Aktivitas Antibakteri Fraksi Metanol dan Etil Asetat Daun Benalu ( Dendrophthoe Petandra (L) Miq .) Terhadap Bakteri Streptococcus Pyogenes dan Eschrichia Coli
Antibacterial Activity of Metanol and Etil Acetat Fractions of Mistletoe (Dendrophthoe Petandra (L) Miq .) on Streptococcus Pyogenes and Eschrichia Coli
Trias Sofia Putri 1*
Kunti Nastiti 1
Melviani 2
Putri Vidiasari Darsono 1
Program Studi Sarjana Farmasi, Fakultas Kesehatan, Universitas Sari Mulia, Banjarmasin, Kalimantan Selatan, Indonesia
*email: tsofiaptr@gmail.com

## Abstrak
Indonesia merupakan salah satu Negara yang memanfaatkan tanaman obat tradisional untuk  membantu  kesehatan  masyarakat. Daun  benalu  mengandung  senyawa  aktif yang dapat menjadi antibakteri. Pemakaian daun benalu secara empiris dimasyarakat mantewe  kabupaten  tanah  bumbu  Kalimantan  selatan  biasa  digunakan  untuk mengobati amandel atau tonsillitis. Salah satu daun benalu yang digunakan masyarakat adalah  daun  benalu  yang  menempel  pada  tanaman  jeruk  nipis.  Untuk  mengetahui aktivitas  fraksi  metanol  dan  etil  asetat  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri Streptococcus  Pyogenes dan Escherichia  Coli. jenis  penelitian  ini  menggunakan true experimental dalam pembuatan ekstrak menggunakan metode maserasi dan metode uji  aktivitas  antibakteri  digunakan  metode papper  disk dan  ditentukan  konsentrasi 25%,50%,100%. Hasil diameter rata-rata zona hambat menunjukkan bahwa fraksi yang diperoleh  menggunakan  pelarut etil  asetat  terhadap bakteri Streptococcus  Pyogenes pada  konsentrasi  25%,50%,100%  masing-masing  sebesar 10,286mm,  12,235mm, 13,966mm . dan  pada  pelarut  metanol  pada  konsentrasi 25%,  50%,  100%  masing- masing  sebesar 9,606mm,  10,486mm,  10,736mm.  sedangkan  pada  fraksi  yang diperoleh  menggunakan  pelarut  etil  asetat  terhadap  bakteri Escherichia  Coli pada konsentrasi 25%,50%,100% masing-masing sebesar 8,356mm, 12,665mm, 13,436mm. dan pada pelarut metanol pada konsentrasi 25%, 50%, 100% masing-masing sebesar 7,456mm,  8,525mm,  12,858mm.  sedangkan  hasil  diameter  rata-rata  zona  hambat pada  kontrol  positif  kloramfenikol  pada  bakteri Streptococcus  Pyogenes yaitu 26,178mm,  dan  diameter  rata-rata  zona  hambat  pada  control  positif  pada  bakteri Escherichia Coli yaitu 28,5 mm. fraksi metanol dan etil asetat daun benalu jeruk nipis (Dendrophthoe Petandra (L) Miq.) resisten terhadap bakteri Streptococcus Pyogenes dan Escherichia Coli.

## Kata Kunci:
Antibakteri Daun Benalu Jeruk Nipis
Escherichia Coli Paper Disk Streptococcus Pyogenes
Keywords :
Antibacterial
Lime Parasite Leaves Escherichia Coli Paper Disk
Streptococcus Pyogenes.

## Abstract
Indonesia  is  one  of  the  countries  that  utilizes  traditional  medicinal  plants  to  help  public health. mistletoe leaves contain active compounds that can be antibacterial. the empirical use of parasite leaves in the mantewe community, tanah bumbu district, south Kalimantan, is commonly used to treat tonsils or tonsillitis. one of the parasite leaves that is used by the community is the parasite leaf attached to the lime plant. to determine the activity of the methanol and ethyl acetate fractions as antibacterial against streptococcus pyogenes and Escherichia coli bacteria. this type of research uses true experimental in the manufacture of extracts using the maceration method and the antibacterial activity test method uses the paper disk method and determines the concentration of 25%,50%,100%. . the results of the average diameter of the inhibition zone showed that the fraction obtained using ethyl acetate  solvent  against  streptococcus  pyogenes  pyogenes  at  a  concentration  of 25%,50%,100%  was  10,286mm,  12,235mm,  13,966mm  respectively.  and  in  methanol solvent  at concentration  of  25%,50%,100%  respectively  9,606mm,  10,486mm, 10,736mm. while the fraction obtained using ethyl acetate solvent against Escherichia coli bacteria  at  a  concentration  of  25%,50%,100%  was  8,356mm,  12,665mm,  13,436mm respectively.  and  in  methanol  solvent  at  concentrations  of  25%,50%,100%  respectively 7,456mm, 8,525mm, 12,858mm. while the average diameter of the inhibition zone on the positive  control  of  chloramphenicol  on  streptococcus  pyogenes  was  26,178mm, and  the average diameter of the inhibition zone on the positive control on Escherichia coli bacteria was a 28,5mm. the methanol and ethyl acetate fractions of the leaves oh the lime parasite (Dendrophthoe Petandra (L) Miq.) Are resistet to Streptococcus Pyogenes and Escherichia Coli.
© 2024 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v10i2.7723

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara  yang  memiliki kekayaan  hayati  terbesar  lebih  dari  30.000  spesies tanaman  dengan  tingkat  tinggi.    Sampai  saat  ini  sudah tercapai  7000  spesies  tanaman  yang  telah  diketahui khasiatnya  tetapi  kurang  dari  300  tanaman  yang dipergunakan untuk bahan baku industry farmasi secara regular.
World  Health  Organization pada  tahun    2008  telah tercatat  bahwa  terdapat  68%  penduduk  dunia  masih menggunakan  sistem  pengobatan  tradisional  yang banyak  melibatkan  tanaman  untuk  menyembuhkan penyakit  dan  lebih  dari  80%  penduduk  dunia menggunakan  obat  tradisional  untuk  membantu kesehatan masyarakat (Mukhtarini 2014).
Di Indonesia terdapat berbagai spesies benalu, biasanya masyarakat  umum  lebih mengenal  benalu  berdasarkan tumbuhan inang tempat tumbuhnya. Benalu merupakan tanaman  pengganggu  yang  bersifat  parasit  terhadap tanaman  inangnya.  Benalu  merupakan  salah  satu golongan tumbuhan parasit yang termasuk dalam suku Loranthaceae (P.D. Putri et al., 2021).
Dendrophtoe  pentandra adalah  jenis  benalu  yang  masuk dalam suku Loranthaceae yang dapat memarasit berbagai macam  tumbuhan  inang,  semak  ataupun  pohon. Pemakaian secara empiris dimasyarakat setempat biasa digunakan untuk mengobati amandel atau tonsillitis.
Bakteri penyebab terdiri dari bakteri aerob gram positif maupun  gram  negative. Salah  satu  penyebab  tonsillitis adalah  adanya  infeksi  bakteri Streptococcus  Pyogenes .
Bakteri  ini  berkolonisasi  di  tenggorokan  dan  kulit manusia  membentuk  mekanisme  virulensi  yang kompleks  untuk  melawan  sistem  pertahanan  tubuh. Selain  itu  menggunakan  juga  bakteri Escherichia  Coli yang merupakan  salah  satu bakteri  Gram  negatif  yang umumnya  hidup  di  dalam  saluran  pencernaan  manusia atau hewan (Noval et al., 2019). Escherichia Coli memiliki kemampuan    untuk  bertahan  hidup  pada  kondisi
lingkungan yang sulit (Rahayu, Nurjanah, and Komalasari 2018).

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah rotary evoparator, wadah  maserasi,  belender,  autoklaf, Erlenmeyer (pyrex) , spatula, kertas label, jangka sorong, jarum  ose,  bunsen,  kertas  cakram,  peralatan  gelas (pyrex) ,  neraca  analitik,  cawan  petri,  kain  hitam,  kain putih, spuit, mikropipet, batang pengaduk, plastik warp, corong pisah, incubator , alumunium foil , tisu.
Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah simplisia daun  benalu (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) ,  DMSO 10%,  etanol  96%,  N-heksan,  aquadest,  methanol,  etil asetat ,  Nutrient  Agar  (NA), biakan  bakteri Streptococcus Pyogenes dan biakan bakteri Escherichia Coli.

## Metode pelaksanaan

## Pengolahan Sampel
Sampel  daun  benalu (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) diambil  atau  dipetik  terlebih  dahulu  pada  bagian  daun yang bewarna hijau muda atau hijau kekuningan namun segar, pisahkan dari batangnya. Kemudian sampel daun benalu (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) dilakukan sortasi  basah  dimana  untuk  memisahkan  bahan pengotor  yang  terdapat  pada  tumbuhan  tersebut dengan  cara  mencuci  dengan  menggunakan  air  bersih dan  mengalir  (Amalia et  al., 2021).  Setelah  dilakukan pencucian  langkah  selanjutnya  adalah  dilakukannya perajangan  untuk    memudahkan  suatu  proses pengeringan.  kemudian  dikeringkan  dibawah  sinar matahari  langsung  yang  ditutup  menggunakan  kain hitam.  setelah  sampel  kering,  langkah  selanjutnya dilakukan  sortasi  kering  yang  akan  dihaluskan  dengan menggunakan  blender  sehingga  bisa  didapat  serbuk simplisia daun benalu (Dendrophthoe Petandra (L) Miq.) .

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak daun benalu (Dendrophthoe Petandra (L) Miq.) Menggunakan metode maserasi menggunakan pelarut  etanol  96%.  Daun  benalu (Dendrophthoe Petandra (L) Miq.) yang sudah menjadi serbuk simplisia diambil dan ditimbang sebanyak 500 gram dimasukkan kedalam  wadah  kaca  untuk  dilakukan  maserasi. Selanjutnya  ditambahkan  etanol  96%  hingga  simplisia terendam  semua  (dilebihi  2-3  cm  dari  permukaan simplisia) digojok kemudian ditutup rapat dan didiamkan selama 3x24 jam. Setelah  dimaserasi selama 3x24 jam ekstrak  cair  yang  diperoleh  dipekatkan  menggunakan water bath. Pada suhu 40 0 C dengan kecepatan 100 rpm sampai didapatkan ekstrak kental.
Langkah selanjutnya dilakukan perhitungan hasil persen rendeman:
% Rendemen Ekstrak=
Bobot Ekstrak
Bobot Serbuk Simplisia x 100 %

## Fraksinasi
Ekstrak kental yang dihasilkan dilarutkan dalam 100 ml aquades.    Selanjutnya  dipartisi  dengan  menambahkan 100  ml  pelarut  N-Heksan  yang  bersifat  non  polar, dikocok  dalam  corong  pisah  dan  didiamkan  hingga terbentuk  dua  lapisan  yang  terdiri  dari  lapisan  heksan dan lapisan aquadest (aquades pada bagian bawah dan n- heksana dibagian atas).
Kedua  lapisan  yang  terbentuk  kemudian  dipisahkan, diambil  lapisan  n-heksan  dari  corong  pisah.  Proses penambahan  pelarut  N-Heksan  yang  terbentuk  dalam aquadest  diulangi  sampai  n-heksan  menjadi  bening. Fraksi aquadest selanjutnya difraksinasi dengan pelarut etil  asetat  yang  bersifat  semi  polar  kemudian  dikocok dan dibiarkan hingga terbentuk dua lapisan yang terdiri dari fraksi etil asetat dan fraksi aquadest (aquades pada bagian bawah dan etil asetat dibagian atas). Hasil fraksi etil  asetat  diambil  dan  dipekatkan  dengan rotary evoparator. Sehingga  didapat  fraksi  kental  etil  asetat. Selanjutnya  sisa fraksi  aquadest  diuapkan  terlebih
dahulu, lalu ditambahkan methanol. Pada proses ini bila terbentuk  endapan  maka  dipisahkan  larutan  dengan endapannya dan diambil larutannya kemudian diuapkan dengan rotary evoparator.

## Sterilisasi Alat
Sebelum  dilakukannya  penelitian,  alat-alat  yang  akan digunakan  harus  dalam  keadaan  steril.  Alat-alat  yang digunakan dibungkus menggunakan alumunium foil atau kertas  minyak  yang  kemudian  dimasukkan  kedalam autoklaf dan disterilisasi pada suhu 121 0 C dalam waktu 15  menit.  Alat-alat  lain  misalkan  kawat  ose  dilakukan sterilisasi menggunakan api langsung dengan spiritus.

## Pembuatan Media
Pada  penelitian  ini  akan  dilakukan  dengan  pembuatan media  sebelum  uji  aktivitas  antibakteri,  media  yanag digunakan adalah:

## Nutrient Agar (NA)
Timbang  nutrient  agar  (NA)  sebanyak  20g/1000ml. Kemudian timbang kembali 2,5mg NA dan dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang kemudian ditambahkan 125 ml aquadest. Setelah itu larutkan dengan hot plate stirrer sampai media (NA) terlarut dengan baik. Lalu sterilkan cawan petri kedalam autoklaf dan sterilkan media (NA) yang sudah homogen didalam autoklaf dalam waktu 15 menit dengan suhu 121 0 C. Kemudian media dituangkan masing-masing 25 ml nedia (NA) kedalam cawan petri dan ditunggu hingga mengeras atau memadat. Media ini akan digunakan untuk inokulasi bakteri.
Pembuatan Larutan Standar Mc Farland 0,5
Larutan Mc  Farland digunakan  sebagai  pembanding kekeruhan  biakan  bakteri  dalam  media  cair  dengan kepadatan  antara  1  x  10 7 sel/ml  –  1  x  10 8 sel/ml. Pembuatan larutan mc farland 0,5 dilakukan dengan cara pipet larutan BaCI 2 1% sebanyak 0,005 ml dimasukkan kedalam  tabung  reaksi.  Kemudian  di  pipet  larutan 1% sebanyak 9,95 ml. Kemudian dicampurkan kedalam tabung  reaksi  yang  sudah  berisikan  larutan  B a Cl 2 1%.
Larutan  harus  tercampur sempurna  menggunakan  alat vortex dan disimpan didalam kulkas.
Tabel I. Jumlah  bakteri  sesuai  dengan  skala Mc
Farland.
Sumber : (Rosmania & Yanti, 2020)

## Peremajaan Bakteri
Bakteri  uji Streptococcus  pyogenes dan Escherichia  coli yang  telah  diidentifikasi  dibiakan  pada  media  agar. Kemudian dilakukan inkubasi dengan suhu 37 0 C selama 1 x 18 jam.

## Suspense Bakteri
Bakteri  uji Streptococcus  Pyogenes dan Escherichia  Coli diambil  dalam  1  ml  kemudian  dimasukkan  kedalam tabung reaksi dan disuspensikan dalam 9 ml larutan nacl 0,9%  steril  dan  dihomogenkan  serta  diseragamkan kekeruhannya dengan menggunakan metode mc farland 0,5.

## Pembuatan Larutan Kontrol
Pembuatan  larutan  kontrol  positif  dibuat  dari  sediaan obat klorampenikol 500 mg yang kemudian digerus dan dilarutkan  dengan  100  ml  aquadest,  sehingga mendapatkan konsentrasi 5 mg/ml. Pembuatan kontrol negativ yaitu larutan DMSO 10% diambil 5 ml dilarutkan dalam 50 ml aquadest.

## Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan  larutan  uji  25%,  50%,  100%  b/v  fraksi methanol  dan  etil  asetat,  dilakukan  dengan  cara membuat larutan induk yaitu hasil dari fraksi methanol dan  etil  asetat  daun  benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe
Petandra  (L)  Miq.) ditimbang  sebanyak  5  gram  dan dilarutkan dalam 5 ml aquadest.

## Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Difusi Cakram
Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  pada  bakteri  uji Streptococcus  Pyogenes dan Escherichia  Coli dengan menggunakan  metode  difusi  cakram.  Hasil  dari  fraksi methanol  dan  etil  asetat  daun  benalu (Dendrophthoe Petandra  (L)  Miq.) Dibuat  dengan  berbagai  konsentrasi (25%,  50%,  100%).  Kemudian  media  agar  yang  sudah disterilkan dimasukan kedalam cawan petri. Media agar yang  sudah  padat  selanjutnya  diinokulasikan  dengan bakteri  menggunakan  metode  tuang  dimana  biakan bakteri  uji Streptococcus  Pygones dan Escherichia  Coli masing-masing  diambil  sebanyak  1  ml  lalu  dituangkan kedalam cawan petri, cawan petri yang berisi bakteri uji diputar kekiri dan kekanan sebanyak 5-7 kali. Kemudian kertas cakram yang telah dicelupkan kedalam larutan uji selama  ±  15  menit,  diletakan  di  atas  media  agar  yang telah berisi bakteri uji, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C  selama  18  jam.  Selanjutnya  diukur  diameter daerah zona hambat yang didapat dengan jangka sorong. Pengujian  dilakukan  masing-masing  sebanyak  3  kali (Kurniawati et al., 2021).
Hitung  zona  hambat  bakteri  dengan  menggunakan rumus :
Rumus: d= 𝐴+𝐵 2
Keterangan :
d = diameter zona hambat A = diameter vertikal B = diameter horizontal Kategori antibakteri :
Tabel II. Kategori Antibakteri Diameter Zona Hambat (mm) Kategori > 20 Susceptible 15-19 Intermediet < 14 Resistant < 20 nonsusceptible Sumber : (CLSI, 2018). Skala Mc Farland Jumlah bakteri (x10
6 / ml ) 0,5 150 1 300 2 600
3 900
4 1200 5 1500 6 1800 7 2100 8 2400 9 2700
10
3000

## Populasi dan Sampel Penelitian

## Populasi Penelitian
Populasi merupakan wilayah regeneralisasi yang terdiri dari  obyek  atau  subyek  yang  memiliki  kualitas  dan karakteristik  tertentu  yang  ditetapkan  oleh  peneliti untuk dipelajari dan dapat diambil kesimpulannya (Muhyi et  al., 2018).  Dalam  metode  pengumpulan  data  yang digunakan  peneliti  dalam  penelitian  ini  adalah  dengan metode pengamatan yaitu teknik pengambilan data yang akan  dilakukan  secara  langsung  yang  dilakukan  di laboratorium  dengan  melihat  dan  mencatat  kegiatan pada  suatu  obyek  perlakuan.  Populasi  yang  akan dilakukan uji adalah daun benalu (Dendrophthoe Petandra (L)  Miq.) yang  didapatkan  dari  daerah  Kecamatan Mantewe, Kabupaten Tanah Bumbu Kalimantan Selatan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Data  Penetapan  Kadar  Air  Daun  Benalu  Pada  Tabel berikut:
Tabel III. Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air Jumlah Berat Sampel Basah (gram) 2.000 Berat Sampel Kering (gram) 1.849,01 Kadar air  (%) 7,55
Data  Perhitungan  Rendemeen  Ekstrak  Pada  Tabel berikut:
Tabel IV. Perhitungan Rendemen Ekstrak
Penetapan kadar air Jumlah Berat serbuk simplisia (gram) 1.849,01 Berat ekstrak (gram) 67,04 Total rendeman ekstrak (%) 3,6257
Data  Yang  Diperoleh  Dengan  Metode  Difusi  Cakram Pada Bakteri Streptococcus Pyogenes Pada Tabel berikut:
Tabel V. Metode  Difusi  Cakram  Pada  Bakteri
Streptococcus Pyogenes Fraksi uji Konsen trasi (%) Diam eter (mm) Rat a- rata Kate gori SD
R1 R2 R3 Etil  asetat (s.pyogene s) 100 % 15,4 85 13,25 5 13,1 6 13,9 66 resis tent 1,315 773
50 % 10,6 5 13,78
5 12,2 7 12,2 35 resis tent 1,567 793
25 % 9,57 5 10,93 5 10,3 5 10,2 86 resis tent 0,682 208 Methanol (s.pyogene s) 100 % 10,1 85 11,84 10,2 65 10,7 63 resis tent 0,933 278 50 % 14,3 35 8,32 8,80 5 10,4 86 resis tent 3,341 565 25 % 12,5 8,79 7,53 9,60 6 resis tant 2,583 686 Cloramph enicol Contro l (+) 28,0 05 26,24 5 24,2 85 26,1 78 sensi tive 1,860 896 DMSO 10% Contro l (-) - - - - - -
Data  Yang  Diperoleh  Dengan  Metode  Difusi  Cakram Pada Bakteri Escherichia coli Pada Tabel berikut:
Tabel VI .   Metode  Difusi  Cakram  Pada  Bakteri Escherichia coli
Fraksi uji Konsen trasi (%) Diam eter (mm) Rat a- rata Kate gori SD
R1 R2 R3 Etil  asetat (e.coli) 100 % 14,1 3 13,33 5 12,8 45 13,4 36 resis tent 0,648 505
50 % 11,0 9 14,6 12,3 05 12,6 65 resis tent 1,782 477 25 % 7,97 9,05 8,05 8,35 6 resis tent 0,601 775 Methanol (e.coli) 100 % 13,0 5 13,61 5 11,9 1 12,8 58 resis tent 0,868 509 50 % 8,11 9,63 7,83 5 8,52 5 resis tent 0,966 786 25 % 6,96 5 7,645 7,76 7,45 6 resis tant 0,429 661 Cloramph enicol Contro l (+) 26,3 05 29,79 5 29,4 28,5 sensi tive 1,911 157 DMSO 10% Contro l (-) - - - - - -

## Pembahasan
Pada proses penetapan kadar air simplisia daun benalu (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) di  dapatkan  hasil sebesar 7,55% dimana syarat kadar air untuk simplisia pada umumnya yaitu tidak lebih dari 10%.
Pada  proses  maserasi  didapatkan  hasil  rendeman ekstrak  daun  benalu (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.)
3,6257%  dan  rendeman  fraksi  etil  asetat  33,7%  dan metanol  31,4%.  Nilai  rendemen  menggunakan  satuan persen  (%)  yang  dimana  semakin  tinggi  suatu  nilai rendemen  yang  dihasilkan  artinya  nilai  ekstrak  yang sudah  dihasilkan  juga  semakin  banyak.  Hal  ini  sesuai dengan  hasil  penelitian  (Siagian  et  al.  2018)  yang menyatakan bahwa rendeman terbesar di peroleh dari pelarut non polar, semi polar, sedangkan pelarut polar menghasilkan rendeman yang paling kecil.
Uji aktivitas antibakteri fraksi methanol dan etil asetat daun benalu jeruk nipis (Dendropthoe Petandra (L) Miq.) dilakukan dengan menggunakan konsentrasi 100%, 50%, 25% dengan kontrol positif kloramfenikol dan kontrol negative DMSO 10% dengan 3 kali replikasi.
Hasil diameter dari zona hambat fraksi etil asetat daun benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) terhadap  bakteri Streptococcus  Pyogenes pada konsentrasi  25%  yaitu  10,286  mm,  konsentrasi  50% yaitu 12,235 mm, konsentrasi 100% yaitu 13,966 mm. Menurut  kriteria  (CLSI  2018)  zona  hambat  dikatakan sensitif  jika  >20  mm,  intermediet  jika  diameter  15-19 mm dan resisten jika diameter ≤14 mm. Artinya, fraksi etil  asetat  daun  benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe Petandra  (L)  Miq.) terhadap    bakteri Streptococcus Pyogenes pada konsentrasi 25%, 50%, 100% masuk dalam kategori  resisitent. zona  hambat  yang  terjadi  pada masing-masing perlakukan konssentrasi fraksi etil asetat disebabkan karena adanya zat-zat aktif yang terkandung didalam daun benalu jeruk nipis (Dendrophthoe Petandra (L)  Miq.) .  Sedangkan  diameter  hasil  dari  zona  hambat fraksi methanol terhadap bakteri Streptococcus Pyogenes pada konsntrasi 25% yaitu 9,606 mm, konsentrasi 50%
10,486  mm,  konsentrasi  100%  yaitu  10,763  mm. Menurut  kriteria  (CLSI  2018)  zona  hambat  dikatakan sensitif  jika  >20  mm,  intermediet  jika  diameter  15-19 mm dan resisten jika diameter ≤14 mm. Artinya, fraksi methanol  daun  benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe Petandra  (L)  Miq.) terhadap  bakteri Streptococcus Pyogenes pada konsentrasi 25%, 50%, 100% masuk dalam kategori  resisitent. zona  hambat  yang  terjadi  pada masing-masing  perlakukan  konssentrasi  fraksi  metanol disebabkan karena adanya zat-zat aktif yang terkandung didalam daun benalu jeruk nipis (Dendrophthoe Petandra (L) Miq.).
Pada  kontrol  positif  kloramfenikol  terhadap  bakteri Streptococcus  Pyogenes diameter  rata-rata  zona hambatnya yaitu 26,178 mm menunjukkan daya hambat antibakteri susceptible/kategori daya hambat sensitive. Pada  kontrol  negatif  DMSO  10%  tidak  terbentuknya zona  hambat  antibakteri.  Aktivitas  antibakteri  dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  seperti  kandungan metabolit sekunder, konsentrasi fraksi dan jenis bakteri uji. Konsentrasi fraksi dapat mempengaruhi kemampuan fraksi untuk berdifusi ke dalam media uji sehingga akan mempengaruhi aktivitas daya hambat terhadap bakteri. Sedangkan  faktor  lain  yang  dapat  mempengaruhi  daya hambat bakteri yaitu pemilihan media, ketebalan media dan  pelarut  yang  digunakan  pada  uji  (Rahmida et  al., 2023).
Hasil dari diameter zona hambat fraksi methanol dan etil asetat  daun  benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe  Petandra (L)  Miq.) diameter  rata-rata  fraksi  etil  asetat  bakteri Escherichia Coli pada konsentrasi 25% yaitu 8,356 mm, konsentrasi  50%  yaitu  12,665  mm,  konsentrasi  100% yaitu  13,436  mm.  Menurut  kriteria  (CLSI  2018)  zona hambat dikatakan sensitif jika >20 mm, intermediet jika diameter 15-19 mm dan resisten jika diameter ≤14 mm. Artinya,  fraksi  etil  asetat  daun  benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) terhadap  bakteri Escherichia Coli pada konsentrasi 25%, 50%, 100% masuk dalam kategori resisitent.
Sedangkan  hasil  dari  diameter  zona  hambat  fraksi methanol  bakteri Escherichia  Coli pada  konsntrasi  25% yaitu  7,456  mm,  konsentrasi  50%  8,525  mm, konsentrasi  100%  yaitu  12,858  mm.  Menurut  kriteria (CLSI  2018)  zona  hambat  dikatakan  sensitif  jika  >20 mm, intermediet jika diameter 15-19 mm dan resisten jika  diameter  ≤14  mm. Artinya,  fraksi  methanol  daun benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) terhadap bakteri Escherichia Coli pada konsentrasi 25%, 50%,  100%  masuk  dalam  kategori  resisitent.  zona hambat  yang  terjadi  pada  masing-masing  perlakukan konssentrasi fraksi etil asetat disebabkan karena adanya zat-zat aktif yang terkandung didalam daun benalu jeruk nipis (Dendrophthoe Petandra (L) Miq.)
Pada  kontrol  positif  kloramfenikol  terhadap  bakteri Escherichia Coli diameter rata-rata zona hambatnya yaitu 28,5  mm  menunjukkan  daya  hambat  antibakteri susceptible/kategori  daya  hambat  sensitive.  pada kontrol  negatif  DMSO  10%  tidak  terbentuknya  zona hambat  antibakteri.  Aktivitas  antibakteri  dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  seperti  kandungan metabolit sekunder, konsentrasi fraksi dan jenis bakteri uji. Konsentrasi fraksi dapat mempengaruhi kemampuan fraksi untuk berdifusi ke dalam media uji sehingga akan mempengaruhi aktivitas daya hambat terhadap bakteri. Sedangkan  faktor  lain  yang  dapat  mempengaruhi  daya hambat bakteri yaitu pemilihan media, ketebalan media dan pelarut yang digunakan pada uji.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  uji  aktivitas  antibakteri fraksi  metanol  dan  etil  asetat  daun  benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) terhadap  bakteri Streptococcus  Pyogenes dan Escherichia  Coli yang dilakukan,  maka  didapatkan  kesimpulan  bahwa  fraksi metanol  dan  etil  asetat  daun  benalu  jeruk  nipis (Dendrophthoe  Petandra  (L)  Miq.) resisten  terhadap bakteri Streptococcus  Pyogenes dan Escherichia  Coli dengan zona hambat rata-rata <14 mm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Universitas Sari Mulia dan pihak-pihak yang turut-serta membantu mulai  dari  mempersiapkan,  melaksanakan,  dan menyelesaikan penelitian ini.

## REFERENSI
Amalia,  N.  F.,  Mahdiyah,  D.,  &  Noval,  N.  2021. Antibacterial Activity Of Bungur Bark Extract (Lagerstroemia  speciosa  (L.)  Pers)  Againts Staphylococcus  aureus  ATCC  29213  By Diffusion And Dillution Methods. In International  Conference  on  Health  and
Science (Vol. 1, No. 1, pp. 470-479).
CLSI. 2018. M100 Performance Standards for Antimicrobal Susceptibility Testing .
CLSI.  2018.  M100  Performance  Standards  for antimicrobal  susceptibility  testing.  In The Encyclopedia  of  Astronomy  and  Astrophysics . https://doi.org/10.1888/0333750888/6100
Kurniawati,  D.  2021.  Formulasi  dan  Uji  Aktivitas Antiseptik dari Bahan Alam Kulit Jeruk Nipis, Daun Sirih dan Tanaman Bundung terhadap Staphylococcus aureus dan Candida albican. FARMASIS: Jurnal Sains Farmasi , 2 (1),
25-31.
Mukhtarini.  2014.  Mukhtarini,  ‘Ekstraksi,  Pemisahan Senyawa,  Dan  Identifikasi  Senyawa  Aktif.  J. Kesehat.,  Vol.  VII,  No.  2,  p.  361,  2014.” J.
Kesehat. VII(2):361.
Noval,  N.,  Yuwindry,  I.,  &  Syahrina,  D.  2019. Phytochemical  Screening  and  Antimicrobial Activity  of  Bundung  Plants  Extract  by Dilution  Method. Jurnal  Surya  Medika (JSM) , 5 (1), 143-154.
Putri, Pratiwi Debi, Indriyanto, and Melya Riniarti. 2021. Tingkat  Asosiasi  Jenis-Jenis  Benalu  Dengan Pohon  Inangnya  Di  Blok  Koleksi  Taman Hutan  Raya  Wan  Abdul  Rachman.” Jurnal Hutan Tropis 9(2):445–53.
Rahayu, Winiati P., Siti Nurjanah, and Ema Komalasari. 2018.  Escherichia  Coli:  Patogenitas,Analisis, Dan  Kajian  Risiko. Journal  of  Chemical Information and Modeling 53(9):5.
Rahmida, Y. P., Darsono, P. V., & Noval, N. 2023. Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Bunga  Pinang (Areca cetechu L.) Terhadap Streptococcus mutans  Penyebab  Karies  Gigi. Sains Medisina , 1 (4), 221-226.
Siagian, Kristine Destrianita, Daniel Lantang, Sepriyanto Dirgantara,  and  Eva  Susanty  Simaremare. 2018.  Uji  Aktivitas  Antifungi  Anggur  Laut (Caulerpa  Sp.)  Asal  Pulau  Ambai  Serui Terhadap Fungsi Cndida Krusel Dan Candida
Albicans. PHARMACY: Jurnal Farmasi Indonesia 44(November):103–9