## Pengaruh Perbandingan Konsentrasi Tween 80 dan Fosfatidilkolin terhadap Karakteristik Transferosom Asam Askorbat

## Effect of Tween 80 and Phosphatidylcholine Concentration Ratio on Ascorbic Acid Transferosomes Characteristics
Isriany Ismail 1 , Dwi Wahyuni Leboe 1 , Nurwinda Eka Syaputri 2
1 Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar, Jl H.M. Yasin Limpo No.36 Kecamatan Sombaopu Kabupaten Gowa, Sulawesi Selatan
1 Mahasiswa Jurusan Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin Makassar, Jl H.M. Yasin Limpo No.36 Kecamatan Sombaopu Kabupaten Gowa, Sulawesi Selatan
Kontak sur-el: isriany.ismail@uin-alauddin.ac.id

## ABSTRAK
Transferosom  adalah  sistem  pengantaran  obat  yang  dapat  membawa  secara  transdermal  obat  hidrofilik, lipofilik,  dan  amfifilik  dengan  molekul  berat  rendah  atau  tinggi.  Transferosom  adalah  sistem  ultra-fleksibel  yang dapat  merusak  dan  melewati  konstriksi  sempit  (dari  5  hingga  10  kali  lebih  kecil  dari  diameternya  sendiri)  tanpa kehilangan yang signifikan. Transferosom dapat melintasi barrier stratum korneum. Tujuan dari penelitian ini adalah penentuan  perbandingan  konsentrasi  yang  dibutuhkan  untuk  membuat  asam  askorbat  transferosom.  Transferosom disiapkan  dengan  metode  hidrasi  lapis  tipis.  Transferosom  mengandung Tween  80 sebagai  pelarut  surfaktan, fosfatidilkolin- soya , kloroform  :  metanol (1  : 1), dan dihidrasi  dengan PBS pH 7,4.  Berdasarkan penelitian, desain formula  yang  membandingkan  konsentrasi  antara  fosfatidilkolin:  Tween  80  adalah  95:  5,85:  15,  dan  75:25 menunjukkan  karakteristik  Transferosome.  Hasil  efisiensi  penjeratan  adalah  sekitar  99,75%  -99,95%,  ukuran partikel  sekitar  151,4-456,1nm,  dan  morfologi  partikel  dengan  memindai  mikroskop  elektron  dan  mikroskop trinoculer.  Formula  terbaik  adalah  formula  III  dengan  efisiensi  penjeratan  99,95%,  ukuran  partikel  151,4nm  dan morfologi menunjukkan mereka memiliki vesikel unilamellar besar (LUV).
Kata Kunci : Transferosom, Asam Askorbat, Liposom ultra-flexible , Vesikel, Fosfatidilkolin

## ABSTRACT
Transferosome  are  drug  delivery  system  which  are  capable  to  delivery  of  hydrophilic,  lipophilic,  and amphiphilic drug with low or high weight molecular. Transferosome are ultra-flexible system which can deform and pass  through  narrow  constriction  (from  5  to  10  times  less  than  their  own  diameter)  without  significant  loss.  They can across the barrier of stratum corneum. The aim of this study is determination of ratio concentration that need to make  the  transferosome  ascorbic  acid.  Transferosome  were  prepared  by  thin-layer  hydration  method. Transferosome  are  contains  Tween  80  as  a  surfactant,  soya-phosphatidylcholine,  chloroform  methanol  (1:1)  as  a solvent,  and  they  are  hydrated  by  PBS  pH  7,4.  Based  on  the  investigate,  design  of  the  formula  who  compare concentration  between  phosphatidylcholine:  Tween  80  are  95:5,85:15,  and  75:25  showed  well  characteristics  of Transferosome. Result of entrapment efficiency are about 99,75%-99,95%, particles size are about 151,4-456,1nm, and particle morphology by scanning electron microscope and trinoculer microscope. The best formula is formula III with entrapment efficiency 99,95%, particle size 151,4nm and the morphology showed they has large unilamellar vesicles (LUV).
Keywords : Transferosome, Ascorbic Acid, Ultra-flexible Liposome, Vesicles, Phosphatydilcholine

## PENDAHULUAN
Telah  dilaporkan  sebelumnya  bahwa ketika  obat  diberikan  melalui  jalur  oral,
sekitar  74%  zat  aktif  oral  tidak  ditemukan seefektif  yang  diinginkan  (Marwah,  Garg, Goyal,  &  Rath,  2016,  hal.  564).  Efikasi  obat
yang diberikan secara oral dapat ditingkatkan dengan  memanfaatkan  rute  pengantaran  obat lain. Pengantaran obat melalui jalur transdermal  bisa  menjadi  jawaban  atas masalah  ini.  Rute  transdermal  juga  bisa meningkatkan  kualitas  hidup  pasien.  Rute transdermal  lebih  baik  daripada  bentuk sediaan oral (Ahad, et al., 2012).
Penggunaan asam askorbat topikal disukai dalam  praktik  dermatologi.  Berbagai  krim dengan  derivatif  Asam  Askorbat  yang tersedia  di  pasar.  Tidak  semua  jenis  sediaan secara  fisiologis  efektif.  Beberapa  bisa membawa Vitamin C ke dermis dalam jumlah yang  cukup,  sementara  bentuk  kimia  yang lain  tidak  bisa  terkonversi  ke  bentuk  aktif biologis dari Asam Askorbat di kulit (Telang, 2013).
Transferosom adalah agregat supramolekul lipid  superformal  sempurna  yang  terdiri  dari sekurang-kurangnya satu kompartemen bagian  dalam  berair  yang  dikelilingi  oleh lapisan  lipid  ganda  yang  memiliki  sifat khusus  yang  disesuaikan,  karena  adanya "aktivator permukaan" pada membran vesikular  (Zheng,  Fang  Xia Wang, &  Zhang, 2012).
Tween  80  dan  fosfatidilkolin  menjadi bahan yang umum dalam pembuatan transferosom.  Seperti  misalnya  penggunaan
tween 80, span 80 dan fosfotidilkolin sebagai bahan  pembawa  ibuprofen  dengan  proses pembuatan  metode  hidrasi  film  lipid  dengan rotary  evaporator (Jain,  Jain,  &  Mahajan, 2014). Penggunaan tween 80 dan fosfatidilkolin  dengan  pelarut  etanol  juga diterapkan  dalam  pembuatan  gel  Voltaren sehingga  senyawa  aktif,  natrium  diklofenik, dapat  lepas  terkendali  setelah  pemberian  gel secara subkutan (Rai, Pandey, & Rai, 2017).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat dan bahan yang digunakan
Alat  yang  digunakan  yaitu bath sonikator ( Elmasonic  S  40  H) ,  labu  alas  bulat (Schoot Duran ® ) , mikroskop triokuler, neraca analitik (Kern) , Particle  Size  Analyzer ( Beckman Coulter ), penangas (Memmert) , rotary evaporator  (Heidolph  Vavor),  Scanning Electron  Microscope  (HITACHI  SU3500) , sentrifugator ( EBA 21 ), shaker  (Heidolph Unimax), dan  spektrofotometer  UV-VIS
(Genesys) .
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu  asam askorbat  (Merck ® ),  Air  suling,  Kloroform (Bratachem ® ), KH 2 PO 4 (Asian  Pharmacy ® ),
metanol (Bratachem ® ), soya phosphatidylcoline (Sigma Aldrich ®
Singapura), tween 80  (Bratachem ® ),  sodium hidroksida dan whatman filter No. 1 dan 43.
Tabel 1. Formula Transferosom Vitamin C Kode Formula Fosfatidilkolin (%) Tween 80 (%) Kloroform:Metanol (1:1)(mL) Asam Askorbat (mg) F I 95 5 10 100 F2 85 15 10 100 F3 75 25 10 100

## Pembuatan Transferosom
Prosedur pembuatan
transferosom menggunakan  metode  yang  digunakan  oleh Eldhose,  Mathew,  &  J  (2016).  Metode pembuatan transferosom menggunakan teknik hidrasi  film  tipis.  Proses  pembuatannya meliputi  3  langkah.  Pertama,  ditimbang masing – masing bahan. Kemudian
dicampurkan  bahan  vesikel  dengan  sampel terbentuk, yakni tween 80, asam askorbat, dan fosfatidilkolin- soya di  dalam  labu  alas  bulat dan  dimasukkan  kloroform  methanol  (1:1) sebanyak  10  mL.  Setelah  itu,  diuapkan pelarut organik di atas suhu transisi lipid 40˚C menggunakan vacuum  rotary  evaporator .
Hingga  terbentuk  lapis  tipis  di  dinding  labu alas  bulat  dan  ditandai  dengan  tidak  adanya aliran dalam labu. Campuran disimpan dalam deksikator  1  x  24  jam.  Lapisan  film  yang tertinggal  dihidrasi  dengan  campuran  dapar fosfat  pH  7,4  sebanyak  10  mL  dan  di- shaker
60  rpm  dalam  suhu  ruang  selama  1  x  60 menit.  Kemudian,  lapisan  film  didiamkan selama  1  x  60  menit  hingga  vesikel mengembang.  Setelah  itu,  vesikel  disonikasi dengan bath sonikator  pada  suhu  ruang selama 30 menit.
Pengujian  efisiensi  penjerapan  obat  dalam

## Transferosom Asam Askorbat
Jumlah  obat  terjerap  dalam  Transferosom Asam  Askorbat  dari  formulasi  berbeda ditentukan  dengan  cara  sentrifugasi  10  mL dispersi  transferosom  asam  askorbat  pada kecepatan 5000 rpm selama 90 menit.  Cairan
supernatan  diukur  pada  panjang  gelombang maksimum asam askorbat dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis
(Andang, Kumi, Yoshiyuki, Yoshie, & Etsuo, 2015).
Efisiensi  penjerapan  dihitung  dengan rumus (Venkatesh, et al., 2014)

## 𝐸𝑇 = 𝑇𝐶 − 𝑇𝑇𝐶 𝑇𝐶 𝑥 100%
dimana  ET  adalah  efisiensi  penjerapan,  TC adalah konsentrasi total vitamin C awal, TCC adalah  konsentrasi  vitamin  C  yang  tidak terjerap.

## Pengujian Ukuran Partikel
Ukuran  partikel  pada  Transferosom  Asam Askorbat  dapat  diukur  dengan Particle  Size Analyzer dengan  sistem Dynamic  Light Scattering (Lei, Yu, Lin, & Zhou, 2013).

## Pengujian Morfologi Permukaan
Bentuk sediaan sediaan dilihat menggunakan  SEM  dan  mikroskop  optik (Irfan, Verma, & Ram, 2012; Andang, Kumi, Yoshiyuki, Yoshie, & Etsuo, 2015).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Transferosom  adalah  kandidat  yang  baik untuk  pengantaran  non-invasif  untuk  obat- obatan berukuran kecil, menengah, dan besar. Formula  yang  dibuat  terdiri  dari  bahan  aktif asam  askorbat, tween 80  sebagai  surfaktan, fosfatidilkolin- soya sebagai pembentuk vesikel,  metanol  dan  kloroform  sebagai pelarut  organik,  serta  PBS  ( Phosphate Buffer Sulfat )  pH  7,4  sebagai cairan  penghidrasi.
Yang  membedakan  ketiga  formula  adalah
kombinasi Tween 80 dan soya fosfatidilkolin.
Formula  I  perbandingannya  5:95,  Formula  II 15:85  dan  Formula  III  25:75.  Tujuan  variasi konsentrasi adalah untuk mengetahui pengaruh  perbandingan  konsentrasi  dari ketiga formula.
Metode yang digunakan dalam pembuatan transferosom  adalah  metode  hidrasi  lapis tipis.  Kecepatan rotary  evaporator yang tinggi  bisa  menyebabkan  tidak  meratanya penyebaran  panas  yang  menyebabkan  lapis tipis yang terbentuk akan berbeda ketebalannya, sehingga menggunakan
kecepatan  60  rpm  dalam  kondisi  vakum diharapkan cukup untuk membentuk transferosom. Vakum sendiri berfungsi untuk menguapkan pelarut organik yakni kloroform : methanol (1:1). Suhu yang digunakan adalah
40°C,  tidak  terlalu  tinggi  dikarenakan menjaga  kestabilan  zat  aktif  serta  fosfolipid. Sediaan dihidrasi dengan dapar fosfat pH 7,4. Dapar  fosfat  akan  melingkupi  keseluruhan lapisan  lipid  film  tipis  yang  terbentuk  agar transferosom  terbentuk  secara  merata  dan dihidrasi dengan menggunakan shaker 60 rpm agar  proses  hidrasinya  merata  ke  seluruh permukaan  labu  alas  bulat  yang mengandung lapis  tipis.  Hidrasi  dilakukan  dengan  shaker tertutup  untuk  melindungi  sampel  karena sensitivitasnya terhadap cahaya. Proses sonikasi,  sonikator  yang  digunakan  adalah bath sonikator yang merupakan tipe sonikator
tidak langsung yang memanfaatkan gelombang  ultrasonik  yang  melewati  cairan untuk sampai ke sampel
Untuk penentuan persen efisiensi penjerapan  dengan  metode  Spektrofotometri UV-Vis, dilakukan terlebih dahulu pengukuran baku sampel yakni asam askorbat (dengan panjang gelombang 258 nm) yakni 5 bpj;  7,5  bpj;  10  bpj;  12,5  bpj;  15  bpj  dengan blanko  dapar  fosfat  pH  7,4  sesuai  dengan cairan penghidrasi (lihat tabel 2). Kurva yang terbentuk  memiliki  hubungan  yang  baik antara konsentrasi dan absorbansi, dengan R2 =  0,9954  (lihat  gambar  1).  Kurva  baku digunakan  untuk  menentukan  konsentrasi asam  askorbat  tidak  terjerap  dari  sampel. Sampel sebelum diukur, disentrifugasi terlebih  dahulu  5000  rpm  selama  90  menit. Hasilnya,  obat  terjerap  dengan  baik  pada sediaan  dengan  jumlah  penyerapan lebih dari 99%  (lihat  tabel  3).  Hasil  yang  paling  baik
Tabel   2.  Absorbansi Asam Askorbat secara Spektrofotometri UV-Vis (258,00 nm) Konsentrasi (X) Absorbansi (Y) 5 bpj 0,309 nm 7,5 bpj 0,434 nm 10 bpj 0,545 nm 12,5 bpj 0,694 nm 15 bpj 0,781 nm
Gambar 1. Kurva Baku Asam Askorbat. y = 0.0482x + 0.071 R² = 0.9954 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 0 5 10 15 20 A b so rb an si (n m ) Konsentrasi  (bpj)
untuk persen obat terjerap adalah Formula III dengan 99,95%.
Penentuan ukuran partikel suspensi
Transferosom  diukur  dengan  alat dynamic light  scattering  (Beckman  Coulter) dilihat pada  tabel  2.  Ukuran  partikel  dari  sediaan adalah  Formula  I  dengan  456,1  nm,  Formula II  dengan  176,2  dan  Formula  III  151,4  nm. Sedangkan  indeks  polidispersitas  Formula  I dengan 0,363, Formula II 0,248 dan  Formula III  0,381.  Ukuran  liposom  adalah  50nm  - 100µm. Ukuran partikel untuk liposom adalah
20 nm –  10  µm.  Karena  liposom konvensional  dengan  ukuran  200  –  800  nm memiliki  keterbatasan,  Cevc  dan  Blume memperkenalkan  liposom  generasi  kedua bernama  liposom ultradeformable dengan elastisitas  tinggi  (10-30  lebih  fleksibel
Tabel 3. Absorbansi dan % Obat Terjerap.
Sampel Absorbansi (nm) Obat Terjerap % Formula I 1,128 nm 99,78 % Formula II 0,523 nm 99,90 % Formula III 0,305 nm 99,95 % Tabel 4. Data Ukuran Partikel Transferosom Asam Askorbat Parameter F I (nm) F II (nm) F  III (nm) Range  ukuran partikel 456,1 176,2 151,4 Indeks Polidispersitas 0,363 0,248 0,381

## Morfologi yang diamati dengan SEM 50,0kV
Gambar 2. Morfologi Partikel dengan SEM
Morfologi dalam metilen blue Gambar 3. Morfologi Partikel dengan Mikroskop trinokuler
dibandingkan  liposom)  yang  secara  umum ukurannya  <300nm.  Pada  ketiga  formula berdasarkan  literatur  ketiganya  masuk  dalam range  ukuran  partikel  yang  sesuai  untuk transferosom.  Dipilih  formula  III  untuk diamati secara morfologi.
Morfologi diamati pada sampel
transferosom  asam  askorbat  yang  diberi perlakuan  preparasi  disalut  emas  dan  diamati pada  kecepatan  voltase  10,0  kV.  Morfologi tidak  sferis  dan  tidak  beraturan  dikarenakan komponen  dari  transferosom  yang  terdiri kebanyakan  lemak  sehingga  memungkinkan untuk tidak membentuk sferis pada deck glass jika dibandingkan dengan salah satu penelitian  dengan  sampel  yang  telat  disalut dengan  emas  dan  diamati  pada  kecepatan voltase  20  kV.  Morfologi  yang  dilihat menggunakan  mikroskop  triokuler  dilakukan dua pengamatan yakni tanpa metilen blue dan dengan  metilen  blue  yang  perbesarannya konstan  40x.  Transferosom  asam  askorbat memperlihatkan  struktur large  unilamelar vesicle (LUV)  dimana  diperlihatkan  dengan saat ditetesi metilen blue core berubah bagian hidrofiliknya  menjadi  biru.  Formula  III digolongkan  dalam  LUV  karena  ukuran partikelnya masuk dalam range LUV 100 nm- 10 µm.

## KESIMPULAN
Formula  I,  II,  dan  III  mampu  membentuk
Transferosom  Asam  Askorbat.  Perbandingan konsentrasi  antara  fosfatidilkolin  dan  tween 80 memberikan pengaruh terhadap
karakteristik  transferosom  asam  askorbat yang  baik  adalah  pada  formula  III,    dengan karakteristik yakni efesiensi penjerapan 99,95 %,  ukuran  partikel  151,4nm,  dan  indeks polidispersitas  0,381  dengan  pengamatan morfologi  bentuk  partikel large  unilamellar vesicle .

## REFERENSI
Ahad,  A.,  Aqil,  M.,  Kohli,  K.,  Sultana,  Y.,
Mujeeb, M., & Ali, A. (2012). Formulation and Optimzation Nanotransferosomes using  Experimental  Design  Technique  for Accentuated  Transdermal  Delivery  of Valsartan. Nanomedicine .
Andang,  M.,  Kumi,  K.,  Yoshiyuki,  H., Yoshie,  M.,  &  Etsuo,  Y.  (2015). Evaluation of Transfersome and
Protransfersome for Percutaneous Delivery of Cisplatin in Hairless Mice.
Pharmaceutics & Pharmacology . Eldhose,  M.,  Mathew,  F.,  &  J,  N.  (2016). Transfersomes. International  Journal  Of Pharmacy and Pharmaceutical Research . Irfan,  M.,  Verma,  S.,  &  Ram,  A.  (2012).
Preparation and Characterization of Ibuprofen  Loaded  Transfersome  As  A Novel  Carrier  for  Transdermal  Drug Delivery  System. Asian  Journal  of Pharmaceutical and Clinical Research , 1. Jain,  S.,  Jain,  V.,  &  Mahajan,  S.  C.  (2014). Lipid  Based  Vesicular  Drug  Delivery Systems. Advances in Pharmaceutics .
Lei, W., Yu, C., Lin, H., & Zhou, X. (2013).
Development of tacrolimus-loaded transfersomes  for  deeper  skin  penetration enhancement and therapeutic effect improvement  in  vivo. asian  journal  of pharmaceutical sciences .
Marwah, H., Garg, T., Goyal, A., & Rath, G. (2016).  Permeation  Enhancer  Strategies  to Transdermal Drug Delivery. Drug
Delivery , 564.
Rai,  S.,  Pandey,  V.,  &  Rai,  G.  (2017). Transfersomes  as  versatile  and  flexible nano-vesicular  carriers  in  skin  cancer therapy: the state of the art. Nano Reviews and Experiments, 8 (1).
Telang,  P.  S.  (2013).  Vitamin  C  in dermatology. Indian  Dermatology  Online,
4 (2).
Venkatesh,  D.  N.,  Kalyani,  K.,  Tulasi,  K.,
Priyanka,  S.,  Abid  Ali,  S.,  &  Kiran,  H. (2014). Transfersomes:
A Novel Technique for Transdermal Drug Delivery. International Journal of Research
inPharmaceuticals and Nano Science . Zheng, W., Fang Xia Wang, L., & Zhang, Y.
(2012). Preparation and quality assessment of  itraconazole  transfersome. Journal  of Pharmaceutics .