Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 4 Nomor 3
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i3.15740

## Isolasi dan Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Daun Andong (Cordyline fructicosa (L) A.Chev)
Endah Nurrohwinta Djuwarno 1, Hamsidar Hasan 2* , Mahdalena Sy. Pakaya 3 , Faramita Hiola 4 , Dewa Ayu Puspita Dewi 5
1,2,3,4 Jurusan Farmasi Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: hamsidar.hasan@ung.ac.id

## ABSTRAK
Andong (Cordyline fruticosa (L) A. Chev) digunakan sebagai obat tradisional, penggunaan obat tradisional  ini  berhubungan  dengan  kandungan  metabolit  sekunder  yang  dikandung  pada tanaman  andong (Cordyline  fruticosa  (L)  A.  Chev) .  Secara  empiris  masyarakat  menggunakan tanaman  ini  sebagai  antioksidan,  senyawa  yang  berperan  sebagai  antioksidan  ini  berkaitan dengan antiinflamasi. Tujuan penelitian ini yaitu untuk mmengisolasi metabolit sekunder dari ekstrak N-Heksan, Etil Asetat dan Metanol dari daun Andong dan Untuk mengetahui efek antiinflamasi  secara  in  vitro  dengan  metode  stabilisasi  sel  darah  merah.  Metode  yang digunakan dalam isolasi senyawa ini yaitu ekstraksi, identifikasi senyawa, fraksinasi KCV dan KKG,  KLT,  KLTP,  dan  karakterisasi  senyawa  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis  dan FTIR. Hasil dari karakterisasi UV-Vis menunjukkan pajang gelombang maksimum yaitu 434 nm  dan  hasil  karakterisasi  FTIR  menunjukkan  adanya  gugus  fungsi  yaitu  O-H  (Hidroksil) pada bilangan gelombang 3448,72 cm -1 , C-H (Alifatik) pada bilangan gelombang 2954,95 cm -1 , 2920,23 cm -1 , dan 2852,72 cm -1 , senyawa alifatik yang didukung dengan adanya CH 2 dan CH 3 pada bilangan gelombang 1463,97 cm -1 dan 1379,10 cm - 1 C=O (Karbonil terkonyugasi) pada bilangan  gelombang  1712,79  cm -1 ,  C=C  pada  bilangan  gelombang  1633,71  cm -1 ,C-O  pada bilangan gelombang 1294,24 cm -1 . Sehingga besar kemungkinan senyawa yang berada pada isolat daun Andong adalah golongan senyawa flavonoid. Hasil pengujian Antiinflamasi isolat menunjukkan  aktivitas  paling  efektif  pada  konsentrasi  pada  100  ppm  ,  dimana  ppm kemampuan dalam menstabilkan membran sel darah merah sebesar 80,142 %.
Kata Kunci:
Andong; Cordyline fruticosa (L) A. Chev.); Senyawa Kimia;  Antiinflamasi
Diterima: 24-07-2022 Disetujui: 17-09-2022 Online: 01-10-2022

## ABSTRACT
Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev) is used as traditional medicine, the use of this traditional medicine is related to the content of secondary metabolites contained in the andong plant. Empirically people  use  this  plant  as  an  antioxidant,  the  compound  that  acts  as  an  antoixidant  is  related  to antiinflamasi. The purpose of this study was to isolate secondary metabolites from the extracts of N- Hexane, Ethyl Acetate, and Methanol from Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev) leaves and to determine  the  anti-inflamatory  effect  of  the  isolated  secondary  metabolites  of  Andong  (Cordyline fructicosa (L) A. Chev) leaves through in vitro with red blood cell stabilization method. Several methods are  used  in  the  isolation  of  these  compounds,  namely  extraction,  identification  of  compound, fractionation  of  KCV  and  KKG,  KLT,KLTP,  and  characterizationof  compounds  using  UV-VIS spectrophotometry and FTIR. The results of UV-VIS characterization show a maximum wavelength of 434 nm, and the results of  FTIR characterization indicate the presence of a functional groups namely O-H (Hidroxyl) at a wave number of 3448,72 cm -1 , C-H (Aliphatic) at a wave number of 2954,95 cm -1 , 2920,23 cm -1 , and 2852,72 cm -1 , aliphatic compounds are supported by the presence of CH 2 and CH 3 at wave number of 1463,97 cm -1 and 1379,10 cm -1 , C=O (conjugated carbonyl) at wave number of 1721,79 cm -1 , C=C at wave number of 1633,71 cm -1 , C-O at wave number of 1294,24 cm -1 . So it is very likely that  the  compounds  in  Andong  leaves  isolate  are  flavonoid  compounds.  Furthermore,  the  activity  of results of the isolation is tested where the isolate whit a concentration of 100 ppm signifies the highest anti-inflamatory activity, with the ability to stabilize red blood cell membranes of 80,142 %.
Copyright © 2022 Jsscr. All rights reserved.
Keywords: Andong; Cordyline fructicosa (L) A. Chev); Chemical compound; Anti-inflamation Received: 2022 -07-24 Accepted: 2022 -09-17 Online: 2022 -10-01

## 1. Pendahuluan
Tumbuhan pada umumnya mengandung metabolit sekunder seperti terpenoid, steroid,  kumarin,  flavonoid  dan  alkaloid.  Senyawa  metabolit  sekunder  tersebut telah banyak  digunakan  sebagai  zat  warna,  racun,  aroma  makanan  maupun  sebagai  obat- obatan dimana metabolit skunder dapat mengobati suatu penyakit. Senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam tumbuhan memiliki manfaat yang secara luas dalam bidang kesehatan, sehingga digunakan sebagai bahan pengobatan [1].
Salah satu tanaman yang bisa digunakan sebagai obat adalah Andong, Andong (Cordyline fruticosa (L) A. Chev ) termasuk suku bawang-bawangan tanaman perdu tegak dengan tinggi 2-4 m, jarang bercabang, batangnya bulat, keras, bekas daun yang rontok berbentuk  cincin.  Tanaman  Andong  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  banyak  di jumpai di lingkungan masyarakat salah satunya di kecamatan Wonosari, masyarakat Wonosari  tidak  asing  lagi  dengan  tanaman  ini  karena  jenis  tanaman  ini  biasanya dijadikan sebagai tanaman hias dan banyak ditemukan di pinggir jalan, di kuburan, dan dijadikan tanaman pagar. Tidak jarang tanaman Andong biasa digunakan sebagai obat oleh  masyarakat  sekitar.  Dimana  menurut  Suarsana et  al secara  empiris  masyarakat Indonesia  umumnya  mengenal  tanaman  Andong  merah  sebagai  tanaman  obat  yang dapat digunakan untuk mengobati inflamasi pada gusi, disentri, perdarahan pada luka, dan  wasir  berdarah.  Penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  asih  menyatakan  bahwa daun andong merah mengandung senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid, fenol, saponin, dan tannin [2,3].
Salah  satu  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder    pada  daun  Andong mempunyai aktivitas antiinflamasi karena dapat menghambat beberapa enzim antara lain, Ca2+ATPase, fosfodiesterase, lipooksigenase dan siklook-sigenase. Steroid dalam tubuh dapat menghambat enzim phospolipase A2 yaitu suatu enzim yang bertanggung
jawab atas pembebasan asam arakhidonat yang kemudian dimetabolisme oleh enzim siklooksigenase  dan  lipooksigenase  yang  kemudian  akan  membebaskan  mediator- mediator radang. Metabolit sekunder yang diduga sebagai antiinflamasi yaitu senyawa steroid dan flavonoid hal ini sesuai dengan pernyataan Kurniawati dalam Fitriyani yang menyatakan  bahwa  mekanisme  flavonoid  dalam  menghambat  proses  terjadinya inflamasi  melalui  dua  cara,  yaitu  dengan  menghambat  permeabilitas  kapiler  dan menghambat metabolisme asam arakidonat dan sekresi enzim lisosom dari sel neutrofil dan sel endothelial [4,5].
Pada  peneitian  Leni  Wijaya et  al [6]  juga  membuktikan  bahwa  adanya  efek antiinflamasi  fraksi  daun  andong  pada  tikus  putih  jantan  galur Spraque  dawey pada fraksi n-heksan daun Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev ) mengandung golongan senyawa  fenol  dan  steroid  terpenoid  yang  diduga  berperan  dalam  aktivitas antiinflamasi, dan potensi antiinflamasi fraksi etil asetat dan metanol air daun andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev ) lebih kecil dibandingkan dengan meloxicam pada tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ) galur Spraque Dawley. Berdasarkan uraian diatas yang telah  dijelaskan  bahwa  berlimpahnya  populasi  tanaman  Andong  di  kecamatan Wonosari serta secara empiris masyarakat juga menggunakan tanaman ini sebagai salah satu pengobatan maka diperlukannya penelitian tentang tanaman Andong tersebut.

## 2.  Metode

## Desain Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium  untuk mengisolasi senyawa kimia yang memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi dari ekstrak daun  Andong  ( Cordyline  fruticosa (L)  A.  Cheval)  yang  dilakukan  dengan  metode stabilisasi membran sel darah merah tikus putih jantan ( Rattus novergicus).

## Alat dan Bahan
Bahan yang digunanakan Aquades, aspirin, asam klorida, buffer natrium fosfat pH  7,4  (0,15  M),  etanol,  FeCL3,  H2SO4,    HCL  pekat,  kertas  saring,  larutan  alsever, lempeng KLT silika gel, lempeng KLTP, suspensi sel darah merah, etil asetat, isotonik saline , hipotonik saline , metanol, metanol p.a, N-Heksan, pereaksi Lieberman-Burchard, pereaksi dragendorf, reagen mayer, Serbuk Mg, serbuk silika gel 60, serbuk silika gel 60 GF 254 , Alat yang digunkaan Autoklaf, bejana maserasi ( pyrex ), belender, hot plate , labu ukur, magnetic stirer , mikropipet, neraca analitik, oven, pipet tetes, pipet volume, rotary evaporator , sentrifugasi, spatula, spektrofotometer UV-VIS dan spektrofotometer IR.

## Ekstraksi
Simplisia  daun  Andong (Cordyline  fructicosa    ( L)  A.  Chev.)  yang  telh  kering ditimbang sebanyak 371 g. Daun Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev. ) kemudian diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  bertingkat  dengan  pelarut  N-heksan,  etil asetat  dan  metanol.  Sampel  terlebih  dahulu  dimasukkan  kedalam  bejana  maserasi kemudian ditambahkan N-Heksan sebanyak 2000 mL hingga semua sampel terendam sempurna kemudian diekstraksi. Selanjutnya sampel didiamkan selama 3 x 24 jam dan sesekali  di  stirer  menggunakan  magnetic  stirer  selama  1  jam.  Setelah  3  x  24  jam perendaman ekstrak disaring untuk memisahkan filtrat dan residu, kemudian residu tersebut diangin-anginkan setelah dirasa kering dilanjutkan dengan pelarut yang kedua yaitu etil asetat.
Residu dari pelarut N-heksan kemudian dimasukkan kedalam bejana maserasi kemudian ditambahkan etil asetat sebanyak 2000 mL hingga semua sampel terendam sempurna kemudian diekstraksi. Selanjutnya sampel didiamkan selama 3 x 24 jam dan sesekali  di  stirer  menggunakan  magnetic  stirer  selama  1  jam.  Setelah  3  x  24  jam perendaman ekstrak disaring untuk memisahkan filtrat dan residu, kemudian residu tersebut diangin-anginkan setelah residu dirasa sudah kering dan dilanjutkan dengan pelarut yang ketiga yaitu metanol. Residu dari pelarut Etil asetat kemudian dimasukkan kedalam bejana  maserasi  kemudian  ditambahkan  metanol  sebanyak  2000  mL hingga semua  sampel  terendam  sempurna  kemudian  diekstraksi.  Selanjutnya  sampel didiamkan selama 3 x 24 jam dan sesekali di stirer menggunakan magnetic stirer selama 1 jam. Setelah 3 x 24 jam perendaman ekstrak disaring untuk memisahkan filtrat dan residu. Setelah itu masing-masing ekstrak n-heksan, etil asetat dan metanol dievaporasi menggunakan  alat  Rotary  Evaporator  sampai  terbentuk  ekstrak  kental,  kemudian ektrak kental tersebut dihitung persen rendamennya menggunakan rumus [7].
………..(1)

## Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Cheval) Uji Flavonoid
Sebanyak gram ekstrak daun andong dilarutkan ke dalam 2 mL etanol, kemudian ditambahkan  serbuk  Mg  dan  HCl  pekat  sebanyak  5  tetes.  Adanya  senyawa  flavonoid ditunjukkan dengan terbentuknya warna merah atau jingga [8].

## Uji Alkaloid
Pada identifikasi atau pengujian alkaloid sebanyak 0,5 gr ekstrak daun andong dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  etanol    sebanyak  2  mL  dan ditambahkan 5 mL HCl 2 N, dipanaskan pada penangas air. Setelah dingin campuran tersebut disaring dan filtrat ditambahkan beberapa tetes reagen mayer. Adanya alkaloid apabila sampel berubah menjadi warna keruh atau terdapat endapan [8].

## Uji Terpenoid dan Steroid
Sebanyak 0,5 gram sampel daun andong dimasukkan kedalam tabung reaksi lalu ditambahkan  etanol  sebanyak  2  mL  kemudian  ditambahkan  pereaksi  liberman  dengan cara diteteskan pada dinding tabung reaksi. Bila terdapat cincin warna merah pada sampel maka  positif  mengandung  steroid  dan  apabila  sampel  berubah  warna  maka  positif mengandung terpenoid [8].

## Uji Saponin
Diambil  ekstrak  daun  andong  ditambah  dengan  etanol,  kemudian  dipanaskan selama  beberapa  menit.  Larutan  dituang  kedalam  tabung  reaksi  dalam  keadaan  panas. Larutan diambil sebanyak 10 ml, kemudian dikocok kuat secara vertikal. Adanya saponin ditandai dengan terbentuknya busa dan tidak hilang pada saat ditambahkan dengan satu tetes HCl 2 N [8].

## Uji Tanin
Sebanyak  1  mL  ekstak  daun  andong  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi, kemudian ditambahkan FeCL3 1% sebanyak 2-3 tetes. Sampel positif mengandung tanin bila mengalami perubahan warna menjadi hijau kehitaman [8].

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Ekstrak  kental  daun  Andong (Cordyline  fructicosa (L)  A.  Chev.)  dianalisis menggunakan KLT (Kromatografi Lapis Tipis) dengan fase diam silika gel dan fase gerak menggunakan  eluen  n-heksan  dan  etil  asetat  pada  berbagai  perbandingan.  Plat  KLT diamati noda-noda menggunakan lampu UV 254 dan 366 nm. Setelah didapatkan noda yang diinginkan dilanjutkan dengan menghitung nilai Rf-nya menggunakan rumus [9] :
Rf =                                                                               ...................(2)
Noda yang paling banyak senyawanya dilanjutkan ketahap selanjutnya untuk di fraksinasi yaitu dengan  metode KCV (kromatografi kolom cair vakum).

## Fraksinasi

## Pemisahan Senyawa Menggunakan Kromatografi Cair Vakum
Ekstrak  kental  sampel  daun  Andong (Cordyline  fructicosa (L)  A.  Chev.)  yang terdiri  dari  beberapa  komponen  tersebut  difraksinasi  dengan  metode  kromatografi kolom  cair  vakum  (KCV)  menggunakan  silika  gel  sebagai  fase  diam  sedangkan  fase geraknya eluen yang ditingkatkan kepolarannya secara bergradien. Hasil kromatografi kolom cair vakum ditampung dalam erlenmeyer kemudian dipekatkan kembali dengan rotary evaporator dan dikumpulkan dalam vial lalu dimonitor lagi dengan KLT.

## Pemisahan Senyawa Menggunakan Kromatografi Kolom Gravitasi
Hasil fraksi gabungan dari KCV selanjutnya di fraksinasi kembali menggunakan fraksinasi  kromatografi  kolom  gravitasi  menggunakan  silika  gel  sebagai  fase  diam sedangkan fase geraknya perbandingan eluen yang sesuai. Hasil kromatografi kolom gravitasi ditampung dalam vial kemudian dipekatkan kembali dengan rotary evaporator lalu dimonitor lagi dengan KLT.

## Pemisahan Senyawa Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
Hasil  fraksinasi  dengan  metode  KKG  selanjutnya  dipisahkan  dengan  metode Kromatografi  Lapis  Tipis  Preparatif  (KLT-P)  menggunakan  eluen  hasil  orientasi  dari KLT.  Hasil  fraksi  kolom  kromatografi  dilanjutkan  KLT-  Préparatif  dengan menggunakan plat KLT ukuran 10 x 10 cm. Fraksi ditotolkan pada plat KLT memanjang membentuk  pita,  lalu  dielusi  dengan  eluen  yang  sesuai.  Plat  yang  telah  dielusi kemudian  dikeluarkan  dari  dalam  chamber  lalu  dikeringkan.  Plat  KLT  selanjutnya diamati noda-noda menggunakan lampu UV 254 dan 366 nm. Noda yang dihasilkan kemudian  dikerok  dan  dimasukkan  kedalam  vial  dan  ditambahkan  pelarut  metanol untuk kemudian digunakan pada Spektrofotometri UV-Vis dan FTIR.

## Spektrofotometri UV-Vis
Fraksi hasil kromatografi lapis tipis preparatif yang sudah dipisahkan dengan silika kemudian dimasukkan ke dalam kuvet lalu diukur Panjang gelombang maupun absorbansinya pada spektrofotometri UV- Vis. Diperoleh dari laboratorium Biofarmaka Pusat Kegiatan Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Hassanudin Makassar.
Jarak Yang Ditempuh Oleh Komponen Jarak Yang Ditempuh Oleh Pelarut

## Spektrofotometri IR
Fraksi hasil kromatografi lapis tipis preparatif yang sudah dipisahkan dengan silika  kemudian  diukur  pada  spektrofotometri  IR.  Isolat  diteteskan  pada  pellet  KBr, dikeringkan  kemudian  dianalisis  dengan  spektrofotometri  inframerah  pada  rentang gelombang  4000  -  400  cm -1 .  Diperoleh  dari  laboratorium  Biofarmaka  Pusat  Kegiatan Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Hassanudin Makassar.

## 3.  Hasil dan Pembahasan
Ekstraksi Daun Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev )
Daun andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev ) diperoleh dari Desa Tri Rukun, Kecamatan  Wonosari,  Kabupaten  Boalemo,  Provinsi  Gorontalo.  Daun  Andong  yang telah  diambil  dicuci  bersih,  dirajang  kemudian  dikeringkan  dan  dihaluskan  agar memperoleh serbuk simplisia.
Tabel 1. Hasil Ekstrak dan Perhitungan Rendamen Daun Andong Ekstrak Berat Sampel (g) Volume Pelarut (mL) Berat Ekstrak (g) Rendemen (%) N-Heksan 371 2000 35,9 9,67 Etil Asetat 365,8 2000 51 13,94 Metanol 350,7 2000 48,1 13,7
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  hasil  ekstraksi  sampel  371  gram  daun  andong (Cordyline  fructicosa (L)  A.  Chev  ( Averrhoa  bilimbi L.)  menggunakan  pelarut n -heksan sebanyak 2000 mL diperoleh ekstrak kental sebanyak 35,9 gram dengan % rendamen sebanyak 9,67%, 365,8 gram sampel yang diekstraksi dengan pelarut etil asetat sebanyak 2000 mL diperolah ekstrak kental 51 gram dengan % rendamen sebanyak 13,94%, dan 350,7  gram  sampel  yang  diekstraksi  dengan  pelarut  metanol  sebanyak  2000  mL diperoleh ekstrak kental sebanyak 48,1 gram dengan % rendamen sebanyak 13,7%. Hasil %  rendamen  dari  masing-masing  ekstrak  memiliki  %  rendamen  yang  baik.  Hasil  ini memenuhi persyaratan Farmakope Herbal Indonesia bahwa dinyatakan rendamen yang baik yaitu rendamen yang tidak kurang dari 7,2% [10].

## Skrining Fitokimia
Data  yang  ditampilkan  pada  tabel  2  menunjukkan  data  hasil  uji  skrining fitokimia  dari  hasil  ekstrak  kental  N-heksan,  etil  asetat  dan  metanol  daun  Andong (Cordyline  fructicosa (L)  A.  Chev ) pada  ekstrak  kental  N-heksan  positif  mengandung senyawa steroid, pada ekstrak kental etil asetat positif mengandung senyawa flavonoid dan pada ekstrak kental metanol positif mengandung senyawa alkaloid, terpenoid, dan tanin. Hal ini diperkuat dengan penelitian yang dilakukan oleh Towiyah et al [11] , yang menyatakan  bahwa  ekstrak  daun  Belimbing  Wuluh  mengandung  senyawa  alkaloid, flavonoid, tanin, steroid dan triterpenoid.
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Belimbing Wuluh
Ekstrak Hasil Senyawa Alkaloid (HCl+ dragendrfof) Flavonoid (HCl+Mg) Tannin (FeCl 3 ) Soponin (air panas +HCl) Steroid/terpenoid (H2SO4 + as. asetat anhidrat) N-Heksan - - - - + Etil asetat - + - - - Metanol + - + - +
Hasil Analisis Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev )
Pemisahan  komponen  senyawa  ekstrak  N-heksan,  Etil  asetat,  Metanol  daun andong (Cordyline  fructicosa (L)  A.  Chev ) dilakukan  dengan  cara  Kromatografi  Lapis Tipis  (KLT).  Pengujian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  ada  atau  tidaknya  senyawa metabolit sekunder dari ekstrak daun andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev ). Masing- masing ditotolkan pada plat KLT dan dielusi menggunakan eluen n -heksan : etil asetat dengan perbandingan 8:2. Setelah dilakukan proses elusi kemudian dilihat bercak noda pada lampu UV 366 nm.
(Etil Asetat) (Metanol)
(N-heksan)
Gambar 1. Hasil Kromatografi Lapis Tipis

## Fraksinasi Dengan Metode Kromatografi Cair Vakum (KCV)
Berdasarkan  hasil  kromatografi  lapis  tipis  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil asetat daun andong ( Cordyline fructicosa (L) A. Chev) dapat dilanjutkan ke fraksinasi. Eluen  yang baik  adalah  eluen  yang  dapat  memisahkan  senyawa  dalam  jumlah  yang banyak yang ditandai dengan munculnya noda. Noda yang terbentuk tidak berekor dan jarak  antara  noda  yang  satu  dengan  yang  lainnya  terpisah  jelas  [12] . Fraksinasi digunakan untuk memudahkan dalam mengisolasi senyawa metabolit sekunder pada daun andong ( Cordyline fructicosa (L) A. Chev). Fase diam yang digunakan dapat berupa silika  gel  atau  alumunium  oksida,  sedangkan  aliran  fase  geraknya  dibantu  dengan pompa  vakum.  Fase  gerak  yang  digunakan  pada  metode  ini  yaitu  dengan  11 perbandingan eluen n -heksan : etil asetat ( n -heksan 50, 45:5, 40:10, 35:15, 30:20, 25:25, 20:30, 15:35, 10:40, 5:45, etil asetat 50) dalam 50 mL dan fase diam yang digunakan yaitu silika gel 60 GF 254 .
RF = 0,71 RF = 0,51 RF = 0,3 RF = 0,51 RF = 0,36 RF = 0,61 RF = 0,49
Gambar  2  menunjukkan  bahwa  hasil  yang  diperoleh  adalah  11  fraksi  yang kemudian hasil fraksi tersebut dimonitoring dengan KLT menggunakan eluen N-heksan : Etil asetat (8 : 2) selanjutnya diamati dibawah lampu UV 366 nm dan 254 nm. Visualisasi bercak  noda  dan  warna  yang  sama  digabung  menjadi  1  fraksi,  sehingga  hasil  fraksi menjadi 2 fraksi gabungan yaitu FA (F1-F3) dan FB (F4-F11) dan di evap mendapatkan berat  hasil  sebesar  FA  (0,0985)  dan  FB  (0,066).  Selanjutnya  fraksi  gabungan  FA difraksinasi kembali dengan Kromatografi Kolom Gravitasi (KKG).

## Fraksinasi Metode Kromatografi Kolom Gravitasi (KKG)
Hasil  fraksi  gabungan  FA  yang  diperoleh  setelah  dilakukan  penimbangan didapat sebesar 0,0985 gram, kemudian dilakukan fraksinasi lanjutan untuk didapatkan pemisahan senyawa yang lebih baik dan sederhana.
Fase gerak yang digunakan pada metode ini  yaitu eluen n -heksan : etil asetat (8:2)  dalam  100  mL  dan  fase  diam  yang  digunakan  adalah  silika  gel  60.  Hasil  yang diperoleh yaitu 10 fraksi, dimana hasil fraksi tersebut ditotolkan pada plat KLT untuk diamati penampakan bercak nodanya pada lampu UV 254 nm dan 366 nm, didapatkan 1 bercak noda tunggal pada fraksi 3 (F 3 ).
Analisis Isolat Fraksi Aktif  Daun Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)
Hasil  fraksi  (F 3 )  yang  diperoleh  dari  metode  KKG  selanjutnya  dilakukan penotolan pada plat KLTP. Tujuan dilakukannya KLTP yaitu untuk mendapatkan hasil isolat  yang  lebih  banyak  karena  lempeng  KLTP  memiliki  ukuran  yang  lebih  besar dibandingkan dengan lempeng KLT. Eluen yang digunakan pada KLTP sama dengan
(Sinar UV 366 nm)                              (Sinar UV 254 nm)
Gambar 2. Hasil Fraksinasi KCV
(Sinar UV 366 nm)                                   (Sinar UV 254 nm) Gambar 3. Hasil Fraksinasi KKG
eluen yang digunakan pada KLT sebelumnya dengan perbandingan yang sama pula  yaitu  N-heksan  :  Etil  asetat  (8:2).  Hasil  fraksi  (F 3 )  kemudian  ditotolkan  secara memanjang membentuk pita  pada plat  KLTP ukuran 20 x  20 cm dan  dielusi  dengan eluen yang sesuai.
(Sinar UV 366 nm) (Sinar UV 254 nm)
(N-Heksan : Metanol)                   (Kloroform : Metanol) Gambar 4. Hasil analisis KLTP Fraksi Aktif dan analisis KLT Isolat dari Fraksi Aktif Gambar 4 menunjukkan bahwa hasil yang diperoleh yaitu noda tunggal, hal tersebut menunjukkan bahwa isolat dari fraksi 3 relatif murni. Hal tersebut diperkuat kemurniannya  dengan  dilakukan  analisis  KLT  dari  Isolat  fraksi  aktif  tersebut  dan diperoleh hasil visualisasi noda tunggal pada perbandingan eluen n -heksan : metanol (8:2) dan kloroform : metanol (7:3). Selanjutnya hasil dari KLTP tersebut dikerok untuk diambil  isolatnya  yang  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  vial  dan  di  larutkan  dalam metanol 10 ml untuk digunakan pada spektrofotometri UV-Vis, FTIR dan Uji aktivitas antiinflamasi.
Karakterisasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis

## 434 nm
Gambar 5. Hasil Karakterisasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis
Gambar 9. Hasil Elusidasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis
Gambar 5. menunjukkan panjang gelombang maksimum berada pada panjang gelombang  434    nm.  Dari  hasil  tersebut  diduga  hasil  isolasi  senyawa  daun  andong ( Cordyline fructicosa (L) A. Chev) adalah golongan senyawa flavonoid. Dimana hal ini didukung oleh Gandjar dan Rohman [13],  bahwa panjang gelombang kuersetin yaitu 375-450  nm.  Hasil  tersebut  diperkuat  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Dian Kartika  Sari et  al [11],  bahwa  panjang  gelombang  makimum  golongan  senyawa flavonoid ekstrak daun andong ( Cordyline fructicosa (L) A. Chev) yang diperoleh yaitu 433 nm.

## Karakterisasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri FTIR
Karakterisasi  menggunakan  sprektrofotometri  Inframerah  digunakan  untuk menentukan gugus fungsi dari senyawa hasil isolasi daun andong ( Cordyline fructicosa (L) A. Chev).
Hasil  pengukuran  sprektrum  IR  pada  gambar  6,  diperoleh  serapan  pada bilangan gelombang 3448,72 cm -1 menunjukkan adanya gugus fungsi O-H (Hidroksil) terikat.  Menurut Pavia et  al [14],  gugus  O-H  (Hidroksil)  terikat  berada  pada  serapan 3600-3000 cm -1 yang membentuk pita lebar, dugaan ini didukung oleh adanya serapan pada bilangan gelombang 1294,24 cm -1 yang menunjukkan adanya C-O. Serapan pada bilangan  gelombang  1712,79  cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  fungsi  C=O  (Karbonil terkonyugasi).  serapan  pada  bilangan  gelombang    2954,95  cm -1 ,    2920,23  cm -1 ,  dan 2852,72 cm -1 menunjukkan adanya gugus fungsi C-H (Alifatik) senyawa alifatik yang didukung  dengan  adanya  CH 2 dan  CH 3 pada  bilangan  gelombang  1463,97  cm -1 dan 1379,10 cm - 1. Adanya gugus CH 3 dan CH 2 juga didukung adanya serapan tajam dan intensitas  lemah  yang  merupakan  vibrasi  tekuk  C-H  alifatik.  Serapan  bilangan gelombang 1633,71 cm -1 menunjukkan adanya gugus fungsi C=C [15]. Sehingga besar kemungkinan senyawa yang berada pada isolat daun Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev ) adalah golongan senyawa flavonoid .

## Hasil Uji Stabilisasi Membran Eritrosit Isolat
Stabilisasi  membran  eritrosit  digunakan  sebagai  metode  untuk  mengetahui aktivitas  antiinflamasi  secara  invitro.  Dari  hasil  pengamatan  yang  telah  dilakukan, diperoeh presentase stabilisasi membran eritrosit sebagai berikut.
Gambar 6. Hasil Karakterisasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri FTIR
Gambar 10. Hasil Elusidasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri IR
Gambar 10. Hasil Elusidasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri IR
Gambar 10. Hasil Elusidasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri IR
Tabel 3. Stabilisasi Membran Eritrosit dari Isolat Daun Andong
Larutan Uji Konsentrasi (ppm) Stabilisasi (%) Isolat daun Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev) 25 40,425 50 48,936 100 80,142 Aspirin 100 65,975
Gambar 7. Histogram Stabilisasi Membran Eritrosit dari Isolat Daun Andong
Berdasarkan dari tabel 3 dan gambar 7 histogram diatas terlihat pada konsentrasi 25 ppm diperoleh % stabilitas sebesar 40,425%, pada konsentrasi 50 ppm diperoleh % stabilitas sebesar 48,936%, dan pada konsentrasi 100 ppm diperoleh % stabilitas sebesar 80,142% untuk konsentrasi eritrosit dari isolat daun Andong sedangkan untuk aspirin konsentrasi 100 ppm diperoleh % stabilitas sebesar 65,975%. Aktivitas antiinflamasi dari isolat daun Andong dapat dilihat dari adanya penurunan absorbansi pada campuran larutan uji. Semakin kecil nilai absorbansi yang dihasilkan maka semakin kecil hemolisis yang terjadi, sehingga semakin besar aktivitas anti inflamasi yang dimiliki oleh sampel. Aspirin  digunakan  sebagai  kontrol  positif  karena  merupakan  obat  antiinflamasi  non steroid yang bekerja dengan cara mencegah pelepasan mediator antiinflamasi sehingga dapat menghambat sintesis prostagandin atau siklooksigenase dan juga memiliki efek sebagai antipiretik dan analgesik [16].

## Hasil Analisis Data Statistik
Hal ini juga dibuktikan dengan analisa secara statistik, untuk analisa awal yang dilakukan uji normalitas dengan metode kolmogorof-Smirnov untuk melihat distribusi data persen stabilitas membran sel darah merah aspirin pada konsentrasi 100 ppm dan isolat  daun  Andong  pada  konsentrasi  25  ppm,  50  ppm,  dan  100  ppm.  Hasil  analisa menunjukkan semua kelompok perlakuan terdistribusi normal.
Kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  homogenitas  dengan  metode  levene  untuk melihat presentase data stabilitas membran sel darah merah aspirin pada konsentrasi 100  ppm  dan  isolat  daun  Andong  pada  konsentrasi  25  ppm,  50  ppm  dan  100  ppm homogen atau tidak, hasil menunjukkan keompok perlakuan tersebut tidak terdistribusi secara  homogen  (p ≤ 0,05) maka  dilanjutkan  dengan  uji  Kurkal-Wallis.  Selanjutnya
40,425% 48,936% 80,142% 65,975%(Aspirin) 0 20 40 60 80 100 25 ppm 50 ppm 100 ppm 100 ppm
% Stabilitas Isolat daun Andong ( Cordyline fructicosa (L) A. Chev) % Stabilitas
dilakukan  uji  BNT  (Beda  Nyata  Terkecil)  dengan  metode  Least  Significane  Different (LSD) [17] .
Antar konsentrasi pada perlakuan isolat daun Andong berbeda secara bermakna membuktikan  bahwa  peningkatan  konsentrasi  akan  memberikan  peningkatan  yang bermakna pada kemampuannya untuk menstabilisasi membran sel darah merah yang dirujuk  pada  kemampuan  kontrol  positif  (Aspirin)  pada  konsentrasi  100  ppm  untuk menstabilkan membran sel darah merah. Dimana, isolat daun Andong pada konsentrasi 100  ppm  identik  dengan  Aspirin  dalam  konsentrasi  100  ppm,  sedangkan  kelompok ekstrak  dengan  konsentrasi  25  dan  50  ppm  tidak  identik  dengan  Aspirin  dalam konsentrasi 100 ppm. Jadi berdasarkan persen (%) stabilitas yang diperoleh perlakuan isolat pada konsentrasi 100 ppm memiliki kemampuan menstabilkan membran sebesar 80,142%.

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  maka  dapat  disimpulkan bahwa Metabolit sekunder yang dapat diisolasi dari ekstrak N-Heksan, Etil Asetat dan Metanol dari daun Andong (Cordyline fructicosa (L) A. Chev ) yaitu senyawa Flavonoid. Serta  isolat  dari  daun  Andong (Cordyline  fructicosa (L)  A.  Chev.)  mempunyai  efek aktivitas  antiinflamasi.  Isolat  dengan  konsentrasi  100  ppm  mempunyai  aktivitas antiinflamasi  yang  paling  tinggi.  Hasil  ini  dilihat  dari  kemampuannya  dalam menstabilkan membran sel darah merah yaitu sebesar 80,142 %.

## Referensi
[1]. Mariana L., Andayani Y. and Gunawan R., 2013., Analisis Senyawa Flavonoid Hasil Fraksinasi Ekstrak Diklorometana Daun Keluwih ( Artocarpus camansi ), Chem. Prog., 6 (2), 50 – 55.
[2]. Suarsana,  I.  N.,  Kumbara,  A.  A.  N.  A.,  &  Satriawan,  I.  K.,  2015., Tanaman  Obat Sembuhkan  Penyakit  Untuk  Sehat .  (I.  N.  G.  Antara,  Ed.).  Denpasar:  Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat Universitas Udayana.
[3]. Asih,  A.,  2014  ., Antihelmintik  Infusa  Daun  Andong  (Cordyline  fruticosa)  terhadap Ascaridia galli secara In vitro ., Universitas Atma Jaya Yogyakarta.
[4]. Katzung, B. G., 2004., Farmakologi Dasar dan Klinik. Edisi XIII. Buku 3. Translation of Basic and Clinical Pharmacology. Eight Edition Alih bahasa oleh Bagian Farmakologi Fakultas kedokteran Universitas Airlangga. Jakarta: Salemba Medika.
[5]. Fitriyani, A., L. Winarti, St. Muslichah dan Nuri., 2011., Uji Antiinflamasi Ekstrak Metanol Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav ) Pada Tikus Putih . Majalah Obat Tradisional 16(1) :34-42
[6]. Wijaya  Leni,  Irsan  Saleh,  Theodorus  Theodorus,  Salni  Salni.,  2015., Efek Antiinflamasi  Fraksi  Daun  Andong  (Cordyline  Fruticosa  L)  Pada  Tikus  Putih  Jantan (Rattus  Norvegicus)  Galur  Spraque  Dawley .  Artikel  penelitian  Depatermen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya.
[7]. Abdul Sani, N. F. et al. (2014) ‘ Effect of the combination of gelam honey and ginger on oxidative stress and metabolic profile in streptozotocin-induced diabetic sprague-dawley rats’,  BioMed  Research  International .  Hindawi Publishing  Corporation,  2014(Dm). doi: 10.1155/2014/160695
[8]. Harbone,  J.B.,  1987, Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Moderen  Menganalisis Tumbuhan , Diterjemahkan Oleh Kosasisih Padmawinata dan Imam Sudiro., Edisi I, 9-10, ITB. Bandung Hal.
[9]. Harmita.  2004. Petunjuk  Pelakasanaan  Validasi  Metode  dan  Cara  Perhitungannya . Majalah Ilmu Kefarmasian, 1 (3), 117-135
[10]. Departemen Kesehatan Republik Indonesia (Depkes RI)., 2000., Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Jakarta.
[11]. Towiyah, Ari Widiyantoro, Lia Destiarti., 2018., Karakterisasi Flavonoid Dari Fraksi Etil  Asetat  Daun  Tanaman  Andong  (Cordyline  fruticosa)  dan  Aktivitasnya  Terhadap Plasmodium  falciparu., Program  Studi  Kimia,  Fakultas  MIPA,  Universitas Tanjungpura. 34-39.
[12]. Gandjar,  I.G.,  dan  Rohman,  A.,  2012., Analisis  Obat  Secara  Spektrofotometri  dan Kromatografi . Yogyakarta : Pustaka Pelajar [13]. Dian  Kartikasari,  Adhysty  Kharisma,  Paula  endang.,  2019., Penentuan  Kadar Flavonoid  Pada  Ekstrak  Etanol  Daun  Andong  Merah  dan  Andong  Hijau .,  Akademi Farmasi Pontianak.
[14]. Pavia,  D.L.,  Lampman,  G.M.,  Kriz,  G.S.,  and  Vyvyan,  J.R.,  2009 ,  Introduction  to Spectroscopy, 4th Edition, Brooks/Cole Cengage Learning, United State of America.
[15]. Sastrohamidjojo,H.,  2002, Kromatografi ,  Edisi  Kedua,  26-32,  Penerbit  Liberty Yogyakarta, Yogyakarta.
[16]. Hitner,  H.,  Nagle,  B.  2012. Pharmacology  :  An  Introduction .  6th  ed.  New  York  : McGraw Hill, p296-298.
[17]. Santoso S. 2008. Panduan Lengkap Menguasai Statistik dengan SPSS 16. PT. Elex Media Komputindo. Jakarta; 237-247.