e-issn: 2716-4608 p-issn: 2655-366X

## TOXICITY OF SEA GRASS EXTRACT ( Eucheuma cottonii
AND Gracillaria sp) TO LARVA Artemia salina
Danil Rama Putra 1 *, Aras Mulyadi 1 , Zulkifli 1
1 Department of Marine Science, Faculty of Fisheries and Marine Universitas Riau, Pekanbaru *danielrama707@gmail.com

## ABSTRACT
Seaweed  is  a  source  of  foreign  exchange,  namely  as  the  main  export  product  and  a source  of  income  for  coastal  communities.  Previous  research  on  species Eucheuma  cottonii and Gracillaria sp contain bioactive compounds that can be used in medicine, for example as anti-cancer. The purpose of this study was to determine the LC 50 value and safe concentration of Artemia  salina larvae.  The  research  was  conducted  at  the  Chemical  Oceanography Laboratory  of  the  Department  of  Marine  Sciences,  Faculty  of  Fisheries  and  Marine,  Riau University  in  July  2020.  The  method  used  in  this  research  is the experimental method.  The results  of  the  research  on  the  toxicity  of  the  n-hexane  extract  of  seaweed E. cottonii and Gracillaria sp  had  bioactivity  compounds  against A.  salina shrimp  larvae,  indicated  by  a small  LC 50 value  (<1000  ppm),  namely  62.62  ppm  for E.  cottonii and  83.55.  ppm  for Gracillaria sp, so it is included in the toxic category. According to research by experts, if the extract  or  compound  tested  is  less  than  1000  ppm,  it  is  considered  that  there  is  biological activity. For a safe concentration for the survival of A. salina , 6.262 ppm for E. cottonii and 8.355 ppm for Gracillaria sp.
Keywords: Toksisitas , Eucheuma cottonii, Gracillaria sp, Artemia salina , n-heksana

## I. PENDAHULUAN
Rumput  laut  merupakan  salah  satu sumber devisa negara, yaitu sebagai produk ekspor  utama  dan  sumber  pendapatan  bagi masyarakat  pesisir.  Pemanfaatan  rumput laut  saat  ini  beragam  dan  mencakup  ke dalam  bidang  pangan,  industri,  serta farmasi.  Rumput  laut  diketahui  memiliki senyawa  bioaktif  beragam  yang  masing- masing  spesies  memiliki  keunikannya tersendiri.  Rumput  laut  sudah  sering digunakan untuk pengobatan oleh masyarakat pesisir, antara lain sebagai obat batuk,  radang  dan  cacingan.  Kegunaan rumput laut yang beragam tersebut ternyata pada  tiap  kelasnya  terdapat  senyawa  yang berbeda dan memiliki sifat kimia dan fisika yang spesifik pula.
Rumput  laut Eucheuma  cottonii dan Gracillaria sp merupakan alga multiseluler yang  diduga  memiliki  senyawa-senyawa hasil metabolisme sekunder berupa alkaloid atau  flavonoid.  Senyawa-senyawa  tersebut kemungkinan  merupakan  senyawa  bioaktif yang dapat digunakan dalam dunia pengobatan,  misalnya  sebagai  antikanker [1].
Uji  Toksisitas  merupakan  metode  uji yang  digunakan  untuk  mengetahui  tingkat toksik  dari  suatu  senyawa  yang  ditentukan dalam  waktu  singkat  setelah  pemberian suatu sediaan. Uji toksisitas dengan metode BSLT  ini  memiliki  spektrum  aktifitas farmakologi yang luas, prosedurnya sederhana,  cepat  dan  tidak  membutuhkan biaya  yang  besar,  serta  hasilnya  dapat dipercaya.  Selain  itu,  metode  ini  sering
dikaitkan  sebagai  acuan  atau  landasan dalam pengujian antikanker. Dengan alasan-alasan  tersebut,  maka  uji  ini  sangat tepat  digunakan  dalam  penelitian  bahan alam [2].
Penelitian  ini  menerapkan  metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan menggunakan  larva  udang A . salina Leach sebagai  hewan  uji.  Metode  ini  merupakan salah  satu  metode  yang  banyak  digunakan untuk  pencarian  senyawa  antikanker  baru yang  berasal  dari  tanaman.  Hasil  uji toksisitas  dengan  metode  ini  telah  terbukti memiliki  korelasi  dengan  daya  sitotoksis senyawa antikanker [3].
Pelarut yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  n-heksana  karena memiliki titik didih yang rendah dan mudah diuapkan  tanpa  menggunakan  suhu  yang tinggi, bersifat inert , serta dapat melepaskan  komponen  nonpolar  dari  suatu jaringan  tumbuhan  untuk  mendapatkan senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam rumput laut. Dalam penelitian ini, informasi  mengenai  seberapa  besar  nilai LC 50 berdasarkan  uji  toksisitas  belum terdokumentasikan  dengan  baik,  begitu juga  dengan  konsentrasi  yang  aman  ( safe concentration )  dari  ekstrak  n-heksana rumput  laut E.  cottonii dan Gracillaria sp terhadap larva A. salina juga belum banyak diteliti. Apakah aman atau tidak tentu perlu diketahui dengan baik.
Adapun  tujuan  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  nilai  LC 50 ekstrak  n- heksana  rumput  laut E.  cottonii dan Gracillaria sp  berdasarkan  uji  toksisitas terhadap  larva  udang A.  salina Leach  dan untuk  mengetahui  konsentrasi  yang  aman ( safe  concentration )  ekstrak  n-heksana rumput  laut E.  cottonii dan Gracillaria sp terhadap larva udang A. salina Leach.

## 2. METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Juli  2020.  Pengambilan  sampel rumput  laut  dilakukan  di  Desa  Sugie
Kabupaten  Karimun  Provinsi  Kepulauan Riau. Sedangkan kegiatan ekstraksi rumput laut  dilakukan  di  Laboratorium  Kimia Organik  FMIPA.  Untuk  Uji  toksisitas dilakukan  pada  Laboratorium  Oseanografi Kimia  Jurusan  Ilmu  Kelautan  Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Riau.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  dengan menggunakan  metode  eksperimen.  Sampel rumput  laut  diekstraksi  secara  maserasi menggunakan  pelarut  n-heksana.  Ekstrak yang  diperoleh  dipekatkan  dengan rotary vacuum  evaporator pada  suhu  40  –  50ºC, hingga  diperoleh  ekstrak  pekat  n-heksana, yang selanjutnya diuji toksisitasnya dengan menggunakan larva udang A. salina . Proses pengujian  ini  untuk  mengetahui  tingkat toksisitas  dan  konsentrasi  yang  aman masing-masing ekstrak rumput laut dengan pelarut  n-heksana  terhadap  larva  udang A. salina melalui nilai LC 50 .

## Prosedur Penelitian Penanganan Sampel Rumput Laut
Sampel  rumput  laut  dengan  berat masing-masing  2  kg  berat  basah  dicuci bersih  dengan  air  laut  yang  bersih  guna menghilangkan  sisa  lumut  yang  menempel pada  rumput  laut  tersebut,  kemudian sampel  dimasukkan  ke  dalam  kantong plastik  dan  disimpan  dalam ice  box yang telah  diberi  es  batu  sebelumnya  guna mempertahankan  kesegaran  rumput  laut sebelum dilakukan penanganan selanjutnya.

## Ekstraksi Rumput Laut
Proses  pemisahan  komponen  bioaktif dilakukan  dengan  cara  ekstraksi  dengan cara  sampel  rumput  laut  yang  sudah dibersihkan ditimbang beratnya selanjutnya dipotong  kecil-kecil  dan  direndam  dalam botol  sampel,  ekstraksi  menggunakan metode maserasi dengan pelarut n-heksana. Rumput  laut  dimaserasi  menggunakan pelarut n-heksana selama 3×24 jam dengan sesekali pengadukan.
Selanjutnya
p-issn: 2655-366X
rendaman disaring dengan kertas saring dan corong,  ampas  dipisahkan  dari  maserat,
kemudian maserat tersebut diuapkan dengan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak  kental  n-heksana  rumput  laut sebanyak  2  kali  pengulangan,  ekstrak kental  yang  diperoleh  dari  maserasi pertama  hingga  kedua  digabung  kedalam botol  sampel  dan  siap  untuk  dijadikan bahan uji.
Penetasan Kista Artemia sp.
Sebelum  melakukan  penetasan  kista artemia  dilakukan  persiapan  alat-alat  dan bahan  yang  dibutuhkan  seperti  wadah berbentuk kerucut yang transparan, aquades, gunting, selang aerasi, batu aerasi lalu dilakukan pengukuran salinitas air laut menggunakan handrefractometer dengan nilai  33‰.  Hasil  ini  sesuai  dengan penelitian Gusrina dalam [4] yang menyatakan  bahwa  kista A.  salina dapat ditetaskan  pada  media  yang  mempunyai salinitas  5-35‰.  Selanjutnya  dilakukan penetasan  kista  artemia,  telur A.  salina dicuci  terlebih  dahulu,  yakni  ditaburkan dan  direndam  dalam  wadah  berisi  aquades selama satu jam.
Penetasan kista Artemia sp dilakukan dengan  menyiapkan  air  laut  buatan  1  L dengan  salinitas  berkisar  antara  33-35‰ dan    telah  diukur  pH  (8-9),  serta  diberi penerangan  dengan  cahaya  lampu  40  watt untuk menghangatkan suhu dalam penetasan  agar  suhu  penetasan  25–31ºC tetap  terjaga  dan  merangsang  proses penetasan  dengan  menggunakan  aerator, selanjutnya dimasukkan kista tersebut yang telah  ditimbang  sebanyak  dua  gram  ke dalam  air  laut  yang  telah  dimasukkan  ke dalam wadah, pencampuran harus dilakukan  dengan  hati-hati  agar  kista artemia tidak rusak. Selanjutnya aerator dan perangkatnya  di  “on”  dengan  kekuatan yang  maksimal  untuk  memaksimalkan oksigen  terlarut.  Telur A.  salina Leach dibiarkan  selama  36-48  jam  sampai menetas menjadi nauplius yang matang dan
siap  digunakan  dalam  percobaan.  Telur akan menetas dalam waktu 18 - 48 jam dan akan  bergerak  secara  alamiah  menuju daerah terang sehingga larva udang terpisah dari  kulit  telur.  Larva  yang  sehat  bersifat fototropik  dan  siap  dijadikan  hewan  uji pada  umur  36-48  jam.  Larva  dipisahkan dari  telurnya  dengan  pipet  ke  dalam  vial yang berisi air laut buatan [5].

## Uji Toksisitas
Setelah larva A. salina menetas dalam waktu  18  –  24  jam,  dilakukan  proses aklimatisasi selama 24 jam di laboratorium untuk  menyesuaikan  kondisi  lingkungan asal hewan uji dengan kondisi laboratorium sebelum digunakan dalam uji toksisitas.
Uji  pendahuluan  dilakukan  untuk mengetahui  nilai  ambang  atas  (N)  dan ambang  bawah  (n)  dari  penggunaan konsentrasi  untuk  uji  toksisitas.  Variasi konsentrasi ekstrak diperoleh dengan terlebih dahulu di buat larutan stok ekstrak 10000 ppm. Larutan uji di buat dari larutan stok  10000  ppm  dengan  cara  dipipet  1  µL, 10 µL, 100 µL, dan 1000 µL ke dalam labu ukur  10  ml,  selanjutnya  diuapkan  sampai kering  selama  24  jam  agar  kematian  larva tidak dipengaruhi oleh pelarutnya.
Setelah pelarutnya mengering, dimasukkan  100  µL  dimetil  sulfoksida,  2 ml  air  laut,  dan  setetes  larutan  ragi  roti kemudian  dikocok  sampai  ekstrak  dapat larut dalam air laut. Kemudian ditambahkan  air  laut  sampai  volumenya menjadi 10 ml dan dikocok kembali sampai larutan menjadi homogen. Sehingga konsentrasi masing-masing larutan menjadi 1  ppm,  10  ppm,  100  ppm,  dan  1000  ppm. Selanjutnya  larutan  dengan  masing-masing konsentrasi  dipindahkan  ke  dalam  tabung reaksi, kemudian dimasukkan 10 ekor larva udang  yang  sehat  ke  dalam  tabung  reaksi yang sudah berisi larutan ekstrak.
Pengamatan  terhadap  kematian  hewan  uji dilakukan pada 6, 12, 18, dan 24 jam dan di amati  mortalitasnya  dengan  menghitung jumlah A.  salina yang  mati.    Hasil  uji
dikatakan efektif terhadap A. salina apabila ekstrak  yang  diujikan  menyebabkan  50% kematian  pada  konsentrasi  <  1000  ppm. Menurut  [6]  uji  pendahuluan  dilakukan sebanyak  2  (dua)  kali  untuk  menetapkan konsentrasi yang menyebabkan 50% kematian hewan uji.
Uji  persistensi. Bertujuan  untuk melihat  penurunan  daya  racun  bahan  uji terhadap waktu uji. Pada tiap konsentrasi 1 ppm,  10  ppm,  100  ppm,  dan  1000  ppm, dimasukkan 10 ekor larva artemia ke dalam wadah  uji.  Pengamatan  terhadap  kematian hewan uji dilakukan pada 6, 12, 18, dan 24 jam  [7].  Untuk  melihat  kapan  media  uji diganti  dibuat  grafik  tingkat  kematian dalam persen terhadap waktu saat pemasukaan hewan uji. Dari grafik tersebut dapat  dilihat  kecendrungan  toksisitas  itu menaik,  menurun  atau  mendatar  yang menunjukkan  persistensinya  [8]  (Nedi et al ., 2006).
Uji  Toksisitas. Pada  uji  toksisitas, masing-masing  media  uji  diisi  dengan konsentrasi  bahan  uji  sesuai  hasil  yang diperoleh  dari  perhitungan  nilai  ambang atas  dan  ambang  bawah  dengan  variasi konsentrasi  1  ppm,  10  ppm,  100  ppm,  dan 1000 ppm. Perlakuan uji toksisitas dilakukan dengan 3 kali pengulangan untuk mendapatkan  data  yang  akurat.  Variasi konsentrasi ekstrak diperoleh dengan terlebih dahulu di buat larutan stok ekstrak 10000  ppm  dengan  cara  dimasukkan  100 mg ekstrak pekat ke dalam labu ukur 10 ml dan  dilarutkan  dengan  pelarutnya  sampai tanda  batas.  Selanjutnya  larutan  yang diperoleh di pipet masing-masing sebanyak 1  µL,  10  µL,  100  µL,  dan  1000  µL  ke dalam  labu  ukur  10  ml  dan  pelarutnya diuapkan selama 24 jam.
Setelah pelarutnya mengering, dimasukkan  100  µL  dimetil  sulfoksida,  2 ml  air  laut,  dan  setetes  larutan  ragi  roti kemudian  dikocok  sampai  ekstrak  dapat larut dalam air laut. Selanjutnya ditambahkan  air  laut  sampai  volumenya menjadi 10 ml dan dikocok kembali sampai
larutan menjadi homogen. Sehingga konsentrasi masing-masing larutan menjadi 1  ppm,  10  ppm,  100  ppm,  dan  1000  ppm. Lalu larutan dengan masing-masing konsentrasi  dipindahkan  ke  dalam  tabung reaksi, kemudian dimasukkan 10 ekor larva udang  yang  sehat  ke  dalam  tabung  reaksi yang sudah berisi larutan ekstrak.
Larutan  kontrol  dibuat  dengan  cara yang  sama  kecuali  penambahan  ekstrak, yaitu  dengan  cara  dimasukkan  100  µL dimetif sulfoksida, 2 ml air laut, dan setetes larutan ragi roti ke dalam labu ukur 10 ml, kemudian  dikocok  sampai  dapat  larut dalam  air  laut.  Lalu    ditambahkan  air  laut sampai  volumenya  10  ml  dan  dikocok kembali  hingga  larutan  menjadi  homogen. Selanjutnya  dipindahkan  ke  dalam  tabung reaksi,  Setelah  itu,  dimasukkan  10  ekor larva  udang  yang  sehat  ke  dalam  tabung reaksi  yang  telah  berisi  larutan  kontrol. Terakhir, semua tabung reaksi diletakkan di bawah  lampu  neon  18  watt  selama  24  jam dan  di  hitung  jumlah  larva A.  salina yang mati (tidak bergerak aktif).

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  pada  penelitian ini  akan  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan dijelaskan  secara  deskriptif  mengacu  pada sumber-sumber  yang  telah  ada.  Efek toksisitas dianalisis dari pengamatan dengan persen kematian:
Dari  persamaan  tersebut  kemudian dihitung  LC 50 dengan  memasukkan  nilai probit  (50  %  kematian).  Suatu  zat dikatakan toksik bila nilai LC 50 <1000 ppm.
Apabila  pada  kontrol  ada  larva  yang  mati maka  %  persen  kematian  ditentukan dengan rumus abbot [9]:
Keterangan :
T = Jumlah larva uji yang mati
K = Jumlah larva kontrol yang mati 10 = Jumlah larva uji
Parameter  yang  digunakan  adalah kematian A. salina melebihi 50 % dari total larva uji. Efek toksisitas terhadap A. salina Leach  ditentukan  berdasarkan  analis  probit melalui  tabel  probit  dan  dibuat  persamaan regresi linier.
Y = aX+ b Keterangan:
y = Log konsentrasi x = Angka probit a = Intersep b = Slop
Persamaan  tersebut  dapat  digunakan untuk mengetahui nilai LC 50 24 jam dengan memasukkan nilai probit 5 (50% kematian) ke  persamaan  tersebut  sehingga  diperoleh
konsentrasi yang menyebabkan 50% kematian.
Hasil  nilai  LC 50 yang  diperoleh  dari analisis  regresi  dari  masing  –  masing ekstrak  rumput  laut  kemudian  dicari konsentrasi  aman  ( safe  concentration ) untuk  mengetahui  pada  kisaran  berapa A.salina bisa  bertahan  hidup  dengan menggunakan    faktor  aplikasi  menurut Wibisono dalam [8]  yakni  10%  dari  nilai LC 50 .

## 3.  HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi Sampel
Hasil maserasi rumput laut E. cottonii dan Gracillaria sp  ditunjukkan  pada  Tabel
1.
Tabel 1 . Hasil Ekstraksi Sampel Sampel Berat Sampel (kg) Pelarut Volume Pelarut (ml) Berat Ekstrak (g) Warna Ekstrak Pekat E. cottonii 2 N-heksana 1000 2,365 Hijau Pekat Gracillaria sp 2 1000 2,146 Merah Pekat
Ekstrak  yang  diperoleh  dari  ekstraksi menggunakan metode maserasi rumput laut jenis E. cottonii dan Gracillaria sp. dengan berat sampel masing-masing 2 kg menggunakan pelarut n-heksana didapatkan berat  ekstrak  pekat  sebanyak    2,365  gram E.  cottonii dengan  warna  ekstrak  hijau pekat  dan  2,146  gram Gracillaria sp dengan warna ekstrak merah pekat.
Prinsip  dari  metode  maserasi  adalah waktu  kontak  yang  cukup  lama  antara pelarut  dengan  sampel  yang  diekstraksi, metode  ini  dipilih  karena  merupakan metode  yang  paling  sederhana  dengan peralatan  yang  relatif  mudah  untuk didapatkan
Menurut  [10],  pada  proses  maserasi pelarut  akan  masuk  ke  dalam  sel  melewati dinding  sel.  Isi  sel  akan  larut,  karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan di dalam dan luar sel. Larutan yang konsentrasi nya tinggi akan terdesak keluar dan  diganti  oleh  cairan  penyari  dengan konsentrasi rendah (proses difusi).
Peristiwa  tesebut  berulang  sampai  terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel.

## Kualitas Air
Parameter  kualitas  air  yang  diukur selama  penelitian,  adalah  suhu,  pH, salinitas  dan  oksigen  terlarut.  Kualitas  air bagi perikanan didefinisikan sebagai kualitas  air  yang  sesuai  untuk  mendukung kehidupan dan pertumbuhan larva A. salina yang  dipengaruhi  oleh  parameter  suhu, oksigen  terlarut,  pH,  dan  salinitas  [4]. Parameter  kualitas  air  yang  diukur  selama penelitian  masih  mendukung  kehidupan larva A.  salina (Tabel  2).  Pada  penelitian ini  kelangsungan  hidup  sangat  dipengaruhi oleh kualitas air. Salah satu cara menciptakan  lingkungan  yang  ideal  adalah dengan melakukan penggantian air. Selama penelitian  ini  berlangsung,  penyiponan, penggantian  air  dan  pemberian  aerasi  pada media  uji  selalu  dilakukan  dan  dikontrol, sehingga  kualitas  air  dalam  media  uji
p-issn: 2655-366X
dengan  perlakuan  maupun  kontrol  bisa
dikatakan baik Tabel 2. Pengukuran Kualitas Air No Parameter Hasil Pengukuran Satuan Baku Mutu * 1 Suhu 29 o C 26 – 32 2 Salinitas 30 ppt 28 – 34 3 DO 5,5 mg/L 5,3 – 6,5 4 pH 7,8 - 7,1 – 8,2 * Sumber : (Kaharudin, 2018)
Pengaruh Penambahan Ekstrak Rumput Laut E.  cottonii dan Gracillaria sp terhadap A. salina Skrining  toksisitas  ekstrak  rumput laut E.  cottonii dan Gracillaria sp.  dengan metode  BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality
Test )  menggunakan  larva A.  salina Leach berumur 48 jam, dengan konsentrasi 1, 10, 100, 1000 ppm.
Persentase  tingkat  mortalitas  pada  uji toksisitas  ekstrak  rumput  laut E.  cottonii disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3 . Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Rumput Laut E. cottonii No Konsentrasi (ppm) Log 10 Konsentrasi Ulangan Total Larva (ind) Larva Mati (ind) Mortalitas (ind) (%) Kematian Probit 1 0 (kontrol) - 1 2 3 10 10 10 0 0 0 0 - - 2 1 0 1 2 3 10 10 10 2 3 1 2 20 4,16 3 10 1 1 2 3 10 10 10
3 5 4 4 40 4,75 4 100 2 1 2 3 10 10 10
8 6 6 7 70 5,52 5 1000 3 1 2 3 10 10 10
10 10 9 9 90 6,28
Tabel  3  hasil  penelitian  uji  toksisitas rumput  laut E.  cottonii didapatkan  pada konsentrasi  1  ppm  dengan  jumlah  larva  10 individu memliki persentase kematian 20%, konsentrasi  10  ppm  persentase  kematian 40%,  Konsentrasi  100  ppm  persentase kematian  70%  dan  konsentrasi  1000  ppm persentase kematian 90%. Berdasarkan data tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  tingkat toksisitas  rumput  laut  meningkat  sejalan dengan tingginya konsentrasi ekstrak rumput laut E. cottonii . Untuk menentukan nilai LC 50 didapatkan  dengan  memasukkan  angka probit (50% kematian larva uji).
Selanjutnya dibuat persamaan garis y=ax+b ,  dimana y adalah  konsentrasi larutan, dan x adalah persen kematian larva. LC 50 merupakan  nilai y yang  diperoleh dengan memasukkan nilai x = 50%.
Persamaan regresi dari ekstrak rumput laut E. cottonii yaitu y = 1,4379x + 2,4165. Nilai x merupakan nilai LC 50 dan y bernilai  5,  sehingga  didapatkan  nilai  LC 50 ekstrak E.  cottonii yang  dapat  mematikan 50%  hewan  uji  berdasarkan  analisis  probit sebesar 62,62 ppm (Gambar 1). Pernyataan di  atas  menunjukkan  bahwa  ekstrak E. cottonii besifat  toksik  terhadap A.  salina , karena  memiliki  nilai  LC 50 ≤  1000  ppm,
p-issn: 2655-366X
suatu ekstrak menunjukkan aktivitas ketoksikan  dalam  BSLT  jika  ekstrak  dapat menyebabkan  kematian  50%  hewan  uji pada  konsentrasi  kurang  dari  1000  ppm
[11].  Penelitian  [12]  juga  menyatakan bahwa  suatu  ekstrak  dikatakan  toksik apabila mempunyai nilai LC 50 ≤ 1000 ppm.
Gambar 1. Grafik Analisis Regresi Ekstrak E. Cottonii
Sehingga didapat nilai: a=1,4379 ;
b=2,4165 Maka, y = ax + b 5 = 1,4379 x + 2,4165 5 – 2,4165 = 1,4379 x x = 2,5836 / 1,4379 x = 1,7966864 x = LC 50 = antilog (x) = 62,62 ppm
Hasil  uji  toksisitas  rumput  laut
Gracillaria sp dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4 . Hasil Uji Toksisitas Ekstrak Rumput Laut Gracillaria sp
N o Konsentrasi (ppm) Log 10 Konsentrasi Ulangan Total Larva (ind) Larva Mati (ind) Mortalitas (ind) (%) Kematian Probit 1 0 (kontrol) - 1 2 3 10 10 10
0 0 0 0 - - 2 1 0 1 2 3 10 10 10
1 2 1 1 10 4,72 3 10 1 1 2 3 10 10 10 3 4 4 4 40 4,75 4 100 2 1 2 3 10 10 10 4 7 5 5 50 5,00 5 1000 3 1 2 3 10 10 10
10 8 9 9 90 6,28 Hasil  uji  toksisitas  rumput  laut Gracillaria. sp  pada  konsentrasi  1  ppm dengan larva 10 individu memiliki persentase  kematian  10%,  konsentrasi  10 ppm  persentase  kematian  40%,  konsentrasi 100  ppm  persentase  kematian  50%, konsentrasi  1000  ppm  persentase  kematian
90%.  Pada  data  hasil  uji  toksisitas  dapat disimpulkan bahwa tingkat toksisitas meningkat sejalan dengan tingginya konsentrasi ekstrak rumput laut Gracillaria sp.
Berdasarkan  Tabel  4  hasil  penelitian uji  toksisitas  rumput  laut Gracillaria sp  di
y = 1,4379x + 2,4165
R² = 0,5859 0 1 2 3 4 5 6 7 8 -0,5 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 P rob it Anl ys is an d L C50 Log (ppm) Probit Linear (Probit)
atas, untuk menentukan nilai LC 50 didapatkan  dengan  memasukkan  angka probit (50% kematian larva uji). Selanjutnya  dibuat  persamaan  garis y=  ax +  b ,  dimana y adalah  konsentrasi  larutan,
dan x adalah  persen  kematian  larva.  LC 50 merupakan  nilai y yang  diperoleh  dengan memasukkan  nilai x =  50%.  Dari  tabel  5, untuk  mencari  nilai  a,  b  dan  r  didapat dengan: X = Log ppm ; Y = Probit).
Gambar 2 . Grafik Analisis Regresi terhadap Konsentrasi Ekstrak Gracillaria sp.
Sehingga  didapat  nilai  :  a  =  1,4544  ;  b  =
2,2047 Maka, y = ax + b 5 = 1,4544 x + 2,2047
5 – 2,2047 = 1,4544x
x = 2,7953 / 1,4544
x = 1,9219414
x = LC 50 = antilog (x) = 83,55 ppm
Persamaan regresi dari ekstrak Gracillaria sp yaitu  y = 1,4544x + 2,2047. Nilai x merupakan nilai LC 50 dan y bernilai 50. Sehingga didapatkan nilai  LC 50 ekstrak Gracillaria sp  yang  dapat  mematikan  50% hewan  uji  berdasarkan  analisis  probit sebesar  83,55  ppm.  Pernyataan  di  atas menunjukkan bahwa ekstrak Gracillaria sp juga  besifat  toksik  terhadap A.  salina , karena  memiliki  nilai  LC 50 ≤  1000  ppm.
[13]  menyatakan  senyawa  yang  toksik terhadap A.  salina juga  toksik  terhadap  sel kanker,  hal  ini  membuktikan  bahwa pengujian  ini  merupakan  tahapan  awal untuk  mengetahui  apakah  suatu  senyawa bersifat toksik atau tidak terhadap A. salina . Hal serupa juga berlaku terhadap Gracillaria sp,  dimana  adanya  pengaruh penambahan  ekstrak  terhadap  nilai  LC 50
dari uji toksisitas ekstrak n-heksana rumput laut Gracillaria sp. terhadap larva A. salina Leach,  yang  dibuktikan  dengan  semakin besar  konsentrasi  yang  digunakan  maka semakin besar persentase kematian A.salina .
Hasil  penelitian  uji  toksisitas  dari kedua spesies rumput laut tersebut diketahui  bahwa  tingkat  toksisitas  ekstrak rumput  laut E.  cottonii dan Gracillaria sp sama-sama  meningkat  sejalan  dengan meningkatnya  konsentrasi  ekstrak,  sejalan dengan  penelitian  yang  telah  dilakukan oleh  [14]  menyatakan  semakin  besar konsentrasi  yang  digunakan  maka  semakin besar  persentase  kematian A.  salina .
Tingkat  toksisitas  dari  kedua  jenis  rumput laut  memiliki  kandungan  senyawa  aktif yang  berbeda  dan  memiliki  bioaktivitas terhadap  larva  udang A.  salina. Sehingga dapat  dilakukan  pengujian  bioaktivitas lebih  lanjut  mengenai  potensinya  sebagai senyawa obat.
Konsentrasi Aman ( Safe Concentration ) Berdasarkan hasil uji toksisitas ekstrak  rumput  laut E.  cottonii dan Gracillaria sp, nilai konsentrasi aman bagi
y = 1,4544x + 2,2047 R² = 0,6301 0 1 2 3 4 5 6 7 -0,5 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 P rob it Anal ys is an d L C50 Log (ppm) Probit Linear (Probit)
kelangsungan  hidup A.  salina didapatkan sebesar  6,262  ppm  untuk E.  cottonii dan 8,355  ppm  untuk Gracillaria sp.  Nilai konsentrasi  aman  di  atas  didapatkan  dari perhitungan 10% nliai LC 50 masing-masing ektrak  uji.  [8]  menyatakan  bahwa  nilai yang  aman  ( safe  concentration )  bagi organisme dari daya racun toksisitas adalah 10% dari nilai LC 50 .
Nilai  konsentrasi  aman  ini  berada  di bawah  nilai  LC 50 ,  sesuai  dengan  penelitian [15]  yang  menyatakan  bahwa  untuk mendapatkan konsentrasi yang aman penggunaannya terhadap hewan uji konsentrasi  dibuat  dibawah  nilai  LC 50 nya. Konsentrasi  aman  ( safe  concentration ) merupakan  konsentrasi  maksimum  bahan toksik yang tidak membahayakan organisme  setelah  bersentuhan  dengan bahan  uji  dalam  periode  waktu  lama, setidak-tidaknya satu generasi [16].
Kelangsungan  hidup  merupakan  nilai persentasi  dari  organisme  yang  hidup  pada akhir  pengujian  dari  jumlah  keseluruhan yang  diuji  pada  awal  pengujian.  Pada penelitian  ini  kelangsungan  hidup  sangat dipengaruhi  oleh  kualitas  air.  Salah  satu cara  menciptakan  lingkungan  yang  ideal adalah  dengan  melakukan  penggantian  air. Selama penelitian ini berlangsung, penyiponan, penggantian air dan pemberian aerasi  pada  media  uji  selalu  dilakukan  dan dikontrol,  sehingga  kualitas  air  dalam media  uji  dengan  perlakuan  maupun kontrol bisa dikatakan baik.
Kelangsungan  hidup A.  salina yang tinggi terdapat pada kontrol, hal ini diduga karena  kualitas  air  kontrol  yang  diberikan baik,  serta A.  salina mampu  mentoleransi kondisi  lingkungan  seperti  kualitas  air selama  penelitian  ini  ada  dalam  kisaran
layak  bagi  kelansungan  hidup A.  salina . Oleh sebab itu, untuk menjamin kelangsungan  hidup A.  salina maka konsentrasi  yang  diperbolehkan  tidak  lebih dari 6,262 ppm untuk E. cottonii dan 8,355 ppm  untuk Gracillaria sp.Berdasarkan  uji toksisitas  ekstrak  rumput  laut E.  cottonii dan Gracillaria sp,  nilai  konsentrasi  aman ( safe  concentration )  bagi  organisme  dari daya racun toksisitas adalah 10% dari nilai LC 50 . Hal ini menunjukkan bahwa konsentrasi  yang  aman  bagi  kelangsungan hidup A.  salina yaitu  sebesar  6,262  ppm untuk E.  cottonii dan  8,355  ppm  untuk Gracillaria sp.  Oleh  sebab  itu,  untuk menjamin  kelangsungan  hidup A.  salina maka konsentrasi yang diperbolehkan tidak lebih  dari  6,262  ppm  untuk E. cottonii dan 8,355 ppm untuk Gracillaria sp.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Nilai  LC 50 ekstrak  rumput  laut E. cottonii dan Gracillaria sp  menggunakan n-heksan  terhadap  larva A.  salina masing- masing  adalah  62,62  ppm  dan  83,55  ppm. Konsentrasi  yang  aman  ekstrak E.  cottonii dan Gracillaria sp  terhadap A.  salina masing-masing  adalah  6,262  ppm  dan 8,355 ppm.

## Saran
Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan mengenai kandungan serta potensi senyawa bioaktif  yang  terkandung  dalam  ekstrak rumput  laut E.  cottonii dan Gracillaria sp, sehingga dapat dilakukan pengujian bioaktivitas lebih lanjut mengenai potensinya sebagai senyawa obat.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Khurniasari, D.W. (2004). Potensi Antikanker Senyawa Bioaktif Ekstrak Kloroform dan Metanol  Makroalgae  Sargassum  duplicatum  J.  Agardh. Fakultas  Biologi  Universitas Gadjah Mada Jogjakarta. Jogjakarta
2. Krishnaraju,  A.  V.,  T.  V  Rao.,  D.  Sundararaju.,  M.  Vanisree.,  H-S.  Tsay.,  and  G.  V. Subbaraju.  (2006).  Assessment  of  Bioactivity  of  Indian  Medicinal  Plants  Using  Brine
Shrimp ( Artemia salina ) Lethality Assay. International Journal of Applied Science and Engineering , 3: 125 – 135.
3. Colegate, S.M. and R.J. Molyneux. (2007). Bioactive Natural Products: Determination, Isolation and Structural Determination Second Edition .  Prancis: CRC Press.
4. Hiola, R., R. Tuiyo dan Syamsuddin. (2014). Pengaruh Salinitas yang Berbeda terhadap Penetasan  Kista Artemia sp.  di  Balai  Benih  Ikan  Kota  Gorontalo  Provinsi  Gorontalo. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan , 2 : 52 – 55.
5. Harmita dan M. Radji. (2008). Analisis Hayati . Penerbit Buku Kedokteran. Jakarta.
6. Tyas.  (2016).  Uji  Toksisitas  Letal  Cr 6+ terhadap  Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus ). Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia , 2: 128 - 132.
7. Sangi,  M.,  L.  Momuat,  dan  M.  Kumaunang.  (2012).  Uji  Toksisitas  dan  Skrining Fitokimia Tepung Gabah Pelepah Aren ( arenga pinnata ). Jurnal Ilmiah Sains , 12: 128- 134.
8. Nedi,  S.,  Thamrin.,  dan  H.  Marnis.  (2006).  Toksisitas  Deterjen  terhadap  Benih  Ikan Kakap Putih ( Lates calcarifer , Bloch). Berkala Perikanan Terubuk , 33: 75 – 81.
9. Meyer,  B.N.,  N.R.  Ferrigni,  J.E.  Putnan,  L.B.  Jacobsen,  D.E.  Nicholas,  and  J.L. Mclaughlin.  (1982).  Brine  Shrimp:  A  Conveinient  General  Bioassay  For  Active  Plant Constituents, Planta Medica . 4 : 31 - 34.
10. Nur, A. dan Y. Zuhud. (2011). Kanker Lenyap Berkat Sirsak. Jakarta: PT. Agro Media Pustaka.
11. Sharo. M. N., Ningsih, Rachmawati., A. Nasichuddin, Ahmad, dan Hanapi. (2013). Uji Toksisitas dan Identifikasi Senyawa Ekstrak Alga Merah ( Eucheuma cottonii ) Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach. Jurnal Alchemy , 3: 170 - 177.
12. Sukardiman., R. Abdul dan P. N. Fatma. (2004). Uji Praskrining Aktivitas Antikanker Ekstrak  Eter  dan  Ekstrak  Metanol Marchantia  planiloba Steph.  dengan  Metode  Uji Kematian  Larva  Udang  dan  Profil  Densitometri  Ekstrak  Aktif. Majalah  Farmasi Airlangga, 4: 97 - 100.
13. Astuti,  P.,  S.  Utami,  T.  Pratiwi,  T.  Hertiani,  G.  Alam,  A.  Tahir  and  S.  Wahyono. (2005).  Antimicrobial  Activity  Screening  of  Marine  Sponges  Extracts  Colected  from Barang Lomposea. Journal of Traditional Medicine, 10:32.
14. Hardiko,  F.  (2018). Toksisitas  Ekstrak  Rumput  Laut  (Eucheuma  cottonii)  dengan Pelarut  n-Heksana  dan  Etil  Asetat  terhadap  Artemia  salina .  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan Universitas Riau.
15. Suryati,  E.  (2015). Uji  Ekstrak  Ramuan  “Kandungan  Subur”  (Kunyit  (Curcuma domestica  Val.),  Kencur  (Kaempferia  galanga  L.),  Adas  (Foeniculum  vulgare  Mill.) dan Pegagan (Centella asiatica)) pada Berbagai Pelarut terhadap Toksisitas Larva A. salina. Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negri Maulana Malik Ibrahim, Malang.
16. Kunsah,  B.  dan  R.  Widyastuti.  (2018). Uji  Toksisitas  Akut  Kulit  Kentang  (Solonum tuberosum  L.)  terhadap  Larva  A.  salina  Leach  dengan  Metode  BSLT  (Brine  Shrimp Lethality Test). Prodi D3 Analisis Kesehatan Universitas Muhammadiyah, Surabaya.