## Biodegradability of Proteolytic Bacteria in Mangrove Ecosystems
Kristiwany Mayneke Claudia 1* , Nursyirwani 1 , Irwan Effendi 1
1 Department of Marine Science, Faculty of Fisheries and Marine Universitas Riau Corresponding Author: kristiwanymeynekeclaudia@gmail.com
Diterima/Received: 20 April 2021; Disetujui/Accepted: 30 April 2021

## ABSTRACT
The  purpose  of  this  study  was  to  awareness  the  optimal  time  for  the  growth  of  proteolytic bacteria  in  producing  the  protease  enzyme  and  determine  the  effectiveness  of  the  protease  enzyme from proteolytic bacteria in degrading mangrove litter. The method used was the experimental method by  using  two  proteolytic  bacteria  isolates,  namely Bacillus  manliponensis (K6)  and  Bacillus toyonensis  (K20).  This  method  used  one  treatment  for  each  proteolytic  bacterial  isolate,  namely  the addition of different extract containing protease enzyme (0%, 25%, and 50%) with three replications. Measurement of bacterial growth was carried out every 6 hours for 24 hours using Total Plate Count (TPC)  and  spectrophotometric  method. B.  manliponensis and B.  toyonensis have  enzyme  activity  as indicate by the presence of a clear zone on Zobell Marine Agar 2216 and skim milk 1%. The growth bacteria  based  on  the  TPC  measurement  was  directly  proportional  to  the  spectrophotometric measurement results. The highest bacterial count was (1.39 x 10 8 CFU's/ml) K6 bacteria and (1.52 x 10 8 CFU's/ml) K20 bacteria. The results of the measurement of cell growth in the spectrophotometric method  occurred  at  the  6th  hour,  namely  10.36  x  108  CFU's/ml  (K6  bacteria)  and  10.97  x  10 8 CFU's/ml (K20 bacteria). The optimum time of the protease enzyme occurred at 6 hours, which was 0.0258 mg/ml (K6 bacteria) and 0.0262 mg/ml (K20 bacteria). The highest dissolved protein content was obtained at the 50% dose of 0.054 mg/ml (K6 bacteria)  and 0.055 mg/ml (K20 bacteria),  while the lowest was at 0%, namely 0.050 mg/ml (K6 bacteria) and 0.051 mg/ml (K20 bacteria).
Keywords: Biodegradation, Growth, Proteolytic Bacteria, Protease Enzyme, Dissolved Protein

## 1. PENDAHULUAN
Ekosistem mangrove merupakan
ekosistem  antara  daratan  dengan  ekosistem lautan, sehingga ekosistem mangrove mempunyai  fungsi  yang  spesifik  dengan berlangsungnya tergantung pada dinamika yang terjadi  di  ekosistem  daratan  maupun  lautan (Olii et  al. 2015;  Syarial et  al. 2018). Berdasarkan  penelitian  Naibaho et  al., (2015), serasah  daun Avicennia  marina mengandung unsur  hara  karbon,  nitrogen  dan  fosfor. A.marina mengandung  bahan  organik  karbon 47,93%,  nitrogen  0,35%,  fosfor  0,083%, kalium 0,81%, dan magnesium 0,49% sedangkan daun Rhizophora apiculata mengandung  bahan  organik  karbon  50,83%, nitrogen  0,83%, fosfor  0,025%,  kalium  0,35%, kalsium  0,75%  dan  magnesium  0,80%.  Salah satu  mikroorganisme  yang  berperan  dalam proses dekomposisi adalah bakteri.
Negara  industri  maju  sudah  banyak mengekstraksi enzim dari berbagai mikroorganisme.
Aktivitas enzim yang dihasilkan dari mikroorganisme yang tinggi dan
bersifat  lebih  stabil  dibandingkan  yang  berasal dari  tumbuhan  atau  hewan.  Contoh  dari  enzim tersebut  adalah  enzim  ekstraseluler  yang dihasilkan dari bakteri seperti amilase, protease, lipase dan selulase.
Berbagai penelitian telah banyak dilakukan  pada  ekosistem  mangrove,  antara lain  mengenai  mikrobiota,  nutrien  dan  analisis logam  berat.  Namun  penelitian  mikrobiologi mengenai mikroorganisme pendegradasi bakteri  proteolitik  masih  belum  banyak dilakukan,  oleh  karena  itu  perlu  dilakukan penelitian  mengenai  kemampuan  biodegradasi dari  isolat  bakteri  proteolitik pada  ekosistem mangrove.
Tujuan  dilakukannya  penelitian  ini adalah  untuk  menentukan  waktu  optimum pertumbuhan  sel  bakteri  dan  produksi  enzim protease  dari  bakteri  proteolitik  serta  untuk menguji efektivitas  enzim protease dari bakteri proteolitik dalam mendegradasi serasah mangrove.
2. METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Juni  2020.  Sampel  serasah  mangrove  diambil dari  areal  hutan  mangrove  Stasiun  Kelautan Kelurahan Purnama Kota Dumai Provinsi Riau. Uji  kemampuan  degradasi  bakteri  proteolitik terhadap  serasah  mangrove  dilakukan  di Laboratorium  Mikrobiologi  Laut  Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Riau.

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  metode  eksperimen,  yaitu  menguji kemampuan  isolat  bakteri  proteolitik  dalam mendegradasi  bahan  organik  dari  serasah mangrove. Rancangan percobaan yang digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  satu  faktor,  dengan  1  (satu)  perlakuan yaitu  penambahan  dosis  enzim  protease berbeda  (0%,  25%  dan  50%).  Percobaan dilakukan dengan tiga kali ulangan.

## Prosedur Penelitian Sterilisasi Alat
Sterilisasi alat dilakukan sebagai langkah awal  dalam  mempersiapkan  pembuatan  media. Hal ini dilakukan agar alat-alat yang digunakan steril  dan  bebas  dari  organisme-organisme patogen yang masih melekat pada alat tersebut. Peralatan yang digunakan seperti tabung reaksi, tabung erlenmeyer dibungkus dengan aluminium  foil,  cawan  petri  dibungkus  dengan kertas  padi  lalu  dimasukkan  ke  dalam keranjang  yang  telah  disiapkan,  keranjang dimasukkan  ke dalam  autoklaf  untuk sterilisasi dengan  suhu  121°C  dengan  tekanan  2  atm dalam  waktu  15  menit.  Setelah  proses  autoklaf selesai,  alat-alat  tersebut  dibiarkan  kering kemudian disusun pada lemari penyimpanan.

## Peremajaan Isolat Bakteri
Isolat  yang  digunakan  adalah  isolat bakteri proteolitik yaitu bakteri B. manliponensis (K6)  dan  bakteri B.  toyonensis (K20)  yang  telah  diisolasi  dari  sedimen  hutan mangrove Stasiun Kelautan Kelurahan Purnama  Kota  Dumai  Provinsi  Riau  (Zebua et al. ,  2020).  Isolat  bakteri  proteolitik  yang digunakan  diambil  sebanyak  1  ose,  kemudian diinokulasi  ke  dalam  cawan  petri  berisi  media Zobell  Marine  Agar  yang  ditambah skim  milk 1%.  Setelah  itu  biakan  bakteri  diinkubasi  pada inkubator dengan suhu ruang selama 24 Jam.
Uji Aktivitas Protease secara Kualitatif Uji kualitatif dilakukan dengan menggunakan media Zobell Marine  Agar 2216 yang  ditambah skim  milk 1%.  Suspensi  bakteri proteolitik  yang  telah  diremajakan  diambil sebanyak  1  ose  dan  diinokulasikan  ke  dalam cawan  petri  yang  berisi  media  Zobell  Marine Agar  dan skim milk lalu  diinkubasi  selama  24 jam  pada  suhu  37 o C.  Jika  terbentuk  zona bening disekitar koloni, hal tersebut menunjukkan bahwa adanya aktivitas proteolitik.

## Pembuatan Suspensi bakteri
Bakteri yang digunakan dalam pengujian dibuat dalam bentuk suspensi, diambil menggunakan jarum ose, dimasukkan ke dalam tabung  reaksi  steril  yang  telah  berisi  larutan NaCl fisiologis. Campuran kemudian dihomogenkan  dengan  vortex.  Kekeruhan campuran  dibandingkan  dengan  kekeruhan Mc Farland  0,5  Standard yang  setara  dengan  10 8

## CFU/mL.

## Pembuatan Larutan Standar Mc. Farland
Prosedur  pembuatan  larutan  standar McFarland  dalam  penelitian  ini  yaitu  dengan memasukkan  BaCl 2 terlebih  dahulu  lalu ditambahkan H 2 SO 4 sesuai komposisi dari skala McFarland,  kemudian  larutan  di vortex dan ditutup  dengan  aluminium  foil  lalu  disimpan pada  suhu  ruang.  Skala  standard  McFarland yang digunakan dalam penelitian ini adalah 0,5 dengan  komposisi 0,05 ml BaCl 1% + 9,95 ml H 2 SO 4 1%  dengan  perikiraan  jumlah  bakteri pada  suspensi  1,5×10 8 CFU’s/ml  dan  nilai absorbansi  ( Optical  Density )  0,8  sampai  1 (DALYNN Biological, 2014).

## Pertumbuhan Bakteri dan Waktu Optimum Produksi Enzim Protease
Penentuan  waktu  optimum  produksi protease  diawali  dengan  penentuan  waktu pertumbuhan  bakteri  pada  inokulum  yang digunakan.  Penentuan  waktu  pertumbuhan bakteri  dilakukan  dengan  mengkultur  10  mL suspensi  bakteri  ke  dalam  100  mL  media  cair yang  ditambahkan skim  milk 1%.  Kultur diinkubasi pada suhu 50 o C menggunakan water bath  shaker dengan  kecepatan  90  rpm. Pengukuran  pertumbuhan  bakteri  dilakukan dengan menggunakan 2 (dua) cara yaitu metode TPC dan metode spektrofotometri.
Teknik  yang  digunakan  pada  metode TPC  dalam  penelitian  ini  yaitu  teknik  cawan
sebar  ( spread  plate ).  Langkah  pertama  dalam metode ini yaitu menyiapkan media PCA ( Plate Count  Agar )  yang  telah  dibuat,  disterilkan  dan ditempatkan  pada  cawan  petri  secara  aseptis (Effendi,  2020).  Sampel  bakteri  pada  media pertumbuhan diencerkan terlebih dahulu sampai  pengenceran  10 -5 ,  kemudian  0,1  ml diambil menggunakan mikropipet dan dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  yang  berisi media  PCA.  Sampel  bakteri  pada  media kemudian  disebar  dan  diratakan  menggunakan batang drigalski secara aseptis di dekat bunsen, setelah itu sampel bakteri diinkubasi selama 24 jam  dalam  inkubator  kemudian  koloni  bakteri yang  tumbuh  pada  media  PCA  dihitung menggunakan Colony  counter .  Hasil  jumlah koloni  yang  didapat  kemudian  dimasukkan kedalam rumus perhitungan bakteri berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan oleh Tyas et al . (2018), yaitu:
CFU
1 ol  sampel    fa  o  pengence an oloni Metode spektrofotometri ini
menggunakan spektrofotometer untuk mengukur  jumlah  sel  bakteri  dengan  cara melihat  kekeruhan  suspensi  sampel  bakteri. Sampel  bakteri  pada  media  diambil  dan dimasukkan  kedalam  kuvet,  kemudian  kuvet diletakkan  dalam  spektrofotometer  dan  diukur nilai absorbansinya dengan panjang gelombang 630 nm. Panjang gelombang 630 nm digunakan berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan oleh  Imron  dan  Purwanti  (2016)  yang mengukur  pertumbuhan  bakteri Bacillus sp menggunakan spektrofotometer dengan panjang  gelombang  600  nm.  Nilai  absorbansi dikonversikan  kedalam  rumus  regresi  linear yang  telah  didapat  dari  data  kurva  standar McFarland,  hingga  didapat  nilai  kepadatan  sel pada media sebagai hasilnya.
Pengukuran  pertumbuhan  bakteri  dan waktu optimum produksi enzim dilakukan pada jam  ke  0,  6,  12,  18  dan  24  untuk  diukur  nilai Optical  Density (OD)  pada  λ  630  nm menggunakan  spektofotometer  dan  setiap  kali pengukuran  dilakukan  juga  pengujian  aktivitas enzim  p o ease  pada  λ  595  nm   Se elah  i u, dibuat  kurva  pertumbuhan  bakteri  untuk menentukan waktu pertumbuhan bakteri tersebut.  Waktu  pertumbuhan  dengan  aktivitas enzim  protease  tertinggi  digunakan  sebagai waktu optimum produksi enzim protease.

## Produksi Enzim Protease
Enzim  protease  dipanen  selama  waktu produksi  tertinggi  yang  telah  didapatkan sebelumnya  yaitu  pada  jam  ke  6.  Kultur  sel pada  media  produksi  yang  mengandung  enzim protease ekstraseluler disentrifugasi pada kecepatan  9.000  rpm  selama  10  menit  untuk memisahkan  supernatant  yang  mengandung enzim  dengan  pellet  bakteri.  Supernatan  hasil sentrifugasi  diukur  absorbansinya  mengguna- kan  spektrofotometer  dan  kemudian  disimpan pada  suhu  10 o C  sebagai  ekstrak  kasar  enzim protease.
Uji Kemampuan Bakteri dalam Mendegradasi Serasah Mangrove Percobaan didesain menggunakan
Rancangan  Acak  Lengkap,  terdiri  atas  1  (satu) perlakuan  dan  tiga  kali  ulangan.  Perlakuan yang digunakan adalah pemberian dosis ekstrak kasar  enzim  protease  yang  berbeda  (0%,  25% dan  50%).  Preparasi  substrat  (daun  mangrove) dilakukan  dengan  cara  substrat  direndam dengan air selama 24 jam dan dikeringkan pada suhu  70 o C  dalam  oven  selama  3  hari.
Kemudian  substrat  dihaluskan  menggunakan alat  blender  dan  diayak  menggunakan  ayakan 100 mesh  size .  Sebanyak  10  g  substrat  di- masukkan  ke  dalam  botol  sampel  yang  berisi 50 mL akuades. Substrat diinkubasi menggunakan water  bath  shaker dengan kecepatan  90  rpm  selama  30  menit.  Setelah inkubasi  selesai,  ditambahkan  enzim  kasar protease  sesuai  perlakuan,  dan  kemudian diinkubasi  selama  60  menit  pada  suhu  50 o C. Substrat disentrifus untuk mendapatkan ekstrak kasar  substrat  dengan  kecepatan  10.000  rpm selama 1 menit. Parameter yang diamati adalah kadar protein terlarut. Kadar protein ditentukan dengan  metode  Bradford  (1976)  menggunakan Bovine  Serum  Albumin (BSA) Fraction  V sebagai  standar  protein.  Sebanyak  20  mg  BSA ditimbang  dan  ditambahkan  10  mL  akuades. Larutan kemudian dihomogenkan dan diencerkan  sampai  20  mL.  Konsentrasi  akhir larutan stok untuk standar ini adalah 1 mg/mL. Ekstrak  kasar  substrat  dimasukkan  kedalam tabung reaksi sebanyak 0.1 mL dan ditambahkan 1 mL pereaksi Bradford kemudian diukur nilai absorbansinya menggunakan spektrofotometri.

## Analisis Data
Data  laju  degradasi  bahan  organik  oleh bakteri  proteolitik  disajikan  dalam  bentuk

## Biodegradability of Proteolytic Bacteria in Mangrove Ecosystems
grafik  dan  tabel.  Kemudian  data  dijelaskan secara  deskriptif  yang  didukung  dengan referensi  yang  terkait  dengan  penelitian  ini. Untuk  melihat  isolat  bakteri  yang  telah  diuji kemampuan  mendegradasi  protein  digunakan uji ANOVA dengan menggunakan prinsip RAL (Rancangan Acak Lengkap). Jika nilai uji tidak signifikan  maka  dilakukan  uji  lanjut  dengan menggunakan uji beda nyata (Newman-Keuls).

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Aktivitas Protease secara Kualitatif
Pada  uji  kualitatif  ini  terlihat  bahwa
isolat  K6  ( B.  manliponensis )  dan  K20  ( B. toyonensis ) menghasilkan zona bening disekitar koloni  bakteri.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa isolat  K6  dan  K20  merupakan  bakteri proteolitik  atau  mampu  menghasilkan  enzim protease (Gambar 1).
Aktivitas  hidrolisis  secara  kualitatif merupakan  gambaran  dari  kemampuan  isolat bakteri  proteolitik  merombak  protein  dengan membandingkan  besarnya  zona  bening  di sekitar koloni dengan besarnya diameter koloni (Widhyastuti dan Dewi, 2001)
Gambar 1. Uji aktivitas protease scara kualitatif isolat K6 (A) dan Isolat K20 (B) Keterangan: a. Koloni bakteri dan b. Zona bening
Zona  bening  yang  dihasilkan  merupakan hasil hidrolisis substrat protein yang terkandung  dalam  media  ZMA  oleh  enzim protease  yang  dihasilkan  oleh  isolat  bakteri. Media  ZMA  mengandung  susu  skim  yang ditambahkan  sebagai  sumber  karbon  utama bagi  kebutuhan  metabolisme  bakteri.  Isolat bakteri kemudian dijadikan sebagai starter pada proses produksi enzim protease.

## Pertumbuhan Sel Bakteri Proteolitik
Hasil  pengukuran  pertumbuhan  bakteri dengan perhitungan metode TPC dan spektrofotometri  dirata-ratakan  berdasarkan  3 (tiga)  ulangan  yang  kemudian  disajikan  dalam bentuk  Gambar  2  dan  Gambar  3  dengan  nilai hasil  yang  dikali  10 8 dan  sa uan  CFU’s/ml Berdasarkan  hasil  penelitian,  isolat  bakteri  K6 dan  K20  mengalami  puncak  pertumbuhan tertinggi  pada  jam  ke-6.  Fase  ini  bakteri mengalami  pertumbuhan  yang  cepat.  Madigan et al. (2009) mengatakan bahwa fase logaritmik
merupakan  fase  pertumbuhan  bakteri  yang berlangsung  sangat  cepat  karena  terjadi penggandaan  sel  bakteri  secara  cepat.  Pada perhitungan  pertumbuhan  sel  bakteri  dengan metode TPC jumlah koloni terbesar terjadi pada jam  ke-6  yaitu  1.39  x  10 8 CFU’s/ml  (ba  e i K6)  dan  1.52  x  10 8 CFU’s/ml  (ba  e i  K20) Pada  perhitungan  pertumbuhan  sel  bakteri dengan metode spektrofotometri, hasil pengukuran  nilai  absorbansi  dikonversikan menjadi jumlah sel yang tersuspensi menggunakan  rumus  regresi  linear  yang didapat  dari  data  standar  McFarland,  sampai didapatkan  data  kepadatan  sel  bakteri  pada setiap pengukuran. Hasil perhitungan pertumbuhan  sel  bakteri  dengan  metode spektrofotometri terbesar terjadi pada jam ke 6, yaitu  sebesar  10.36  x  10 8 CFU’s/ml  (ba  eri K6)  dan  10.97  x  10 8 CFU’s/ml  (ba  e i  K20 (Gambar 3 dan Gambar 4).
Gambar 2. Pertumbuhan isolat bakteri yang dihitung melalui metode TPC
Gambar 3. Pertumbuhan isolat bakteri yang dihitung melalui metode spektrofotometri
Waktu Optimum Produksi Enzim Protease Hasil pengukuran waktu optimum produksi  enzim  dari  isolat  bakteri  dirata- ratakan berdasarkan 3 (tiga) ulangan yang dapat dilihat  pada  Gambar  4,  dengan  satuan  mg/ml. Waktu  optimum  produksi  enzim  protease terjadi pada jam ke-6. Kerapatan optik menurun setelah jam ke-6. Pada waktu jam ke-12 sampai dengan  jam  ke-24,  produksi  enzim  menurun karena  berkurangnya  jumlah  substrat  yang dipecah.  Produk  enzim  yang  terbentuk  dan produk lainnya berupa asam dapat menghambat pembentukkan kompleks enzim substrat. Akibat gangguan tersebut bisa terjadi perubahan  struktur,  sehingga  sisi  aktif  enzim
mengalami perubahan dan tidak dapat digunakan dalam mengikat substrat secara baik (Yunita,  2012).  Dugaan  lain  yakni  kebutuhan nutrisi  asam  amino  oleh  bakteri  sudah terpenuhi,  atau  bakteri  mulai  mengalami  lisis atau  mati  (Yunita et  al., 2015).  Aktivitas protease tertinggi dari isolat bakteri K6 sebesar 0.0258  mg/ml  dan  isolat  bakteri  K20  sebesar 0.0262  mg/ml.  Hasil  ini  lebih  besar  jika dibandingkan  dengan  penelitian  Inten et  al.,
(2015) yang melaporkan ekstrak tanah mangrove memiliki aktivitas protease mencapai 1.9  x  10 -4 mg/ml.  Waktu  optimum  produksi enzim  protease  akan  digunakan  untuk  tahap selanjutnya.
Gambar 4. Aktivitas protease isolat bakteri

## Biodegradability of Proteolytic Bacteria in Mangrove Ecosystems

## Uji  Kemampuan  Bakteri  Proteolitik  dalam Mendegradasi Serasah Mangrove
Kadar protein terlarut merupakan produk antara  pada  hidrolisis  protein  ekstrak  enzim protease  yang  terkandung  dalam  ekstrak  kasar substrat.  Hasil  pengukuran  kadar  protein terlarut pada bakteri K6 ( B. manliponensis ) dan bakteri  K20  ( B.  toyonensis )  dapat  diliat  pada Gambar  5.  Kadar  protein  terlarut  secara  nyata (P<0.005)  dipengaruhi  oleh  enzim  protease yang  ditambahkan  ke  dalam  substrat  serasah mangrove.  Kadar  protein  terlarut  meningkat sejalan  dengan  meningkatnya  dosis  ekstrak kasar enzim protease yang ditambahkan. Kadar protein  terlarut  tertinggi  pada  bakteri  K6  ( B. manliponensis ) dan bakteri K20 ( B. toyonensis ) yaitu  pada  perlakuan  pemberian  dosis  ekstrak
kasar enzim protease sebesar 50% yaitu sebesar 0.054  mg/ml  (bakteri  K6)  dan  0.055  mg/ml (bakteri  K20).  Namun  demikian,  nilai  ini  tidak berbeda  nyata  dengan  perlakuan  pemberian dosis yang lain. Kadar protein terlarut terendah pada pemberian 0% yaitu sebesar 0.050 mg/ml (bakteri  K6)  dan  0.051  mg/ml  (bakteri  K20) dan  menunjukkan  perbedaan  nyata  dengan perlakuan  yang  mendapat  penambahan  dosis ekstrak  kasar  enzim  protease.  Murray et  al . (2003)  mengemukakan  bahwa  konsentrasi enzim  berpengaruh  terhadap  reaksi  inisiasi antara  enzim  dengan  substrat  yang  akan menentukan  kecepatan  awal  reaksi  hidrolisis. Semakin terurai struktur protein maka  semakin banyak  persentase  protein  terlarutnya  (Witono et al., 2020).

## Gambar 5. Kadar protein terlarut pada dosis enzim yang berbeda

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  dari  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  maka  didapatkan  kesimpulan sebagai  berikut:  (1)  Puncak  waktu  optimum untuk pertumbuhan sel bakteri terjadi pada jam ke-6,  yaitu  perhitungan  dengan  metode  TPC sebesar  1.39  x  10 8 CFU’s/ml  (ba  e i  K6)  dan 1.52  x  10 8 CFU’s/ml  (ba  e i  K20)  se  a perhitungan  dengan  metode  spektrofotometri sebesar 10.36 x 10 8 CFU’s/ml (ba  e i K6) dan 10.97  x  10 8 CFU’s/ml  (ba  e i  K20);  (2) Puncak  waktu  optimum  untuk  produksi  enzim protease  terjadi  pada  jam  ke-6,  yaitu  sebesar 0.0258  mg/ml  (bakteri  K6)  dan  0.0262  mg/ml (bakteri  K20);  (3)  Bakteri  K20  memiliki
pertumbuhan  sel  bakteri  dan  produksi  enzim protease  yang  lebih  baik  jika  dibandingkan dengan  pertumbuhan  sel  bakteri  dan  produksi enzim  protease  dari  bakteri  K6;  (4)  Enzim protease  yang  dihasilkan  oleh  isolat  bakteri proteolitik  mampu  mendegradasi  substrat serasah mangrove.
Adapun  saran  dari  penelitian  ini  adalah perlunya  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut faktor yang mempengaruh pertumbuhan maupun  produksi  enzim  (pH,  suhu  dan  lain lain)  dan  pengujian  aktivitas  protease  secara kuantitatif  untuk  melihat  lebih  jelas  seberapa besar  aktivitas  enzim  protease  yang  dihasilkan oleh bakteri uji.

## DAFTAR PUSTAKA
DALYNN, Biological.  (2014). McFarland Standard. Canada: DALYNN Biological.
Effendi, I. (2020). Metode Isolasi dan Identifikasi Bakteri . Oceanum Press. Pekanbaru.
Imron, M.F. dan I.F. Purwanti. (2016). Uji Kemampuan Bakteri Azotobacter S8 dan Bacillus subtilis untuk  Menyisihkan Trivalent  Chromium (Cr 3 + )  pada  Limbah  Cair. Jurnal  Teknik  ITS 5(1):F4– F10
Madigan, M.T., J.M. Martinko. dan J. Parker. (2009). Biology of Microorganism. 9 th Edition. Prentice Hall International, Inc. New Jersey.
Murray,  R.K.,  D.K.  Granner,  A.P.  Mayes,  and  V.W.  Rodwell.  (2003). Biokimia  Harper .  Penerbit Buku Kedokteran EGC, Ed 25, Jakarta.
Naibaho, R. F., Yunasfi, dan A. Suryanti. (2015). Laju Dekomposisi Serasah Daun Avicennia marina dan  Kontribusinya  terhadap  Nutrisi  di  Perairan  Pantai  Serambi  Deli  Kecamatan  Pantai  Labu. Jurnal Aquacoastmarine 7(2): 152-164.
Olii,  A.H.,  Muhlis,  dan  Sayuti.  (2015).  Ekosistem  Mangrove  Perairan  Teluk  Kwandang  Kabupaten Gorontalo Utara. Jurnal Perikanan dan Kelautan, 20(2); 49-55
Syarial., W. Syahrian, dan T. Heriyanto. (2018). Inventarisasi dan Pola Penyebaran Regenerasi Alami Semai Mangrove Sejati di Utara Indonesia. Jurnal Perikanan dan Kelautan, 23(1): 39-46
Tyas,  D.E.,  N.  Widyorini  dan  A.  Solichin.  (2018).  Perbedaan  Jumlah  Bakteri  dalam  Sedimen  pada Kawasan  Bermangrove  dan  Tidak  Bermangrove  di  Perairan  Desa  Bedono,  Demak. Journal  of Maquares , 7(2):189-196.
Widhyastuti, N. dan R.M. Dewi.  (2001). Isolasi Bakteri Proteolitik dan Optimasi Produksi Protease. Laporan  Teknik  Proyek  Inventarisasi  dan  Karakterisasi  Sumberdaya  Hayati.  Pusat  Penelitian Biologi. LIPI
Witono,  Y.,  M.  Maryanto,  I.  Taruna,  A.D.  Masahid,  dan  K.  Cahyaningti.  (2020).  Aktivitas Antioksidan  Hidrolisat  Protein  Ikan  Wader  ( Rasbora  jacobsoni )  dari  Hidrolisis  oleh  Enzim Calotropin dan Papain. Jurnal Agroteknologi 14(1):1-8
Yunita,  R.,  T.T.,  Nugroho,  dan  F.  Puspita.  (2015).  Uji  Aktivitas  Enzim  Protease  dari  Isolat Bacillus sp. Galur Lokal Riau. JOMP FMIPA , 1:116-122.
Yunita,  S.P.  (2012).  Skrining  dan  Uji  Aktivitas  Enzim  Protease  Bakteri  dari  Limbah  Rumah Pemotongan Hewan. Skripsi . Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Airlangga. Surabaya.
Zebua,  A.B.P.,  Nursyirwani,  dan  Feliatra.  (2020).  Molecular  Identification  of  Proteolitic  Bacteria from  Mangrove  Sediment  in  Dumai  Marine  Station. Asian  Journal  of  Aquatic  Sciences ,  3(2): 179-188