sampel segar, kering-oven dan freeze- drying masing-masing  adalah  1,023±0,165, 0,937± 0,148,  dan  1,014 ± 0,163.  Sementara  rata- rata  kemurnian  DNA  pada  berat  sampel  25 mg, 50 mg, 75 mg dan 100 mg masing-masing 1,059± 0,142,  0,981 ± 0,130,  0,908 ± 0,061,  dan 1,061±0,215.  Hasil  sidik  ragam  menunjukkan bahwa  metode  preparasi  sampel  dan  jumlah sampel  tidak  berpengaruh  nyata  (P>0,05) terhadap  kemurnian  DNA  yang  dipurifikasi dari sosis sapi.
Hasil  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini sejalan  dengan  Popping et  al. (2010)  bahwa hasil  purifikasi  DNA  dari  produk  makanan olahan  berkisar  0,1-5  μg/100  mg  produk. Namun, konsentrasi dan kemurnian DNA yang diperoleh pada penelitian ini jauh lebih rendah jika  dibanding  konsentrasi  dan  kemurnian DNA  yang  diperoleh  pada  purifikasi  DNA dari daging. Hutami et al. (2018) dan Biase et al. ( 2002) masing-masing melaporkan memperoleh DNA dengan konsentrasi  177,20 - 547,45 ng/ μl  dan  kemurnian  1,93-1,97  pada  daging  sapi segar dan konsentrasi 483,3 ng/μl kemurnian 1,80 pada daging babi.
Nilai  kemurnian  DNA  yang  baik untuk  penelitian  molekuler  berkisar  1,8–2. Nilai  kemurnian  DNA  kurang  dari  1,8 mengindikasikan ekstrak DNA masih mengandung  residu  phenol  dan  pelarut
lainya.  Sedangkan  nilai  kemurnian  lebih  dari 2 mengindikasikan ekstrak DNA mengandung kontaminan  dari  senyawa  protein  (Sambrook et al., 1989). Konsentrasi DNA yang diperlukan untuk PCR yaitu 10 ng/μl, jika konsentrasi DNA terlalu  tinggi  harus  dilakukan  pengenceran, sedangkan  jika  konsentrasi  DNA  kurang  dari 10  ng/μl  tidak  perlu  diencerkan  (Seipp et  al ., 2010). Meskipun  konsentrasi  dan  kemurnian DNA  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini berada  di  bawah  standar  umum  untuk  PCR, namun  masih  ada  kemungkinan  DNA  hasil purifikasi  dari  sosis  sapi  dapat  digunakan untuk autentikasi halal menggunakan marker DNA. Hal ini didasarkan pada (Riffiani et al., 2015)  yang  berhasil  melakukan  amplifikasi DNA bakteri dengan konsentrasi 14,839 µl/ml dengan kemurnian 0,9581. Selain itu, (Ståhlberg and  Kubista,  2018)  menyatakan  bahwa  PCR juga dapat dilakukan menggunakan sampel sel tunggal.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini,  dapat disimpulkan bahwa purifikasi DNA dari sosis sapi  masih  dapat  dilakukan,  namun  kualitas DNA  hasil  purifikasi  dari  sosis  sapi  berada dibawah  standar  umum  untuk  PCR.  Metode preparasi  sampel freeze-drying menghasikan DNA dengan konsentrasi dan kemurnian yang lebih tinggi dibanding metode kering-oven dan sampel segar. Jumlah sampel tidak berpengaruh nyata  terhadap  konsentrasi  dan  kemurnian DNA hasil purifikasi dari sosis sapi .

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang  metode  purifikasi  DNA  dari  sosis sapi  untuk  menghasilkan  DNA  dengan konsentrasi  dan  kemurnian  yang  lebih  baik.
Tabel 2. Kemurnian DNA hasil ekstraksi dari sosis sapi dengan metode preparasi dan jumlah sampel yang berbeda. Preparasi Sampel Berat Sampel (mg) Rata-rata 25 50 75 100 Sampel segar 0,964 0,958 0,902 1,267 1,023±0,165 Kering oven 0,991 1,121 0,800 0,837 0,937±0,148 Freeze drying 1,22 0,864 0,908 1,061 1,014±0,163 Rata-rata 1,059±0,142 0,981±0,130 0,908±0,061 1,061±0,215 0,991±0,149

## JITP Vol. 9 No. 1,  2021
Perlu  dilakukan  pengujian  amplifikasi  untuk mengetahui  jenis  primer  DNA  barkode  yang sesuai  untuk  autentikasi  halal  pada  produk olahan hasil ternak.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  Kementerian  Riset  dan  Teknologi/ Badan  Riset  dan  Inovasi  Nasional  yang telah  mendanai  sepenuhnya  penelitian  ini melalui  Lembaga  Penelitian,  Publikasi,  dan Pengabdian  Masyarakat  (LP3M)  Universitas
Muhammadiyah Sidenreng
Rappang dengan  Skema  Penelitian  Dosen  Pemula (PDP).  Penulis  juga  ingin  menyampaikan penghargaan  kepada  Prof.  Asmuddin  Natsir yang  telah  mengizinkan  untuk  menggunakan Laboratorium  Bioteknologi  Terpadu  Fakultas Peternakan Universitas Hasanuddin Makassar dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Fatih, S., dan Z. F. Aditya. 2017. Perbandingan Hukum  Fatwa  Halal  di  Beberapa  Negara (Kajian Yuridis Fatwa Halal MUI dan Fatwa Halal  dari  Lembaga  Lain  di  Luar  Negeri. Perbandingan Hukum dan Perkembangan Sistem  Hukum.  Konvergensi  atau Divergensi. Univ. Airlangga, Surabaya. pp 1–25.
Al-Kahtani, H., E. Ismail, and M. Ahmed. 2017.
Pork  detection  in  binary  meat  mixtures and some commercial food products using conventional and real-time PCR techniques. Food Chem.,  219: 54–60.
Anderson,  J.,  D.  Wright,  and  K.  Meksem. 2013.  Agarose  Gel  Electrophoresis  and Polyacrylamide  Gel  Electrophoresis  for Visualization of Simple Sequence Repeats. In Microsatellites. Humana Press, Totowa, N J. pp. 167-177.
Asensio, L., I. González, T. García, and R. Martín. 2008.  Determination  of  food  authenticity by  enzyme-linked  immunosorbent  assay (ELISA). Food control, 19(1): 1-8.
Ballin, N., F. Vogensen, and A. Karlsson. 2009. Species determination–Can we detect and quantify  meat  adulteration.  Meat  Sci.,  83:
165–174.
Biase, F.H., M. M. Franco, L. R. Goulart, and R.
C.  Antunes.  2002.  Protocol  for  extraction of genomic DNA from swine solid tissues. Genet. Mol. Biol., 25: 313–315.
Borst,  P.  2005.  Critical  review  Ethidium  DNA agarose  gel  electrophoresis :  how  it started. IUBMB life, 57(11): 745-747.
Charity,  M.  L.  2017.  Jaminan  Produk  Halal  di Indonesia  (Halal  Products  Guarantee  in Indonesia). J. Legis Indonesia, 14: 99–108.
Chawla, H.S. 2004. Basic techniques. Introduction to plant biotechnology, 2 nd edition. Science Publishers, Inc., Enfield, NH, USA.
Hebert,  P.  D.  N.,  A.  Cywinska,  S.  L.  Ball,  and
R.  Jeremy.  2003.  Biological  identification through  DNA  barcodes  Biological identifications  through  DNA  barcodes. Proceedings of the Royal Society of London. Series B: Biological Sciences, 270(1512) pp. 313-321.
Herlina,  I.  Darmawan,  dan  A.  S.  Rusdianto. 2015.  Penggunaan  tepung  glukomanan umbi  Gembili  ( Dioscorea esculenta L.) sebagai  bahan  tambahan  makanan pada  pengolahan  sosis  daging  ayam.  J. Agroteknologi, 09: 134–144.
Hutami,  R.,  H.  Bisyri,  H.  Nuraini,  dan  R. Ranasasmita.  2018.  Ekstraksi  DNA  dari daging segar untuk analisis dengan metode loop-mediated  isothermal  amplification (LAMP). J. Agroindustri Halal, 4: 209–216
Joshi, M., and J. D. Deshpande. 2011. Polymerase chain  reaction :  methods  ,  principles  and application. Int. J. Biomed. Res., 2: 81–97.
Kim,  M.,  I.  Yoo,  S.  Y.  Lee,    Y.  Hong,  and  H. Y.  Kim.  2016.  Quantitative  detection  of pork  in  commercial  meat  products  by TaqMan®  real-time  PCR  assay  targeting the  mitochondrial  D-loop  region.  Food Chemistry, 210: 102-106.
Klein-nijenhuis,  A,  F.  Van-Holthoon,  and  G. Herregods. 2018. Validation and theoritical justification  of  an  LC-MS  method  for  the animal species specific detection of gelatin. Food Chem., 243: 461–467.
Kuswandi,  B.,  A.  Gani,  and  M.  Ahmad.  2017. Immuno  strip  test  for  detection  of  pork adulteration  in  cooked  meatballs.  Food Biosci., 19: 1–6.

## Purnomo, dkk
Nurjuliana,  M.,  Y.  Che-Man,  D.  Mat-Hashim, and A. Mohamed. 2011. Rapid identification of pork for halal authentication using the electronic  nose  and  gas  chromatography mass  spectrometer  with  headspace analyzer. Meat Sci., 88: 638–644.
Perestam,  A.,  K.  Fujisaki,  O.  Nava,  and  R. Hellberg.  2017.  Comparison  of  real-time PCR  and  ELISA-based  methods  for  the detection  of  beef  and  pork  in  processed meat products. Food Control, 71: 346–352.
Pestana, E., S. Belak, and A. Diallo. 2010. Early Rapid and Sensitive Veterinary Molecular Diagnostics  Real-time  PCR  Application. Springer  Science  &  Bussiness  Media., Dordrecht (DE).
Popping, B., C. Diaz-Amigo, and K. Hoenicke. 2010. Mollecular Biological and Immunological Techniques and Application for  Food Chemists.  John  Wiley  and  Sons, Inc., New Jersey, Canada.
Riffiani, R., N. Sulistinah, and B. Sunarko. 2015.
Comparison  of  three  dna  isolation  and purification  methods  of  bacterial  DNA. KnE Life Sci., 2: 491-494.
Sambrook,  J.,  F.  Fritsch,  and  T.  Miniatis.  1989. Molecular  Cloning  Laboratory  Manual. New  York  (US):  Cold  Spring  Harbor Laboratory Pr., 3 rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory  Press,  Cold  Spring  Harbor, New York.
Santoso, I., S. A. Mustaniroh, dan D. Pranowo. 2018.  Keakraban  produk  dan  minat  beli frozen  food:  peran  pengetahuan  produk, kemasan,  dan  lingkungan  sosial.  Jurnal Ilmu  Keluarga  &  Konsumen,  11(2):  133- 144.
Seipp, M. T., M. Herrmann, C. T. Wittwer. 2010. Automated DNA Extraction, Quantification, Dilution,  and  PCR  Preparation  for Genotyping by High-Resolution Melting. J. Biomol. Tech., 21: 163–166.
Soares, S., J. Amaral, M. Oliveira, and I. Mafra. 2013. A SYBR Green real-time PCR assay to detect and quantify pork meat in processed poultry meat products. Meat Sci., 95: 115– 120.
Ståhlberg,  A.,  and  M.  Kubista  2018.  Technical aspects  and  recommendations  for  single- cell qPCR. Mol. Aspects Med., 59: 28–35.
Stellwagen, N. C. 1998. DNA gel electrophoresis.
Nucleic  acid  electrophoresis  laboratory manual. D Tietz,. Springer Verlag, Berlin- Heidelberg-New York.
Sudjana.  2005.  Metoda  Statistika  Cetakan  III.
Tarsito, Bandung.
Zulaekah,  S.,  dan  Y.  Kusumawati  2015  Halal dan haram makanan dalam islam. SUHUF, 17: 25–35.