## Keragaman dan Resistensi Antibiotik Isolat Bakteri Tanah di Dalam dan Luar TPU Bonoloyo, Surakarta Jawa Tengah
Diversity and Resistance to Antibiotic Isolates of Soil Bacteria Inside and Outside Bonoloyo Cemetery, Surakarta, Central Java
Yusnita Rahmawati, Erma Musbita Tyastuti, Yasir Sidiq, Triastuti Rahayu *
Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Jl. Ahmad Yani, Pabelan, Surakarta 57162, Indonesia
*E-mail: tr124@ums.ac.id
Received: 20 Mei 2023; Accepted: 30 Juni 2023; Published: 30 Juni 2023

## Abstrak
Pemakaman  sebagai  situs  penguraian  jasad  dan  kemungkinan  besar  mengandung  bakteri  yang  memiliki resistensi  antibiotik.  Namun,  data  terkait  fenomena  tersebut  terbatas.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk membandingkan keragaman bakteri di dalam dan di luar kuburan serta mengkaji resistensi bakteri terhadap antibiotik. Pertama, sampel diambil dari tiga titik berbeda di dalam dan di luar pemakaman umum Bonoloyo di Surakarta, Jawa Tengah. Kemudian bakteri diisolasi dengan metode spread plate pada media NA dan diamati  dengan  pewarnaan  Gram  setelah  48  jam  inkubasi.  Juga,  resistensi  bakteri  terhadap  cefepime, bacitracine,  dan  ampisilin  diperiksa.  Hasilnya,  populasi  bakteri  di  dalam  dan  di  luar  area  pemakaman masing-masing adalah 3,4x10 6 dan 4,6x10 6 CFU/gram, dengan keragaman 38% dan 34%, sedangkan 28% isolat terkumpul dari kedua area tersebut. Hasil pengamatan morfologi menunjukkan bahwa 15 dan 21 isolat masing-masing berbentuk bulat dan tidak beraturan, berwarna putih sampai kuning dengan elevasi mendatar (16  isolat)  dan  mendatar  (19  isolat).  Pewarnaan  Gram  menunjukkan  48  isolat  kokus  dan  2  isolat  basil, dengan 23 isolat Gram negatif dan 27 isolat Gram positif. Isolat bakteri menunjukkan resistensi terhadap cefepime  (50%-50%)  dan  terhadap  basitrasin  (52%-43%)  masing-masing  dari  kedua  area  pemakaman, sedangkan resistensi terhadap ampisilin relatif rendah (33%-21%). Jumlah populasi bakteri dan keragaman bakteri di dalam dan di luar areal pemakaman tidak berbeda nyata.  Isolat-isolat bakteri yang berasal dari tanah TPU menunjukkan reistensinya terhadap antibiotik (ampicillin, bacitracin, cefepime) dan resistensi bakteri asal tanah di dalam pemakaman lebih banyak dibandingkan dengan bakteri yang berasal dari tanah di luar pemakaman.
Kata Kunci : Keragaman bakteri, Resistensi antibiotik, Tempat pemakaman umum (TPU)

## Abstract
A cemetery acts as an active  decomposition site and contains bacteria which most likely have antibiotic resistance. However, related data to the phenomenon is limited. This study aimed to compare the diversity of bacteria inside and outside the cemetery and examine bacterial antibiotic resistance. First, samples were collected from three different spots inside and outside the Bonoloyo public cemetery in Surakarta, Central Java. Then, the bacteria  were isolated by spread plate method on NA medium and were observed using Gram staining after 48 hours of incubation. Also, bacterial resistance against cefepime, bacitracine, and ampicilin were examined. As the results, bacterial populations inside and outside the cemetery area are 3.4x10 6 and 4.6x10 6 CFU/gram, respectively, with a diversity of 38% and 34%, while 28% of isolates are collected from both  areas. The  result  of  morphological  observation  showed  that  15  and  21  isolates are respectively  round  and  irregular,  white  to  yellow  colour  with  raised  (16  isolates)  and  flat  (19  isolates) elevation. Gram staining showed 48 isolates are coccus and 2 are bacilli, with 23 isolates of Gram negative and 27 isolates of Gram positive. Bacterial isolates showed resistance against cefepime (50%-50%)  and against bacitracine (52%-43%) each from both areas of the cemetery, while resistance against ampicilin was  relatively  low  (33%-21%).  The  number  of  bacterial  populations  and  bacterial  diversity  inside  and outside the cemetery area are not significantly different. In fact, the resistance of the soil bacteria population collected from cemetery soil are higher than that collected from soil outside the cemetery.
Keywords: Bacterial Diversity, Antibiotic Resistance, Cemetery

## PENDAHULUAN
Tempat  Pemakaman  Umum  (TPU) adalah  areal  tanah  yang  disediakan  untuk pemakaman  jenazah  bagi  setiap  orang  tanpa membedakan agama dan golongan yang diatur dalam  Peraturan  No.  9  Tahun  1987  BAB    I Pasal 1 ayat a (Peraturan Pemerintah Republik Indonesia, 1987). Begitu manusia meninggal, proses  pembusukan  akan  segera  dimulai. Proses  pembusukan  mayat  terdiri  dari  lima fase yaitu autolisis, penggembungan, pembusukan  aktif,  pembusukan  tahap  lanjut, dan  pembusukan  tulang  yang  berlangsung selama  8-12  tahun  (Dent  et  al.,  2004). Pembusukan  mayat  menghasilkan  gas  dan bahan  organik.  Gas  yang  dihasilkan  berupa gas  metana,  CO 2 ,  H 2 S,  dan  N 2 ,  sedangkan bahan  organik  berupa  asam  lemak,  amonia, asam  amino,  senyawa  amonium,  metan, merkaptan,  sulfur,  dan  nitrat  (Fineza  et  al., 2014).  Selain  itu,  juga  akan  dihasilkan rembesan produk pembusukan yang mengandung  bakteri,  virus  dan  bahan  kimia organik  maupun  anorganik  (Üçisik  and Rushbrook,  1998)  (Üçisik  and  Rushbrook, 1998)
Bahan-bahan  organik  hasil  pembusukan mayat akan memperkaya  mineral  tanah  yang diperlukan untuk pertumbuhan mikrorganisme  tanah  termasuk bakteri.  Hasil penelitian  (Putra  et  al.,  2023),  mendapatkan total  bakteri  tanah  rizosfer  di  area  TPU sebanyak  1,0  x  10 7 CFU/g.  Jumlah  ini  lebih banyak dibanding total bakteri rizosfer di luar area  TPU,  misalnya  dari  rizosfer  tanaman kemiri  sunan  sebanyak  7,6  x  10 5 CFU/g (Amaria et al., 2019),  rizosfer tanaman  karet sebanyak 2,7 x 10 4 CFU/g (Gofar et al., 2014), dan  rizosfer  tanaman  caisim  sebanyak  4,3  x 10 4 CFU/g  (Hindersah  et  al.,  2018). Kemelimpahan  bakteri  rizosfer  di  TPU tersebut  menunjukkan  bahwa  dekomposisi jenazah  berpengaruh  terhadap  mineral  tanah yang  diperlukan  untuk  pertumbuhan  bakteri (Utomo et al., 2018).
Bakteri yang terkandung dalam rembesan hasil pembusukan mayat berpotensi
menimbulkan penyakit pada manusia. Penelitian di area pemakaman Afrika Selatan melaporkan  terdapat  potensi  bakteri  patogen penyebab sakit tuberkulosis, pertusis, influenza, toksoplasmosis, kolera, Alzheimer, Parkinson, amoebiasis, dan myocarditis (Abia et al., 2019). Beberapa genus bakteri dan fungi patogen  seperti Bacillus spp. Enterococcus spp., Escherichia spp., Klebsiella, Enterobacter,  Serratia,  Staphylococcus spp., Penicillium spp.,  dan Aspergillus spp. terdeteksi  di  tanah  pemakaman  Polandia dengan  persentase  patogen  paling  umum adalah Enterococcus spp.  (80,6%)  dan Bacillus spp. (77,4%), sedangkan Penicillium spp.  dan Aspergillu s  spp.  masing-masing dengan  persentase  sebesar  51%  dan  6,4% (Całkosiński et al., 2015). Laporan ini menjadi informasi  penting  untuk  menjadi  perhatian karena  di  Surakarta  khususnya,  lokasi pemukiman  penduduk  sangat  berdekatan dengan  area  TPU.  Di  Indonesia,  penelitian terkait  analisis  potensi  patogen  di  area  TPU masih  sangat  terbatas  karena  laporan  yang ditemukan  baru  menganalisis  kualitas  air tanah dan air minum di sekitar tanah makam menggunakan  pendekatan culture  dependent (Rahmadi et al., 2014)
Potensi bakteri patogen di area TPU akan menjadi  lebih  parah  apabila  ternyata  bakteri tersebut  juga  mempunyai  sifat  resisten terhadap  antibiotik.  Resistensi  antibiotik bakteri  patogen  telah  menjadi  masalah  di seluruh dunia. Terjadinya resistensi antibiotik tersebut  disebabkan  pemakaian  antibiotik yang tidak tepat baik untuk pengobatan pada manusia maupun hewan  (Indana and Effendi, 2020).  Menurut  data  statistik,  konsumsi antibiotik  secara  global  pada  tahun  2000  - 2010  meningkat  sekitar  36%.  Negara  utama penyumbang peningkatan konsumsi antibiotik dari  63  negara  yaitu  76%  terdiri  dari  Rusia, Brazil, China, India dan Afrika Selatan  (Van Boeckel  et  al.,  2014).  Menurut  organisasi kesehatan dunia  (WHO),  resistensi antibiotik pada tahun 2050 diperkirakan dapat meningkatkan  kematian  700  ribu  hingga  10
juta  per  tahun  (Begum  and  Shilpi,  2022). Indonesia termasuk dalam lima negara dengan perkiraan  peningkatan  persentase  konsumsi antimikroba tertinggi pada tahun 2030 (WHO Indonesia, 2022). Salah satu bakteri yang telah resisten  terhadap  beberapa  antibiotik  yaitu Enterobacter  agglomerans penyebab  infeksi nosokomial  yang  menginfeksi  hewan  dan manusia.  Bakteri ini banyak ditemukan di air, tanah,  bahan  makanan  dan  limbah  sayuran. Sumber  infeksi  yang  terjadi  dapat  melalui saluran kemih, saluran pencernaan, kulit, dari tangan  perawat,  stetoskop  dan  endoskopi (Wulansari  et  al.,  2020).  Pada  tahun  2012, diperoleh  data bahwa Staphylococcus  aureus dari RSUD Dr. Moewardi Solo menunjukkan resistensinya  terhadap  amoksisilin  93,75% dan  tetrasiklin  87,5%.  Bahkan Acinetobacter baumanni menunjukkan   resistensi  mencapai 100%  terhadap  amoksisilin,  siprofloksasin, gentamisin,  dan  sefotaksim  (Chudlori  dkk., 2012).  Kecenderungan  resistensi  bakteri terhadap  antibiotik  yang  sudah  ada  harus diiringi  dengan  penemuan  antibiotik  baru seperti  dari  Streptomyces  (Ambarwati  et  al., 2023)  tetapi  memerlukan  usaha  dan  biaya yang besar.
Berdasarkan  penelusuran  referensi,  di Indonesia  masih  belum  ditemukan  penelitian tentang keragaman bakteri di TPU beserta uji resistensinya  terhadap  beberapa  antibiotik walaupun  di  beberapa  Negara  lain  sudah melaporkan seperti di Polandia (Całkosiński et al.,  2015),  Afrika  Selatan,  Australia  (Z˙ ychowski  and  Bryndal,  2015),  Latvia (Kazarina et al., 2019), dan Brazil  (Fineza et al., 2014). Iklim di Indonesia sangat berbeda dengan negara-negara tersebut karena Indonesia merupakan negara beriklim tropika basah  yang  dapat  mempengaruhi  laju pencucian air lindi yang lebih tinggi sehingga kandungan  organik  tanah  dan  mikroba meningkat  (Utomo  et  al.,  2018).  Indonesia memiliki musim hujan dan kemarau, sedangkan  Polandia  memiliki  musim  semi, musim  panas,  musim  dingin,  dan  musim gugur.  Selain  itu  juga  perbedaan  cara pemakaman  juga  akan  ikut  berpengaruh.  Di
Indonesia,  jenazah  Muslim  dikubur  dengan kain  kafan  sebagai  pembungkus  kemudian dimasukkan  ke  liang  kubur.  Jenazah  Kristen Katolik dikubur dengan pakaian dan dimasukkan ke dalam peti kemudian dimasukkan ke dalam liang kubur, sedangkan di  luar  negeri  seperti  Polandia  dengan menggunakan  peti  dan  juga  dengan  cara krematorium. Dengan perbedaan cara pemakaman  dapat  menyebabkan  perbedaan proses penguraian jenazah. Hal tersebut akan menyebabkan  perbedaan  keragaman  bakteri tanah pemakaman.
Lokasi  yang  menjadi  titik  pengambilan sampel  adalah  tanah  di  dalam  dan  luar  area TPU Bonoloyo, Surakarta, Jawa Tengah. TPU ini  terluas  di   Surakarta,  tanahnya  berkontur, dan  dalam  pengelolaannya  dibedakan  antara blok  makam  tua  dan  makam  baru.  Tujuan penelitian  ini  membandingkan  keragaman bakteri  yang  berada  di  dalam  dan  luar  area TPU  dan  resistensinya  terhadap  antibiotik. Data  penelitian  ini  dapat  menjadi  rujukan dalam  penataan  tata  ruang  kota,  peningkatan informasi  terkait  kesehatan  masyarakat,    dan kebijakan dalam penggunaan antibiotik.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksplorasi  untuk  mendapat  data  keragaman bakteri  dari  TPU  dan  resistensinya  terhadap antibiotik.  Lokasi  pengambilan  sampel  tanah di  TPU  Bonoloyo,  Surakarta,  sedangkan pengamatan  keragaman  bakteri  dan  uji resistensi antibiotik dilakukan di laboratorium mikrobiologi Prodi Pendidikan Biologi FKIP Universitas Muhammadiyah Surakarta. Kegiatan  penelitian  dilaksanakan  tanggal  9 Januari – 7 Februari 2023.
Alat  yang  digunakan  dalam  pembuatan media, pengamatan populasi dan keanekaragaman bakteri yaitu koloni counter (Funke gerber), hot plate (Cimarec+), sprayer, cawan petri, oven (Maspion), oven inkubator (Memmert),  vorteks,  erlenmeyer  (Pyrex), mikropipet  (Socorex  10-100),    timbangan digital  (Durasclae  DAB-E223),  autoklaf (GEA  LS-35LJ),  laminar  air  flow  (LAF), shaker, blue tip, mikroskop, dan gelas obyek.
Bahan yang digunakan dalam penelitian yaitu pada  media  yang  meliputi nutrient  agar ( Merck ), nutrient broth , sampel tanah di dalam dan  luar  area  TPU,    alkohol  70%,  satu  set pewarna  Gram,  mallachit,  kertas  merang, spirtus, antibiotic disc ampicillin ( Liofilchem ), antibiotic  disc  bacitracin ( Oxoid ), antibiotic disc  cefepime ( Liofilchem ),  dan blank antibiotik  disc ( Marcherey-Nagel ).
Pengambilan Sampel Sampel tanah diambil di dalam ( inside / I)  dan  luar  ( outside /  O)  TPU  Bonoloyo dengan kisaran jarak 400 m – 1 km dari TPU. Sampel tanah diambil pada kedalaman 10 cm, masing-masing  dari  tiga  titik  sampling  di dalam  dan  luar  TPU.  Tiga  titik  sampling  di dalam  TPU  berlokasi  pada  blok  1,  blok  12, dan blok 21, sedangkan sampel tanah di luar TPU  berlokasi  di  sebelah  utara,  selatan  dan timur  dari  TPU  ( Gambar 1).  Sampel  tanah dari  setiap  titik  berasal  dari  tiga  titik berdekatan yang dibuat komposit.

## Keragaman Isolat Bakteri
Pada  penelitian  ini  setelah  dilakukan  isolasi bakteri,  dilanjutkan  dengan  pengamatan morfologi  koloni  dan  pewarnaan  Gram. Isolasi  bakteri  dilakukan  dengan  metode spread  plate (Damayanti,  2020)  pada pengenceran  10 -5 dan  10 -6 .  Koloni  bakteri yang  terbentuk  diamati  morfologinya  yang meliputi  warna,  bentuk,  elevasi  dan  tepi. Morfologi  koloni  bakteri  yang  berbeda dilanjutkan pewarnaan Gram sesuai prosedur
standar (Cappuccino and Sherman, 2014). Sel bakteri diamati di bawah mikroskop binokuler dengan  perbesaran  1.000x.  Bakteri  yang selnya teramati berwarna merah dikelompokkan sebagai bakteri Gram negatif, dan  yang  berwarna  ungu  dikelompokkan sebagai bakteri Gram positif. Selain warna sel, diamati juga susunan selnya.
Resistensi Antibiotik Uji resistensi antibiotik dilakukan menggunakan  metode  difusi  agar  (Christian and  Irawati,  2019).  Bakteri  yang  digunakan adalah bakteri yang didapat dari sampel tanah TPU.  Inokulasi  bakteri  dilakukan  dengan metode spread  plate dari  kultur  cair  yang sudah  diinkubasi  selama  16  jam.  Disc antibiotik yang digunakan adalah  A = blank ( Macherey-Nagel ), B = Ampicillin ( Liofilchem ), C = Bacitracin ( Oxoid ), dan D = Cefepime  ( Liofilchem ).  Petri  untuk  uji resistensi antibiotik diinkubasi selama 24 jam pada  suhu  37 0 C.  Hasilnya  dapat  dibaca dengan memperhatikan zona bening berdasarkan  diameter  pada  pedoman  CLSI 2015 (Amatul-Samahah et al., 2020).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  mendapatkan  data  populasi bakteri  di  dalam  dan  luar  TPU,  keragaman bakteri,  dan  resistensinya  terhadap  tiga antibiotik yang diujikan.

## Populasi Bakteri
Populasi  bakteri  tanah  di  dalam  dan  di  luar TPU Bonoloyo tidak menunjukkan perbedaan nyata,  masing-masing  sebanyak  3,4  x  10 6 CFU/g dan 4,6 x 10 6 CFU/g ( Tabel 1).
Berdasarkan uji normalitas,  didapatkan hasil keseluruhan  bahwa  signifikansi  seluruh populasi    >  0,05  yang  menunjukkan  data berdistribusi  normal  (p  >  0,05).  Hasil  dari Analysis of
Variances
(ANOVA) menunjukkan nilai probabilitas atau signifikansi adalah 0,631>0,05 (H0 diterima). Hal ini menunjukkan tidak terdapat perbedaan populasi bakteri yang signifikan di dalam dan di luar TPU.
Tidak adanya perbedaan  populasi bakteri di dalam dan luar TPU secara nyata mungkin
Gambar 1. Lokasi Pengambilan Sampel Tanah (Ket : titik warna kuning berlokasi di luar TPU, warna hijau berlokasi di dalam TPU)
disebabkan  karena  kedalaman  pengambilan sampel hanya 10 cm padahal jenazah dikubur di  kedalaman  minimal  1,5  m  sehingga  hasil pembusukan  jenazah  yang  berupa  mineral- mineral lebih terkonsentrasi pada kedalaman tersebut. Mineral tanah akan tersebar luas dari titik pembusukan jenazah bersamaan dengan aliran  air  dalam  tanah  padahal  air  tanah  di dalam TPU Bonoloyo sekitar 1,5 - 2 m dan di luar TPU sekitar 12 m. Apabila dibandingkan dengan tanah di tempat lain, populasi bakteri di area TPU terlihat lebih tinggi dibandingkan luar  TPU,  seperti  tanah  pegunungan  pada kedalaman  10  cm  yaitu  sebesar  7,36  x  10 5 CFU/g (Sahara, 2019). Beberapa faktor yang dapat mempengaruhi; pertumbuhan mikroorganisme  tanah  yaitu  bahan  organik, kelembaban  tanah,  temperatur  tanah,  aerasi tanah  dan  keadaan  alami  pertumbuhan tanaman  (Sahara,  2019).  Perubahan  kondisi cuaca  dan  iklim  serta  ketersediaan  air  dan nutrisi yang bervariasi, zat perusak mempengaruhi perkembangan berbagai mikroba  di  komunitas  tanah  (Köhler  et  al., 2020).
Keragaman Bakteri Isolat  bakteri  tanah  di  dalam  ( inside /I) dan  luar  ( outside /O)  TPU  diamati  dan diperoleh  50  isolat  berbeda.  Sebanyak  19 isolat (38%) bakteri ditemukan di dalamTPU, 17 isolat (34%) dari luar TPU, dan  14 isolat (28%)  ditemukan  baik  di  dalam  maupun  di luar TPU (Gambar 2).
Keragaman bakteri di dalam pemakaman lebih banyak dibandingkan dengan bakteri di luar  pemakaman  ( Gambar 2).  Perbedaan tersebut dimungkinkan karena adanya pengaruh  biotik  yang  meliputi  pH,  sedimen
yang  dapat  menopang  kekayaan  spesies, keberadaan biomateri, serta ekosistem (Caputo et al., 2019).
Hasil  pengamatan  morfologi  koloni, diperoleh  5  isolat  berbentuk  akar,  16  isolat berbentuk bulat, 21 isolat tak teratur, 4 isolat titik,  dan  4  isolat  berbenang.  Elevasi  koloni timbul rata teramati pada 16 isolat, rata pada 19  isolat,  membukit  dan  mencembung masing-masing pada 1 isolat, dan melengkung  pada  3  isolat.  Tepi  koloni didominasi  utuh  (18  isolat),  berbelah  (13 isolat),  berbenang  (9  isolat),  keriting  (3 isolat),  berombak  (7  isolat).  Dari  50  isolat kebanyakan berwarna putih, akan tetapi juga terdapat  isolat  yang  berwarna  kuning,  krem, pink,  transparan,  kuning  kunyit,  oranye, dan abu-abu. Hasil pewarnaan Gram menunjukkan 48 isolat berbentuk kokus dan 2 isolat  berbentuk  basil,  sebanyak  23  isolat
Tabel 1. Populasi Bakteri Tanah TPU Bonoloyo Surakarta
Pengenceran Populasi bakteri tanah TPU (CFU/g) Dalam Pemakaman Luar Pemakaman B 1 B 12 B 21 W E S 10 -5 1,1 x 10 6 1,5 x 10 6 9 x 10 5 8 x 10 5 8 x 10 5 9 x 10 5 10 -6 2 x 10 6 1,1 x 10 7 4 x 10 6 1,3 x 10 7 6 x 10 6 6 x 10 6 Total 1,6 x 10 6 6,3 x 10 6 2,5 x 10 6 6,9 x 10 6 3,4 x 10 6 3,5 x 10 6 Rerata 3,4 x 10 6 4,6 x 10 6
Ket : B: Blok; W : West ; E : Eas t; S : South
Gambar 2. Keragaman Bakteri Tanah yang ditemukan di Dalam dan Luar Area TPU Bonoloyo Surakarta
menunjukkan  gram  negatif  dan  27  isolat menunjukkan positif ( Tabel 2).

## Resistensi Antibiotik
Penentuan resistensi isolat bakteri terhadap  antibiotik  dengan  mengukur  zona bening  yang  terbentuk  di  sekitar  disc
antibiotik ( Gambar 3), kemudian dibandingkan  dengan  pedoman  CLSI  2015
(Amatul-Samahah  et  al.,  2020)  sehingga dapat  dikategorikan  menjadi  ‘sensitive’, ‘susceptible’,  dan  ‘resistance’.  Hasil  uji resistensi  antibiotik  isolat  bakteri  tanah  di

## Tabel 2. Morfologi Koloni dan Pewarnaan Gram Isolat Bakteri Tanah di Dalam dan Luar TPU Bonoloyo
Isolat Karakteristik Warna koloni Bentuk koloni Elevasi koloni Tepi koloni Bentuk sel Gram Asal Bakteri B1 Putih Akar Timbul datar Berbenang Kokus - Inside B2 Putih Bulat Timbul datar Keriting Kokus - Inside B3 Krem Tak teratur Rata Berbelah Kokus + Inside, outside B4 Putih Bulat Timbul datar Keriting Basil + Inside B5 Putih Titik Melengkung Utuh Basil + Inside, outside B6 Putih Berbenang Rata Berbenang Kokus + Inside, outside B7 Putih Berbenang Rata Berbenang Kokus + Inside, outside B8 Putih Berbenang Rata Berbenang Kokus + Outside B9 Putih Berbenang Rata Berbenang Kokus + Inside, outside B10 Putih Akar Rata Berbenang Kokus + Outside B11 Putih Tak teratur Rata berbelah Kokus + Inside, outside B12 Putih Bulat Timbul datar Utuh Kokus + Inside, outside B13 Abu-abu Tak teratur Rata Berombak Kokus + Outside B14 Transparan Bulat Timbul datar Utuh Kokus - Outside B15 Transparan Tak teratur Mencembung Berbelah Kokus + Outside B16 Putih Tak teratur Rata Berbelah Kokus - Inside, outside B17 Putih Tak teratur Rata Berbelah Kokus + Outside B18 Putih Akar Timbul  datar Berbenang Kokus + Inside, outside B19 Kuning bening Titik Rata Utuh Kokus - Inside B20 Pink keputihan Bulat Rata Utuh Kokus + Inside B21 Kuning kunyit Bulat Melengkung Utuh Kokus + Inside B22 Kuning bening Titik Melengkung Utuh Kokus + Inside. Outside B23 Putih Bulat Timbul datar Utuh Kokus - Inside, outside B24 Transparan Bulat Rata Utuh Kokus + Inside B25 Transparan Tak teratur Rata Keriting Inside B26 Kuning transparan Tak teratur Rata Berbelah Kokus - Outside B27 Kuning Tak teratur Rata Berbelah Kokus - Outside B28 Putih Akar Rata Berbenang Kokus - Outside B29 Putih Bulat Timbul datar Utuh Kokus - Inside, outside B30 Putih Tak teratur Rata Berbelah Kokus - Outside B31 Putih Tak teratur Rata Berombak Kokus - Outside B32 Putih Tak teratur Rata Berombak Kokus - Inside B33 Transparan Bulat Rata Utuh Kokus + Inside B34 Putih Tak teratur Rata Berombak Kokus + Inside B35 Putih Tak teratur Rata Berombak Kokus - Inside B36 Putih krem Tak teratur Rata Berbelah Kokus - Inside B37 Putih Tak teratur Rata Berbelah Kokus + Inside B38 Putih Tak teratur Timbul datar Berbelah Inside B39 Kuning krem Bulat Rata Utuh Kokus - Inside B40 Kuning lemon Bulat Timbul datar Utuh Kokus + Inside B41 Putih Tak teratur Rata Berbelah Kokus + Outside B42 Putih Akar Rata Berbenang Kokus - Inside, outside B43 Oranye Bulat Timbul datar Utuh Kokus - Outside B44 Putih Tak teratur Timbul datar Berombak Kokus + Inside, outside B45 Putih Tak teratur Timbul datar Berombak Kokus - Outside B46 Putih kekuningan Bulat Timbul datar Utuh Kokus + Outside B47 Putih kekuningan Bulat Membukit Utuh Kokus - Outside B48 Transparan Bulat Timbul datar Utuh Kokus - Inside B49 Kuning Titik Timbul datar Utuh Kokus - Inside B50 Putih Tak teratur Rata Berbelah Kokus - Outside
dalam  dan  luar  TPU  terhadap  tiga  jenis antibiotik  ditampilkan pada Tabel 3.
Dari  ketiga  antibiotik  yang  digunakan, ternyata  isolat  bakteri  tanah  TPU  telah menunjukkan sifat resisten terhadap cefepime 50%-50%)  dan  bacitracine  (52%-43%) masing-masing  dari  dalam  dan  luar  TPU, sedangkan terhadap ampicillin persentasenya relatif  masih  sedikit  (33%-21%).  Secara umum, persentase isolat bakteri yang resisten
terhadap  ketiga  antibiotik  uji  lebih  banyak yang  berasal  dari  dalam  TPU  dibandingkan dengan yang berasal dari luar ( Tabel 3). Persen resistensi ini  lebih tinggi dibanding  bakteri  dari  peternakan  yang diperoleh data 32,5% isolat resisten terhadap ampicillin (Indana and Effendi, 2020), bakteri penyebab  pneumonia  tidak  resisten  terhadap antibiotik  (Yayan  et  al.,  2016),  bakteri  pada sampah  sisa  makanan  di  pesawat  tidak resisten  terhadap  antibiotik  (Riasari  et  al., 2020), bakteri V. harveyi, V. parahemolyticus memiliki presentase 66,7% resisten terhadap
antibiotik bacitracin (Amatul-Samahah et al., 2020).
Ampicillin sering diresepkan oleh dokter kepada  pasien  untuk  mengobati  infeksi  oleh bakteri, seperti di salah satu RS Jawa Tengah yang  terdata  bahwa  ampicillin  diberikan kepada  pasien  sepsis  rawat  inap  sebesar 41,67% (Nugraheni et al., 2021). Berdasarkan sensitivity chart , ampicillin efektif digunakan untuk  mengobati  penyakit  infeksi  yang disebabkan  oleh  bakteri  gram  positif  dan negatif tetapi lebih efektif pada gram positif, cefepime efektif digunakan untuk mengobati penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri  gram positif  dan  negatif,  sedangkan  bacitracin efektif  digunakan  pada  bakteri  gram  positif. Dari  hasil  uji  resistensi  antibiotik  tersebut, masyarakat disarankan untuk menjaga kebersihan  ketika  berziarah  ke  pemakaman. Selain  itu,  masyarakat  perlu  ditingkatkan pengetahuannya terkait
penggunaan antibiotik secara tepat agar kejadian resistensi bakteri terhadap antibiotik dapat dikurangi.

## KESIMPULAN
Populasi  bakteri  dan  keragaman  bakteri  di dalam  dan  di  luar  area  tempat  pemakaman umum  (TPU)  Bonoloyo,  Surakarta,  Jawa Tengah  tidak  berbeda  nyata.  Isolat-isolat bakteri  yang  berasal  dari  tanah  TPU menunjukkan resistensinya terhadap antibiotik  (ampicillin,  bacitracin,  cefepime) dan resistensi bakteri  yang berasal dari tanah di dalam pemakaman lebih banyak dibandingkan dengan bakteri yang berasal dari tanah di luar pemakaman.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih penulis ucapkan kepada :
1. Universitas  Muhammadiyah  Surakarta yang  sudah  memberikan  dana  penelitian skim  Penelitian  Unggulan  Program  Studi (PUPS) Nomor :
110.30/A.3-
III/LRI/VI/2022
2. Kepala  Dinas  Perumahan  Kota  Surakarta, yang sudah memberi ijin untuk mengambil sampe tanah TPU Bonoloyo
3. Bapak Nuryadin, yang sudah mendampingi proses sampling di area TPU.
Gambar 3. Hasil Uji Resistensi Isolate Bakteri terhadap Antibiotik Blank (Kontrol) (A),
Ampicillin (B), Bacitracine (C), dan Cefepime (D)
Tabel 3. Hasil Uji Resistensi Antibiotik
Antibiotik uji Kategori (%) Susceptible Intermediate Resistance I O I O I O Ampicillin 19 25 12 10 33 21 Cefepime 8 4 6 2 50 50 Bacitracine 12 10 0 0 52 43 Ket = I : Inside (dalam TPU); O : Outside (luar TPU)

## Daftar Pustaka
Ambarwati,  A.,  Santoso,  B.,  Sofyan,  A.  2023.  Phylogenetic  Analysis  of  Streptomyces Producing Antimicrobial Agent Isolated from Kukup Beach Sand, Yogyakarta, Indonesia. Biodiversitas. Volume 24, Number 4, Pages: 2374-2383.
Abia, A.L.K., Alisoltani, A., Ubomba-Jaswa, E., Dippenaar, M.A., 2019. Microbial life beyond the  grave:  16S  rRNA  gene-based  metagenomic  analysis  of  bacteria  diversity  and  their functional  profiles  in  cemetery  environments.  Science  of  The  Total  Environment  655, 831–841.
Amaria, W., Kasim, N.N., Munif, A., 2019. Kelimpahan Populasi Bakteri Filosfer, Rizosfer, dan  Endofit  Tanaman  Kemiri  Sunan  (Reutalis  trisperma  (Blanco)  Airy  Shaw),  Serta Potensinya Sebagai Agens Biokontrol. Journal TABARO 3, 305–307.
Amatul-Samahah, M.A., Muthukrishnan, S., Omar, W.H.H.W., Ikhsan, N.F.M., Ina-Salwany, M.Y., 2020. Vibrio sp. associated with acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) found in penaeid shrimp pond from east cost of peninsular Malaysia. JEB 41, 1160–1170.
Begum,  A.,  Shilpi,  R.Y.,  2022.  Analysis  of  antibiotic  resistance  of  bacteria  in  the  soil  of Sundarbans mangrove forest, Bangladesh. International Journal of Advanced Research in Biological Sciences 9, 98–104.
Całkosiński, I., Płoneczka-Janeczko, K., Ostapska, M., Dudek, K.,  Gamian, A., Rypuła, K., 2015. Microbiological Analysis of Necrosols Collected from Urban Cemeteries in Poland. BioMed Research International 2015, 1–7.
Cappuccino, J.G., Sherman, N., 2014. Microbiology. Pearson, Lake Ave.
Caputo, D., Rattansingh, J., Hernandez, V., Nash, B., 2019. An analysis of soil microhabitats in Revolutionary War, Civil War, and modern graveyards on Long Island, NY 2, 1–5.
Chudlori, B. Kuswandi, M.,dan Indrayudha, P. 2012. Pola Kuman dan Resistensinya terhadap Antibiotika dari Spesimen Pus di RSUD Dr. Moewardi Tahun 2012. Pharmacon,Vol. 13, No. 2.
Christian,  S.,  Irawati,  W.,  2019.  Uji  Resistensi  Isolat  Khamir  Yang  Diisolasi  Dari  Limbah Industri Di Rungkut, Surabaya, Indonesia. Bioeksperimen 5, 1–10.
Dent, B.B., Forbes, S.L., Stuart, B.H., 2004. Review of human decomposition processes in soil. Environmental Geology 45, 576–585.
Fineza,  A.G.,  Marques,  E.A.G.,  Bastos,  R.K.X.,  Betim,  L.S.,  2014.  Impacts  on  the Groundwater Quality Within a Cemetery Area in Southeast Brazil. S&R 37, 161–169.
Gofar, N., Munawar, M., Widjajanti, H., Mulya, A.P., 2014. Eksplorasi Bakteri Antagonis Asal Jaringan dan Rizosfer Tanaman Karet Untuk Menekan Pertumbuhan Bakteri Proteolitik Pada Bahan Olahan Karet (Bokar). J, Tanah, Lingk, 16, 61.
Hindersah, R., Rachman, W., Fitriatin, B.N., Nursyamsi, D., 2018. Populasi Bakteri Dan Jamur Pada  Rizosfer  Caisim  (Brassica  juncea  L.)  Yang  Ditanam  Di  Tanah  Dikontaminasi Insektisida Organoklorin Setelah Aplikasi Konsorsia Mikroba Dan Kompos. Agrologia 3.
Indana, K., Effendi, M.H., 2020. Uji Resistensi Antibiotik Ampicillin Pada Bakteri Escherichia Coli Yang Di Isolasi Dari Beberapa Peternakan Di Surabaya 3.
Kazarina, A., Gerhards, G., Petersone-Gordina, E., Kimsis, J., Pole, I., Zole, E., Leonova, V., Ranka, R., 2019. Analysis of the bacterial communities in ancient human bones and burial soil  samples:  Tracing  the  impact  of  environmental  bacteria.  Journal  of  Archaeological Science 109, 104989.
Köhler,  J.M.,  Beetz,  N.,  Günther,  P.M.,  Möller,  F.,  Schüler,  T.,  Cao,  J.,  2020.  Microbial community types and signature-like soil bacterial patterns from fortified prehistoric hills of Thuringia (Germany). COMMUNITY ECOLOGY 21, 107–120.
Nugraheni,  A.Y.,  Utami,  M.S.P.,  Saputro,  A.Y.,  2021.  Evaluasi  Ketepatan  Antibiotik  pada Pasien Sepsis Evaluation of Antibiotic Therapy in Sepsis Patients. . ISSN 18.
Peraturan Pemerintah Republik Indonesia, 1987. Tentang Penyediaan dan Penggunaan Tanah Untuk Keperluan Tempat Pemakaman.
Putra,  S.S.,  Rahayu,  T.,  Tyastuti,  E.M.,  2023.  Isolation  and  Characterization  of  Cambodian Tree Rhizospheric Bacteria (Plumeria acuminata) at Pracimaloyo TPU as a producer of IAA. Bioeduscience 7.
Rahmadi, G., Wijatna, A.B., Satrio, 2014. Aplikasi Teknologi Isotop Alam untuk Analisis Pola Aliran  Airtanah  sebagai  Studi  Awal  Pencemaran  Airtanah  yang  Disebabkan  Tempat Pemakaman Umum Kauman Kecamatan Demak. TEKNOFISIKA 3, 46–51.
Riasari, J.R., Sudarwanto, M.B., Indrawati, A., Latif, H., Krisnan, N.R., Pisestiyani, H., 2020. Resistensi  Enterobacteriaceae  Terhadap  Antibiotik  Asal  Sisa  Makanan  dari  Sampah Pesawat di Bandara Internasional Soekarno Hatta. Acta Vet Indones 8, 47–54.
Sahara, N., 2019. Populasi Fungi dan Bakteri Tanah Di Hutan Pegunungan dan Dataran Rendah Di Kawasan Taman Nasional Lore Lindu Sulawesi Tengah.
Üçisik, A.S., Rushbrook, P., 1998. The Impact of Cemeteries On The Environment And Public Health.
Utomo, M., Sabrina, T., Sudarsono, Lumbanraja, J., Rusman, B., Wawan, 2018. Ilmu Tanah. Prenada Media, Jakarta.
Van  Boeckel,  T.P.,  Gandra,  S.,  Ashok,  A.,  Caudron,  Q.,  Grenfell,  B.T.,  Levin,  S.A., Laxminarayan,  R.,  2014.  Global  antibiotic  consumption  2000  to  2010:  an  analysis  of national pharmaceutical sales data. The Lancet Infectious Diseases 14, 742–750.
WHO Indonesia, 2022. Sekarang Saatnya Beraksi Menangkal Resistensi Antimikroba. WHO Indonesia.  URL  https://www.who.int/indonesia/id/news/detail/12-10-2022-time-to-act- to-curb-antimicrobial-resistance-now (accessed 4.26.23).
Wulansari, T., Sagita, D., Pratama, S., 2020. Uji Resistensi Antibiotik Terhadap Kultur Bakteri Enterobacter  agglomerans  di  Ruang  Intensive  Care  Unit  (ICU)  Rumah  Sakit  X  Kota Jambi. Journal of Healthcare Technology and Medicine, Journal of Healthcare Technology and Medicine 6, 237–247.
Yayan,  J.,  Ghebremedhin,  B.,  Rasche,  K.,  2016.  Cefepime  shows  good  efficacy  and  no antibiotic resistance in pneumonia caused by Serratia marcescens and Proteus mirabilis – an observational study. BMC Pharmacol Toxicol 17, 10.
Z˙ ychowski, J., Bryndal, T., 2015. Impact of cemeteries on groundwater contamination by bacteria and viruses – a review. Journal of Water and Health 13, 285–301.