Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol 6.No.1 Juni 2020 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p -ISSN : 2442-6032 e -ISSN :  2598-9979
Analisis  Penetapan  Kadar  Flavonoid  Sari  Jeruk  Kalamansi ( Citrofortunella microcarpa ) Dengan Metode Spektrofotometri UV-VIS
Nurfijrin Ramadhani 1 , Agung Giri Samudra 1 , Lea Wati Indah Pratiwi 2
1 Program Studi S1 Farmasi, Universitas Bengkulu
2 Program Diploma Farmasi Akademi Farmasi Al-Fatah

## ABSTRAK
Jeruk
kalamansi ( Citrofortunella microcarpa )  banyak  terdapat  di  Kota Bengkulu serta merupakan salah satu produk unggulan  di  Kota  Bengkulu.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengidentifikasi dan mengetahui  berapa  kadar  senyawa  flavonoid yang  terkandung  dalam  sari  buah  jeruk kalamansi  ( Citrofortunella  microcarpa ). Penelitian  ini  didahului  dengan  uji  kualitatif menggunakan  serbuk  magnesium  untuk mengidentifikasi
senyawa
flavonoid.
Selanjutnya  dianjutan  dengan  uji  kuantitatif dengan  membuat  seri  kadar  kuersetin  yaitu 20,  40,  60,  80,  dan  100  ppm  dengan menggunakan metode spektrofotometri. Data absorbansi yang diperoleh kemudian
dihitung  kadarnya.  Hasil  penelitian  uji kualitatif  menunjukan  bahwa  sari  jeruk kalamansi positif mengandung flavonoid dan hasil  kadar  flavonoid  yang  diperoleh  dengan metode spektrofotometri yaitu 10,958 mg/QE.
Kata Kunci : Sari Jeruk Kalamansi, Citrofortunella microcarpa , Spektofotometri, Flavonoid
Penulis Korespondensi : Nurfijrin Ramadhani Program Studi S1 Farmasi, Universitas Bengkulu E-mail : nurfijrin@gmail.com

## PENDAHULUAN
Kalamansi  diklasifikasikan  sebagai buah  sitrus,  meliputi  lemon  dan  limau, memiliki  daging  berwarna  jingga,  berair, asam,  dan  memiliki  kemiripan  rasa seperti  jeruk  nipis  (Surlitah,2017).  Jeruk kalamansi  ( Citrofortunella  microcarpa ) memiliki  nilai  ekonomis  yang  penting karena bergizi tinggi terutama kandungan antioksidan  dari  vitamin  C  yang  sangat kuat dan mineralnya sehingga digunakan sebagai bahan dalam pembuatan minuman.  Vitamin  c  sebagai  zat
pereduksi dapat bertindak sebagai antioksidan,  memiliki  efek  yang  baik dalam meredam radikal bebas yang dapat merusak  sel  atau  jaringan  termasuk melindungi lensa dari kerusakan oksidatif yang ditimbulkan oleh radiasi (Edan,2016).
Jeruk  kalamansi  banyak  terdapat  di provinsi  Bengkulu.  Jeruk  kalamansi banyak  digunakan  bahan  baku  utama pada industri olahan sirup buah. Industri pengolahan  sirup  buah  ini  menghasilkan
limbah berupa kulit dan kulit daging buah hasil pengepresan buah.
(Rosalina,dkk.2017).  Senyawa  flavonoid memiliki  aktivitas  antioksidan.  Golongan flavonoid  yang  bersifat  antioksidan  yaitu meliputi  flavon,  flavonol,  kaateksin,  dan kalkon  (Wulandari,dkk.2013).  Flavanon merupakan  flavonoid  jeruk  yang  sangat penting,  dan  beberapa  senyawa  lainnya bertanggung  jawab  atas  rasa  kepahitan jeruk,  seperti  naringin,  neohesperidin, neoeriocitrin dan poncirin (Li, S. W. et a l.
2014). Flavonoid,  seperti  poncirin, dydimin, neohesperidin, hesperidin, narirutin,  diosmin,  dan  isorhoifolin diperoleh  dari  bubuk  pulp  calamodin kering  yang  diekstrasi  dengan  metanol 80% (Ramful. et al . 2011)

## METODE PENELITIAN
A.Alat dan Bahan Penelitian 1.  Alat
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu,  timbangan  analitik,  perasan  jeruk, gelas  ukur  (pyrex),  batang  pengaduk, erlenmeyer (pyrex), pipet volume (pyrex), tabung reaksi, seperangkat alat spektrofotometri UV-Vis (thermo).
2. Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu, buah  jeruk  kalamansi,   serbuk Mg, HCl  pekat(Sigma  Aldrich), 2,2-diphenyl-
1-picrylhydrazyl (DPPH), kuersetin,
AlCl 3 , asam asetat, etanol 96% , aquadest (p.a).
B. Prosedur Kerja Penelitian 1. Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  buah  jeruk  kalamansi  yang diambil dari kota Bengkulu tepatnya pada kelurahan  Surabaya  kecamatan  Sungai Serut.  Pengambilan  sampel  dilakukan pada  saat  buah  masih  segar  dan  sudah masak  lalu  buah  tersebut  dikumpulkan dan telah dilakukan determinasi tanaman.
2.  Pengambilan  Sari  Buah  Jeruk Kalamansi
Sari  buah  jeruk  kalamansi  diambil dengan  cara  diperas  menggunakan  alat perasan. Sebelum sari buah jeruk diambil maka  buah  jeruk  dibersihkan  terlebih dahulu  menggunakan  air  yang  mengalir, lalu  diamkan  beberapa  saat  sampai permukaan  buah  nya  kering.  Setelah  itu belah  buah  jeruk  menjadi  2  bagian  yang sama  besar,  kemudian    peras  buah  jeruk menggunakan alat perasan yang sudah di siapkan..  Buah  jeruk  kalamansi  yang sudah  didapatkan  sarinya  kemudian dilakukan  penyimpanan  dalam  wadah tertutup  rapat  dan  berwarna  gelap  agar mutu sari buah terjaga.
3. Uji Skrining Flavonoid Sari Buah Jeruk Kalamansi
Sebanyak  3  ml  larutan    sampel dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi. Kemudian ditambahkan serbuk magnesium dan  asam  klorida  pekat  5 tetes.  Positif mengandung  flavonoid    jika
Ramadhani dkk.,  Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 6 ( 1 );2019 : 53-58
menghasilkan  warna  kuning,  orange  dan merah (Nafisah,dkk. 2014).
4.Penentuan Operating Time 1  ml  larutan  kuersetin  100  ppm  diambil sebanyak  1  mL  ditambahkan  1  mL  AlCl 3
10%  dan  asam  asetat  5%  sejumlah  8  ml Larutan  tersebut  diukur  absorbansinya pada  panjang  gelombang    yang  telah diperoleh  dengan  interval  pada  waktu  5 menit  sampai  diperolah  absorbansi  yang stabil (Anna dan Noverda, 2017). . 5.  Penentuan  Panjang    Gelombang Maksimum
Larutan  kuersetin  100  ppm  diambil sebanyak  1  mL,  ditambahkan  dengan  1 mL AlCl 3 10% dan 8 mL asam asetat 5%. Lakukan pembacaan dengan Spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang gelombang 350-450 nm (Das,dkk.2013). 6. Penentuan Kurva Baku Kuersetin Larutan  induk  kuersetin  100  ppm  dibuat dengan  menggunakan  kuersetin  sebagai baku  standar.  Dibuat  seri  kadar  sebesar 20, 40, 80 dan 100 ppm. Sebanyak 1 mL larutan  seri  kadar  dari  masing-masing konsentrasi  dimasukkan,  direaksikan dengan  1  mL  AlCl 3 10%  dan  8  mL  asam asetat  5%.  pembacaan  absorbansi  seri kurva  baku  dilakukan  setelah  didiamkan selama
15 menit menggunakan
spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang gelombang maksimum (Anna dan Noverda, 2017).
7. Penentuan Flavonoid Total Sari  buah  jeruk  kalamansi  100  mg diencerkan  dengan  etanol  sampai  10ml
diambil  masing-masing  sebanyak  1  mL, ditambahkan dengan 1 mL AlCl3 10% dan 8 ml asam asetat 5% didiamkan selama 15 menit . Dilakukan pembacaan absorbansi pada  panjang  gelombang  maksimum. Pembacaan absorbansi  sampel dilakukan pengulangan  sebanyak  3  kali  (Anna  dan Noverda, 2017).
8. Analisis Data
Data  yang  diperoleh  merupakan  data primer  yang  didapatkan  dari  absorbansi larutan  pembanding  kuersetin,  dibuat kurva  kalibrasi  dan  diperoleh  persamaan regresi  linear.  Kadar  total  dari  senyawa dihitung  dengan  memasukkan  kedalam persamaan regresi  linear y = ax  - b, yang diperoleh dari kurva kalibrasi pembanding  dan  hasil  dinyatakan  dalam satuan  mg  dalam  ml.    Kandungan flavonoid total dalam tumbuhan dinyatakan dalam QE ( Quercetin Ekivalen) yaitu jumlah kesetaraan milligram  rutin  dalam  mililiter  sampel (Rajauria and Tiwari, 2018).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Jeruk kalamansi tersebut sudah
dilakukan determinasi tanaman di Laboratorium Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas Bengkulu yaitu menunjukkan bahwa  tumbuhan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  benar  merupakan Jeruk kalamansi ( citrofortunella microcarpa) .  Hasil uji  skrining  flavonoid sari jeruk kalamansi, yang diperoleh yaitu
Ramadhani dkk.,  Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 6 ( 1 );2019 : 53-58
positif  mengandung  flavonoid  karena menghasilkan  warna  kuning.Hasil  warna kuning  diperoleh  dari  reaksi  gugus hidroksi dari flavonoid dengan serbuk Mg yang membentuk suatu kompleks
( Quercetin Ekivalen) Hasil
penelitian menunjukkan perubahan  warna  yang  sesuai  dengan teori  dan  menandakan  hasil  yang  positif. Sehingga  didalam  sari  jeruk  kalamansi mengandung adanya flavonoid.
Perubahan warna ini disebabkan terjadinya  pembentukan  kelat  antara kuersetin  dan  magnesium  (Gosh, et  al.
2015).  Senyawa  yang  digunakan  sebagai standar    pada  penetapan  kadar  flavonoid ini adalah kuersetin, dikarenakan kuersetin  merupakan  salah  satu  standar dari  flavonoid  yang  terkandung  di  dalam kalamansi  (Lou, et  al .2014).    Dengan menggunakan  metode  spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimum  yang  diperoleh  yaitu  414  nm pada
absorbansi 0,255 dengan konsentrasi  60  ppm.  Pada    pengukuran kadar  flavonoid  dilakukan  penambahan AlCl 3 yang  dapat  membentuk  komplek dengan kuersetin, sehingga terjadi penggeseran  panjang  gelombang  kearah visible ( nampak) ditandai dengan larutan menghasilkan  warna  yang  lebih  kuning (Chang, et al. 2002).
Gambar 1. Proses Pembentukan Komplek Flavonoid-AlCl 3 (Guntarti, et al. 2017).
Pada  penentuan  kurva  baku  kuersetin, sari  jeruk  kalamansi  sebelumnya  di  buat terlebih  dahulu  serikadar  sebesar  20 ppm,  40  ppm,  80  ppm,dan  100  ppm. Sebanyak  1  mL  larutan  seri  kadar  dari masing-masing  konsentrasi  dimasukkan, direaksikan dengan 1 mL AlCl 3 10% dan 8 mL asam asetat 5%. Didiamkan selama 15 menit  pembacaan  absorbansi  seri  kadar dengan  menggunakan  spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimum  414  nm  (Anna  dan  Noverda, 2017)..  Pada  penentuan  flavonoid  total Seri  kadar  sari  buah  jeruk  kalamansi 1000  ppm    diambil  masing-masing sebanyak  1  mL,  ditambahkan  dengan  1 mL  AlCl 3 10%  dan  8  mL  asam  asetat  5% didiamkan  selama  15  menit  (Anna  dan Noverda,  2017).  AlCl 3 digunakan  untuk pembentuan  kompleks  dengan  gugus hidroksi pada flavonoid sehingga menghasilkan  warna  agar  dapat  diukur dengan spektrofotometri visibel, sedangkan  penambahan  asam  asetat dilakuan  untuk  memberikan  kondisi asam pada kompleks yang terjadi (Mabry et  al .  1970).  Pengukuran  absorbansi dilakukan  pada  panjang  gelombang  414 nm.  Pembacaan  absorbansi    sampel
Ramadhani dkk.,  Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 6 ( 1 );2019 : 53-58
dilakukan pengulangan sebanyak tiga kali replikasi  untuk  keperluan    akurasi  data. Kandungan flavonoid total dalam
tumbuhan dinyatakan dalam QE ( Quercetin Ekivalen) yaitu jumlah kesetaraan milligram rutin dalam mililiter  sampel  (Rajauria  and  Tiwari, 2018).
Tabel I. Hasil Absorbansi Kurva Baku No.  Kosentrasi Absorbansi 1. 20 ppm 0,046 2. 40 ppm 0,155 3. 60 ppm 0,255 4. 80 ppm 0,341 5. 100 ppm 0,438

## Gambar 2. Kurva Kalibasi Larutan
Kuersetin

## Tabel II. Hasil Perhitungan Rata-rata
Absorbansi Sampel
No.  Sampel Absorbansi Rata-rata absorbansi Flavonnoid 1. 1 0,006 0,0066 2. 2 0,007 3. 3 0,007
Dari  kurva  kalibrasi  flavonoid  total diperoleh persamaan regresi linier yaitu y = 0,0049x - 0,044 dengan nilai koefisien kolerasi  (r)  =  0,998.  Nilai  r  yang mendekati  angka  1  menunjukkan  kurva kalibrasi  linier  dan  terdapat  hubungan antara  konsentrasi  larutan  kuersetin
dengan  meningkatkan  konsentrasi,  maka absorbansi juga akan  meningkat. Sampel dengan  konsentrasi  1mg/ml  diukur  pada spektrofotometri dengan panjang gelombang 414 nm. Diperoleh absorbansi sampel dengan replikasi 1 : 0,006 mg/ml, replikasi 2 : 0,007 mg/ml, dan replikasi 3
: 0,007 mg/ml. Kadar flavonoid dinyatakan  dalam Quercetin  Equivaent QE  sehingga  didapat  flavonoid  10,958 mg/ml QE.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  ditarik  kesimpulan bahwa hasil analisa kualitatif
menunjukkan bahwa sari jeruk kalamansi positif    dan  dari  sampel  1mg/ml mengandung  flavonoid  dengan  kadar 10,958 mg/ml QE.

## DAFTAR PUSTAKA
Chang,  C.  C.,  Yang,  M.  H.,  Chern,  J.  C. 2002. Estimation  of  total  flavonoid content  in propolis  by  two complementary colorimetric methods. Journal of Food and Drug Analysis, 10(3), 178-182.
Das, N., Md. E. Islam., N. Jahan., M. S. Islam., A. Khan, Md. R. Islam, & Mst. S. Parvin. 2014. Antioxidant Activities of Ethanol Extracts and Fractions of Crescentia cujete Leaves and Stembark and The Involvement of Phenolic Compounds . BMC Complementary and Alternative Medicine.14-45. Dhar Pubali, 2013. Characterization Of Antioxidants And Antioxidative Properties Of Various Unifloral Honeys Procured From West Bengal, India. Article.  ·
Ramadhani dkk.,  Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia 6 ( 1 );2019 : 53-58
https://www.researchgate.net/pub lication/259214092 Edan,2007. Kimia Farmasi Analisis .
Pustaka Pelajar: Yogyakarta.
Ghosh N, Chakraborty T, Mallick S, et al. 2015. Synthesis, characterization and study of antioxidant activity of quercetin-magnesium complex. Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc .;151:807-813. doi:10.1016/j.saa.2015.07.050 Guntarti A, Juniati Annisa, Mulki Mughniy Fitria Rizq, 2017. Effect of Regional Variation on the Total Flavonoid Level of Ethanol Extract of Mangosteen (Garcinia mangostana) Peels. JKKI 2017;8(2):136-143 Hamzah, Nursalam. 2013. Analisis Kimia Metode Spektroskopi . Makassar: Alauddin university press. Li, S. W. et al. (2014). Content changes of bitter compounds in ‘Guoqing No.1’ Satsuma mandarin (Citrus unshiu Marc.) during fruit development of consecutive 3 seasons. Food Chem. 145, 963 – 969 Lou SN, Hsu YS, Ho CT. 2014. Flavonoid compositions and antioxidant activity of calamondin extracts prepared using different solvents. J Food Drug Anal .;22(3):290-295. doi:10.1016/j.jfda.2014.01.020 Nafisah, M., Tukiran, Suyatno, Hidayati, N., 2014, Phytochemical Screening
Test On hexan, Chloroform and Methanol Extracts of Patikan Kebo ( Euphorbiae hirtae ), Prosiding Seminar Nasional Kimia , hal.279-286. Rajauria, G., & Tiwari, B. K. (2018). Fruit juices:  extraction,  composition, quality and analysis . http://search.ebscohost.com/login .aspx?
direct=true&scope=site&db=nlebk &db=nlabk&AN=1497554.
Ramful D, Tarnus E, Aruoma OI, et al. 2011. Polyphenol composition, vitamin C content and antioxidant capacity of Mauritian citrus fruit pulps. Food Res Int;44:2088e99. Rosalina,Susanti,Karo.2017. Kajian Ekstraksi Pektin Dari Limbah Jeruk Rimau Gerga Lebong (Jeruk RGL) Dan Jeruk Kalamansi . Universitas Begkulu. Surlitah,2017. Interversi Sari Jeruk Kalamansi (Citrus microcarpa) Terhadap Perubahan Propil Lipid Pada Perempuan Dewasa Kelebihan Berat Badan . Sekolah Pasca Sarjana Institut Pertanian Bogor. Wulandari,R.R.2013. Senyawa Flavonoid.Fakultas Farmasi . Universitas Muhamadiah Surakarta.