ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 17 (2) (2014) : 37 – 42
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi dan Uji Antibakteri Senyawa Terpenoid Ekstrak N-Heksana Rimpang Lengkuas Merah ( Alpinia purpurata )
Fajar Budi Laksono a , Enny Fachriyah a* , Dewi Kusrini b
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: enny.fachriyah@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Alpinia purpurata , terpenoid, kromatography, antibactery
The  red  galangal  plant  ( Alpinia  purpurata )  is  a  medicinal  plant  belonging  to  the Zingiberacea family and is widely used as a medicinal plant for throat, rheumatic, and headache diseases. The objective of this study was to isolate terpenoids from red galangal rhizome and to analyze the isolation result using FTIR and GC-MS spectrophotometer and to test antibacterial activity of terpenoid compound by determining minimum inhibitory concentration by disc diffusion method. This research was started by maseration of red galangal powder with ethanol solvent. The ethanol extract was then partitioned with n- hexane  solvent.  After  that,  the  n-hexane  extract  was  analyzed  using  TLC  and  column chromatography. A positive fraction of terpenoids was then performed by preperative TLC and purity test. From the results of FTIR and GC-MS analysis of terpenoid isolates, it was concluded  that  terpenoid  compounds  obtained  from  the  process  of  isolation  of  red galangal  rhizomes  were  compounds  3,7,11-trimethyl-1,6,10-dodekatrien-3-ol  or nerolidol.  The  terpenoid  isolates  were  then  tested  for  antibacterial  activity  at concentrations  of  5%,  1%,  and  0.5%  and  did  not  provide  antibacterial  activity  against Escherichia coli and Salmonella typhi bacteria.

## A b s t r a k
Kata Kunci: Alpinia purpurata , terpenoid, kromatografi, antibakteri
Tanaman lengkuas merah ( Alpinia purpurata ) merupakan tanaman obat yang termasuk dalam famili Zingiberacea dan banyak digunakan sebagai tanaman obat untuk penyakit tenggorokan,  rematik,  dan  sakit  kepala.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi terpenoid dari rimpang lengkuas merah dan menganalisis hasil isolasinya menggunakan spektrofotometer FTIR dan GC-MS serta menguji aktivitas antibakteri senyawa terpenoid dengan  menentukan  konsentrasi  hambat  minimum  dengan  metode  difusi  cakram. Penelitian  ini  dimulai  dengan  cara  maserasi  serbuk  rimpang  lengkuas  merah  dengan pelarut etanol. Ekstrak etanol kemudian dipartisi dengan pelarut n-heksana. Setelah itu, ekstrak  n-heksana  dianalisis  mengguanak  KLT  dan  Kromatografi  kolom.  Fraksi  yang positif terhadap terpenoid kemudian dilakukan KLT preperatif dan uji kemurnian. Dari hasil  analisis  FTIR  dan  GC-MS  dari  isolat  terpenoid,  disimpulkan  bahwa  senyawa terpenoid  yang  diperoleh  dari  proses  isolasi  rimpang  lengkuas  merah  adalah  senyawa 3,7,11-trimetil-1,6,10-dodekatrien-3-ol atau nerolidol. Isolat terpenoid kemudian diuji aktivitas antibakteri pada konsentrasi 5%, 1%, dan 0,5% dan tidak memberikan aktivitas antibakteri terhadap bakteri Eschericia coli dan Salmonella typhi.

## 1. Pendahuluan
Tanaman  lengkuas  merah  ( Alpinia  purpurata )
merupakan  tanaman  obat  yang  termasuk  dalam  famili
Zingiberacea  [1].  Rimpang  lengkuas  merah  secara  luas digunakan pada pengobatan penyakit perut, kudis, panu, dan  menghilangkan  bau  mulut  [2].  Rimpang  lengkuas
merah  juga  dianggap  memiliki  khasiat  sebagai  anti tumor atau anti kanker terutama tumor di bagian mulut dan lambung [3]. Selain itu rimpang lengkuas merah juga memiliki  aktivitas  antibakteri  sehingga  rimpang tanaman  ini  dapat  menyembuhkan  beberapa  penyakit yang disebabkan oleh bakteri.
Ekstrak  etanol  dari  rimpang  lengkuas  merah mengandung senyawa-senyawa aktif diantaranya adalah flavonoid, terpenoid, saponin dan tannin [4]. Salah satu senyawa aktif yang berpotensi menjadi agen anti bakteri adalah terpenoid [5]. Terpenoid adalah senyawa dengan kerangka  isoprena  yang  telah  mengalami  modifikasi. Potensi  terpenoid  dalam  lengkuas  merah  masih  belum banyak dimanfaatkan  sehingga  perlu  adanya  penelitian yang  lebih  guna  menelusuri  pemanfaatan  senyawa terpenoid  dalam  rimpang  lengkuas  merah.  Dalam penelitian  ini  akan  diisolasi  senyawa  terpenoid  dengan pelarut  n-heksana  dan  diuji  aktivitas  antibakteri terhadap Eschericia coli dan Salmonella typhi .
Sebelumnya  telah  dilakukan  penelitian  tentang rimpang  lengkuas  merah  yakni  uji  fitokimia,  uji larvasida,  serta  uji  aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri rimpang  lengkuas  merah  [6],  uji  aktivitas  ekstrak lengkuas  merah  terhadap  bakteri  dan  jamur  dan  uji aktivitas  antioksidan  secara  in-vitro  dan  uji  fitokimia dari  ekstrak  etanol  rimpang  lengkuas  merah,  tetapi belum  ada  penelitian mengenai  isolasi  dan  uji  aktivitas antibakteri  senyawa  terpenoid  dari  ekstrak  n-heksana dari  rimpang  lengkuas  merah  dengan  bakteri  uji Eschericia coli dan Salmonella typhi [4].
Penelitian ini bertujuan memperoleh terpenoid dari rimpang  lengkuas  merah  dan  menganalisis  senyawa tersebut menggunakan spektrofotometer FTIR dan GC- MS  serta  menguji  aktivitas  antibakteri  isolat  terpenoid dengan metode difusi cakram.

## 2. Metode Penelitian

## Alat dan Bahan
Alat gelas standar penelitian, corong pemisah, botol vial,  pipet  mikro,  satu  set  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT),  satu  set  kromatografi  kolom,  plat  kromatografi preparatif,  alat  pembuat  kromatografi  preparatif, seperangkat  rotary  evaporator,  neraca  analitis, seperangkat  spektrofotometer  Fourier  Transform Inframerah, seperangkat alat GC-MS, inkubator, cawan petri,  jarum  ose,  autoklaf,  sentrifuge,  shaker.  Sampel lengkuas  merah,  etanol  (teknis),  n-heksana  (pa),  n- heksana  (teknis),  etil  asetat  (pa),  kloroform  (pa), kloroform (teknis), aquades, Nutrien Agar (NA), pepton, bakteri  Eschercia  coli, Salmonella  typhi ,  pereaksi Liberman-Burchard  (anhidrida  asam  asetat  dan  asam sulfat pekat 3:1), DMSO, serbuk silika gel GF254, Silika gel 60 G, plat KLT silikia gel GF254. Semua reagen pro analys menggunakan reagen dari merck.

## Preparasi Simplisia
Sebanyak 5 kg rimpang lengkuas merah dibersihkan kemudian  dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan. Sampel yang telah kering selanjutnya dihaluskan dengan menggunakann penggiling.

## Pengambilan Fraksi n-Heksana Rimpang Lengkuas Merah
Serbuk  rimpang  lengkuas  merah  sebanyak  0,6  kg dimaserasi dengan etanol. Pelarut diganti setiap 24 jam sekali  selama  1  minggu.  Selanjutnya  ekstrak  tersebut dipekatkan  dengan  menggunakan rotary  eveporator . Setelah  didapatkan  ekstrak  pekat  etanol,  dilakukan partisi  dengan  cara  menambahkan  n-heksana  dengan perbandingan 1 : 1. Partisi dilakukan sampai warna fraksi n-heksana tetap. Selanjutnya fraksi n heksana dilakukan pemekatan  menggunakan rotary  evaporator sehingga didapatkan ekstrak kental n-heksana.

## Pemisahan dengan Kromatografi Kolom
Sebelum  dilakukan  kromatografi  kolom  terlebih dahulu dilakukan penentuan eluen terbaik menggunakan KLT dengan fasa diam Silika gel 60 GF 254 dan fasa gerak campuran eluen dengan perbandingan tertentu. Setelah didapatkan  eluen  yang  sesuai  selanjutnya  dilakukan kromatografi kolom dengan eluen tersebut. Silika gel 60 G  sebanyak  120  gram  dibuburkan  dengan  campuran eluen  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  kolom  dan didiamkan selama 24 jam.
Selanjutnya  sebanyak  3  gram  fraksi n- heksana rimpang  lengkuas  merah  dimasukkan  ke  dalam  kolom. Pemisahan  dengan  kromatografi  kolom  dilakukan dengan  cara  mengatur  aliran  eluen  yang  ditampung dalam setiap botol vial, aliran eluen dibuat 8 menit / 15 mL setiap vialnya. Selanjutnya vial hasil kolom dilakukan KLT untuk pengelompokan fraksi berdasarkan pola noda yang sama kemudian disatukan menjadi fraksi besar.

## Identifikasi Terpenoid
Fraksi-fraksi  besar  yang  didapat  kemudian dilakukan  KLT  dan  disemprot  menggunakan  pereaksi Libermann-Burchard. Selanjutnya KLT tersebut dimasukkan  kedalam oven  dengan  suhu  110 o C  selama  5 menit.  Noda  dari  KLT  tersebut  selanjutnya  dilihat  pada lampu UV 365 nm.

## Pemisahan dengan Kromatografi Preparatif
Kromatografi  preparatif  dilakukan  terhadap  fraksi yang  positif  terpenoid  untuk  mendapatkan  isolat terpenoid  murni.  Sebelumnya  dilakukan  KLT  untuk menentukan  eluen  terbaik.  Kromatografi  preparatif dilakukan dengan plat silika gel GF 254 ukuran 20 cm x 5 cm  dengan  ketebalan  0,2  cm.  Setelah  fraksi  positif terpenoid  dielusi,  dilakukan  pengerokan  pita-pita  dan selanjutnya  direndam  menggunakan  n-heksana  pro analis yang melarutkan isolat terpenoid.

## Uji Kemurnian
Uji kemurnian dilakukan menggunakan KLT dengan fase gerak berbagai campuran eluen yaitu kloroform : n- heksana  (7  :  3),  etil  asetat  :  n-heksana  (5  :  3),  dan kloroform : n-heksana (1 : 1). Jika hasil KLT menunjukkan 1 noda maka isolat terpenoid tersebut dianggap murni.

## Analisis FTIR dan GC-MS serta Uji Aktivitas Antibakteri
Analisis  FTIR  digunakan  untuk  menentukan  gugus fungsi dan Kromatografi Gas untuk mengetahui tingkat
kemurnian  serta  menggunakan  Spektroskopi  Massa untuk  mengetahui  berat  molekul  dan  pola  fragmentasi dari senyawa tersebut.
Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  isolat  terpenoid menggunakan metode difusi cakram dengan konsentrasi 5%,  1%,  dan  0,5%.  Nutrien  agar  yang  telah  dibuat kemudian disterilisasi dalam autoklaf. Nutrien agar yang telah steril diberi supensi bakteri dan diratakan dengan menggunakan  jarum  ose.  Cakram  kertas  dicelupkan  ke dalam  isolat  terpenoid  rimpang  lengkuas  merah diletakan pada permukaan media nutrien agar yang telah diinokulasikan  bakteri  dan  diinkubasi  selama  24  jam pada suhu 37 0 C [7].

## 3. Hasil Dan Pembahasan

## Preparasi Sampel
Hasil proses pengeringan sampel dari 5 kg rimpang lengkuas  merah  basah  didapat  bobot  kering  sampel menjadi 0,6 kg. Dari hasil pengeringan tersebut didapat warna  dari  rimpang  lengkuas  merah  menjadi  lebih kecoklatan dan setelah digiling didapat serbuk rimpang lengkuas merah 0,5 kg dengan warna coklat kemerahan.

## Pengambilan Fraksi n-Heksana Rimpang Lengkuas Merah
Maserasi dengan etanol berfungsi untuk mengisolasi  metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam rimpang lengkuas merah. Ekstrak etanol hasil maserasi didapatkan  cairan  berwarna  merah  kecoklatan  dan selanjutnya  ekstrak  tersebut  dipekatkan  dengan menggunakan rotary eveporator sehingga didapatkan 50 mL ekstrak etanol rimpang lengkuas merah.
Setelah  didapatkan  ekstrak  etanol  dari  lengkuas merah selanjutnya dilakukan partisi dengan menggunakan  n-heksana.  Terpenoid  merupakan senyawa  non  polar  sehingga  dapat  larut  dalam  n- heksana dan senyawa lain yang bersifat lebih polar akan tetap  di  dalam  ekstrak  etanol.  Cairan  yang  didapat  dari hasil partisi menggunakan n-heksana berwarna kuning terang.  Setelah  fraksi  tersebut  dipekatkan  diperoleh sebanyak  4  gram  fraksi  n-heksana  berwarna  coklat kemerahan.

## Pemisahan dengan Kromatografi Kolom
Dari hasil KLT didapatkan bahwa eluen terbaik untuk pemisahan terpenoud adalah kloroform : n-heksana (10 : 9).  Perbandingan  eluen  tersebut  menghasilkan pemisahan noda yang paling maksimal yaitu didapatkan 7 noda dengan Rf masing-masing noda antara 0,2 - 0,8. Eluen  tersebut  digunakan  untuk  kromatografi  kolom gravitasi.
Dari  hasil  kromatografi  kolom  diperoleh  220  vial masing-masing vial dilakukan
KLT untuk pengelompokan  fraksi  besar  seperti  ditunjukkan  pada tabel 1.
Tabel 1: Hasil pengelompokkan fraksi vial-vial hasil kromatografi kolom Fraksi Vial Warna A 5 – 19 Jernih B 20 – 55 Jernih C 56 – 98 Jernih D 99 – 143 Jernih E 144– 220 Kekuningan

## Identifikasi Terpenoid
Identifikasi  terpenoid  dilakukan  dengan  uji Liberrman  Burchard  terhadap  5  fraksi  (A,  B,  C,  D,  E) untuk mengetahui adanya terpenoid. Senyawa terpenoid apabila  disemprot  dengan  reagen  Liberrman  Burchard akan  tampak  noda  berwarna  ungu  apabila  dilihat  di bawah  UV  365  nm.  Hasil  identifikasi  terpenoid ditunjukkan seperti gambar 1.
Gambar 6. Hasil Kromatografi Lapis Tipis Fraksi A - E dengan eluen Kloroform:n-hexane 10:9

## Pemisahan dengan Kromatografi Preparatif
Pada  uji  terpenoid  dari  fraksi  E  dengan  KLT menggunakan  eluen  kloroform  :  n-heksana  (10  :  9) didapatkan  noda  terpenoid  berwarna  ungu  berdekatan dengan  noda  lain  sehingga  apabila  tidak  dipisahkan, maka noda selain senyawa target yang akan diambil akan terbawa  dan  tidak  dihasilkan  isolat  murni.  Setelah dilakukan  KLT  kembali  dengan  eluen  kloroform  :  n- heksana  (7  :  3)  diperoleh  hasil  pemisahan  yang  baik antara  target  terpenoid  dengan  senyawa  lain.  Setelah mendapatkan  eluen  terbaik  dilakukan  isolasi  terpenoid dengan mengerok silika gel pada daerah pita yang positif terpenoid.  Hasil  kromatografi  preparatif  ditunjukkan oleh gambar 2.
Gambar 2. Kromatografi Preparatif Fraksi E dengan eluen kloroform : n-heksana 7 : 3 di bawah lampu UV 365 nm
Silika  hasil  pengerokan  kromatografi  preparatif selanjutnya  dilakukan  perendaman  menggunakan  n- heksana sehingga didapatkan cairan berwana kekuningan. Setelah didapat isolat terpenoid selanjutnya dilakukan penentuan tingkat kemurnian isolat terpenoid melalui uji kemurnian.

## Uji Kemurnian
Uji  kemurnian  isolat  terpenoid  dilakukan  dengan menggunakan metode KLT dengan berbagai eluen. Eluen yang  dipakai  adalah  kloroform  :  n-heksana  (7  :  3),  etil asetat : n-heksana (5 : 3), dan kloroform : n-heksana (1 : 1). Uji kemurnian isolat terpenoid dengan KLT berbagai eluen ditunjukkan seperti pada gambar 3.
Gambar 3. KLT isolat terpenoid (a) Eluen kloroform : n- heksana (7 : 3); (b) Etil asetat : n-heksana (5 : 3); (c)
Kloroform : n-heksana (1 : 1 )
Hasil  KLT  pada  uji  kemurnian  isolat  terpenoid dengan  berbagai  eluen,  setelah  disemprot  dengan pereaksi  Libermann-Burchard  didapatkan  satu  noda berwarna  ungu  yang  membuktikan  bahwa  isolat  yang diperoleh merupakan isolat murni.

## Analisis dengan FTIR
Analisis  FTIR  menunjukkan  spektra  seperti  pada gambar 4.
Gambar 4. Spektrum FTIR Isolat Terpenoid Rimpang Lengkuas Merah
Dari  spektrogram  di  atas  didapatkan  serapan  pada bilangan gelombang 1111 cm -1 , 1381 cm -1 , 1465 cm -1 , 1627 cm -1 ,  2854  cm -1 ,  2924  cm -1 ,  3441  cm -1 .  Serapan  pada bilangan  gelombang  1381  cm -1 dan  1465  cm -1 menunjukkan  adanya  vibrasi  ikatan  antara  C-H  tekuk alifatik  dari  CH 3 dan  C-H  tekuk  alifatik  dari  CH 2 .  Pada bilangan  gelombang  1111  cm -1 menunjukkan  adanya vibrasi  antara  atom  C  dan  O  pada  gugus  alkohol. Sedangkan pada bilangan gelombang 2924 cm -1 dan 2854 cm -1 menunjukkan adanya ikatan C-H ulur alifatik pada senyawa terpenoid. Pada bilangan gelombang 3441 cm -1 menunjukkan adanya vibrasi ikatan antara O dan H pada gugus alkohol [8].
Dari hasil uji Libermann-Burchard diketahui bahwa isolat  didapatkan  merupakan  senyawa  terpenoid. Sedangkan dari hasil spektra FTIR diketahui bahwa pada isolat yang dihasilkan terdapat gugus CH 2 , CH 3 , C=C, C- O,  dan  OH  sehingga  dapat  diketahui  bahwa  terpenoid yang  didapatkan  merupakan  terpenoid  alkohol.  Hal  ini sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Rosyidah [9] bahwa jenis terpenoid yang ditemukan pada rimpang lengkuas merah merupakan jenis terpenoid alkohol.

## Analisis dengan GC-MS
Hasil  kromatogram  GC  isolat  terpenoid  rimpang lengkuas merah ditunjukkan seperti gambar 5.
Gambar 5. Kromatogram GC Isolat Terpenoid Lengkuas

## Merah
Dari  gambar  kromatogram  GC  tersebut  dapat diidentifikasi  bahwa  isolat  terpenoid  dari  lengkuas merah  memiliki  kemurnian  tinggi.  Hal  tersebut dibuktikan dengan hanya adanya 1 puncak dominan yang memiliki  intensitas  yang  tinggi.  Sehingga  dengan kemurnian  tinggi  tersebut  proses  isolasi dari  terpenoid yang  dilakukan  terhadap  lengkuas  merah  ( Alpinia
purpurata )  bisa  dinyatakan  berhasil.  Senyawa  tersebut memiliki waktu retensi 23,367 menit.
Dari hasil analisis menggunakan MS akan diketahui berat  molekul  yang  dipunyai  isolat  terpenoid  lengkuas merah. Berat molekul dan pola fragmentasi dari analisis MS  dapat  mengidentifikasi  jenis  senyawa  dari  isolat terpenoid  tersebut.  Analisis  MS  yang  dihasilkan spektrogram seperti ditunjukkan pada gambar 6.
Gambar 6 (a) Spektra MS Senyawa Isolat Terpenoid Rimpang Lengkuas Merah dan (b) Spektra MS Refferensi Senyawa 3,7,11-trimetil-1,6,10-dodekatrien-3-ol
Berat  molekul  yang  dihasilkan  dari  analisis  MS adalah  222  gram/mol,  diprediksikan  senyawa  isolat terpenoid  berdasarkan  spektra  referensi  MS  adalah 3,7,11-trimetil-1,6,10-dodekatrien-3-ol  dengan  tingkat kemiripan 96%.
Dari  penelitian  yang  dilakukan  Parwata  dan  Dewi [10]  didapatkan  senyawa  terpenoid  yang  ada  pada komponen minyak atsiri pada rimpang lengkuas merah antaralain  senyawa  3,7,11-trimetil-1,6,10-dodekatrien- 3ol. Sehingga dari kedua penelitian tersebut memperkuat dugaan bahwa terpenoid yang didapatkan  dari rimpang lengkuas merah adalah 3,7,11-trimetil-1,6,10- dodekatrien-3-ol.
Gambar 7. Pola Fragmentasi Isolat Terpenoid
Kedua  spektra  tersebut  mempunyai  base  puncak yang  sama  yaitu  69.  Selain  itu  pola  fragmentasi  dari isolat terpenoid sesuai dengan senyawa 3,7,11-trimetil- 1,6,10-dodekatrien-3-ol  yang  keluar  pada  (m/z)  :  222, 204, 189, 169, 107, 93, 81, 55, 41, dan 29. Pada spektra m/z 204  menunjukkan  lepasnya  senyawa  H 2 O  dari  senyawa awal.  Selanjutnya  muncul  m/z  189  yang  menunjukkan lepasnya CH 3 . Senyawa dengan m/z 69 yang merupakan base  puncak  dari  spektra  MS  dihasilkan  dari pembentukan  senyawa  (C 5 H 9 ) + .  Selain  itu  pada  pola fragmentasi  isolat  terpenoid  muncul  m/z  169  akibat lepasnya  senyawa  C 2 H 4 dari  m/z  189.  Dari  m/z  169 menghasilkan senyawa m/z 93 akibat lepasnya C 5 H 8 dan m/z 107 dari lepasnya C 4 H 6 . Dari m/z 107 menghasilkan fragmen dengan m/z 81 dan m/z 55 dengan lepasnya C 2 H 2 dan C 2 H 2 berturut-turut. Sedangkan m/z 41 didapat dari lepasnya senyawa C 4 H 4 dari m/z 93. Pola fragmentasi dari senyawa
3,7,11-trimetil-1,6,10-dodekatrien-3-ol ditunjukkan  seperti  pada  gambar  7.  Senyawa  3,7,11- trimetil-1,6,10-dodekatrien-3-ol  merupakan  terpenoid jenis alkohol dengan rumus molekul C 15 H 26 O.

## Uji Antibakteri Isolat Terpenoid
Uji  antibakteri  isolat  terpenoid  dilakukan  terhadap bakteri Eschercia  coli dan Salmonella  typhy .  Isolat terpenoid  yang  didapatkan  sebanyak  0,04  gram kemudian  dilarutkan  ke  dalam  4  mL  aquades  dengan ditambahkan  2  tetes  DMSO.  Penambahan  DMSO berfungsi  agar  isolat  terpenoid  dapat  larut  sempurna dengan aquades selanjutnya diuji antibakteri menggunakan  metode  diffusi  cakram  terhadap  bakteri Eschercia coli dan Salmonella typhy .
Jumlah  koloninya  diatur  hingga  sebanyak  0,1  MF atau setara dengan 1 x 10 7 CFU. JumLah koloni ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan Kochuthressia dkk. [1]. Dari hasil pengujian antibakteri didapatkan hasil seperti pada gambar 8.
Gambar 8. Hasil Uji Antibakteri Isolat Terpenoid terhadap Eschercia coli dan Salmonella typhy
Dari  hasil  pengujian  menggunakan  metode  diffusi cakram  dapat  dilihat  dari  gambar  8  bahwa  tidak  ada aktivitas  antibakteri  dari  isolat  terpenoid  pada konsentrasi  5%,  1%  dan  0,5%.  Hal  ini  ditandai  dengan tidak adanya zona bening di sekeliling cakram atau zona hambatnya  0  mm.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  isolat terpenoid tersebut yaitu senyawa 3,7,11-trimetil-1,6,10- dodekatrien-3-ol  pada  konsentrasi  0,5%,  1%,  dan  5% tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri.  Hasil  pengukuran zona  hambat  ini  diukur  tanpa  menggunakan  kontrol pisitif dan kontrol negatif.

## 4. Kesimpulan
Fraksi  B  berupa  gel  berwarna  coklat  kehitaman merupakan  fraksi  yang  paling  sitotoksik  dengan  nilai LC50  terkecil  (7,862  ppm).  Analisis  menggunakan kromatografi gas-spektrometer massa (GC-MS) menunjukkan  bahwa  fraksi  B  terdapat  29  senyawa. Senyawa – senyawa  sitotoksik  ekstrak  daun  tempuyung yang  memiliki  indeks  kemiripan  dan  kelimpahan  besar yaitu dibutil ftalat, asam palmitat, 8,11,14 asam eikosa- trienoat, dioktil adipat dan dioktil ftalat.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  KP  Kochuthressia,  S  John  Britto,  MO  Jaseentha,  L Joelri  Michael  Raj,  SR  Senthilkumar,  Antimicrobial efficacy of extracts from Alpinia purpurata (Vieill.) K. Schum.  against  human  pathogenic  bacteria  and fungi, Agriculture  and  Biology  Journal  of  North
America , 1, 6, (2010) 1249-1252 http://dx.doi.org/10.5251/abjna.2010.1.6.1249.1252
[2]  Narayan Das Prajapathi, SS Purohit, Arun K Sharma, Tarun  Kumar,  A  handbook  of  medicinal  plants:  A complete source book, Agrobios, India , 396, (2003)
[3]  R  Othman,  H  Ibrahim,  Mustafa  Ali  Mohd,  MR Mustafa,  K  Awang,  Bioassay-guided  isolation  of  a vasorelaxant  active  compound  from  Kaempferia galanga  L, Phytomedicine ,  13,  1,  (2006)  61-66 http://dx.doi.org/10.1016/j.phymed.2004.07.004
[4]  Justi C Jovitta, Sreenivasan Aswathi, S Suja, In-vitro antioxidant  and  phytochemical  screening  of ethanolic  extract  of Alpinia  purpurata , International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research , 3, 7,
(2012) 2071
[5]  I  WG Gunawan,  I GA  Gede  Bawa,  NL  Sutrisnayanti, Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa  Terpenoid  yang Aktif  Antibakteri  pada  Herba Meniran  (Phyllanthus niruri Linn), (1907)
[6]  Geanne  KN  Santos,  Kamilla  A  Dutra,  Rosângela  A Barros, Claudio AG da Câmara, Diana D Lira, Norma B Gusmão, Daniela MAF Navarro, Essential oils from Alpinia purpurata (Zingiberaceae): chemical composition,  oviposition  deterrence,  larvicidal  and antibacterial  activity, Industrial  Crops  and  Products , 40,
(2012) 254-260 http://dx.doi.org/10.1016/j.indcrop.2012.03.020
[7]  Hasan  R.  H;  Macabeo  G,  Investigation  on antimicrobial  activities  of  the  plant    Clerodendrum viscosum Vent, J. Innov. Dev. Strategy 6, 1, (2012) 69-
72
[8]  Hardjono
Sastrohamidjojo,
Spektroskopi,
Yogyakarta: Liberty , (1991)
[9]  Kholifatu Rosyidah, Dua Senyawa Terpenoid Alkohol Dari Rimpang Lengkuas Merah, Skripsi, Universitas Lambung  Mangkurat,  Banjarbar,  Kalimantan Selatan.
[10] I M Oka Adi Parwata, P Fanny Sastra Dewi, Isolasi dan uji  aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri  dari  rimpang lengkuas (Alpinia galanga L.), (2012)