Volume 4, Nomor 2, Desember 2021 e-ISSN: 2598-7453 DOI: https://doi.org/10.31539/bioedusains.v4i2.2169
EFEK DAUN Etlingera hemisphaerica PADA PERBAIKAN SKORING SPERMATOGENESIS TIKUS PUTIH ( Rattus norvegicus ) YANG DIINDUKSI HgCl 2
Liya Agustin Umar 1 , Siti Habiburrahmah Ash Shadar 2 , Kartika Sari 3 , Hilda Taurina 4 , Marisadonna Asteria 5 , Aceng Ruyani 6
Universitas Bengkulu 1,2,4,5,6
RSUD dr. M. Yunus Bengkulu 3
liyaagustinumar@unib.ac.id 1

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek pemberian ekstrak daun Etlingera hemisphaerica terhadap  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus) yang  diinduksi  merkuri klorida  yang  dilihat  dari  gambaran  histopatologi  testis.  Metode  penelitian  yang digunakan  yaitu  eksperimental post-test-only  control  group  design .  Pemberian ekstrak  dilakukan  selama  tujuh  hari  secara gavage .  Pengambilan  organ  testis dilakukan  pada  hari  ke-9  setelah  tikus  dieuthanasia  dan  dilanjutkan  pembuatan preparat  testis.  Penilaian  kerusakan  testis  menggunakan Johnsen  score .  Data dianalisis menggunakan uji statistik non-parametrik. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa antar  kelompok  uji  memiliki  nilai p yaitu  0,000.  Adapun gambaran  histopatologi  testis  yang  di  induksi  HgCl 2 memiliki  nilai p sebesar 0,005  dan  pemberian  ekstrak  daun E.  hemisphaerica pada  tikus  yang  diinduksi HgCl 2 memperlihatkan  nilai p= 0,008. Simpulan,  pemberian  ekstrak  daun E. hemisphaerica pada R.  norvegicus yang  diinduksi  merkuri  klorida  memberikan efek  perbaikan  pada  spermatogenesis  pada  gambaran  histopatologi  testis R. norvegicus .
Kata Kunci : Etlingera hemisphaerica, HgCl 2, Johnsen Score , Rattus norvegicus

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  the  effect  of  administration  of  Etlingera hemisphaerica leaf extract on white rats (Rattus norvegicus) induced by mercury chloride as seen from the histopathological description of the testes. The research method used is experimental post-test-only control group design. The extract was administered for  seven days  by gavage. Testicular organ harvesting was carried out  on  the  9th  day  after  the  rats  were  euthanized  and  continued  with  making testicular preparations. Testicular damage was assessed using the Johnsen score. Data  were  analyzed  using  non-parametric  statistical  tests.  The  results  showed that the test  groups  had a p-value of  0.000. The  histopathological description of the testes induced by HgCl2 had a p-value of 0.005 and the administration of E. hemisphaerica leaf extract in HgCl2-induced mice showed a p-value of 0.008. In conclusion,  administration  of  E.  hemisphaerica  leaf  extract  to  R.  norvegicus induced by mercury chloride improved spermatogenesis on the histopathological features of the R. norvegicus testes.
Keywords : Etlingera hemisphaerica, HgCl2, Johnsen Score, Rattus norvegicus

## PENDAHULUAN
Logam  berat  telah  menjadi  salah  satu  dari  banyak  kontaminan  yang ditemukan  di  lingkungan,  salah  satunya  adalah  merkuri  yang  diketahui  memiliki efek toksik pada fungsi testis (El-desoky et al., 2013). Merkuri (Hg) adalah salah satu jenis logam yang banyak ditemukan di alam dan tersebar dalam batu-batuan, biji tambang, tanah, air dan udara sebagai senyawa inorganik.  Namun, umumnya kadar  merkuri  dalam  tanah,  air  dan  udara  relatif  rendah  (Badan  Pengawas  Obat dan  Makanan,  2016).  Keracunan  merkuri  dapat  terjadi  akibat  terhirup,  konsumsi dan  penyerapan  melalui  kulit.  Merkuri  menyebabkan  toksisitas  ginjal, neurotoksisitas,  toksisitas  reproduksi  dan  efek  hematotoksik  (Bas  &  Kalender, 2016). Merkuri dikenal dengan 3 bentuk,  yaitu  merkuri elemental (Hg 0 ), merkuri inorganik (Hg 2+ dan Hg ++ ) dan merkuri organik (Broussard et al . , 2002). Merkuri  klorida  salah  satu  pro-oksidan  yang  menginduksi  stres  oksidatif menyebabkan  kerusakan  makromolekul  seperti  DNA,  protein,  lipid  dan  respirasi sel.  Stress  oksidatif  dapat  merusak  membran  mitokondria  dan  menyebabkan hilangnya  fungsi  potensial  membran  mitokondria.  Keadaan  ini  mengakibatkan mitochondrial  permeability  transition yang  menyebabkan  hilangnya  potensial membran  mitokondria  dan  mengakibatkan  kebocoran  membran  sehingga  terjadi depolarisasi  membran  dan  pengaktifan apoptotic  factor yang  akan  menginduksi terjadinya  proses  apoptosis  dan  memicu  banyak  proses  patologis  dalam  sistem reproduksi laki-laki (Adelati et al., 2016)
Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  etanol  daun E.  hemisphaerica menunjukkan bahwa tanaman ini mengandung alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin (Ruyani et al.,  2018).  Aktivitas  senyawa  flavonoid  tersebut  memiliki  kemampuan  terhadap pemulihan  kerusakan  organ  tubuh  akibat  toksisitas  logam  berat  merkuri  (Jackie, 2011).  Penelitian  mengenai  efek  ekstrak  daun Etlingera  hemisphaerica terhadap sistem  reproduksi  masih  sedikit  dan  belum  ada  penelitian  terkait  mengenai efeknya terhadap gambaran testis. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui efek pemberian ekstrak daun Etlingera hemisphaerica terhadap tikus putih Rattus  norvegicus yang  diinduksi  merkuri  klorida  yang  dilihat  dari gambaran histopatologi testis.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan eksperimental post-test-only-control group design . Subjek  penelitian  adalah  20  ekor  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  galur  Sprague Dawley,  berat  badan  280-300g,  usia  10-12  minggu,  memiliki  anatomi  normal, sehat  tanpa  kelainan  fisik,  belum  menerima  perlakuan  sebelumnya  dan  gerak aktif. Bahan yang digunakan pada penelitian yaitu merkuri klorida (HgCl 2 ) merek MERCK,  ekstrak  daun Etlingera  hemisphaerica dosis  0,27  mg/gBB  tikus  dan dosis  0,55  mg/gBB  tikus.  Pemeliharaan  dan  pemberian  perlakuan  dilakukan  di Sumber Belajar Ilmu Hayati (SBIH) Ruyani. Hewan coba diadaptasi selama 7 hari dan dibagi  kedalam 4 kelompok secara acak dengan masing-masing kelompok  5 ekor tikus penelitian.
Kelompok  kontrol  (P0),  kelompok  kontrol  positif  (P1)  diinduksi  HgCl 2 5 mg/kgBB tikus, kelompok perlakuan I (P1) diinduksi HgCl 2 5 mg/kgBB tikus dan ekstrak daun E. hemisphaerica dosis 0,27 mg/gBB tikus, dan kelompok perlakuan II (P2) diinduksi HgCl 2 5 mg/kgBB tikus dan ekstrak daun E. hemisphaerica dosis 0,5  mg/gBB  tikus.  Pemberian  ekstrak  daun E.  hemisphaerica selama  7  hari
dengan  metode gavage setelah  24  jam  induksi  HgCl 2 secara  intraperitoneal  (IP). Pada  hari  ke-16  penelitian  tikus  disuntikkan  ketamin–xylazine  sebagai  analgesia dan anastesia, tikus di euthanasia dengan teknik dislokasi servikal dan laparotomi untuk diambil organ testis.
Organ  testis  kemudian  dibuat  preparat  histopatologinya  dan  dinilai  dengan Johnsen  Score .  Gambaran  histopatologi  pada  kerusakan  sel  reproduksi  testis penilaian  menggunakan  kriteria  Johnsen  dengan  skor  1-10.  Kriterianya  sebagai berikut: (10) spermatogenesis lengkap, lumen tubulus terbuka, sel spermatozoa ≥ 5; (9) lumen tubulus tertutup, sel spermatozoa ≥ 5; (8) sel spermatozoa ≤ 5; 7, sel spermatozoa 0, sel spermatid ≥ 5; (6) sel spermatozoa 0, sel spermatid < 5; (5) sel spermatozoa dan sel spermatid 0, sel spermatosit ≥5; (4) sel spermatozoa dan sel spermatid  0,  sel  spermatosit  <  5;  (3)  sel  spermatogenik  hanya  terdiri  atas  sel spermatogonium; (2) sel spermatogenik 0, hanya ada sel sertoli; (1) tidak ada sel sama sekali dalam tubulus. Pengamatan dilakukan pada 5 lapang pandang dengan perbesaran  400x.  Data  dianalisis  menggunakan  uji Kruskal  Wallis dengan  uji lanjutan Post Hoc Mann-Whitney U .

## HASIL PENELITIAN
Hasil  penelitian  diperoleh  pola  histopatologi Johnsen  Score untuk  seluruh kelompok  perlakuan  terdiri  dari  skor  10,  skor  9,  skor  8  dan  skor  7.  Skor  yang paling banyak ditemukan merupakan skor 10 yaitu 46% dan skor 9 yaitu 9%, skor 8 yaitu 36% dan skor 7 yaitu 9%. Kategori Johnsen Score untuk setiap kelompok dapat dilihat pada gambar 1.
Gambar 1.   Grafik Persebaran Johnsen Score per Kelompok (Ket: warna biru skor 10, warna merah skor 9, warna hijau skor 8 dan warna ungu skor 7)
Total  skor  seluruh  lapang  pandang  per  sampel  dilakukan  uji  normalitas distribusi  data  menggunakan Shapiro-wilk, didapatkan  data  tidak  berdistribusi normal  (<0,05)  dengan  nilai p= 0,031,  sehingga  dilanjutkan  dengan  uji non parametrik yaitu uji Kruskal Wallis , dan terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok  ( p <0,05)  dengan  nilai p =0,000  yang  menunjukkan  terdapat  perbedaan bermakna  skor  histopatologi  testis R.  norvegicus setelah  perlakuan  sesuai kelompok.  Kemudian  dilakukan  uji Post  Hoc  Mann-Whitney untuk  mengetahui kelompok  yang  memiliki  perbedaan  bermakna.  Rerata Johnsen  Score testis  pada kelompok  kontrol  negatif,  induksi  HgCl 2 ,  dosis  ekstrak  0,27  mg/gBB,  dosis ekstrak 0,55mg/gBB sebesar 10; 7,6; 8,5 dan 9,4 secara berurut. Hasil penelitian gambaran  histopatologi  masing-masing  perlakuan  dapat  dilihat  pada  gambar  di bawah ini:
Gambar  2.  Struktur  histopatologi  testis  tikus  ( R.  norvegicus ).  Kelompok kontrol  negatif  P0  dengan  pewarnaan  HE  dan  perbesaran  400x (Skor 10). Keterangan: Sg. Spermatogonium, St. Spermatosit, Sd. Spermatid, Sz. Spermatozoa, dan Ss. Sel Sertoli
Gambar 3.   Struktur  Histologi  Testis  Tikus Rattus  nornegicus. A  dan  B: kelompok  Kontrol  Positif  (P1)  dengan  pewarnaan  HE  dan perbesaran 400x. (A) Skor 7; (B) Skor 8; C: kelompok Perlakuan I (P2), Skor 9; D: Kelompok Perlakuan II (P3), Skor 10
Sg Ss Sz St Sd Ss Sz Sd St Sg St Sd Sd Sz Ss Sg Ss C B D A St Ss St Sg Sd Sg Sz
Gambar 4. Grafik Uji Post Hoc Mann Whitney U pada Kelompok Perlakuan Keterangan:  *=  Nilai  dengan  kelompok  signifikansi  P0  sebagai kontrol;  #=  Nilai  signifikansi  dengan  kelompok  P1  sebagai kontrol; ‘a’ nilai mean ± standar deviasi kelompok perlakuan; a=
10  ±  0  kelompok  P0;  aa=  7,6  ±  0,260  kelompok  P1;  aaa=  8,5  ± 0,167 kelompok P2; aaaa= 8,5 ± 0,167 kelompok P3
Hasil  uji Post  Hoc  Mann-Whitney pada  Gambar  4  didapatkan  bahwa terdapat  perbedaan  skor  kerusakan  histopatologi  testis  pada  tikus R.  norvegicus yang  bermakna  antara  kelompok  P0  dengan  kelompok  P1 yaitu  nilai p =  0,005. Hasil  uji Post  Hoc  Mann-Whitney kelompok  P0  dibandingkan  dengan  kelompok P2 dan kelompok P3 didapatkan hasil berbeda nyata kerusakan skor histopatologi organ  testis  dengan  nilai p yaitu  0,005.  Kelompok  P1  yang  diberikan  HgCl 2 dibandingkan dengan kelompok P2 yang diberikan ekstrak E. hemisphaerica 0,27 mg/kgBB  dan  kelompok  P3  yang  diberikan  Ekstrak E.  hemisphaerica 0,55 mg/kgBB terdapat perbedaan kerusakan skor histopatologi organ testis yaitu nilai p = 0,008.

## PEMBAHASAN
Induksi  HgCl 2 pada  tikus  normal  dapat  menyebabkan  kerusakan  yaitu perubahan  gambaran  histopatologi.  Penelitian  ini  sejalan  dengan  yang  dilakukan oleh  El-desoky  et  al.  (2013)  yaitu  tikus  yang  terpajan  oleh  HgCl 2 terjadi peningkatan  MDA,  penurunan  GSH  testis,  penurunan  enzim  antioksidan  testis SOD,  CAT  dan  GPx  serta  terjadinya  gangguan  proses  spermatogenesis  pada beberapa  tubulus  seminiferus  berupa  penurunan  spermatozoa.  Merkuri  klorida merupakan  salah  satu  pro-oksidan  yang  menginduksi  terjadinya  stres  oksidatif (Khan  et  al.,  2004).  Senyawa  merkuri  memiliki  afinitas  tinggi  terhadap  gugus biomolekul  tiol  (-SH),  penipisan  tiol  intraseluler  sebagai  pemicu  terjadinya produksi ROS oleh merkuri (Farina et al., 2003). Peningkatan kadar non protein - SH  pada  testis  setelah  paparan  dapat  merupakan  respons  adaptif  terhadap  stres oksidatif (Martinez et al., 2014).
Glutation  adalah  senyawa  tiol  yang  merupakan  antioksidan  utama intraseluler  penting  yang  secara  spontan  menetralkan  beberapa  ROS.  Merkuri menurunkan  GSH  dalam  jaringan  testis  yang  membuat  sel  spermatogenik  lebih rentan  terhadap  kerusakan  oksidatif,  terutama  selama  peningkatan  produksi
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 P0 P1 P2 P3 Sk o r H is to pa to lo g i T estis Kelompok Perlakuan a aa* aaa*# aaaa*#
radikal  bebas.  Glutation  sebagai  pembawa  merkuri  dan  agen  antioksidan  yang memiliki peran spesifik dalam melindungi tubuh dari toksisitas merkuri. Glutation berikatan dengan merkuri dengan membentuk kompleks yang mencegah merkuri berikatan  dengan  protein  seluler  dan  menyebabkan  kerusakan  pada  enzim  dan jaringan (Boujbiha et al., 2009).
Penurunan  GSH  sebagai  antioksidan  oleh  merkuri  dapat  menjadi  pemicu untuk  produksi  ROS  yang  menginduksi  lipid. Reactive  oxygen  species adalah mediator penting dari fungsi  sperma normal,  jika produksi ROS  yang berlebihan mengakibatkan  peroksidasi  lipid  dan  kerusakan  membran  karena  spermatozoa kaya  akan  asam  lemak  tak  jenuh  ganda  (PUFA)  pada  membran  plasma  dan sitoplasma  yang  sangat  rentan  terhadap  serangan  ROS.  Peroksidasi  lipid  PUFA mengalami  degradasi  oleh  reaksi  berantai  yang  mengarah  ke  produksi  aldehida sitosolik  termasuk  MDA  (Martinez  et  al.,  2014;  Jezek  &  Hlavata,  2005). Malondialdehid  adalah  salah  satu  produk  utama  asam  lemak  tak  jenuh  ganda. Peningkatan  kadar  MDA  adalah  indikator  dari  peroksidasi  lipid.  HgCl 2 meningkatkan  kadar  MDA  dalam  jaringan  testis  (Boujbiha  et  al.,  2009). Peningkatan MDA dalam  jaringan testis akan terjadi  penekanan spermatogenesis dan  kerusakan  sperma. Reactive  oxygen  species dalam  sitoplasma  sel  dapat meningkatkan  produksi  hidrogen  peroksida  dan  peroksidasi  lipid  pada  membran mitokondria,  yang  mengakibatkan  hilangnya  integritas  membran  dan  akhirnya nekrosis sel atau apoptosis (Martinez et al., 2014; Jezek & Hlavata, 2005). Penurunan SOD karena stres oksidatif dalam jaringan testis disebabkan oleh merkuri  (Boujbiha  et  al.,  2009).  Enzim  antioksidan  SOD,  CAT  dan  GPx merupakan pelindung terhadap toksisitas  yang disebabkan oleh merkuri. Paparan merkuri dalam jangka panjang menurunkan aktivitas SOD di testis, pengurangan ini dapat meningkatkan kerusakan oksidatif karena akumulasi radikal superoksida dan  hidrogen  peroksida.  Aktivitas  katalase  juga  berkurang  sementara  aktivitas SOD  meningkat  pada  semua  organ  reproduksi  sebagai  mekanisme  kompensasi (Martinez et  al., 2014).  Penurunan aktivitas enzim menunjukkan kegagalan SOD pertahanan  antioksidan  setelah  paparan  merkuri  yang  berkepanjangan. Pengurangan aktivitas SOD dan CAT disebabkan oleh penurunan ekspresi enzim akibat langsung dari ROS karena penghambatan langsung dari merkuri (Bando et al., 2005).
Perubahan  sel  Sertoli  dapat  menyebabkan  gangguan  spermatogenesis, kehilangan  sel  germinal  dan  kerusakan  sel  sertoli  menghasilkan  penurunan  pada laktat  (Monsees  et  al.,  2000).  Hasil  uji  fitokimia  ekstrak  etanol  daun Etlingera hemisphaerica mengandung alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin. Senyawa tanin yang  terkandung  di  dalam Etlingera  hemisphaerica didapatkan  hasil  (++) sedangkan senyawa yang lainnya didapatkan hasil (+) (Ruyani et al., 2018). Flavonoid berfungsi sebagai anti radikal bebas yaitu dengan cara mencegah kerusakan akibat radikal bebas secara langsung. Flavonoid dioksidasi oleh radikal, menghasilkan  radikal  yang  lebih  stabil  dan  kurang  reaktif.  Flavonoid menstabilkan  ROS  dengan  bereaksi  pada  senyawa  reaktif  radikal  karena reaktivitas  tinggi  gugus  hidroksil  pada  flavonoid  membuat  radikal  menjadi  tidak aktif (Panche et al., 2016).
Flavonoid  melindungi  lipid  terhadap  kerusakan  oksidatif.  Ion  logam  bebas meningkatkan  pembentukan  ROS  dengan  mereduksi  hidrogen  peroksida  dengan menghasilkan  radikal  hidroksil  yang  sangat  reaktif,  karena  potensi  redoks  yang
lebih rendah, flavonoid  mengurangi radikal bebas yang sangat teroksidasi seperti radikal superoksida, peroksil, alkoksil, dan hidroksil dengan cara menyumbangan atom  hidrogen  untuk  mengikat  ion  logam  (Kumar  &  Pandey,  2013).  Flavonoid juga  memiliki  efek  aditif  pada  senyawa  endogen  dan  meningkatkan  fungsi antioksidan  endogen  itu  sendiri  (Robert  et  al.,  2001).  Selain  itu,  flavonoid berfungsi  melindungi  mitokondria  dari  kerusakan  yang  disebabkan  oleh  stres oksidatif (Franco et al., 2010).
Saponin  berperan  sebagai  antioksidan  dalam  menghambat  radikal  peroksil yang  diinduksi  oleh  peroksidasi  lipid  (Necib  et  al.,  2013).  Selanjutnya,  alkaloid berperan  terhadap  menurunkan  peroksidasi  lipid  dan  meningkatkan  kadar  GSH (Sasikumar,  2015).  Adapun  tanin  merupakan  antioksidan  yang  dapat  berperan sebagai  pro-oksidan  untuk  melawan  kerusakan  oksidatif  dan  berfungsi  untuk melawan radikal bebas  serta  mereduksi senyawa  lain  yang  berperan cepat dalam pengikat  radikal  hidroksil  dan  memiliki  kemampuan  untuk  mengikat  ion  logam. Aktivitas  yang  dilakukan  oleh  antioksidan  ini  berupa  reaksi  secara  enzimatik dengan cara mencegah pembentukan radikal  bebas dan radical  quenching agent . Tanin  termasuk  metabolit  sekunder  golongan  metabolit  fenolik.  Fenolik  adalah senyawa  dengan  benzene  tersubstitusi  hidroksil  dan  relatif  stabil  untuk  melawan radikal bebas (Kasote et al., 2015).

## SIMPULAN
Pemberian  ekstrak  daun E.  hemisphaerica pada R.  norvegicus yang diinduksi  merkuri  klorida  terbukti  memberikan  efek  perbaikan  pada  skoring penilaian tahap spermatogenesis pada gambaran histopatologi testis R. norvegicus yang diinduksi merkuri inorganik.

## DAFTAR PUSTAKA
Adelati,  S.,  Juniarto,  A.  Z.,  &  Miranti,  I.  P.  (2016).  Histopatologi Spermatogenesis  Testis  Tikus  Wistar  Diabetes  Melitus. Jurnal  Kedokteran Diponegoro , 5 (4), 1760–1769. https://doi.org/10.14710/dmj.v5i4.15962 Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan.  (2016). Merkuri  pada  Penambang  Emas . http://ik.pom.go.id/v2016/artikel/Merkuri%20Pada%20Penambangan%20E mas.pdf
Bando, I., Sánchez Reus, M. I.,  Andrés, D., & Cascales, M. (2005). Endogenous Antioxidant Defence System in Rat Liver Following Mercury Chloride Oral Intoxication. Journal  of  Biochemical  and  Molecular  Toxicology , 19 (3), 154–161. https://doi.org/10.1002/jbt.20067
Bas, H., & Kalender, S. (2016). Antioxidant Status, Lipid Peroxidation and Testis- Histoarchitecture  Induced  by  Lead  Nitrate  and  Mercury  Chloride  in  Male Rats. Brazilian  Archives  of  Biology  and  Technology , 59 ,  1–9. https://doi.org/10.1590/1678-4324-2016160151
Boujbiha,  M.  A.,  Hamden,  K.,  Guermazi,  F.,  Bouslama,  A.,  Omezzine,  A., Kammoun,  A.,  &  Feki,  A.  E.  (2009).  Testicular  Toxicity  in  Mercuric Chloride  Treated  Rats:  Association  with  Oxidative  Stress. Reproductive Toxicology , 28 (1), 81–89. https://doi.org/10.1016/j.reprotox.2009.03.011 Broussard, L. A., Hammett-stabler, C. A., & Winecker, Ruth Ropero-Miller, J. D. (2002). The Toxicology of Mercury. Laboratory Medicine , 33 (8), 614-625. https://doi.org/10.1309/5HY1-V3NE-2LFL-P9MT
El-desoky, G. E., Bashandy, S. A., Alhazza, I. M., Al-othman, Z. A., Aboul-soud, M. A. M., & Yusuf, K. (2013). Improvement of Mercuric Chloride-Induced Testis  Injuries  and  Sperm  Quality  Deteriorations  by  Spirulina  platensis  in Rats. PLoS One, 8 (3), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0059177
Farina, M., Brandão, R., De Lara, F. S., Pagliosa, L. B., Soares, F. A., Souza, D.
O.,  &  Rocha,  J.  B.  T.  (2003).  Profile  of  Nonprotein  Thiols,  Lipid Peroxidation and δ-aminolevulinate Dehydratase Activity in Mouse Kidney and Liver in Response to Acute Exposure to Mercuric Chloride and Sodium Selenite. Toxicology , 184 (2–3),  179–187.  https://doi.org/10.1016/S0300- 483X(02)00576-0
Franco, J. L., Posser, T., Missau, F., Pizzolatti, M. G., Santos, A. R. S., Souza, D. O.,  Aschner,  M.,  Rocha,  J.  B.  T.,  Dafre,  A.  L.,  &  Farina,  M.  (2010).
Structure-Activity  Relationship  of  Flavonoids  Derived  from  Medicinal Plants  in  Preventing  Methylmercury-Induced  Mitochondrial  Dysfunction. Environmental Toxicology and Pharmacology , 30 (3), 272–278.
https://doi.org/10.1016/j.etap.2010.07.003
Jackie,  T.,  Haleagrahara,  N.,  &  Chakravarthi,  S.  (2011).  Antioxidant  Effects  of Etlingera  Elatior  Flower  Extract Against Lead  Acetate-Induced Perturbations  in  Free Radical  Scavenging Enzymes and  Lipid Peroxidation in Rats. BMC Research Notes , 4, 1-7. https://doi.org/10.1186/1756-0500-4- 67
Ježek, P., & Hlavatá, L. (2005). Mitochondria in Homeostasis of Reactive Oxygen Species  in  Cell,  Tissues,  and  Organism. International  Journal  of Biochemistry and Cell Biology , 37 (12), 2478–2503.
https://doi.org/10.1016/j.biocel.2005.05.013
Kasote,  D.  M.,  Katyare,  S.  S.,  Hegde,  M.  V.,  &  Bae,  H.  (2015).  Significance  of Antioxidant  Potential  of  Plants  and  its  Relevance  to  Therapeutic Applications. International Journal of Biological Sciences , 11 (8), 982–991. https://doi.org/10.7150/ijbs.12096
Khan, A. T., Atkinson, A., Graham, T. C., Thompson, S. J., Ali, S., & Shireen, K. F.  (2004).  Effects  of  Inorganic  Mercury  on  Reproductive  Performance  of
Mice. Food and Chemical Toxicology , 42 (4), 571–577. https://doi.org/10.1016/j.fct.2003.10.018
Kumar,  S.,  &  Pandey,  A.  K.  (2013).  Chemistry  and  Biological  Activities  of Flavonoids :  An  Overview. The  Scientific  World  Journal , 2013, 1-16. https://doi.org/10.1155/2013/162750
Martinez,  C.  S.,  Escobar,  A.  G.,  Torres,  J.  G.  D.,  Brum,  D.  S.,  Santos,  F.  W., Alonso, M. J., Salaices, M., Vassallo, D. V., Peçanha, F. M., Leivas, F. G., &  Wiggers,  G.  A.  (2014).  Chronic  Exposure  to  Low  Doses  of  Mercury Impairs  Sperm  Quality  and  Induces  Oxidative  Stress  in  Rats. Journal  of Toxicology  and  Environmental  Health,  Part  A , 77 (1–3),  143–154. https://doi.org/10.1080/15287394.2014.867202
Monsees,  T.  K.,  Franz,  M.,  Gebhardt,  S.,  Winterstein,  U.,  Schill,  W.  B.,  & Hayatpour,  J.  (2000).  Sertoli  Cells  as  a  Target  for  Reproductive  Hazards.
Andrologia , 32 (4–5), 239–246. https://doi.org/10.1046/j.1439-
0272.2000.00391.x
Necib,  Y.,  Bahi,  A.,  Zerizer,  S.,  Abdennour,  C.,  &  Boulakoud,  M.  S.  (2013). Effect  of  Virgin  Olive  Oil  ( Olea  europea .  L)  on  Kidney  Function
Impairment  and  Oxidative  Stress  Induced  by  Mercuric  Chloride  in  Rats. American  Journal  of  Biochemistry  and  Biotechnology , 9 (4),  415–422. https://doi.org/10.3844/ajbbsp.2013.415.422
Panche, A. N., Diwan, A. D., & Chandra, S. R. (2016). Flavonoids: An Overview.
Journal of Nutritional Science , 5 , 1–3. https://doi.org/10.1017/jns.2016.41
Nijveldt, R. J., van Nood, E., van Hoorn, D. E., Boelens, P. G., van Norren, K., & van Leeuwen, P. A. (2001). Flavonoids a Review of Probable Mechanisms of  Action. The  American  Journal  of  Clinical  Nutrition, 74 (4),  418–425. https://doi.org/10.1093/ajcn/74.4.418
Ruyani, A., Putri, R. Z. E., Jundara, P., Gresinta, E., Ansori, I., & Sundaryono, A. (2018). Protective Effect of Leaf Ethanolic Extract Etlingera hemisphaerica Blume  Against  Mercuric  Chloride  Toxicity  in  Blood  of  Mice. Journal  of Dietary Supplements , 16 (1), 51–65. https://doi.org/10.1080/19390211.2018.1429516 Sasikumar,  V.  (2015).  Protective  Effect  of  Alkaloids  from Amaranthus  viridis
Linn.  Against  Hydrogen  Peroxide  Induced  Oxidative  Damage  in  Human Erythrocytes  (RBC). International  Journal  of  Clinical  Endocrinology  and Metabolism , 1 (1), 49–53. https://doi.org/10.17352/ijcem.000011