## Abstract
Soil bacteria group which can release soil P-adsorbed is phosphate bacteria (PB). PB can release soil P-adsorbed through: 1) acidification, 2) chelating 3) ligand exchange 4) mineralization and 5) compete colloid sorption site. PB have a potential to release soil P-adsorbed. This study was aimed at determining the character and PB inoculant potential in soil P-adsorbed release. The results of BLASTn PB showed that    isolate  1  was  Pseudomonas  trivialis,  isolate  5  was  Pseudomonas  putida  and    isolate  9  was Pseudomonas fluorescens. Based on the growth curve on day 5th (the end log. phase) population of Pseudomonas trivialis was 1010 CFU/mL, Pseudomonas putida was 1014 CFU/mL and Pseudomonas fluorescens was 1017 CFU/mL. Storage inoculant PB population decrease 97-84 % and 80-65 % PB lowering capabilities.
Keywords: determination, inoculant, population, release, phosphate bacteria

## Abstrak
Penelitian  tentang  “Adaptasi  Anatomis  Tanaman  Kedelai  Varietas  Slamet  Akibat  Perbedaan Ketinggian  Tempat”  telah  dilakukan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  menjajaki  pengaruh  adaptasi tanaman  kedelai  varietas  Slamet  pada  ketinggian  tempat  yang  berbeda  dan    membuktikan  bahwa ketinggian tempat yang berbeda memberikan adaptasi anatomis yang berbeda pada tanaman kedelai varietas  Slamet.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ketinggian  tempat  yang  berbeda  memberikan pengaruh pada ketebalan mesofil kedelai varietas Slamet. Makin tinggi ketinggian tempat makin tebal lapisan  mesofilnya.    Perbedaan  ketinggian  tempat  tidak  memberikan  pengaruh  pada  tebal  kutikula,
2 panjang dan lebar stomata, kerapatan stomata dan trikomata   per mm    luas daun. Ketinggian tempat yang paling mempengaruhi tebal mesofil daun kedelai varietas Slamet adalah 250 m dpl, dengan tebal mesofil 112,40 µm.
Kata kunci : Adaptasi anatomis, Kedelai Slamet,

## Karakter dan Potensi Inokulum Bakteri Fosfat dalam Melepaskan Fosfor The Character and Potential of Phosphate Bacteria Inoculant on Phosphorus Release

## Tamad
Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Jenderal Soedirman Jl. dr. Soeparno Karangwangkal Purwokerto 53123
Email : tamad_1965@yahoo.com
Diterima Februari 2014 disetujui untuk diterbitkan Mei 2014

## Pendahuluan
M i k r o b i a   t a n a h   y a n g   m a m p u melarutkan fosfat dari genus bakteri adalah Pseudomonas,  Bacillus,  dan  Escherichia, dari  genus  jamur  adalah  Aspergillus, Penicillium,dan Culvularia, dan   dari genus Actinomicetes adalah Streptomyces (Subba Rao, 1982).   Kelompok bakteri tanah yang mampu melepaskan P adalah bakteri fosfat (BF)  (Lal,  2002).  BF  dapat  melepaskan  P melalui:  1)  pengasaman  (sitrat,  malat, oksalat,  glukonat,  dan  asetat),  2) pengkelatan oleh anion asam organik yang mengandung  grup  hidkroksil  dan  karboksil terhadap kation Al, Fe, dan Ca, 3) pertukaran ligan  oleh  anion  organik  terhadap  fosfat pada Al, Fe dan Ca, sehingga fosfat bebas, dan  4)  pengisian  loka  jerapan  koloid  oleh asam  organik  dan  sel,  karena  bermuatan permukaan  (Arcand  dan  Schneider,  2006).
Selain  itu,  BF  berperanan  meningkatkan potensi  tanaman  menyerap  hara,  produksi tanaman,  aktivitas  dan  keanekaragaman hayati  dalam  tanah,  kesehatan  tanah  dan lingkungan, dan mengawetkan sumber daya alam  yang  tidak  terbarukan  (Khan  et  al., 2007; Mehrvarz dan Chaichi, 2008).
Biofertilizer dikemas  dalam  bentuk cairan, serbuk atau butiran yang terdiri atas media  pembawa  dan  propagul  mikrobia. Media  pembawa  sekaligus  difungsikan sebagai  media  tumbuh  yang  dapat memengaruhi  kegigasan  (viabilitas)  dan kemampuan  khusus  dari  mikrobia  tersebut (Subba  Rao,  1994).  Media  cair  sering digunakan  untuk  memroduksi  inokulum mikrobia  tunggal,  misalnya  inokulum penghasil asam sitrat, penghasil enzim, dan biakan  jamur.Mikrobia  yang  tidak  dapat tumbuh/membentuk spora pada media cair
maka penggunaan media padat merupakan pilihannya.    Pemilihan  media  pembawa yang mudah dan murah, namun efektif dan efisien  dalam  mengembangkan  inokulum untuk  memroduksi  biofertilizer,  merupakan inovasi  yang  perlu  dikembangkan  untuk menunjang pertanian berkelanjutan.
Pemberian  pupuk  P  yang  banyak tidak menjamin ketersediaan P yang banyak bagi  tanaman,  karena  keefesienan  P  yang rendah, sekitar 10-20 % P.   Ketersediaan P yang  rendah  dalam  tanah  disebabkan karena P: 1) dijerap oleh koloid anorganik, 2) mengendap sebagai fosfat tidak larut pada kondisi  pH  asam,  dan  alkalin  dan  3) membentuk komplek dengan bahan organik (Hawkes  et  al.,  2007).  Keuntungan pemanfaatan  BF  adalah:  1)  ramah lingkungan,  karena  tidak  menimbulkan dampak  negatif,  2)  biaya  murah,  karena tidak memerlukan bahan baku dan teknologi yang  mahal,  dan  3)  berkelanjutan,  karena BF dalam tanah mampu memperbanyak diri d a n   b e r t a h a n   u n t u k   m u s i m - m u s i m selanjutnya.    Tujuan  penelitian  ini  adalah menentukan karakter dan potensi inokulum BF dalam melepaskan P-terjerap tanah.

## Materi dan metode

## A.Determinasi Bakteri Fosfat
Determinasi  spesies  BF  isolat  1,  5, dan  9  melalui  analisis  gen  16S  rRNA dilakukan  di  MACROGEN  Inc.  (908  World Meridian  Venture  Center,  #60-24,  Gasan- dong, Geumchun-gu, Seoul 153-781, Korea) terdiri  atas:  1)  preparasi  templet  DNA,  2) PCR, 3) purifikasi hasil PCR, 4) sequnecing, dan  5)    analisis  sequen  dengan  database dari  gene  bank  (Harris  dan  Hartley,  2003; Janda dan Abbott, 2007).
Analisis  hasil  gen  16S  rRNA  tiga isolat  BF  menggunakan  menu  BLASTn (Basic  Local  Aligment  Search  Tool) nucleotide program MEGA5 pada database gen  dari  NCBI  (National  Centre  for B i o t e c h n o l o g y   I n f o r m a t i o n )   u n t u k membandingkan antara sekuen gen contoh dengan  sekuen  gen  data  base  gen  bank spesies  bakteri  yang  diketahui  (Altschul  et al., 1990; Altschul et al., 1997; Pepper dan Gerba, 2004; Kumar et al., 2008).

## B. Kurva Tumbuh Bakteri Fosfat
Satu mL biakan (populasi diketahui) isolat BF terdeterminasi diinokulasikan pada 100  mL  Pikovskaya  cair,  selanjutnya
diinkubasikan pada suhu ruang selama dua belas  hari  dengan  penggojogan  100  rpm. Tiap 2x24 jam diambil 1 mL cuplikan untuk ditentukan  populasinya  dengan  metode SPC  (standard  plate  count).    Saat tercapainya  fase  logaritmik  merupakan waktu  untuk  penentuan  asam  organik  dan fase stationer merupakan waktu pemanenan isolat BF untuk dijadikan inokulum (Pepper dan Gerba, 2004).

## C. Pengembangan Inokulum Bakteri Fosfat
Isolat  BF  tunggal,  dan  konsorsium dua dan tiga isolat dipanen pada akhir fase logaritmik  dikembangkan  menjadi.  Media pembawa inokulum BF cair adalah 20% (v) molase  dan  5  gram/Liter  ekstrak  kedelai. Media  pembawa  inokulum  BF  padat  ialah campuran  (100  mesh)  steril    20  %  abu sekam,  20  %  dedak  padi,  20  %  onggok tapioka, 3,0 % asam asetat, 2,0 % CuSO4. 5H2O, 5 % zeolit, dan 30 % H2O (Tamad dan Maryanto,  2010).    Isolat  BF  diinokulasikan pada  media  pembawa  108  CFU/mL s e b a n y a k   1 0   m L / L  a t a u   k g ,   d a n diinkubasikan pada suhu ruang selama satu bulan.
Kestabilan  populasi  inokulum  BF umur  6  dan  12  bulan  ditentukan  dengan metode  SPC.  Sedangkan  kestabilan kemampuan  inokulum  BF  melarutkan  P ditentukan  dengan  menguji  kemampuan melarukan/memineralkan sumber P (batuan fosfat/RP,  Ca-P, Al-P,  Fe-P,  pNPP,  dan  Na- fitat) pada medium Pikovskaya cair.

## Hasil dan pembahasan

## A. Determinasi Bakteri Fosfat
Berdasarkan  hasil  BLASTn  data analisis gen 16S rRNA tiga isolat BF dengan primer amplifikasi 1492R (ggY TAC CTT gTT Acg  ACTT)  dan  primer  sequencing  800R (TAC  Cag  ggT ATC TAA TCC)  (Gambar  1) isolat  1  adalah  Pseudomonas  trivialis dengan  query  coverage  sebesar  95  %,  e- value  max  sebesar  0,099  %,  QV 16 sebesar 740, QV 20 sebesar 740, dan GC s e b e s a r   5 1 , 0   %   ( B L A S T n   I D J4PX2VSS013),  isolat  5  adalah  Pseudo- monas  putida  dengan  query  coverage sebesar  82  %,  e-value  max  sebesar  0,095 %, QV 16 sebesar 569, QV 20 sebesar 301, dan GC sebesar 55,0 %   (BLASTn ID J4R1ECDA012),  dan  isolat  9  adalah Pseudomonas  fluorescens  dengan  query coverage  sebesar  94  %,  e-value  max
sebesar 0,099 %, QV 16 sebesar 745, QV 20 sebesar 743, dan GC sebesar 52,0 % (BLASTn  ID  J4R7TRV6013)  (Ewing  et  al., 1998; Ewing dan Green, 1998),   dan jarak evolusi  Pseudomonas  trivialis  dengan
Pseudomonas putida adalah 1,388 µm, dan dengan  Pseudomonas  fluorescens  adalah 0,024  µm,  sedangkan  jarak  Pseudomonas putida  dengan  Pseudomonas  fluorescens adalah 1,409 µm (Tamura et al., 2011).
A (BF isolat 1)
Tamad, Karakter dan Potensi Inokulum Bakteri Fosfat dalam Melepaskan Fosfor   : 41 - 47 43
maka penggunaan media padat merupakan pilihannya.    Pemilihan  media  pembawa yang mudah dan murah, namun efektif dan efisien  dalam  mengembangkan  inokulum untuk  memroduksi  biofertilizer,  merupakan inovasi  yang  perlu  dikembangkan  untuk menunjang pertanian berkelanjutan.
Pemberian  pupuk  P  yang  banyak tidak menjamin ketersediaan P yang banyak bagi  tanaman,  karena  keefesienan  P  yang rendah, sekitar 10-20 % P.   Ketersediaan P yang  rendah  dalam  tanah  disebabkan karena P: 1) dijerap oleh koloid anorganik, 2) mengendap sebagai fosfat tidak larut pada kondisi  pH  asam,  dan  alkalin  dan  3) membentuk komplek dengan bahan organik (Hawkes  et  al.,  2007).  Keuntungan pemanfaatan  BF  adalah:  1)  ramah lingkungan,  karena  tidak  menimbulkan dampak  negatif,  2)  biaya  murah,  karena tidak memerlukan bahan baku dan teknologi yang  mahal,  dan  3)  berkelanjutan,  karena BF dalam tanah mampu memperbanyak diri d a n   b e r t a h a n   u n t u k   m u s i m - m u s i m selanjutnya.    Tujuan  penelitian  ini  adalah menentukan karakter dan potensi inokulum BF dalam melepaskan P-terjerap tanah.

## Materi dan metode

## A.Determinasi Bakteri Fosfat
Determinasi  spesies  BF  isolat  1,  5, dan  9  melalui  analisis  gen  16S  rRNA dilakukan  di  MACROGEN  Inc.  (908  World Meridian  Venture  Center,  #60-24,  Gasan- dong, Geumchun-gu, Seoul 153-781, Korea) terdiri  atas:  1)  preparasi  templet  DNA,  2) PCR, 3) purifikasi hasil PCR, 4) sequnecing, dan  5)    analisis  sequen  dengan  database dari  gene  bank  (Harris  dan  Hartley,  2003; Janda dan Abbott, 2007).
Analisis  hasil  gen  16S  rRNA  tiga isolat  BF  menggunakan  menu  BLASTn (Basic  Local  Aligment  Search  Tool) nucleotide program MEGA5 pada database gen  dari  NCBI  (National  Centre  for B i o t e c h n o l o g y   I n f o r m a t i o n )   u n t u k membandingkan antara sekuen gen contoh dengan  sekuen  gen  data  base  gen  bank spesies  bakteri  yang  diketahui  (Altschul  et al., 1990; Altschul et al., 1997; Pepper dan Gerba, 2004; Kumar et al., 2008).

## B. Kurva Tumbuh Bakteri Fosfat
Satu mL biakan (populasi diketahui) isolat BF terdeterminasi diinokulasikan pada 100  mL  Pikovskaya  cair,  selanjutnya
diinkubasikan pada suhu ruang selama dua belas  hari  dengan  penggojogan  100  rpm. Tiap 2x24 jam diambil 1 mL cuplikan untuk ditentukan  populasinya  dengan  metode SPC  (standard  plate  count).    Saat tercapainya  fase  logaritmik  merupakan waktu  untuk  penentuan  asam  organik  dan fase stationer merupakan waktu pemanenan isolat BF untuk dijadikan inokulum (Pepper dan Gerba, 2004).

## C. Pengembangan Inokulum Bakteri Fosfat
Isolat  BF  tunggal,  dan  konsorsium dua dan tiga isolat dipanen pada akhir fase logaritmik  dikembangkan  menjadi.  Media pembawa inokulum BF cair adalah 20% (v) molase  dan  5  gram/Liter  ekstrak  kedelai. Media  pembawa  inokulum  BF  padat  ialah campuran  (100  mesh)  steril    20  %  abu sekam,  20  %  dedak  padi,  20  %  onggok tapioka, 3,0 % asam asetat, 2,0 % CuSO4. 5H2O, 5 % zeolit, dan 30 % H2O (Tamad dan Maryanto,  2010).    Isolat  BF  diinokulasikan pada  media  pembawa  108  CFU/mL s e b a n y a k   1 0   m L / L  a t a u   k g ,   d a n diinkubasikan pada suhu ruang selama satu bulan.
Kestabilan  populasi  inokulum  BF umur  6  dan  12  bulan  ditentukan  dengan metode  SPC.  Sedangkan  kestabilan kemampuan  inokulum  BF  melarutkan  P ditentukan  dengan  menguji  kemampuan melarukan/memineralkan sumber P (batuan fosfat/RP,  Ca-P, Al-P,  Fe-P,  pNPP,  dan  Na- fitat) pada medium Pikovskaya cair.

## Hasil dan pembahasan

## A. Determinasi Bakteri Fosfat
Berdasarkan  hasil  BLASTn  data analisis gen 16S rRNA tiga isolat BF dengan primer amplifikasi 1492R (ggY TAC CTT gTT Acg  ACTT)  dan  primer  sequencing  800R (TAC  Cag  ggT ATC TAA TCC)  (Gambar  1) isolat  1  adalah  Pseudomonas  trivialis dengan  query  coverage  sebesar  95  %,  e- value  max  sebesar  0,099  %,  QV 16 sebesar 740, QV 20 sebesar 740, dan GC s e b e s a r   5 1 , 0   %   ( B L A S T n   I D J4PX2VSS013),  isolat  5  adalah  Pseudo- monas  putida  dengan  query  coverage sebesar  82  %,  e-value  max  sebesar  0,095 %, QV 16 sebesar 569, QV 20 sebesar 301, dan GC sebesar 55,0 %   (BLASTn ID J4R1ECDA012),  dan  isolat  9  adalah Pseudomonas  fluorescens  dengan  query coverage  sebesar  94  %,  e-value  max
42
sebesar 0,099 %, QV 16 sebesar 745, QV 20 sebesar 743, dan GC sebesar 52,0 % (BLASTn  ID  J4R7TRV6013)  (Ewing  et  al., 1998; Ewing dan Green, 1998),   dan jarak evolusi  Pseudomonas  trivialis  dengan
Pseudomonas putida adalah 1,388 µm, dan dengan  Pseudomonas  fluorescens  adalah 0,024  µm,  sedangkan  jarak  Pseudomonas putida  dengan  Pseudomonas  fluorescens adalah 1,409 µm (Tamura et al., 2011).
A (BF isolat 1)
C (BF isolat 5)
Gambar  1. Filogenetik tiga isolat BF (A = isolat 1, B = isolat 9 dan C = isolat 5) Figure  1. Filogenetic of three PB isolates (A =  isolate 1, B =  isolate 9 and C =Isolate 5)

## B. Kurva Tumbuh Bakteri Fosfat
Pola  pertumbuhan  Pseudomonas trivialis, P. putida   dan P. fluorescens pada media  Pikovskaya  selama  12  hari  inkubasi pada  suhu  ruang  mirip,  walaupun  dengan jumlah  populasi  ketiga  isolat  BF  yang berbeda  (Gambar  2),  yaitu:  1)  fase lag/adaptasi  sampai  hari  ke-2,  2)  fase log/eksponensial pada hari ke-2 sampai 5, 3)
fase stationer pada hari ke-5 sampai 8, dan 4)  fase  decline/kematian  mulai  hari  ke-8 sampai  12  (akhir  pengamatan).    Hari  ke-5 (akhir  fase  log  awal  fase  stationer) merupakan waktu terbaik untuk pemanenan kultur  BF  untuk  dijadikan  inokulum. Berdasarkan  kurva  tumbuh  pada  hari  ke-5 populasi Pseudomonas trivialis adalah 1010 CFU/mL, P. putida adalah 1014 CFU/mL dan P. fluorescens adalah 1017 CFU/mL.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 0
2 4 6 8 10 12 P o p u la si B F L o g C F U /m L
Hari Inkubasi Islt-1 Islt-5 Islt-9 Gambar 2.  Kurva tumbuh BF  (log CFU/mL) selama 12 HI pada media Pikovskaya p a d a suhu ruang (Tamad et al., 2011) Figure 2.  PB growth curve (log CFU/mL) during 12 days on Pikovskaya on room temperatue (Tamad et al., 2011)

## C. Inokulum Bakteri Fosfat
P e n y i m p a n a n   m e n u r u n k a n populasi BF, populasi BF penyimpanan 6 bulan  menurun  menjadi  95-97  %  (log CFU/mL = 8,55-8,74), dan penyimpanan 12 bulan menjadi 84-88 % (log CFU/mL =
7,53-7,68) (Gambar 3). Penyimpanan 6 bulan menurunkan populasi menjadi 93- 95 % (log CFU/mL = 8,35-8,54), dan 12 bulan  menjadi  81-84  %  (log  CFU/mL  = 7,30-7,53).    Inokulum  baik  apabila populasi minimal 106-1010 CFU/g atau mL (Bashan, 1998; Swaminathan, 2007).
Gambar 3. Kestabilan populasi inokulum BF pengaruh lama penyimpanan (inokulum: 1 = cair, 2 = padat; jumlah isolat: 1 = 1, 2 = 2, 3 = 3) Figure 3. Population stability of PB inoculant effect of storage time (inoculant 1 = liquid, 2 = solid; isolate number 1 = 1, 2 = 2, 3 = 3)
Tamad, Karakter dan Potensi Inokulum Bakteri Fosfat dalam Melepaskan Fosfor   : 41 - 47 45
C (BF isolat 5)
Gambar  1. Filogenetik tiga isolat BF (A = isolat 1, B = isolat 9 dan C = isolat 5) Figure  1. Filogenetic of three PB isolates (A =  isolate 1, B =  isolate 9 and C =Isolate 5)
44

## B. Kurva Tumbuh Bakteri Fosfat
Pola  pertumbuhan  Pseudomonas trivialis, P. putida   dan P. fluorescens pada media  Pikovskaya  selama  12  hari  inkubasi pada  suhu  ruang  mirip,  walaupun  dengan jumlah  populasi  ketiga  isolat  BF  yang berbeda  (Gambar  2),  yaitu:  1)  fase lag/adaptasi  sampai  hari  ke-2,  2)  fase log/eksponensial pada hari ke-2 sampai 5, 3)
fase stationer pada hari ke-5 sampai 8, dan 4)  fase  decline/kematian  mulai  hari  ke-8 sampai  12  (akhir  pengamatan).    Hari  ke-5 (akhir  fase  log  awal  fase  stationer) merupakan waktu terbaik untuk pemanenan kultur  BF  untuk  dijadikan  inokulum. Berdasarkan  kurva  tumbuh  pada  hari  ke-5 populasi Pseudomonas trivialis adalah 1010 CFU/mL, P. putida adalah 1014 CFU/mL dan P. fluorescens adalah 1017 CFU/mL.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 0 2 4 6 8 10
12
P o p u la si B F L o g C F U /m L Hari Inkubasi Islt-1
Islt-5 Islt-9 Gambar 2.  Kurva tumbuh BF  (log CFU/mL) selama 12 HI pada media Pikovskaya p a d a
suhu ruang (Tamad et al., 2011)
Figure 2.  PB growth curve (log CFU/mL) during 12 days on Pikovskaya on room temperatue (Tamad et al., 2011)

## C. Inokulum Bakteri Fosfat
P e n y i m p a n a n   m e n u r u n k a n populasi BF, populasi BF penyimpanan 6 bulan  menurun  menjadi  95-97  %  (log CFU/mL = 8,55-8,74), dan penyimpanan 12 bulan menjadi 84-88 % (log CFU/mL =
7,53-7,68) (Gambar 3). Penyimpanan 6 bulan menurunkan populasi menjadi 93- 95 % (log CFU/mL = 8,35-8,54), dan 12 bulan  menjadi  81-84  %  (log  CFU/mL  = 7,30-7,53).    Inokulum  baik  apabila populasi minimal 106-1010 CFU/g atau mL (Bashan, 1998; Swaminathan, 2007).
Gambar 3. Kestabilan populasi inokulum BF pengaruh lama penyimpanan (inokulum: 1 = cair, 2 = padat; jumlah isolat: 1 = 1, 2 = 2, 3 = 3)
Figure 3. Population stability of PB inoculant effect of storage time (inoculant 1 = liquid, 2 = solid; isolate number 1 = 1, 2 = 2, 3 = 3)
Daya  larut  P  inokulum  BF  menurun 65-85 % setelah penyimpanan 6 bulan, dan menurun 55-78 % setelah penyimpanan 12 bulan.      Penurunan  daya  melarutkan  P inokulum BF dari sumber P adalah CaP > RP >  FeP  >  AlP  (Gambar  4).    Daya  larut  P inokulum  BF  umur  6  bulan  antara  cair  dan padat tidak berbeda yaitu 80 %, sedangkan
umur 12 bulan inokulum BF cair lebih tinggi (71 %) dibanding padat (65 %). Jumlah isolat inokulum  BF  tidak  berpengaruh  terhadap daya melarutkan P, umur 6 bulan menurun menjadi  82-85  %,  dan  umur  12  bulan menurun  menjadi  72-75  %.  Inokulum  BF baik  apabila  mampu  melarutkan  P  minimal 30 % (Motsara dan Roy, 2008).
Gambar 4. Kestabilan daya larut P BF pengaruh lama penyimpanan (inokulum: 1 = cair, 2 = padat; jumlah isolat: 1 = 1, 2 = 2, 3 = 3; sumber P: 1 = RP, 2 = CaP, 3 = AlP, 4 = FeP) Figure  4.  P solubility stability of PB effect of storage time (inoculant: 1 = liquid, 2 = solid; isolate
number: 1 = 1, 2 = 2, 3 = 3; P source: 1 = RP, 2 = CaP, 3 = AlP, 4 = FeP)

## Simpulan
1.  B a k t e r i   f o s f a t   i s o l a t   1   i a l a h Pseudomonas  trivialis,  isolat  5  ialah  P. putida dan isolat 9 ialah P. fluorescens.
2.  Hari  ke-5  (akhir  fase  log/awal  fase stationer)  merupakan  waktu  terbaik untuk pemanenan  kultur  BF  untuk d i j a d i k a n   i n o k u l u m .     P o p u l a s i Pseudomonas  trivialis  hari  ke-5  adalah 1010  CFU/mL,  P.  putida  adalah  1014
CFU/mL dan P. fluorescens adalah 1017 CFU/mL.
3.  Penyimpanan  inokulum  BF  selama  6 bulan menurunkan populasi menjadi 93- 95  %,  dan  12  bulan  menjadi  81-84  %. Daya  larut  P  inokulum  BF  umur  enam bulan  menurun  menjadi  82-85  %,  dan umur dua belas bulan menurun menjadi 72-75 %.

## Daftar Pustaka
Altschul,  S.F.,  W.  Gish,  W.  Miller,  E.W. Myers, and D.J. Lipman. 1990. Basic Local Alignment Search
T o o l .
J. Mol. Biol. 215: 403-410.
Altschul, S.F., T.L. Madden, A.A. Schaffer, J. Zhang,  Z.  Zhang,  W.  Miller,  and  D.J. Lipman.  1997.  Gapped  BLAST  and PSI-BLAST  :  a  new  generation  of protein  database  search  programs.
Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402.
Arcand,  M.M.,  and  K.D.  Schneider.  2006.
Plant and Microbial Based to Improve the Agronomic Effectiveness
of  Phosphate  Rock  : A  Review.   An. Acad. Bras. Cienc. 78(4): 791-807.
Bashan  Y.,    1998.    Inoculants  of  Plant Growth-Promoting Bacterial for Use in A g r i c u l t u r e .     B i o t e c h n o l o g y Advances 16(4): 729-770.
Ewing,  B.,  L.D.  Hillier,  M.C.  Wendl,  and  P. Green.  1998.  Base-Calling  of Automated Sequencer Traces  U s i n g Phred.  I.  Accuracy  Assesment. Genome Research 8: 175-185.
Ewing,  B.,  and  P.  Green.  1998.    Base- Calling  of  Automated  Sequencer Traces  Using  Phred.  II.  Error Probabilities.  Genome  Research  8: 186-194.
H a r r i s ,   K . ,   a n d   J .   H a r t l e y.   2 0 0 3 . Development  of  broad-range  16S rRNA  PCR  foruse  in  the  routine diagnostic  clinical  microbiology service. J. Med.  Microbiology 52: 685- 691.
Hawkes,  C.V.,  K.M.  DeAngelis,  and  M.K. Firestone.    2007.    Root  Interactions
with  Soil  Microbial  Communities  and Processes. Pp.  1-30.  In: Cordon,
Z.G., and J.L.  Whitbeck.    (Eds.).    The R h i z o s p h e r e :   A n   E c o l o g i v a l Perpective. Academic Press,   N e w York. 210p.
Janda,  J.M.,    and  S.  L.  Abbott.    2007. 16S  rRNA  Gene  Sequencing  for Bacteriall  Identification  in  the
Diagnostic Laboratory : Pluses, Perils, and  Pitfalls.  J.  Clin.  Microbiol.  45(9): 2761-2764. Khan,  M.S.,  A.  Zaidi,  and  P.A.  Wani.
2007.  Role of Phosphate- Solubilizing Micro-organisms  in  Sustainable
Agriculture.  Agron.  Sustain.  Dev.  27:
29-43.
Kumar, S., M. Nei, J. Dudley, and K.  Tamura. 2008.  MEGA:  A  biologist-  centric software  for  evolutionary  analysis  of DNA and protein sequences. Briefing in Bioinformatics 9: 299- 306. Lal,  L.  2002.    Phosphatic  biofertilizer. Agrotech. Publ. Acad. Udaipur. 224p.
Mehrvarz, S., and M.R. Chaichi 2008. Effect o f   P h o s p h a t e   S o l u b i l i z i n g Microorganisms  and  Phosphorus Chemical  Fertilizer  on  Forage  and Grain  Quality  of  Barley  (Hordeum vulgare  L.).    American-Eurasian  J. Agric. & Environ. Sci. 3(6): 855-860.
Motsara,  M.R.,  and  R.N.  Roy.    2008. Guide to Laboratory Establishment for Plant Nutrient   Analysis.    FAO  and Plant Nutrition Bulletin 19. FAO of UN,
Rome.
Pepper,  I.L.,  and  C.P.  Gerba.    2004. Environmental  Microbiology.    A Laboratory  Manual,  2nd  ed.  Elsevier Academis Press, New York, 226p.
Subba  Rao,  N.S..  1982.  Biofertilizers  in
Agriculture.  Oxford  &  IBH  Publising Co., New Delhi, B o m b a y , Calcuta. 189p. ----------------------.  1994.    Advance  in Agriculture Microbiology. Oxford & IBH Publ.  Co.  New  Delhi,  Bombay, Calcuta. 164p.
Swaminathan, M.S..   2007. Ecoenterprises f o r   S u s t a i n a b l e   L i v e h o o d D e c e n t r a l i s e d   P r o d u c t i o n   o f B i o f e r t i l i z e r s - A z o s p i r i l l u m   a n d P h o s p h o b a c t e r i a l .     J R D   Ta t a Ecotechnology  Centre,  Taramani Institutional Area, Chennai.
Tamad,  dan  J.  Maryanto.    2010.    Media Pembawa Alternatif Inokulan Mikrobia Pelarut  Fosfat  Berbasis  Limbah Pertanian.  Agrin 14(2):167-176.
Tamad, Radjagukguk, B., Hanudin, E. and J. Widada. 2011. Seleksi  Isolat  Bakteri P e l a r u t   F o s f a t   ( B P F )   u n t u k Mengembangkan  Inokulum  Efektif. BIOSFERA 28(2): 94-103.
Tamura  K.,  D.  Peterson,  N.  Peterson,  G. Stecher, M. Nei, and S. Kumar. 2011. MEGA5:  Molecular  Evolutionary Genetics  Analysis  using  Maximum Likelihood, E v o l u t i o n a r y Distance,  and  Maximum  Parsimony Methods.  Molecular  Biology  and Evolution (In Press).
Tamad, Karakter dan Potensi Inokulum Bakteri Fosfat dalam Melepaskan Fosfor   : 41 - 47 47
Daya  larut  P  inokulum  BF  menurun 65-85 % setelah penyimpanan 6 bulan, dan menurun 55-78 % setelah penyimpanan 12 bulan.      Penurunan  daya  melarutkan  P inokulum BF dari sumber P adalah CaP > RP >  FeP  >  AlP  (Gambar  4).    Daya  larut  P inokulum  BF  umur  6  bulan  antara  cair  dan padat tidak berbeda yaitu 80 %, sedangkan
umur 12 bulan inokulum BF cair lebih tinggi (71 %) dibanding padat (65 %). Jumlah isolat inokulum  BF  tidak  berpengaruh  terhadap daya melarutkan P, umur 6 bulan menurun menjadi  82-85  %,  dan  umur  12  bulan menurun  menjadi  72-75  %.  Inokulum  BF baik  apabila  mampu  melarutkan  P  minimal 30 % (Motsara dan Roy, 2008).
Gambar 4. Kestabilan daya larut P BF pengaruh lama penyimpanan (inokulum: 1 = cair, 2 = padat; jumlah isolat: 1 = 1, 2 = 2, 3 = 3; sumber P: 1 = RP, 2 = CaP, 3 = AlP, 4 = FeP)
Figure  4.  P solubility stability of PB effect of storage time (inoculant: 1 = liquid, 2 = solid; isolate
number: 1 = 1, 2 = 2, 3 = 3; P source: 1 = RP, 2 = CaP, 3 = AlP, 4 = FeP)

## Simpulan
1.  B a k t e r i   f o s f a t   i s o l a t   1   i a l a h
Pseudomonas  trivialis,  isolat  5  ialah  P.
putida dan isolat 9 ialah P. fluorescens.
2.  Hari  ke-5  (akhir  fase  log/awal  fase stationer)  merupakan  waktu  terbaik untuk pemanenan  kultur  BF  untuk
d i j a d i k a n   i n o k u l u m .     P o p u l a s i Pseudomonas  trivialis  hari  ke-5  adalah
1010  CFU/mL,  P.  putida  adalah  1014
CFU/mL dan P. fluorescens adalah 1017
CFU/mL.
3.  Penyimpanan  inokulum  BF  selama  6 bulan menurunkan populasi menjadi 93-
95  %,  dan  12  bulan  menjadi  81-84  %.
Daya  larut  P  inokulum  BF  umur  enam bulan  menurun  menjadi  82-85  %,  dan umur dua belas bulan menurun menjadi 72-75 %.

## Daftar Pustaka
Altschul,  S.F.,  W.  Gish,  W.  Miller,  E.W.
Myers, and D.J. Lipman. 1990. Basic Local Alignment Search
T o o l .
J. Mol. Biol. 215: 403-410.
Altschul, S.F., T.L. Madden, A.A. Schaffer, J.
Zhang,  Z.  Zhang,  W.  Miller,  and  D.J.
Lipman.  1997.  Gapped  BLAST  and PSI-BLAST  :  a  new  generation  of protein  database  search  programs.
Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402. Arcand,  M.M.,  and  K.D.  Schneider.  2006. Plant and Microbial Based to Improve the Agronomic
Effectiveness
of  Phosphate  Rock  : A  Review.   An. Acad. Bras. Cienc. 78(4): 791-807.
Bashan  Y.,    1998.    Inoculants  of  Plant
Growth-Promoting Bacterial for Use in
A g r i c u l t u r e .     B i o t e c h n o l o g y Advances 16(4): 729-770.
Ewing,  B.,  L.D.  Hillier,  M.C.  Wendl,  and  P. Green.  1998.  Base-Calling  of Automated Sequencer Traces  U s i n g Phred.  I.  Accuracy  Assesment. Genome Research 8: 175-185.
Ewing,  B.,  and  P.  Green.  1998.    Base- Calling  of  Automated  Sequencer Traces  Using  Phred.  II.  Error
Probabilities.  Genome  Research  8:
186-194.
H a r r i s ,   K . ,   a n d   J .   H a r t l e y.   2 0 0 3 . Development  of  broad-range  16S rRNA  PCR  foruse  in  the  routine diagnostic  clinical  microbiology service. J. Med.  Microbiology 52: 685- 691.
Hawkes,  C.V.,  K.M.  DeAngelis,  and  M.K. Firestone.    2007.    Root  Interactions
with  Soil  Microbial  Communities  and Processes. Pp.  1-30.  In: Cordon,
Z.G., and J.L.  Whitbeck.    (Eds.).    The R h i z o s p h e r e :   A n   E c o l o g i v a l
Perpective. Academic Press,   N e w York. 210p.
Janda,  J.M.,    and  S.  L.  Abbott.    2007. 16S  rRNA  Gene  Sequencing  for Bacteriall  Identification  in  the Diagnostic Laboratory : Pluses, Perils, and  Pitfalls.  J.  Clin.  Microbiol.  45(9): 2761-2764.
Khan,  M.S.,  A.  Zaidi,  and  P.A.  Wani. 2007.  Role of Phosphate- Solubilizing Micro-organisms  in  Sustainable Agriculture.  Agron.  Sustain.  Dev.  27: 29-43.
Kumar, S., M. Nei, J. Dudley, and K.  Tamura. 2008.  MEGA:  A  biologist-  centric software  for  evolutionary  analysis  of DNA and protein sequences. Briefing in Bioinformatics 9: 299- 306.
Lal,  L.  2002.    Phosphatic  biofertilizer. Agrotech. Publ. Acad. Udaipur. 224p.
Mehrvarz, S., and M.R. Chaichi 2008. Effect o f   P h o s p h a t e   S o l u b i l i z i n g Microorganisms  and  Phosphorus Chemical  Fertilizer  on  Forage  and Grain  Quality  of  Barley  (Hordeum vulgare  L.).    American-Eurasian  J. Agric. & Environ. Sci. 3(6): 855-860.
Motsara,  M.R.,  and  R.N.  Roy.    2008. Guide to Laboratory Establishment for Plant Nutrient   Analysis.    FAO  and Plant Nutrition Bulletin 19. FAO of UN, Rome.
Pepper,  I.L.,  and  C.P.  Gerba.    2004.
Environmental  Microbiology.    A Laboratory  Manual,  2nd  ed.  Elsevier Academis Press, New York, 226p.
Subba  Rao,  N.S..  1982.  Biofertilizers  in
Agriculture.  Oxford  &  IBH  Publising Co., New Delhi, B o m b a y , Calcuta. 189p.
----------------------.  1994.    Advance  in Agriculture Microbiology. Oxford & IBH Publ.  Co.  New  Delhi,  Bombay, Calcuta. 164p.
Swaminathan, M.S..   2007. Ecoenterprises f o r   S u s t a i n a b l e   L i v e h o o d D e c e n t r a l i s e d   P r o d u c t i o n   o f B i o f e r t i l i z e r s - A z o s p i r i l l u m   a n d P h o s p h o b a c t e r i a l .     J R D   Ta t a Ecotechnology  Centre,  Taramani Institutional Area, Chennai.
Tamad,  dan  J.  Maryanto.    2010.    Media Pembawa Alternatif Inokulan Mikrobia Pelarut  Fosfat  Berbasis  Limbah Pertanian.  Agrin 14(2):167-176.
Tamad, Radjagukguk, B., Hanudin, E. and J.
Widada. 2011. Seleksi  Isolat  Bakteri P e l a r u t   F o s f a t   ( B P F )   u n t u k Mengembangkan  Inokulum  Efektif. BIOSFERA 28(2): 94-103.
Tamura  K.,  D.  Peterson,  N.  Peterson,  G. Stecher, M. Nei, and S. Kumar. 2011. MEGA5:  Molecular  Evolutionary Genetics  Analysis  using  Maximum Likelihood, E v o l u t i o n a r y Distance,  and  Maximum  Parsimony Methods.  Molecular  Biology  and Evolution (In Press).