## Validasi Metode Penetapan Bahan Aktif Permethrin dalam Insektisida dengan High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
Hasbi Bagja Walansyah 1 , Kartini Afriani 1,* , Agus Salim 2 , Fareka Kholidanata 1
1) Program Studi Analisis Kimia, Politeknik AKA Bogor, Jl. Pangeran Sogiri No.283, Bogor, 16154, Indonesia
2) PT. Agriculture Construction (Agricon), Jl. Siliwangi No.68, Bogor, 16134, Jawa Barat
Email: kartini-a@kemenperin.go.id (Received: 26 April 2023; Accepted: 29 Juli 2023; Published: 31 Juli 2023)

## Abstrak
Salah  satu  bahan  aktif  yang  terkandung  dalam  insektisida  adalah  permethrin.  Pengujian  kadar  bahan  aktif permethrin  dilakukan  dengan  mengunakan High  Performance  Liquid  Chromatography (HPLC).  Metode penetapan kadar bahan aktif permethrin dalam insektisida merupakan metode baru yang akan digunakan untuk analisis  rutin  di  laboratorium.  Oleh  karena  itu,  diperlukan  validasi  terhadap  metode  tersebut  teradap  beberapa paremeter yang dapat menimbulkan variasi terhadap hasil pengujian dan mengidentifikasi komponen yang dapat mempengaruhi unjuk kerja metode dan mengetahui pengaruh yang ditimbulkan. Hasil parameter validasi metode uji diperoleh hasil sebagai berikut: pengujian spesifisitas terhadap standar permethrin memberikan respon peak pada  menit  ke-6  untuk  trans-permethrin  dan  menit  ke-7  untuk  cis-permethrin;  uji  linieritas  didapatkan  nilai koefisien  korelasi  (r)  0,9995;  limit  deteksi  instrumen  (LDI)  16,99  mg/L;  limit  kuantitasi  (LK)  56,66  mg/;  uji presisi repeatability diperoleh nilai persen simpanan baku relative (%SBR) 0,85%; uji presisi antara didapatkan nilai  %SBR  sebesar  1,17%  untuk  analis  I,  0,97%  untuk  analis  II,  1,17% untuk  alat I, dan  0,92% untuk  alat  II. Pada  prameter  uji  akurasi  diperoleh  rentang  % recovery sebesar  98,23  –  100,34  %  dan  uji  ketegaran  terhadap perubahan suhu kolom, komposisi eluen, dan perbedaan laju alir diperoleh nilai F hitung < F tabel dan nilai t hitung < t tabel .  Metode  telah  memenuhi  syarat  keberterimaan  yang  mengacu  pada Collaborative  International  Pesticides Analytical Council. Document No. 3807 (CIPAC 3807).
Kata Kunci: Insektisida, Permethrin, CIPAC 3807

## Abstract
One of the active ingredients contained in insecticides is permethrin. Testing the levels of the active ingredient permethrin  was  carried  out  using  High  Performance  Liquid  Chromatography  (HPLC).  The  method  of determining the concentration of the active ingredient permethrin in insecticides is a new method that is used for routine analysis in the laboratory. Therefore, it is mandatory to validate the method on several parameters that can cause variations in the  test results and identify components that can affect the performance of the method and  determine  the  effect.  The  results  of  the  parameter  validation  of  the  test  method  obtained  the  following results: the specificity test for standard permethrin gave a peak response at the 6th minute for trans-permethrin and  the  7th  minute  for  cis-permethrin;  linearity  test  obtained  correlation  coefficient  (r)  0.9995;  instrument detection  limit  (LDI)  16.99  mg/L;  quantitation  limit  (LK)  56.66  mg/;  repeatability  precision  test  obtained relative standard deposit percent value (% SBR) 0.85%; intermediate precision test obtained % SBR values  of 1.17% for analyst I, 0.97% for analyst II, 1.17% for tool I, and 0.92% for tool II. In the parameter accuracy test, the  %recovery  range  was  98.23  –  100.34%  and  the  robustness  test  for  changes  in column  temperature,  eluent composition, and differences  in flow rates obtained Fcount <Ftable and tcount <ttable. The method meets the acceptance requirements referring to Collaborative International Pesticides Analytical Council. Document No. 3807 (CIPAC 3807).

## Keywords: Insecticide, Permethrin, CIPAC 3807

## PENDAHULUAN
Insektisida  merupakan  zat  atau  senyawa kimia  yang  secara  umum  diperunakan  untuk memberantas  serangga  (Djojosumarto,  2008). Serangga  dapat  mengganggu  kegiatan  di  berbagai
sektor  seperti  dalam  bidang  pertanian,  kesehatan, industri  bahkan  lingkungan  perumahan,  sehingga sangat  membutuhkan  insektisida  untuk  mengatasi kehadiran  serangga  tersebut  (Soenandar,  2010). Secara  umum,  bahan  aktif  yang  terkandung  dalam
produk  insektisida  antara  lain  adalah  deltamethrin, cypermethrin, dan permethrin.
Permethrin  tergolong  dalam  senyawa piretroid  sintetik  dan  merupakan  racun  yang bekerja  pada  syaraf  melalui  kontak  insektisida dengan  larva  atau  nyamuk  (Suwasono,  2001). Permethrin  bereaksi  dengan  serangga  apabila termakan atau tersentuh. Permethrin mempengaruhi sistem saraf pada serangga, menyebabkan  kejang  otot,  kelumpuhan,  hingga kematian.  Permethrin merupakan  hasil sintesis dari tiruan pyrethrum , suatu senyawa metabolit sekunder  yang  terkandung  dalam  bunga  aster chrysanthemum . Pengujian kadar bahan aktif permethrin  di laboratorium  mengunakan High  Performance Liquid  Chromatography (HPLC)  dan  mengacu pada farmakope eropa 2.4.24 (European Pharmacopoeia).  Penelitian  mengenai  validasi metode  terkait  pengujian  permethrin  banyak dilakukan seperti Tian J. et al . (2016) memvalidasi pengujian residual  solvent dalam  permethrin. Penelitian Arayne et all . (2011) melakukan validasi metode  menggunakan  HPLC- isocratic  reversed- phase (RP-HPLC)  untuk  menentukan  kadar permethrin menggunakan detektor UV-vis.
Sementara  itu,  Gracia et  al .  (2001)  melakukan validasi  metode  uji  penetapan  permethrin  dalam sampo  dan  lotion  menggunakan  HPLC.  Pada penelitian  ini  dilakukan  validasi  penetapan  kadar bahan aktif permethrin dalam insektisida menggunakan  HPLC,  sebagai  metode  baru  yang akan  digunakan  untuk  analisis  permethrin  di Laboratorium  tempat  penelitian  dilakukan.  Oleh karena  itu  diperlukan  validasi  terhadap  metode tersebut untuk mengkonfirmasi bahwa metode telah memenuhi persyaratan.
Tujuan penelitian ini ialah untuk mengkonfirmasi  bahwa  metode  penetapan  kadar bahan aktif permethrin dalam insektisida mengunakan  HPLC  telah  memenuhi  persyaratan. Parameter  yang  diujikan  meliputi  spesifisitas, linieritas,  limit  deteksi  instrumen  (LDI),  limit kuantitasi (LK), presisi repeatability , presisi antara, akurasi  dan  ketegaran  metode,  dengan  syarat keberterimaan mengacu pada Collaborative International
Pesticides
Analytical Council (CIPAC) 3807 (CIP, A., 1999).

## BAHAN DAN METODE
Validasi  metode  pada  penelitian  ini dilakukan  dengan  menguji  parameter  spesifisitas, linieritas,  limit  deteksi  instrumen  (LDI),  limit kuantitasi (LK), presisi repeatability , presisi antara, akurasi dan ketegaran metode. Syarat keberterimaan  validasi  metode  mengacu  pada Collaborative  International  Pesticides  Analytical Council (CIPAC) 3807.
Pembuatan  Standar  Kerja  Permethrin  1000 mg/L
Standar  permethrin  ditimbang  10  mg dengan  botol  timbang  dan  pindahkan  ke  labu  takar 10  mL.  Standar  permethrin  yang  telah  ditimbang kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  LC grade sampai  setengah  volume  labu  takar.  Tahap berikutnya,  larutan  disonifikasi  selama  5  menit untuk  menghilangkan  gas  dan  gelembung,  ditera dengan  metanol  LC grade sampai  tanda  tera. Campuran dihomogenkan.

## Pembuatan Larutan Deret Standar Permethrin
Larutan  deret  standar  kerja  permethrin dibuat dalam konsentrasi 800, 900, 1000, 1100, dan 1200 mg/L. Standar baku ditimbang sebanyak 8, 9, 10,  11,  dan  12  mg  ke  labu  takar  10  mL.  Deret standar  yang  telah  ditimbang  dilarutkan  dengan metanol  LC grade hingga  setengah  volume  labu takar  dan  disonifikasi  selama  5  menit.  Setelah  itu, larutan ditera sampai tanda batas, kemudian larutan dihomogenkan.

## Pembuatan Larutan Fasa Gerak
Larutan  fasa  gerak  dibuat  dari  campuran metanol : akuabides (85:15, v/v). Fasa gerak dibuat dalam volume 500 mL. Sebanyak 75 mL akuabides dituangkan  ke  labu  takar  500  mL,  dan  metanol ditambakan  setelahnya  sampai  dengan  tanda  batas labu  takar.  Fasa  gerak  kemudian  dimasukkan  ke dalam  botol  reagen  500  mL,  selanjutnya  larutan fasa  gerak  disonifikasi  selama  10  menit  untuk menghilangkan gelembung dan gas.

## Preparasi Sampel Insektisida
Sampel  insektisida  yang  disimpan  pada suhu  ruang  ditimbang  sejumlah  120  mg  dan dituangkan  ke  labu  takar  25  mL.    Sampel  yang sudah  ditimbang,  lalu  dilarutkan  dengan  metanol LC grade sampai  setengah  volume  labu  takar  dan disonifikasi  selama  5  menit.  Setelah  itu,  larutan ditera sampai tanda batas lalu dihomogenkan.

## Pengondisian  Sistem  High  Perormance  Liquid Chromatography (HPLC)
Intrumen  HPLC  dikondisikan  terlebih dahulu sebelum digunakan. Pengondisian alat dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Pengkodisian HPLC Instrumen Shimadzu LC 20 AT Kolom Thermohypersil C-18 (150 x 4,6 mm), 5 µm particle Fasa Gerak Metanol: Air (85:15) Laju Alir 1 mL/menit Detektor UV Panjang Gelombang 272 nm Suhu Kolom 35⁰C
Sistem Isokratik Volume Injeksi 10 µm Waktu Retensi 120 menit Uji Spesifisitas Uji spesifisitas dilakukan dengan menginjeksikan  larutan  blanko  dan  larutan  sampel sebanyak masing–masing satu kali ke dalam sistem HPLC.    Data  hasil  pengujian  dievaluasi  dengan membandingkan  kromatogram  larutan  blanko, larutan  sampel,  dan  larutan  standar  permethrin dengan kemurnian 96,2%.

## Uji Linieritas
Pada  uji  linieritas,  larutan  deret  standar dengan konsentrasi 800, 900, 1000, 1100, dan 1200 mg/L,  diinjeksiakan  pada  sistem  HPLC.  Dari  hasil luas  daerah  permethrin  yang  diperoleh,  dibuat kurva  linieritas  terhadap  konsentrasi  permethrin sehingga  didapatkan  nilai  koefisien  korelasi  (r), slope ,  dan intercept dengan  menggunakan  rumus sebagai berikut.
a = Σi=1 n yi−(b Σi=1 n xi ) n (1)
b = Σi=1 n xiyi−( Σi=1 n xi − Σi=1 n yi n ) Σi=1 n xi2−( Σi=1 n xi2 n ) ` (2)
r = Σi=1 n xiyi − ( Σi=1 n xi − Σi=1 n yi n ) √Σ i=1 n xi2− (Σi=1 n xi)2 𝑛 √Σi=1 n yi2− (Σi=1 n yi)2 𝑛 (3)
Keterangan: a: intercept (luas area) b: slope (luas area/konsentrasi) r: koefisien korelasi x i : Nilai konsentrasi standar ulangan ke-i (mg/L) y i : Luas area ulangan ke-i (abs)
n: Banyaknya ulangan i: 1, 2, 3, ..., n
Menurut  Meier  dan  Zund  (2000),  kadar bahan  aktif  permethrin  dalam  insektisida  dapat dihitung menggunakan rumus (4) dan (5).
𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝑝𝑒𝑟𝑚𝑒𝑡ℎ𝑟𝑖𝑛 = 𝐿𝑢𝑎𝑠 𝐴𝑟𝑒𝑎−𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡 𝑆𝑙𝑜𝑝𝑒 (4) y= ax + b (5) Keterangan:
y: luas area permethrin a: intercept b: slope

## Uji Limit Deteksi dan Kuantisasi
Uji limit deteksi instrumen (LDI) dan limit kuantitasi  (LK)  dilakukan  dengan  menghitung konsentrasi secara teoritis melalui regresi linier dari hasil  uji  parameter  linieritas  menggunakan  rumus sebagai berikut:
S ylx
= √ ∑(yi− y𝑐)2 n−2 (6) LDI = 3 x Sy/x b (7) LK = 10 x Sy/x b (8)
Keterangan: B: slope (luas area/konsentrasi) Sy|x: simpangan baku (mg/L) Yi: nilai pengukuran luas area Yc:  nilai  perhitungan  luas  area  dengan  persamaan n: banyaknya pengulangan, i: 1, 2, 3, ..., n

## Uji Presisi Repeatability
Uji  presisi repeatability dilakukan  dengan menginjeksikan  larutan  standar  permethrin,  larutan sampel technical ,  dan  larutan  sampel  insektisida yang  sudah  dipersiapkan.    Penimbangan  dilakukan sebanyak  8  kali  ulangan  dan  diinjeksikan  masing– masing  sebanyak  1  kali  pada  sistem  HPLC.    Data hasil pengujian dievaluasi dengan menghitung nilai simpangan  baku  relatif  (%SBR)  menggunakan rumus sebagai berikut:
x̅ = Σi=1 n xi n (9)
SB
= √ Σi=1 n xi− x̅ n−1 (10)
% SBR   = SB x̅ x 100% (11)
Keterangan: 𝑥̅ : konsentrasi rata rata sampel (mg/L) x i : konsentrasi sampel ulangan ke-i (mg/L) n: banyaknya ulangan i: 1, 2, 3, ..., n SB: simpangan baku konsentrasi sampel (mg/L) %SBR: simpangan baku relatif (%)

## Uji Presisi Antara
Pada  uji  presisi  antara,  larutan  sampel yang sudah dipersiapkan, diinjeksikan. Penimbangan  dilakukan  sebanyak  8  kali  ulangan dan  diinjeksikan  masing  –  masing  sebanyak  satu kali  pada  sistem  HPLC.  Pengujian  dilakukan  oleh analis yang berbeda dan alat yang berbeda pada hari yang  berbeda.  Data  hasil  pengujian  dievaluasi dengan  menghitung  %SBR  dan  menghitung  uji distribusi  F  dengan  menggunakan  rumus  sebagai berikut:
F hitung : SB besar ² SB Kecil ² (12) F tabel : (db 1 , db 2 , α ) (13)
α = 5%

## Uji Akurasi
Uji  akurasi  dilakukan  dengan  cara  sampel ditambahkan  larutan  induk  permethrin  (konsentrasi 1000  mg/L)  sebanyak  2,00  ml  pada  konsentrasi rendah, 4,00  ml  pada  konsentrasi  sedang,  dan  6,00 ml  pada  konsentrasi  tinggi,  diinjeksikan  pada sistem  HPLC.  Preparasi  dilakukan  3  kali  pada masing  –  masing  variasi  konsentrasi.  Data  hasil pengujian  dievaluasi  dengan  menghitung  persen perolehan  kembali  (% recovery )  menggunakan rumus sebagai berikut.
(14)
Keterangan: % recovery : perolehan kembali konsentrasi permethrin dalam sampel formulasi (%) C 1 : konsentrasi permethrin dalam sampel (mg/L) C 2 : konsentrasi spike permethrin yang ditambahkan (mg/L) C 3 :  konsentrasi  permethrin  dalam  sampel  + spike permethrin yang ditambahkan (mg/L)

## Uji Ketegaran Metode
Uji  ketegaran  metode  dilakukan  dengan mengukur larutan sampel yang ditimbang sebanyak 5  kali  pengulangan  dan  diinjeksikan  masing  – masing satu kali ke dalam sistem kromatografi cair kinerja  tinggi.  Kondisi  penginjekkan  ke  dalam sistem HPLC divariasikan terhadap kondisi normal yaitu  dengan  mengubah  laju  alir  (0,8  dan  1,2 mL/menit),  suhu  kolom  (30°C  dan  25°C)  dan komposisi  fasa  gerak  metanol  :  akuabides  (82:18 dan 88:12). Data hasil pengujian dievaluasi dengan menghitung  uji  F  dan  uji  t.  Uji  t  dapat  dilakukan dengan rumus (15-17).
S 2 = (n1−1 ) SB1 2 + (n1−1 ) SB2 2 n1+n2−2
(15)
t hitung = | x̅1− x̅2
s√ 1 n1 + 1 n2 | (16)
t tabel = (df 1 + df 2 – 2) (17)
α = 5%

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Sensitifitas
Uji  spesifisitas  metode  dilakukan  untuk mengidentifikasi  zat  secara  akurat  dan  cermat dengan  adanya  komponen  lain  dalam  matriks (Harmita,  2004).    Spesifisitas  digunakan  untuk melihat  waktu  retensi  sampel.  Hal  ini  dilakukan untuk melihat apakah ada serapan ketika menginjeksikan  sampel  tanpa  analit  kemudian dibandingkan dengan dengan sampel yang
mengandung  analit  dan  atau  standar.  Hasil  uji spesifisitas dinyatakan pada Gambar 1 (a) dan (b).
Gambar 1. Kromatogram (a) Blanko Permethrin,
(b) Standar Permethrin 1000 mg/L
Berdasarkan  hasil  pengujian  (Gambar  1 (a)),  blanko  pelarut  yaitu  metanol  LC grade tidak memberikan  respon  pada  menit  ke-6  dan  ke-  7. Sedangkan pada Gambar 1(b), dapat dilihat standar permethrin  1000  mg/L  memberikan  respon  yang dapat  dibuktikan  dengan  munculnya  puncak kromatogram  pada  menit  ke-6  untuk  trans- permethrin  dan  menit  ke-7  untuk  cis-permethrin. Berdasarkan  hasil  analisis  kuantitatif  perbandingan antara  kromatogram  sampel  dengan  kromatogram blanko  pelarut  dimana  tidak  adanya  analit pengganggu  yang  muncul  pada  target  sehingga  hal ini  menginformasikan  bahwa  pengujian  kadar bahan  aktif  permethrin  dalam  sampel  insektisida secara  HPLC bersifat spesifik. Afshar et al. (2013) mendapatkan  peak  trans  dan  cis  permethrin  pada menit  ke-16,2  dan  20,3  berturut-turut  dengan menggunakan fase gerak etanol : asam fosfat pH 3 (67:33,  v/v).  Sementara  Garcia et  al. (2001) mendapatkan  peak  pada  menit  ke-13  dan  17  untuk trans dan cis permethrin dengan fasa gerak metanol : air (78:22, v/v).
(b)
(a)

## Uji Linieritas
Uji  linieritas  ditetapkan  menggunakan deret  larutan  standar  minimal  empat  konsentrasi dengan  rentang  berbeda  yang  mengandung  50- 150% kadar analit per sampel.
Gambar 2. Kurva Kalibrasi Deret Standar Permenthrin
Hubungan linieritas ini dapat terlihat dari koefisien korelasi  (r)  pada  persamaan  regresi  (y  =  bx  +  a, dengan  b  sebagai slope dan  a  sebagai intercept ). Hasil  pengukuran  disajikan  dalam  kurva  kalibrasi deret  standar  permethrin  yang  dapat  dilihat  pada Gambar 2. Persamaan regresi linier yang diperoleh adalah y = 2821x - 15776 dengan koefisien korelasi (r)  sebesar  0,9995, dengan  nilai intercept sebesar  - 15776 menyatakan bahwa saat konsentrasi permethrin  0,0000  mg/L  maka  nilai  luas  areanya ialah  -15776.  Nilai slope sebesar  2821  artinya  saat konsentrasi  permethrin  bertambah  satu  satuan, maka  nilai  luas  areanya  meningkat  sebesar  2821 kali.  Nilai  koefisien  korelasi  dari  deret  standar permethrin  menunjukkan  respon  positif  dan  linier terhadap  konsentrasi  yang  telah  ditentukan.  Nilai
yang  didapatkan  telah  memenuhi  syarat  yang mengacu pada CIPAC 3807 yaitu r ≥ 0,99. Hasil ini juga  sejalan  dengan  penelitian  Garcia et  al. (2001) yang mendapatkan persen korelasi sebesar 0.9999.

## Uji  Limit  Deteksi  Instrumen  dan  Limit Kuantitasi
Limit  deteksi  instrumen  (LDI)  ialah  batas terkecil  dari  konsentrasi  analit  yang  masih  terbaca alat.    LDI  untuk  mengetahui  konsentrasi  analit terendah yang masih dapat dideteksi oleh alat yang digunakan. Limit kuantitasi (LK) untuk mengetahui  konsentrasi  terendah  yang  dapat ditetapkan  secara  kuantitatif  dengan  presisi  dan akurasi yang dapat diterima. Nilai LK menunjukkan nilai  yang  dipercaya  menunjukkan  konsentrasi analit yang terkuantitasi dan dapat terbaca oleh alat (Riyanto,  2014).  Berdasarkan  hasil  pengujian didapatkan  nilai  LDI  sebesar  16,99  mg/L  dan  nilai LK  sebesar  56,66  mg/L.  Hasil  ini  juga  sesuai dengan  hasil  perhitungan  teoritis  yang  sudah dilakukan.

## Uji Presisi Repeatability
Presisi repeatability merupakan kedekatan pengukuran  hasil  uji  yang  dilakukan  secara berulang oleh analis yang sama, pada kondisi yang sama,  dan  dalam  waktu  interval  yang  pendek (Riyanto, 2014). Uji presisi repeatability dilakukan dengan  menginjeksi  larutan  sampel  insektisida, larutan  sampel technical permethrin  dan  larutan standar  permethrin  sebanyak  masing  –  masing sebanyak  delapan  kali.    Hasil  uji  presisi repeatability standar  permethrin  ditampilkan  pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Pengujian Presisi Repeatability Standar dan Sampel Permethrin
Berdasarkan Tabel 2, nilai rata – rata total standar area permethrin pengujian sebesar 2863200, dengan nilai  %SBR  sebesar  0,85%.    Hasil  tersebut memenuhi persyaratan yang ditetapkan laboratorium  yang  mengacu  pada  CIPAC    3807 yaitu nilai %SBR < 0,67 x CV Horwitz (3,78%).
Hasil pengujian presisi repeatability sampel insektisida (Tabel 2) didapatkan nilai rata – rata  kadar  sampel  insektisida  pengujian  sebesar 212,62  mg/L,  dengan  nilai  %SBR  sebesar  1,26%. Hasil tersebut memenuhi persyaratan yang ditetapkan  oleh  laboratorium  yang  mengacu  pada
CIPAC  3807  yaitu  nilai  %SBR  <  0,67  x  CV Horwitz (4,78%).
Hasil pengujian presisi repeatability sampel technical permethrin  (Tabel  3),  didapatkan nilai rata  – rata kadar sampel insektisida pengujian sebesar  900,70  mg/L,  dengan  nilai  %SBR  sebesar 1,14%.  Hasil  tersebut  memenuhi  persyaratan  yang ditetapkan  oleh  laboratorium  yang  mengacu  pada
CIPAC    3807  yaitu  %SBR  <  0.67  x  CV  Horwitz (3,85%). Menurut (Sumardi, 2002), nilai SBR 1% < SBR  <  2%  menyatakan  tingkat  ketelitian  tinggi terhadap  data  pengujian.  Penelitian  ini  sejalan dengan  yang  telah  diperoleh  sebelumnya  oleh Garcia et al. (2001) mendapatkan presisi instrumentasi pada rentang 0,22–1,81%, dan presisi repeatability pada rentang 0,2–2,39%.
Tabel 3. Hasil pengujian presisi repeatability sampel technical permethrin
Uji Presisi Antara Uji presisi antara dilakukan untuk mengevaluasi  kinerja  antara  analis  dan  antara  alat kromatografi  cair  kinerja  tinggi.  Uji  presisi  antara analis  dilakukan  dengan  cara  menginjeksikan larutan  sampel  insektisida  sebanyak  delapan  kali pengulangan  oleh  analis  yang  berbeda  pada
peralatan  yang  sama.  Sementara  untuk  uji  presisi antara  alat  dilakukan  dengan  cara  menginjeksikan larutan  sampel  insektisida  sebanyak  delapan  kali pengulangan  oleh  analis  yang  sama  pada  peralatan yang  berbeda.  Hasil  uji  presisi  antara  diberikan pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil pengujian presisi antara
Berdasarkan  Tabel  4,  didapatkan  nilai %SBR  sebesar  1,17%  untuk  analis  I,  0,97%  untuk analis II, 1,17% untuk alat I, dan 0,92% untuk alat II.  Hasil  tersebut  memenuhi  persyaratan  yang ditetapkan  dengan  syarat  keberterimaan  nilai %SBR  <  0,67  x  CV  Horwitz  (1,68%).  Pada perhitungan statistika pada presisi antara analis dan presisi antara alat diperoleh F hitung < F tabel .
Hasil  uji  statistika  menyatakan  bahwa metode penetapan kadar permethrin dalam insektisida dapat dilakukan oleh analis berbeda dan
alat  berbeda,  serta  dapat  dilakukan  dalam  hari berbeda  karena  sama  –  sama  memberikan  hasil yang optimal.  Sementara pada penelitian Garcia et al. (2001)  didapatkan  presisi  antara  pada  rentang 0,44–1,87%.  Penelitian  yang  dilakukan  sejalan dengan penelitian lainnya.

## Uji Akurasi
Akurasi,  dapat  dinyatakan  sebagai  persen perolehan  kembali  (% recovery ),  merupakan  suatu nilai  yang  menunjukkan  kedekatan  hasil  analisis
dengan  nilai  sebenarnya  (Harmita,  2004).  Pada penetapan  akurasi  dilakukan  penambahan  bahan aktif  secara  tiga  kali  pada  tiga  variasi  konsentrasi, yaitu level bawah, tengah dan atas sebanyak 2 ml, 4
ml,  dan  6  mL  untuk  masing  –  masing  variasi konsentrasi. Hasil uji ditunjukkan pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil Pengujian Akurasi
Tabel  5  menunjukkan  hasil  percobaan
% recovery yang  diperoleh  memiliki  nilai  yang berbeda. Hasil uji akurasi tersebut masuk ke dalam rentang  % recovery yang  dipersyaratkan  yaitu  98- 102%.  Pada  hasil  uji  parameter  akurasi  tersebut menunjukkan bahwa metode pengujian ini memberikan  kedekatan  hasil  analisis  dengan  nilai sebenarnya. Penelitian ini sejalan dengan penelitian Garcia et al. (2001) dengan nilai % recovery secara statistic tidak jauh dari 100%.

## Uji Ketegaran Metode
Uji  ketegaran  metode  dilakukan  untuk mengetahui  pengaruh  yang  diberikan  kepada metode  mempengaruhi  hasil  analisis  atau  tidak. (Riyanto,  2014).    Pada  penelitian,  perubahan kondisi  analisis  yang  diujikan  yaitu  dengan memvariasikan  suhu  kolom  25°C  dan  30°C),  laju alir  (1,2  mL/menit;  0,8  mL/menit),  dan  komposisi eluen  pengujian  metanol:  air  (82:18  dan  88:12) terhadap  kondisi  normal  yaitu  suhu  kolom  (35°C),
laju  alir  (1,0  mL/menit)  dan  komposisi  eluen metanol  :  akuabides    (85:15).    Evaluasi  dilakukan dengan  membandingkan  hasil  pengukuran  pada variasi  yang  ditetapkan  dengan  hasil  pengukuran pada kondisi normal.  Kemudian diuji ketepatannya dengan  uji  F.    Hasil  pengujian  ketegaran  metode terdapat  pada  Tabel  6.  Berdasarkan  Tabel  6,  hasil pengujian terhadap perubahan suhu kolom, komposisi  eluen,  dan  perbedaan  laju  alir  diperoleh nilai  F hitung <  F tabel dan  nilai  t hitung <  t tabel .    Hal  ini menunjukkan  ragam  konsentrasi  terukur  sampel insektisida  pada  masing  –  masing  variasi  tidak berbeda  nyata  dengan  kondisi  normal.  Hal  ini menginformasikan bahwa metode validasi penetapan kadar permethrin dalam sampel insektisida  secara  HPLC  dapat  mempertahankan unjuk  kerjanya  dengan  baik  secara  presisi  dan akurat.
Tabel 6. Hasil Pengujian Ketegaran Metode

## KESIMPULAN
Hasil penelitian diperioleh simpulan bahwa  seluruh  parameter  validasi  metode  uji penetapan  kadar  bahan  aktif  permethrin  dalam insektisida  menggunakan  HPLC  telah  memenuhi syarat  keberterimaan  yang  telah  ditetapkan  oleh laboratorium  yang  mengacu  pada  CIPAC  3807 dengan  koefisien  korelasi  (r),  0,999  untuk  uji linieritas; dan dengan %SBR < 0,67 x CV Horwitz untuk  uji  limit  deteksi  instrumen  (LDI),  limit kuantitasi  (LK),  uji  presisi repeatability ,  presisi antara,  akurasi,  dan  ketegaran  metode.  Metode  ini dinyatakan  valid  dan  dapat  digunakan  untuk analisis  rutin  di  laboratorium.  Penelitian  lanjutan dapat  dilakukan  pada  aspek  validasi  penetapan trans  dan  cis  permethrin  secara  terpisah  dengan menggunakan HPLC.

## DAFTAR PUSTAKA
Afshar,  M.,  Salkhordeh,  N.,  &  Rajabi,  M.  (2013). An  ecofriendly  and  stability  indicating HPLC  method  for  determination  of permethrin isomers: application to pharmaceutical analysis. Journal of Chemistry , 2013.
Arayne,  M.  S.,  Sultana,  N.,  &  Hussain,  F.  (2011).
Validated RP-HPLC
method for determination  of  permethrin  in  bulk  and topical preparations using UV-vis detector. Journal  of  chromatographic  science , 49(4), 287-291.
CIP, A. (1999). Guidelines on method validation to be  performed  in  support  of  analytical methods  for  agrochemical  formulation s. Collaborative International Pesticides Analytical Council. Document No. 3807.
Council of Europe (Strasbourg), Convention on the elaboration of a European pharmacopoeia, Council  of  Europe.  European  Department for  the  Quality  of  Medicines,  Europarat, European  Directorate  for  the  Quality  of Medicines  &  Healthcare,  &  European Pharmacopoeia Commission. (2010). European  Pharmacopoeia :  Published  in Accordance  with  the  Convention  on  the Elaboration of a European Pharmacopoeia (European Treaty Series No. 50) (No. 50). Council of Europe. Djojosumarto, P. (2008). Panduan lengkap pestisida & aplikasinya . Agromedia. Garcıa,  E.,  Garcıa,  A.,  &  Barbas,  C.  (2001).
Validated  HPLC  method  for  quantifying permethrin in pharmaceutical
formulations. Journal  of  pharmaceutical and  biomedical  analysis ,  24(5-6),  999- 1004.
Harmita,  H.  (2004).  Petunjuk  pelaksanaan  validasi metode dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian , 1(3), 1.
Meier,  P.  C.,  &  Zünd,  R.  E.  (2005). Statistical methods  in  analytical  chemistry .  John Wiley & Sons.
Riyanto, P. D. (2014). Validasi & Verifikasi Metode Uji  Sesuai  dengan  ISO/IEC  17025 Laboratorium  Pengujian  dan  Kalibrasi . DEEPUBLISH. Soenandar, M., Raharjo, A., & Aeni, M. N. (2010). Petunjuk  Praktis  Membuat  Pestisida Organik . AgroMedia.