## KARAKTERISTIK  FISIOLOGI EMPAT ANTAGONIS ISOLAT
Trichoderma sp. SEBAGAI AGENSIA HAYATI
Fitria Dewi Sulistiyono Universitas Pakuan - Bogor e-mail: fitria.sulistiyono@unpak.ac.id

## ABSTRACT
Characteristics of Four Physiology Antagonists Isolate of Trichoderma spp . as Biological Agents
Trichoderma sp is soil saprophyte, one of many parasites that causing plants disease. The purpose of this study was to determine the temperature and pH growth of Trichoderma sp . This study was designed with the experimental method. The treatments were the temperature factor with five levels (temperature 15, 20, 25, 30, and 35 °C) and pH factor with five levels (pH 4, 5, 6, 7, and 8). All treatments were prepared according to  completely  randomized  design  factorial  5x5.  Repetition  was  done  3  times.  The  results  showed  that Trichoderma sp. able to grow at pH 4, 5, 6, 7, and 8 and it also grow at temperatures of 15, 20, 25, 30 and 35 o C.
Keywords: Trichoderma sp, Four Physiology Antagonists, Biological Agents

## ABSTRAK
Trichoderma sp. adalah saprofit tanah, secara alami merupakan parasit yang menyerang banyak jenis penyebab penyakit tanaman. Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui suhu dan pH tumbuh Trichoderma sp.  Penelitian  ini  dirancang  dengan  metode  eksperimen.  Perlakuan  yang  dicoba  adalah  faktor  suhu  dengan lima  taraf  (suhu  15,  20,  25,  30,  dan  35 o C)  dan  faktor  pH  dengan  lima  taraf  (pH  4,  5,  6,  7,  dan  8).  Semua perlakuan disusun menurut Rancangan Acak Lengkap pola faktorial 5x5. Pengulangan dilakukan sebanyak 3 kali.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa Trichoderma sp.  mampu  tumbuh  pada  pH  4,  5,  6,  7,  dan  8. Trichoderma sp. Juga mampu tumbuh pada suhu 15, 20, 25, 30 dan 35 o C.
Kata kunci: Trichoderma sp, fisiologi empat antagonis, agensia hayati

## PENDAHULUAN
Trichoderma sp.  adalah  saprofit tanah,  secara  alami  merupakan  parasit yang  menyerang  banyak  jenis  penyebab penyakit tanaman. Trichoderma sp. dapat menjadi hiper parasit pada beberapa jenis penyebab  penyakit  tanaman,  pertum- buhannya sangat cepat dan tidak menjadi penyakit pada tanaman (Purwantisari dan Hastuti,  2009). Trichoderma sp . Mem- punyai  miselium  halus  tebal,  per- tumbuhan  koloni  radial  dengan  pola cincin  yang  jelas  serta  berwarna  hijau- putih (Octriana, 2011).
Trichoderma sp.  mempunyai  per- tumbuhan yang lebih cepat dibandingkan dengan patogen yang menyerang tanaman. Pertumbuhannya bersifat
agresif,  mampu  menutupi  koloni  fungi lain,  dapat  menghambat  pertumbuhan patogen  (Octriana,  2011).  Ciri  fisiologi dari  isolat Trichoderma sp.  antara  lain adanya suhu dan pH yang  spesifik untuk pertumbuhannya. Derajat keasaman (pH) dan  suhu  yang  spesifik  akan  meng- hasilkan  pertumbuhan  miselium  yang maksimum,  sehingga  potensi  sebagai agensia  hayati  dari Trichoderma sp.
tersebut dapat dilakukan dengan optimum. Menurut  Hadar et  al .  (1984), pertumbuhan Trichoderma sp.  akan lambat  pada  pH  2  dan  8.  Hajieghrari et al. (2008)  melaporkan, T.  harzianum T447 dapat tumbuh optimum pada pH 5. Sobieralski et  al .  (2009)  menyatakan bahwa  fungi T.  harzianum T447  dan T.
harzianum T969  dapat  tumbuh  optimum pada  suhu  antara  25-30 o C.  Pertumbuhan mengalami  penurunan  pada  suhu  kurang dari 25 o C dan lebih dari 30 o C. Pencirian fisiologi berhubungan dengan  faktor  lingkungan  yang  me- mengaruhi  pertumbuhan  suatu  sumber agensia,  antara  lain  suhu  dan  derajat keasaman (pH). Suhu dan pH merupakan faktor  yang  berhubungan  dengan  ma- nipulasi  pertumbuhan,  sporulasi  dan kemampuan  saprofit  fungi  pada  per- akaran.  Pencirian  biokimia  berhubungan dengan  senyawa  metabolit  yang  di- hasilkan  oleh  sumber  agensia,  termasuk di  dalamnya  antibiotika  baik  volatil  dan non-volatil  serta  adanya  enzim  ekstrasel. Produksi  metabolit  ini  akan  dipengaruhi oleh  suhu  dan  pH  dari  sumber  agensia tersebut (Kredics et al ., 2003 dan Howell, 2003).
Faktor  utama  yang  sangat  me- nentukan  keberhasilan  dalam  pengem- bangan  agensia  hayati  untuk  pengen- dalian patogen tanaman adalah ketepatan dalam  pemilihan  jenis  dan  sumber agensia.  Selanjutnya  terhadap  sumber agensia tersebut perlu dilakukan pencirian  agar  potensinya  dapat  tergali secara optimum. Pencirian dapat meliputi kajian fisiologi dan biokimia (Pelczar dan Chan, 1986).

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam
penelitian  adalah  4  isolat Trichoderma sp.,  yaitu T.  harzianum isolat  pisang (Haryono et  al. ,  2009), Trichoderma sp. isolat  nenas  (koleksi  Loekas  Soesanto), T.  harzianum isolat  bawang  merah (Santoso et  al .,  2007)  dan T.  harzianum isolat  jahe  (Soesanto et  al. ,  2005).  Isolat patogen  yang  digunakan  adalah F. oxysporum (koleksi  Loekas  Soesanto), alkohol,  spirtus,  medium  PDA  dengan pH 4, 5, 6, 7, 8.
Alat  yang  digunakan  adalah  cawan Petri  dengan  berdiameter  9  cm  (Iwaki Pyrex ® ),  beaker  glass  1000  ml  (Iwaki
Pyrex ® ), labu Erlenmeyer 250 mL (Iwaki Pyrex ® ),  gelas  ukur  250  ml  (Iwaki Pyrex ® ), autoclave, oven dengan
(Memmert), laminar airflow , timbangan analitik  (Explorer  Ohous),  kompor  gas, thermometer ,  lemari  es  (Samsung),  pH meter.
Penelitian  ini  dirancang  dengan metode  eksperimen.  Perlakuan  yang dicoba  adalah  faktor  suhu  dengan  lima taraf (suhu 15, 20, 25, 30, dan 35 o C) dan faktor  pH  dengan  lima  taraf  (pH  4,  5,  6, 7,  dan  8).  Semua  perlakuan  disusun menurut  Rancangan  Acak  Lengkap  pola faktorial  5x5.  Pengulangan  dilakukan sebanyak 3 kali.

## METODE
Penentuan  ciri Trichoderma sp.
terhadap pengaruh pH dan suhu dilakukan  dengan  menghitung  diameter koloni.  Masing-masing  isolat  (ϕ  10  mm) diinokulasikan  ke  dalam  medium  PDA (Potatoes Dextrose Agar) dengan kisaran pH  4,  5,  6,  7,  8  dengan  penambahan  0,1 N  HCL  atau  NaOH  sebelum  disterilkan untuk  menentukan  pH  di  atas.  Seluruh isolat diinkubasi pada suhu yang berbeda yaitu  15+1,  20+1,  25+1,  30+1  dan 35+1 o C selama 7 hari dengan menggunakan  inkubator  (Hajieghrari et al. ,  2008).  Data  yang  diperoleh  dari pencirian  fisiologi  dianalisis  dengan
Anova  dua  arah,  dengan  menggunakan software Minitab 14.

## Waktu dan Tempat
Penelitian telah dilakukan di Laboratorium Mikologi, Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto.  Penelitian  dilakukan  dalam waktu  3  bulan  dari  bulan  Mei  2013-Juli 2013.

## HASIL PENELITIAN
Hasil  pengamatan  dan  diameter pertumbuhan  berdasarkan  suhu  masing- masing  isolat, Trichoderma sp.  dapat
tumbuh  pada  suhu  15 o C,  20 o C,  25 o C, 30 o C,  dan  35 o C  (Tabel  1).  Berdasarkan perbedaan pada penelitian ini, Trichoderma sp. dapat beradaptasi dengan berbagai suhu. Suhu  per- tumbuhan  yang  telah  diatur  dari  15 o C hingga 35 o C, menunjukkan bahwa Trichoderma sp.  baik  isolat  pisang, bawang merah, nenas maupun jahe masih dapat tumbuh pada kisaran suhu tersebut. Hasil  ini  sesuai  dengan  penelitian  Al-
Mahareeq et al . (2005) bahwa Trichoderma sp.  di  Palestina  mampu tumbuh  pada  suhu  10-35 o C  dan  tidak mampu  tumbuh  di  atas  suhu  40 o C. Soesanto  (2008),  menyatakan  bahwa suhu optimum untuk pertumbuhan Trichoderma sp. berkisar  15-35 o C. Hasil penelitian bahwa Trichoderma sp.  mampu  tumbuh  pada  suhu  15 o C dengan  diameter  Pertumbuhan  sebesar  9 cm  pada  hari  ke-7.  Koloni  isolat berwarna  putih  karena  pada  suhu  15 o C, Trichoderma tidak  mampu  membentuk konidium  hingga  hari  ke-7.  Berbeda dengan  suhu  15 o C,    pada  suhu  20 o C, 25 o C,  dan  30 o C  menunjukkan  bahwa Trichoderma sp.  mampu  membentuk konidium  pada  seluruh  bagian  cawan petri  (berdiameter  9  cm)  dengan  pola lingkaran pada hari ke-7, sehingga warna koloni yang terbentuk adalah hijau muda. Pada  suhu  35 o C,  hari  ke-7  pertumbuhan Trichoderma sp.  mengalamai  penurunan dibandingkan  pada  suhu  15-30 o C,  yaitu
dengan  kisaran  diameter  antara  7,5-8,4 cm.  Warna  hijau  muda  terlihat  hanya  di daerah  tengan  cawan  petri,  hal  ini dikarenakan  konidium  yang  terbentuk hanya berada di daerah tersebut.
Koloni Trichoderma sp.  tumbuh dengan cepat dan matang sejak hari ke-5 (diameter  pertumbuhan  sebesar  9  cm) dalam medium  dextrose  agar suhu  25 o C, sedangkan  dalam medium  oat  agar Trichoderma sp. optimum  pada suhu 20 o C  (Soesanto,  2008;  Gupta  dan  Sharma, 2013).  Pertumbuhan Trichoderma sp. dimulai  setelah  5-6  jam  pada  medium kultur  agar.  Koloni Trichoderma sp. berwarna  putih,  dengan  konidium  akan menyebar  dan  menebal  membentuk  pola cincin berwana kehijauan. Koloni menjadi berwarna karena adanya pembentukan  konidium  dan  perkem- bangan  konidium  akan  berakhir  setelah 3-5  hari  (Gams  dan  Meyer,  1998; Howell,  2003;  Soesanto,  2008;  dan Octriana, 2011).
Perbedaan  diameter  pertumbuhan dan  warna  koloni  yang  terbentuk  dari suhu  15-35 o C  disebabkan  faktor  fisik yang  berbeda,  dalam  hal  ini  adalah perbedaan suhu yang digunakan. Menurut Monte (2001) perubahan struktur,  bentuk,  ukuran,  warna  miselum suatu fungi tergantung pada kondisi fisik lingkungannya,  salah  satunya  adalah suhu.
Gambar 1. Trichoderma s p. pada berbagai suhu dan pH
A B C D E Keterangan: A. Trichoderma sp. pada suhu 15 o C B. Trichoderma sp. pada suhu 20 o C C. Trichoderma sp. pada suhu 25 o C D. Trichoderma sp. pada suhu 30 o C E. Trichoderma sp. pada suhu 35 o C
(a)     pH 4 (b)     pH 5 (c)     pH 6 (d)     pH 7 (e)     pH 8
Tabel 1. Diameter pertumbuhan Trichoderma sp. dalam berbagai suhu dan pH
Menurut  Miles  dan  Chang  (1997) pengaturan  suhu  optimum  pada  pertum- buhan  fungi  berhubungan  dengan  pem- bentukan  struktur  khusus  untuk  per- tahanan  hidup.  Contohnya  adalah  pem- bentukan konidium pada Trichoderma sp. yang  merupakan  struktur  khusus  untuk reproduksi. Selain itu, suhu akan menentukan  distribusi  spesies  fungi  di alam.  Suhu  juga  akan  memengaruhi senyawa  metabolit  yang  dihasilkan  di antaranya  dalah  enzim.  Enzim  tersebut
dapat dihasilkan pada saat fase
eksponensial pertumbuhan fungi. Seluruh  isolat  yang  ditumbuhan pada  kisaran  pH  berbeda  menunjukkan bahwa  isolat Trichoderma sp.  selama  7 hari  dapat  tumbuh  pada  medium  dengan pH 4, 5, 6, 7, dan 8. Hal ini sesuai dengan pernyataan  Kredics  (2003)  dan  Soesanto (2008),  bahwa  kisaran  pH  pertumbuhan Trichoderma sp.,  yaitu  2-6.  Hasil pengamatan menunjukkan bahwa pembentukan  konidium  lebih  banyak No  Suhu/pH Diameter pertumbuhan (cm) Trichoderma sp. Isolat pisang+stdv Trichoderma sp. Isolat bawang+stdv Trichoderma sp. Isolat nenas+stdv Trichoderma sp. Isolat jahe+stdv 1 15a 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 2 15b 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 3 15c 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 4 15d 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 5 15e 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 6 20a 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 7 20b 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 8 20c 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9 20d 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 10 20e 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 11 25a\ 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 12 25b 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 13 25c 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 14 25d 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 15 25e 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 16 30a 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 17 30b 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 18 30c 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 19 30d 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 20 30e 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 9,0 + 0,0 21 35a 8,17 + 0,46 7,97 + 0,41 8,23 + 0,18 7,97 + 0,41 22 35b 8,17 + 0,15 7,57 + 0,41 8,43 + 0,35 7,57 + 0,41 23 35c 8,47 + 0,25 8,00 + 0,00 7,80 + 0,79 8,00+ 0,00 24 35d 8,47 + 0,25 8,27 + 0,25 8,63 + 0,15 8,27 + 0,25 25 35e 8,63 + 0,06 8,53 + 0,48 8,23 + 0,15 8,53 + 0,47
terdapat  pada  medium  dengan  pH  4.  Hal ini  ditunjukkan  dengan  perubahan  warna hijau  yang  paling  dominan  pada  pH  4 dibandingkan dengan pH lainnya. Kredics  (2003)  menyatakan  bahwa  pH optimum untuk pertumbuhan
Trichoderma sp.  adalah  4.  Chet et  al . (1981)  menyatakan  bahwa  keasaman tingkat  pH in  vitro pada  pertumbuhan Trichoderma sp. akan merangsang
pembentukan  konidium    dan  perkecam- bahan konidium.
Keberadaan pH berhubungan dengan  aktivitas  enzim  yang  dihasilkan selama  pertumbuhan  fungi.  Pemisahan molekul  menjadi  ion  yang  terjadi  di dalam  permiabel  membran  sel  fungi dipengaruhi  oleh  pH.  Molekul  asam organik yang dibutuhkan oleh fungi dapat masuk ke dalam membran sel dengan pH rendah (asam), sehingga pH pertumbuhan yang  dibutuhkan  untuk  pertumbuhan fungi  adalah  bersifat  asam  (Miles  dan Chang, 1997).
Selain  lingkungan  abiotik,  yang mendukung  pertumbuhan Trichoderma sp.  adalah  kandungan  nutrisi.  Seluruh isolat Trichoderma sp. pada penelitian ini ditumbuhkan  pada  medium  PDA  yang menggunakan  sumber  karbon  berupa  D- glukosa, yang dimanfaatkan Trichoderma sp. untuk pertumbuhannya. Hal ini sesuai dengan  pernyataan  Mehta et  al. (2012), yang  menyatakan  bahwa  pertumbuhan Trichoderma sp. dipengaruhi oleh
sumber  karbon.  Karbon  dapat  diperoleh dari  monosakarida  maupun  disakarida. Selain  itu,  Soesanto  (2008)  menyatakan bahwa  gula  (glukosa)  dimanfaatkan  oleh T.  harzianum sebagai  sumber  karbon, yang  memiliki  peran  sebagai  prekursor metabolit  sekunder  untuk  menghambat perkecambahan  konidium  fungi  patogen. Miles  dan  Chang  (1997)  menyatakan bahwa karbon digunakan sebagai sumber energi untuk melakukan aktivitas metabolisme  di  dalam  sel  fungi  dan sebagai  kerangka  dalam  pembentukan senyawa  organik  (karbohidrat,  asam amino).

## KESIMPULAN
1. Trichoderma sp. mampu tumbuh pada suhu 15, 20, 25, 30 dan 35 o C 2. Trichoderma sp. mampu tumbuh pada pH 4, 5, 6, 7, dan 8

## DAFTAR PUSTAKA
Gams, W, and W. Meyer. 1998. What exactly is Trichoderma harzianum Rifai. Mycologia .
90: 904-915. Gupta,  V,  and  A.K.  Sharma.  2013. Assesment of optimum temperature  of Trichoderma harzianum by  monitoring radial  growth  and  population dynamics in different compost manures under different  temperaturer. Octa Journal  of  Biosciences. 1(2): 151-157.
Hadar,  Y.,  G.E.  Harman,  and  A.G. Taylor.  1984.  Evaluation  of Trichoderma  koningii and T. harzianum from  New  York soils for biological  control of seed  rot  caused  by Pythium spp. Phytopathology. 74(1):
106-110.
Hajieghrari,  B.,  M.T.  Giglou,  M.R. Mohammadi,  and  A.  Davari. 2008.  Biological  potential  of some  Iranian Trichoderma
isolates  in  the  control  of  soil borne  plant  pathogenic  fungi. African journal of Biotechnology. 7(8): 967-972.
Kredics,  L., Z. Antal,  L. Manczinger,
A.  Szekeres,  F.  Kevei,  and  E. Nagy.  2003.  Influence  of environmental  parameters  on Trichoderma strains with
biocontrol potential. Food Technology and Biotechnology. 41 (1): 37–42. Monte,  E.  2001.  Editorial  paper: understanding Trichoderma : Between agricultural biotechnology  and  microbial ecology. International Microbiology. 4: 1- 4. Octriana, L. 2011. Potensi agen hayati dalam menghambat pertumbuhan Phytium sp.
secara in vitro. Buletin Plasma
Nutfah. 17 (2):138-142.
Purwantisari,  S,  dan  R.B.  Hastuti.
2009. Uji antagonisme patogen Phytophthora Infestans penyebab  penyakit busuk daun dan umbi Tanaman kentang dengan menggunakan Trichoderma spp . isolat  lokal. Bioma. 11
(1): 24-32.
Sobieralski,  K.,  M.  Siwulski,  and  D.
Frużyńska-Jóźwiak. 2009.
Growth  of  aggressive  isolates of Trichoderma  aggressivum
f. europaeum in  dependence on  temperature  and  medium.
Phytopathologia. 53: 11–18.