Indonesian Sugar Research Journal Volume 3 No 1 page: 25-32 p-ISSN: 2775-2100 e-ISSN: 2798-5415
Identifikasi Molekuler Trichoderma sp. Isolat T10 ISRI sebagai Agen Hayati Penyakit Busuk Akar dan Pangkal Batang Xylaria
Molecular Identification of Trichoderma sp. T10 ISRI Isolate as a Biological Agent of Root and Stem Rot Disease of Xylaria
Wiwit Wicaksono Jati 1) , Ari Kristini 1) , Agustin Sri Mulyatni 2) dan Abdul Latief Abadi 3)
1) Pusat Penelitian Perkebunan Gula Indonesia, Pasuruan
2) Pusat Penelitian Bioteknologi dan Bioindustri Indonesia, Pasuruan
3) Universitas Brawijaya, Malang
Alamat korespondensi, Email: jatiwiwit@gmail.com

## ABSTRAK
Penyakit busuk akar dan pangkal batang pada tebu merupakan penyakit yang memiliki arti penting secara ekonomi.  Salah satu agen hayati yang berpotensi mengendalikan penyakit busuk  akar  dan  pangkal  batang Xylaria adalah Trichoderma sp.  Isolat  T10  ISRI  memiliki aktivitas enzim kitinase yang tinggi sehingga dapat digunakan sebagai agen hayati. Identifikasi isolate T10 ISRI bertujuan agar potensi lain dari isolate T10 ISRI dapat diktahui. Tujuan dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengidentifikasi  isolat  T10  ISRI  sampai  dengan  tingkat  spesies melalui identifikasi secara molekuler. Metode identifikasi dilakukan dengan sequencing DNA melalui BLAST dan pembuatan pohon filogenik. Hasil penelitian menunjukkan bahwa spesies isolat  T10  ISRI  yaitu Trichoderma  asperellum dengan  kesamaan  100%  dengan  strain Trichoderma asperellum T sum 66 dari data NCBI dan kedekatan dalam kelompok 0,00001 dari pada jarak diluar kelompok yaitu 0,3287.
Copyright © 2023 by Authors, Published by ISRJ Group. This is an open access article under the CC BY-SA License ( https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/ )
Kata kunci : Trichoderma, Identifikasi, Molekuler,

## ABSTRACT
Root and stem rot disease in sugarcane is a disease that has economic importance. One of the biological agents that has the potential to control root and stem rot disease Xylaria is Trichoderma sp. Isolate T10 ISRI has high chitinase enzyme activity so it can be used as a biological agent. Identification of the T10 ISRI isolate aims to identify other potentials of the T10 ISRI isolate. The aim of this study was to identify T10 ISRI isolates up to the species level through molecular identification. Identification method was done by sequencing DNA through BLAST  and  making  phylogenic  trees.  The  results  showed  that  the  T10  ISRI  species,  namely Trichoderma asperellum, had 100% similarity with the Trichoderma asperellum strain T sum 66 from NCBI data and the closeness within the group was 0.00001 compared to the distance outside the group, which was 0.3287.
Key words: Trichoderma, Identification. Molecular

## PENDAHULUAN
Penyakit  busuk  akar  dan  pangkal batang  pada  tebu  di  Indonesia  yang disebabkan oleh jamur Xylaria cf warbugii dan X. arbuscula merupakan penyakit yang memiliki  arti  penting  secara  ekonomi. Penyakit  ini  akan  menimbulkan  kerugian yang besar seiring dengan kategori tanaman tebu  (Maryono et  al. ,  2017;  2019). Kerugian penyakit pada kategori PC ( plant cane ) akan lebih rendah dibandingkan pada tanaman  keprasannya  ( ratoon ).  Di  Taiwan kerugian  karena Xylaria  warbugii pada tanaman  pertama  5%  dan  pada  tanaman keprasan mencapai 30% (Fang et al. , 1994). Pada  serangan  tinggi  penyakit  busuk  akar dan  pangkal  batang  mengakibatkan tanaman tidak dapat dikepras (Maryono et al. , 2017).
Pengalihfungsian lahan hutan menjadi lahan perkebunan yang digunakan secara  terus  menerus  dapat  menurunkan produktivitas  lahan.  Produktivitas  lahan yang menurun mengakibatkan menurunnya aktivitas  mikrobia  tanah  dan  dominasi mikrobia  tertentu  salah  satunya Xylaria warbugii (Yulianti , 2017).  Patogen Xylaria warbugii merupakan  patogen  tular  tanah yang  dapat  bertahan  lama  di  dalam  tanah (Hooker, 1981) Sampai saat ini belum ada varietas tebu yang tahan terhadap penyakit busuk akar dan pangkal batang. Penggunaan varietas PS 881, PS 882, PS JT 941,  PSKA  922  tenyata  masih  dapat terserang penyakit busuk akar dan pangkal batang  dengan  serangan  sebesar  12,5- 28,6%.  Serangan  penyakit  busuk  akar  dan pangkal batang pada varietas CM 0901, BM 2104,  PS  862,  CM  0902,  KK,  ROC  22, TLH2  tergolong  sangat  tinggi  diatas  50% (Winarno,  2016  dalam  Yulianti , 2017). Pengendalian  menggu-nakan  agen  hayati diharapkan mampu meningkatkan diversitas  mikrobia  berman-faat  lainnya. Salah  satu  agen  hayati  yang  berpotensi mengendalikan  penyakit  busuk  akar  dan pangkal  batang Xylaria sp . adalah
Trichoderma sp.  Jamur  antagonis  ini memiliki kemampuan kompetisi yang baik dengan kecepatan pertumbuhan yang tinggi dan  mampu  menghasilkan  enzim  kitinase (Benitez et al , 2004). Hasil penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa Trichoderma sp. isolat T10 ISRI memiliki aktivitas enzim kitinase yang  tinggi.  Kemampuan  aktivitas  enzim tersebut  menunjukkan  kemampuan  dalam mendegradasi kitin per satuan waktu. Kitin merupakan penyusun dari dinding sel jamur pathogen  sehingga Trichoderma sp.  isolat T10 ISRI dapat menjadi agen hayati untuk penyakit  busuk  akar  dan  pangkal  batang Xylaria sp. (Jati et al. , 2022).
Identifikasi  agen  hayati  jamur umumnya  dilakukan  secara  morfologi dengan  memisahkan  koloni  yang  berbeda pada  media  baru,  berdasarkan  perbedaan warna  koloni,  tekstur  dan  rata-rata  waktu tumbuh  koloni  (Sandy et  al. ,  2016).  Akan tetapi susunan dari taksonomi morfospesies tidak dapat menggambarkan filogeni hingga tingkat spesies. Identifikasi secara morfologi  terkadang  memiliki  tingkat akurasi  yang  rendah  karena  obyektifitas pengamat berbeda-beda sehingga diperlukan  identifikasi  secara  molekuler. Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengidentifikasi  secara  molekuler  jamur Trichoderma sp.  isolat  T10  ISRI  yang diisolasi  dari  lahan  tebu  sampai  dengan tingkat  spesies  sehingga  karakter  lain  dari isolat tersebut dapat diketahui.

## METODE
Penelitian
dilakukan di Laboratorium  Penyakit  dan  Laboratorium Jasa  Pusat  Penelitian  Perkebunan  Gula Indonesia,  Pasuruan,  Jawa  Timur  dan Laboratorium Pusat Penelitian
Bioteknologi  dan  Bioindustri  Indonesia, Bogor,  Jawa  Barat.    Penelitian  dilakukan selama  3  bulan  (September  -  November 2021).
Bahan yang digunakan adalah isolat jamur Trichoderma sp.  T10  ISRI,  media PDB dan PDA, 1 ml lysis buffer , nitrogen cair,  1  µl  mercaptoethanol,  500  µl potassium acetate 5 M,  phenol, CHCl 3 , dan isoamyl alkohol, 3 M sodium acetate, EtOH 100%, primer ITS 1 dan ITS4, TAE buffer , gel agarose , 1 µl loading dye , 4 µl dH 2 O, ethium bromide, ethanol, dan nitrogen. Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah cawan  petri,  tabung  reaksi,  tabung eppendorf,  vortex , centrifuge suhu  dingin, freezer , PCR thermal cycler , elektroforesis.
Metode  Identifikasi Trichoderma sp . secara molekuler
Tahapan isolasi DNA (Fatiyah et al. , 2006 ) dan  identifikasi  jamur  antagonis  sebagai berikut :

## Isolasi DNA Genom
Isolat  yang  telah  ditumbuhan  di  dalam media  PDB.  Kemudian    isolat  jamur Trichoderma sp. diletakkan pada tube , dan diberi label. Isolat tersebut ditumbuk halus dengan  menggunakan  nitrogen  cair  pada mortar dan ditambahkan 1 ml lysis buffer serta 1 µl mercaptoethanol , lalu dimasukkan ke  dalam  tabung eppendorf baru  dan diinkubasi  pada  suhu  65  °C  selama  10 menit.  Kemudian  ditambahkan  500  µl Potassium  Acetate  5  Molar  dan  di homogenkan  dengan  cara  dibolak-balik sebanyak 10-20 kali dan diinkubasi pada es selama  5  menit.  Setelah  itu  isolat disentrifugasi  pada  suhu  4  °C  selama  10 menit dengan 10.000 rpm.
Sebanyak  500  µl  fasa  atas  diambil dengan  ujung  tips  yang  steril,  lalu dipindahkan  ke  tabung eppendorf yang baru.  Setelah  itu  ditambahkan  500  µl campuran  Phenol,  CHCl 3 ,  dan  isoamyl alkohol, lalu disentrifugasi pada suhu 4 °C selama  3  menit  dengan  13.000  rpm.  Fasa atas  (supernatan)  diambil  400  µl  dan dipindahkan ke tabung eppendorf baru, lalu ditambahkan  400  µl  campuran  phenol, CHCl 3 , dan isoamyl alkohol dan disentrifugasi  pada  suhu  4  °C  selama  3
menit dengan 13.000 rpm. Fasa atas diambil 300  µl    dan  dipindahkan  ke  tabung eppendorf baru. Lalu ditambahkan 300 µl campuran  CHCl 3 dan  isoamyl  alkohol kemudian  disentrifugasi  pada  suhu  4  °C selama 3 menit dengan 13.000 rpm. Setelah disentrifugasi, upper  layer (fasa  atas) dipindahkan  ke  tabung eppendorf baru sebanyak 250 µl (Sandy et al. , 2016).
Setelah  semua  rangkaian  di  atas  maka dilakukan  purifikasi  DNA.  Langkah  awal yang dilakukan adalah menambahkan  25 µl 3M sodium acetate dan ditambahkan 500µl EtOH  100  %.  Kemudian  dihomogenkan dengan  cara  dibolak  balik  10-20  kali  dan diinkubasi  pada  suhu  -80  °C  selama  30 menit. Setelah itu disentrifugasi pada suhu 4 °C selama 10 menit dengan 13.000 rpm. Larutan  EtOH  pada eppendorf dibuang, kemudian ditambahkan  500 µl EtOH 80 % dan disentrifugasi pada suhu 4 °C selama 5 menit  dengan  13.000  rpm.  Ethanol kemudian  dibuang  menggunakan  pipet. Pelet dikeringanginkan selama 24 jam dan ditambahkan buffer TE sebanyak 20 µl lalu disimpan pada suhu -20 °C.
Polymerase Chain Reaction (PCR)
Proses PCR digunakan untuk amplifikasi  DNA  fungi.  Ekstraksi  genom DNA  fungi  di  amplifikasi  menggunakan primer universal. Primer tersebut yaitu ITS1 (5’-TCT GTA GGT GAA CCT GCG G-3’) dan  ITS4  (5’-TCC  TCC  GCT  TAT  TGA TAT GC-3’) (White et. al., 1990).   Proses PCR  dengan  menggunakan  alat  PCR Thermal  Cycler .  Setting  dilakukan  dengan proses denaturasi pada suhu 94 °C selama 30  detik,  kemudian annealing pada  suhu 51,9  °C  selama  30  detik,  kemudian extention pada suhu 72 °C selama 1 menit dan final extention pada suhu 72 °C selama 7 menit, dan di ulang selama 30 kali ulangan atau 30 siklus.

## Elektroforesis
Hasil  isolasi  genom  DNA  jamur dianalisis dengan elektroforesis gel agarose 0,9%.  Gel  dan  cetakan  direndam  pada buffer TAE  IX  pada  kolom  elektroforesis.
Larutan  sampel    dari freezer diambil sebanyak  5  µl,  kemudian  dicampurkan dengan  1  µl loading  dye dan  4  µl  dH 2 O. Sampel dimasukkan ke dalam sumur yang terdapat dalam gel pada kolom elektroforesis. Setelah sampel dimasukkan, kemudian dielektroforesis pada tegangan 50 volt  selama  100    menit.  Gel  berisi  DNA hasil elektroforesis direndam menggunakan larutan  Ethium  Bromide  (EtBr)  selama  10 menit,  kemudian  dibilas  dengan delution water steril . Gel hasil elektroforesis dilihat dengan alat sinar UV ( UV  Transluminator ) dan dicetak fotonya.

## Sequensing DNA
Presipitasi etanol ( ethanol precipitation ) dapat pula disebut purifikasi sekuen  produk.  Sampel  DNA  di flash dan dipindahkan  ke  tabung eppendorf baru. Sampel  DNA  ditambahkan  64  µl  Ethanol 99,5 % (suhu ruangan), kemudian di vortex dan ditambahkan 16 µl dH 2 O lalu di vortex lagi. Sampel dibungkus alumunium selama 10 menit. Sampel disentrifugasi pada suhu 28 °C selama 15 menit dengan 14.000 rpm. Semua upper layer dibuang dan ditambahkan  100  µl  Ethanol  70  %  (suhu ruangan).  Sampel disentrifugasi lagi pada suhu 28 °C selama 10 menit dengan 14.000 rpm.  Semua upper  layer dibuang  dan dikeringkan  dengan  dibungkus  aluminium foil  selama  15  menit  (suhu  ruang). Kemudian sampel disimpan pada suhu -20 °C  sebelum  dikirimkan  ke  perusahaan untuk  dilaksanakan sequencing atau pembacaan untai DNA.
Analisis Data Bioinformatika Isolat jamur yang telah di subkultur,
diidentifikasi sampai tingkat taksa genus/spesies menggunakan metode bioinformatika Basic  Local  Alignment Search  Tool (BLAST)  secara  online  di alamat
website http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi.  dan aplikasi MEGA 4.1 untuk pembuatan pohon filogenetik  metode bootstrap-Neighbor joining dengan pengulangan 1000 kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  amplifikasi  menunjukkan bahwa Trichoderma sp.    isolat  T10  ISRI memiliki nilai pasangan basa 593 bp. DNA yang  diperoleh  dimurnikan  dan  dilakukan sekuensing DNA.  Hasil pita DNA terlihat tebal  dan  tidak  berbayang.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  DNA  jamur  menem- pel  sempurna  pada  cetakan  DNA.  Hasil sekuensing  DNA  digunakan  untuk  identi- fikasi  spesies  isolat  T10  ISRI.  Menurut Baldwin et  al (1995),  ukuran  basa  dari primer  ITS  1  dan  ITS  4  antara  500  bp sampai dengan 700 bp.
Hasil elekroforesis pada Gambar 1. menunjukkan  bahwa  pita  sampel  isolat Trichoderma sp.  T10  ISRI  memiliki  kete- balan  yang  sama  dengan  kontrol  positif Trichoderma sp. Hal tersebut menunjukkan bahwa  sampel  isolat  T10  ISRI  teriden- tifikasi  sebagai  jamur Trichoderma sp. karena berada pada 500 bp sampai dengan 700  bp.  Identifikasi  tahap  selanjutnya adalah  menggunakan  metode  sekuensing DNA T10 ISRI untuk dibandingkan dengan data  base  dari National  Center  Biotech- nology  Information (NCBI).  Hasil  analisa dapat  dilihat  berdasarkan  analisa Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) dan gambar  kekerabatan  dengan  spesies Trichoderma lainnya.
Hasil analisa menggunakan BLAST dari  NCBI  menunjukkan  bahwa Tricho- derma sp.  isolat  T10  ISRI  yang  diidenti- fikasi  memiliki  kesamaan  dengan  urutan DNA Trichoderma  asperellum .  Kesamaan hasil  analisa  BLAST  mencapai  100% (Tabel  1.).  Hal  tersebut  menunjukkan bahwa isolat T10 ISRI teridentifikasi seba- gai Trichoderma asperellum . Panjang untai DNA isolat T10 ISRI 593 bp yang hampir sama  dengan Trichoderma  asperellum isolat T sum 66 dengan aksesi MT 102403 dengan selisih panjang untai DNA 8 bp. Hal tersebut  menunjukkan  kesamaan  pada panjang  untai  DNA.  Kedekatan  hubungan kerabatan Trichoderma sp . isolat T 10 dan Trichoderma  asperellum T10  ISRI  dapat dilihat pada gambar pohon filogenetik.
Gambar 1. Hasil amplifikasi DNA Trichoderma sp. isolat T10 ISRI dengan primer ITS 1&4. M  adalah marker 1  kbp  plus  ladder,  K  –  (kontrol  negatif/aquades),  K  + ( Trichoderma sp.) dan S adalah sampel Trichoderma sp. isolat T10 ISRI
Figure 1. Results of Trichoderma T10 ISRI DNA amplification with ITS 1-4 primers. M is 1 kbp marker  plus  leader.  K  –  (negative  control/aquades)  K  +  (Trichoderma  sp.).  S  is Trichoderma sp. Sample. T10 ISRI
Tabel 1.  Homologi Trichoderma sp. isolat T10 ISRI dengan spesies Trichoderma asperellum Table 1. Homology of isolate T10 ISRI with Trichoderma asperellum species
Organisme Isolat  Nama spesies Nomor Aksesi Persen identitas BLAST Panjang untai DNA Total Skor Jamur T10 ISRI Trichoderma asperellum 1solate T Sum 66 MT 102403 100 % 601 bp 1096 Trichoderma asperellum Strain CRI- Ta1 MT704500 100% 602 bp 1096 M            K-            K+            S 1500  bp 1000 bp bpbpbp 500 bp 593 bp
Gambar 2.  Pohon  filogenetik Trichoderma sp.  isolat  T10  ISRI  dengan  pembanding  3  data isolate Trichoderma NCBI.  (1) Pohon filogenetik dihasilkan dari neighbor-joining Bootsrap 1000 ulangan alogaritma  cabang pohon  dengan jarak dan frekuensi.
Figure 2. Phylogenetic tree of isolate T10 ISRI with comparison of 3 data of NCBI Trichoderma isolates. (1) The phylogenetic tree is generated from the neighbor-joining Bootstrap 1000 replicate tree branch algorithm with distance and frequency.
Berdasarkan  Gambar  2.  terlihat bahwa isolat T10 ISRI memiliki jarak yang dekat  dengan  kelompok Trichoderma asperellum dengan  jarak  antar  cabang 0,00001.  Jarak  di  luar  kelompok  0,3287 dengan Sporisorium  scitamineum .  Isolat T10
ISRI teridentifikasi sebagai Trichoderma asperellum dan dekat dengan Trichodema asperellum strain TR21 dengan nomer  aksesi  MH400815.  Menurut  Hall (2021)  jika  semakin  besar  nilai  cabang menunjukkan  adanya  perubahan  sekuen yang  terjadi.  Pada  gambar  pohon filogenetik  cabang  sangat  pendek  atau rerata  sama  pada  satu  kelompok  0,00001 sehingga  perubahan  sekuen  tidak  terjadi dalam kelompok.
Trichoderma asperellum merupakan jamur antagonis pada beberapa penyakit  tanaman. T.  asperellum dapat menekan  100%  penyakit  layu  fusarium pada  tanaman  cabai  (Antari et  al .,  2020). Penggunaan agen hayati T. asperellum pada konsentrasi  2  g/liter  dan  4  g/liter  mampu mengendalikan  penyakit  busuk  buah  pada kakao  yang  disebabkan Phytophthora palmivora (Hakkar et al. , 2014). Kemampuan T. asperellum dalam menekan kejadian  penyakit  biasanya  berkaitan
dengan  antagonisme  secara  langsung dengan  patogen  dan  secara  spesifik berkaitan  dengan  enzym  lisis  seperti kitinase  dan  beta  1,3  glukanase.  Kedua enzim ini yang memiliki peran utama dalam menghambat  pertumbuhan  jamur  patogen (Benítez et  al. ,  2004).  Jumlah  aktivitas enzim  kitinase Trichoderma  asperellum yaitu  antara  2,3  –  10,3  unit/ml  sedangkan aktivitas  enzym  beta  -1,3  glukanase  yaitu antara 0,80 – 1,98 unit/ml. Aktivitas enzim kitinase paling mempengaruhi antagonisme T. asperellum terhadap penekanan penyakit (El  Komy et  al. ,  2015). Trichoderma asperellum memiliki  kemampuan  untuk mengkolonisasi akar yang berfungsi untuk menekan  serangan  pada  permukaan  akar tanaman  (Hermosa et  al ,  2012).  Hasil Penelitian  dari  Trillas et  al., (2006) menyatakan  bahwa  pengendalian  penyakit rebah semai Rhizoctonia solani dengan cara menggabungkan kompos dan Trichoderma asperellum dapat  menekan  penyakit  dan mempercepat  tingkat  kematangan  kompos (Trillas et al. , 2006). Oleh karena itu isolat T10 ISRI yang teridentifikasi dengan nama Trichoderma  asperellum memiliki  potensi sebagai  agen  pengendali  hayati  jamur Xylaria sp .
KESIMPULAN Identifikasi secara molekuler
menggunakan  analisis  BLAST  NCBI menunjukkan  bahwa  jamur Trichoderma sp. isolat T10 ISRI terindentifikasi sebagai Trichoderma asperrellum . Perlu dilakukan penelitian  lebih  lanjut  pada  skala  rumah kaca untuk mengkarakterisasi potensi isolat tersebut sebagai agen hayati.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kami sampaikan  kepada  teknisi  di  Pusat Penelitian Perkebunan Gula Indonesia dan Pusat Penelitian Bioteknologi dan Bioindustri  Indonesia  yang  terlibat  dalam kegiatan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Antari, N.M., Darmayasa, I.B.G. & Hardini, J.  (2020)  Efektivitas Trichoderma asperellum Dengan Mediator Pupuk Kandang  Untuk  Mengendalikan Penyakit  Layu  Fusarium  Pada Tanaman  Cabai  Merah    ( Capsicum annum L.). Simbiosis, VIII (2): 63- 71
Baldwin,  B.G.,  Michael  J.S.,  Porter,  J.M., Martin  F.W.,  Christoper  S.C.  &
Michael J.D. (1995) The ITS Region of  Nuclear  Ribosomal  DNA:  A Valuable of Evidence on Angiosperm  Phylogeny. Annals  of the Missouri Garden (2): 247-277 p. Benitez, T., Rincon, A.M., Limon, M.C. & Codon,  A.C.  (2004)  Biocontrol Mechanisms of Trichoderma Strain.
International    Microbiologi .    Vol
7:249-260 p.
El Komy, M. H., Saleh, A. A., Eranthodi, A.
& Molan, Y.Y. (2015) Characterization of Novel Trichoderma  asperellum  Isolates  to Select  Effective  Biocontrol  Agents Against Tomato Fusarium Wilt. The
plant pathology journal . 31(1), 50– 60. https://doi.org/10.5423/PPJ.OA.09. 2014.0087
Fatiyah, E.L., Aruminingtyas, S., Widyarti, S., Rahayu, Y., Kusmowardhani, A., Hidayati & Harmaji (2006) Analisa Biologi Molekuler. JBUB . 88 p.
Fang, J.G., Hsieh, W.H. & Lee, C.S. (1994) Root  and  basal  stem  rot,  a  new disease of sugarcane. In: Rao, G.P., Gillaspie Jr., A.G., Upadhyaya, P.P.,
Bergamin,  A.,  Agnihotry,  V.P.  and
Chen,  C.T.  eds.  Current  Trends  in Sugarcane  Pathology .  International
Books  & Periodicals  Supply Service. Delhi, India, 59–64 Hall, B.G. (2001) Phylogenetic Trees Made Easy:  A  How  -  To  Manual  for Molecular Biologists . Sinauer Associates, Inc. Sunderland, Massachusetts, USA. 197 p. Hakkar, A.A., Rosmana, A. & Rahim, M.D. (2014) Pengendalian Penyakit
Busuk  Buah  Phytophthora  pada Kakao  dengan  Cendawan  Endofit Trichoderma  asperellum. Jurnal Fitopatologi  Indonesia Vol  10  (5):
139-144 p.
Hermosa, R.,Viterbo, A., Chet, I. & Monte, E. (2012) Plant-beneficial effects of Trichoderma  and  of  its  genes . Microbiology  (Reading,  England). 158.  17-25.  10.1099/mic.0.052274- 0.
Hooker  W.J.  (1981)  Potato  disease. The American Phytopathological Society , St paul Minnesota USA. 125 pp.
Jati,  W.W.,  Abadi,  A.L.,  Aini,  L.Q.  & Djauhari,  S.  (2022)  Screening  of Trichoderma sp.  Isolates  Based  on Antagonism  and  Chitinolytic  Index Against Xylaria sp. J  Trop  Plant Pests Dis , 22: 55-67 p.
Maryono,  T.A.,  Widiastuti,  A.  & Priatmodjo  (2017)  Penyakit  Busuk
Akar  dan  Pangkal  Batang  Tebu  di Sumatra Selatan. Jurnal Fitopatologi Indonesia , 13: 67-71 p.
Maryono, T.A., Widiastuti, R.H., Murti, A. & Priatmodjo (2020)  Identification and  Characterization  of  the  Causal Agent of Sugarcane Root and Basal Stem  Rot  in  South  Sumatra, Indonesia. Sugar Tech , 22:105-111. https://doi.org/10.1007/s12355- 019-00749-2.
Sandy, Y.A., Djauhari, S. & Sektiono, A.W.
(2016) Identifikasi Molekuler Jamur Antagonis Trichoderma  harzianum
Diisolasi  dari  Tanah  Pertanian  di Malang,  Jawa  Timur. Jurnal  HPT (Hama  Penyakit  Tumbuhan) ,  3(3), pp.1–8. Diakses 12 Desember 2022 dari https://jurnalhpt.ub.ac.id/index.php/
jhpt/article/view/194
Trillas, M.I., Casanova, E., Cotxarrera, L.,
Ordovás,  J.,  Borrero,  C.  &  Avilés, M. (2006) Composts from agricultural waste and the
Trichoderma asperellum strain T-34 suppress Rhizoctonia  solani in cucumber  seedlings. Biological Control , 39(1), 32–38. P. Yulianti, T. (2017). Perkembangan Penyakit  Lapuk  Akar  dan  Pangkal
Batang  Tebu  ( Xylaria  warbugii )  di Sumatera dan Strategi Pengendaliannya. Perspektif ,  Vol.
16 No. 2, 122-133 p.