## Research Article

## Determination of Total Phenolic Levels in Ethanol Extract of Moringa (Moringa oleifera L.) Leaves based on Differences in Growing Sites
Penetapan  Kadar  Total  Fenolik  pada  Ekstrak  Etanol  Daun  Kelor  (Moringa  oleifera  L.) berdasarkan Variasi Tempat Tumbuh
Any Guntarti*, Nining Sugihartini, Siti Athiyah Umaiyah, Nina Salamah Faculty of Pharmacy, Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta 55164 Indonesia *Corresponding author: Any Guntarti | Email: any_guntarti@yahoo.co.id
Received: 17 February 2021; Revision: 15 March 2021; Accepted: 18 March 2021; Published: 20 March 2021
Abstract: Moringa oleifera L. have good nutritional content including phenolic compounds which can be used as antioxidants and can grow in lowlands and highlands. The purpose  of this study was to determine the total phenolic  content  of  the  ethanol  extract  of  M.  oleifera  leaves with  variations in  the area  of  collection.  The 50% ethanol extract was obtained from the simplicia of M. oleifera leaves by using the maceration method. Analysis of total phenolic content in the extract was carried out using a spectrophotometer instrument with the addition of reagent Folin-Ciocalteu and gallic acid as standard. The results of total phenolic content in Sleman, Wonosari, and Wonosobo areas were (127.87 ± 2.71) mg GAE / g extract, (99.40 ± 2.68) mg GAE / g extract, and (142 , 92 ± 1.81) mg GAE / g extract. The highest phenolic content in the ethanol extract of moringa leaves was found in Wonosobo areas.

## Keywords: Moringa leaf, ethanol extract, total phenolic, regional variation
Abstrak: Tanaman kelor (Moringa oleifera L.) memiliki kandungan gizi yang baik antara lain senyawa fenolik yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  antioksidan  dan  dapat  tumbuh  didataran  rendah  maupun  dataran  tinggi. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui kadar total fenolik ekstrak etanol daun kelor (Moringa oleifera L.) dengan variasi daerah pengambilan. Ekstrak etanol 50% diperoleh dari simplisia daun kelor (Moringa oleifera L.) dengan metode  penyarian  maserasi.  Analisis  kadar  fenolik  total  dalam  ekstrak  dilakukan  menggunakan  instrumen spektrofotometer  dengan  penambahan  reagen  Folin-Ciocalteu  dan  asam  galat  sebagai  standar.  Hasil  kadar fenolik total daerah Sleman, daerah Wonosari, dan daerah Wonosobo secara berturut-turut adalah (127,87± 2,71) mg GAE/g ekstrak, (99,40± 2,68) mg GAE/g ekstrak dan (142,92±1,81) mg GAE/g    ekstrak. Daerah Wonosobo memeliki kandungan fenolik yang paling besar pada ekstrak etanol daun kelor.
Kata kunci : Ekstrak etanol, daun kelor, total fenolik, variasi daerah

## 1. PENDAHULUAN
Indonesia memiliki  kekayaan alam yang cukup melimpah. Beraneka ragam tanaman obat tumbuh  subur  di  alam  Indonesia  [1]  Salah  satu  tanaman  yang  berpotensi  sebagai  tanaman  obat adalah kelor (Moringa oleifera L.). Kelor dapat tumbuh pada daerah tropis dan subtropis dan tahan terhadap musim kering dengan toleransi terhadap kekeringan sampai 6 bulan [2]. Kandungan gizi yang  tinggi  pada  tanaman  kelor  sehingga  mendapat  julukan  sebagai  World’s  most  valuable multipurpose  trees  dan  miracle  tree.  Menurut  Krisnadi  (2015),  kelor  merupakan  tanaman  yang  kaya nutrisi karena mengandung banyak vitamin, mineral, β karoten, quercetin, antioksidan, dan asam amino esensial [3]. Daun kelor telah dilaporkan menjadi sumber yang kaya akan β karoten, protein, vitamin C, kalsium dan kalium. Kelor bertindak sebagai sumber antioksidan alami    yang baik dan demikian  dapat  meningkatkan  umur  simpan  makanan  yang  mengandung  lemak  karena  adanya berbagai  jenis  antioksidan  seperti  asam  askorbat,  flavonoid,  fenolat  dan  karotenoid [4].  Penelitian Verma et al (2009) bahwa daun kelor mengandung fenol dalam jumlah yang banyak yang dikenal sebagai penangkal senyawa radikal bebas [5]. Kandungan fenol dalam daun kelor segar sebesar 3,4% sedangkan pada daun kelor yang telah diekstrak sebesar 1,6% [6].
Salah  satu  faktor  yang  dapat  mempengaruhi  kandungan  senyawa  kimia  dalam  tanaman adalah kondisi lingkungan tempat tumbuh dan iklim [7] . Suhu di daerah Wonosobo lebih rendah dari daerah Sleman dan Wonosari, sedangkan untuk curah hujan di daerah Wonosobo lebih besar dari  daerah  Sleman  dan  Wonosari. Berdasarkan  penelitian Guntarti    (2016) menunjukkan  bahwa adanya perbedaan kandungan senyawa fenolik ekstrak etanol kulit buah manggis pada variasi asal daerah (Sumatra, Jawa dan Kalimantan) yaitu 824,13 (mg GAE/g ekstrak); 155,86 (mg GAE/g ekstrak) dan 688,9 (mg GAE/g ekstrak) [8] . Berdasarkan penelitian Sari (2018) ekstrak etanol dengan variasi konsentrasi  pelarut  etanol  50%,  70%,  96%  dengan  spektrofotometri  kemampuan  penangkapan radikal bebas (ES 50 ) dengan metode DPPH menunjukkan penangkapan radikal bebas paling tinggi (ES 50 ) pada pelarut etanol konsentrasi 50% [9].

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1. Bahan
Bahan  yang  digunakan  antara  lain  daun  Kelor  (Moringa  oleifera  L.)  yang    diperoleh  dari daerah    Sleman, Wonosari, dan Wonosobo, aquades, etanol p.a (Merck), natrium karbonat (Na 2 CO 3 ) (Merck), (Merck), Folin-ciocalteu (Merck), asam galat (Aldrich), FeCl 3 .

## 2.2 Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah neraca analitik (Mettler Toledo), aluminium foil,  kertas  saring,  seperangkat  alat  maserasi,  waterbath  (Memmert),  rotary  evaporator  (Heidolph), corong    buchner, seperangkat alat destilasi toluen, oven, blender (Philip), Halogen Moisture Analyzer (Ohaus).

## 2.3. Determinasi Tanaman Daun Kelor
Determinasi tanaman dilakukan di laboratorium Taksonomi Tumbuhan Prodi Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Terapan Universitas Ahmad Dahlan.

## 2.4. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kelor
Metode  maserasi  dilakukan  dengan  rasio  1:10.  Serbuk  sampel  kering  ditimbang  500  gram kemudian  diekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol  50%  hingga  simplisia  tersebut  terendam.
Dibiarkan selama 72 jam pada suhu kamar dalam bejana tertutup dan terlindung dari cahaya sambil sesekali diaduk [9].

## 2.5. Penetapan Susut Pengeringan
Penetapan susut pengeringan ekstrak etanol daun kelor sesuai Anonim (2000) [7] .

## 2.6. Analisis Kualitatif Senyawa Fenolik
Analisis kualitatif dengan menggunakan pereaksi FeCl 3 (Besi (III) klorida) 1% dalam air atau etanol [10].

## 2.7. Analisis Kuantitatif Total Fenolik
2.7.1.  Penentuan    Operating  Time  (OT)  ,  panjang  gelombang  serapan  maksimal  dan  pembuatan kurva baku
Penetuan  OT,  serapan  panjang  gelombang  maksimum  dan  pembuatan  kurva  baku  seperti penelitian yang dialkukan oleh Ahmad et al. (2015) dan Susanti, H. (2012) [11,12].
2.7.2. Penentuan Kadar Total Fenolik Sampel
Sebanyak 1 mL larutan sampel ditambahkan dengan 0,4 mL reagen Folin-Ciocalteu digojog dan dibiarkan 4 menit, ditambahkan 4,0 mL larutan Na 2 CO 3 7% digojog hingga homogen. Ditambahkan aquades hingga 10 mL digojog hingga homogen, dan didiamkan pada range operating time pada suhu kamar.  Semua  larutan  diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang  absorbansi  maksimum. Dilakukan 3 kali pengulangan pada masing-masing sampel [11].

## 2.8. Analisis Data
Analisis data dengan kurva standar regresi linear y + bx + a berdasarkan data absorbansi dan konsentrasi  larutan  kurva  standar.  Kemudian  dari  persamaan  regresi  linear  diperoleh,  di  hitung kadar total fenolik dengan rumus :
Kadar Total Fenolik ( mg GAE gram ekstrak ) = kadar fenolik ( mg mL )x volume sampel(ml) x FP
gram ekstrak x 1000 1

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Hasil Determinasi
Hasil determinasi dilakukan di Laboratorium Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Terapan Universitas Ahmad Dahlan. Hasil uji terhadap sampel membuktikan bahwa sampel tersebut tersebut adalah daun kelor (Moringa oleifera L.).

## 3.2. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Simplisia Daun Kelor
Hasil  susut  pengeringan  rata-rata  serbuk  simplisia  daun  kelor  dari  masing-masing  variasi daerah  Sleman,  Wonosari,  Wonosobo,  berturut-turut  adalah  (8,10±0,69)%;  (7,72±0,16)%; (6,64±0,29)%.. Berdasarkan susut pengeringan yang ditetapkan dapat dikatakan simplisia memenuhi syarat yakni kurang dari 10% [7] . Kadar air berkaitan dengan kerapatan, semakin rapat rongga antar partikel maka kemungkinan celah atau ruang kosong terisi uap air semakin kecil [13] .

## 3.3. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kelor
Ekstraksi  daun  kelor  menggunakan  metode  maserasi.  Metode  ini  dipilih  karena  murah, mudah  serta  menghindari  adanya  kerusakan  komponen  senyawa  akibat  adanya  pemanasan  [14] . Digunakan pelarut etanol memiliki sifat semi polar dan memiliki kemampuan melarutkan  hampir semua zat, sehingga diharapkan senyawa yang terkandung dalam simplisia daun kelor dapat tersari dalam pelarut etanol. Penggunaan etanol sebagai pelarut memiliki beberapa kelebihan diantaranya dapat mencegah pertumbuhan jamur, relatif murah, bersifat netral dan mudah menguap sehingga dapat mempercepat proses penguapan [15].

## 3.4. Organoleptis Ekstrak Etanol Daun Kelor
Ekstrak  yang    diperoleh  kemudian  di  identifikasi  beberapa  parameter  organoleptis  seperti rasa, bau, warna, dan bentuk. Pengujian dilakukan berdasarkan gambaran awal dari ekstrak yang dihasilkan  dengan  mengacu  pada  Anonim  (1986)  [16].    Hasil  organoleptis  ekstrak  daun  kelor disajikan pada Tabel 1, dan hasil ekstrak pada Gambar 1.

## Tabel 1. Uji Organoleptis Ekstrak daun kelor dari Sleman, Wonosari, dan Wonosobo
No Parameter Hasil Pembanding 1 Rasa Pait Pait 2 Bau Bau khas kelor Bau khas kelor 3 Warna Hijau kecoklatan Hijau kecoklatan 4 Bentuk Kental Kental
Gambar 1. Ekstrak Daun Kelor (Moringa oleifera L.)

## 3.5. Uji Kualitatif
Hasil uji kualitatif dilakukan untuk mengetahuimkandungan fenolik. Uji dilakukan dengan menggunakan  pereaksi  FeCl 3 1  %.  Hasil  uji  kalitatif    disajikan  pada  Tabel  2  dan  reaksinya  pada Gambar 2.
Tabel 2. Uji Kualitatif Senyawa Fenolik dengan Pereaksi FeCl
3 1% Sampel Sebelum Sesudah Keterangan Asam Galat Terjadi perubahan warna hitam, positif senyawa fenolik
Daerah Sleman
Terjadi perubahan warna biru-hitam, positif senyawa fenolik
Daerah Wonosari
Terjadi perubahan warna biru-hitam, positif fenolik
Daerah Wonosobo
Terjadi perubahan warna biru-hitam, positif fenolik
Gambar 2 . Reaksi asam galat dengan Folin Ciocalteu [17].
Prinsip  metode  Folin  Ciocalteu  adalah  oksidasi  yang  dilakukan  oleh  pereaksi  folin  terhadap fenolat  (garam  alkali)  atau  gugus  fenolik-hidroksil  mereduksi  asam  fosfomolibdat-fosfotungstat yang terdapat dalam Folin Ciocalteu menjadi kompleks molibdenum-tungsten (Mo-W) yang berwarna biru. Reaksi terjadi dalam suasana basa. Semakin besar konsentrasi senyawa fenolik maka semakin banyak  ion  fenolat  yang  akan  mereduksi  asam  heterofili  menjadi  kompleks  molibdenum-tungsten sehingga warna biru yang dihasilkan semakin pekat [12].

## 3.6. Uji Kuantitatif Kadar Total Fenolik
Hasil penelitian mencari Operating Time,    diperoleh pada menit ke 30-31, panjang gelombang serapan  maksimum  pada  764  nm.  Dicari  OT  untuk  memperoleh  waktu  reaksi  yang  optimal, sedangkan  panjang  gelombang  pada  serapan  maksimum  sehingga  akan  didapat  kadar  yang maksimal [18] . Hasil Operating Time dan panjang gelombang serapan maksimum digunakan untuk membuat kurva baku. Hasil pembuatan kurva baku Asam Galat disajikan Gambar 3.
Gambar 3. Grafik hubungan antara konsentrasi dan larutan standar asam galat
Penetapan  kadar  fenolik  menggunakan  metode  spektrofotometri  sinar  tampak,  dengan standar  positif  asam  galat,  dengan  pereaksi  Folin  Ciocalteu.  Folin  Ciocalteu  adalah  oksidasi  gugus fenolik-hidroksil  mereduksi  asam  heteropoli  (fosfomolibdat-fosfotungstat)  yang  terdapat  dalam Folin Ciocalteu dalam suasana basa menjadi kompleks molibdenum-tungsten (Mo-W) yang berwarna biru  [12]. Kadar  total  fenolik  pada  penelitian  ini  adalah  sebagaimana  disajikan  pada  Tabel  3  dan Gambar 4.
Tabel 3. Kadar Total fenolik Ekstak Etanol Daun Kelor Variasi Tempat Tumbuh
Daerah Bobot Sampel (Gram) Absorbansi Kadar (mg/ml) Kadar total fenolik (mg GAE/g ekstrak) (X    + LE) mg GAE/g ekstrak CV (%) Sleman 0,1009 0,573 0,052 128,84 127,87± 2,71 2,35% 0,1007 0,563 0,051 126,61 0,1013 0,551 0,050 123,39 0,1009 0.581 0,053 131,31 0,1006 0.571 0,052 129,22 Wonosari 0,1007 0,467 0,042 104,27 99,40± 2,68 3,00 % 0,1003 0,461 0,040 99,70 0,1007 0,452 0,039 96,82 0,1004 0,449 0,039 97,11 0,1006 0,559 0,040 99,40 Wonosobo 0,1005 0,626 0,058 144,27 142,92±1,81 1,40% 0,1008 0,631 0,058 143,84 0,1002 0,628 0,058 144,71 0,1004 0,618 0,057 141,93 0,1001 0,609 0,056 139,86 LE= Limit of Error; GAE= Galat Acid Ekivalensi
y = 0,0095x + 0,0743 R² = 0,9913 0 0.2 0.4 0.6 0.8 20 30 40 50 60 70 Abs o rb an si Konsentrasi (ug/ml)
Gambar 4. Diagram rata-rata total fenolik dari Sleman, Wonosari dan Wonosobo
Berdasarkan Tabel 3 dan Gambar 4, kadar total fenolik yang diperoleh menunjukkan bahwa daun kelor dari Wonosobo yang paling besar, kemudian Sleman dan paling kecil Wonosari. Hal ini di  pengaruhi  oleh  letak  geografis  daerah  Wonosobo  yang  memiliki  curah  hujan  cukup  tinggi, struktur tanah yang gembur atau subur, kandungan humus yang tinggi baik untuk tanaman kelor. Curah hujan lebih tinggi dengan suhu yang lebih rendah. Jika kelembaban udara rendah, penguapan akan meningkat sehingga penyerapan air pun semakin banyak. Kelembaban udara dan ketinggian tempat tumbuh yang optimum  menyebabkan kadar total fenolik di daerah Wonosobo lebih besar dari  daerah  Sleman  dan  daerah  Wonosari.  Suhu  di  daerah  Wonosobo  lebih  rendah  dari  daerah Sleman dan Wonosari, sedangkan untuk curah hujan di daerah Wonosobo lebih besar dari daerah Sleman  dan  Wonosari.  Keragaman  kondisi  tempat  tumbuh  yang  bervariasi  mengakibatkan perbedaan kandungan fenolik. Berdasarkan hal tersebut, kadar total fenolik daerah wonosobo yang optimal [7].

## 4. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian diperoleh Kadar total fenolik pada ekstrak etanol 50% daun kelor daerah Sleman  sebesar  (127,87±  2,71)mg  GAE/g  ekstrak,  daerah  Wonosari  sebesar  (99,40±2,68)mg  GAE/g ekstrak,  dan  daerah  Wonosobo  sebesar  (142,92±1,81)mg  GAE/g  ekstrak.    Daerah  Wonosobo mempunyai kandungan total fenolik yang paing besar karena pengaruh iklim, cuaca dan suhu.
Ucapan Terimakasih: - Ucapan terima kasih kepada Fakultas Farmasi Universitas Ahmad Dahlan atas  fasilitas  laboratorium  Kimia  Farmasi  dan  Laboratorium  Tehnologi  selama  penelitian  ini dilaksanakan.

## References
1. Fahey,  J.  R.  Moringa  oleifera :  A  Review  of  the  Medical  Evidance  for  Its  Nutritional, Therapeutic, and Prophylactic Properties. Part 1. Tree for Life Journal. 2005, 1–24.
2. Mendieta-Araica, B., Spörndly, E., Reyes-Sánchez, N., Salmerón-Miranda, F., & Halling, M.
127.87 99.4 142.92 0 20 40 60 80 100 120 140 160 Sleman Wonosari wonosobo
Kadar Fenolik (mG GAE/G ekstrak)
Biomass production and chemical composition of Moringa oleifera under different planting densities and levels of nitrogen fertilization. Agroforestry Systems. 2013, 87(1), 81–92.
3. Krisnadi, D. Kelor Super Nutrisi. Moringa oleifera. 2015, 10–40.
4. Siddhuraju,  P.,  &  Becker,  K.  Antioxidant  properties  of  various  solvent  extracts  of  total phenolic constituents    from three different agroclimatic origins of drumstick tree (Moringa oleifera Lam.) leaves. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2003, 51(8), 2144–2155.
5. Verma, A. R., Vijayakumar, M., Mathela, C. S., & Rao, C. V. In vitro and in vivo antioxidant properties of different fractions of Moringa oleifera leaves. Food and Chemical Toxicology. 2009, 47(9), 2196–2201.
6. Zhang  D,  dan  Hamauzu  Y.  Phenolic  Compounds  and  Theirs  Antioxidant  Properties  in Different Tissues of Carrots (Daucus carota L.). Food, Agriculture, and Environment. 2004; 2(1): 95-100.
7. Anonim.  Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tanaman  Obat  (Vol  1).  2000,  Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
8. Guntarti, A. Kadar Polifenol Total Ekstrak Etanol Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana) pada Variasi Asal Daerah. Jurnal Farmasi Dan Ilmu Kefarmasian Indonesia. 2016,    3(1), 22.
9. Sari,  D.  E.  M.  Uji  Aktivitas  Antiaging  dan  Penghambatan  Enzim  Tirosinase  dari  Ekstrak Etanol  Daun  Kelor  (Moringa  oleifera  L.)  Secara  n  Vitro.  Tesis.  2018,  Universitas  Ahmad Dahlan.
10. Bayani,  F.  Analisis  Fenol  Total  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Dari  Ekstrak  Buah  Sentul (Sandoricum koetjape Merr). Jurnal Ilmiah Pendidikan Kimia “Hydrogen”. 2016,    4(1), 55– 69.
11. Ahmad, A. R., Juwita, J., & Ratulangi, S. A. D. Penetapan Kadar Fenolik dan Flavonoid Total Ekstrak Metanol Buah dan Daun Patikala (Etlingera elatior (Jack) R.M.SM). Pharmaceutical Sciences and Research. 2015, 2(1), 1–10.
12. Alfian,  R.,  &  Susanti,  H.  Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Metanol  Kelopak  Bunga Rosella  Merah  (Hibiscus  sabdariffa  Linn)  Dengan  Variasi  Tempat  Tumbuh  Secara Spektrofotometri. Pharmaciana. 2012,    2(1).
13. Purwanto, D. Pengaruh Ukuran Partikel Tempurung Sawit dan Tekanan Kempa Terhadap Kualitas Biobriket. Jurnal Penelitian Hasil Hutan. 2015, 33(4), 303–313.
14. Anonim.  Standarisasi  Ekstrak  Tumbuhan  Obat  Indonesia,  Salah  Satu  Tahapan  Penting Dalam Pengembangan Obat Asli Indonesia. Info POM. 2005, 6 (4).
15. Mahmud, R., Mahdi, H., Yousif, E., Khan, N., Murugaiyah, V., & Asmawi, M.    Optimizing Extraction  Conditions  of  Moringa  Oleifera  Lam  Leaf  for  Percent  Yield,  Total  Phenolics Content,  Total  Flavonoids  Content  and  Total  Radical  Scavenging  Activity.  International Journal of Advanced Research. 2016, 4(11), 682–695. https://doi.org/10.21474/ijar01/2133
16. Anonim. Sediaan Galenika (Edisi IV). 1986, Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
17. Nunes, X. P., Silva, F. S., Almeida, J. R. G. da S., Lima, J. T. de, Ribeiro, L. A. de A., Júnior, L. J.  Q.,  &  Filho,  J.  M.  B.  Biological  oxidations  and  antioxidant  activity  of  natural  products. Phytochemicals  as  nutraceuticals-Global  approaches  to  their  role  in  nutrition  and  health. 2006, 1-21.
18. Pulipati S, Babu PS, Naveena U, Parveen SKR, Sumaya SK, Nausheen M. Determina-tion of
Total  Phenolic,  Tannin,  Flavonoid  Contents  and  Evaluation  of  Antioxidant  Property  of Amaranthus  tricolor  (L).  In-ternational  Journal  of  Pharmacognosy  and  Phytochemical Research, 2017, Vol. 9(6): 814-19.
© 2021 by the authors. Submitted for possible open access publication under the terms and  conditions  of  the  Creative  Commons  Attribution  (CC  BY)  license (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).