## PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK KUNYIT (CURCUMA LONGA) TERHADAP EKSPRESI SEL GOBLET PADA KONJUNGTIVA TIKUS (RATTUS NOVERGICUS) YANG DIINDUKSI OVALBUMIN
Wenna  Valentine  Puspitasari 1 ,  Yuliono  Trika  Nur  Hasan 2 ,  Halida  Nelasari 3 Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Muhammadiyah  Malang Jl.  BendunganSutami  188  A  Malang,  65145
Email  :  valentinewenna@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Konjungtivitis merupakan sutau peradangan konjungtiva yang ditandai dengan dilatasi pembuluh darah sehingga konjungtiva menjadi hiperemi, edema dan dapat disertai adanya discharge. Curcumin merupakan bahan aktif dari kunyit yang memiliki manfaat sebagai anti alergi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak kunyit ( Curcuma longa ) terhadap ekspresi sel goblet pada konjungtiva tikus yang diinduksi ovalbumin. Penelitian ini merupakan penelitian True experimental dengan post  test  only  group  design. Sampel  dibagi  dalam  empat  kelompok  perlakuan  yang  diberi  ekstrak  kunyit dengan dosis masing-masing 35 mg/200grBB, 70 mg/200grBB, 140 mg/200grBB secara ip pada hari ke 15 dan 18 satu jam sebelum pemberian ovalbumin serta satu kelompok kontrol positif yang hanyadiberi ovalbumin padaharike 0,7,15 dan 18. Analisis data menggunakan Oneway Anova, bonferonni, kolerasi dan regresi. Ekstrak kunyit dapat menurunkan jumlah sel goblet secarabermakna (ANOVA p=0,000). Terdapathasilujiregresi linier sebesar  70,0%. Dosis minimal yang menunjukkan efek signifikan adalah 70 mg/kgBB. Ekstrak kunyit berpengaruh terhadap penurunan jumlah sel goblet pada konjungtiva tikus  ( Rattusnorvegicus) yang  diinduksi  ovalbumin
Kata  kunci  : Konjungtivitis Alergi,  Kurkumin,  Ovalbumin

## ABSTRACT
Conjunctivitis  is  an  inflammation  disease  in  conjunctiva  that  marked  dilatation  of  blood  vessels  become  hyperemia,  edema  and accompanied  by  discharge.  While  curcumin,  active  ingredients  found  in  Turmeric  has  anti  allergy  effect.The  purpose  this  study  were  to determine the influence of  Turmeric extract (Curcuma longa) towards Common Rat’s Ovalbumin Conjunctiva’s Goblet Cell.This study were true experimental with post test only control group design. Sample were devide into 4 groups and each were given 35 mg/200grBB, 70 mg/ 200grBB, 140 mg/200grBB of turmeric extract via intraperitoneum on day 15 and 18  one hour before ovalbumin topical administration. While  one  positive  control  group  were  given  ovalbumin  on  day  0,7,15,  and  18.  Analysis  done  using  One  Way  Anova,  bonferonni,  and regression. Turmeric extract had significantly reduce the number of  goblet cell (ANOVA p=0,000). 70,0% as linear regression test result. Minimal  dose  with  significant  effect  is  70  mg/200grBB.Turmeric  extract  influence  the  decreased    numer  of  goblet  cell  on  the  conjunctiva of  Common  Rat  (Rattusnorvegicus)  Ovalbumin-induced  Allergic  Type.
Keywords  : Conjunctivitis  Allergy,  Curcumin,  Ovalbumin

## 20 VOLUME 12 NOMOR 1 JUNI TAHUN 2016

## PENDAHULUAN
Kornea dan konjungtiva merupakan bagian paling  superficial  dari  mata  yang  rentan  terhadap berbagai  macam  patogen  dari  lingkungan.  Salah satu  penyakit  yang  sering  mengenai  mata  adalah konjungtivitis.  Konjungtivitis  merupakan  suatu peradangan konjungtiva yang ditandai dengan dilat asi pembuluh darah sehingga konjungtiva menjadi hiperemi,  edema  dan  dapat  disertai  adanya discharge.(Azari  AA,  &  Barney  NP,  2013) Menurut Ramadhanisa A (2014), insidensi konjungtivitis  di  Indonesia  saat  ini  menduduki tempat kedua (9,7%) dari 10 penyakit mata utama. Konjungtivitis  alergi  pada  umumnya  bersifat self limited tetapi  dalam  perkembangannya  bisa mengakibatkan kehilangan penglihatan secara perma nen atau kerusakan struktural dari konjungtiva seperti pada atopic keratokonjungtivitis (American Academy of  Ophthalmology, 2013) . Penggunaan obat antibiotik dan  kortikosteroid  sebagai  terapi  penyakit  mata makin  luas  yang  dalam  jangka  panjang  dapat menyeb  abkan  katarak  subskapsular  dan  dapat meningkatkan tekanan  intraocular. (6) .Hazarika AK, 2015  Oleh  sebab  itu  diperlukan  pengobatan  lain yang  mempunyai  efek  terapi  maksimal  namun minimal  toksisitas  dan  efek  sampingnya  salah satunya  adalah  kurkumin. (Singletary  K,  2010) Kurkumin  merupakan  bahan  aktif  dari kunyit yang dapat menghambat sejumlah mediator inflamasi yaitu leukotrien. Menurut penelitian Dartt DA  (2011)  menunjukkan  bahwa  reaksi  inflamasi menstimulasi  sekresisel  goblet  melalui  leukotrien yang diproduksi oleh asam arakidonat. (Dartt, et al, 2011) . Sementara kandungan anti inflamasi kunyit dapat  menghambat  asam  arakidonat  melalui down regulation pada  jalur cyclooxygenase dan lypoxygenase. Dengan  demikian  kurkumin  dapat  menurunkan ekspresi  sel  goblet. (Jurenka  JS,  2009)

## METODE
Desain  Penelitian Desain  penelitian  ini  merupa  kan Truec Experimental dengan post test only group design. Penelitian dilakukan  di  Laboratorium  Biomedik  dan Farmakologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas Muhammadiyah  Malang  selama  1  bulan.

## Penginduksian Tikus
Hewan  coba  dibagi  menjadi  4  kelompok yaitu,  kelompok  K(+)  dan  3  kelompok  perlakuan (P1,  P2,  dan  P3).  Keempat  kelompok  tersebut diberi  ovalbumin+ALUM  secara  ip  ( intraperitoneal ) pada hari ke 0 dan hari ke 7, selanjutnya diberikan Ovalbumin secara topikal pada sakkus konjungtiva pada  hari  ke  15  dan  hari  ke  18.
Pembuatan  dan  Pemberian  Ekstrak  Kunyit Timbang serbuk rimpang kunyit sebanyak 100gr,  masukkan  serbuk  yang  telah  ditimbang  ke dalam  toples,  diratakan  dan  sambil  ditambahkan pelarut  etanol  96%  sampai  bahan  terendam,  total yang  ditambahkan  sebanyak  1  L.  Tutup  toples dengan  rapat  selama  72  jam  dam  dishaker di  atas shaker digital 50 rpm, kemudian saring ekstrak cair dengan penyaring kain dan tampung ekstrak dalam erlenmeyer.  Hasil  ekstrak  cair  diuapkan  dengan menggunakan  rotary  evaporator  selama  1  jam. Ekstrak cair yang dihasilkan kemudian dievaporasi /  diuapkan  kembali  diatas  water  bath  selama  2 jam.  Didapatkan  ekstrak  kunyit  cair  sebanyak  8 gram. Ekstrak yang sudah dibuat diberikan pada ketiga  kelompok  perlakuan  dengan  dosis  masing- masing  yaitu  35mg/200gBB,  70mg/200gBB,  dan 140mg/200gBB  yang  diberikan  secara  ip ( intraperitoneal) pada hari ke 15 dan hari ke 18 yang diberikan  1  jam  sebelum  pemberian  ovalbumin secara  topikal.
Evaluasi  Sel  Goblet Jaringan  konjungtiva  tikus  diambil  pada hari  ke  18,  sebelumnya  tikus  dianestesi  terlebih dahulu  dengan  kloroform  lalu dilanjutkan  dengan penghitungan ekspresi sel goblet pada konjungtiva dan dilanjutkan dengan analisis data.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penghitungan jumlah sel goblet pada konjungtiva tikus ditunjukkan hasil pada tabel dibawah ini :
Analisis One Way Anova. Dari uji One Way Anova didapatkan  nilai  0,000  artinya  terdapat  perbedaan jumlah  sel  goblet  antar  kelompok.Uji  Post  Hoc Bonferroni  dilakukan  untuk  mengetahui perbandingan  jumlah  sel  goblet  antara  setiap kelompok perlakuan, dengan hasil sebagai berikut :
Gambar  1.Perbedaan  Jumlah  Ekspresi  Sel  Goblet  Tikus  (Pengecatan  HE  dengan  Pembesaran  400x)  pada konjungtiva  tikus  pada  berbagai  kelompok.  Pada  kelompok  perlakuan  III,  yaitu  kelompok  yang  diberikan ekstrak kunyit sebesar 140 mg/200 grBB (Gambar D) paling sedikit dibandingkan dengan kontrol positif yang hanya  diberikan  ova  dan  alum  (Gambar  A),  kelompok  perlakuan  I,  yaitu  kelompok  yang  diberikan  ekstrak kunyit sebesar 35 mg/200 grBB  (Gambar  B),  kelompok perlakuan II yaitu  kelompok yang  diberikan ekstrak sebesar  70  mg/200  grBB  (Gambar  C)
Data-data  yang  diperolah  dilakukan  uji normalitas  ( Saphiro-Wilk )  dan  didapatkan  nilai 0,345, selanjutnya dilakukan uji homogenitas ( Levene ) dan didapatkan nilai 0,354. Dari uji normalitas dan homogenitas didapatkan nilai yang signifikan karena nilai  p>0,05sehingga  dapat  dilanjutkan  dengan
Kelompok JumlahSel Mast Rata-rata 1 2 3 4 5 6 7 K Positif 25 22  24 23 24 27 23 24 P1 (35mg/200gBB) 25 23  22 24 22 21 22 22,7 P2 (70mg/200gBB) 20 20  21 19 20 21 20 20,1 P3 (140mg/200gBB) 18 15  13 14 17 16 13 15,1
Perbandingan antar Kelompok Signifikansi Kesimpulan K+ P1 1.000 Tidak Berbeda signifikan P2 0.031 Berbeda signifikan P3 0.000 Berbeda signifikan P1 P2 0.111 Tidak Berbeda signifikan P3 0.000 Berbeda signifikan P2 P3 0.014 Berbeda signifikan

## 22 VOLUME 12 NOMOR 1 JUNI TAHUN 2016
Tabel  2.  Uji  Post  Hoc Bonferroni Hasil  Uji Post  Hoc didapatkan  adanya  perbedaan jumlah ekspresi sel goblet antara kelompok kontrol positif  dengan  kelompok  perlakuan  yang ditambahkan  dengan  ekstrak  kunyit.  Hal  ini dikarenakan OVA yang merupakan protein alergenik jika  diberikan  secara  inhalasi,  oral,  maupun intraperitoneal  terbukti  dapat  menyebabkan terjadinya respon imun IgE spesifik, Th2, produksi sitokin  dan infiltrasi eosinofil ke dalam konjungtiva. Hal ini terjadi karena OVA akan memicu APC yang akan  didegradasi  menjadi  peptida-peptida  dan selanjutnya    akan  dipresentasikan  pada  sel  Th2. Teraktivasinya  Th2  akanmenginduksiproduksi mediator  inflamasiseperti  histamine,  leukotrien, dansitokin . (Subijanto  AA  &  Diding  HP,  2008)
Berdasarkan table analisis uji Post Hoc diatas dapat menjelaskan bahwa terdapat perbedaan penurunan jumlah  ekspresi  sel  goblet  yang  bermakna  antara setiap  kelompok  perlakuan  kecuali  kontrol  (+) dengan  P1,  dan  P1  dengan  P2.  Tidak  didapatkan perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol (+)  dengan  kelompok  perlakuan  1  dikarenakan dosis  pemberian  ekstrak  kunyit  b  elum  mencapai rentang  efek  terapi.  Hal  ini  juga  sesuai  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Ram et  al (2003) yang  menunjukkan  bahwa  marmot  yang  diinduksi OVA  kemudian  diberikan  ekstrak  kunyit  sebesar 200  mg  (setara  dengan  45,6  mg/200grBB  tikus) signifikan dalam menghambat re aksi hipersensitifitas pada  alergi  respiratori  yang  ditunjukkan  dengan penurunan  jumlah  Ig  Edaneosinofil. (Ram  A,  Das M, Ghosh B, 2003) Sementara pada pe rlakuan dosis kurkumin  masih  dibawah  45,6  mg.  Hal  inijuga dipengaruhi  karena  cara  penginduksiannya  melalui intraperitoneal. Meskipun intraperitoneal merupakan rute  pemberian  secara  parenteral,  tetapi  sifat farmakokinetiknya menyerupai de ngan pemberian secara  peroral.  Oleh  sebab  itu  zat  intra  peritoneal akan  mengalami  metabolism  hepatic  sebelum mencapai  sirkulasi  sistemik.  Sehingga  dosis  yang diperlukan  juga  harus  lebih banyak.
Pada  kelompok  perlakuan  2  dan  3  didapatkan perbedaan  yang  signifikan  artinya  dosis  terse  but sudah  memberikan  efek  penurunan  terhadap ekspresi sel goblet secara bermakna. Hal ini terjadi karena  kurkumin  yang  terkandung  dalam  kunyit mampu  menghambat  COX-2  melalui  inaktivasi NF-kB. NF-kB merupakan faktor
transkripsieukariotik  yang  terlibat  dalam  regulasi peradangan,  proliferasisel,  transformasi  dan tumorigenesis.  Penekanan  pada  NF-kB  akan menurunkan  produksi  COX-2  dan  melalui down regulation ini asam arakidonat akan turut terhambat. (Jurenka JS, 2009) Menurut penelitian Darrt (2011) menunjukkan bahwa CysLT menstimulasi sekresisel goblet  melalui  LTD4  yang  diproduksi  oleh  asam arakidonat. (Dartt,  et  al,  2011)
Berdasarkan  ketiga  dosis  ekstrak  kunyit  diatas, pemberian  ekstrak  mempengaruhi  pengaruh  yang berbeda  terhadap  jumlah  ekspresi  sel  goblet. Semakin tinggi dosis ekstrak kunyit yang diberikan maka  jumlah  sel  goblet  akan  semakin  rendah. Perbandingan tersebut disimpulkan bahwa dosis ke 3  mampu  menurunkan  ekspresi  sel  goblet  lebih besar  dari  2  dosis  lainnya  karena  kelompok perlakuan  3  diinduksi  ekstrak  kunyit  paling  besar. Hal  ini  terjadi  karena  kurkumin  yang  terkandung dalam kunyit menghambat reaksi anafilaktik sistemik in  vitro  dan  anti dinitrophenylimmunoglobulin  E (Anti DNP IgE). Jika reaksi ini dihambat maka mediator- mediator  farmakologis  aktif,  salah  satunya  adalah leukotrien  sebagai  stimulus  sekresisel  goblet  juga turut  terhambat. (Baratawidjaja  KG  &  Rengganis  I, 2013). Dari uji regresi linier didapatkan nilai Adjusted R  square sebesar  70%  sebanyak  30%  lainnya merupakan zat-zat atau faktor lain yang tidak diteliti namun juga dapat berpengaruh terhadap penurunan jumlah sel goblet, yaitu faktor endogen dan eksogen. Faktor endogen antara lain berupa adanya leukosit dan  turunannyadansellainnya  yang  mempunyai peranan  dalam  pertahanan  seluler  dan  humoral terhadap  benda-benda  asing  serta  kelibatan  TNF- á. (5) Effendi Z, 2003 Selain itu menurut Serhan CN (2008)  leukosit  bersamaan  dengan  lipoksin  dan mediator  kimia  endogen  yang  disebut  dengan resolvin  dan  proteksin  men  gendalikan  respon inflamasi  lokal  pada  berbagai  tingkatan  untuk merangsang  perbaikan  jaringan. (Serhan  CN,  2008) Sementara  faktor  eksogen  berupa  (1)  Faktor lingkungan berupa kelembapan dan paparan cahaya selama  masa  perlakuan  yang  akan  meningkatkan respon  stress.  (2)  Faktorgenetik.  (3)  Faktor  dari kandungan ekstrak kunyit. Secara keseluruhan dari hasil  penelitian  ini  didapatkan  bahwa  pemberian ovalbumin  selama  18  hari  dapat  menyebabkan reaksi alergi yang bermakna pada konjungtiva tikus dan  dengan  pemberian  ekstrak  kunyit (Curcuma
PENGARUH PEMBERIAN EKTRAK KUNYIT TERHADAP EKSPRESI SEL GOBLET 23 longa) dapat  menurunkan  jumlah  sel  goblet  tikus yang diinduksialergen (OVA).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  :
1.  Ada pengaruh pemberian ekstrak kunyit ( Curcuma longa )  terhadap  ekspresi  sel  goblet  pada konjungtiva tikus ( Rattus novergicus ) yang diinduksi OVA
2.  Ada perbedaan penurunan jumlah ekspresi sel goblet  pada  masing-masing  kelompok perlakuan. kelompok P1 (3,46%), P2 (17,87%), P3 (37,7%).
3.    Dosis  minimum  yang  dapat  memberikan  efek penurunan terhadap jumlah ekspresi sel goblet pada penelitian ini adalah pada perlakuan dosis 2  (70  mg/200grBB).

## DAFTAR  PUSTAKA
American  Academy  of   Ophthalmology,  2013, Conjunctivitis, Preffered Practice Pattern, pp.1-
48. Azari AA, & Barney NP, (2013), Conjunctivitis: A Systematic  Review  of  Diagnosis  and Treatment. JAMA Clinical Review & Education,
310 (16), pp. 1721 - 1729.Borges AS, 2013, Anatomy  of   Ciliary  Body,  Ciliary  Processes, Anterior  Chamber  Angle  and  Collector  Vessels, INTECH,  pp.  1-13. Baratawidjaja  KG  &  Rengganis  I,  2013, Imunologi Dasar, 10 th edn,  Fakultas  Kedokteran
Universitas  Indonesia,  Jakarta,  pp.375-378. Dartt, et al, 2011 DA, Hodges RR, Li Dayu, et al, 2011, Conjunctival Goblet Cell Secretion Stimulated by Leukotrienes is Reduced by Resolvins  D1 and E1  to  Promote  Resolution  of Inflammation, The Journal  of   Immunology,  186,  pp.  4455- 4466. Effendi  Z,  2003, PerananLeukositSebagai  Anti InflamasiAlergikdalamTubuh, Digitized by USU Digital  Library,  1,  pp.1-8. Hazarika  AK,  2015, Benefits  and  Risk  of   Topical Corticosteroid  in  The  Management  of  Ocular Inflammation, Sikkim  Manipal  University Medical  Journal,  2(2),  pp.  295-305. Jurenka  JS,  2009, Anti-inflammatory  Properties  of Curcumin, a Major Constituent of Curcuma longa
:  A  Review  of  Preclinical  and  Clinical  Research, Alternative  Medicine  Review,  14,  pp.  141- 153. Ram A, Das M, Ghosh B, 2003, Curcumin Attenuates Allergen-Induced  Airway  Hyperresponsiveness  in Sensitized  Guinea  Pigs ,  Biol  Pharm  Bull.  26, pp.1021–1024. Ramadhanisa A, 2014, Conjunctivitis Bacterial Treatment in  Kota  Karang ,  Medula  Unila,  3,  pp.  1-7. Serhan  CN,  Chiang  N,  Dyke  TEV,  2008, Resolving Inflammation : Dual Anti-Inflammatory and Pro- resolution  Lipid  Mediator, Nature  Review Immunology,  8,  pp.  349-361. Singletary K, 2010, Turmeric an Overview of  Potential Health Benefits, Nutrition Today, 45, pp. 216- 225.
Subijanto AA & Diding HP, 2008, Pengaruh Minyak Biji  Jintan  Hitam  (Nogella  sativa  L.)