Menara Perkebunan , 2007, 75 (1), 32-42.
Pertumbuhan dan perkembangan kalus embriogenik dan embrio somatik kelapa sawit ( Elaeis guineensis Jacq.) pada sistem perendaman sesaat
Growth and differentiation of embryogenic callus and somatic embryos of oil palm (Elaeis guineensis Jacq .) in a temporary immersion system
SUMARYONO 1) , Imron RIYADI 1) , Pauline D. KASI 1) & Gale GINTING 2)
1) Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia, Bogor 16151, Indonesia
2) Pusat Penelitian Kelapa Sawit, Medan 20158, Indonesia

## Summary
In  temporary  immersion  system  (TIS), plant  materials  are exposed to the medium for a  short  time,  therefore  they  are  more  exposed to  the  air  and  a  lack  of  oxygen  frequently experienced by a liquid culture can be avoided. This  experiment  was  conducted  to  determine the  procedure  for  callus  proliferation  up  to somatic  embryo  germination  of  oil  palm ( Elaeis  guineensis Jacq.)  in  TIS  culture. Embryogenic  calli  of  oil  palm  clone  MK  638 from Marihat Research Institute were cultured on solid medium in the dark culture room and then used as materials for TIS.  Immersion time for  all  cultures  was  three  minutes  every  six hours.    Callus  proliferation  was  conducted  in DF  liquid  culture  with  5  mg/L  2,4-D  and 0.1  mg/L  kinetin  with  transfer  interval  of  4,  6 and  8  weeks.    The  treatments  for  somatic embryo  maturation  were  kinetin  and  ABA, whereas  for  somatic  embryo  germination  was IBA,  kinetin  and  GA 3 .    The  results  show  that the  best  transfer  interval  for  callus  proli- feration was  four weeks.  In  this treatment  the relative growth rate of callus was 0.38 g/g/week.  Somatic embryo initiation from the  callus  was  done  in  DF  medium supplemented with 1 mg/L 2,4-D and 0.1 mg/L kinetin.    The  percentage  of  somatic  embryo was  80%  based  on  biomass  fresh  weight  after the fourth subculture.  The addition of 0.5 mg/L kinetin  and  0.05  mg/L  ABA  improved  somatic embryo  maturation  of  oil  palm;  the  average
number of somatic embryos at advanced stages (torpedo  and  cotyledonary)  was  16.3  embryos per  flask.    The  addition  of  2  mg/L  IBA  and 0.5  mg/L  kinetin  in  DF  medium  with  half- strength  macro-salt  enhanced  significantly  the germi-nation  of  somatic  embryos.    GA 3 at 0.1  mg/L  increased  the  total  number  of germinants.
[ Key words : In vitro culture, oil palm,   somatic embryogenesis, temporary immer- sion-system]

## Ringkasan
Pada  sistem  perendaman  sesaat  (SPS), bahan  tanam  hanya  terpapar  sebentar  dalam medium  sehingga  paparan  dengan  udara  lebih lama  dan  kekurangan  oksigen  yang  sering terjadi pada kultur cair dapat diatasi.  Penelitian ini  bertujuan  menetapkan  prosedur  untuk perbanyakan kalus embriogenik sampai dengan perkecambahan  embrio  somatik  kelapa  sawit ( Elaeis  guineensis Jacq.)  dalam  kultur  SPS. Kalus  embriogenik  kelapa  sawit  klon  MK  638 yang  diperoleh  dari  Balai  Penelitian  Marihat diperbanyak pada medium padat di ruang gelap yang kemudian digunakan sebagai bahan untuk kultur  cair  SPS.    Lama  perendaman  semua kultur  di  SPS  diatur  tiga  menit  dengan frekuensi setiap enam jam.  Perbanyakan kalus dalam  medium  cair  DF  dengan  2,4-D  5  mg/L dan  kinetin  0,1  mg/L  dilaksanakan  dengan interval  subkultur  4,  6  dan  8  minggu.

## Sumaryono et al.
Perlakuan  pematangan  embrio  somatik  adalah kinetin  dan  ABA  sedangkan  perlakuan  untuk perkecambahan  embrio  somatik  adalah  IBA, kinetin  dan  GA 3 .    Hasil  penelitian  menunjuk- kan bahwa untuk proliferasi kalus embriogenik kelapa  sawit,  interval  subkultur  terbaik  adalah empat minggu.  Pada perlakuan ini laju tumbuh relatif  kalus  mencapai  0,38  g/g/minggu. Inisiasi  embrio  somatik  dari  kalus  dilakukan pada medium DF ditambah  2,4-D 1 mg/L dan kinetin  0,1  mg/L.    Persentase  embrio  somatik mencapai 80% dari total bobot basah biomassa setelah subkultur keempat. Penambahan kinetin 0,5  mg/L  dan  ABA  0,05  mg/L meningkatkan pematangan embrio somatik kelapa sawit; rata- rata jumlah embrio somatik fase lanjut (torpedo dan  kotiledon)  adalah  16,3  embrio  per  bejana. Penambahan IBA 2 mg/L dan kinetin 0,5 mg/L pada  medium  DF  dengan  setengah  garam makro  meningkatkan  perkecambahan  embrio somatik  secara  nyata.    GA 3 0,1  mg/L  mening- katkan jumlah kecambah yang terbentuk.

## Pendahuluan
Kultur in vitro melalui embriogenesis somatik  pada  medium  padat  merupakan teknik  yang  paling  umum  digunakan  saat ini untuk perbanyakan klonal kelapa sawit ( Elaeis  guineensis Jacq.).    Penggunaan medium  padat  dianggap  tidak  efisien dalam  hal  tingkat  produksi  planlet  dan dalam  penggunaan  tenaga  kerja  serta ruang  (Soh et al ., 2006).   Di  samping  itu, kemungkinan  untuk  otomatisasi  dari kultur padat lebih terbatas sehingga meng- hambat peningkatan skala produksi secara massal.
Kelemahan  medium  padat  tersebut dapat  diatasi  dengan  penggunaan  medium cair.  Medium  cair  sangat  ideal  dalam mikropropagasi  untuk  menurunkan  biaya produksi  dan  untuk  otomatisasi  (Aitken- Christie,  1991).  Sistem  kultur  cair menyediakan  kondisi  kultur  yang  lebih seragam,  penggantian  medium  lebih
mudah  dan  dapat  digunakan  wadah  yang lebih  besar  daripada  kultur  padat.  Peng- gunaan medium cair mulai banyak dikem- bangkan untuk kultur in vitro kelapa sawit dengan  tujuan  meningkatkan  laju  pertum- buhan dan keseragaman kalus serta embrio somatik  (de  Touchet et  al .,  1991;  Duval et  al .,  1993;  Sumaryono et  al .,  1994; Teixeira et  al .,  1995;  Ginting  & Fatmawati, 1997; Tahardi, 1998). Namun, kultur in vitro dalam medium cair  juga  memiliki  kelemahan  antara  lain adanya  masalah  teknis  seperti  vitrifikasi, kerusakan  sel-sel  oleh  putaran  baling- baling  dan  kekurangan  oksigen.    Untuk menghindari  masalah  tersebut  telah  di- kembangkan  berbagai  prosedur  seperti penggunaan blok/sponge penyangga, sistem  rakit  untuk  mendukung  eksplan, penambahan medium cair pada kultur agar dan penggunaan bioreaktor kabut.  Sistem perendaman  sesaat  (SPS)  dikembangkan untuk  mikropropagasi  tanaman  berdasar- kan  prinsip  serupa  dengan  bioreaktor kabut  yakni  kontak  antara  eksplan  dan medium hanya secara periodik, tidak terus menerus. Lama dan frekuensi perendaman dapat  diatur  secara  otomatis  dengan pengatur  waktu.    Pada  sistem  ini  eksplan tidak  kekurangan  oksigen,  terjadi  pen- campuran  ( mixing )  yang  cukup  merata, dan  biaya  relatif  lebih  rendah  (Teisson et al ., 1999). Sistem perendaman sesaat (SPS) telah diaplikasikan  untuk  perbanyakan in  vitro secara massal pada berbagai jenis tanaman (Etienne  &  Berthouly,  2002).  Hasil  pene- litian  pada  kelapa  sawit  (Tahardi,  1998) menunjukkan  bahwa  frekuensi  produksi embrio somatik dari kalus nodular di SPS lebih  tinggi  daripada  di  medium  padat,  di samping  itu  keseragaman  perkembangan embrio juga lebih baik sehingga diperoleh embrio  somatik  yang  lebih  seragam. Namun,  bahan  yang    digunakan  adalah
Pertumbuhan dan perkembangan kalus embriogenik dan embrio somatik...
kalus  nodular  yang  dipilih  seragam  dan disubkultur  berulang  kali  sampai  mem- bentuk  kecambah.  Dalam  penelitian  ini digunakan  kumpulan  ( clump )  kalus  dan embrio somatik beragam seperti dilakukan dalam  kegiatan  produksi  rutin  sehari-hari. Penelitian ini bertujuan menetapkan prosedur  kultur  cair  untuk  perbanyakan kalus  embriogenik  sampai  dengan  perke- cambahan  embrio  somatik  kelapa  sawit pada sistem perendaman sesaat

## Bahan dan Metode

## Bahan kalus dan kondisi kultur
Kalus yang diinduksi dari daun pupus kelapa  sawit  klon  MK  638  berasal  dari Balai  Penelitian  Marihat,  Pusat  Penelitian Kelapa  Sawit,  Medan.  Kalus  tersebut kemudian dikulturkan dalam tabung kultur yang  berisi  medium  MS  (Murashige  & Skoog,  1962)  padat  dengan  penambahan zat pengatur tumbuh 2,4-D 1mg/L; kinetin 0,1 mg/L; air kelapa 10%; sukrosa 30 g/L; arang  aktif  2  g/L,  kasein  hidrolisat 100 mg/L; dan gelrite 2 g/L.  pH medium disesuaikan  pada  skala  5,2  sebelum  di- autoklaf pada suhu 121 0 C dengan tekanan 1  atm  selama  20  menit.    Kultur  disimpan di  ruang  gelap  pada  suhu  25 0 C.  Kalus disubkultur  pada  medium  yang  sama sebanyak  dua  kali  sehingga  diperoleh kalus  yang  bersifat  embriogenik.    Kalus embriogenik digunakan untuk kultur SPS.
Untuk  proliferasi  kalus  embriogenik, kultur  ditempatkan  dalam  ruang  dengan intensitas  cahaya  rendah  sekitar  10  µmol foton/m 2 /s  dan  periode  pencahayaan selama  12  jam.  Untuk  inisiasi,  pematang- an,  dan  perkecambahan  embrio  somatik, kultur  ditempatkan  dalam  ruang  dengan intensitas  cahaya  30  µmol  foton/m 2 /s  dan periode pencahayaan selama 12 jam. Suhu ruang diatur sekitar 25 0 C.
Pada  kultur  SPS,  bejana  terdiri  dari dua  wadah  yang  terpisah.  Propagula ditempatkan  dalam  wadah  atas  sedangkan medium  berada  dalam  wadah  bawah (Gambar 1A).  Pada penelitian ini volume medium  cair  yang  digunakan  adalah  75- 100 mL per bejana.  Untuk mencegah kon- taminasi ditambahkan rifampicin  15 mg/L dan  tetracycline  15  mg/L  ke  dalam medium.  Medium cair naik ke wadah atas menggenangi kultur tanaman dengan lama dan  interval  perendaman  tertentu  yang diatur  oleh  alat Autonic  double  timer (Gambar 1B).  Perendaman kalus embrio- genik  atau  embrio  somatik  diatur  selama tiga  menit  dengan  interval  waktu  enam jam,  sehingga  dalam  sehari  (24  jam) terjadi empat kali perendaman.

## Proliferasi kalus embriogenik
Sebanyak  0,5  g  kalus  embriogenik ditempatkan  dalam  setiap  bejana  SPS. Medium yang digunakan untuk proliferasi kalus embriogenik adalah medium DF (de Fossard et.  al .,  1974)  cair  dengan  penam- bahan zat pengatur tumbuh 2,4-D 5 mg/L, kinetin 0,1 mg/L,  dan sukrosa 30 g/L.  pH medium  disesuaikan  pada  skala  5,7 sebelum  diautoklaf  pada  suhu  121 0 C dengan  tekanan  1  atm  selama  20  menit. Perlakuan  yang  digunakan  adalah  interval subkultur  (lama  periode  kultur)  yaitu  4,  6 dan  8  minggu.    Penelitian  dilaksanakan sampai dengan 24 minggu sehingga ketiga perlakuan    berakhir  pada  saat  yang  sama. Setiap  perlakuan  diulang  sebanyak  tiga kali.  Pertumbuhan  kalus  embriogenik diamati  dengan  menimbang  bobot  basah kalus  embriogenik  setiap  kali  dilakukan subkultur.  Dari  bobot  basah  tersebut dibuat  kurva  pertumbuhan  kalus  embrio- genik pada tiga interval subkultur tersebut.
Sumaryono et al. .
Gambar 1. Kultur in vitro kelapa  sawit  pada  sistem  perendaman sesaat (A) Bejana  terdiri  dari wadah atas tempat bahan kultur dan wadah bawah tempat medium, (B) Bejana dihubungkan dengan Autonic double timer.
Figure  1. In  vitro culture  of  oil  palm  in  temporary  immersion  system  (A) Flask  consisted  of  upper containment for culture the materials and lower containment for the media, (B) Flasks are connected with an Autonic double timer.

## Inisiasi embrio somatik
Sebagian  kalus  embriogenik  yang telah  diperbanyak  dalam  tahap  proliferasi dalam medium cair SPS diinisiasi menjadi embrio  somatik.    Sebanyak  0,5  g  kalus embriogenik  dimasukkan  ke  dalam  setiap bejana.    Medium  yang  digunakan  adalah medium  cair  DF  dengan  penambahan  zat pengatur  tumbuh  2,4-D  1  mg/L,  kinetin 0,1  mg/L  dan  sukrosa  30  g/L.    Pemben- tukan  embrio  somatik  diamati  selama  24 minggu.  Setiap  enam  minggu  kalus embriogenik  disubkultur  pada  medium yang sama. Setiap kali disubkultur, embrio somatik  yang  terbentuk  dipisahkan  dari kalus  embriogenik  dan  bobot  basahnya ditimbang dari setiap bejana.

## Pematangan  dan  perkecambahan  embrio somatik
Embrio  somatik  yang  digunakan sebagian  besar  masih  dalam  fase  perkem-
bangan  awal  (globuler  dan  bentuk-hati). Sebanyak  4  g  embrio  somatik  pada  fase tersebut dikulturkan dalam bejana. Medium  dasar  yang digunakan  adalah  DF cair dengan penambahan 2,4-D 0,01 mg/L dan  sukrosa  30  g/L.  Perlakuan  yang  di- gunakan untuk pematangan embrio somatik  adalah  peningkatan  konsentrasi kinetin  (0,1  mg/L  dan  0,5  mg/L),  serta kombinasi  kinetin  0,5  mg/L  dengan  ABA 0,05  mg/L.    Masing-masing perlakuan  di- ulang empat kali.  Jumlah embrio somatik fase lanjut (torpedo dan kotiledon) diamati enam minggu kemudian.  Pada perkecam- bahan  embrio somatik digunakan medium dasar  DF  cair  (setengah  garam  makro) dengan  penambahan  sukrosa  20  g/L  dan PVP 20 mg/L. Perlakuan untuk perkecam- bahan adalah IBA 3 mg/L, IBA 2 mg/L + kinetin  0,5  mg/L,  dan  IBA  2  mg/L  + kinetin  0,1  mg/L  +  GA 3 0,1  mg/L. Masing-masing  perlakuan  diulang  empat kali.  Jumlah  kecambah  diamati  enam minggu kemudian.
B A
Pertumbuhan dan perkembangan kalus embriogenik dan embrio somatik...

## Analisis data
Data  hasil  pengamatan  dianalisis dengan sidik ragam ( analysis of variance ). Apabila  ada  perbedaan  yang  nyata  maka perbedaan  antar  perlakuan  ditentukan menurut  uji  jarak  berganda  Duncan  pada P = 0,05 (Duncan, 1955).

## Hasil dan Pembahasan

## Proliferasi kalus embriogenik
Kalus  embriogenik  pada  medium padat  yang  digunakan  berstruktur  noduler dan berwarna  putih   kecoklatan  (Gambar 2A).    Kultur  di  SPS  menyebabkan  kalus menjadi  lebih  lunak  dan  berwarna kekuningan  (Gambar  2B).  Setelah  empat minggu  dalam  kultur  SPS,  bobot  basah kalus  meningkat  lebih  dari  dua  kali  lipat (Gambar 3).  Bobot basah biomassa kalus bertambah  terus  sampai  enam  minggu, selanjutnya menurun pada delapan minggu.    Hal  ini  menunjukkan  bahwa setelah  enam  minggu  terjadi  penurunan laju  tumbuh  kalus  mendekati  tanpa pertumbuhan  ( levelling-off ).  Penggantian medium  dengan  medium  baru  terlihat memacu kembali kalus untuk tumbuh.
Setelah  16-18  minggu,  bobot  biomassa meningkat  dengan  tajam,  terutama  pada perlakuan interval empat minggu (Gambar 3).
Bobot  basah  biomassa  kalus  terus meningkat  pada  kultur  berulang  sampai dengan  umur  24  minggu  (Gambar  3). Interval transfer berpengaruh nyata terhadap  proliferasi  kalus  embriogenik. Bobot  kalus  paling  tinggi  diperoleh  pada interval  transfer  empat  minggu  (5,02  g), disusul  interval  transfer  enam  minggu (3,70  g)  dan  delapan  minggu  (3,02  g) (Tabel  1).  Laju  tumbuh  relatif  masing- masing  perlakuan  selama  24  minggu memperlihatkan  bahwa  pada  interval transfer  empat  minggu  penambahan  rata- rata  biomassa  mencapai  0,38  g  per  gram biomassa  awal  per  minggu.  Ini  me- nunjukkan peningkatan lebih dari sepertiga  biomassa  setiap  minggunya. Laju  tumbuh  relatif  pada  interval  transfer 6 dan 8 minggu berturut-turut adalah 0,27 dan 0,21 g/g/minggu (Tabel 1). Peningkatan bobot biomassa  kalus terbaik sekitar  2,2  kali  dalam  waktu  empat minggu  pertama.    Laju  tumbuh  kalus kelapa  sawit  ini  lebih  rendah  dari  yang diperoleh de Touchet et al. (1991) sebesar empat  kali  dan  Soh et  al .  (2006)  sebesar
Gambar 2. Kalus  kelapa sawit  (A)  pada medium padat, (B) setelah ditransfer ke medium cair pada sistem perendaman sesaat.
Figure 2.  Callus of oil palm (A) on a solid media, (B) after being transferred into a liquid medium of temporary immersion system.
B A
Sumaryono et al.
Tabel 1.  Pengaruh interval transfer terhadap laju tumbuh relatif dan bobot basah biomassa kalus embriogenik setelah 24 minggu pada media cair SPS.
Table 1.  Effect of  transfer  interval on  relative growth rate and  biomass fresh weight of  embryogenic callus at 24 th week  on a liquid media of TIS.
Interval transfer (minggu) Transfer interval (week) Laju tumbuh relatif (g/g/minggu) Relative growth rate (g/g/week) Bobot basah kalus (g) Callus fresh weight (g) 4 0,38  a* 5,02  a 6 0,27  ab 3,70   b 8 0,21  b 3,02   b
* Angka rata-rata pada kolom yang sama yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada P=0,05.
* Means in the same column followed by the same letters are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at P=0.05.
enam  kali  dalam  medium  cair,  walaupun laju  ini  tergantung  pada  bobot  kalus  awal yang  digunakan.    Oleh  karena  itu  perlu penelitian  lebih  lanjut  menyangkut  kom- posisi  medium  serta  lama  dan  frekuensi perendaman  untuk  meningkatkan  laju pertumbuhan  kalus  kelapa  sawit  dengan SPS. Laju  pertumbuhan  yang  lebih  baik pada  perlakuan  interval  subkultur  empat minggu  menunjukkan  bahwa  ketersediaan nutrisi  bagi  pertumbuhan  kalus  masih memadai  sampai  dengan  empat  minggu. Pada perlakuan interval enam dan delapan minggu,  tingkat  ketersedian  nutrisi  sudah mulai terbatas yang berakibat laju pertum- buhan  mulai  menurun.    Namun  perlu  di- perhatikan  bahwa  interval  subkultur  kalus setiap  empat  minggu  mempunyai  kecen- derungan meningkatkan abnormalitas pembungaan  kelapa  sawit  dibandingkan dengan interval delapan minggu (Eeuwens et  al .,  2002).    SPS  memang  tidak  banyak digunakan  untuk  proliferasi  kalus,  tetapi
lebih sering ditujukan untuk meningkatkan pematangan  dan  kualitas  embrio  somatik (Duval et  al. ,  1993;  Tahardi,  1998),  setek mikro (Berthouly et al ., 1995), serta umbi mikro (Teisson & Alvard, 1999).

## Inisiasi embrio somatik
Pada  tahap  inisiasi  embrio  somatik, selama  24  minggu  (empat  periode  kultur) pada  SPS  terjadi  peningkatan  persentase embrio somatik  dan penurunan persentase kalus  secara  bertahap.    Hal  ini  memper- lihatkan berlangsungnya diferensiasi kalus menjadi  embrio  somatik.  Persentase  em- brio  somatik  mencapai  80%  pada  periode kultur  keempat  (Gambar  4).  Embrio somatik  berukuran  lebih  besar  dibanding ukuran kalus dengan bentuk globuler yang tersusun  dalam  agregat.    Sebagian  besar embrio  somatik  berwarna  kuning-kehi- jauan  yang  permukaannya  tampak  halus dan lebih kompak (Gambar 5A).
Pertumbuhan dan perkembangan kalus embriogenik dan embrio somatik...
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 Periode kultur (minggu) B o b o t b as ah k al u s (g ) .. . 4 minggu (week) 6 minggu (week) 8 minggu (week) C a ll u s fr es h w ei g h t (g )

## Culture period (week)
Gambar 3.  Laju pertumbuhan kalus embriogenik kelapa sawit dalam SPS pada tiga interval subkultur yang berbeda.
Figure 3.  Growth rate of embryogenic callus of oil palm in TIS on three different transfer intervals.
Pematangan  dan  perkecambahan  embrio somatik
Embrio  somatik  yang  sebagian besar  dalam  fase  globuler  (Gambar  5A) dikulturkan pada medium pematangan DF dengan  2,4-D  0,01  mg/L  dan  berbagai konsentrasi  kinetin.  Hasil  pengamatan jumlah  embrio  somatik  fase  lanjut (torpedo  dan  kotiledon)  setelah  enam minggu  menunjukkan  bahwa  kinetin 0,1 mg/L tidak berbeda dengan 0,5 m g/L terhadap  perkembangan  embrio  somatik kelapa  sawit,  sedangkan  penambahan ABA  0,05  mg/L  meningkatkan  secara nyata  jumlah  embrio  dewasa  (Tabel  2). Jumlah  embrio  somatik  fase  lanjut  yang dihasilkan  berkisar  10-16  per  bejana. Hasil  ini  serupa  dengan  yang  diperoleh Tahardi  (1998)  bahwa  ABA  0,05  mg/L meningkatkan pembentukan embrio dewasa.   ABA diketahui dapat membantu perkecambahan  yang  normal  dengan
mempengaruhi  akumulasi  cadangan  pro- tein dan asam lemak simpanan (Bonetta & McCourt,  1998)  serta  pati  (Fujii et  al ., 1992).  Pada  pematangan  embrio  somatik teh,  ABA  5  mg/L  yang  diberikan  pada fase hati meningkatkan beberapa kali lipat kandungan  pati,  protein  dan  total  gula terlarut  sehingga  mampu  memperbaiki daya  kecambah  embrio  somatik  (Sharma et  al .,  2004).    Sharma et  al .  (2004) menyimpulkan  bahwa  kekurangan  bahan simpanan saat pematangan embrio somatik  merupakan  penyebab  utama  daya kecambah yang rendah dan abnormal.
Perkecambahan  embrio  somatik  fase dewasa  (torpedo  dan  kotiledon)  menjadi kecambah  (Gambar  5B)  dilakukan  pada medium  DF  setengah  makro  dan  sukrosa 20  g/L.  Zat  pengatur  tumbuh  yang  ditam- bahkan  adalah  IBA,  kinetin  dan  GA 3 . Peningkatan  jumlah  kecambah  yang terbentuk  terdapat  pada  kultur  dengan penambahan  IBA  2  mg/L  dan  kinetin
Sumaryono et al.
Gambar 4.   Perkembangan  komposisi kalus dan embrio somatik berdasarkan bobot basahnya dalam medium inisiasi embrio somatik pada SPS selama empat siklus dari kultur enam minggu.
Figure 4.     Development of callus and somatic embryo composition based on their fresh weights in somatic embryo initiation medium on TIS for four cycles of six week-culture.
Gambar 5.  Embrio  somatik kelapa  sawit  pada  sistem  perendaman sesaat (A) pada fase perkembangan dini, dan (B) fase kecambah.
Figure 5.   Somatic  embryos  of  oil palm  in temporary  immersion  system (A) at  early   developmental stages, and (B) germinant stage.
0 20 40 60 80 100 0 6 12 18 24 Periode kultur (minggu) Kalus Callus Embrio somatik Somatic embryo Culture period (week) K a lu s a ta u e m b ri o s o m at ik ( % ) C a ll u s o r so m a ti c e m b ry o ( % ) A B
Pertumbuhan dan perkembangan kalus embriogenik dan embrio somatik...
Tabel 2.  Jumlah embrio somatik fase lanjut per bejana setelah enam minggu dalam SPS pada perlakuan pematangan.
Table 2.  Number of somatic embryos at advanced stages per flask after six-weeks in TIS at maturation treatments.
Perlakuan Treatment Jumlah embrio somatik dewasa Number of mature somatic embryos Kinetin 0,1 mg/L 10,3    b* Kinetin 0,5 mg/L 10,5    b Kinetin 0,5 mg/L + ABA 0,05 mg/L 16,3   a
* Angka rata-rata yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada P=0,05.
* Means followed by the same letters are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at P=0.05.
0,5 mg/L (Tabel 3).  Hal ini menunjukkan bahwa  penambahan  kinetin  0,5  mg/L diperlukan  untuk  perkecambahan  embrio somatik kelapa sawit pada SPS. Penambahan  GA 3 0,1  mg/L  memberi pengaruh  positif  terhadap  perkecambahan embrio  somatik  walaupun  secara  statistik tidak  berbeda  nyata.  GA 3 diketahui  mem- bantu  sintesis  protein  yang  memacu perkembangan  embrio  somatik  untuk menjadi  planlet.    Di  samping  itu,  kom- posisi  dan  konsentrasi  zat  pengatur tumbuh  yang  tepat  dapat  meningkatkan perkembangan  embrio  somatik  (Gaspar et al ., 1996; Tahardi et al ., 2003). Perendaman  eksplan  dalam  medium secara  periodik  memungkinkan  tingkat penyerapan  hara  oleh  eksplan  lebih optimal  sehingga  menstimulasi  perkem- bangannya  (Teisson et.  al .,  1999;  Tahardi et.  al .,  2000).    Pada  saat  medium  meng- genangi propagula, seluruh permukaannya terpapar langsung dengan medium sehingga  penyerapan  hara  terjadi  di seluruh  bagian  eksplan,  tidak  hanya  di bagian  bawah  saja  seperti  pada  medium padat.    Oleh  karena  itu,  tingkat  pertum- buhan  dan  perkembangan  di  seluruh
bagian  eksplan  menjadi  lebih  seragam karena  hara  diserap  secara  bersamaan dalam  proporsi  seimbang  (Etiene  & Berthouly, 2002).
Sebagian  besar  embriogenesis  soma- tik  kelapa  sawit  dilakukan  pada  medium padat.    Pada  medium  padat,  laju  pertum- buhan kalus dan embrio somatik dianggap lebih  rendah  dibandingkan  pada  medium cair (de Touchet et al ., 1991; Duval et al. , 1993; Tahardi, 1998; Tarmizi et al. , 2003; Soh et  al .,  2006).    Di  samping  itu,  kultur cair  digunakan  untuk  meningkatkan  kese- ragaman  embrio  somatik  dan  meningkat- kan  skala  produksi.  Kekhawatiran  peng- gunaan  kultur  cair  dapat  meningkatkan persentase abnormalitas pembungaan kela- pa  sawit  sejauh  ini  tidak  terbukti.    Rata- rata tingkat abnormalitas pada kultur padat dan cair kurang dari 3% (Soh et al ., 2006). Pada  penelitian  ini  lama  perendaman diatur  tiga  menit  dengan  frekuensi  peren- daman  setiap  enam  jam.    Pengaturan  ter- sebut  didasarkan  pada  hasil  penelitian spesies  tanaman  lain,  terutama  tanaman tahunan  yang  mempunyai  rentang  lama perendaman  1  sampai  15  menit  dengan frekuensi  perendaman  2   sampai   12 jam
Sumaryono et al.
Tabel 3.  Jumlah kecambah per bejana setelah enam minggu dalam medium per- kecambahan pada perlakuan zat pengatur tumbuh.
Table 3.  Number of germinants per flask after six- weeks in germination media at  different treatments of plant growth regulators.
Perlakuan Treatment Jumlah kecambah Number of germinants IBA 3 mg/L 18,5  b* IBA 2mg/L + kinetin 0,5 mg/L 45,5 a IBA 2mg/L + kinetin 0,1 mg/L + GA 3 0,1 mg/L 56,3 a
* Angka rata-rata yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata menurut uji jarak berganda Duncan pada P=0,05.
* Means followed by the same letters are not significantly different according to Duncan’s multiple range test at P=0.05.
(Etiene  &  Berthouly,  2002).    Untuk mendapatkan  hasil  yang  lebih  baik  maka perlu  dilakukan  penelitian  tentang  lama dan  frekuensi  perendaman  pada  masing- masing  fase  pertumbuhan  kalus  dan embrio somatik kelapa sawit.

## Kesimpulan
Perbanyakan kalus embriogenik kelapa  sawit  dapat  dilakukan  pada  sistem perendaman  sesaat  (SPS)  dengan  interval subkultur terbaik empat minggu. Sebagian  besar  kalus  berubah  menjadi embrio somatik setelah subkultur keempat pada  medium  inisiasi  embrio  somatik. Medium  terbaik  untuk  tahap  pematangan embrio  somatik  adalah  medium  DF dengan  penambahan  2,4-D  0,01  mg/L, kinetin  0,5  mg/L,  dan  ABA  0,05  mg/L; sedangkan  untuk  perkecambahan  embrio somatik  adalah  medium  DF  setengah garam  makro  dengan  penambahan  IBA 2 mg/L dan kinetin 0,5 mg/L.

## Daftar Pustaka
Aitken-Christie,  J.    (1991).    Automation. In P.C.  Debergh  &  R.J.  Zimmerman  (eds.) Micropropagation: Technology and Application. Dondrecht,      Kluwer  Acad. Publ. p. 363-388.
Berthouly,  M.,  M.  Dufour,  D.  Alvard,
C.  Carasco,  L.  Alemano  &  C.  Teisson
(1995).    Coffee  micropropagation  in  a liquid  medium  using  the  temporary immersion technique. In: ASIC Publ. 16th International  Sci.  Colloq.  on  Coffee , Kyoto, Japan. p. 514-519.
Bonetta,  D.  &  P.  McCourt    (1998).    Genetic analysis  of  ABA  signal  transduction pathways. Trend Plant Sci ., 3 , 231-235.
de  Fossard,  R.A.,  A.  Myint  &  E.C.M.  Lee (1974).    A  broad  spectrum  tissue  culture experiment  with  tobacco  ( Nicotiana tabacum L.)  pith  tissue  callus. Physiol. Plant., 30 , 125-130.
de  Touchet,  B.,  Y.  Duval  &  C.  Pannetier (1991).  Plant  regeneration  from  embryo- genic  suspension  cultures  of  oil  palm ( Elaeis guineensis Jacq.). Plant Cell Rep.,
10 , 529-532.
Duncan,  D.B.    (1955).  Multiple  range  and multiple F tests. Biometrics, 11 (1-4),  1- 42.
Pertumbuhan dan perkembangan kalus embriogenik dan embrio somatik...
Duval,  Y.,  F.  Aberlenc  &  B.  de  Touchet (1993).  Use  of  embryogenic  suspensions for oil palm micropropagation. In: V. Rao et  al .  (eds.) Recent  Dev.  in  Oil  Palm Tissue  Cult.  &  Biotechnol .,  Kuala Lumpur, p. 38-47.
Eeuwens,  C.J.,  S.  Lord,  C.R.  Donough, V.  Rao,  G.  Vallejo  &  S.  Nelson    (2002). Effects of tissue culture conditions during embryoid  multiplication  on  the  incidence of  “mantled”  flowering  in  clonally propagated  oil  palm. Plant  Cell  Tiss.  & Org. Cult., 70 , 311-323.
Etienne,  H.  &  M.  Berthouly    (2002). Temporary  immersion  systems  in  plant micropropagation. Plant  Cell  Tiss.  & Org. Cult., 69 , 215-231.
Fujii,  J.A.,  D.  Slade,  J.  Aguirre-Rascon      & K. Redenbaugh  (1992).  Field planting of alfalfa artificial seeds. In Vitro Cell. Dev. Biol.Plant ., 28 , 73-80.
Gaspar, T.,  C. Kevers, C. Penel,   H. Greppin, D. M. Reid & T.A. Thorpe  (1996).  Plant Hormones  and  plant  growth  regulators  in plant  tissue  culture. In  Vitro  Cell  Dev. Biol.Plant., 32 , 272-289.
Ginting, G. & Fatmawati  (1997).  Suspensi sel pada  kelapa  sawit  ( Elaeis  guineensis Jacq.). J.  Pen.  Kelapa  Sawit, 5 (3),  153- 160.
Murashige, T. &  F. Skoog   (1962).  A revised medium  for  rapid  growth  and  biassays with  tobacco  tissue  culture. Physiol. Plant., 15 , 473-497.
Sharma,  P.,  S.  Pandey,  A.  Bhattacharya, P.K.  Nagar  &  P.S.  Ahuja    (2004).    ABA associated  biochemical  changes  during somatic embryo development in Camellia sinensis (L.) O. Kuntze. J. Plant Physiol . 161 , 1269-1276.
Soh,  A.C.,  G.  Wong,  C.C.  Tan,  S.P.  Chong, C.N.  Chou,  A.  Nur  Azura  &  Y.W.  Ho (2006).    Progress  and  challenges  in commercial mass propagation of clonal oil
palm. In E.S.  Sutarta et  al .  (eds.) Proc. International Oil Palm Conf ., Bali, p. 229-
240.
Sumaryono,  N.  Mardiana  &  J.S.  Tahardi
(1994).    Embryogenic  suspension  culture of  oil  palm. Menara  Perkebunan, 62 (3),
41-46.
Tahardi, J.S.  (1998).  Improvement of oil palm somatic embryogenesis by periodic immersion  in  liquid  medium. In A. Jatmika et  al .  (eds.) Proc.  Internat.  Oil Palm Conf ., Bali, Indonesia, p. 595-601.
Tahardi,  J.S.,  T.  Raisawati,  I.  Riyadi  & W.A.  Dodd    (2000).    Direct  somatic embryogenesis  and  plant  regeneration  in tea  by  temporary  liquid  immersion. Menara Perkebunan, 68 (1), 1-9.
Tahardi, J.S., I.  Riyadi &  W.A.  Dodd  (2003).
Enhancement of somatic embryo development  and  plantlet  recovery  in Camellia  sinensis by  temporary  liquid immersion. J. Biotek. Pert ., 8 (1), 1-7.
Tarmizi  A.,  M.A.  Norjihan,  R.S.  Kamal, R.  Zaitun  &  S.C.  Soh    (2003).    Mass propagation of oil palm planting materials using  liquid  culture  and  bioreactor technology .  In : Proc.  PIPOC  2003 Internat.  Palm  Oil  Congress (Agric.),
p. 130-143.
Teisson,  C.  &  D.  Alvard    (1999). In  vitro production of potato microtubers in liquid medium  using  temporary  immersion. Potato Res ., 42 , 499-504.
Teisson, C., D. Alvard, M. Lartaud, H. Etienne, M. Berthouly, M. Escalona &
J.C.  Lorenzo    (1999).    Temporary immersion  for  plant  tissue  culture. In: Proc.  IXth  Internat.  Congress  of  Plant Tissue  and  Cell  Cult .  Jerusalem,  p.  629-
632.
Teixeira,  J.B.,  M.R.  Sondahl,  T.  Nakamura  &
E.G.  Kirby    (1995).    Establishment  of  oil palm cell suspensions and plant regeneration. Plant  Cell  Tiss.  Org.  Cult. 40, 105-111.