## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com
Antioxidant Activity, Inhibition α-Glucosidase of Cymbopogon nardus (L.) Rendle and Identification of Active Compounds
(Aktivitas Antioksidan, Inhibisi α-Glukosidase dari Daun Sereh Wangi ( Cymbopogon nardus (L.) Rendle dan Identifikasi Senyawa Aktif)
Najmah 1* , Hasim 1 , Didah Nur Faridah 2
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia 2 Department of Food Sience and Technology, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 12 April 2021  ; Accepted: 20 May 2021
Corresponding author : Najmah ; Departemen Biokimia IPB; e-mail: najmahkim235@gmail.com

## ABSTRACT
Mellitus diabetes (DM) has become a health problem in various countries even in Indonesia some  people  with  Covid-19  have  comorbid  DM.  DM  treatment  can  be  done  by  inhibiting  the absorption  of  glucose  by  inhibiting  enzymes  α-glucosidase  in  the  intestine.  Treatment  using synthetic drugs often causes side effects  and to overcome the problem herbal medicine becomes  a choice.  The  fragrant  lemongrass  plant  (Cymbopogon  nardus  (L.)  Rendle)  has  bioactive  potential based  on  previous  research,  but  its  potency  as  a  DM  drug  needs  further  exploration.  The  study aimed to determine the potency of fragrant lemongrass leaves (Cymbopogon nardus (L.) Rendle) as a  DM  drug  by  determining  antioxidant  and  α-glucosidase  inhibition  activities  and  then  the  most active sample was subjected to compound identification. Fragrant lemongrass leaves (Cymbopogon nardus  (L.)  Rendle)  were  macerated  using  ethanol  concentrations  of  96%  followed  by  multilevel fractionation  with  solvents  n-hexane,  water  and  ethyl  acetate.  Testing  of  antioxidant  activity  was carried  out  using  the  DPPH  method,  antidiabetic  activity  using  α-glucosidase  inhibition  and identification of compounds using Liquid Chromatograph-Mass Spectrometry (LC-MS/MS). The n- hexane fraction test results showed very strong antioxidant activity with an IC50 value of 8.23 ppm and  an  ic50  inhibition  value  of  α-glucosidase  of  311.87  ppm  so  that  it  does  not  have  sufficiently active  α-glucosidase  inhibition  activity.  Identification  of  n-hexane  fractions  using  LC-MS  /  MS showed  the  presence  of  compounds  namely  ar-turmerone  as  an  antioxidant,  and  antidiabetes compounds  beesioside  N  and  notohamosin  A.  Based  on  the  results  it  can  be  concluded  that  the fraction of n-hexane has the potential as a source of antioxidants and its inhibitory activity against α-glucosidase is not significant.
Keywords: Cymbopogon nardus (L.) Rendle, DPPH, ELISA, LC-MS/MS

## ABSTRAK
Penyakit  Diabetes  Milletus  (DM)  telah  menjadi  masalah  kesehatan  di  berbagai  negara bahkan  di  Indonesia  termasuk  sebagian  penderita  Covid-19  memiliki  komorbid  DM.  Pengobatan DM  dapat  dilakukan  dengan  menghambat  penyerapan  glukosa  melalui  penghambatan  aktivitas enzim α-glukosidase di usus. Pengobatan menggunakan obat sintetik sering kali menimbulkan efek samping  untuk  mengatasi  masalah  tersebut  sehingga  obat  herbal  menjadi  pilihan  alternatif. Tanaman  sereh  wangi  (Cymbopogon  nardus  (L.)  Rendle)  memiliki  potensi  berdasarkan  dari penelitian  terdahulu,  namun  potensinya  sebagai  obat  DM  perlu  dilakukan  ekplorasi  lebih  lanjut. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  daun  sereh  wangi  (Cymbopogon  nardus  (L.) Rendle)  sebagai  obat  DM  dengan  menentukan  aktivitas  antioksidan  dan  inhibisi  α-glukosidase kemudian  sampel  teraktif  diidentifikasi  senyawa.  Daun  sereh  wangi  (Cymbopogon  nardus  (L.) Rendle) dimaserasi menggunakan etanol konsentrasi 96% dilanjutkan fraksinasi bertingkat dengan pelarut  n-heksan,  air  dan  etil  asetat.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  menggunakan metode  DPPH  dan  aktivitas  antidiabetes  menggunakan  inhibisi  α-glukosidase  serta  identifikasi senyawa  menggunakan  Liquid  Chromatograph-Mass  Spectrometry  (LC-MS/MS).  Hasil  pengujian fraksi n-heksan memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat dengan nilai IC50 sebesar 8,23 ppm dan nilai  IC 50 inhibisi  α-glukosidase  sebesar  311,87  ppm  sehingga  tidak  memiliki  aktivitas  inhibisi  α- glukosidase signifikan. Identifikasi fraksi n-heksan menggunakan LC-MS/MS mengandung senyawa yaitu ar-turmeron sebagai antioksidan, dan antidabetes senyawa beesioside N dan notohamosin A. Berdasarkan hasil pengujian dapat disimpulkan fraksi n-heksan berpotensi sebagai sumber bahan antioksidan dan aktivitas inhibisi α-glukosidase tidak signifikan.
Kata kunci : Cymbopogon nardus (L.) Rendle, DPPH, ELISA, LC-MS/MS

## 1. PENDAHULUAN
Pasien  Covid-19  yang  terkonfirmasi memiliki  penyakit  penyerta  atau  komorbid sebagian  merupakan  pasien  diabates  mellitus (DM)  (Kemenkes  RI  2020).  Prevalensi diabetes  Indonesia  termasuk  kedalam  10 urutan negara dengan kasus  diabetes sebanyak 10,7  juta  jiwa  pada  urutan  ke-7  dan menjadikan  negara  di  Asia  Tenggara  terdaftar nominasi  tersebut.  Untuk  kawasan  Asia Tenggara,  Indonesia  dengan  kasus  sebanyak 11,3% terdaftar pada urutan ke-3 (Atlas 2019). Data  Riset  Kesehatan  Dasar  (Riskesdas) mencatat  pravelensi  peningkatan  selama  5 tahun,  semula  sebanyak  6,9%  di  tahun  2013 dan  menjadi    8,5%  pada  tahun  2018 (Kemenkes RI 2020).
Penyakit  DM  memicu  terjadinya  stres oksidatif  sehingga  penderita  DM  sangat dianjurkan mengonsumsi antioksidan dari luar tubuh.  Pengobatan  DM  dapat  dilakukan dengan  cara  menghambat  kerja  enzim  α-
glukosidase di usus halus sehingga menurunkan  kadar  gula  darah.  Obat-obatan seperti  akarbos,  miglitol  dan  voglibos  dapat menghambat kerja enzim α-glukosidase namun,  menghasilkan  efek  samping  berupa kembung, diare, flatulensi dan ketidaknyamanan  perut  (Derosa  &  Maffioli 2012).  Akibat  efek  samping  ini  bahan  herbal menjadi  pilihan  alternatif  selain  itu  mudah diperoleh.
Sereh  wangi  ( Cymbopogon  nardus (L.) Rendle)  merupakan  tanaman  yang  masih  satu genus  dengan  sereh  dapur  ( Cymbopogon citratus ), dimana sereh dapur memiliki potensi sebagai  antidiabetes  dengsn  cukup  dibuat berupa  minuman  teh.  Beberapa  penelitian mengenai  potensi  sereh  wangi,  Jumepaeng et al. (2013) melaporkan aktivitas penghambatan α-amilase  dari  minyak  atsiri  sereh  wangi. Aktivitas  antioksidan  pada  sereh  dilaporkan oleh  G et  al. (2013)  bahwa  nilai  IC50  ekstrak kasar  metanol    dari  batang  sereh  wangi  yaitu
67,18  mg/mL  dan  nilai  IC50  dari  fraksi  etil asetat  yaitu  68,96  mg/mL.  Artinya  nilai  IC50 masih  diantara  50-100  mg/mL  sehingga dikatakan  memiliki  antioksidan  yang  kuat. Oleh  sebab  itu,  penelitian  ini  bertujuan menganalisis  daun  sereh  wangi  ( Cymbopogon nardus (L.)  Rendle)  untuk  memperoleh  obat DM dengan menggunakan aktivitas antioksidan  dan  inhibisi  α-glukosidase  dan dilanjutkan dengan identifikasi senyawa.

## 2. METODOLOGI

## Preparasi Sampel
Daun sereh wangi ( Cymbopogon nardus (L.) Rendle) dari kebun Cikabayan IPB dicuci dengan  menggunakan  air  mengalir  lalu ditiriskan,  dirajang  dan  dikeringkan  dalam oven  pada  suhu  50  ᵒC  selama  3  hari.
Selanjutnya  dibuat  simplisia  ukuran  60  mesh dengan  cara  daun  diblender  membentuk serbuk  dan  disaring  serta  diayak  untuk memperoleh ukuran mesh yang sesuai (Alfarabi et al. 2010).

## Ekstraksi Simplisia
Simplisia  sebanyak  50  g  diekstraksi dengan  500  mL  etanol  konsentrasi  96%, dishaker  selama  24  jam  pada  suhu  ruang dengan  kecepatan  130rpm.  Kemudian,  filtrat diperoleh dari maserat yang disaring. Ekstraksi dilakukan sebanyak tiga kali ulangan, selanjutnya  dipekatkan  melalui  alat rotary evaporator pada  suhu  50  ᵒC  untuk memperoleh  ekstrak  kasar  (Sa’adah  & Nurhasnawati 2017).

## Fraksinasi Bertingkat
Ekstrak  difraksinasi  dengan  corong  pisah menggunakan  pelarut  bertingkat  yaitu  pelarut non  polar  (n-heksan),  semipolar  (etil  asetat) dan  polar  (air).  Ekstrak  sebanyak  0,5  gram dilarutkan dalam pelarut n-heksan:air (perbandingan  1:1)  dengan  bantuan  sonikator lalu  dipisahkan  dengan  menggunakan  corong pisah.  Larutan  ekstrak  yang  akan  dipisahkan
dikocok  dan  didiamkan  selama  30  menit  di dalam  corong  pisah  hingga  terbentuk  dua lapisan n-heksan dan air kemudian dipisahkan dan disimpan sebagai fraksi n-heksan. Selanjutnya  fraksi  air  difraksinasi  kembali menggunakan  pelarut  etil  asetat  sehingga diperoleh lapisan air dan etil asetat. Fraksinasi bertingkat  diulang  sebanyak  tiga  kali.  Setelah itu, dipekatkan pada suhu 50 ᵒC menggunakan rotary  evaporator kemudian  fraksi  disimpan pada suhu 4 o C (Ismail et al. 2016).
Pengujian Aktivitas Antioksidan Metode

## DPPH
Metode pengujian menggunakan metode 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) (Sigma Aldrich, USA. D9132) yang didasarkan  pada  kemampuan  sampel  dalam mereduksi radikal bebas stabil DPPH. Pembuatan  serbuk  DPPH,  sebanyak  1,6  mg ditambahkan  metanol  0,4  mM  sebanyak  10 mL  dan  distirer  30  menit  setelah  homogen ditambahkan  bufer  MES  pH  6  dan  metanol 20% masing-masing 10 mL sehingga diperoleh  campuran  DPPH.  Sampel  sebanyak 1  mL  dimasukan  dalam  tabung  dengan konsentrasi  setiap  tabung  bervariasi  0;  1.25; 2.5;  3.75;  5;  6.25  (ppm).  Selanjutnya,  setiap tabung  ditambahkan  1  mL  campuran  DPPH dan  diinkubasi  selama  30  menit  dan  serapan diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis (Hitachi type U-2800) pada panjang gelombang 520 nm. Asam askorbat (vitamin c) sebagai senyawa standar (Hasim et al. 2017). Aktivitas persen hambat dihitung menggunakan rumus: % inhibisi =
Keterangan:
Ab : absorbansi blanko
As : absorbansi sampel
Nilai IC 50
dapat dihitung dengan menggunakan  rumus  persamaan  regresi  linier dimana  sumbu  x  merupakan  konsentrasi  dan
sumbu  y  adalah  persen  penghambatan. Persamaan regresi y = bx + a digunakan untuk menentukan IC 50 dengan persamaan :
IC 50 = {(50-a)/b)}

## Uji inhibisi α-Glukosidase
Sampel  dipipet  10  µL,  blanko  dan larutan standar (konsentrasi 50 ppm, 100 ppm, 200  ppm,  300  ppm,  400  ppm  dan  500  ppm) dimasukkan  ke  dalam  sumur microplate reader (Biotek  Epoch),  dimetil  sulfoksida (DMSO)  (Merck,  Jerman)  digunakan  sebagai pelarut dan ditambahkan buffer fosfat (pH 7,0) sebanyak  50  µL.  Selanjutnya  tiga  menit sebelum uji ditambahkan substrat  p-nitrofenil- α-D-glukopiranosida  (pNPG)  (Sigma  Aldrich
USA.  N1377)  10  mM  dipipet  25  µL.  Reaksi diinisiasi dengan ditambahan α-glukosidase 25 µl pada konsentrasi 0.04 U/mL ke buffer fosfat (pH  7.0)  selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  30  menit.  Kemudian  pengukuran menggunakan Enzym-Linked  Immunosobent Assay (ELISA reader) pada panjang gelombang  410  nm.  Pengerjaan  dilakukan sebanyak  3  kali  ulangan  dan  kontrol  positif menggunakan  larutan  akarbos.  Selanjutnya nilai  IC 50 ditentukan  dengan  perhitungan  % inhibisi. Sistem reaksi ditujukkan pada Tabel 1 (Sholikha & Muhammad 2020).
% inhibisi =
Tabel 1 Sistem reaksi inhibisi α-glukosidase Pereaksi Volume (μL) Blanko Kontrol Blanko Sampel Kontrol Sampel DMSO 10 10 - - Sampel - - 10 10 Buffer 50 50 50 50 Substrat 25 25 25 25 Enzim 25 - 25 - Buffer - 25 - 25 Inkubasi 37 ᵒC 30 menit Identifikasi Senyawa Fraksi  n-Heksan  dilanjutkan  untuk diidentifikasi menggunakan LC-MS/MS (Waters Alliance 2659-Quattro Micro) dengan tipe  QMicro  QAA  842  dan  detektor  MS-MS Waters  Quatro  Micro.  Jenis  kolom  C18, diameter 4.6 panjang 150 mm, ukuran partikel 5 µm, ukuran pori 130 Å, fase gerak campuran air  dan  metanol  (10:90),  tekanan  maksimal 300  Bar.  Sampel  yang  sudah  dimasukkan  ke kolom  LC  memiliki  laju  alir  0.800  mL/menit dengan kolom suhu 40 ⁰ C, suhu sampel 20 ⁰ C dan  waktu  akhir  35  menit.  Jenis  quadrupole adalah  modus  scan  5  detik.  Spektrum  yang terbentuk  merupakan  muatan  (m/z)  dari  rasio massa.

## Analisis Data
Analisis data menggunakan uji Analysis of Variance (ANOVA) dan Uji Tukey pada  selang  kepercayaan  95%,  taraf  uji  α  = 0.05.  Data  dianalisis  menggunakan  program SPSS Statistics 16.0

## 3. HASIL
Rendemen  Ekstrak  dan  Fraksi  Sereh Wangi
Simplisia  yang  diperoleh  memiliki kadar  air  sebesar  6%.  Ekstrak  daun  sereh wangi diperoleh dengan metode maserasi pada suhu  ruang  menggunakan  etanol  konsentrasi 96%.  Ekstraksi  dilakukan  tiga  kali  ulangan yang  bertujuan  mengekstrak  secara  optimal senyawa  bioaktif  dalam  serbuk  simplisia.
Filtrat  hasil  ekstraksi  diuapkan  pelarutnya menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh  maserat  etanol  96%  kering.  Hasil ekstraksi diperoleh dengan menghitung persentase  rendemen.  Ekstrak  etanol  96%
dipisahkan  dengan  fraksinasi  agar  diperoleh fraksi yang bertingkat sesuai dengan kepolaran dan menghitung persentase rendemen. Rendemen  sereh  wangi  ditunjukkan  pada Tabel 2. Tabel 2 Rendemen ekstrak dan fraksi sereh wangi Sampel Rendemen rata-rata (%) EtOH 96% 13.2 Fraksi n-heksan 5.86 Fraksi air 5.34 Fraksi etil asetat 1.80

## Gambar 1 Aktivitas antioksidan sereh wangi

## Aktivitas Antioksidan
Aktivitas antioksidan ditentukan berdasarkan  perubahan  warna  ungu  menjadi kuning yang menandakan berkurangnya konsentrasi DPPH akibat penghambatan reaksi oksidasi.  Nilai  IC 50 dapat  dihitung  dengan menggunakan  rumus  persamaan  regresi  linier. Persamaan regresi y = bx + a digunakan untuk menentukan IC 50 . Hasil uji menunjukkan pada selang  kepercayaan  95%  aktivitas  antioksidan ekstrak  dan  fraksi  berbeda  nyata.  Gambar  1 menunjukkan  nilai  IC50,  kesamaan  huruf menunjukkan  aktivitas  antioksidan  tidak signifikan
Inhibisi Enzim α-Glukosidase
Pengujian  ini  prinsip  kerjanya  adalah terjadi reaksi hidrolisis dimana p- nitrofenil-α- D-glukopiranosida  menghasilkan  produk  α-D- glukosa  dan  p-nitrofenol  ditandai  dengan warna kuning. Perubahan warna yang dihasilkan  menjadi  indikator  aktivitas  inhibisi α-glukosidase, warna kuning semakin memudar menunjukkan aktivitas inhibisi  yang tinggi  (Susilawati et  al. 2017).  Daya  hambat ekstrak  dan  fraksi  terhadap  α-glukosidase ditentukan berdasarkan perhitungan nilai IC50 yang  diperoleh.  Nilai  IC50  merupakan konsentrasi yang dibutuhkan untuk menghambat 50% aktivitas enzim dan akarbos digunakan sebagai pembanding.
Hasil  penelitian  menunjukkan  uji  yang dilakukan  pada  akarbos  didapatkan  nilai  IC50 2.82 ppm. Huruf yang berbeda signifikan pada selang kepercayaan 95%. Gambar 2
menunjukkan  fraksi  n-heksan  paling  poten dengan  nilai  IC50  311.87  ppm  dibandingkan dengan fraksi lainnya dan ekstrak.
Gambar 2 Inhibisi α-glukosidase sereh wangi

## Identifikasi Senyawa Fraksi n-heksan
Senyawa aktif pada sampel diidentifiksai  menggunakan  LCMS/MS,  fraksi n-heksan memiliki aktivitas antioksidan terkuat dan  aktivitas  penghambatan α- glukosidase  tertinggi  sehingga  dilanjutkan identifikasi  kandungan  senyawa. Peak hasil LCMS/MS  diinterpretasikan  menggunakan software masslynx  selanjutnya  ditelusuri formula dibank data pubchem dan chemspider. Gambar 3 menunjukkan peak hasil LCMS/MS
perbandingan  sumbu  y  merupakan  persentase kelimpahan  dan  sumbu  x  merupakan  waktu retensi (Rt).
Hasil  interpretasi peak pada  fraksi  n- heksan  menggunakan software masslynx  dan bank  data    pubchem  dan  chemspider  untuk menganalisis  kemungkinan  senyawa  dengan rumus molekul yang sama. Tabel 3 menunjukkan  identifikasi  senyawa  dari  fraksi n-heksan.
Gambar 3 Peak LC-MS/MS dari fraksi n-heksan

## Tabel 3 Identifikasi senyawa fraksi n-heksan dari sereh wangi
No Waktu Retensi (Rt) m/z Bobot Molekul (g/mol) Kemungkinan Nama Senyawa Senyawa Dengan Formula Yang Sama Pubchem Chemspider 1 2.04 301.2764 300.483 12-Hydroxyoctadecanoic acid 671 175 2 3.41 475.3437 474.682 Notohamosin A 411 111 3 14.73 701.5118 701.095 [11,11,11-Tris(3,5-di-tert- butylphenyl)]undeca- 1,3,5,7,9-pentayne 2 1 4 16.86 257.0647 256.21 3,4,5-trimethoxyphthalic acid 152 45 5 257.0647 256.255 2,3-Diethynyl-9,10- anthraquinone 1649 3 6 17.20 595.6425 595.094 3,7,11,15,18,22,26,30- octamethyldotriacontane- 1,32-diol 26 11 7 17.97 217.155 216.324 Ar-turmeron 4267 2111 8 19.08 217.0285 216.195 dodeca-1,3,5,7,9,11-hexaynyl prop-2-enoate 1 0 9 20.01 639.4080 638.839 Beesiosides N 78 29 10 20.58 409.3729 408.667 (E)-2-heptyl-10-oxononadec- 11-enoic acid 99 12 11 23.68 475.2804 474.641 Biyouyanagin A 257 47 12 25.21 701.5118 701.095 [11,11,11-Tris(3,5-di-tert- butylphenyl)]undeca- 1,3,5,7,9-pentayne 2 1 13 27.17 217.0918 216.186 myo-inositol dihydrate 1 0
14
31.50 683.425 682.992 bis[1-methyl-6-(5,5,8,8- tetramethyl-6,7- dihydronaphthalen-2- yl)naphthalen-2-yl]methanone 2 0 15 39.18 217.0918 217.0923 (2R,3R,4R,5R)-hexane- 1,2,3,4,5,6 hexol;hydrogen peroxide 6 0 16 40.62 217.2183 216.365 10-propoxydecan-1-ol 910 1 17 49.82 551.4326 550.810 Cholestan-3-ylhexopyranosid 87 5

## 4. DISKUSI
Rendemen  Ekstrak  dan  Fraksi  Sereh Wangi
Ekstraksi  dengan  metode  maserasi melalui  perendaman  dengan  pelarut  etanol 96%,  pemilihan  pelarut  didasarkan  pada  sifat
yang tidak berbahaya, aman dan tidak beracun (Azis et  al. 2014).  Pelarut  etanol  96% menghasilkan  persen  rendemen  tertinggi  pada bahan  sediaan  obat  herbal  (Arifianti et  al. 2014).  Prinsip  maserasi  didasarkan  pada proses  difusi  dengan  adanya  perbedaan
konsentrasi  pada  sel,  larutan  konsentrasi  yang tinggi  dalam  sel  akan  keluar  dan  tergantikan oleh  pelarut  yang  mempunyai  konsentrasi rendah  sehingga  keseimbangan  tercapai  di dalam sel maupun di luar sel.
Maserat  hasil  maserasi  dipekatkan dengan  menggunakan rotary  evaporator dan diperoleh  rendemen  sebesar  13.2%  rendemen ini  lebih  tinggi  dari  penelitian  Rizkita  (2017) dimana ekstrak daun sereh wangi menggunakanan  etanol  70%  menghasilkan rendemen  sebesar  8.17%.  Nuryadin et  al. (2018)  pada  daun  sereh  dapur  menggunakan etanol menghasilkan rendemen sebesar 3.95%. Ekstrak  kasar  etanol  sereh  wangi  dilanjutkan fraksinasi  dengan  meningkatkan  kepolaran menggunakan  pelarut  yang  berbeda-beda sehingga  diperoleh  senyawa  yang  sesuai tingkat kepolaran masing-masing. Hasil fraksinasi    dipekatkan  menggunakan  alat rotary evaporator sehingga didapatkan rendemen  fraksi  n-heksan  sebesar  5.86%, fraksi  air  5.34%  dan  fraksi  etil  asetat  sebesar 1.8%.  Berdasarkan  hasil  rendemen  dari  fraksi menunjukkan  fraksi  n-heksan  tertinggi  dan diduga  fitokimia  dalam  ekstrak  daun  sereh wangi  bersifat  non  polar  sehingga  mudah diekstrak  oleh  n-heksan  yang  bersifat  non polar.

## Aktivitas antioksidan
Antioksidan merupakan zat yang bisa berkompetisi dan menghambat atau menghambat  proses  oksidasi  radikal  bebas pada  tingkat  konsentrasi  yang  relatif  rendah
(Warsito et  al. 2017).  Senyawa  yang  berperan mendonorkan  atom  hidrogennya  terhadap radikal  bebas  dikatakan  memiliki  aktivitas antioksidan.  Besarnya  penghambatan  DPPH dinyatakan dalam IC 50 ( inhibitory concentration ),  yaitu  kemampuan  konsentrasi ekstrak  dan  fraksi  dalam  penghambatan aktivitas DPPH sebesar 50%. Menurut Putri & Hidajati  (2015)  tingkatan  kekuatan  senyawa antioksidan  yaitu  sangat  kuat  jika  nilai  IC 50 kurang  dari  50  ppm,  untuk  tingkatan  kuat apabila  berada  pada  rentang  50  ppm  hingga 100  ppm,  tingkat  sedang  antara  100  ppm sampai  250  ppm  dan  kategori  lemah  antara 250 sampai dengan 300 ppm. Artinya semakin kecil  nilai  IC 50 berarti  aktivitas  antioksidan suatu  senyawa  bioaktif  semakit  kuat.  Gambar 1  menunjukkan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  dan fraksi  lebih  besar  dari  vitamin  C.  Hal  ini dikarenakan ekstrak dan fraksi bukan senyawa murni  artinya  masih  mengandung  campuran senyawa  lain yang  kemungkinan  tidak mempunyai  aktivitas  antioksidan.  Tetapi masih  dikategorikan  memiliki  aktivitas  yang sangat  kuat  dengan  nilai  kurang  dari  50  ppm. Nilai IC 50 pada vitamin C sebesar 7,6 ppm dan fraksi n-heksan sebesar 8,23 ppm dari hasil uji Tukey  keduanya  tidak  berbeda  nyata.  Ekstrak daun  etanol  96%  dan  fraksi  dapat  dikatakan lebih tinggi dari penelitian yang diperoleh G et al. (2013)  dengan  nilai  IC 50 fraksi  etil  asetat sebesar 68,96 ppm dan ekstrak metanol batang sereh  wangi  sebesar  67,18  ppm.  Gambar  4 menunjukkan  mekanisme  reaksi  peredaman radikal oleh polifenol.
Gugus  hidroksil  pada  senyawa  fenolik  dan flavonoid dapat menstabilkan atau menangkap senyawa radikal bebas pada DPPH, menunjukkan  perubahan  warna  dari  ungu menjadi kuning yang menandakan terbentuknya  polifenol  yang  stabil  dan  DPP hidrazin yang bukan senyawa radikal (G et al. 2013).
Fraksi  n-heksan  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  tinggi  diduga  karena  sereh wangi mengandung minyak atsiri yang bersifat non polar. Minyak atsiri daun sereh ( Cymbopogon citratus)  memiliki  aktivitas antioksidan  sebesar  44.06  mg  Trolox/mL sampel (Vazquez-Briones et al. 2015). Minyak atsiri pada batang sereh ( Cymbopogon citratus) memiliki  persen  penghambatan  terhadap DPPH  sebesar  89.5%  .  Silou et  al. (2017) melaporkan,  minyak  atsiri  sereh  wangi ( Cymbopogon nardus)  mengandung  sitronelal (40-48%),  geraniol  (10-22%),  sitronelol  (10- 12%),  limonen  (2-3%),  geranil  asetat  (1-2%), linalool  (1%).  Geraniol  dan  geranil  asetat memiliki  aktivitas  antioksidan  sebesar  24.6 dan 4.2 ppm (Farhath et al. 2012).

## Inhibisi α-glukosidase
Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui  potensi  dari  ekstrak  dan  fraksi daun  sereh  wangi  ( Cymbopogon  nardus (L.) Rendle) sebagai  antidiabetes berdasarkan nilai IC50.  α-glukosidase  merupakan  enzim  kunci di  usus  yang  mengkatalisis  penyerapan glukosa dengan hidrolisis pada ikatan glikosidik.  Inhibisi  terhadap  α-glukosidase menyebabkan berkurangnya penyerapan glukosa  didalam  tubuh  (Balaji et  al. 2015). Persentase  inhibisi  dari  enzim  α-glukosidase dinyatakan  dalam  IC50.  Nilai  IC50  semakin kecil  menandakan  kemampuan  inhibisi  α- glukosidase semakin kuat. Warna kuning yang semakin  memudar  menandakan  terbentuknya p-nitrofenol yang menandakan besarnya penghambatan  α-glukosidase.  Pengukuran
absorbansi  menggunakan ELISA  reader pada panjang  gelombang  410  nm.  Kelebihan pengerjaan  relatif  sederhana,  ekonomis,  dan memiliki  sensitivitas  yang  cukup  tinggi  serta hasil  yang  cukup  akurat  walaupun  latutan  uji yang  digunakan  dalam  jumlah  sangat  kecil (Charisma et al. 2020).
Gambar  2  menunjukkan  nilai  IC50, akarbos  digunakan  sebagai  kontrol  dengan IC50  2,82  ppm.  Tingkat  kekuatan  inhibisi terhadap  enzim  α-glukosidase  ialah  sangat aktif jika IC50 ≤ 25 ppm, aktif jika 25 ppm < IC50  ≤  50  ppm,  kurang  aktif  jika  50  ppm  < IC50 ≤ 100 μg/mL dan tidak aktif jika IC50 > 100  μg/mL  (Sukmawati et  al .  2014).  Artinya ekstrak  dan  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat  dan fraksi  n-heksan  dikategorikan  tidak  aktif dengan nilai IC50 berturut-turut 2600,38 ppm; 3377,14  ppm;  797,79  ppm  dan  311,87  ppm. Hal  ini  kemungkinan  ekstrak  dan  fraksi  yang masih  dalam  keadaan  senyawa  campuran sehingga  masih  terdapat  senyawa  yang  tidak memiliki  aktivitas  inhibisi  terhadap  α- glukosidase.
Penelitian  ini  menunjukkan  fraksi  n- heksan  mempunyai  kemampuan  menginhibisi α-glukosidase lebih baik dibandingkan dengan fraksi air, fraksi etil asetat dan ekstrak. Hal ini diduga  akibat  perbedaan  kepolaran  pelarut mempengaruhi  kandungan  metabolit  sekunder yang  dihasilkan  sehingga  aktivitas  inhibisi yang diperoleh juga berbeda. Adanya senyawa fenolik dapat mengikat protein enzim sehingga sampel  dapat  menghambat  enzim  yang menghidrolisis  karbohidrat  (Zhang et  al. 2015).
Fraksi n-heksan yang bersifat non polar pada  sereh  wangi  juga  mengandung  minyak atsiri  yang  bersifat  non  polar.  Interpretasi senyawa  LC-MS/MS  yang  menunjukkan adanya senyawa ar-turmeron umumnya terdapat dalam minyak atsiri. Senyawa minyak atsiri  seperti  mircen,  sitral,  dan  geraniol  pada sereh    ( Cymbopogon citratus)  diketahui sebagai  inhibitor  aldose  reduktase  dengan
menggunakan  metode  docking  in  silico (Saraswathi  2011)  dan  telah  dibuktikan melalui  penelitian in  vivo pada  tikus  model diabetes  tipe  2  (Bharti et  al. 2013).  Minyak atsiri  daun  dan  batang  sereh  ( Cymbopogon citratus )  mampu  menurunkan  kadar  glukosa melalui  hambatan  aktivitas  β-glukosidase (Mirghani et al. 2012). Aktivitas penghambatan  α-amilase  dari  minyak  atsiri sereh wangi  ( Cymbopogon nardus )  yang telah diuapkan  dengan  air,  secara  signifikan  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  obat  akarbosa (Jumepaeng et al. 2013).
Sampel yang paling baik pada aktivitas antioksidan  dan  inhibisi  α-glukosidase  adalah fraksi  n-heksan  sehingga  dilanjutkan  ke identifikasi senyawa menggunakan LC-

## MS/MS
Identifikasi Senyawa Fraksi n-heksan Gambar  3,  terlihat peak dengan  waktu  retensi yang berbeda. Peak selanjutnya diolah dengan masslynx dan ditelusuri  senyawa di  bank data pubchem  dan  chemspider,  pada  Tabel  3 terdapat senyawa-senyawa dari fraksi n-heksan sebanyak  17.  Terdapat  beberapa  senyawa diduga  sebagai  obat  DM  yaitu  beesioside  N,
ar-turmeron  dan  notohamosin  A.  Senyawa beesioside  N  (Gambar  5)  yang  muncul  pada waktu retensi 3,41 menit merupakan golongan triterpenoid mempunyai rumus molekul C 35 H5 8 O 10 . Triterpenoid merupakan komponen  aktif  obat  antidiabetes  yang memiliki  efek  dalam  sekresi  insulin  dan penyerapan  glukosa(Sunaryo  H,  Kusmardi 2012;  Rathore et  al. 2014).  Ar-turmeron muncul  pada  waktu  retensi  17,97  menit, senyawa  ini  termasuk  dalam  kelompok terpenoid dengan rumus molekul C 15 H 20 O dan massa  molekul  216.324  g/mol.  Menurut Lekshmi et  al. (2012)  ar-turmeron,  komponen volatil utama dalam rimpang kunyit menunjukkan  potensi  α-glukosidase  IC 50 sebesar  0.28  ppm)  dan  penghambatan  α- amylase IC 50 sebesar 24,5 ppm. Penelitian Liju et  al. (2011),  menunjukkan  ar-turmeron  juga berperan dalam aktivitas antioksidan superoksida, radikal hidroksil, dan peroksidasi lipid  pada  tikus  diuji in  vitro maupun in  vivo . Avanco et  al. (2017),  melaporkan  ar-turmeron secara in  vitro berperan  dalam  menghambat radikal  bebas  dengan  metode  DPPH  dan ABTS.
Gambar 5 (a) Struktur Ar-turmeron, (b) Beesioside N, dan (c) Notohamosin A
Senyawa  yang  kemungkinan  juga berperan dalam antidiabetes adalah notohamosin  A,  senyawa  ini  dengan  waktu retensi  23,68  menit  memiliki  rumus  molekul C 29 H 46 O 5 dan  massa  molekul  474,682    g/mol.
Notohamosin  A  mempunyai  efek  terhadap aktivitas  dari  α-glukosidase  sebesar  42% dengan  konsentrasi  0.5  mM  (Jabeen et  al. 2013).
Hasil pengujian fraksi n-heksan memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat dengan  nilai  IC50  sebesar  8,23  ppm  dan  nilai IC50  inhibisi  α-glukosidase  sebesar  311,87 ppm sehingga tidak memiliki aktivitas inhibisi α-glukosidase  cukup  aktif.  Identifikasi  fraksi n-heksan menggunakan
LC-MS/MS
mengandung senyawa yaitu ar-turmeron sebagai  antioksidan,  dan  antidabetes  senyawa beesioside N dan notohamosin A. Berdasarkan hasil  pengujian  dapat  disimpulkan  fraksi  n- heksan  berpotensi  sebagai  sumber  antioksidan dan  aktivitas  inhibisi  α-glukosidase  tidak cukup aktif.

## DAFTAR PUSTAKA
Alfarabi  M,  Bintang  M,  Suryani,  Safithri  M. 2010.  The  Comparative  Ability  of Antioxidant  Activity  of  Piper  crocatum in  Inhibiting  Fatty  Acid  Oxidation  and Free  Radical  Scavenging. Hayati  J. Biosci. 17(4):201– 204.doi:10.4308/hjb.17.4.201.
Arifianti L, Oktarina RD, Kusumawati I. 2014. Pengaruh  Jenis  Pelarut  Pengektraksi  E- Journal  Planta  Husada  Vol.2,No.1  April 2014  1. E-Journal  Planto  Husada . 2(1):3–6.
Atlas  IDFD.  2019. International  Diabetes Federation . Ninth. ISBN: 978-2-930229- 87-4.
Avanco  G,  Ferreira  F,  Bonfim  N,  Mallmann CA,  Brugnari  T,  Abreu  Filho  BA  de, Mikcha  JMG,  Machinski  M.  2017. Curcuma longa L. essential oil composition,  antioxidant  effect,  and effect  on  Fusarium  verticillioides  and fumonisin  production. Food  Control . 73:806–
813.doi:10.1016/j.foodcont.2016.09.032.
Azis  T,  Febrizky  S,  Mario  AD.  2014. Pengaruh  Jenis  Pelarut  Terhadap  Persen Yieldalkaloiddari  Daun  Salam  India (Murraya  Koenigii). Tek.  Kim. 20(2):1–
6.
Balaji  RM,  Jeyaram  C,  Sundaram  KM,
Ramasamy  MS.  2015.  Studies  on
Antidiabetic Activity of Indian
Medicinal  Plants  Using  α-Amylase  and α-Glucosidase  Inhibitory  Activity  -  A Pathway to Antidiabetic Drugs. World J. Med. Sci. 12(3):207– 212.doi:10.5829/idosi.wjms.2015.12.3.9 317.
Bharti  SK,  Kumar  A,  Prakash  O,  Krishnan  S, Gupta  AK.  2013.  Essential  oil  of cymbopogon  citratus  against  diabetes: Validation  by  In  vivo  experiments  and computational studies. J. Bioanal. Biomed. 5(5):194– 203.doi:10.4172/1948-593X.1000098.
Charisma  AM,  Elis  AF,  Farida  A.  2020. ELISA  (Enzyme-Linked  Immunosorbent Assay) Indirect Urine Pada Pemeriksaan Dengue .  Pasuruan:  CV.  Penerbit  Qiara Media.
Derosa  G,  Maffioli  P.  2012.  α-Glucosidase inhibitors  and  their  use  in  clinical practice. Arch.  Med.  Sci. 8(5):899– 906.doi:10.5114/aoms.2012.31621.
Farhath  MSS,  Vijaya  PP,  Vimal  M.  2012.  An evaluation of toxicity in  essential oils of geraniol,  geranial  acetate,  gingerol  and eugenol  in  rats. Int.  J.  Phytomedicine . 4(4):519–524.
G  W,  -  E,  Panggabean  A.  2013.  Pemanfaatan Tumbuhan  Serai  Wangi  ( Cymbopogon nardus (L.) Rendle) Sebagai Antioksidan Alami. J.  Kim.  Mulawarman .  10(2):74– 79.
Hasim  H,  Andrianto  D,  Lestari  ED,  Faridah DN.  2017.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak sulur  buah  naga  putih  (Hylocereus undatus)  dengan  metode  DPPH  dan Rancimat. J. Gizi dan Pangan . 12(3):203–
210.doi:10.25182/jgp.2017.12.3.203- 210.
Jabeen  B,  Riaz  N,  Saleem  M,  Naveed  MA, Ashraf  M,  Alam  U,  Rafiq  HM,  Tareen RB, Jabbar A. 2013. Isolation of natural compounds  from  Phlomis  stewartii showing α-glucosidase inhibitory activity. Phytochemistry . 96:443–
448.doi:10.1016/j.phytochem.2013.09.0
15.
Jumepaeng  T,  Prachakool  S,  Luthria  DL, Chanthai  S.  2013.  Determination  of antioxidant  capacity  and  α-amylase inhibitory  activity  of  the  essential  oils from  citronella  grass  and  lemongrass. Int. Food Res. J. 20(1):481–485.
(Kemenkes RI) Kementrian kesehatan republik indonesia. 2020. Tetap
Produktif,  Cegah  Dan  Atasi  Diabetes Mellitus. Pus.  data  dan  Inf.  kementrian Kesehat. RI .
Lekshmi  PC,  Arimboor  R,  Indulekha  PS, Nirmala  Menon  A.  2012.  Turmeric ( Curcuma  longa L.)  volatile  oil  inhibits key  enzymes  linked  to  type  2  diabetes. Int.  J.  Food  Sci.  Nutr. 63(7):832– 834.doi:10.3109/09637486.2011.607156 .
Liju  VB,  Jeena  K,  Kuttan  R.  2011.  An evaluation of antioxidant, anti- inflammatory, and antinociceptive
activities  of  essential  oil  from Curcuma longa. L. Indian J. Pharmacol.
43(5):526–531.doi:10.4103/0253- 7613.84961.
Mirghani  MES,  Liyana  Y,  Parveen  J.  2012. Bioactivity analysis of lemongrass ( Cymbopogan citratus ) essential oil. Int. Food Res. J. 19(2):569–575.
Nuryadin  Y,  Naid  T,  Dahlia  AA,  Dali  KS,
Selatan  S.  2018.  Kadar  Flavonoid  Total Ekstrak  Etanol  Daun  Serai  Dapur  dan Daun  Alang  -  Alang  Menggunakan Spektrofotometri  UV  -  VIS. WOH  J.
Kesehatan. 1(4):337–345.
Putri  AA.,  Hidajati  N.  2015.  Uji  Aktivitas Antioksidan  Senyawa  Fenolik  Ekstrak Metanol  Kulit  Batang  Tumbuhan  Nyiri Batu ( Xylocarpus moluccensis ). Unesa J. Chem. 4(1):41.
Rathore K, Singh VK, Jain P, Rao SP, Ahmed Z, Singh VD. 2014. In-vitro and in-vivo antiadipogenic, hypolipidemic and antidiabetic activity of Diospyros melanoxylon (Roxb). J. Ethnopharmacol. 155(2):1171–
1176.doi:10.1016/j.jep.2014.06.050. Rizkita  AD.  2017.  Efektivitas  Antibakteri Ekstrak Daun Sereh. Univ. Muhammadiyah Jakarta .(November 2017):1–2. Sa’adah H, Nurhasnawati H. 2017. Perbandingan pelarut etanol dan air pada pembuatan  ekstrak  umbi  bawang  tiwai (Eleutherine Americana Merr) menggunakan  metode  maserasi. J.  Ilm. Manuntung . 1(2):149.doi:10.51352/jim.v1i2.27.
Saraswathi  K.  2011.  Inhibition  of  aldose activity  by  essential  phytochemicals  of Cymbopogon  Citratus  (DC.)  Stapf. Int. J. (5):257–267.
Silou T, Bikanga R, Nsikabaka S, Nombault J, Mavoungou C, Figuérédo G, Chalchat J- C.  2017.  Aromatic  Plants  from  the Plateau  des  Cataractes  (Congo  Basin). Chemotype  characterization  of  essential oil  of  Cymbopogon  nardus  (L.)  Rendle acclimatized in Congo-Brazzaville Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 21(2):105-116.
Sukmawati, Nurnaningsih, Mamat P. 2020. Uji
Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Daun  Kersen ( Muntingia calabura L.) Sebagai
Inhibitor  Enzim  α-Glukosidase  Dengan Menggunakan Elisa Reader. J Fito. Indo . 7(2):1-5.
Sunaryo H, Kusmardi TW. 2012. Uji aktivitas antidiabetes  senyawa  aktif  dari  fraksi kloroform  herba  ciplukan  (Physalis angulata  L.)  terhadap  penurunan  kadar glukosa darah dan perbaikan sel langerhans  pankreas  pada  mencit  yang diinduksi aloksan. Farmasains . 1(5):246–251. Susilawati  E,  Adnyana  IK,  Fisheri  N.  2017. Aktivitas ekstrak etanol daun singawalang  (Petiveria  alliacea  L.)  dan fraksinya  sebagai  antidiabetes. Kartika J. Ilm. Farm. 5(2):68.doi:10.26874/kjif.v5i2.113. Vazquez-Briones MDC, Hernandez LR, Guerrero-Beltran JA. 2015. Physicochemical and Antioxidant
Properties  of  Cymbopogon  citratus
Essential Oil. J. Food Res.
4(3):36.doi:10.5539/jfr.v4n3p36.
Warsito,  Noorhamdani,  Sukardi,  Suratmo.
2017. Aktivitas Antioksidan Dan Antimikroba  Minyak  Jeruk  Purut. J. Environ. Eng. Sustain. Technol.
04(01):13–18.