## PEMANFAATAN LIMBAH CANGKANG KEONG SAWAH
( Bellamya javanica ) UNTUK SINTESIS HIDROKSIAPATIT DENGAN MODIFIKASI PORI MENGGUNAKAN PATI UBI JALAR
Yunida Indriani, Iswadi, dan Nurul Fuadi Jurusan Fisika Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Alauddin Makassar Email: nidaindriani25@gmail.com
Abstract: The  research  has  been  carried  out  by  utilizing  pore  conch  shell waste  using  sweet  potato  starch  to  make  porous  Hydroxyapatite  using porogen  sweet  potato  starch  by  precipitation  method  and  to  determine  the bioactive  properties  of  apatite  hydroxy  and  the  growth  of  apatite  crystals using  Simulated  Body  Fluid  (SBF).  This  study  used  wet  precipitation method.  The  results  of  the  analysis    using  XRD  show  that  the  HAp  phase has been formed. The morphology of HAp based on SEM results shows that HAp  pores  modification  is  produced  in  the  composition  of  HAp  added  with 20%  sweet  potato  starch  with  6  hour  sonication  wich  results  in  pore  size from the range 0,23-3,37 µm. This result is not correlate with the theory that the best pore modification is produced in the composition of HAp added with 30% starch.  This  is  because  there are  difference characters  of each sweet potato  used.  The  result  of in  vitro tests  on  synthesis  HAp  samples  and  7 days porous HAp have shown the growth of apatite crystals in SBF solution media (Simulated Body Fluid).
Key words: Hydroxyapatite, Rice Conch Shell, XRD, Pore Modification .

## 1. PENDAHULUAN
Kerusakan tulang sangat mengganggu fungsi tubuh manusia karena tulang merupakan  komponen  yang  penting  bagi  manusia.  Sejauh  ini  pemenuhan  akan kebutuhan  untuk  menangani  kerusakan  tulang  dilakukan  dengan  menggunakan bahan-bahan  impor.  Mineral  pengganti  tulang  yang  umum  digunakan  di antaranya allograft, autograft, dan xenograft. Ketiga material ini biasanya tersedia dalam  jumlah  terbatas,  dengan  adanya  keterbatasan  tersebut  maka  memicu perkembangan riset dalam bidang material dan sampai saat ini studi biomaterial sintetik  terus  berkembang.  Biomaterial  sintetik  yang  berhasil  diproduksi  oleh negara  lain  masih  memiliki  harga  yang  tinggi.  Oleh  karena  itu  perlu dikembangkan produksi biomaterial di tanah air.
Seiring  dengan  perkembangan  teknologi  saat  ini  telah  berkembang biomaterial pengganti tulang yang umum digunakan dari limbah-limbah yang ada. Biomaterial  pengganti  tulang  pada  umumnya  berasal  dari  senyawa  Kalsium fosfat  diantaranya  Hidroksiapatit  (Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH) 2 )  dan  Trikalsium  fosfat
(Ca 3 (PO 4 ) 2 )  karena kedua material  ini  memiliki  komposisi  kimia  yang  mendekati dengan komponen-komponen yang terdapat di dalam tulang.
Sumber  Kalsium  yang  dipilih  dalam  penelitian  ini  adalah  cangkang  dari keong  sawah  yang  diperoleh  dari  area  persawahan  dekat  perumahan  Villa Samata  Sejahtera  (Gowa,  Sulawesi  Selatan).  Keong  sawah  (marga Bellamya) termasuk  ke  dalam  kelompok Gastropoda yang  hidup  di  perairan  dangkal  air tawar.  Selain  cangkang  keong  sawah  salah  satu  bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  pati  ubi  jalar.  Dalam  penelitian  ini,  pati  ubi  jalar  berperan sebagai  salah  satu  bahan  untuk  memodifikasi  pori.  Dimana  Hidroksiapatit  yang memiliki biokompatibilitas yang baik ialah HAp yang dapat melakukan proliferasi sel  tulang  dengan  baik.  Hidroksiapatit  yang  seperti  ini  biasanya  memiliki  pori yang  besar  dalam  jumlah  yang  banyak  [4].  Hidroksiapatit  berpori  ini  dapat dimodifikasi  dengan  menggunakan  porogen,  salah  satunya  adalah  pati. Sehingga  hal  inilah  yang  menjadi  dasar  penggunaan  ubi  jalar.  Selain  itu,  pati memiliki sifat biokompatibel, tidak beracun, dan biodegradabel.  Sumber pati baik digunakan  untuk  aplikasi  biomedis  karena  memiliki  sifat  biodegradabel, biokompatibel,  dapat  larut  dalam  air,  dan  harganya  murah  serta  mampu memperbanyak dan memperbesar ukuran pori.

## 2. METODE PENELITIAN
Bahan  utama  sintesis  Hidroksiapatit  adalah  cangkang  keong  sawah ( Bellamya javanica ), ubi jalar putih, aquabides, air, HCl, (Ca(NO 3 ) 2 , (NH 4 ) 2 HPO 4 , NaCl,  NaHCO 3 ,  KCl,  Na 2 HPO 4 .2H 2 O,  MgCl 2 .6H 2 O,  CaCl 2 .2H 2 O,  Na 2 SO 4 ,  dan (CH 2 OH) 3 CNH 2 .  Sintesis  dengan  metode  Presipitasi  basah  dilakukan  dengan  6 tahapan  yaitu:  Tahapan  pertama  adalah  identifikasi  dan  preparasi  cangkang keong  sawah  yang  terdiri  dari  pembersihan,  pengeringan,  penggilingan,  dan kalsinasi. Tahap kedua adalah karakterisasi XRD dan penentuan kadar Kalsium. Karakterissi  menggunakan  XRD  dilakukan  pada  sampel  keong  sawah  sebelum dan  sesudah  kalsinasi.  Abu  hasil  kalsinasi  keong  sawah  kemudian  dibiarkan kontak  dengan  udara  (yang mengandung  uap  air)  selama  1  minggu  pada  suhu kamar agar membentuk senyawa Ca(OH) 2 . Pengukuran kadar kalsium cangkang keong  sawah  meliputi  preparasi  sampel,  preparasi  deret  standar  dan  preparasi blanko.
Tahap  ketiga  adalah  sintesis  HAp.  Pada  tahap  awal  sintesis,  Suspensi Ca(OH) 2 0,5  M  disiapkan  dari  serbuk  Ca(OH) 2 (abu  hasil  kalsinasi  yang  telah dihidrasi)  dan  aquabides.  Larutan  (NH 4 ) 2 HPO 4 0,3  M  ditambahkan  kedalam suspensi Ca(OH) 2 pada suhu 40 ± 2 o C dengan kecepatan 5 rpm, dan kecepatan penetesan  6  mL/menit.  Larutan  diaduk  dengan  menggunakan  magnetic  stirrer kemudian didekantasi 1 malam pada suhu kamar. Setelah itu, larutan disonikasi dengan 3 variasi waktu, yaitu selama 2, 4, dan 6 jam. Endapan disentrifuga pada 4500  rpm  selama  15  menit  kemudian  dibilas  dengan  aquabides.  Lalu  endapan dikeringkan  dengan  menggunakan  oven  pada  suhu  100 o C  selama  3  jam. Setelah  kering,  endapan  ditumbuk  halus  dengan  menggunakan  mortar  lalu
dimasukkan  kedalam  tanur  pada  suhu  900 o C  selama  3  jam  30  menit.  Serbuk HAp  dibiarkan  mendingin.  Serbuk  yang  telah  dingin  diidentifikasi  menggunakan XRD [6].
Tahap  keempat  adalah  preparasi  larutan  pati  ubi  jalar  dan  sintesis  HAp berporogen  pati  ubi  jalar.  Ubi  jalar  dicuci  bersih  dan  dikupas  kulitnya  kemudian dicuci  kembali  hingga bersih.  Sebanyak 500 g  ubi  jalar  diblender  sampai  halus, kemudian disaring dan dibiarkan mengendap di dalam wadah selama beberapa jam. Hasil endapan pati dikeringkan dengan menggunakan oven. Metode sintesis HAp beroprogen sama dengan metode sintesis HAp biasa hanya saja dilakukan penambahan  porogen  pati  ubi  jalar  dengan  dua  konsentrasi  larutan  pati  yang berbeda  yaitu  masing-masing  20%  dan  30%.  Kedua  konsentrasi  pati  ini disonikasi selama 6 jam.
Tahap kelima adalah karakterisasi menggunakan SEM degan sampel HAp sintesis,  HAp  porogen  20%,  dan  HAp  porogen  30%.  Tahap  terakhir  adalah preparasi  larutan  SBF  dan  uji in  vitro. Preparasi  larutan  SBF  dilakukan  dengan menembahkan  air  sebanyak  960  mL  diaduk  dengan  menggunakan  magnetik stirrer  pada  suhu  35 o C. Selanjutnya  dimasukkan  bahan-bahan  dengan  urutan sebagai  berikut:  3,2735 g  NaCl  99,5%,  1,1340  g  NaHCO 3 99,5%, 0,1865 g  KCl 99%,  0,0890  g  Na 2 HPO 4 .2H 2 O  99,5%,  0,1525  g  MgCl 2 .6H 2 O  98%,  0,1840  g CaCl 2 .2H 2 O  99%,  0,0355  g  Na 2 SO 4 ,  3,0285  g  (CH 2 OH) 3 CNH 2 99,2%  dan  20  g HCl  1  M.  Agar  bahan-bahan  yang  dimasukkan  dapat  larut  secara  merata, pencampuran  diberi  selang  2  menit  setiap  bahannya  serta  penambahan  HCl  2 tetes per detik.
Uji  in  Vitro  dilakukan  dengan  menimbang  sampel  sebanyak  0,7  g  dan dibuat  dalam  bentuk  pelet,  kemudian  dimasukkan  kedalam  larutan  SBF sebanyak 60 mL. Sampel  yang diuji  yaitu HAp tanpa porogen, HAp berporogen 20%  pati  ubi  jalar  dan  HAp  berporogen 30%  pati  ubi  jalar.  Proses  perendaman dilakukan  dengan  rentang  waktu  yang  telah  ditentukan,  yaitu  selama  7  dan  15 hari.  Hasil  perendaman  larutan  SBF  diambil  20  mL  kemudin  dilakukan penyaringan  larutan  dengan  kertas  saring.  Setiap  sampel  diambil  10  ml  lalu dicampurkan  dengan  aquabides  100  ml  dalam  labu  ukur  dan  dihomogenkan. Pencirian dilakukan dengan menggunakan AAS.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Identifikasi dan preparasi Cangkang Keong Sawah
Hasil  analisis  kandungan Kalsium  pada cangkang  keong  sawah  dilakukan dengan  menggunakan  alat  Spektroskopi  Serapan  Atom  (AAS).  Kandungan Kalsium pada cangkang keong sawah sangat tinggi dan tersimpan dalam bentuk Kalsium karbonat (CaCO 3 ) [7]. Hal ini kurang sesuai dengan analisa kandungan Kalsium  yang  telah  dilakukan.  Analisis  kandungan  cangkang  keong  sawah dilakukan  dengan  pengujian  triplo.  Hasil  analisis  menunjukan  bahwa  kadar Kalsium yang terkandung dalam serbuk cangkang keong sawah adalah sebesar 30%.  Namun  hal  ini  kurang  sesuai  dengan  referensi  yang  menunjukan  bahwa
kandungan  kadar  Kalsium  yang  diperoleh  sebesar  88,54%.  Adanya ketidaksesuaian  ini  disebabkan  oleh  beberapa  faktor  diantaranya  yaitu  kurang tepatnya pengerjaan pada saat preparasi sampel untuk penentuan kadar Kalsium seperti proses pengenceran yang dilakukan berulang kali.
Kandungan  CaCO 3 cangkang  keong  sawah  dapat  diidentifikasi  dengan pencirian  XRD.  Hasil  pencirian  XRD  cangkang  keong  sawah  sebelum  kalsinasi dapat dilihat pada gambar 1:
Gambar 1 : Difraktogram sinar-X cangkang keong sawah sebelum kalsinasi 800
o C selama 4 jam 30 menit
Dari  gambar  di  atas  dapat  dilihat  bahwa  selain  fasa  Kalsium  karbonat (CaCO 3 ),  di  dalam  cankang  keong  sawah  sebelum  kalsinasi  juga  terdapat  fasa Kalsium  fosfat  (Ca 3 (PO 4 ) 2 ).  Fasa  CaCO 3 yang  terbentuk  begitu  dominan  di bandingkan  dengan  fasa  Ca 3 (PO 4 ) 2 .  Dimana  fasa  CaCO 3 menempati  seluruh puncak  dengan  intensitas  rendah  maupun  tinggi  yang  ditunjukkan  oleh  puncak sudut  2θ  sebesar  27,31 o ,  46,08 o ,  dan  56,57 o .  Hal  ini  sesuai  dengan  teori  yang mengatakan  bahwa  Kalsium  yang  terkandung  dalam  cangkang  moluska umumnya  berupa  Kalsium  karbonat  yang  tergabung  dalam  struktur  cangkang sebagai  kristal  kalsit  dan  aragonite  [7].  keberadaan  fasa  Ca 3 (PO 4 ) 2 ditunjukan pada sudut 2θ sebesar 19,63 o , 52,94 o , dan 56,57 o .
Tahap  berikutnya  serbuk  cangkang  keong  sawah  dilakukan  penghilangan komponen organiknya melalui proses kalsinasi. Proses kalsinasi bertujuan untuk mengubah  Kalsium  karbonat  (CaCO 3 )  menjadi  Kalsium  oksida  (CaO).  Hasil kalsinasi  diharapkan  akan  terbentuk  CaO  yang  kemudian  akan  dikonversi menjadi  Ca(OH) 2 .  Proses  konveksi  dilakukan  dengan  cara  membiarkan  kontak dengan udara  (yang mengandung  uap  air)  selama  1 minggu  pada suhu  kamar. Untuk memastikan pembentukan Ca(OH) 2, abu dianalisis dengan difraksi sinar-X.
Gambar 2 : Difraktogram sinar-X cangkang keong sawah setelah kalsinasi
800 o C selama 4 jam 30 menit dan hidrasi 1 minggu
Hasil  analisis  difraksi  sinar-X  pada  sampel  cangkang  keong  sawah menunjukan adanya fasa Ca 3 (PO 4 ) 2 , CaCO 3, dan CaO. Akan tetapi fasa Ca(OH) 2 belum  terbentuk  diakibatkan  karena  pada  saat  proses  hidrasi  kurang  berkontak langsung dengan udara yang mengandung uap air.

## Sintesis Hidroksiapatit
Untuk  proses  sintesis  Hidroksiapatit  (Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH 2 ))  menbutuhkan sumber Kalsium dan Fosfor. Sumber Kalsium yang digunakan pada penelitian ini berasal dari Ca(OH) 2 hasil kalsinasi dan hidrasi cangkang keong sawah. Sumber Fosfor  yang  digunakan  berasal  dari  larutan  (NH 4 ) 2 HPO 4. Jumlah  komposisi Ca(OH) 2 dan  (NH 4 ) 2 HPO 4 ditentukan berdasarkan  hasil  perhitungan stokiometri sehingga  menghasilkan  rasio  konsentrasi  Ca/P  sebesar  1,67.  Reaksi pembentukan HAp pada penelitian ini adalah:
10Ca(OH) 2(susp) + 6(NH 4 ) 2 .HPO 4(aq) → Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH) 2(s) + 6H 2 O (aq) + 12NH 4 OH (aq)
Sinteis  HAp  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini  adalah  sintesis  HAp  tanpa porogen.  Sintesis  HAp  tanpa  porogen  dilakukan  dengan  tiga  variasi  waktu sonikasi  yaitu  2,  4,  6  jam  (gambar  3).  Perlakuan  variasi  waktu  dilakukan  untuk melihat  hasil  sintesis  HAp  terbaik.  Proses  sonikasi  dilakukan  untuk menghomogenkan  antara  Kalsium  fosfat  yang  telah  dicampurkan,  sedangkan sentrifugasi bertujuan untuk memisahkan endapan.
(a)
(b)
(c)
Gambar 3 : Difraktogram sinar-X Hap tanpa porogen (a) sonikasi 2 jam (b) sonikasi 4 jam (c) sonikasi 6 jam
Berdasarkan  difraktogram  sinar-X  pada  gambar  3,  secara  keseluruhan telah  terbentuk  fasa  HAp.  Lamanya  waktu  sonikasi  mempengaruhi  fasa  HAp yang  dihasilkan.  Terlihat  dari  hasil  anlisis  difraktogram  sinar-X  menunjukkan semakin  lama  waktu  sonikasi,  fasa  HAp  yang  dihasilkan  semakin  dominan. Gambar  3  (a)  merupakan  hasil  pencirian  XRD  sintesis  HAp  tanpa  porogen
dengan  waktu  sonikasi  2  jam.  Adapun  fasa  yang  muncul  yaitu  HAp (Ca 10 (PO 4 ) 6 (OH) 2 ),  CaCO 3 ,  dan  Ca(OH) 2 .  Fasa  HAp  sonikasi  2  jam  memiliki puncak tertinggi pada sudut 2θ sebesar 31,78 o , 46,39 o , dan 49,18 o . Keberadaan fasa  pengotor  seperti  CaCO 3 sebelumnya  sudah  ada  pada  cangkang  keong sawah  hasil  kalsinasi  dan  hidrasi,  sehingga  keberadaan  fasa  ini  dapat mengganggu  proses  pembentukan  Kristal  apatit.  Selain  itu,  keberadaan  fasa Ca(OH) 2 diperkirakan  karena  proses  pencampuran  antara  Ca(OH) 2 dan (NH 4 ) 2 HPO 4 kurang  optimal.  Keberadaan  fasa  selain  HAp  pada  difraktogram dapat  menurunkan  kemurnian  HAp.  Akan  tetapi,  hasil  yang  diperoleh  dapat dikatakan  memiliki  kemurnian  yang  cukup  tinggi  disebabkan  sebagian  besar difraktogram menunjukan fasa HAp.
Fasa  yang  terbentuk  pada  HAp  tanpa  porogen  dengan  waktu  sonikasi  4 jam ditunjukkan oleh gambar 3 (b). Hasil pencirian XRD memunculkan pengotor yang sama dengan HAp tanpa porogen waktu sonikasi 2 jam. Intensitas tertinggi HAp dengan waktu sonikasi 4 jam berada pada puncak sudut 2θ sebesar 31,82 o , 32,35 o , dan 32,95 o .
Hasil  pencirian  XRD  HAp  tanpa  porogen  dengan  waktu  sonikasi  6  jam dapat  dilihat  pada  gambar  3  (c).  Hasil  difraktogram  menunjukkan  fasa  yang terbentuk  dominan  HAp.  Fasa  HAp  terlihat  pada  puncak  sudut  intensitas  tinggi maupun  rendah.  Intensitas  HAp  tertinggi  ditunjukkan  oleh  puncak  sudut  2θ sebesar  28,95 o ,  31,87 o ,  dan  33,02 o .  Fasa  pengotor  tidak  ditemukan  lagi  pada hasil  difraktogram  XRD.  Hal  ini  diduga  karena  pengaruh  perlakuan  waktu sonikasi yang lebih lama. Sehingga dapat dikatakan bahwa semakin lama waktu sonikasi maka proses reaksi antara Ca(OH) 2 dan (NH 4 ) 2 HPO 4 semakin homogen dan  sempurna.  Selain  itu,  kemampuan  sonikasi  dalam  menghomogenkan senyawa memudahkan proses penghilangan pengotor saat proses kalsinasi.
Berdasarkan  variasi  waktu  sonikasi  2,  4,  dan  6  jam,  dapat  dilihat  bahwa HAp yang memiliki kemurnian paling tinggi ditunjukan oleh waktu sonikasi 6 jam karena lebih sedikit fasa pengotornya. Secara umum, dari ketiga perlakuan waktu sonikasi  tersebut  sudah  terbentuk  HAp.  Hasil  pencirian  difraksi  sinar-X menunjukkan  bahwa  semakin  lama  waktu  sonikasi,  maka  HAp  yang  dihasilkan semakin  murni.  Sehingga  waktu  sonikasi  6  jam  inilah  yang  akan  diaplikasikan pada proses sintesis HAp berpori.

## Sintesis HAp Berporogen Pati Ubi Jalar
Hidroksiapatit sebenarnya telah memiliki pori-pori yang tidak begitu banyak dan  berukuran  kecil.  Salah  satu  cara  untuk  memodifikasi  ukuran  pori  adalah dengan  penambahan  porogen  seperti  pati  ubi  jalar.  Pati  ubi  jalar  memiliki kandungan  amilopektin  yang  cukup  tinggi.  Struktur  amilopektin  yang  memiliki banyak  percabangan  membuat  HAp  berikatan  dengan  amilopektin  dan membentuk struktur HAp berpori.
Hidroksiapatit  berpori  telah  dipergunakan  untuk  pengganti  tulang  buatan. Kegunaan utamanya untuk perbaikan pertumbuhan kembali jaringan yang hilang,
rusak,  atau mengalami  perubahan  (Sopyan et al, 2007).  Pemilihan  pati  sebagai porogen  didasarkan  pada  pati  merupakan  material  yang  mempunyai  sifat biokompatibel,  bioaktif,  sehingga  aman  bagi  tubuh  manusia.  Ubi  jalar  dipilih sebagai sumber pati karena selain cara pembuatannya yang mudah, melimpah di alam,  juga  harganya  yang  relatif  murah.  Pada  penelitian  ini,  dilakukan  variasi penambahan  konsentrasi  pati  ubi  jalar  yaitu  sebesar  20%  dan  30%.  Hal  ini dilakukan agar terdapat perbandingan hasil sintesis HAp berpori yang signifikan. Sintesis  HAp  berporogen  pati  ubi  jalar  dilakukan  dengan  waktu  sonikasi  6  jam agar sampel HAp yang dihasilkan lebih homogen.
Setelah  dilakukan  sintesis  HAp  berporogen  dengan  penambahan  dua konsentrasi  pati,  selanjutnya  dilakukan  pencirian  dengan  menggunakan  SEM. Hidroksiapatit  yang  ditambah  pati  ubi  jalar  dengan  konsentrasi  20% menghasilkan  pori  yang  lebih  besar  dibandingkan  dengan  HAp  yang ditambahakan pati ubi jalar konsentrasi 30%.

## Morfologi HAp
Morfologi Hidroksiapatit dapat dilihat dengan SEM pada sampel HAp tanpa porogen  (sonikasi  6  jam),  ataupun  dengan menggunakan  porogen  pati  ubi  jalar (konsentrasi 20% dan 30%). Karakterisasi HAp ini dapat dilakukan untuk melihat struktur  pori  yang  terbentuk  dari  hasil  sintesis  HAp.  Semakin  besar  ukuran  pori yang terbentuk maka sifat osteokonduktivitas dan kekuatan adsorbsinya menjadi sangat baik sehingga pertumbuhan jaringan tulang baru menjadi semakin cepat [8].  Pori  pada  HAp  berperan  penting  dalam  pertumbuhan  sel  tulang.  HAp  yang memiliki  pori  yang  besar maka  pertumbuhan sel  tulangnya  akan  semakin  cepat dan  sebaliknya  jika  struktur  porinya  berukuran  kecil  maka  akan  memperlambat pertumbuhan sel tulang pada HAp.
Gambar 4 : Hasil analisis SEM HAp sintesis (sonikasi 6 jam) pada perbesaran 10000 ×
Hasil  analisis  SEM  HAp  sintesis  (sonikasi  6  jam)  pada  gambar  di  atas merupakan  hasil  sintesis  yang  menggunakan  Ca(OH) 2 atau  dari  reaksi  hidrasi CaO dari cangkang keong sawah. Pengukuran SEM dilakukan pada perbesaran
10000x  agar  pori-pori  yang  dihasilkan  dapat  terlihat  dengan  jelas.  pada  sampel HAp  tanpa  penambahan  porogen  pati  ubi  jalar  terlihat  bahwa  pori-pori  yang dihasilkan  kurang  seragam  dengan  ukuran  pori  yang  dihasilkan  masih  sangat kecil yaitu sebesar 0,31 – 0,58 µm. hal ini menunjukan bahwa HAp telah memiliki pori walaupun dengan ukuran yang sangat kecil dan dengan distribusi pori masih belum merata.
Gambar 5 : Hasil analisis SEM HAp berporogen pati ubi jalar 20% pada perbesaran 10000 ×
Gambar 5 di atas memperlihatkan hasil foto SEM HAp berporogen pati ubi jalar  20%  dengan  perbesaran  10000x.  Hasil  analisis  SEM  menunjukan  bahwa pori yang dihasilkan sudah banyak dan mengalami perbesaran ukuran pori. Akan tetapi, untuk distribusi pori pada HAp berporogen pati ubi jalar 20% masih belum merata.  Hal  itu  dapat  diamati  dengan  adanya  kumpulan  granula-granula  yang masih menumpuk. Penyebab penumpukkan granula  ini adalah kurang tingginya suhu  kalsinasi  dan  aktivasi  yang  dilakukan,  karena pada  pati  ubi  jalar  sebagian besar  mengandung  amilopektin  yang  memiliki  sifat  lengket  sehingga  masih terjadi  penumpukan  granula  yang  menyebabkan  pori  HAp  kurang  terbuka  [5]. Ukuran  pori  yang  terbentuk  pada  HAp  berporogen  pati  ubi  jalar  20%  adalah sebesar 0,23 – 3,37 µm.
Gambar 6 : Hasil analisis SEM HAp berporogen pati ubi jalar 30% pada perbesaran 10000 ×
Hasil  analisis  SEM  HAp  berporogen pati  ubi  jalar  30%  (gambar  6)  di  atas menunjukan bahwa ukuran pori  yang dihasilkan semakin kecil dengan distribusi pori  semakin  merata.  Distribusi  pori  yang  dihasilkan  pada  HAp  berporogen  pati ubi  jalar  30%  lebih  merata  dibandingkan  dengan  HAp  berporogen  pati  ubi  jalar 20%. Distribusi pori yang merata disebabkan oleh tingginya konsentrasi pati yang ditambahkan  pada  HAp.  Semakin  banyak  penambahan  pati  ubi  jalar  pada  HAp maka akan semakin banyak percabangan yang terjadi. Amilopektin yang terdapat pada pati ubi jalar akan membentuk rantai cabang pada HAp sehingga pada HAp dengan  penambahan  pati  terbesar  akan  memiliki  pori  yang  besar  dengan distribusi  pori  yang  merata  [5].  Akan  tetapi,  pori  yang  dihasilkan  pada  porogen pati ubi jalar 30% mengalami pengecilan ukuran pori, hal  ini disebabkan karena adanya  perbedaan  karakter  pada  ubi  jalar  yang  digunakan.  Ukuran  pori  yang dihasilkan adalah sebesar 0,26 – 1,69 µm.
Besarnya  ukuran  granula  pati  menyebabkan  ukuran  pori  yang  terbentuk juga semakin besar. Selain itu, konsentrasi pati yang besar yang terjebak dalam HAp  pada  saat  proses  kalsinasi  menghasilkan  jejak  pori  yang  besar.  Pori terbentuk  karena  porogen  pati  terjebak  diantara  partikel-partikel  HAp.  Pati  akan menghilang pada saat proses pemanasan suhu tinggi dan terlepas dari partikel- partikel HAp sehingga meninggalkan jejak berupa pori [9].
HAp yang dihasilkan dalam penelitian ini belum dapat diaplikasikan secara implan  ke  dalam  tubuh,  karena  pori  yang  terbentuk  masih  sangat  kecil  dan ukurannya  yang  tidak  seragam.  Pori-pori  minimum  dengan  ukuran  100 mikrometer  diperlukan  untuk  bahan  implan  agar  dapat  berfungsi  dengan  baik, karena dapat membentuk tulang yang baru, sebab jaringan ikat pembuluh darah akan  tumbuh  pada  pori  diantara  implan  dan  tulang  pada  ukuran  tersebut  [10]. Pori-pori  HAp  yang  tidak  teratur  dalam  bentuk  dan  ukuran  dapat  menyebabkan porositas  HAp  yang  dihasilkan  rendah,  akibatnya  struktur  HAp  tidak  kompak sehingga apabila digunakan sebagai implan karakterisasinya rapuh atau mudah patah [11].

## Uji in Vitro
Larutan SBF ( Simulated Body Fluid ) merupakan larutan yang mengandung ion-ion  yang  komposisinya  kurang  lebih  sama  dengan  cairan  tubuh  manusia. Cairan  SBF  dapat  digunakan  sebagai  media  untuk  pertumbuhan  Kristal  apatit dalam uji coba in vitro . Uji in vitro dilakukan untuk mengetahui sifat bioaktif dari HAp yang ditandai dengan pertumbuhan Kristal apatit. Pertumbuhan kristal apatit membutuhkan  ion  Kalsium  dan  Fosfat  [12].  Perendaman  sampel  dilakukan selama  7  dan  15  hari.  Sampel  yang  digunakan  pada  uji in  vitro adalah  HAp sintesis (sonikasi 6 jam), HAp porogen 20%, dan HAp porogen 30%.
Tabel 1. Data hasil uji in vitro selama 7 hari
Sampel Absorban Terkoreksi Konsentrasi Ca (ppm) Blanko Larutan SBF 0,0049 8,4286 HAp murni 0,0028 5,4286 HAp + pati 20% 0,0020 4,2857 HAp + pati 30% 0,0019 4,1429 Tabel 2. Data hasil uji in vitro selama 15 hari Sampel Absorban Terkoreksi Konsentrasi Ca (ppm) Blanko Larutan SBF 0,0044 6,8000 HAp murni 0,0054 8,8000 HAp + pati 20% 0,0052 8,4000 HAp + pati 30% 0,0035 5,0000
Hasil  pengamatan  konsentrasi  Kalsium  pada  ketiga  sampel  dapat  dilihat bahwa setelah perendaman 7 hari terjadi peningkatan konsentrasi Kalsium pada HAp sintesis  dan penurunan pada HAp berporogen. Konsentrasi Kalsium dalam larutan SBF awal sebesar 8,4286 ppm, untuk HAp sintesis yaitu sebesar 5,4286 ppm,  sedangkan  untuk  HAp  berporogen  pati  ubi  jalar  20%  dan  30%  yaitu berturut-turut  sebesar  4,2857  dan  4,1429  ppm.  Kenaikan  jumlah  Kalsium  pada larutan  SBF  pada  HAp  sintesis  terjadi  karena  adanya  pertukaran  ion  antara permukaan sampel dan larutan akibat perbedaan potensial kimia sehingga terjadi pelepasan ion Ca 2+ dari sampel ke larutan SBF yang mengakibatkan kandungan Ca 2+ dari  sampel  ke  larutan  SBF  meningkat.  Pada  penelitian  ini,  HAp  sintesis memiliki  komposisi  HAp  yang  lebih  besar  sehingga  Kalsium  yang  terkandung juga  lebih  banyak  dibandingkan  HAp  berporogen.  Oleh  karena  itu,  peningkatan Kalsium  larutan  SBF  pada  HAp  sintesis  lebih  tinggi  dari  pada  HAp  berporogen. Penurunan  Kalsium  pada  HAp  berporogen  diduga  karena  potensial  kimia  yang dimiliki  larutan  SBF  lebih  besar  dari  pada  sampel  HAp  sehingga  terjadi pelepasan  ion  Ca 2+ dari  larutan  SBF  ke  sampel  HAp  yang  mengakibatkan kandungan Ca 2+ dalam larutan SBF mengalami penurunan.
Perubahan  konsentrasi  Kalsium  HAp  terjadi  setelah  perendaman  15  hari. Kalsium HAp sintesis mengalami kenaikan menjadi 8.8000 ppm. Sedangkan HAp berporogen pati ubi jalar 20% dan 30% mengalami kenaikan konsentrasi sebesar 8,4000  dan  5,0000  ppm.  Proses  kenaikan  ini  disebabkan  karena  Kalsium  yang dikeluarkan  terus  menerus  oleh  sampel  HAp  yang  mengalami  pengendapan. Kenaikan  konsentrasi  ini  akan  terus  berlanjut  seiring  bertambahnya  waktu perendaman.  Setelah  6  hari  perendaman  akan  terjadi  pengendapan  ion  Ca 2+ yang merupakan langkah awal pertumbuhan kristal apatit. Dalam hal ini, ion Ca 2+ yang dikeluarkan sampel HAp akan berikatan dengan ion Fosfat dari larutan SBF membentuk  kristal  apatit  [10].  Adanya  kenaikan  Kalsium  pada  HAp  berporogen setelah  perendaman  7  hari  menandakan  telah  terbentuknya  kristal  apatit
sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  material  HAp  yang  disintesis  dengan menggunakan pati ubi jalar bersifat bioaktif.

## 4. PENUTUP Kesimpulan
Sintesis HAp berbahan dasar Ca(OH) 2 dari serbuk cangkang keong sawah dan (NH 4 ) 2 HPO 4 yang dimodifikasi dengan penambahan porogen berupa pati ubi jalar  berhasil  dibuat  menggunakan  metode  basah.  Hasil  analisis  dengan menggunakan XRD menunjukan bahwa pada sampel telah terbentuk fasa HAp. Morfologi  HAp  berdasarkan  hasil  SEM  menunjukan  bahwa  sudah  terbentuknya pori  HAp.  Modifikasi  pori  terbaik  dihasilkan  pada  komposisi  HAp  yang ditambahkan  dengan  20%  pati  ubi  jalar  dengan  sonikasi  6  jam  yang menghasilkan  ukuran  pori  dari  rentang  0,23 –  3,37  µm.  Akan  tetapi  hasil  ini berbeda  dengan  penelitian  sebelumnya,  yang  menunjukan  bahwa  pori  terbaik dihasilkan  dengan  penambahan  porogen  pati  sebesar  30%.  Hal  ini  disebabkan karena adanya perbedaan karakter dari masing-masing ubi jalar yang digunakan itu sendiri. Hasil uji in vitro pada sampel HAp sintesis dan HAp berporogen 7 hari telah  menunjukan  adanya  pertumbuhan  kristal  apatit  pada  media  larutan  SBF ( Simulated Body Fluid ).

## DAFTAR PUSTAKA
Athawi,  Aldhi. Sintesis  Hidroksiapatit  Berpori  Dari  Cangkang  Keong  Sawah (Bellamya Javanica) Dengan Penambahan Pati Singkong Sebagai Porogen . Bogor: IPB. 2013.
Baby RL, Hasan I, Kabir KA, Naser MN. Nutrient analysis of some Commercially important molluscs of Bangladesh. J Sci Res. 2(2): 390-396. 2010.
Dahlan,  Kiagus. Potensi  Kerang  Rangan  Sebagai  Sumber  Kalsium  dalam Sintesis Biomaterial Subtitusi Tulang “Jurnal”, FMIPA Universitas Lampung. 2013.
Febriansyah,  Mugananda. Sintesis  Dan  Uji  In  Vitro  Hidroksiapatit  Dari  Limbah Cangkang  Keong  Sawah  (Belamya  Javanica)  Berporogen  Pati  Kentang. Bogor: Institut Pertanian Bogor. 2013.
Fitri,  Desy  Kusuma. Sintesis  Hidroksiaptit  Dari  Cangkang  Keong  Sawah (Belamya  Javanica)  Dengan  Metode  Basah  Dan  Modifikasi  Pori  Dengan Kitosan. Bogor: Institut Pertanian Bogor. 2014.
Kim HS, Kim JT, Jung YJ. Preparation of Porous chitosan/fibroin  Hydroxiapatite Composite  Matrix  for  Tissue  Engineering .  Macromolecular  Research. 15(1):65-73. 2007.
Pane  MS. Penggunaan  Hidroksiapatit  Sebagai  Bahan  Dental  Implan (Skripsi). Medan: Universitas Sumatera Utara. 2004.
Riyanto, Agung Ardy. Pemanfaatan Limbah  Cangkang Keong Sawah (Bellamya
Javanica) Untuk Sintesis Hidroksiapatit Dengan Modifikasi Pori
Menggunakan Pati Beras Ketan . Institut Pertanian Bogor: Bogor. 2013.
Santos  MH,  de  oliveira  M.  Souzal  PF,  Mansur  HS,  Vasconcelos WL. Synthesis Control  and  Characterization  of  Hydroxyapatite  Prepared  by  Wet Precipitation Process . Mater Res 7(4): 625-630. 2004.
Soido  C,  Vasconcellos  MC,  Diniz  AG,  Pinheiro  J. An  Improvement  of  Calcium Determination  Technique  in  the  shell  of  Molluscs .  Brazilian  Archives  Of Biology And Technology 52(1): 93-98. 2009.
Sopyan I, Mel M, Ramesh S, Khalid KA. Porous hydroxyapatite for artificial bone applications. Science  and  Technology  of  Advanced Materials 8:116 –123.
2007.
Utami, S. Pembuatan komposit Kalsium Fosfat Kitosan Dengan Metode Sonikasi. Institut Pertanian Bogor: Bogor. 2009.