## UJI AKTIVITAS PENGHAMBATAN XANTIN OKSIDASE EKSTRAK
ETANOL 80% DARI TANAMAN FAMILI COMBRETACEAE, LAURACEAE, LYTHRACEAE, OXALIDACEAE, PIPERACEAE,

## PLUMBAGINACEAE, DAN SMILACACEAE
Tri wahyuni, Anggita Widuri, Abdul Mun’im, Katrin Fakultas Farmasi, Universitas Indonesia, Depok 164 Email : wahyuni.tri@ui.ac.id

## ABSTRAK
Hiperurisemia dapat disebabkan oleh produksi berlebih dan kurangnya ekskresi asam  urat  dalam  tubuh.  Xantin  oksidase  adalah  enzim  yang  memiliki  peran mengkatalisis oksidasi hipoxantin dan xantin menjadi asam urat. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui tanaman obat yang memiliki aktivitas penghambatan xantin oksidase dan mengidentifikasi golongan senyawa kimianya. Metode yang digunakan adalah Continous Spectrophotometric Rate Determination . Serbuk simplisia diekstrak dengan  cara  refluks  menggunakan  pelarut  etanol  80%.  Dengan  uji  aktivitas penghambatan  xantin  oksidase  didapatkan  ekstrak  yang  memiliki  aktvitas penghambatan, yaitu ekstrak herba suruhan ( Peperomia pellucida (L.) Kunth), ekstrak daun  blimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.), ekstrak daun sirih  ( Piper betle L.), dan ekstrak  kulit  kayu  manis  ( Cinnamomum  burmannii Nees  ex  Blume)  yang  memiliki nilai IC 50 berturut-turut 2621,07 ppm, 1149,113 ppm, 245,30 ppm, dan 1294,58 ppm. Identifikasi  kimia  pada  ekstrak  herba  suruhan  menunjukkan  adanya  alkaloid, flavonoid,  tanin,  saponin,  dan  glikosida.  Pada  ekstrak  daun  belimbing  wuluh mengandung  senyawa  flavonoid,  tanin,  dan  saponin.  Pada  eksktrak  daun  sirih  hijau mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin,  dan  antrakuinon.  Pada ekstrak kulit kayu manis mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, saponin
Kata  kunci :  suruhan,  blimbing  wuluh,  sirih,  kayu  manis,  hiperurisemia,  aktivitas inhibitor, xantin oksidase

## ABSTRACT
Hyperuricemia could happen because of overproduction and/or underexcretion of uric acid in the body. Xanthine oxidase is an enzyme that plays a role in catalyzing the oxidation hypoxanthine and xanthine into uric acid. The purpose of this study is to find  medicinal  plants  which  have  inhibited  the  xanthine  oxidase  activity  and identification the chemical contain. The method used to test the inhibitory activity of the  xanthine  oxidase  is  a Continous  Spectrophotometric  Rate Determination .  The simplisia powder was extracted by reflux using 80% ethanol solvent. The result of this study  showed that  suruhan  ( Peperomia  pellucida (L.)  Kunth)  herb  extract,  blimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) leave extract, sirih ( Piper betle L.) leave extract, and kayu manis ( Cinnamomum burmannii Nees ex Blume) bark extract has IC 50 value 2621.07
ppm,  1149.113  ppm,  245.30  ppm,  dan  1294.58  ppm  respectively.  Chemical identification  in suruhan  herb extract  is alkaloids, flavonoids, tannins, saponins, and glycosides. Averrhoa  bilimbi L.  leave  extract    contain  flavonoids,  tannins,  and saponins. Piper betle L. leave extract contain alkaloids, flavonoids, tannins, saponins, and  anthraquinones,  while  kayu  manis  bark  extract  showed  alkaloids,  flavonoids, tannins, saponins..
Keywords  : Peperomia  pellucida (L.)  Kunth), Averrhoa  bilimbi L., Piper  betle L., Cinnamomum burmannii Nees ex Blume, hyperuricemia, inhibitory activity, xanthine oxidase

## PENDAHULUAN
Hiperurisemia,  yang  berkaitan dengan gout ,  dihasilkan  dari  produksi asam urat yang berlebihan atau berkurangnya ekskresi asam tersebut dan sangat  dipengaruhi  oleh  pola  konsumsi makanan yang banyak mengandung asam nukleat (Owen & Johns, 1999). Penelitian terkini  menunjukkan  bahwa  kasus gout meningkat  secara  luas  dimungkinkan karena  adanya  perubahan  dalam  pola makan,  seperti  mengonsumsi  makanan yang  banyak  mengandung  asam  nukleat, contohnya  daging  dan  makanan  laut (Umamaheswari et al ., 2009). Gout adalah  salah  satu  kelainan
metabolik yang umum menyerang manusia.  Penyakit  ini  ditandai  dengan hiperurisemia  yang  memicu  endapan kristal urat monohidrat di sendi dan ginjal sehingga menyebabkan arthritis gout dan nefrolitiasis  yang  disebabkan  asam  urat (Umamaheswari et  al .,  2007). Salah satu cara  pengobatan  yang  digunakan  untuk mengobati penyakit gout adalah menggunakan  inhibitor  xantin  oksidase yang  menghambat  pembentukan  asam urat (Kong, et al ., 2000).
Alopurinol merupakan satu- satunya  senyawa  penghambat  xantin oksidase  yang  sering  digunakan.  Dalam penggunaannya, obat  ini  tidak  lepas  dari
adanya efek samping seperti hipersensitivitas, sindrom Stevens- Johnson, dan toksisitas ginjal (Umamaheswari et  al .,  2007).  Obat  ini juga dapat menyebabkan hepatitis, nefropati,  dan  reaksi  alergi  (Kong et  al ., 2000).  Oleh  karena  itu,  dibutuhkan penelitian  dan  pencarian  senyawa  yang memiliki potensi aktivitas penghambatan xantin  oksidase,  tetapi  sedikit  efek sampingnya  (Murata et  al .,  2009). Salah satu  sumber  yang  berpotensi  adalah berasal dari tanaman obat (Umamaheswari et  al .,  2009).  Tanaman telah  lama  memainkan  peran  yang penting dalam menjaga kesehatan manusia dan juga berfungsi sebagai bahan makanan  untuk  manusia.  WHO  ( World Health  Organization )  memperkirakan lebih dari 80% penduduk dunia bergantung  pada  pengobatan  tradisional sebagai  pengobatan  utama  mereka  dan sebagian  besar  meliputi  penggunaan ekstrak tanaman atau kandungan senyawa aktif  dari  tanaman  tersebut  (Egwuche et al ., 2011).
Penelitian mengenai khasiat tanaman  sebagai  penghambat  xantin oksidase  telah  banyak  dilakukan.  Pada tahun  2003  telah  dilakukan  penelitian terhadap  beberapa  tanaman  dari  famili Celastraceae  dan  famili  Lamiaceae.
Tanaman  yang  diteliti  tersebut  dipilih pada  kombinasi  berbagai  kriteria,  tetapi hal  utama  yang  diperhatikan  adalah digunakan oleh masyarakat Panama. Dari hasil penelitian tersebut pada konsentarsi 1  µg/mL  ekstrak  etanol  akar  dan  bagian aerial Hyptis obtusiflora Presl  ex  Benth (Lamiaceae)  memiliki  daya  inhibisi sebesar  42%  dan  44%.  Ekstrak  etanol bagian  aerial Hyptis  lantanaefolia Poit (Lamiaceae)  memiliki  daya  inhibisi sebesar 41%. Pada konsentrasi 50 µg/mL, ekstrak  etanol  akar Hyptis  brevipes Poit (Lamiaceae)  memiliki  daya  inhibisi sebesar  99%  (Gonzales et  al .,  1995).
Penelitian  yang  dilakukan  terhadap  122 tanaman  obat  tradisional  China  yang dipilih  sesuai  dengan  khasiat  klinis  dan frekuensi  resep  untuk  pengobatan  asam
urat  dan  gangguan  lain  yang  terkait dengan  hiperurisemia  menunjukkan  4 jenis  ekstrak  tanaman  yang  memilki aktivitas terbaik. Ekstrak metanol Cinnamomum cassia (Lauraceae)
merupakan yang paling aktif dengan nilai IC 50 18 µg/mL kemudian ekstrak metanol dari Chrysanthenum indicum (Asteraceae), Lycopus europaeus (Lamiatae),  dan  ekstrak  air  tanaman
Polygonum  cuspidatum (Polygonaceae) masing-masing  dengan  nilai  IC 50 22 µg/mL,  26  µg/mL,  dan  38  µg/mL. Kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu Alopurinol dengan nilai IC 50 1,06 µg/mL (Kong et al ., 2000).
Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji aktivitas  penghambatan  xantin  oksidase terhadap  beberapa  tanaman  obat  di Indonesia yang berkhasiat sebagai antihiperurisemia.  Pengukuran  aktivitas penghambatan xantin oksidase dilakukan menggunakan metode Continous Spectrophotometric  Rate  Determination .
Hasil  penghambatan  reaksi  enzimatik tersebut diukur serapannya secara spektrofotometri pada panjang gelombang 277,5 nm. Percobaan dilakukan  dengan  variasi  konsentrasi sediaan uji untuk mengetahui konsentrasi paling  optimal  yang  dapat  menghambat aktivitas xantin oksidase.

## METODE PENELITIAN Alat
Alat refluks, kondensor, penangas air, termometer, pipet mikro 100-1000μL (Eppendorf),  spektrofotometer  UV-Vis (Shimadzu  1601,  Jepang),  kuvet  kuarsa (Quartz  Cells,  Jerman),  penguap  vakum putar  (rotavapor),  rak  tabung  reaksi, sentrifugator (Kubota 5100, Jepang).

## Bahan
Simplisia  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  berasal  dari  beberapa tanaman  yang  tertera  dalam  Tabel  1. Simplisia uji berasal dari Balai Penelitian
Tanaman Obat
dan Aromatik (BALITRO), Bogor.
Etanol 80%, larutan dapar kalium fosfat  0,05  M,  substrat  xantin  (Sigma Ultra,  USA),  xantin  oksidase  (Oriental Yeast  Co,  LTD,  Jepang),  dimetil sulfoksida  (Merck,  Jerman),  HCl  1  N, Bouchardat  LP,  Mayer  LP,  Dragendorff LP,  larutan  Iodii,  air  suling  (aquadest), HCl  2  N,  HCl  10%,  natrium  sulfat anhidrat (Merck, Jerman), metanol, asam sulfat P, Molisch LP, asan asetat anhidrat, etanol 95%, serbuk seng (Merck, Jerman), serbuk  magnesium  (Merck,  Jerman), natrium  karbonat  (Merck,  Jerman), larutan Pb (II) asetat, larutan NaCl 10%, larutan  gelatin  (10%),  FeCl3  3%,  asam sulfat 2 N, benzen (Merck, Jerman).

## Cara Kerja Persiapan Bahan
Setelah pengumpulan bahan baku, lalu  memilih  bagian  tanaman  yang  akan digunakan  untuk  pengujian.  Bagian tanaman  yang  telah  dipilih  kemudian dicuci  dengan  air  hingga  bersih.  Bagian tanaman yang dikeringkan pada temperatur kamar hingga air bekas cucian mengering lalu ditimbang. Bagian tanaman  dimasukkan  kedalam  lemari pengering  kemudian  hasil  pengeringan ditimbang  kembali  agar  dapat  diketahui bobot  penyusutannya.  Bagian  tanaman yang  telah  dikeringkan,  dihaluskan menggunakan  mesin  penggiling  hingga menjadi serbuk.
Masing-masing  50  gram  serbuk simplisia  direfluks  menggunakan  pelarut etanol  80%  selama  1  jam  dan  diulangi sebanyak  3  kali.  Ekstrak  yang  didapat kemudian diuapkan pelarutnya menggunakan rotavapor pada  suhu  40- 50ºC hingga menjadi ekstrak kental.
Tabel 1 . Daftar sampel tanaman untuk simplisia uji No.  Spesies tanaman Bagian tanaman yang digunakan 1 Plumbago zeylanica L. daun 2 Peperomia  pellucida (L.) Kunth herba 3 Piper  crocatum Ruiz  & Pav daun 4 Piper betle L daun 5 Averrhoa bilimbi L. daun 6 Smilax china L rimpang 7 Terminalia cattapa L daun 8 Lawsonia inermis L. daun 9 Cinnamomum  burmannii Nees ex Blume Kulit kayu 10 Persea Americana Mill
buah
Uji  Aktivitas  Penghambatan  Xantin Oksidase (Umamaheswari et al ., 2007)
Secara umum uji aktifitas penghambatan  enzim  xantin  oksidase terdiri  dari  uji  pendahuluan  penetuan panjang  gelombang  maksimum  substrat xantin,  penentuan  suhu  optimum,  dan penentuan  konsentrasi  xantin  oksidase optimum.
Semua  ekstrak  yang  dihasilkan diukur aktivitas penghambatannya. Pengujian dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer di bawah kondisi aerob. Larutan uji sebanyak 1 mL dengan konsentrasi (10, 25, 50, 100, dan 200  µg/mL)  ditambahkan  2,9  mL  dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 dan 0,1 mL larutan enzim  dengan  konsentrasi  optimum dalam  dapar  fosfat,  pH  7,5.  Setelah dilakukan pra-inkubasi pada suhu optimum selama 15 menit, reaksi dimulai dengan  penambahan  2  mL  larutan substrat  xantin  12,072  ppm.  Larutan campuran  kemudian  diinkubasikan  pada suhu  optimum  selama  30  menit.  Reaksi dihentikan  dengan  penambahan  1  mL HCl  1  N  kemudian  diukur  serapannya pada panjang gelombang maksimum yang telah
ditentukan menggunakan spektrofotometer.  Pengujian  dilakukan sebanyak  3x  ulangan.  Satu  unit  xantin oksidase  didefinisikan  sebagai  jumlah enzim yang diperlukan untuk menghasilkan 1 mM asam urat per menit pada suhu optimum. Aktivitas penghambatan  xantin  oksidase  dapat dihitung dengan rumus:
% Inhibisi = (𝐴−𝐵)−(𝐶−𝐷) (𝐴−𝐵) x 100%
Keterangan: A = aktivitas enzim tanpa ekstrak B = kontrol untuk A, tanpa ekstrak dan enzim C = aktivitas sampel D = aktivitas sampel tanpa enzim
Sebagai kontrol positif digunakan alopurinol dengan konsentrasi 1, 2, 5, 10, dan 20 ppm. Nilai IC 50 dihitung menggunakan rumus persamaan regresi linear.
Identifikasi Kandungan Kimia (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995b)

## Identifikasi Alkaloid
Ekstrak  dilarutkan  dengan  10  ml campuran  air  suling  dan  HCl  2  N  (9:1) kemudian  panaskan  selama  2  menit. Selanjutnya  disaring  dan  1  mL  filtrat digunakan  sebagai  larutan  percobaan yang  selanjutnya  dilakukan  sebagai berikut:
1) Tambahkan  2  tetes  Bouchardat  LP. Hasil positif dengan terbentuk
endapan coklat hitam.
2) Tambahkan 2 tetes Mayer LP. Hasil positif  dengan  terbentuk  endapan putih.
3) Tambahkan  2  tetes  Dragendorf  LP.
Hasil  positif  terbentuk  endapan jingga coklat
Identifikasi Glikosida Pembuatan larutan percobaan dengan  menambahkan  15  mL  HCl  10%
pada sejumlah 1 gram ekstrak.
Selanjutnya dipanaskan hingga mendidih, dinginkan,  kemudian  saring.  Cuci  filtrat dengan  10  mL  eter  lakukan  sebanyak  3 kali.  Kemudian  kumpulkan  filtrat  dan
uapkan, tambahkan natrium sulfat anhidrat,  saring  dan  uapkan,  Tambahkan 2 mL metanol P dan larutan ini digunakan sebagai larutan percobaan.
1)  Larutan  percobaan  sebanyak  1  mL diuapkan  hingga  kering,  sisanya ditambahkan  20  tetes  asam  asetat anhidrat  P  dan  1 tetes  asam  sulfat  P. Hasil positif terbentuknya warna biru atau hijau.
2)  Larutan  percobaan  sebanyak  1  mL diuapkan  hingga  kering,  sisanya dilarutkan dengan 2 mL air dan 5 tetes Molisch  LP.  Kemudian  ditambahkan dengan hati-hati
2  mL  asam  sulfat  P.  Hasil  positif terbentuknya  cincin  berwarna  ungu pada batas cairan (Reaksi Molisch).

## Identifikasi Saponin
Ekstrak  dimasukkan  ke  dalam tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan  10 mL  air  suling  panas,  dinginkan,  kocok kuat-kuat  selama  10  detik.  Hasil  positif ditunjukkan  dengan  terbentuknya  buih yang mantap tidak kurang dari 10 menit, setinggi  1  cm  sampai  19  cm,  pada penambahan1  tetes  asam  klorida  2  N  , buih tidak hilang.

## Identifikasi Flavonoid
1) Sejumlah  500  mg  ekstrak  dilarutkan dalam 1-2 mL etanol (95%) kemudian ditambahkan 0,5 gram serbuk seng P dan  2  mL  asam  klorida  2  N  dan didiamkan  selama  1  menit.  Setelah itu, tambahkan  10 tetes  asam  klorida pekat P, jika dalam waktu 2 sampai 5 menit  terjadi  warna  merah  intensif, menunjukkan adanya flavonoid (glikosida-3-flavonol).
2) Sejumlah  500  mg  ekstrak  dilarutkan dalam 1 mL etanol (95%) P kemudian
ditambahkan 0,1 gram serbuk magnesium P dan 10 tetes HCl pekat. Jika  terjadi  warna  merah  jingga sampai  merah  ungu  menunjukkan adanya  flavonoid.  Jika  warna  kuning jingga  menunjukkan  adanya  flavon, kalkon dan auron.

## Identifikasi Tanin
1) Ekstrak (1 mL) dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 5 mL air  suling  dan  direbus  sebentar, setelah  dingin  disaring  dan  diperiksa pH  filtrat  mendekati  pH  netral  (pH 6,0-8,0).  Tambahkan  Na  karbonat atau  asam  asetat  jika  perlu  untuk mendekati  pH  netral.  Selanjutnya  5 mL filtrat diberi 2-3 tetes Pb(II)asetat.
Hasil positif jika memberikan endapan putih sampai warna kuning.
2) Ekstrak  sebanyak  1  mL  dilarutkan dalam  5  mL  air  suling  panas  dan diaduk.  Setelah  dingin  disentrifugasi dan  bagian  cairan  didekantisir  da diberi  larutan  NaCl  10%  kemudian disaring.  Filtrat  sebanyak  masing- masing  1  mL  dikerjakan  sebagai berikut:
a) Ditambahkan 3 mL larutan gelatin 10% dan diperhatikan adanya endapan.
b) Ditambahkan 2 tetes larutan FeCl 3 3%.
c) Ditambahkan 3 mL larutan NaCl- gelatin (larutan gelatin 1% dalam larutan NaCl 10%).

## Identifikasi Antrakuinon
Sejumlah 200 mg ekstrak dilarutkan dengan 5 mL asam sulfat 2 N,
panaskan sebentar kemudian didinginkan. Tambahkan 10  mL benzen P, kocok dan didiamkan.  Dipisahkan  lapisan  benzene
dan  disaring.  Filtrat  berwarna  kuning menunjukkan adanya antrakuinon. Kocok lapisan benzen dengan 1 mL sampai 2 mL natrium  hidroksida  2  N,  didiamkan, lapisan  air  berwarna  merah  intensif  dan lapisan benzene tidak berwarna.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Penyiapan Bahan
Tanaman yang diperoleh disortasi basah terlebih dahulu untuk memisahkan kotoran  dan  bahan  asing  lainnya  yang menempel pada tanaman kemudian dicuci untuk  menghilangkan  pengotor  masih menempel  pada  tanaman  yang  sudah disortasi  basah  lalu  dirajang  pada temperatur  kamar  untuk  menghilangkan air bekas pencucian. Kemudian dilakukan pengeringan dalam lemari pengering suhu 40-50°C.

## Ekstraksi Simplisia
Ekstraksi simplisia dilakukan dengan  cara  panas,  yaitu  secara  refluks menggunakan etanol 80% sebagai pelarut dengan alasan kepolarannya yang mendekati senyawa  yang diekstrak, serta bersifat  tidak  toksik.  Refluks  dilakukan selama  satu  jam,  kemudian  ekstrak  yang didapat  dipisahkan  dari  ampas  dengan cara penyaringan. Setelah disaring, ampas ditambahkan  lagi  pelarut,  kemudian proses ekstraksi diulangi kembali  hingga tiga kali agar jumlah senyawa yang tersari dapat lebih banyak.
Ekstrak  cair  diuapkan  pelarutnya
menggunakan rotavapor .  Pelarut  yang masih  tersisa  pada  ekstrak  diuapkan diatas  penangas  air  hingga  terbentuk ekstrak kental kemudian ditimbang untuk menghitung rendemennya.

## Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Substrat Xantin
Larutan  substrat  xantin  dengan
konsentrasi 10 ppm yang telah dipersiapkan  diukur  serapannya  pada panjang  gelombang  200-400  nm  untuk menentukan  panjang  gelombang  yang memberikan serapan maksimum. Hasilnya diketahui bahwa panjang gelombang  yang  memberikan  serapan maksimum  adalah  pada  277,5  nm.
Panjang  gelombang  tersebut  berbeda dengan  digunakan  pada  literatur,  yaitu berkisar  antara  262  hingga  295  nm. Beberapa  faktor,  termasuk  larutan  yang digunakan,  konsentrasi,  pH,  dan  suhu dapat mempengaruhi posisi dan intensitas serapan  molekul.  Parameter  ini  harus dikontrol  untuk  memastikan  presisi maksimum.  Secara  umum,  besarnya pergeseran  dapat  dihubungkan  dengan polaritas pelarut. Sebagai contoh, serapan maksimum  aseton  dapat  bervariasi  dari 259  hingga  279  nm,  bergantung  pada larutan yang dipergunakan. Untuk analisis yang bertujuan untuk
membandingkan,  pelarut  tunggal  harus digunakan  untuk  semua  pengukuran (Owen, 2000).
Pembuatan  Kurva  Kalibrasi  Substrat Xantin
Larutan  substrat  xantin  dibuat dengan cara melarutkan 50,3 mg substrat dengan menggunakan NaOH 0,5% 3 tetes kemudian  diencerkan  dengan  air  dalam labu ukur 50,0 mL hingga garis batas. Uji ini  dilakukan  dengan  mengukur  serapan yang  diberikan  oleh  larutan  uji  dengan konsentrasi  larutan  uji  2,012;  4,024; 6,036; 8,048; 10,06; dan 12,072 ppm pada panjang  gelombang  277,5  nm.  Kurva
kalibrasi yang didapat dengan persamaan regresi linear y = -0,02826 + 0,06029x.
Gambar 1 . Kurva Kalibrasi subtrat xathin

## Penentuan Suhu Optimum
Konsentrasi  12,072  ppm  subtrat xantin  direaksikan  dengan  0,1  U/mL enzim  xantin  oksidase  dalam  larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 lalu diinkubasi selama 30 menit pada variasi suhu, yaitu suhu 20, 25, dan 37°C. Hasil serapan yang didapat  menunjukkan  suhu  optimum  ada pada suhu 20°C, karena pada suhu 25 dan 37°C  serapan  mengalami  penurunan,  ini terjadi  karena  terjadinya  penguraian  dan denaturasi  rantai  polipeptida  pada  enzim sehingga kemampuan kinetika dari enzim mengalami pengurangan (Murray, Granner & Rodwell, 2009).

## Penentuan  Konsentrasi  Enzim  Xantin Oksidase Optimum
Larutan  substrat  xantin  dengan konsentrasi  12,072  ppm  direaksikan dengan  enzim  dengan  konsentrasi  yang berbeda-beda,  yaitu  :  0,02565  U/mL; 0,513  U/mL;  dan  0,1026  U/mL  dalam larutan  dapar  fosfat  0,05  M  pH  7,5  lalu diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu 20°C  didapat  serapan  optimum  dengan nilai  0,251  pada  konsentrasi  0,1026 U/mL.
Uji  Aktivitas  Inhibisi  Enzim  Xantin Oksidase Pengujian terhadap aktivitas penghambatan xantin oksidase dilakukan dengan varisasi konsentrasi dengan tujuan dapat  mengetahui  pengaruh  penambahan konsentrasi ekstrak terhadap peningkatan daya hambat. Variasi konsentrasi ekstrak yang digunakan mulai dari 10 ppm hingga konsentrasi 200 ppm. Ekstrak yang tidak dapat  larut  dengan  air  dilarutkan  dahulu dengan  2-5  tetes  DMSO  (Dimetil Sulfoksida).
Selain itu juga dilakukan pengamatan aktivitas enzim tanpa
penambahan  ekstrak  (blanko  A)  untuk melihat  pengaruh  penghambatan  ekstrak tersebut  terhadap  aktivitas  enzim  dan blanko  B  (tanpa  enzim  dan  ekstrak) sebagai kontrol dari blanko A. Blanko D (ekstrak  tanpa penambahan enzim) digunakan untuk mengoreksi hasil serapan sampel.
Uji aktivitas penghambatan xantin oksidase  dilakukan  pada  suhu  optimum, yaitu  20 o C  dengan  konsentrasi  enzim optimum  0,1026  U/mL  pada  panjang gelombang  277,5  nm.  Semua  ekstrak yang dihasilkan diukur aktivitas penghambatannya.  Pengujian  dilakukan dengan  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  (Shimadzu  1601)  di  bawah kondisi aerob.
Hasil  pengujian  menunjukkan hanya 4 ekstrak tanaman yang mempunyai  aktivitas  yang  cukup  untuk menghambat  xantin  oksidase,  namun dengan  persentase  penghambatan  yang kecil.  Keempat  ekstrak tanaman  tersebut yaitu ekstrak herba  suruhan dengan  nilai IC 50 2621,07 ppm, ekstrak daun blimbing wuluh  dengan  nilai  IC 50 1149,113  ppm, ekstrak  daun  sirih  dengan  nilai  IC 50
245,30 ppm, dan ekstrak kulit kayu manis dengan  nilai  IC 50
1294,58.  Aktivitas penghambatan xantin oksidase kemungkinan disebabkan adanya kandungan  tanin  dan  senyawa  flavonoid dalam tanaman. Tanin dikenal kemampuannya  bereaksi  dengan  protein yang mengakibatkan terbentuknya kompleks tannin-protein sehingga mengurangi  aktivitas  katalis xantin oksidase, sedangkan aktivitas penghambatan  oleh  flavonoid  yaitu disebabkan  karena  kerangka  strukturnya posisi  geometris  yang  hampir  mirip dengan xantin dan adanya gugus hidroksil pada posisi C5 dan C7 yang memungkinkannya untuk teroksidasi oleh xantin oksidase (Owen et al ., 2002).
Sebagai kontrol positif digunakan tablet generik alopurinol 100 mg produksi Bernofarm®.
Pengujian dilakukan dengan  konsentrasi  1,  2,  5,  10,  dan  20 ppm.  Larutan  sampel  alopurinol  dibuat dengan  cara  menimbang  berat  rata-rata dari  10  tablet,  yaitu  sebesar  439,0  mg kemudian  ditambahkan  dengan  5  tetes NaOH 1 N lalu diencerkan dengan 10 mL air  dan  dilarutkan  dengan  bantuan ultrasonik  (Elmason,  Jerman).  Bagian tablet yang tidak larut disaring kemudian sisa filtrat. ditambahkan air sampai batas volume. Hasil menunjukkan bahwa tablet alopurinol  memiliki  efek  penghambatan enzim  xantin  oksidase  dengan  nilai  IC 50 287,82 ppm dengan persentasi penghambatan  20,97%  pada  konsentrasi 20  ppm.  Nilai  ini  jauh  berbeda  jika dibandingkan dengan nilai IC 50 alopurinol pada  literatur,  yaitu  6,75  ppm  dengan persentase  penghambatan  93,21%  pada konsentrasi  100  ppm.  Perbedaan  ini disebabkan  karena  perbedaan  variasi konsentrasi  alopurinol  yang  digunakan
dan  tingkat  kemurnian  bahan.  Pada penelitian ini menggunakan tablet generik alopurinol,  sedangkan  pada  literature menggunakan alopurinol standar. Tabel 2. Hasil uji penetuan aktivitas penghambatan xantin oksidase No. Sampel uji Bagian yang digunakan IC 50 (ppm) 1 Ekstrak Rimpang Gadung Cina Rimpang 150,60 2 Ekstrak Daun Sirih daun 245,30 3 Ekstrak Kulit Kayu Manis kulit kayu 1294,58 4 Ekstrak Herba Suruhan herba 2621,07 5 Ekstrak Daun Pacar Kuku daun 6000,48 6 Ekstrak Daun Ketapang daun 300,60 7 Ekstrak Daun Sirih Merah daun 1978,58 8 Ekstrak Daun Encok daun 256,67 9 Ekstrak Daun Belimbing Wuluh daun 1149,11 11 Ekstrak Buah Alpukat buah 126,78 12 Persea Americana Mill Buah 368,76

## Uji Identifikasi Kandungan Kimia
Hasil  identifikasi  tiap  ekstrak tanaman  menggunakan  pereaksi  kimia memberikan  hasil  yang  berbeda-beda. Terhadap pereaksi saponin semua ekstrak tanaman  memberikan  hasil  yang  positif. Pada  identifikasi  alkaloid,  ekstrak  herba suruhan memberikan hasil positif terhadap semua pereaksi alkaloid, hal ini sesuai  dengan  salah  satu  literatur  yang menyatakan  bahwa  tanaman  suruhan mengandung  alkaloid  (Egwuche et  al .,
2011).  Dari  hasil  identifikasi  alkaloid, tanaman  lain  memberikan  hasil  yang berbeda-beda  terhadap  pereaksipereaksi alkaloid  yang  digunakan.  Pada  hasil
flavonoid,  ekstrak  daun  sirih,  ekstrak daun  encok,  dan  ekstrak  daun  ketapang memberikan  hasil  yang  positif,  baik ketika direaksikan dengan serbuk magnesium  dan  HCl  pekat,  maupun ketika  direaksikan  dengan  serbuk  seng, HCl 2 N, dan HCl pekat. Pada identifikasi tanin, ekstrak daun encok, kulit kayu kayu manis,  dan  daun  blimbing  wuluh memberikan hasil positif terhadap semua pereaksi tanin, Pada identifikasi glikosida,  hanya  ekstrak  herba  suruhan, ekstrak daun encok, dan ekstrak daunketapang  yang  memberikan  hasil positif terhadap semua pereaksi glikosida.
Tabel 3 . Hasil uji identifikasi kandungan kimia tiap ekstrak
Kandungan Kimia Pereaksi Kimia Herba Suruhan Daun Pacar Kuku Rimpang Gadung Cina Daun Sirih Daun Encok Daun Sirih Merah Buah Alpukat Daun Ketapang Kulit Kayu Manis Daun Belimbing Wuluh
Alkaloid
Bouchardat LP + + - + + + + + +
- Dragendorff LP + - -
- + +
- + - - Mayer LP + - +
+ - -
- + -
-
Flavonoid Serbuk Zn +
HCl 2N + HCl (p) - - - + + -
- + - - Serbuk Mg + HCl (p) + + + + + + + + + + Tanin Pb(II)Asetat
+ + + + + + + + +
+ Gelatin 10% - - - + + + - - +
+
NaCl - Gelatin
- - - + + - - - + +
FeCl 3 + + + + + + + +
+ Saponin Air Panas + + + + + + + + +
+ Antrakinon Benzen + NaOH 2N - - - + - + - - - - Glikosida As. Asetat Anhidrat + H 2 SO 4(p) + - - - + + - + - - Molisch LP + + + + + - + +
+ -

## Kinetika Enzim
Karena tidak ada ekstrak yang memiliki persentase inhibisi melebihi 50%, maka tidak ada ekstrak yang digunakan untuk menentukan  kinetika  penghambatan enzim.

## KESIMPULAN
Ekstrak  herba  suruhan,  daun blimbing  wuluh,  daun  sirih,  dan  kulit kayu  manis  berpotensi  menghambat xantin  oksidase  dengan  nilai  IC 50 berturut-turut  2621,07  ;  1149,113  ; 245,30 dan 1294,58 ppm.
Identifikasi  kimia  pada  ekstrak herba  suruhan  menunjukkan  adanya alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, dan glikosida.  Pada  ekstrak  daun  blimbing wuluh mengandung senyawa flavonoid,  tanin,  dan  saponin.  Pada ekstrak daun sirih mengandung senyawa  alkaloid,  flavonoid,  tanin, saponin, dan antrakuinon. Pada ekstrak kulit kayu manis mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, saponin.

## DAFTAR ACUAN
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  (1995),  Farmakope Indonesia  edisi  IV.  Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Egwuche,  R.  U.,  Odetola,  A.  A., Erukainure,  O.  L.  (2011). Preliminary  Investigation  into the  Chemical  Properties  of Peperomia pellucida L. Research Journal of Phytochemistry , 5 (1), 48-53. Gonzalez,  A.  G.,  Bazzochi,  I.  L., Moujir,  L.,  Ravelo,  A.  G., Correa,  M.  D.,  Gupta,  M.  P. (1995). Xanthine Oxidase Inhibitory  Activity  of  Some Panamian Plants from Celatraceae and Lamiaceae .
Journal  of  Etnopharmacology , 46, 25-29. Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia. Ter. Dari Phytochemical  Methods  oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung:
Penerbit ITB.
Kong,  L.  D.,  Cai,  Y.,  Huang,  W.  W.,
Cheng,  C.  H.  K.,  Tan,  R.  X. (2000).  Inhibition  of  Xanthine Oxidase  by  Some  Chinese Medicinal Plants Used to Treat Gout. Journal of Ethnopharmacology,  73,  199– 207. Murata,  K.,  Nakao,  K.,  Hirata,  N., Namba, K., Nomi, T., Kitamura,
Y.,  Moriyama  K.,  Shintani  T., Iinuma, M., Matsuda, H. (2009).  Hydroxichavicol:  A potent xanthine oxidase
inhibitor  obtained  from  the leaves  of  betel,  Piper  betle. Journal  of  Natural  Medicine, 63, 355-359.
Owen, P.L., Johns, T. (1999). Xanthine oxidase  inhibitory  activity  of Northeasthern  North  American plant  remedies  used  for  gout. Journal  of  Ethnopharmacology
. 64, 146.
Umamaheswari,  M.,  Asokkumar,  K., Somasundaram,A.,Sivashanmu gam,  T.,  Subhadradevi,  V., Ravi,  T.K.  (2007).  Xanthine oxidase  inhibitory  activity  of some  Indian  medical  plants . Journal of Ethnopharmacology,
109, 547–551.
Umamaheswari,  M.,  Asokkumar,  K., Sivashanmugam,A.T.,Remyara ju,  A.,  Subhadradevi,  V.,  Ravi, T.K.  (2009). In  vitro xanthine oxidase  inhibitory  activity  of the fractions of Erythrina stricta Roxb. Journal of Ethnopharmacology , 124, 646– 648. Van Hoorn, D.E.C., Nijveldt, R.J., Van Leuween  P.A.M.,  Hofman,  Z., M’Rabet, L., De Bont, D.B.A.Van  Norren,  K.  (2002). Accurate Prediction of Xanthine  Oxidase  Inhibtion Based  on  the  Structure  of Flavonoids. European  Journal of  Pharmacology ,  451,  111- 118.