## EFEK PEMBERIAN KOMBINASI SIPROFLOKSASIN DAN A-MANGOSTIN SECARA
IN VITRO TERHADAP ERADIKASI UROPATOGEN ESCHERICHIA COLI
Maya Dian Rakhmawatie 1 , Afiana Rohmani 2
1. Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Muhammadiyah Semarang
2.  Bagian  Histologi  dan  Imunologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Muhammadiyah  Semarang
Korespondensi mayapriambodo83@gmail.com

## ABSTRAK
Latar  Belakang Persentase  resistansi Escherichia  coli  (E.  coli)  pada  pasien  ISK  terhadap  siprofloksasin  mencapai 73.04%.  Berbagai  usaha  untuk  memaksimalkan  penggunaan  antibiotika  telah  dilakukan,  termasuk  mengoptimalkan parameter  farmakokinetika/farmakodinamika  (PK/PD)  dari  masing-masing  antibiotika.  Dibutuhkan  usaha  lain  untuk mengoptimalkan  pengobatan  menggunakan  antibiotika  yang  telah  tersedia,  salah  satunya  mengkombinasikan  dengan menggunakan  senyawa  yang  berasal  dari  herbal,  misal  senyawa  aktif  a-mangostin.
Tujuan  Penelitian Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat  efek  pemberian  kombinasi  siproflokasin  dan  á-mangostin terhadap  eradikasi  uropatogen E. coli (UPEC).
Metode  Penelitian  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  memberi  perlakuan  terhadap  bakteri  uropatogen E.  coli (UPEC) secara in vitro. Perlakuan dibagi menjadi (a) kelompok  perlakuan menggunakan  kadar siprofloksasin  C max pada dosis 500 mg (2,4 µg/mL), (b) kelompok perlakuan menggunakan kadar siprofloksasin C max pada dosis 750 mg (4,3 µg/mL), (c) kelompok perlakuan menggunakan kadar siprofloksasin 2,4 µg/mL dan a-mangostin kadar 0,18 µg/mL, (d) kelompok perlakuan menggunakan kadar siprofloksasin 4,3 µg/mL dan a-mangostin 0,18 µg/mL.
Hasil penelitian menyatakan bahwa pemberian kombinasi siprofloksain dan á-mangostin dapat mencegah pertumbuhan bakteri uropatogen E. coli pada strain resisten siprofloksasin (nilai MIC 128 µg/mL) dibandingkan dengan pemberian siprofloksasin  saja,  namun  efek  tersebut  tidak  signifikan.  Untuk  uropatogen E.  coli  sensitif  (MIC  0,008  µ g/mL)  dan intermediat (MIC 0,5 µg/mL), tidak terdapat perbedaan efek penurunan jumlah koloni atau eradikasi antara pemberian kombinasi  siprofloksasin  dan  á-mangostin  dengan  pemberian  siproflokasin  tunggal.
Kesimpulan Pemberian  á-mangostin  dengan  kadar  0,18  µg/mL  yang  dikombinasikan  dengan  siprofloksasin  tidak memberikan  manfaat  nyata  dalam  eradikasi  uropatogen E.  coli, yang  diuji  secara  in  vitro.
Kata  kunci :  Siprofloksasin,  a-mangostin,  uropatogen E.  coli

## 192 Maya Dian R, et al.

## ABSTRACT
Background The  percentage  of  resistance Escherichia  coli  (E.  coli)  in  patients  with  UTI  to  ciprofloxacin  reached 73.04%.  Various  attempts  to  maximize  the  use  of  antibiotics  have  been  done,  including  optimizing  the  parameters pharmacokinetics/pharmacodynamics  (PK  /  PD)  of  each  antibiotic.  Another  effort  is  needed  to  optimize  the  use  of antibiotic  treatment  that  has  been  available,  one  of  which  combines  the  use  of  compounds  derived  from  herbs,  eg active  compounds  a-mangostin.
Objective The  purpose  of  this  study  is  to  find  the  effect  of  the  combination  of  á-mangostin  and  ciprofloxacin  on uropathogen E. coli (UPEC) eradication.
Methods  This  research  was  carried  out  by  treating  the  bacteria  uropathogen E.  coli (UPEC)  in  vitro.  Treatment  is divided  into  (a)  treatment  groups  using  ciprofloxacin  concentration  C max at  500  mg  dose  (2,4  µg/mL),  (b)  treatment groups  using ciprofloxacin  concentration  C max at  750 mg  dose  (4,3  µg/mL),  (c)  treatment  groups  using  ciprofloxacin concentration  2,4  µg/mL  and  a-mangostin  concentration  0,18  µg/mL,  (d)  treatment  groups  using  ciprofloxacin concentration  4,3 µg/mL and  a-mangostin  concentration 0,18  µg/mL.
Result  states  that  a  combination  of  á-mangostin  and  ciprofloxacin  can  prevent  the  growth  of  uropathogen E.  coli ciprofloxacin-resistant  strains  (MIC  value  of  128  µg/mL)  compared  to  administration  of  ciprofloxacin  alone,  but  the effect was not significant. On uropathogen E coli sensitive to ciprofloxacin (MIC 0,008 µg/mL) and intermediate (MIC 0,5 µg/mL), there was no difference effect  of decreasing the number of colonies between awarding a  combination of ciprofloxacin and á-mangostin compared administering ciprofloxacin only.
Conclusion Provision of á-mangostin grading 0,18 µg/mL combined with ciprofloxacin had no real benefit in eradicating uropathogen E.  coli,  which  is  tested  in  vitro.
Keyword : ciprofloxacin, a-mangostin, uropathogen E. coli

## PENDAHULUAN
Resistensi  bakteri  terhadap  berbagai  golongan antibiotika  meningkat,  sementara  pengembangan antibiotika  terkendala  waktu  dan  biaya  yang  besar. Oleh  karena  itu,  diperlukan  optimalisasi  penggunaan antibiotika yang tersedia 1 . Resistensi juga terjadi pada siprofloksasin  yang  digunakan  untuk  pengobatan infeksi saluran kemih (ISK), suatu infeksi yang cukup banyak diderita oleh manusia. Sebanyak 40-50% wanita usia  dewasa  pernah  mengalami  ISK  dalam  periode hidupnya 2 .  Menurut  Mandal et  al.  (2012),  persentase resistansi Escherichia  coli  (E.  coli)  pada  pasien  ISK terhadap  siprofloksasin telah  mencapai 73,04% 3 .
Berbagai  usaha  untuk  memaksimalkan  penggunaan antibiotika telah dilakukan, termasuk mengoptimalkan parameter farmakokinetika / farmakodinamika (PK/PD) dari  masing-masing  antibiotika  tersebut 4 .  Namun, beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa  optimalisasi
parameter PK/PD tidak sepenuhnya dapat mengurangi kejadian resistensi antibiotika. Penelitian Rakhmawatie (2012) yang menggunakan model simulasi kinetika in vitro,  melihat  pengaruh  siproflokasin  terhadap resistensi  bakteri  uropatogen E.  coli.  Hasil  penelitian menunjukkan terjadi penurunan jumlah bakteri pada 2 jam  pertama  pemberian  siprofloksasin  dosis  750  mg yang berbeda secara signifikan dibandingkan pemberian siprofloksasin dosis 500 mg. Namun setelah perlakuan 3 hari, kedua kelompok perlakuan membentuk bakteri uropatogen E.  coli  yang  resisten 5 .
Eradikasi dan terbentuknya bakteri E. coli yang resisten selain  dipengaruhi  oleh  dosis  siprofloksasin  yang diberikan juga dipengaruhi nilai MIC awal dari bakteri E. coli. Hal tersebut disebabkan karena aksi farmakologi s i p r o f l o k s a s i n t e r g a n t u n g p a d a p a r a m e t e r P K / P D A U C 0- 24 /MIC  dan  C max /MIC.  Semakin  tinggi  dosis siprofloksasin yang digunakan akan meningkatkan nilai parameter AUC 0-24 /MIC. Oleh karena itu, untuk eradikasi
Efek  Pemberian  Kombinasi  Siprofloksasin  dan  A-Mangostin Seacara  In  Vitro  Terhadap  Eradikasi  Uropatogen  Escherichia  Coli 193
optimal dibutuhkan dosis siprofloksasin yang semakin besar  serta  nilai  MIC  bakteri E.  coli  yang  semakin kecil 6 .
Berbagai  sediaan  herbal  diketahui  bermanfaat  dalam pencegahan  atau  penyembuhan  penyakit  infeksi, contohnya  cranberry  (Vaccinium  macrocarpon  Ait.). Pemberian  72  mg/hari  proanthocyanidins  (PACs) cranberry  terstandar  dalam  bentuk  bubuk  dapat mencegah  adhesi  dan  virulensi  bakteri  uropatogen E. coli.  Namun  herbal  tersebut  jarang  ada  di  Indonesia, kalaupun ada harganya cukup mahal 7 . Salah satu herbal yang banyak didapatkan di Indonesia dan mempunyai aktivitas  anti  bakteri  adalah  tanaman  manggis (Garcinia mangostana L.). Zat pada tanaman manggis yang mempunyai efek farmakologis sebagai anti bakteri adalah  alfa  mangostin 8 .
Resistensi  bakteri  terhadap  fluorokuinolon  terkait dengan  regulatori  gen  yang  mempengaruhi permeabilitas  fluorokuinolon  masuk  ke  dalam  sel bakteri 9 . Efek alfa mangostin sendiri adalah bakterisida dengan  mekanisme  aksi  merusak  integritas  membran sitoplasma bakteri sehingga komponen intrasel bakteri keluar.  Aktivitas  tersebut  tergantung  dosis 10 .  Oleh karena itu, diharapkan alfa mangostin dapat mencegah resistensi  dengan  cara  meningkatkan  masuknya antibiotika siprofloksasin ke dalam sel bakteri. Tujuan dari  penelitian  ini  adalah  menguji  efek  pemberian kombinasi alfa mangostin dan siprofloksasin secara in vitro  terhadap  eradikasi  bakteri  uropatogen E.  coli.

## METODE PENELITIAN

## Populasi dan sampel penelitian
Penelitian ini adalah penelitian eksperimental. Populasi penelitian  adalah  uropatogen E.  coli yang  didapatkan dari  isolat  pasien  ISK  RS  Roemani  Muhammadiyah Semarang. Sampel penelitian adalah tiga kelompok E. coli yang  terdiri  dari strain rentan, strain intermediat, dan  strain  resistan  terhadap  siprofloksasin.  Penilaian kategori  kerentanan E.  coli  mengacu  pada  EUCAST (2012), yaitu kategori rentan dengan nilai MIC d” 0,5 mg/L, strain E. coli intermediat dengan nilai MIC 0,5 – 1 mg/L, dan strain E. coli resisten dengan nilai MIC > 1 mg/L 11 .

## Cara penelitian
Untuk  tahap  pertama  dilakukan  isolasi  uropatogen E. coli  dari  sampel  urin  pasien  ISK  di  RS  Roemani Muhammadiyah  Semarang.  Uropatogen E.  coli  yang didapatkan dari isolat klinik diuji terlebih dahulu nilai MIC  sebelum  perlakuan,  menggunakan  metode  CLSI (2012) 12 . Setelah didapatkan nilai MIC pada uropatogen E. coli, kemudian masing-masing dari ketiga kelompok strain  uropatogen E.  coli  kemudian  diberi  perlakuan, yaitu  (I)  kelompok  perlakuan  menggunakan  kadar siprofloksasin  C max pada dosis  500  mg, (II) kelompok perlakuan menggunakan kadar siprofloksasin C max pada dosis 750 mg, (III) kelompok perlakuan menggunakan kadar  siprofloksasin  C max pada  dosis  500  mg  dan  alfa mangostin, dan (IV) kelompok perlakuan menggunakan kadar  siprofloksasin  C max pada  dosis  750  mg  dan  alfa mangostin  (skema  gambar  1).  Selain  kelompok perlakuan, terdapat kelompok kontrol negatif (V), yang digunakan  untuk  melihat  sterilitas  media  dan  pelarut yang  digunakan  dalam  penelitian.
Pemberian  dosis  alfa  mangostin  berdasar  pada  profil kadar  maksimal  dalam  darah  setelah  pemberian  jus manggis  60  mL  per  hari 13 .  Penelitian  tersebut menyatakan bahwa 60 mL jus manggis menyediakan ± 3,07  mmol/L  á-mangostin.  Kadar  maksimal  dalam  á- mangostin  dalam  darah  dicapai  pada  waktu  3,7  ±  2,4 jam  dengan  kadar  maksimal  pada  salah  satu  subyek penelitian sebesar 450 nmol/L atau setara dengan kadar 0,18  µg/mL.  Kadar  tersebut  yang  digunakan  sebagai acuan  kelompok  perlakuan  (III)  dan  (IV).  Kadar siprofloksasin perlakuan berdasar pada kadar maksimal siprofloksasin  dalam  darah  setelah  pemberian  dosis siprofloksasin 500 mg dan 750 mg, yaitu berturut-turut 2,4 dan 4,3 µg/mL 14 .
Setiap  kelompok  perlakuan  pada  semua  strain uropatogen E. coli kemudian diinkubasi selama 2 jam pada  suhu  37°C.  Jumlah  koloni  awal  bakteri  yang diinginkan  sebelum perlakuan  adalah 2x10 5 CFU/mL. Jumlah  koloni  tersebut  berdasarkan  pada  patogenesis ISK, yaitu jumlah minimal bakteri untuk menimbulkan gejala bakteriuria.
Setelah  2  jam  inkubasi  pertama,  kemudian  dilakukan prosedur hitung jumlah koloni untuk melihat efektivitas atau  penurunan  jumlah  koloni  bakteri  dibandingkan

## 194 Maya Dian R, et al.
awal  sebelum  perlakuan.  Proses  perhitungan  jumlah koloni  setelah  2  jam  perlakuan  dimulai  dengan menggores  sejumlah  volume  tertentu  dari  masing- masing perlakuan ke media agar Mueller Hinton Agar (MHA). Penggoresan sejumlah volume tertentu bakteri dalam  media  cair  harus  memperhatikan  faktor pengenceran,  karena  perhitungan  jumlah  koloni dianggap  valid  jika  jumlah  koloni  dalam  media  agar antara 30-300 koloni 15 .

## Pengolahan dan analisis data
Data  hasil  sebelum  dan  sesudah  perlakuan  dianalisis. Data  pengujian  efek  eradikasi  kombinasi  á-mangostin dan  siprofloksasin  adalah  jumlah  koloni  bakteri. Penurunan  jumlah  koloni  bakteri  setelah  2  jam
perlakuan dan inkubasi dilakukan dengan mengurangi jumlah koloni 2 jam setelah perlakuan dengan jumlah koloni  bakteri  uropatogen E.  coli  awal  sebelum perlakuan.  Perbedaan  efek  tiap  perlakuan  dianalisis dari masing-masing kategori strain uropatogen E. coli. Hal  tersebut  digunakan  untuk  melihat  pengaruh  dosis siprofloksasin  dan  atau  diberikan  secara  kombinasi dengan  á-mangostin  pada  tiap  kategori  strain uropatogen E.  coli.  Data  di  analisis  dengan menggunakan uji t statistik. Data signifikansi ada atau tidaknya  perbedaan  pengaruh  dosis  perlakuan  antar grup  strain uropatogen E. coli  juga  dilakukan  apabila terdapat  signifikansi  pada  uji  t-statistik  tiap  kategori strain  uropatogen E.coli.  Uji  dilakukan  menggunakan statistik  analisis  varian.
Kelompok Strain Uropatogen E. coli Rentan/Intermediat/Resisten Koloni 10 5 CFU/mL
Koloni 10 5 CFU/mL V IV III II I Masing-masing kelompok perlakuan diinkubasi pada suhu 37  C selama 2 jam
Hitung jumlah koloni masing- masing kelompok perlakuan
Analisis perbedaan jumlah koloni sebelum dan sesudah perlakuan (uji t statistika)
Gambar 1. Skema alur perlakuan I, II, III, IV, dan V pada masing-masing kelompok strain bakteri E. coli dengan tingkat kerentanan yang berbeda (Ket. (I) Siprofloksasin dosis 500 mg, (II) Siprofloksasin dosis 750 mg, (III) Siprofloksasin dosis  500  mg dan  alfa  mangostin,  (IV)  Siprofloksasin  dosis  750  mg dan  alfa  mangostin.

## HASIL PENELITIAN
Isolasi  uropatogen E.  coli  dari  sampel  urin  pasien ISK di RS Roemani Muhammadiyah Semarang.
Isolasi uropatogen E.  coli  dilakukan  dari  sampel  urin pasien  ISK  RS  Roemani  Muhammadiyah  Semarang.
Periode  pengambilan  sampel  urin  dilakukan  dari  12 Maret  hingga  7  Mei  2015.  Total  waktu  pengambilan mendapatkan sampel urin adalah 13 hari dengan total 33 sampel urin.  Dari  33 sampel urin yang didapatkan dari  RS  Roemani,  hanya  3  (tiga)  sampel  urin  yang positif terdapat uropatogen E.coli. Sampel uropatogen
E.  coli  tersebut  kemudian  dikoding  dengan  kode sampel A, B, dan  C.
Penetapan kadar MIC uropatogen E. coli sebelum perlakuan.
Berdasarkan hasil penetapan uji MIC maka sampel A dan  B  dikategorikan  sebagai  bakteri  uropatogen E. coli resisten terhadap siprofloksasin karena nilai MIC lebih  dari  1  mg/L  (1  µg/mL).  Sampel  A  digunakan untuk penelitian, dengan nilai MIC 128 µg/mL. Sampel B  tidak  digunakan  karena nilai  MIC  lebih  tinggi  dari 128 µg/mL. Sampel C merupakan strain uropatogen E. coli sensitif terhadap siprofloksasin dengan nilai MIC 0,008  µg/mL  (nilai  d”  0,5  µg/mL).  Untuk  strain uropatogen E.  coli  kelompok  intermediat  terhadap siprofloksasin  dibuat  dengan  memodifikasi  jumlah koloni awal sampel C, sehingga didapatkan nilai MIC 0,5 µg/mL.

## Perlakuan pada uropatogen E. coli.

## Masing-masing dari ketiga kelompok strain uropatogen
E.  coli  yaitu  strain  resisten  (sampel  A  dengan  nilai MIC 128µg/mL), strain intermediat (sampel D dengan nilai  MIC  0,5  µg/mL),  dan  strain  sensitif  terhadap siprofloksasin (sampel C dengan nilai MIC 0,008 µ g/ mL) kemudian dibagi dalam lima kelompok perlakuan, yaitu  (I)  memberi  perlakuan  pada  sejumlah  masing- masing strain uropatogen E. coli dengan siprofloksasin sesuai kadar rata-rata C max subyek manusia pada dosis 500 mg yaitu 2,4 µ g/mL; (II) memberi perlakuan pada sejumlah  masing-masing  strain  uropatogen E.  coli dengan siprofloksasin sesuai kadar rata-rata C max pada dosis 750 mg yaitu 4,3 µg/mL, (III) memberi perlakuan pada  sejumlah  masing-masing  strain  uropatogen E. coli  dengan  siprofloksasin  sesuai  kadar  rata-rata  C max pada dosis 500 mg (2,4 µg/mL) dan á-mangostin sesuai kadar maksimal subyek manusia setelah pemberian 60 mL jus manggis (0,18 µg/mL), (IV) memberi perlakuan pada  sejumlah  masing-masing  strain  uropatogen E. coli  dengan  siprofloksasin  sesuai  kadar  rata-rata  C max pada dosis 750 mg (4,3 µg/mL) dan á-mangostin sesuai kadar maksimal subyek manusia setelah pemberian 60 mL  jus  manggis  (0,18  µg/mL),  serta  (V)  kelompok kontrol  negatif.
Penelitian  ini  melihat  efek  terapi  masing-masing perlakuan dengan menghitung penurunan jumlah koloni setelah  2  jam  perlakuan  atau  inkubasi.  Pengukuran efek terapi masing-masing perlakuan pada 2 jam setelah perlakuan  untuk  melihat  seberapa  cepat  perlakuan dapat membunuh bakteri di awal pemberian. Uropatogen E.  coli  atau  strain E.  coli  pada  umumnya  dapat bermutasi  dan  berkembang  menjadi  resisten  dengan cepat,  terutama  apabila  diberikan  dosis  obat  yang subterapeutik 16 .
Penurunan  jumlah  koloni  setelah  2  jam  perlakuan dihitung  dengan  mengurangi  jumlah  koloni  awal perlakuan  dengan  jumlah  koloni  2  jam  setelah perlakuan.  Jumlah  koloni  2  jam  setelah  perlakuan dihitung  dengan  cara  mengambil  sejumlah  volume tertentu  dari  masing-masing  sampel  perlakuan  dan digoreskan  di  cawan  petri  berisi  media  MHA.
Beberapa  metode  dapat  digunakan  untuk  menghitung sel  bakteri  suatu  sampel,  antara  lain  (1) viable  count, hanya  menghitung  sel  yang  aktif  dan  hidup  secara metabolik, (2) total count, menghitung sel bakteri hidup dan  mati,  (3) direct  count,  menghitung  jumlah  koloni secara  langsung,  serta  (4) indirect  count,  menghitung jumlah  sel  misalnya  berdasarkan  hamburan  sel  yang dikultur (pembacaan absorbansi) dengan spektrofotometer.  Untuk  perhitungan  jumlah  koloni  2 jam  setelah  perlakuan  menggunakan  metode viable count,  dengan  asumsi  mengukur  sel  yang  hidup  yang akan  tumbuh  ketika  dikultur  pada  suatu  media  yang sesuai.
Jika  melihat  pada  hasil  tabel  1  maka  dapat  dikatakan bahwa  seluruh  perlakuan  I  hingga  IV  tidak  dapat membunuh  bakteri  pada  awal  2  jam  perlakuan.  Nilai minus  menunjukkan  adanya  kecenderungan peningkatan  jumlah  bakteri  di  awal  2  jam  perlakuan. Nilai MIC dari uropatogen E. coli sampel A adalah 128 µg/mL, lebih besar daripada nilai kadar siprofloksasin yang  diberikan  pada  perlakuan  I  (2,4  µ g/mL)  dan perlakuan II (4,3 µg/mL).
Kelompok Strain Uropatogen E. coli Rentan/Intermediat/Resisten Koloni 10 5 CFU/mL
Koloni 10 5 CFU/mL V IV III II I

## Masing-masing kelompok perlakuan diinkubasi
pada suhu 37  C selama 2 jam Hitung jumlah koloni masing- masing kelompok perlakuan
Analisis perbedaan jumlah koloni sebelum dan sesudah perlakuan (uji t statistika)
Tabel 1. Nilai rata-rata, standar deviasi, dan koefisien variasi penurunan jumlah log koloni sampel A setelah 2  jam  perlakuan  pada  masing-masing  kelompok perlakuan
Kelompok Perlakuan Rata-Rata ± SD Koefisien Variasi (%)
Gambar 2. Grafik perbedaan penurunan jumlah koloni (rata-rata ± SD) setelah 2 jam perlakuan pada sampel A.  Kelompok  perlakuan  I  (-0,278),  II  (-0,222),  III  (- 0,140), dan IV (-0,182)
Nilai  rata-rata  pertambahan  jumlah  koloni  pada kelompok perlakuan III dan IV berbeda dibandingkan kelompok perlakuan I dan II, namun perbedaan tersebut tidak  bermakna  karena  rentang  deviasi  yang  cukup besar.  Meskipun  demikian,  penambahan  á-mangostin pada pemberian siprofloksasin di kelompok perlakuan III dan IV, menunjukkan terdapat manfaat pemberian á- mangostin  dalam  mencegah  multiplikasi  atau pertumbuhan uropatogen E. coli sampel A (Gambar 2).
Gambar 3. Grafik perbedaan penurunan jumlah koloni (rata-rata  ± SD) setelah 2 jam perlakuan  pada sampel C. Kelompok perlakuan I (2,064), II (2,024), III (1,844), dan IV (1,964)
Pada sampel C, terdapat penurunan jumlah koloni pada seluruh kelompok perlakuan setelah diinkubasi selama 2 jam. Jika dilihat dari nilai rata-rata penurunan jumlah koloni sampel C, maka tidak terdapat perbedaan antara seluruh kelompok perlakuan (Gambar 3 dan Tabel 2).
Tabel 2. Nilai rata-rata, standar deviasi, dan koefisien variasi penurunan jumlah log koloni sampel C setelah 2  jam  perlakuan  pada  masing-masing  kelompok perlakuan
Kelompok Perlakuan Rata-Rata ± SD Koefisien Variasi (%)
Gambar  4.  Grafik  perbedaan  penurunan  koloni  (rata- rata  ±  SD)  setelah  2  jam  perlakuan  pada  sampel  D. Kelompok perlakuan I (1,034), II (0,976), III (1,052), dan IV (1,006)
Kelompok Perlakuan Rata-Rata ± SD Koefisien Variasi (%) I -0,278 ± 0 ,03 0,11 II -0,222 ± 0 ,13 0,61 III -0,140 ± 0 ,14 1,02 IV -0,182 ± 0 ,26 1,45
Kelompok Perlakuan Rata-Rata ± SD Koefisien Variasi (%) I 2,064 ± 0,33 0,16 II 2,024 ± 0,27 0,14 III 1,844 ± 0,26 0,14 IV 1,964 ± 0,08 0,04
Untuk sampel D, juga terlihat adanya penurunan jumlah koloni  bakteri  pada  semua  kelompok  perlakuan  pada inkubasi  2  jam  pertama.  Namun  penambahan  á- mangostin tidak meningkatkan penurunan jumlah koloni bakteri  sampel  D  (Gambar  4  dan  Tabel  3).  Jika dibandingkan dengan sampel C, maka penurunan jumlah koloni  bakteri  sampel  C  lebih  besar  dibandingkan sampel  D. Hal  tersebut  dapat  disebabkan karena  nilai MIC sampel C (0,008 µg/mL) lebih kecil dari nilai MIC sampel D (0,5 µg/mL).
Tabel  3.  Nilai  rata-rata,  standar  deviasi,  dan koefisien variasi penurunan  jumlah log koloni sampel D  setelah  2  jam  perlakuan  pada  masing-masing kelompok perlakuan
Kelompok Perlakuan Rata-Rata ± SD Koefisien Variasi (%)
Untuk  melihat  perbedaan  penurunan  jumlah  koloni setelah  2  jam  perlakuan  pada  tiap  kelompok  strain uropatogen E. coli, dapat dilihat dari gambar 5 berikut:
Gambar  5.  Rata-rata  penurunan  jumlah  koloni uropatogen E. coli setelah 2 jam perlakuan, sampel A, C,  dan  D.

## PEMBAHASAN
Penggunaan kombinasi antibiotik bertujuan mengurangi dosis  masing-masing  obat,  sehingga  diharapkan kejadian  efek  obat  yang  tidak  diinginkan  (adverse drug  reaction)  dari  kedua  antibiotik  akan  berkurang. Selain itu, kombinasi antibiotik akan sangat bermanfaat
apabila  salah  satu  obat  dan  bekerja  dengan menghambat resistensi suatu bakteri terhadap antibiotik yang  lain.  Contoh  yang  paling  baik  adalah  asam klavulanat yang diberikan bersama dengan amoksisilin, dengan  tujuan  mengurangi  resistensi  bakteri  terhadap amoksisilin. Asam klavulanat berguna untuh mencegah pembentukan  enzim  penisilinase  yang  akan  merusak amoksisilin.
Penelitian  mengenai  kombinasi  antibiotik  dengan beberapa  ekstrak  kasar  (crude  extract)  atau  isolat murni  tanaman  mulai  dilakukan  untuk  menemukan kombinasi  yang  baik  seperti  pada  penggunaan amoksisilin dan asam klavulanat. Hal tersebut dilakukan untuk  optimalisasi  penggunaan  antibiotik  yang  ada, serta  untuk  pencegahan  resistensi  bakteri  terhadap antibiotik  yang  telah  tersedia 17 .
Penelitian ini bertujuan untuk melihat apakah kombinasi á-mangsotin  dan  siprofloksasin  lebih  efektif dibandingkan  penggunaan  siprofloksasin  saja.  Secara teori,  á-mangostin  mempunyai  target  pada  membran bakteri,  yang  menghasilkan  aksi  bakterisidal  cepat. Efek  pada  membran  bakteri  tersebut  juga  diharapkan dapat mengalihkan resistansi dengan cara menurunkan kemungkinan mutasi terkait struktur membran bakteri 10 . Namun pada penelitian ini efek á-mangostin tidak terlihat membantu dari efek siprofloksasin terhadap uropatogen E. coli. Pengurangan jumlah koloni bakteri 2 jam setelah perlakuan  pada  bakteri  yang  masih  sensitif  dan intermediat  terhadap  siprofloksasin  tidak  berbeda bermakna, baik pada kelompok perlakuan siprofloksasin saja  atau  pada  kelompok  perlakuan  kombinasi  á- mangostin  dan  siprofloksasin  (Gambar  3  dan  4).
Ibrahim et al (2014) melakukan penelitian menggunakan kombinasi á-mangostin dengan enam macam antibiotik yaitu  ampisilin,  doksisiklin,  penisilin  G,  streptomisin, tetrasiklin,  dan  nistatin.  Uji  pemberian  kombinasi  á- mangostin  dengan  salah  satu  antibiotik  tersebut dilakukan  telah  dilakukan  pada  bakteri  Gram  +  (S. aureus  dan B.  cereus )  serta  bakteri  Gram  –  ( P. aeruginosa  dan E.  coli).  Hasil  menunjukkan  bahwa tidak  terdapat  interaksi  yang  mengguntungkan  antara á-mangostin  dan  antibiotik  dalam  membunuh  bakteri. Senyawa á-mangostin sendiri juga tidak aktif terhadap bakteri  dibandingkan  dengan  ekstrak  kasar  kulit manggis untuk  membunuh bakteri. Hal  tersebut dapat
Kelompok Perlakuan Rata-Rata ± SD Koefisien Variasi (%) I 1,034 ± 0,17 0,17 II 0,976 ± 0,10 0,10 III 1,052 ± 0,14 0,13 IV 1,006 ± 0,04 0,04 Kelompok Perlakuan Rata-Rata ± SD Koefisien Variasi (%) I 2,064 ± 0,33 0,16 II 2,024 ± 0,27 0,14 III 1,844 ± 0,26 0,14 IV 1,964 ± 0,08 0,04

## 198 Maya Dian R, et al.
disebabkan karena pada ekstrak kasar terdapat senyawa lain yang dapat meningkatkan efek dari á-mangostin 16 .
Penelitian  lain  mengenai  efek  á-mangostin  pada pertumbuhan bakteri telah dilakukan. Bakteri Gram + dinyatakan  lebih  sensitif  terhadap  á-mangostin dibandingkan bakteri Gram – 10 . Bakteri Gram – seperti Klebsiella spp, Proteus mirabilis, dan E. coli dikatakan hanya  moderat  rentan  terhadap  senyawa  xanthon, dibandingkan  bakteri  Gram  + 18 .  Isolat  á-mangostin dari  hasil  ekstraksi  etil  asetat Garcinia  mangostana ditemukan aktif terhadap S. aureus dan Mycobacterium tuberculosis dengan nilai MIC 3,2 µ g/mL dan 1,5 µ g/ mL. Namun pada penelitian tersebut disebutkan bahwa á-mangostin  tidak  aktif  terhadap E.  coli  dengan  nilai IC50 > 200 µg/mL 19 .
Penelitian  menggunakan  ekstrak  etanol  dan  ekstrak encer  dari  kulit Garcinia  mangostana  linn  untuk menentukan  nilai  MIC  dan  MBC  terhadap E.  coli. Hasil menunjukkan nilai MIC dan MBC ekstrak etanol Garcinia  mangostana  Linn  terhadap E.  coli  adalah 2000 µg/mL, nilai MIC dan MBC ekstrak encer terhadap E. coli adalah 4000 µg/mL 20 .
Penelitian  lain  dari  penggunaan  ekstrak  metanol Garcinia  mangostana,  didapatkan  zona  hambat  pada penggunaan  ekstrak  500  µg/mL pada bakteri  Gram + (Bacillus  subtilis, S.  aureus, S.  faecalis)  dan  tidak terdapat zona hambat pada bakteri Gram – ( E. coli dan P.  aeruginosa) 21 .
Melihat hasil penelitian, tidak terlihat efek á-mangostin pada penurunan jumlah koloni 2 jam perlakuan bakteri uropatogen E.  coli  sensitif  atau  intermediat siprofloksasin.  Namun  pada  bakteri  uropatogen E. coli  resisten  terdapat  pertumbuhan  atau  multiplikasi bakteri  yang  lebih  lambat  pada  kelompok  perlakuan kombinasi á-mangostin dan siprofloksasin dibandingkan kelompok perlakuan siprofloksasin saja (Gambar 2). Hal tersebut didukung penelitian Rahmawati (2010)  bahwa  kombinasi  ekstrak  kulit  manggis  yang mengandung á-mangostin dengan siprofloksasin dapat menghambat E.  coli  multiresiten  jika  dibandingkan dengan  penggunaan  tunggal  siprofloksasin  atau ekstrak  kulit  manggis  saja 22 .
Untuk itu diperlukan penelitian lanjutan, salah satunya dengan  meningkatkan  kadar  á-mangostin  yang
digunakan. Peningkatan kadar akan meningkatkan resiko toksisitas apabila digunakan secara in vivo.  Meskipun salah  satu  uji  sitotoksik,  dilakukan  pada  sel  gingival fibroblast  manusia  selama  6  jam  menggunakan  á- mangostin kadar 4000 µg/mL terbukti tidak toksik 23 .
Pelarut  á-mangostin  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  metanol.  Hampir  semua  pelarut  non  polar atau pelarut organik yang biasa digunakan pada industri farmasi dapat digunakan untuk melarutkan á-mangostin, contohnya  etanol,  metanol,  propilen  glikol, dimetilformamide, aseton, atau heksan. Pada penelitian ini  dipilih  metanol,  disesuaikan  dengan  petunjuk pelarutan  di  label  kemasan  á-mangostin.  Metanol sendiri dikategorikan sebagai pelarut kelas 2 oleh Food and Drug Administration (FDA), yang penggunaannya dibatasi di industri farmasi karena cukup toksik. Kadar metanol maksimum harian adalah 3000 ppm atau setara dengan 3 mg metanol dalam tiap mL, setara dengan 380 µ L  metanol  dalam  100,0  mL  larutan  pengencer (akuades).  Namun  menurut  petunjuk  pelarutan  dalam kemasan, á-mangostin dilarutkan dalam metanol dengan kadar 1 mg/mL. Penggunaan metanol dalam penelitian 1000 µL dalam 100,0 larutan pengencer (akuades) atau lebih tinggi tiga kali lipat dibandingkan batas maksimal harian  penggunaan  metanol 24 .
Selain  itu,  meskipun  etanol  dapat  digunakan  sebagai pelarut yang lebih aman, namun efek bakterisidal etanol lebih  besar  daripada  metanol  dan  dikhawatirkan mengganggu  perlakuan.  Metanol  merupakan bakterisidal terlemah dari golongan alkohol 25 .

## KESIMPULAN
Pemberian  kombinasi  siprofloksain  dan  á-mangostin dapat  mencegah  pertumbuhan  bakteri  uropatogen E. coli  pada  strain  resisten  (nilai  MIC  128  µ g/mL) dibandingkan  dengan  pemberian  siprofloksasin  saja. Namun  untuk  uropatogen E.  coli  sensitif  (MIC  0,008 µg/mL) dan intermediat (MIC 0,5 µg/mL), tidak terdapat perbedaan efek penurunan jumlah koloni atau eradikasi antara  pemberian  kombinasi  siprofloksasin  dan  á- mangostin  dengan  pemberian  siproflokasin  tunggal.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Drussano,  G.L.  2007.  Pharmacokinetics  and pharmacodynamics of antimicrobial. Clin Infect Dis. 45:589-595.
2.  Hooton,  TM.  2000.  Pathogenesis  of  urinary  track infections:  an  update. Journal  of  antimicrobial chemotherapy 46. Suppl. S1:1-7
3.  Mandal  J,  Acharya  S,  Buddhapriya  D,  Parija  SC. 2012. Antibiotic resistance  pattern among  common bacterial  uropathogens  with  a  special  reference  to ciprofloxacin  resistant Escherichia  coli.
4. Gloede, J., Scheerans, C., Derendorf, H., and Kloft, C.  2010. In  vitro  pharmacodynamic  models  to determine  the  effect  of  antibacterial  drugs. J Antimicrob Chemother 65:186-201.
5. Rakhmawatie  MD, Mustofa.  2012.  Efek  perbedaan dosis  siprofloksasin  pada  resistensi  uropatogen Escherichia  coli:  simulasi  model  kinetika  in  vitro. Tersedia dalam etd.ugm.ac.id.
6.  Olofsson,  S.K.,  Marcusson,  L.L.,  Stromback,  A., Hughes, D., and Cars, O. 2007. Dose related selection of  fluoroquinolone  resistant  escherichia  coli. J Antimicrob Chemother 60:795-801.
7. Howell AB., Botto H., Combescure C., Blanc-Pottard A.,  Gausa  L.,  Matsumoto  T.,  et  al.  2010.  Dosage effect  on  uropathogenic Escherichia  coli  anti- adhesion activity in urine following consumption of cranberry powder standardized for proanthocyanidin content:  a  multicenteric  randomized  double  blind study. BMC  (Biomedcentral)  Infectious  Disease Vol.10:94
8.  Chaverri  JP,  Rodriguez  NC,  Ibarra  MO,  and  Rojas JMP.  2008.  Review  Medicinal  properties  of mangosteen  (Garcinia  mangostana). Food  and Chemical Toxicology Vol. 46: 3227-3239
9. Allou,  N.,  Cambau,  E.,  Massias,  L.,  Chau,  F.,  and Fantin,  B.,  2009.  Impact  of  low-level  resistance  to fluoroquinolones due to qnrA1 and qnrS1 genes or a gyrA mutation on ciproûoxacin bactericidal activity in a murine model of Escherichia coli urinary tract infection. Antimicrob Agents Chemother 53(10):4292- 4297.
10.Koh  JJ,  Qiu  S,  Zou  H,  LakshminarayananR,  Li  J, Zhou  X,  et  al.  2013.  Rapid  bactericidal  action  of alpha-mangostin  against  MRSA  as  an  outcome  of membrane targeting. Biochimica et Biophysica Acta Vol 1828(2): 834-44
11.EUCAST. 2012. Breakpoint tables for interpretation of MIC and zone diameters. European Committee on Antimicrobial  Susceptibility  Testing.  Diakses  11 Maret 2012 dari www.eucast.org/clinical_breakpoints/
12.CLSI.  2012.  Methods  for  dilution  antimicrobial susceptibility test for bacteria that grow aerobically; approved standard ninth edition. CLSI M07-09 Vol. 32(2).
13.Chitchumroonchokchai C, Riedl KM, Suksumrarn S, Clinton  SK,  Kinghorn  AD,  and  Faila  ML.  2012. Xanthones  in  mangosteen  juice  are  absorbed  and partially  conjugated  by  healthy  adults. Journal  of Nutrition Vol 142(4): 675-680
14.FDA. 2011. Ciprofloxacin. Ciprofloxacin Official FDA Information,  Side  Effect,  and  Uses.  Diakses  15 September  2011  dari http://www.drugs.com/pro/ ciprofloxacin.html
15.Fardiaz,  S.  1992.  Mikro  pangan  I.  Jakarta:  PT. Gramedia Pustaka.
16.Van der Horst, MA., Schuurmans, JM., Smid, MC., Koenders,  BB.,  and  ter  Kuile,  BH.  2011.  De  novo acquisition  of  resistance  to  three  antibiotic  by Escherichia  coli. Microb.  Drug  Resist,  Vol.  17(2): 141-7
17.Ibrahim  NHS,  Taher  M,  Susanti  D,  Amroudine MZAM, dan Ahmed QU. 2014. Direct and indirect antimicrobial  effects  of  á-mangostin  on  pathogenic microorganism. Journal  of  Coastal  Life  Medicine, Vol. 2(1): 70-5
18.Ibrahim  MY,  Hashim  NM,  Mariod AA,  Mohan  S, Abdulla MA, Abdelwahab SI, dan Arbab IA. 2014. Review: á-mangostin from Garcinia mangostana Linn: An updated review of its pharmacological properties.