## EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum) MENURUNKAN KADAR GULA DARAH MENCIT DIABETES
Submitted : 8 April 2015 Edited : 10 Mei 2015 Accepted : 20 Mei 2015
Ambali Azwar Siregar 1,2 , Urip Harahap 2 , Mardianto 3
1 Departemen Keperawatan, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Indah, Medan
2 Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Medan
3 Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara, Medan E-mail : siregarambali@gmail.com

## ABSTRACT
Diabetes mellitus is one of desease that have a large population and trend to increase. sulfonylurea and  biguanide  are  almost  used  treatment  but  have  unexpected  side  effects.  The  research  still  necessary  to seek alternative medicine, such as Piper crocatum.
This study aimed to determine the effect of ethanol extract of red betel leaves on blood sugar levels and body weight of mice (Mus musculus L.) diabetes. This riset was started to produce simplicia and drilled become  powders,  continued  extract with  70%  ethanol. The  extract  was  evaporated  with  rotary  evaporator until obtaine crude extract. And then screen it that determine phytochemical. To continued test on tolerance of level of glucose then mice diabetes induced aloxan.
In summary, extract of red betle ethanolic has contained alkaloid, quercetin flavonoid, steroid and fenolic  compounds  and  decreased  level  of  glucose  in  blood  mice  diabetes.  Besides, it  can  reduce  lose  of weight symptom.

## K eywords : Piper crocatum, mice diabetes, aloxan, lose of weight

## PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  diperkirakan  diderita hampir  150  juta  di  dunia  pada  tahun  2000  dan terus  meningkat  seiring  dengan  waktu  dan sebagian besar  peningkatan  itu  akan  terjadi  di negara-negara yang sedang berkembang.
Diabetes mellitus (DM) merupakan penyakit  yang  ditandai  dengan  tingginya  kadar gula darah akibat kekurangan sekresi insulin baik absolut  maupun  relatif  disertai  dengan  gangguan metabolisme  karbohidrat,  lemak  dan  protein. Keadaan tersebut lazim  terjadi  pada  penderita diabetes sehingga bisa menyebabkan kerusakan serius pada sistem tubuh 1 .
Di Amerika Serikat terdapat 25,8 juta atau 8,3%  dari  populasi  yang  menderita  baik  anak- anak maupun orang dewasa dengan 18,8 juta jiwa terdiagnosa  dan  7,0  juta  jiwa  tidak  terdiagnosa . Di Indonesia  diperkirakan  berkisar  antara  1,5 sampai  2,5%  kecuali  di  Manado sekitar 6% dari jumlah penduduk sebanyak 200  juta  jiwa,  berarti lebih  kurang  3-5  juta  penduduk  Indonesia menderita  diabetes.  Tercatat  pada  tahun  1995, jumlah  penderita  diabetes  di Indonesia  mencapai 5  juta  jiwa dan  diperkirakan akan  mencapai  12 juta jiwa 2 .
Riset  Kesehatan  Dasar  (Riskesdas)  pada tahun  2007  menunjukkan  bahwa  prevalensi penyakit  diabetes  sekitar  5,7%  dan  cenderung mengalami  peningkatan  seiring  waktu  (Depkes RI, 2008). Pada tahun 2030, Indonesia diperkirakan  memiliki  penderita  DM  sebanyak 21,3  juta  jiwa dan  menduduki  peringkat  keempat setelah Amerika Serikat, Cina dan India 3 . Hal ini menjadi  tantangan  bagi  peneliti  dan  tenaga kesehatan untuk menekan laju prevalensi penyakit diabetes tersebut.
Pengobatan penyakit diabetes menggunakan obat per oral golongan sulfonilurea dan  biguanida  masih  menjadi  pilihan  utama  saat ini,  namun  memiliki  efek  samping  yang  tidak diharapkan. Dewasa  ini sebagian  masyarakat masih  menggunakan  obat  tradisional,  baik  dalam bentuk  sederhana  yang  diambil  langsung  dari alam maupun sediaan atau bungkusan yang sudah melewati  proses  produksi  pada  perusahaan  atau industri jamu 4 .
Suatu tumbuhan obat memberikan manfaat secara ilmiah, terkait dengan penggunaan secara  tradisional,  maka peneliti  merasa  perlu untuk menyelidikinya secara eksperimental
sehingga  diperoleh data  yang  meyakinkan  secara ilmiah,  sehingga  penggunaan  tanaman  tersebut sebagai  obat  dapat  dijamin  kebenarannya. Mekanisme  kerjanya yang tidak  diketahui  secara pasti dapat diteliti selanjutnya,  namun  dapat diperkirakan  bahwa  efeknya  dalam  menurunkan kadar  gula  darah  sama  seperti  obat-obat hipoglikemia oral 5 .
Salah satu tanaman yang sering digunakan pasien  DM sebagai  obat  yaitu  sirih  merah  (Piper crocatum).  Daun  sirih  merah  digunakan  secara tradisional bahkan  keluarga  kraton  Jogjakarta
menggunakannya untuk mengobati DM, hipertensi,  leukemia, keputihan,  dan kanker payudara 6 . Air  rebusan  daun  sirih  merah menunjukkan  dosis  20  g/kg  BB  merupakan  dosis yang aman untuk dikonsumsi 7 .
Berdasarkan uraian  di  atas  peneliti tertarik  untuk  menguji  lebih  lanjut  efek  ekstrak etanol  sirih  merah  (Piper  crocatum) sebagai penurun  kadar  gula  darah  dengan  pembanding metformin serta  gambaran  histologi  pankreas terhadap mencit percobaan.

## BAHAN DAN METODE
Bahan-bahan yang digunakan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah daun sirih merah yang diperoleh dari hasil kultivasi  di  daerah  Medan  Johor,  Medan;  Etanol 96%; Tablet metformin (PT Kimia Farma); CMC- Na;  Aquadest;  Larutan  fisiologis  NaCl  0,9%; toluen;  Aloksan  monohidrat  (Sigma);  formalin 10%; Makanan;  D-Glukosa;  Fruktosa;  dan  bahan kimia lain yang dianggap perlu.
Hewan Percobaan
Hewan  yang  digunakan  dalam  percobaan ini adalah mencit jantan (Mus muscullus L)  yang diperoleh  dari Fakultas  Farmasi  Universitas Sumatera  Utara. Uji antidiabetes  dengan  metode uji toleransi glukosa menggunakan mencit dengan berat  badan    25-30 g  dan  umur  2  bulan.  Hewan dikondisikan  selama  lebih  kurang  satu  bulan  di laboratorium  dan  diberi  makanan  pelet  dan minuman  air  mineral  yang  sesuai.  Penggunaan hewan  coba  mencit  telah  mendapat  persetujuan dari  Komite  Etik  Penelitian  Kesehatan  No. 019/KEPH-FMIPA/2012.
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  Merah (EEDSM)
EEDSM dibuat  di  laboratorium Fitokimia Fakultas  Farmasi  USU.  Serbuk  kering  dimaserasi dengan  etanol 70%  dalam  wadah  tertutup  rapat dan  dibiarkan  pada  suhu  kamar  selama  2  hari terlindung  dari  cahaya  dan  sering  diaduk, kemudian  dipisahkan,  ampas  dimaserasi  kembali dengan  pelarut  etanol 70% baru dan  dilakukan dengan  cara  yang  sama  seperti  di atas  sampai diperoleh  maserat  yang  jernih.  Semua  maserat digabung  menjadi  satu  lalu  diuapkan  dengan bantuan  alat rotary  evaporator sampai  diperoleh ekstrak etanol kental, kemudian ekstrak dikeringkan  di freeze  dryer (-20 o C)  hingga diperoleh ekstrak kering daun sirih merah.
Ekstrak sirih merah dibuat suspensi dengan menggunakan karboksil  metil  selulosa  natrium (CMC-Na) konsentrasi 0,5% dengan variasi dosis 50,  100,  dan  200  mg/kg  BB serta  metformin sebagai pembanding.
Skrining  Fitokimia  dan  Identifikasi komponen senyawa EEDSM dengan KLT
Skrining  fitokimia  EEDSM    meliputi senyawa  alkaloid,  saponin,  flavonoid,  fenolik, tannin, triterpenoid  dan  steroid  dengan  mengikuti metode yang terdapat pada Harborne 8 . Kemudian larutan  ekstrak dielusi  dengan  kromatografi lapis tipis  (KLT)  dan  fase  gerak  etil  asetat:nheksan (1:1). Hasilnya dilihat secara visual dan di bawah sinar  UV  (254  dan  366  nm)  dengan  atau  tanpa pereaksi  semprot 9 . Senyawa  pembanding  yang digunakan adalah quersetin.
Pengujian Antidiabetes
Hewan  yang  diinduksi  aloksan,  terlebih dahulu digemukkan lalu  diinjeksikan  aloksan secara intra  peritoneal (ip). Makanan  setelah diinduksi tetap diberikan.
Uji  antidiabetes  secara in  vivo diacu berdasarkan  metode  yang  dilakukan  Tanquilut et al 10 . Hewan coba dipuasakan (ad libitium) selama lebih  kurang  18  jam.  Kemudian  berat  badan ditimbang  dan  diukur  kadar  gula  darah  puasa dengan  alat Accu  trend  GCT  (Roche). Larutan aloksan  200  mg/kg  BB  diberikan  secara intra peritoneal (i.p).  Lalu  diukur  kadar  gula  darah mencit  pada  hari  ke  3  dan  ke  7.  Pada  hari  ke  7, hewan  yang  memiliki  kadar  gula  darah  (KGD) lebih  tinggi  dari  200  mg/dl  dipisahkan  dan dijadikan  sebagai  hewan  uji.  Hewan  yang memiliki  KGD  lebih  rendah  dari  200  mg/dl diinduksi  kembali.  Jika  hewan  uji  pada  hari  ke-7 telah  menunjukkan  kadar  gula  darah  lebih  dari 200  mg/dl,  maka  hewan  sudah  dapat  diberikan bahan uji. Pengambilan darah dilakukan sebanyak
1 tetes melalui ekor mencit. Mencit dikelompokkan  secara  acak  menjadi 6 kelompok, masing-masing  terdiri  dari 5 ekor  mencit kemudian diberi perlakuan secara peroral.
Suspensi diberikan selama 11 hari berturut- turut  secara  oral. Lalu  diukur  kadar  gula  darah mencit  pada  hari  ke-3, 5, 7 dan  11 setelah pemberian  bahan  uji, selama  percobaan  diamati berat badan hewan.
Analisis Statistik
Analisis  data  menggunakan  analisis ragam (ANOVA)  rancangan  acak  lengkap (RAL)  pada tingkat  kepercayaan 80%, α =0,2 dan  kemudian dilanjutkan  dengan uji Duncan. Semua  data dianalisis  dengan  menggunakan program  SPSS 19.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Skrining  Fitokimia  dan  Identifikasi  komponen senyawa EEDSM dengan KLT
Tabel 1. Hasil uji skrining golongan senyawa kimia EEDSM Pengujian Hasil Alkaloid + Flavonoid + Saponin - Triterpenoid - Steroid + Tanin/fenol + (+) = menunjukkan ada keberadaan senyawa yang diuji (-) = menunjukkan tidak terdeteksi senyawa uji Skrining fitokimia menggunakan kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dengan  silika  gel GF 254 sebagai  fase  diam  dan  fase  gerak menggunakan  etil  asetat:n-heksan  (1:1)    dan dideteksi  di  bawah  sinar  UV  254  nm, menunjukkan  adanya  noda  (spot) Rf yang  sama dengan  senyawa  baku  pembanding  quersetin, yaitu  sebesar  0,53. Hal  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak sirih merah mengandung quersetin. Aktivitas  Hipoglikemi  EEDSM  Terhadap  Mencit Diabetes yang diinduksi Aloksan
Gambar 1 menunjukkan pemberian EEDSM    dosis  100  dan  200  mg/kg  BB  ternyata mampu  menurunkan  KGD  mendekati  normal dengan nilai masing-masing 210,5 dan 175 mg/dl;
jika  dibandingkan  dengan  metformin  10  mg/kg BB  tidak  berbeda  signifikan  (p0,2).  Sedangkan EEDSM    dosis  50  mg/kg  BB  hanya  mampu menurunkan  KGD  rerata  sebesar  320  mg/dl, namun  masih  berbeda  signifikan  dengan  kontrol negatif  dengan  nilai  KGD  rerata  sebesar  541,7 mg/dl.
Peningkatan  dosis  EEDSM    sampai  dosis 200  mg/kg  BB  menunjukkan  peningkatan aktivitas  hipoglikemik.  Hal  ini mengindikasikan komponen senyawa kimia aktif di dalam EEDSM memiliki  efek  sinergis.  Velazquez, et  al., 11 menyatakan bahwa obat-obatan alternatif komplementer  yang  berasal  dari  alam  memiliki efek sinergisme dalam mengobati suatu penyakit.
0 100 200 300 400 500 600 700 0 2 4 6
8 10 12
K a d a r G u la D a ra h ( m g /d L ) Waktu (hari) base line Kontrol Negatif: CMC 0,5% EESM 50 mg/kg
EESM 100 mg/kg EESM 200 mg/kg Metformin 10 mg/kg bb
Gambar 1.

## Profil KGD mencit diabetes yang diberi suspensi EEDSM
Flavonoid  quersetin,  merupakan  agen antiradikal  bebas,  menurunkan  jumlah  lipid peroksidasi,  produksi  NO, dan  meningkatkan aktivitas  enzim  antioksidan  di  pulau  langerhans pankreas, menurunkan jumlah interleukin- 1 β dan interferon- γ 12,13 .  Senyawa  tanin  atau  fenol  yang terdapat dalam EEDSM dapat menurunkan  kadar gula  darah  pada  penderita  DM,  melalui  jalur penangkapan radikal bebas dan antioksidan 14 .

## Aktivitas  EEDSM  terhadap  Penurunan  Berat Badan Mencit
Berdasarkan  pengamatan  selama  11  hari menunjukkan terdapat perubahan  berat  badan mencit  DM  (Gambar  4.6).  Kelompok  kontrol negatif yang hanya diberikan suspensi CMC 0,5% tanpa  EEDSM  dan  metformin,  mengalami kehilangan  bobot  berat  badan  yang  paling  besar dengan  bobot  awal  34,7  g  menurun  menjadi  26,9 g atau -12,4% (p0,2).
Pemberian  EEDSM    dosis  50  mg/kg  BB juga  mengalami  penurunan  berat  badan,  namun masih  lebih  kecil  dibanding  kontrol  negatif (p0,2).  EEDSM    100  mg/kg  BB  belum  nampak meningkatkan  berat  badan  mencit  sampai  pada hari  ke-3,  walaupun  fluktuatif  namun  secara umum  dapat  memperbaiki  kehilangan  berat badan.  EEDSM    dosis  200  mg/kg  BB  nampak lebih  baik  dibanding  dengan  dosis  50  dan  100 mg/kg  BB  bahkan  pada  hari  ke-11  (akhir
pengamatan) bobot badan mencit dapat ditingkatkan sebesar 7,5%.
Pemberian  EEDSM    dosis  100  mg/kg  BB yang  diberikan  satu minggu  secara  per  oral sebelum  diinduksi  aloksan,  sebagai  upaya preventif  menunjukkan  peningkatan  bobot  badan sebesar  8,6%  (Gambar 2).  Hal  ini  bila dihubungkan  dengan  nilai  KGD-nya,  memiliki nilai  rerata  183,3  mg/kg  BB,  mengindikasikan bahwa  EEDSM    memiliki potensi  mencegah kerusakan pankreas.
Salah  satu  simptom  penederita  DM  adalah kehilangan  berat  badan  secara  drastis  dan  dalam waktu relatif singkat. Pada penelitian ini EEDSM memiliki  potensi  untuk  mengatasi  simptom kehilangan berat badan.
Peningkatan  berat  badan  pada  mencit diabetes  yang  diberi  EEDSM    disebabkan  nafsu makan meningkat berdasarkan pengamatan kualitatif  peneliti.  Nafsu  makan  yang  meningkat tersebut dapat disebabkan adanya zat pahit (bitter taste) 15 ,  di antaranya  adalah  alkaloid.  Informasi yang sama seperti yang dilaporkan bahwa sediaan dekoks Piper crocatum dapat meningkatkan nafsu makan  tikus  yang  diinduksi  aloksan. Ini mempertegas bahwa di samping dapat memperbaiki  kadar glukosa  dari  penderita diabetes,  alkaloid  juga  dapat  meningkatkan  nafsu makan.
Gambar 2. Perubahan berat badan mencit yang diinduksi aloksan selama 11 hari

## SIMPULAN
EEDSM memiliki aktivitas menurunkan kadar  gula  darah  mencit  diabetes  yang  diinduksi aloksan dan memperbaiki  symptom  kehilangan
berat  badan  serta berpotensi menjadi  obat alternatif untuk penderita diabetes.
-30 -20 -10 0 10 20 30 Persentase Perubahan Berat Badan (%) EESM 100 mg/kg bb, preventif metformin 10 mg/kg bb EESM 200 mg/kg bb EESM 100 mg/kg bb EESM 50 mg/kg bb kontrol negatif base line

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  ditujukan  kepada Ibu  Aswita  Hafni  Lubis dan  staf Laboratorium Fitokimia  membantu  dalam  memberikan  fasilitas dan  pembuatan  ekstrak,  Dan  Ibu  Marianne dan
staf Laboratorium  Farmakologi  Farmasi  USU membantu dalam memberikan fasilitas pengerjaan hewan percobaan.
Speroff L, Fritz MA. Clinical gynaecologic endocrinology and infertility. 7th ed. Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins; 2005. Chapter 29, Endometriosis; P.1103-33.

## DAFTAR PUSTAKA
1. World Health Organization (WHO). About Diabetes. 2012.
Diambil dari http://www.who.int/diabetes/action_online/basics/en/index3.html
2. Depkes  RI. Pharmaceutical  Care  Untuk  Penyakit  Diabetes Mellitus. Jakarta:  Direktorat Jenderal  Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan. 2005. P. 1, 7, 11-12, 25-27, 32.
3. Depkes  RI. Riset  Kesehatan Dasar.  Laporan  Nasional  2007.  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia. 2008.
4. Agoes,  HA,  Jacob,  T. Antropologi  Kesehatan  Indonesia  Pengobatan  Tradisional.  Jilid  I.  Cetakan Pertama. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC; 1992.  P.13, 159.
5. Widowati  L,  Dzulkarnain  B, Sa’roni. Tanaman Obat  Untuk  Diabetes  Mellitus. Cermin  Dunia Kedokteran. No. 116. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. 1997. p. 54.
6. Werdhany WI, Marton A, Setyorini W. Sirih Merah. Yogyakarta: Balai Pengkajian Teknologi Pertanian Yogyakarta. 2008.
7. Salim  A.  Potensi  Rebusan  Daun  Sirih  Merah  (Piper  crocatum)  Sebagai  Senyawa  Antihiperglikemia Pada Tikus Putih Galur Sprague Dawley. Skripsi. Bogor: IPB. 2006.
8. Harborne,  JB. Metode  Fitokimia.  Edisi  II.  Penerjemah:  Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang  Soediro. Bandung: Penerbit ITB. 1987. p. 152.
9. Jork H, Funk W, Fischer W, Wimmer H. Thin Layer Chromatography Reagent and Detection Metods, 1, New York: VCH. 1990; p. 9-38, 147,191,314.
10. Qadori. Histological  Studies  on  Pancreatic  Tissue  in  Diabetic  Rats  by  Using  Wild  Cherry. The  Iraqi Postgraduate Medical Journal. 2009. 10(3): 421-425
11. Velazquez ALL, Beltrán MM, Panduro A, Ruiz LH. Alternative Medicine and Molecular Mechanisms in Chronic Degenerative Diseases. Chinese Medicine. 2011. 2: 84-92
12. Coskun O, Kanter M, Korkmaz A, Oter S. Quercetin,  a  flavonoid  antioxidant,  prevents  and  protects streptozotocin-induced  oxidative  stress  and  beta-cell  damage  in  rat  pancreas. Pharmacol Res. 2005; 51(2): 117-23
13. Kim EK, Kwon KB, Song MY, Han MJ, Lee JH, Lee YR, et al. Flavonoids protect against cytokine- induced pancreatic beta-cell damage through suppression of nuclear factor kappa B activation. Pancreas. 2007. 35(4):1-9.
14. Kumari M. Jain S. Tannins: An Antinutrient with Positive Effect to Manage Diabetes. Res.J.Recent Sci. 2012. 1(12): 70-73,
15. Deshmukh D, Baghel VS, Shastri D, Nandini D, Chauhan NS. Plant as bitter, International Journal of Advances in Pharmaceutical Sciences, 2010; 1: 334-343