## Potensi Khamir sebagai Agens Pengendalian Hayati
Colletotrichum capsici , Cendawan Penyebab Antraknosa pada Buah Cabai
Potency of Yeast as Biological Control Agent of Colletotrichum capsici; Fungal Causing Antrachnose in Chilli.
Okky Setyawati Dharmaputra 1* , Lisdar I. Sudirman 1 , Maria Magdalena Misnawati 1
Diterima 21 Desember 2015/Disetujui 06 Juli 2016

## ABSTRACT
Antrachnose on chilli fruit caused by Colletotrichum capsici can reduce yield and quality of chilli fruit. Biological control agent can be used as an alternative to control C. capsici. Yeast is one of  biological  control  agent  which  is  potential  to  control  the  pathogen.  This  study  was  aimed  at testing antagonistic potential of yeast on fruits and vegetables against C. capsici. Twenty two yeast isolates were isolated from banana, rambutan, red chilli, tomato, and eggplant fruits. Screening for antagonistic yeast using well test showed that 5 isolates of yeast (CMM-1, CMM-3, CMM-4, TMM- 1,  and  EMM-11)  completely  inhibited  the  growth  of  C.  capsici.  Based  on  the  result  of  biocontrol assay  of  the  pathogen  in  vivo,  four  yeast  isolates  (CMM-3,  CMM-4,  TMM-1,  and  EMM-11) completely  inhibited  C.  capsici  in  vivo.  Identification  using  morphological  and  molecular characteristics showed that these four yeast isolates were Issatchenkia orientalis.
Keywords: antagonistic yeast, antrachnose, biocontrol, Issatchenkia orientalis

## ABSTRAK
Antraknosa pada buah cabai yang disebabkan oleh Colletotrichum capsici dapat menyebabkan penurunan produksi dan kualitas buah cabai. Penggunaan agens pengendalian hayati dapat menjadi salah  satu  alternatif  untuk  mengendalikan C.  capsici .  Khamir  merupakan  salah  satu  agens pengendalian  hayati  yang  berpotensi  mengendalikan C.  capsici .  Penelitian  ini  bertujuan  menguji potensi antagonistik khamir pada buah-buahan dan sayuran terhadap C. capsici. Sebanyak 22 isolat khamir  diisolasi  dari  buah  rambutan,  pisang,  cabai  merah  besar,  tomat,  dan  terung  ungu.  Seleksi khamir antagonis menggunakan uji sumur diperoleh sebanyak 5 isolat khamir, yaitu isolat CMM-1, CMM-3, CMM-4, TMM-1, dan EMM-11 menghambat total pertumbuhan C. capsici . Isolat CMM-3, CMM-4,  TMM-1,  dan  EMM-11  menghambat  total  pertumbuhan C.  capsici  in  vivo .  Berdasarkan hasil  identifikasi  secara  morfologi  dan  molekuler,  isolat  CMM-3,  CMM-4,  TMM-1,  dan  EMM-11 adalah Issatchenkia orientalis .
Kata kunci: antraknosa, Issatchenkia orientalis , khamir antagonis, pengendalian hayati

## PENDAHULUAN
Menurut Kementan (2015) di Indonesia pada  tahun  2013  produksi  cabai  merah  besar adalah  1  012  879  ton.  Adanya  organisme pengganggu  tanaman  dapat  menyebabkan penurunan  produksi  dan  mutu  buah  cabai
merah.  Salah  satu  organisme  pengganggu tanaman yang dapat menyerang tanaman cabai merah adalah Colletotrichum capsici. Serangan C.  capsici dapat  terjadi  pada  saat tanaman  cabai  masih  di  lapangan  (prapanen) dan pascapanen. Colletotrichum capsici menyebabkan  penyakit  antraknosa  pada  buah
1 Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor (Bogor Agricultural University) Jl. Agatis Kampus IPB Dramaga, Bogor, 16680, Indonesia.  Telp/Faks: (0251) 8622833. email: okky@biotrop.org (*penulis korespondensi)
cabai  merah.  Selama  ini,  usaha  pengendalian pascapanen  serangan C.  capsici pada  buah cabai  yang  dilakukan  oleh  petani  adalah menggunakan fungisida sintetik yang dianggap lebih  cepat  dan  efektif.  Penggunaan  fungisida sintetik secara terus-menerus dapat
menimbulkan berbagai masalah karena fungisida  sintetik  sulit  terdegradasi  secara alami. Masalah yang timbul akibat penggunaan  fungisida  sintetik  yaitu  timbulnya resistensi  patogen  dan  adanya  residu  pada bahan  pangan  yang  bersifat  karsinogenik  (Pal et al ., 2006). Hal ini menyebabkan diperlukannya suatu agens pengendalian hayati C.  capsici yang  aman,  baik  untuk  manusia maupun lingkungan.
Beberapa  agens  pengendalian  hayati antraknosa  pada  buah  cabai  yang  telah dilaporkan  adalah  khamir Pichia  guilliermondii, Candida musae, C. quercitrusa, dan Issatchenkia orientalis .  Efikasi  pengendalian  hayati C. capsici tertinggi  yaitu  disebabkan  oleh P . guiliermondii (93.3%),  diikuti  oleh C . musae (83.1%), I. orientalis (76.6%) dan C. quercitrusa (66.4%).  (Chanchaichaovivat et  al., 2007).
Wilia et  al .  (2012)  melaporkan  bahwa Cryptococcus  terreus , C.  albidus var aerius IPB  1, C.  albidus var aerius IPB  2, Candida edax dan  isolat  CBN  masing-masing  dapat mengendalikan C.  capsici sebesar  62.5,  57.5, 52.5, 62.5 dan 87.5%. Penelitian pada tanaman cabai  menunjukkan  bahwa  aplikasi  dengan mulsa organik dapat meningkatkan pertumbuhan  dan  hasil  buah  cabai  yang  baik (Harsono, 2012).
Penggunaan  khamir  sebagai  agens pengendalian hayati memiliki beberapa kelebihan,  yaitu  khamir  mudah  diperbanyak dalam  waktu  singkat,  tidak  menghasilkan toksin,  mampu  mengkolonisasi  dan  bertahan pada  permukaan  buah  dalam  waktu  yang cukup  lama  pada  berbagai  kondisi  (Hashem dan  Alamri,  2009).  Tujuan  penelitian  ini adalah  menguji  potensi  isolat-isolat  khamir yang  diisolasi  dari  buah-buahan  dan  sayuran untuk mengendalikan C . capsici pada buah cabai.

## BAHAN DAN METODE

## Pengambilan Sampel Buah-buahan dan Sayuran
Pada  penelitian  ini  buah-buahan  dan sayuran  yang  sehat  dan  digunakan  untuk
isolasi  khamir  adalah  pisang  ambon  (Ditbuah, 2012), rambutan varietas Binjai, tomat varietas Betavila dan Servo, cabai merah besar varietas Adipati dan Imperial-308, terung ungu varietas Mustang,  Yumi  dan  Largo  (Ditbenih,  2014), diperoleh  dari  beberapa  pasar  tradisional  di Kota Bogor dan sekitarnya. Buah cabai merah besar  yang  digunakan  pada  uji  pengendalian C.  capsici  in  vivo adalah  buah  cabai  merah besar  varietas  Gada  (Ditbenih,  2014)  yang diperoleh dari Toko Buah Total, Bogor.
Asal Isolat C. capsici
Pada  penelitian  ini  isolat C.  capsici yang  digunakan  adalat  isolat  BIO  51047, diperoleh  dari  koleksi  biakan  SEAMEO BIOTROP, Bogor.

## Isolasi Khamir dari Buah-buahan dan Sayuran
Isolasi  khamir  pada  pisang,  rambutan, tomat,  cabai  merah  besar,  dan  terung  ungu dilakukan  berdasarkan  metode  pengenceran berseri  1:10  sampai  1:1000  yang  dilanjutkan dengan metode cawan sebar. Sebanyak 0.1 mL dari setiap pengenceran diambil menggunakan pipet,  kemudian  disebar  pada  media Yeast Malt Extract Agar (YMEA) yang mengandung kloramfenikol  (100  mg  L -1 )  menggunakan batang gelas berbentuk segitiga (Chanchaichaovivat et al ., 2007). Selanjutnya, semua  cawan  diinkubasi  selama  48  jam  pada suhu  ruang  (28±2 0 C).  Setiap  koloni  khamir yang berbeda ciri-cirinya berdasarkan pengamatan secara visual dan dari pengenceran yang memberikan koloni terpisah dimurnikan pada media YMEA tanpa kloramfenikol,  kemudian  dibiakkan  pada media Nutrient Yeast Dextrose Agar (NYDA). Setiap  koloni  khamir  tersebut  selanjutnya disebut isolat.
Seleksi Khamir Antagonis terhadap C. capsici
Seleksi  khamir  antagonis  terhadap C. capsici dilakukan  menggunakan  uji  sumur ( well  test )  berdasarkan  metode  Dan et  al. (2003).  Sebanyak  5  potong  biakan  murni setiap  isolat  khamir  (diameter  5  mm) dibiakkan  pada  25  mL  media Nutrient  Yeast Dextrose  Broth (NYDB)  di  dalam  labu erlenmeyer  volume  100  mL,  kemudian diinkubasi  pada  suhu  28±2 0 C  selama  7  hari dan  digoyangkan  selama  1  jam  setiap  24  jam
menggunakan shaker merek Kottermann 4020. Sel-sel khamir diendapkan melalui sentrifugasi menggunakan  sentrifuse  mikro 200  R  (jenis rotor  sentrifuse  adalah fixed-angle  rotor ) dengan  kecepatan  7  000  rpm  selama 15  menit dan  dibilas  dua  kali  menggunakan  akuades steril,  selanjutnya  disuspensikan  kembali  di dalam  akuades  steril  hingga  konsentrasinya mencapai  5x10 8 sel  mL -1 .  Sel  khamir  dihitung menggunakan hemasitometer.
Bagian  tengah  media  PDA  yang mengandung  15%  jus  buah  cabai  merah  var. IPB Perbani  di dalam  cawan petri  (diameter  9 cm)  dibuat  sumur  menggunakan cork-borer (diameter  6  mm),  kemudian  suspensi  sel khamir  (20  µL  dari  5x10 8 sel  mL -1 ) ditempatkan  di  dalam  sumur  menggunakan pipet  mikro.  Cawan  petri  dibiarkan  selama  2 jam  supaya  suspensi  sel  khamir  berdifusi  ke dalam  sumur.  Selanjutnya,  20  µL  dari  5x10 6 konidium  mL -1 C.  capsici ditempatkan  di dalam  sumur.  Sebagai  kontrol,  pada  sumur tidak  diberi  suspensi  sel  khamir.  Setiap perlakuan  (setiap  isolat  khamir)  dan  kontrol dibuat  3  ulangan  (=  3  cawan  petri).  Semua cawan  diinkubasi  pada  suhu  ruang  (28±2 0 C) dalam  kondisi  gelap.  Pertumbuhan C.  capsici pada  setiap  cawan  diamati  berdasarkan keberadaan  koloninya  setelah  7  hari  inkubasi. Isolat khamir yang menghambat total pertumbuhan C. capsici setelah 7 hari inkubasi digunakan  pada  uji  pengendalian  hayati C. capsici in vivo .
Pengendalian Hayati C. capsici Menggunakan Khamir In Vivo .
Pengendalian  hayati  penyakit  tanaman yaitu  penggunaan  mikrob  (mikroorganisme) antagonis  untuk  menekan penyakit  (Pal et  al ., 2006). Pengendalian hayati C. capsici menggunakan  khamir in  vivo dilakukan berdasarkan  metode  Dan et  al. (2003).  Buah cabai  merah  besar  varietas  Gada  yang  sehat, tidak  ada  luka  dan  goresan  pada  permukaan buah,  serta  tidak  diberi  perlakuan  pestisida dibilas  dengan  air  leding.  Setelah  dikering- udarakan,  permukaan  buah  cabai  merah didesinfeksi dengan cara diseka menggunakan kapas  steril  yang  telah  dibasahi  etanol  70%. Sebanyak  20  µL  suspensi  sel  setiap  isolat khamir dengan konsentrasi 5x10 8 sel mL -1 dan ditambahkan  0.1%  Tween  20  diinokulasikan pada  bagian  tengah  buah  cabai  menggunakan
suntikan  plastik  merek  Concepon.  Setelah  2 jam  inokulasi  khamir,  sebanyak  20  µL konidium C.  capsici (5x10 6 konidium  mL -1 ) dan ditambahkan 0.1% Tween 20
diinokulasikan  pada  titik  inokulasi  yang  sama dengan  inokulasi  khamir  pada  buah  cabai merah.  Sebagai  kontrol  negatif,  buah  cabai merah  hanya  diinokulasi  dengan  20  µL konidium C.  capsici (5x10 6 konidium  mL -1 ), sedangkan  sebagai  kontrol  positif  digunakan 20  µL  larutan fungisida benomil  0.5%  dan 20 µL  suspensi  konidium C.  capsici (5x10 6 konidium  mL -1 ).  Setiap  perlakuan  dan  kontrol dibuat  12  ulangan  (=  12  buah  cabai).  Buah cabai  merah  ditempatkan  di  dalam  wadah plastik  dengan  diameter  atas  18  cm,  diameter bawah  14  cm,  tinggi  15  cm,  dan  volume  3  L (4  buah  cabai  per  wadah  plastik)  yang  telah didesinfeksi menggunakan etanol 70%.
Kondisi  di  dalam  wadah  dibuat  lembab (kelembaban  relatif  90%).  Semua  wadah ditutup  dengan  kain  batis  steril,  selanjutnya diinkubasi  pada  suhu  ruang  (28±2 0 C)  selama
7 hari. Pengamatan gejala antraknosa dilakukan terhadap luas permukaan buah cabai merah  yang  terserang C.  capsici dengan metode  gravimetri  (Rindita et  al .,  2015) Persentase  hambatan  antraknosa  dihitung berdasarkan rumus berikut:
H = – x 100%
H  :  hambatan antraknosa (%)
LK  :  luas  gejala  antraknosa  pada  kontrol negatif (mm 2 ) LP  :  luas gejala antraknosa pada perlakuan (mm 2 )

## Analisis Data
Rancangan  penelitian  yang  digunakan pada  seleksi  khamir  antagonis  dan  uji pengendalian  hayati C.  capsici menggunakan khamir in vivo adalah rancangan acak lengkap masing-masing  dengan  3  dan  12  ulangan (Mattjik dan Sumertajaya, 2002). Tiga ulangan (=  3  cawan  petri)  yaitu  pada  tahap  penelitian seleksi  khamir  antagonis  terhadap C.  capsici, sedangkan 12 ulangan (= 12 buah cabai) yaitu pada  tahap  penelitian  pengendalian  hayati C. capsici menggunakan khamir in vivo . Analisis statistika  dilakukan  menggunakan  program SPSS versi 22.0. Jika analisis ragam (ANOVA) memberikan  perbedaan  yang  nyata,  maka dilakukan uji lanjut (DMRT) banding Duncan.

## Identifikasi  Khamir  Antagonis  Secara Morfologi dan Molekuler
Isolat  khamir  yang  menghambat  total perumbuhan C.  capsici  in  vivo diidentifikasi secara morfologi berdasarkan pustaka
Kurtzman et  al. (2011).  Setiap  isolat  khamir ditumbuhkan  pada  media Malt  Extract  Agar (MEA)  selama  7  hari  pada  suhu  28±2 0 C. Warna,  bentuk,  tepi,  dan  elevasi  koloni  setiap isolat  khamir  diamati,  kemudian  dibuat preparat  menggunakan  pewarna  laktofenol biru  katun.  Ciri-ciri  setiap  sel  khamir  diamati menggunakan mikroskop Olympus.
Identifikasi  khamir  secara  molekuler dilakukan di Laboratorium Biorin PPSHB IPB berdasarkan  pustaka  Mitchell et  al. (1992).
Primer  yang  digunakan  adalah  primer  umum 18  S  rDNA  dengan forward  primer ITS1  dan reverse  primer ITS4.  Fragmen  DNA  hasil amplifikasi  dikirim  ke  PT  Genetica  Science untuk  sikuensing.  Analisis  homologi  gen khamir  dilakukan  menggunakan basic  local
alignment  search  tool (BLAST)  pada  situs National Center for Biotechnology Information (NCBI) (www.blast.ncbi.nlm. nih.gov).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Khamir pada Buah-buahan dan Sayuran
Sebanyak  22  isolat  khamir  berhasil diisolasi  dari  permukaan  buah-buahan  dan sayuran  yang  sehat,  yaitu  isolat  CMM-1, CMM-3,  CMM-4,  PMM-1,  PMM-3,  TMM- 1,TMM-6,  RMM-1,  EMM-1,  EMM-2,  EMM- 4,  EMM-5,  EMM-9,  EMM-10,  EMM-11, EMM-13,  EMM-14,  EMM-15,  EMM-16, EMM-17,  EMM-18,  dan  EMM-19.  Kode isolat  khamir  pada  permukaan  buah-buahan dan  sayuran  yang  diperoleh  dari  beberapa pasar tradisional di Kota Bogor dan sekitarnya dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1.  Kode  isolat  khamir  pada  permukaan  buah-buahan  dan  sayuran  yang  diperoleh  dari beberapa pasar tradisional di Kota Bogor dan sekitarnya Sampel Buah-buahan dan Sayuran Lokasi Pengambilan Sampel Kode Isolat* Cabai merah var. Adipati Pasar Gunung Batu CMM-1 CMM-3 Cabai merah var. Imperial Pasar Bogor CMM-4 Pisang ambon Pasar Bogor PMM-1 PMM-3 Tomat var. Betavila Pasar Gunung Batu TMM-1 Tomat var. Servo Pasar Anyar TMM-6 Rambutan var. Binjai Pasar Dramaga RMM-1 Terung var. Mustang Pasar Gunung Batu EMM-2 EMM-4 EMM-5 EMM-10 Terung var. Yumi Pasar Bogor EMM-1 EMM-9 Terung var. Yumi Pasar Anyar EMM-11 EMM-14 EMM-15 Terung var. Largo Pasar Gembrong EMM-13 EMM-16 EMM-17 EMM-18 EMM-19
Keterangan:  *Kode  isolat  berdasarkan  (a)  huruf  pertama  nama  buah-buahan  dan  sayuran,  misal  C  =  Cabai,  P  = Pisang,  R  =  Rambutan,  E  =  Egg  plant;  (b)  MM  =  singkatan  nama  mahasiswa  yang  terlibat  pada penelitian. Angka 1 pada CMM-1 yaitu isolat khamir pertama kali yang diisolasi dari cabai merah var. Adipati.
Khamir Antagonis terhadap C. capsici
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan perlakuan  22  isolat  khamir  dan  kontrol menghasilkan  luas  koloni C.  capsici yang berbeda  sangat  nyata  pada  taraf  kepercayaan 99%  (Tabel  2).  Berdasarkan  hasil  seleksi khamir  menggunakan  uji  sumur,  diperoleh  5 dari  22  isolat  khamir  yang  menghambat  total pertumbuhan C.  capsici karena  berdasarkan pengamatan secara visual tidak ada pertumbuhan  miselium C.  capsici pada  media PDA  yang  mengandung  15%  jus  cabai  merah (Gambar 1).
Kelima  isolat  tersebut  adalah  isolat CMM-1  dan  CMM-3  yang  diisolasi  dari  buah cabai merah besar var. Adipati, isolat CMM-4
yang  diisolasi  dari  cabai  merah  besar  var. Imperial,  isolat  TMM-1  yang  diisolasi  dari tomat  var.  Betavila,  dan  isolat  EMM-11  yang diisolasi dari terung ungu var. Yumi.
Pengendalian Hayati C.
capsici
Menggunakan Khamir In Vivo
Strategi  umum  pengendalian  hayati adalah menggunakan organisme hidup sebagai agens  pengendalian  hayati  penyakit  prapanen dan  pascapanen  pada  buah-buahan  dan sayuran  (Janisiewicz  dan  Korsten,  2002). Menurut  Sharma et  al. (2009)  pengendalian penyakit  pascapanen  lebih  efektif  dan  efisien daripada pengendalian prapanen.
Tabel 2. Analisis ragam hasil seleksi khamir antagonis menggunakan uji sumur
Sumber Keragaman Jumlah Kuadrat db Kuadrat Tengah F-Hitung A 2.708E7 22 1230725.125 72.284 ** Galat 783203.571 46 17026.165 Total 2.786E7 68
Keterangan: A: perlakuan isolat khamir; **: berbeda sangat nyata pada taraf kepercayaan 99%.
a b c d
e f
Gambar  1.  Hasil  seleksi  khamir  antagonis  yang  mencegah  total  pertumbuhan C.  capsici menggunakan  uji  sumur  pada  media  PDA  yang  mengandung  15%  jus  cabai  merah setelah  7  hari  inkubasi  pada  suhu  28±2 0 C.  Isolat  khamir  CMM-1  (a);  CMM-3  (b); CMM-4  (c);  TMM-1  (d);  EMM-11  (e);  kontrol  (pada  sumur  hanya  ditempatkan suspensi konidium C. capsici ) (f).
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa luas  gejala antraknosa pada buah  cabai merah  varietas  Gada  yang  disebabkan  oleh perlakuan C. capsici dan isolat khamir CMM- 1  dan  kontrol  negatif  berbeda  sangat  nyata pada  taraf  kepercayaan  99%.  Isolat  CMM-1 tidak dapat menghambat total pertumbuhan C. capsici pada  buah  cabai  merah  varietas  Gada, namun isolat ini dapat menghambat perkembangan  antraknosa  sebesar  84.10% (Tabel  3).  Isolat  CMM-3,  CMM-4,  TMM-1, dan  EMM-11  dapat  menghambat  total pertumbuhan C.  capsici pada  buah  cabai merah var. Gada, karena berdasarkan pengamatan  secara  visual  tidak  ada  gejala antraknosa pada permukaan buah cabai setelah
7 hari inkubasi. Keempat isolat ini menyebabkan  persentase  hambatan  gejala antraknosa  yang  sama  dengan  fungisida benomil  0.5%  sehingga  berpotensi  sebagai agens pengendalian hayati.

## Mekanisme  Antagonisme  Khamir  terhadap C. capsici
Interaksi  antara  isolat  khamir  CMM-3, CMM-4,  TMM-1,  dan  EMM-11  dengan C. capsici menghasilkan  tipe  interaksi  inhibisi patogen  yang  memenuhi  kriteria  interaksi  tipe E  dan  F  (Wheeler  dan  Hocking,  1993, dimodifikasi  dari  Magan  dan  Lacey,  1984). Interaksi  yang  dihasilkan  memenuhi  kriteria tipe  E  karena C.  capsici tidak  mengalami pertumbuhan  lagi,  dan  memenuhi  kriteria  tipe
F  karena  setiap  isolat  khamir  mengalami pertumbuhan melewati C. capsici dengan cara mengelilingi  koloni C.  capsici .  Berdasarkan pengamatan  secara  visual,  koloni  keempat isolat  khamir  dan C.  capsici saling  kontak tanpa membentuk zona hambatan (Gambar 2).
Persaingan ruang dan nutrisi diduga merupakan  mekanisme  antagonisme  antara keempat  isolat  khamir  dengan C.  capsici .  Hal ini  dapat  dilihat  pada  uji  sumur  dan  uji pengendalian  hayati C.  capsici in  vivo. Isolat khamir  dapat  mengkolonisasi  dengan  cepat, menggunakan  ruang  dan  nutrisi  yang  tersedia pada  media  PDA  yang  mengandung  15%  jus buah cabai merah dan pada luka yang terdapat di buah cabai merah besar var. Gada sehingga dapat  menghambat  pertumbuhan C.  capsici . Hal ini sesuai dengan Bleve et al. (2006) yang menyatakan bahwa khamir mampu mengkolonisasi  dengan  cepat  pada  luka  yang terdapat  pada  permukaan  buah-buahan  dan sayuran  dan  menggunakan  nutrisi  yang tersedia sehingga dapat mencegah
pertumbuhan cendawan patogen. Chalutz et al.
(1988)  juga  melaporkan  bahwa  kompetisi ruang dan nutrisi merupakan mekanisme dasar dalam  penghambatan  patogen  oleh  khamir. Mekanisme hambatan lainnya adalah produksi kitinase, pelekatan pada dinding sel cendawan, aktivitas  peroksidase,  induksi  ketahanan  (El Gouth et al., 2003), dan menghasilkan sekresi yang  menghambat  pertumbuhan  patogen (Guetsky et al., 2002).
Tabel  3.  Hasil  uji  pengendalian  hayati C.  capsici menggunakan  khamir in  vivo pada  buah  cabai merah  besar  var.  Gada  setelah  7  hari  inkubasi  pada  suhu  28±2 0 C  dengan  kelembaban relatif 90%.
Isolat Khamir + C . capsici, dan Kontrol
Luas Gejala Antraknosa (mm 2 ) Hambatan (%) CMM-1 + C. capsici 15.25 ± 3.07 b 84.10 ± 3.67 b CMM-3 + C. capsici 0.00c 100.00c CMM-4 + C. capsici 0.00c 100.00c TMM-1 + C. capsici 0.00c 100.00c EMM-11 + C. capsici 0.00c 100.00c Kontrol negatif (C. capsici) 96.61 ± 6.54 a 0.00a* Kontrol positif (benomil 0.5%+ C. capsici ) 0.00c 100.00c
Keterangan: Angka-angka pada kolom yang sama yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata berdasarkan uji banding Duncan pada taraf kepercayaan 99%;  *Asumsi persentase hambatan luas gejala antraknosa pada kontrol negatif (96.6102 mm 2 ) adalah 0%.
a b c d
Gambar 2. Hasil uji mekanisme antagonisme antara khamir dengan C. capsici dengan tipe interaksi E  dan  F  pada  media  PDA  setelah  7  hari  inkubasi  pada  suhu  28±2 0 C.  CMM-3  vs C. capsici (a); CMM-4 vs C. capsici (b); TMM-1 vs C. capsici (c); EMM-11 vs C. capsici . a= C. capsici, b= isolat khamir.

## Identifikasi Khamir Antagonis
Identifikasi secara morfologi terhadap 4 isolat  khamir  yang  dapat  mencegah  total pertumbuhan C.  capsici  in  vivo menunjukkan bahwa keempat isolat tersebut tergolong genus Issatchenkia .  Koloni  isolat  CMM-3,  CMM-4, TMM-1,  dan  EMM-11  pada  media  MEA setelah  7  hari  inkubasi  berwarna  krem  terang, berbentuk  tak  beraturan  dan  menyebar, memiliki tepi bergelombang, dan elevasi datar. Bentuk  sel  isolat  CMM-3  dan  TMM-1  adalah oval  dan  ukuran  selnya  8.3-10.9  x  3.26-4.99 µm,  sedangkan  isolat  CMM-4  dan  EMM-11 memiliki  bentuk  oval  dan  agak  memanjang,
ukuran  selnya  9.33-11.93  x  4.39-5.97  µm. Hasil identifikasi
secara molekuler menunjukkan  bahwa  isolat  CMM-3,  CMM-4, TMM-1,  dan  EMM-11  adalah Issatchenkia orientalis karena berdasarkan  analisis  BLAST keempat  isolat  khamir  memiliki  tingkat kesamaan sikuen nukleotida dengan Issatchenkia  orientalis ( Pichia  kudriazevii ) sebesar 99%. Panjang sikuen CMM-3, CMM- 4,  TMM-1  dan  EMM-11  masing-masing adalah  513,  515,  448  dan  513  bp  ( base  pair ). Hasil BLAST isolat CMM-3, CMM-4, TMM- 1 dan EMM-11 adalah sebagai berikut:

## Hasil BLAST isolat CMM-3:
Query  1    CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTAGTACTACACTGCGTGAGC  60 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  1    CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTAGTACTACACTGCGTGAGC  60
Query  61   GGAACGAAAACAACAACACCTAAAATGTGGAATATAGCATATAGTCGACAAGAGAAATCT  120 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  61   GGAACGAAAACAACAACACCTAAAATGTGGAATATAGCATATAGTCGACAAGAGAAATCT  120
Query  121  ACGAAAAACAAACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCG  180 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  121  ACGAAAAACAAACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCG  180
Query  181  CAGCGAAATGCGATACCTAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACG  240 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  181  CAGCGAAATGCGATACCTAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACG  240
Query  241  CACATTGCGCCCCTCGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCGTTTCCATCTTGC  300 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  241  CACATTGCGCCCCTCGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCGTTTCCATCTTGC  300 Query  301  GCGTGCGCAGAGTTGGGGGAGCGGAGCGGACGACGTGTAAAGAGCGTCGGAGCTGCGACT  360 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  301  GCGTGCGCAGAGTTGGGGGAGCGGAGCGGACGACGTGTAAAGAGCGTCGGAGCTGCGACT  360

## (Lanjutan hasil BLAST isolat CMM-3)
Query  361  CGCCTGAAAGGGAGCGAAGCTGGCCGAGCGAACTAGACtttttttCAGGGACGCTTGGCG  420 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  361  CGCCTGAAAGGGAGCGAAGCTGGCCGAGCGAACTAGACTTTTTTTCAGGGACGCTTGGCG  420
Query  421  GCCGAGAGCGAGTGTTGCGAGACAACAAAAAGCTCGACCTCAAATCAGGTAGGAATACCC  480 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  421  GCCGAGAGCGAGTGTTGCGAGACAACAAAAAGCTCGACCTCAAATCAGGTAGGAATACCC  480
Query  481  GCTGAACTTAAGCATATCAATAAGNCGGAGGAA  513 |||||||||||||||||||||||| |||||||| Sbjct  481  GCTGAACTTAAGCATATCAATAAGGCGGAGGAA  513

## Hasil BLAST isolat CMM-4:
Query  3    CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTAGTACTACACTGCGTGAGC  62 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  1    CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTAGTACTACACTGCGTGAGC  60
Query  63   GGAACGAAAACAACAACACCTAAAATGTGGAATATAGCATATAGTCGACAAGAGAAATCT  122 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  61   GGAACGAAAACAACAACACCTAAAATGTGGAATATAGCATATAGTCGACAAGAGAAATCT  120
Query  123  ACGAAAAACAAACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCG  182 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  121  ACGAAAAACAAACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCG  180
Query  183  CAGCGAAATGCGATACCTAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACG  242 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  181  CAGCGAAATGCGATACCTAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACG  240
Query  243  CACATTGCGCCCCTCGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCGTTTCCATCTTGC  302 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  241  CACATTGCGCCCCTCGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCGTTTCCATCTTGC  300
Query  303  GCGTGCGCAGAGTTGGGGGAGCGGAGCGGACGACGTGTAAAGAGCGTCGGAGCTGCGACT  362 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  301  GCGTGCGCAGAGTTGGGGGAGCGGAGCGGACGACGTGTAAAGAGCGTCGGAGCTGCGACT  360
Query  363  CGCCTGAAAGGGAGCGAAGCTGGCCGAGCGAACTAGACtttttttCAGGGACGCTTGGCG  422 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  361  CGCCTGAAAGGGAGCGAAGCTGGCCGAGCGAACTAGACTTTTTTTCAGGGACGCTTGGCG  420
Query  423  GCCGAGAGCGAGTGTTGCGAGACAACAAAAAGCTCGACCTCAAATCAGGTAGGAATACCC  482 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  421  GCCGAGAGCGAGTGTTGCGAGACAACAAAAAGCTCGACCTCAAATCAGGTAGGAATACCC  480
Query  483  GCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCCGGAGGAA  515 |||||||||||||||||||||||| |||||||| Sbjct  481  GCTGAACTTAAGCATATCAATAAGGCGGAGGAA  513

## Hasil BLAST isolat TMM-1:
Query  3    CTTCCGTAGGGGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTATATCTTATACACATGCGT  62 |||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  1    CTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTATATCTTATACACATGCGT  60
Query  63   GAGCGCACCAAACACCTAAAATTGTAATACCACCAGTCACTAAGTTTTAACAAAACAAAA  122 |||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  61   GAGCGCACCAAACACCTAAAATTGTAATACTACCAGTCACTAAGTTTTAACAAAACAAAA  120

## (Lanjutan hasil BLAST isolat TMM-1)
Query  123  CTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCGCAGCGAAATGCGATACC  182 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  121  CTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCGCAGCGAAATGCGATACC  180
Query  183  TAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACGCACATTGCGCCCCATGG  242 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  181  TAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACGCACATTGCGCCCCATGG  240
Query  243  TATTCCATGGGGCATGCCTGTCTGAGCGTCGTTTCCTTCTTGCGCAAGCAGAGTTGAGAA  302 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  241  TATTCCATGGGGCATGCCTGTCTGAGCGTCGTTTCCTTCTTGCGCAAGCAGAGTTGAGAA  300
Query  303  CAGGCTATGCCTTTTTCGAAATGGAACGTCGTGGACGAAGTGAACTAAACTTTTAGCACG  362 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  301  CAGGCTATGCCTTTTTCGAAATGGAACGTCGTGGACGAAGTGAACTAAACTTTTAGCACG  360
Query  363  CTTTGGCCGCCGAACTTTTAACTAAGCTCGACCTCAGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAA  422 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  361  CTTTGGCCGCCGAACTTTTAACTAAGCTCGACCTCAGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAA  420
Query  423  CTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA  448 |||||||||||||||||||||||||| Sbjct  421  CTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA  446

## Hasil BLAST isolat EMM-11:
Query  2    TTCCGTAGGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTAGTACTACACTGCGTGAGC  61 ||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  153  TTCCGTAGG-TGAACCTGCGGAAGGATCATTACTGTGATTTAGTACTACACTGCGTGAGC  211
Query  62   GGAACGAAAACAACAACACCTAAAATGTGGAATATAGCATATAGTCGACAAGAGAAATCT  121 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  212  GGAACGAAAACAACAACACCTAAAATGTGGAATATAGCATATAGTCGACAAGAGAAATCT  271
Query  122  ACGAAAAACAAACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCG  181 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  272  ACGAAAAACAAACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAGCG  331
Query  182  CAGCGAAATGCGATACCTAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACG  241 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  332  CAGCGAAATGCGATACCTAGTGTGAATTGCAGCCATCGTGAATCATCGAGTTCTTGAACG  391
Query  242  CACATTGCGCCCCTCGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCGTTTCCATCTTGC  301 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  392  CACATTGCGCCCCTCGGCATTCCGGGGGGCATGCCTGTTTGAGCGTCGTTTCCATCTTGC  451
Query  302  GCGTGCGCAGAGTTGGGGGAGCGGAGCGGACGACGTGTAAAGAGCGTCGGAGCTGCGACT  361 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  452  GCGTGCGCAGAGTTGGGGGAGCGGAGCGGACGACGTGTAAAGAGCGTCGGAGCTGCGACT  511
Query  362  CGCCTGAAAGGGAGCGAAGCTGGCCGAGCGAACTAGACtttttttCAGGGACGCTTGGCG  421 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  512  CGCCTGAAAGGGAGCGAAGCTGGCCGAGCGAACTAGACTTTTTTTCAGGGACGCTTGGCG  571
Query  422  GCCGAGAGCGAGTGTTGCGAGACAACAAAAAGCTCGACCTCAAATCAGGTAGGAATACCC  481 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  572  GCCGAGAGCGAGTGTTGCGAGACAACAAAAAGCTCGACCTCAAATCAGGTAGGAATACCC  631
Query  482  GCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA  513 |||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct  632  GCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGAA  663
Gambar 3. Biakan murni Issatchenkia orientalis isolat  CMM-3  pada  media Malt Extract Agar (MEA) setelah 7 hari inkubasi  pada  suhu  28±2 0 C  (a); Foto  mikrograf Issatchenkia orientalis isolat CMM-3 (1 000x) (b).
Bleve et al. (2006) melaporkan bahwa I. orientalis galur  16C2  dan  2C2  yang  diisolasi dari  buah  anggur  dapat  mereduksi  kolonisasi cendawan Aspergillus  carbonarius dan A. niger pada buah anggur. Issatchenkia orientalis galur ER1 yang diisolasi dari terung ungu  dapat  mereduksi  timbulnya  antraknosa pada buah cabai sebesar 76.6%
(Chanchaichaovivat et al., 2007).

## KESIMPULAN
Lima  dari  22  isolat  khamir  yang diisolasi  dari  buah-buahan  dan  sayuran,  yaitu CMM-1,  CMM-3,  CMM-4,  TMM-1,  dan EMM-11 dapat menghambat total
pertumbuhan C. capsici setelah inkubasi 7 hari pada  uji  sumur.  Isolat  CMM-3,  CMM-4, TMM-1,  dan  EMM-11  dapat  menekan  total serangan  antraknosa  pada  buah  cabai  merah
besar  varietas  Gada  sehingga  keempat  isolat tersebut berpotensi sebagai agens pengendalian  hayati  antraknosa  pada  buah cabai  merah.  Berdasarkan  hasil  identifikasi secara morfologi  dan molekuler,  isolat  CMM- 3,  CMM-4,  TMM-1,  dan  EMM-11  adalah Issatchenkia orientalis .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada Ir. Ina Retnowati dan Nijma Nurfadila, SSi  atas  bantuan  teknis;  dan  kepada  Dr.  Utut Widyastuti, MSi (Almh.) yang telah membantu mengidentifikasi khamir secara molekuler.

## DAFTAR PUSTAKA
Bleve,  G.,  F.  Grieco,  G.  Cozzi,  A.  Logrieco, A. Visconti. 2006. Isolation of epiphytic yeast  with  potential  for  biocontrol  of Aspergillus carbonarius and A. niger on grape. J. Food Microbiol . 108: 204-209.
Chalutz E., A.R. Ben, S. Droby, L. Cohen, B. Weiss,  C.L.  Wilson.  1988.  Yeast  as biocontrol agents of postharvest diseases of fruits. Phytoparasitica. 16: 69.
Chanchaichaovivat,  A.,  B.  Panijpan,  P. Ruenwongsa.  2007.  Screening  and identiﬁcation of yeast strains from fruits and  vegetables:  potential  for  biological control of postharvest chilli anthracnose ( Colletotrichum  capsici ).  Biol.  Control . 42: 326-335.
[Ditbenih]  Direktorat  Perbenihan  Hortikultura.
2014. Database Varietas . http://ditbenih. hortikultura.deptan.go.id [12 Maret 2015].
[Ditbuah] Direktorat Budidaya dan Pascapanen  Buah.  2012. Pedoman Penanganan Pascapanen Pisang. http://
ditbuah.hortikulturapertanian.go.id [11 Maret 2015].
Dan, H., X.D. Zhenk, Y.M. Yin, P. Sun, H.Y. Zhang.  2003.  Yeast  application  for controlling  apple  postharvest  disease associated  with Penicillium  expansum. Bot. Bull. Acad. Sin . 44: 211-216.
El  Gouth,  A.,  C.L.  Wilson,  M.  Wisniewski.
2003.  Control  of  postharvest  decay  of apple  fruit  with Candida  saitoama and induction  of  defense  responses.  J. Phytopathol. 93: 344-348.
Guetsky,  R.,  D.  Shtienberg,  Y.  Elad,  E. Fischer,  A.  Dinoor.  2002.  Improving biological control by combining
biocontrol  agents  each  with  several mechanisms  of  disease  suppression.  J. Phytopathol. 92: 976-985.
Hashem,  M.,  S.  Alamri.  2009.  The  biocontrol of  postharvest  disease  ( Botryodiplodia theobromae ) of guava ( Psidium guajava )  by  the  application  of  yeast strains.  Postharvest  Biol.  Technol.  53: 123-130.
Harsono, P. 2012. Mulsa organik: pengaruhnya terhadap  lingkungan  mikro,  sifat  kimia tanah  dan  keragaan  cabai  merah  di tanah  vertisol  Sukoharjo  pada  musim kemarau. J. Hort. Indonesia. 3(1): 35-41.
Janisiewicz, W.J., L. Korsten. 2002. Biological control of postharvest diseases of fruits. Ann. Rev. Phytopathol . 40(1): 14-41.
[Kementan]  Kementrian  Pertanian.  2015. Produksi Cabai Besar Menurut Provinsi, 2010-2014.  http://www.pertanian.go.id.
[19 Juni 2015].
Khalimi, K. 2010. Pemanfaatan ragi
( Saccharomyces sp.) dalam pengendalian penyakit tumbuhan yang ramah lingkungan. J. Bumi Lestari . 10(2): 215-
221.
Kurtzman, C.P., J.W. Fell, T. Boekhout. 2011. The  Yeasts,  A  Taxonomic  Study.  Edisi ke-5. London (GB): Elsevier.
Magan, N., J. Lacey. 1984. The effect of water activity,  temperature  and  structure  on interactions  between  field  and  storage fungi. Trans. Brit. Mycol. Soc. 92: 83-93.
Mattjik,  A.A.,  I.M.  Sumertajaya.  2002. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab. Ed ke-2. Bogor (ID): IPB Pr.
Mitchell, T.G., T.J. White, J.W. Taylor. 1992.
Comparison  of  5.8S  ribosomal  DNA sequences  among  the Basidiomycetous yeast genera Cystofilobasidium, Filobasidium, and Filobasidiella .  J. Med. Vet. Mycol. 30: 207-208.
Pal,  K.K.,  B.M.  Gardener.  2006.  Biological Control  of  Plant  Pathogens.  The  Plant Health Instructor. DOI: 10.1094/PHI-A- 2006-1117-02.
Rindita,  L.I.,  Sudirman,  Y.  Koesmaryono. 2015. Air quality bioindikator using the population  of  epiphytic  macrolichens  in Bogor City, West Java. Hayati J. Biosci. 22 (2): 53-59.
Sharma,  R.R.,  D.  Singh,  R.  Singh.  2009.
Biological control of postharvest diseases  of  fruits  and  vegetables  by microbial  antagonists:  A  review.  J. Biocontrol. 50: 205-221.
Wheeler, K.A., A.D. Hocking. 1993. Interactions  among  xerophilic  fungi associated  with  dried  salted  fish.  J. Applied Bacteriol. 74: 164-169.
Wilia, W., Widodo, S.  Wiyono. 2012. Potensi khamir  untuk  mengendalikan  penyakit antraknosa  ( Colletotrichum  acutatum L.) pada  tanaman  cabai.  Bioplantae.  1(4): 291-298.