Jurnal : Jurnal Kesehatan Prima Volume
: 8, No.1, Februari 2014, Halaman : 1224-1231
ISSN Print
: 1978 – 1334, ISSN Online : 2460 – 8661

## ___________________________________________________________________________
Yunan  Jiwintarum, Maruni Wiwin  Diarti, Awan Dramawan, Ristini : Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Mataram, Jl. Prabu Rangkasari Dasan Cermen Sandubaya Mataram

## RESISTENSI PRIMER MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS DENGAN TARGET Gen rpoB
Yunan Jiwintarum, Maruni Wiwin Diarti, Awan Dramawan
Abstract : Detection of primary resistance in sputum samples of patients with pulmonary tuberculosis AFB (+) with molecular analysis on the target rpoB gene causes anti-tuberculosis drug resistance (OAT) rifampicin can be  beneficial  to  the  holder  of  a  policy  program  to  look  for  tuberculosis  control  efforts,  one  of  attempt  to overcome  these  problems  is  to  deliver  information  about  the  resistance  report  in  this  interval.  This  research observasional  descriptive  study,  the  research  variables Mycobacterium  tuberculosis rpoB gene  mutations  and patients with pulmonary TB sputum smear (+), with the number of 50 sputum samples with acidental sampling technique. This study results showed all the samples (50 samples) microscopic examination of smear and PCR diagnostics with primary genes and gene Tb1-Tb2 results are positive (+) tuberculosis (100%). By nested PCR amplification  techniques to prove that the primary  gene rpoB1 negative results of 23 samples (46%),  with the primary  gene rpoB2 negative  results  in 13 samples (26%). Conclusion:  A total of 13 samples (26%) occurred mutation in the gene rpoB / is resistant to the antibiotic rifampin.
Kata Kunci: Primer resistance, Sputum, rpoB gene, Mycobacterium tuberculosis.

## LATAR BELAKANG
Tuberculosis  (TB)  adalah  penyebab  utama kematian  yang  disebabkan  oleh Mycobacterium tuberculosis . Mycobacterium tuberculosis merupakan  bakteri  berbentuk  batang  yang  lurus berukuran  0,4  x  3  mikron  dan  bersifat  tahan  asam. Tuberculosis  (TB)  masih  merupakan  masalah kesehatan  diseluruh  dunia,  oleh  karena  morbiditas dan mortalitasnya masih tinggi, terutama pada negara yang sedang berkembang. WHO menyatakan TB saat ini  telah  menjadi  ancaman  global.  Diperkirakan terdapat 8 juta kasus baru dan 3 juta kematian karena TB setiap tahunnya (Arlina G, 2003).
Laporan  WHO  tahun  1999,  Indonesia termasuk  dalam  kelompok  ( high  burden  countries ), menempati  urutan  ketiga  setelah  India  dan  China. Berdasarkan  hasil  survei  riset  kesehatan  dasar  tahun 2010  pada  hasil  wawancara  anggota  rumah  tangga
(ART)  menunjukkan  bahwa  periode  prevalence  TB Paru  2009/2010  berdasarkan  diagnose  tenaga kesehatan melalui pemeriksaan sputum dan atau foto paru  sebesar  725/  100.000  penduduk. Periode Prevalence TB tertinggi terdapat pada kelompok usia di atas 54 tahun sebesar 3.593 per 100.000 penduduk, sedangkan  pada  kelompok  lain  dengan  kisaran  348 per  100.000  –  943  per  100.000  penduduk.  Lima provinsi  yang  memiliki  angka  prevalensi  TB  Paru paling  tinggi  adalah  :  Papua  1.441  per  100.000 penduduk,  Banten  1.282  per  100.000  penduduk, Sulawesi  utara  1.221  per  100.000  penduduk, Gorontalo  1.200  per  100.000  penduduk  dan  DKI Jakarta  1.032  per  100.000  penduduk  (Badan Litbangkes,2010).
Program  kontrol  pengobatan  tuberculosis yang  dikenal  dengan  program  DOTS  ( Directly Observed  Treatment  Shortcourse  Chemotherapy )
diterapkan sebagai strategi kontrol terhadap tuberculosis  yang  diberlakukan  disemua  negara terutama  negara  –  negara  yang  termasuk  dalam kelompok high burden countries termasuk Indonesia.
Di  Indonesia,  khususnya  dalam  uji  pendahuluan program  penatalaksanaan  pengobatan  TB  dengan menggunakan  obat  anti  tuberculosis  (OAT)    harus diperhatikan  KIE  yang  bersifat  komprenhensif terhadap  penderita  dan  keluarganya  menyangkut berbagai hal yang berkaitan dengan pengobatan yang akan  diberikan  dan  selama  pengobatan  harus dilakukan  dengan  pengawasan  langsung  (Badan Litbangkes,2010).
Program kontrol pengobatan tuberculosis ini terkendala  akibat  merebaknya  TB  yang  bersifat resisten  terhadap  obat  anti  tuberculosis  (OAT), terutama multidrug-resistance  tuberculosis yang didefinisikan  sebagai  resisten  terhadap  isoniazid  dan rifampisin.  Kekebalan  obat  ganda  ini  dalam pengobatan  tuberkulosis  (TB)  menjadi  masalah masyarakat  di  sejumlah  negara  dan  merupakan hambatan terhadap program pengendalian TB secara global.  Kekebalan  bakteri  TB  terhadap  obat  anti tuberkulosis  (OAT)  sebenarnya  telah  muncul  sejak lama.  WHO  pada  tahun  2005  melaporkan  di  dunia lebih  dari  400.000  kasus  TB  –MDR  terjadi  setiap tahunnya  sebagai akibat kurang baiknya penanganan dasar  kasus  TB  dan  transmisi  strain  –  strain  bakteri yang  resisten  obat  anti  TB. TB-MDR  muncul  akibat akumulasi mutasi penyebab resistensi pada satu obat atau  akuisisi  unsur  –  unsur  MDR.  Menurut  WHO, saat  ini  Indonesia  menduduki  peringkat  ke  delapan kasus  TB  –  MDR  dari  27  negara.  Data  awal  survei resistensi  obat  OAT  lini  pertama  yang  dilakukan  di
Jawa  Tengah  pada  tahun  2006  menunjukkan  angka TB-MDR  pada  kasus  baru  yaitu  2,07%,  angka  ini meningkat  pada  pasien  yang  pernah  diobati  yaitu 16,3% (Soedarsono,2010).
Konfirmasi  resistensi  obat  TB  sangat  perlu dilakukan  pada  setiap  daerah  mengingat  adanya variasi  fenotife  dan  genotipe  dari Mycobacterium tuberculosis disetiap wilayah melalui uji laboratorium seperti uji biologi molekuler. Perkembangan  teknik  biologi  molekuler  khususnya metode  PCR  memungkinkan  cara  baru  untuk mendeteksi adanya resistensi Mycobacterium tuberculosis terhadap  OAT.  Salah  satunya  adalah analisis resistensi terhadap rifampisin (RMP).
Rifampisin  (RMP)  adalah  obat  antibakteri yang  handal  dan  merupakan  komponen  standar resimen  kombinasi  serta  obat  lini  pertama  untuk  TB karena aktivitasnya yang tinggi melawan Mycobacteriun  tuberculosis .  RMP  adalah  antibiotik semisintetik turunan Streptomyces mediterranei yang bersifat  bakteriostatik  dan  bakterisidal  serta  paling aktif  melawan  mikroorganisme  yang  berkembang biak cepat. Munculnya basil Mycobacterium tuberculosis yang  resisten  terhadap  obat  anti tuberculosis seperti rimfapisin mengakibatkan banyak  penderita  mengalami  kekambuhan  dan kegagalan pengobatan, sehingga menimbulkan masalah dalam program pemberantasan TB paru.
Provinsi NTB merupakan salah satu dari 33 provinsi yang merupakan daerah indikator pencapaian Millenium  Development  Goals (MDGs) bidang  kesehatan  pada  riset  kesehatan  dasar (RISKESDAS)  tahun  2010.  Menurut  data  Riskesdas 2010 periode  prevalence TB  di  NTB  0,927  %  dan
periode suspek TB adalah 2,877 % (Riskesdas,2010). Nilai  konversi  ini  menunjukkan  keberhasilan tatalaksana  kasus  TB  paru  BTA  (+)  di  tentukan dengan  melihat  niali  konversi.    Nilai  konversi dihitung dengan adanya perubahan hasil pemeriksaan sputum yang semula positif sebelum pengobatan dan menjadi  negatif  setelah  menjalani  pengobatan  masa intensif  (2  bulan)  atau  lazim  disebut  sebagai konversi.    Pada  pemeriksaan  setelah  pengobatan sering  didapatkan  bentuk  fragmented  yang  sering disebut  sebagai  bangkai  bakteri,  namun  walaupun dalam  bentuk  fragmented basil  Mycobacterium belum  bisa  dikatakan  mati  karena  DNA  nya  masih aktif,  kalau  pengobatan  dihentikan,  bentuk  ini  bisa menjadi  bentuk  vegetatif  basil  yang  utuh  dan menyebabkan  kekambuhan.    Hal  ini  yang  memicu terjadinya  resistensi  terhadap  obat  anti  tuberculosis. Fenomena tersebut bisa dibuktikan dengan pemeriksaan  biologi  molekuler  dengan  menganalisis mutasi gen yang mengalami mutasi.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian observasional  deskriptif,    yaitu  mendeteksi  adanya mutasi  gen rpoB pada  sputum  penderita  TB  paru baru  BTA  (+)  yang  merupakan  penyebab  resistensi obat anti tuberculosis (OAT) rifampisin.
Pemeriksaan  biologi  molekuler  PCR  dilakukan  di Laboratorium  Molekuler  Instalasi  Litbang  –  Tekkes Unit Riset Biomedik RSU Provinsi NTB. Bahan dan insrument  penelitian  yaitu PCR  core  kit  (Promega), Agarose  (Invitrogen),  Isolat  murni Mycobacterium tuberculosis sebagai  kontrol  positip,  Marker  174  RF (Invitrogen),  Reagen  DNA-zol  (Invitrogen),  Primer
Mycobacterium  tuberculosis TB1  dan  TB2  untuk primer diagnostik. Primer Mycobacterium tuberculosis rpoB1F-rpoB1R  dan  rpoB2F-rpoB2R untuk    penentuan  mutasi  gen rpoB yang  mengkode RNA Polimerase β- subunit yang mengalami resisten terhadap  Rifampisin, Aquadest/aquabidest, Ethidium bromida (10 mg/ml), EDTA (Sigma 9150133), Asam borak (05250006),  Trizma (Lot. 121K5432), Bromphenol  blue, Etanol  absolute,  Cat  Ziehl  – Nelssen, Machine Biorad Thermal  iCycle,  Mini sub cell  power  supply  PAC model  1000/500  untuk elektroforesis  DNA  (Biorad  laboratories,  California USA), Gell  apparatus (  Biorad  ), Elektroforesis apparatus  horizontal (  Biorad  ), Centrifuge    TOMY MC-140 (TOMY  Corp,  Japan), Centrifuge  Sorvall Biofuge, Mikro pipet, Vortex type 37600 super mixer, Hot  Plate menggunakan Cimarec  2 (Thermolyne), Eppendorf    /    micro  tubes, Parafilm  (Sigma  lot. 95H0419), Bio-rad  Gel  DOC  XR tipe  170  –  8170 dilengkapi  komputer software YP  dengan Dell optiplex  GX  520,  Autoclave 55-245  ( Tommy,Japan), Elektroforesis Apparatus  horizontal  Biorad, Esco class  II  tipe  A2  lab  kultur  ( Laminary  flow ), Inkubator CO 2 MCO – 175 ( Sanyo-Japan). Sampel sputum yang diambil adalah sampel sputum pagi hari dari penderita, ditampung dalam copok plastik steril. Ekstraksi  DNA  menggunakan  DNA-zol.  Kondisi PCR  yaitu: 1. Hot start 94 o C  5 menit, Denaturasi 94 o C  40 detik, Annealing 64 o C  40 detik , Elongasi / Ekstensi 72 o C  selama  1  menit,  kondisi  ini dilakukan  sebanyak  40  siklus  dan Elongasi post PCR 72 o C 10 menit.  Produk PCR (hasil amplifikasi) di  analisis  menggunakan  elektroforesis  gel  agarose 2%  menggunakan  penyelator ethidium  bromida dan
dibaca  dibawah  sinar  ultra  violet.  Susunan  primer yang  dignakan  untuk  diagnostik  TB  dan  penentuan adanya  resistensi  OAT  Rifampisin  berdasarkan
adanya  mutasi  gen rpoB menggunakan  teknik  PCR yaitu :
No. Nama Primer Dan Susunan Basa Oligonukleutida
Panjang
Produk (bp) Referensi 1. Tb1   5’ – TACTACGACCACATCAACCG – 3’ Tb2   5’ – GGGCTGTGGCCGGATCAGCG – 3’ 390 Young (1994) Wada et al (2004) 2. rpoB1R   5’- ACAGCCGCAGACGTTGATCA- 3’ rpoB1F   5’- CTAGTGATGGCGGTCAGGTAC- 3’ 363 3. rpoB2R   5’-GGGAGCGGATGACCACCCA - 3’ rpoB2F   5’-TGTAGTCCACCTCAGACGAG - 3’ 534

## PCR  diagnostik  dilakukan  untuk  mendeteksi  DNA
Mycobacterium  tuberculosis yang  ada  pada  sputum menggunakan  pasangan  primer  untuk  diagnostik yaitu primer Tb 1 dan Tb 2.

## HASIL
Hasil PCR diagnostik dengan menggunakan pasangan  primer  Tb1  dan  Tb  2  untuk  mendeteksi Mycobacterium  tuberculosis dari  50  sampel  dengan hasil mikroskopis BTA positif, seluruhnya menunjukkan  hasil  PCR  positif  (+).  Hasil  PCR diagnostik tersebut terlihat pada gambar 1.
Gambar 1.  Hasil PCR diagnostik Mycobacterium tuberculosis
Hasil Nested amplification PCR pada 50 sampel yang  positif  pada  PCR  diagnostik Mycobacterium tuberculosis menggunakan  primer  gen rpoB1 dan primer  gen rpoB2 adalah  11  sampel  dari  50  sampel (22%)  menunjukkan  hasil  PCR  (+)  ;  (-)  ;  (-). Sebanyak 2 sampel dari 50 sampel (4%) menunjukkan  hasil  PCR  (+)  ;  (+)  ;  (-).  Sebanyak  10 sampel  dari  50  sampel  (20%)  menunjukkan  hasil PCR  (+)  ;  (-)  ;  (+).  Sebanyak  27  sampel  (54%) menunjukkan hasil diagnostik PCR (+); (+); (+). Dari total  jumlah  sampel  50  jumlah  sampel,  jumlah  yang tidak mutasi  pada gen rpoB yaitu 37 sampel (74 %), sedangkan  jumlah  yang  mutasi  pada  gen rpoB yaitu 13 sampel (26 %).  Hasil nested PCR menggunakan 2  pasang  primer  yaitu  primer  gen rpoB1 dan  primer gen rpoB2 terlihat pada gambar 2. 390 bp
Gambar 2. Hasil nested PCR Adanya  band  atau  pita  (+)  pada  gambar  2 menunjukkan terdeteksinya gen rpoB dari Mycobacterium  tuberculosis baik  pada  PCR  dengan pasangan  primer rpoB1 (363bp)  dan nested PCR dengan  menggunakan  pasangan  primer rpoB2 (534 bp),  artinya  gen rpoB tidak  mengalami  mutasi, sedangkan  tidak  terbentuknya  band  atau  pita  (-) seperti  pada  well  yang  ditunjukkan  panah  merah menunjukkan  sampel  yang  tidak  terdeteksinya  gen rpoB atau yang mengalami mutasi.

## PEMBAHASAN
Penelitian  analisis  molekuler  resistensi primer  sputum  penderita  TB  Paru  BTA  (+)  dengan target  gen rpoB dilakukan  dengan  tehnik  molekuler Polymerase  Chain  Reaction (PCR)  yaitu  suatu metode  untuk  amplifikasi  sekuens  gen  target  secara eksponensial  invitro.  Tehnik  PCR  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah Nested  amplification yaitu menggunakan nested sets primer . Pada putaran pertama  amplifikasi  digunakan  sepasang  primer (primer  Tb1  dan  Tb2)  dan  amplikasi  dilakukan sebanyak  15-30  siklus.  Produk  dari  amplifikasi pertama  (390  bp)  digunakan  untuk  PCR  kedua dengan  menggunakan  dua  pasang  primer  yang spesifik  terhadap Internal  sequence (primer  gen
rpoB1R dan  gen rpoB1F serta  primer  gen rpoB2R dan  gen rpoB2F )  dengan  jumlah  siklus  yang  sama dengan  amplifikasi  putaran  pertama.  Produk  PCR dideteksi  dengan  menggunakan  elektroforesis  gel. Keuntungan nested  amplification ini  yaitu  dapat memberikan sensitivitas yang sangat tinggi (Djuminar A, 2005; Putra ST, 1999).
Hasil penelitian analisis molekuler resistensi primer  sputum  penderita  TB  Paru  BTA  (+)  dengan target  gen RpoB ,    dari  50  sampel  yang  diperiksa dengan  tehnik  PCR  menggunakan  primer  Tb1  dan Tb2,  seluruhnya  (100%)  menunjukkan  hasil  positif tuberkulosis.  Kemudian  setelah  dilanjutkan  dengan tehnik nested  amplification dengan  menggunakan pasangan primer gen rpoB1R dan rpoB1F menunjukkan hasil: sebanyak 27 sampel (54%)  tetap positip  dan  23  sampel  (46%)  hasilnya  menjadi negatip. Hasil nested amplification dengan pasangan primer  gen rpoB2R dan  gen rpoB2F yaitu  sebanyak 37 sampel (74%) tetap positip dan 13 sampel (26%) hasilnya  menjadi  negatip.  Jika  hasil  pemeriksaan dengan  tehnik  PCR  ini  diinterpretasikan  dengan patokan  bahwa:  kalau  hasil  PCR-nya  (+),  (+),  (+) (primer  Tb1  dan  Tb2,  primer rpoB1R dan rpoB1F , primer rpoB2R dan rpoB2F )  atau  (+),  (-),  (+) menandakan  tidak  terjadi  mutasi  pada  gen rpoB dan hasil  PCR-nya  (+),  (-),  (-)  atau  (+),  (+),  (-) menandakan  terjadi  mutasi  pada  gen rpoB ;  maka dapat  kita  lihat  bahwa:  sebanyak  13  sampel  (26%) terjadi  mutasi  pada  gen rpoB serta  bersifat  resisten terhadap antibiotika rifampisin dan 37 sampel (74%) tidak  terjadi  mutasi  pada  gen rpoB serta  bersifat sensitif terhadap antibiotika rifampisin.
363 bp 534 bp
Hasil penelitian ini sejalan dengan beberapa penelitian  resistensi  di  Indonesia,  antara  lain penelitian  Aditama,dkk,1995  melaporkan  bahwa resistensi primer terhadap rifampisin 0,50% (Aditama,dkk,1995).  Paul  B,  1999  melaporkan terdapat resistensi primer terhadap rifampisin sebesar 3,5%  pada  tahun  1961  sampai  dengan  1968,  6,9% pada  tahun  1975  sampai  dengan  tahun  1982  dan 9,0%  pada  tahun  1982  sampai  dengan  1986  (Paul B,1999).    Pada  simposium  resistensi  antimikroba  di Indonsia,  Ida  Parwati,dkk  dalam  Stella  L  ahun  2008 menunjukkan  bahwa  di  Jawa  Barat  dari  kasus tuberculosis baru (n=644) , 43 pasien (6,7%) resisten rifampisin (Stella L,2008).  Laporan penelitian Salim ST  dkk.,  tahun  2010  di  RSUP  NTB,  dari  17  sampel cairan  pleura  dari  pasien  TB  paru  (+)  sebanyak  13 sampel  (76,47%)  menandakan  tidak  terjadi  mutasi pada  gen rpoB (sensitif)  dan  sebanyak  4  sampel (23,53%)  menandakan  terjadi  mutasi  pada  gen rpoB (resisten) (Salim ST dkk,2010).
Perkembangan resistensi primer pada beberapa  daerah  menunjukkan  adanya  perbedaan epidemiologis.  Misalnya  penelitian  di  Rumah  Sakit di  California  Selatan  dari  tahun  1969  hingga  1984 angka  resistensi  primer  adalah  sebesar  23%.  Di  new York dengan angka resistensi primer 13%, di Yunani pada tahun 1995 resistensi primer sebesar 1,8%  dan di  Indonesia  tahun  1995  resistensi  primer  terhadap rifampisin 0,50%, (Paul B,1999).
Gambaran  hasil  diagnostik  dengan  tehnik PCR  tersebut  menunjukkan  bahwa  bakteri  dapat menjadi resisten terhadap antibiotik yang sebelumnya  efektif.  Kemampuan  bakteri  tersebut untuk  terus  menerus  mengembangkan  resistensi
terhadaap  agen  antibakteri  menyebabkan  perlunya dikembangkan  obat-obat  baru.  Timbulnya  resistensi suatu  bakteri  terhadap  agen  antibakteri  dalam  suatu populasi  besar  sel  bakteri  yang  terpapar  antibakteri cukup  sederhana.  Bila  dalam  suatu  populasi  besar sel,  ada  beberapa  sel  yang  secara  genotip  resisten (mempunyai  sifat  resisten  terhadap  obat),  sel  yang dapat  tumbuh  dalam  lingkungan  abiotik  tersebut akan  menghasilkan  populasi  baru  yang  sebagian besar merupakan genotip resisten. Timbulnya sedikit sel  yang  secara  genotip  resisten  tersebut  adalah akibat  mutagenesis  mikroba.  Mekanisme  biokimia resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik  tertentu  adalah dengan  cara  (1)  penurunan  permeabilitas  terhadap antibiotik,  (2)  inaktivasi  enzimatik  antibiotik,  (3) modifikasi sifat tempat reseptor obat, (4) peningkatan sintesis  metabolit  antagonis  terhadap  antibiotik (Shulman ST dkk., 1994).
Resistensi  terhadap  obat  anti  tuberkulosis (OAT) ada 3 macam yaitu (1) mutan yang resisten, di dalam setiap populasi bakteri tuberkulosis (TB) akan ada  bakteri  dalam  jumlah  kecil  yang  resisten  secara alami. Apabila hanya satu jenis obat yang diberikan, bakteri TB yang sensitif akan dibasmi, tetapi bakteri- bakteri  yang  resisten  akan  berkembangbiak.  Karena itu  jangan  pernah  memberikan  pengobatan  dengan obat tunggal (monoterapi); (2) resistensi sekunder/resistensi  yang  diperoleh,  hal  ini  dapat timbul  karena  pengobatan  tidak  benar,  pemberian  2 macam  obat  dimana  salah  satu  obat  sudah  resisten, pasien gagal  minum obat secara benar; (3) resistensi primer,  terjadi  apabila  seseorang  ketularan  oleh orang  yang  memiliki  bakteri  TB  dengan  resistensi
yang diperoleh terhadap satu obat atau lebih (Crofton J dkk., 2002).
Pada penelitian analisis molekuler resistensi primer  sputum  penderita  TB  Paru  BTA  (+)  dengan target  gen rpoB menunjukkan  hasil  yang  resisten sebesar  26%  bisa  disebabkan  karena  terjadinya modifikasi sifat pada tempat reseptor obat/modifikasi pada  daerah  sasaran  obat  (mutasi),  dimana  mutan resistensi-rifampisin  mempunyai  polimerase  RNA dengan  subunit  B  yang  telah  berubah  dan  gagal mengikat  rifampisin.  Hasil  negatip  (terjadi  mutasi pada gen rpoB /resisten) bisa juga disebabkan karena akibat nucleotide  mismatch (ketidak  cocokan nukleotida  karena  mutasi)  dimana  hasil  PCR  TB menggunakan  primer  Tb1  dan  Tb2  hasilnya  positip seharusnya  hasil  PCR  dengan  menggunakan  primer rpoB juga positip.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## KESIMPULAN
Pemeriksaan  Mikroskopis  BTA  dari  50 sampel  sputum  seluruhnya  BTA  positip  (100%). PCR diagnostik dengan primer gen Tb1 dan gen Tb2, seluruh  sampel  (50  sampel)  hasilnya  positip  (+) tuberkulosis.  PCR  diagnostik  dengan  tehnik nested amplification dengan primer gen rpoB1 hasil negatip sebanyak    23  sampel  (46%),    dengan  primer  gen rpoB2  hasil  negatip    sebanyak  13  sampel  (26%). Sebanyak  13  sampel  (26%)  terjadi  mutasi  pada  gen rpoB/bersifat resisten terhadap antibiotika rifampisin.

## SARAN
Perlu  di  lakukan  penelitian  lanjutan  untuk menentukan  lokasi  mutasi  pada  satu  basa,  dengan
menggunakan  metode  sequensing  DNA  atau  HDF ( Heteroduplex  Formation ).  Sangat  perlu  dilakukan pelaporan  bentuk  apapun  yang  di  dapat  dalam pengamatan   mikroskopis BTA pada 5 bulan setelah terapi.    Untuk  pemetaan  munculnya  MDR  pada orang dengan resistensi primer di daerah NTB, maka perlu  dilakukan  penelitian  tentang  sifat  resistensi Mycobacterium  tuberculosis di  Kabupaten  lain  di daerah NTB.

## DAFTAR PUSTAKA
Arlina  G.  2003.  Kekerapan  Tuberculosis  Paru  Pada Pasangan  Suami  –  Isteri  Penderita Tuberculosis  Paru  Yang  Berobat  Di Bagian Paru RSUP.H. Adam Malik. USU Sumatera Utara.
Badan  Litbang  Kesehatan,  Departemen  Kesehatan
RI.2010. Riset Kesehatan Dasar
(Riskesdas) 2010. Jakarta.
Brooks GF; Butel JS; Morse SA. 2005, Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology) buku 1, Salemba Medika, Jakarta
Crofton  SJ;  Horne  N;  Miller  F.    2002,  Tuberkulosis Klinis, Widya Medika, Jakarta
Depkes R.I. 2007. Pedoman Nasional Penanggulangan  Tuberkulosis.  Edisi  2
Cetakan Pertama.Jakarta.
Djuminar  A.  2005,  Biologi  Molekuler,  Jurusan Analis Kesehatan, Bandung
Dikes Lotim. 2010. Profil Bidang P2PL Tahun 2010.
Hilaluddin.  2008.  Multi-Drug  Resistensi  (MDR)
Pada  Penderita  tuberculosis  Paru  Dengan Diabetes Melitus,Laporan Program Pendidikan Dokter Spesialis I Paru. Paul  Boekitwetan.  1999.  Resistensi  Multiple  Obat Antituberkulosis.Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Trisakti.Jakarta.
Putra  S  T.  1999.  Biologi  Molekuler  Kedokteran, Surabaya, Airlangga University Press
Salim S.T, Haris W, Zainul M. 2010. Penelitian Pola
Kepekan Bakteri Mycobacterium Tuberculosis Terhadap  Obat  Anti  –  TB Menggunakan Teknik PCR. Jurnal
Kedokteran Mataram, Nomor 6 Juni 2010.
Soedarsono.  2010.  Tuberkulosis  Multidrug-resistent:
Deteksi  dan  Penatalaksanaanya.Workshop dan seminar penatalaksanaan terkini
berbagai penyakit metabolik, kardiovaskuler dan paru.Mataram.
Stella  I.  2008.  Tinjauan  Kepustakaan  tuberculosis Paru.FK UI. Jakarta.
Sugiyono.  2005  “  Statistika  dan  Penelitian, Penerbit Alfabeta Bandung.
Shulman  ST:  Phair  JP  :  Sommers  HM.  1994.  Dasar Biologis  dan  Klinis  Penyakit  Infeksi.Edisi IV.Gajah Mada University Press.
WHO.  2008. Global Tuberculosis Control. Geneva.