## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI AKTIF TERSTANDAR
FLAVONOID DARI DAUN BELIMBING WULUH ( Averrhoa bilimbi L.)
ANTIBACTERIAL ACTIVITY ASSAY OF STANDARDIZED ACTIVE FRACTION FROM BELIMBING WULUH LEAF ( Averrhoa Bilimbi L.)

## Dyah Aryantini, Fita Sari, Juleha
Info Artikel Abstrak Sejarah Artikel: Diterima: 02 November 2017 Disetujui 15 Desember 2017 Dipublikasikan 16 Desember 2017
Latar  belakang: Daun  belimbing  wuluh  memiliki  potensi  besar  sebagai  obat tradisional,  diantaranya  sebagai  antiradang,  antibatuk,  antihipertensi,  mengobati ulkus  lambung  dan  antiinfeksi. Tujuan: Menguji  aktivitas  dari  fraksi  terstandar marker  flavonoid  (rutin)  yang  aktif  menghambat  bakteri Staphyllococcus aureus . Metode: Daun  belimbing  wuluh  diekstrak  dengan  metode  maserasi menggunakan pelarut etanol 70%, fraksinasi ekstrak kental menggunakan metode ekstraksi cair-cair dengan corong pisah. Aktivitas antibakteri diuji dengan sampel fraksi  semipolar  dengan  konsentrasi  10%,  7,5%  dan  5% . Uji  kualitatif  KLT terhadap  sampel  fraksi  dengan  pembanding    rutin  sebagai  marker  golongan flavonoid  untuk  mengkonfirmasi  keberadaan  senyawa  golongan  flavonoid  dalam fraksi. Hasil: Fraksi  semi  polar  menunjukkan  aktivitas  dalam  menghambat pertumbuhan S.  aureus dengan  zona  hambat  terbesar  11  mm  pada  konsentrasi fraksi 10%. Pola kromatogram dari fraksi aktif menunjukkan adanya noda pada Rf yang sama dengan standar rutin Simpulan dan saran: Fraksi semi polar terstandar rutin  memiliki  aktivitas    menghambat  pertumbuhan S.  aureus pada  konsentrasi 10%, 7,5% dan 5%. Perlu identifikasi dan karakterisasi lebih lanjut senyawa yang muncul dalam pemisahan KLT Kata Kunci: Fraksi belimbing wuluh, antibakteri
belimbing wuluh, fraksi terstandar,

## Keywords:
Belimbing wuluh fraction, belimbing wuluh antibacterial, standard fraction

## Abstract
Background: Leaf  belimbing  wuluh  has  great  potential  as  a  traditional medicine. Such as anti-inflammatory,antitussive, antihypertensive, treat  gastric ulcers, and antiinfection. Objectives : Examine the activity of a standard active fraction  with  a  flavonoid  marker  (rutin)  against  Staphyllococcus  aureus. Methods: Leaf  belimbing  wuluh  extracted  with  maseration  method  using  70% ethanol  as  solvent  and  then  fractination  of  extract  was  using  liquid-liquid extraction  with  separation  funnel.  Antibacterial  activity  was  tested  with  semi polar  fraction  samples  concentration  of    10%,  7,5%  and  5%.  The  TLC qualitative  test  with  rutin  as  a  standard  of  flavonoid  group  marker  to  confirm the presence of flavonoid compounds in the active fraction. Results: .Semi-polar fraction showed activity in  inhibiting  S. aureus growth  with the largest  11 mm inhibit  zone  at  10%  fraction  concentration.  The  chromatogram  pattern  of  the active fraction shows a stain on the Rf equal to the standard rutine
Conclusions  and  suggestions: A  standard  semi-polar  fraction  has  activity inhibiting  S.  aureus  growth  at  concentrations  of  10%,  7.5%  and  5%.  Need further  identification  and  characterization  of  the  compounds  that  appear  in separation of TLC
Dyah Aryantini | Judul artikel 4 kata di awal judul….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 2 Tahun 2017

## PENDAHULUAN
Hingga  saat  ini  penyakit  infeksi  masih  mendominasi  dan  menjadi  penyebab  beberapa penyakit  yang  menjangkiti  khususnya  daerah  tropis.  Pemahaman  masyarakat  mengenai  terapi penggunaan obat, efek samping penggunaan obat menggiring mereka untuk menggunakan obat yang  berasal  dari  herbal  sebagai  alternatif  dari  terapi  pengobatan.  Penelusuran  senyawa  aktif dalam ekstrak tanaman yang memiliki efek sebagai antibakteri penyebab penyakit infeksi terus digali.  Diantara  jutaan  diversitas  tumbuhan  berkhasiat  obat  di  Indonesia,  tanaman    belimbing wuluh menjadi salah satu sumber dari senyawa-senyawa aktif yang memiliki efek farmakologi.
Hampir seluruh bagian tanaman belimbing wuluh telah dimanfaatkan secara tradisional sebagai  obat  antihipertensi,  antibatuk,  antiradang,  antiinflamasi,  antijerawat,  astringensia (Kumar et.al ,  2013).  Ekstrak  daun  belimbing  wuluh  mengandung  senyawa  golongan  tannin, flavonoid  dan  triterpen  yang  memiliki  aktivitas  farmakologi  bagi  manusia.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  fraksi  aktif  terstandar  flavonoid  yang  mampu  menghambat pertumbuhan Staphyllococcus aureus .
Penelitian  ini  diharapkan  dapat  memberikan  informasi  ilmiah  tentang  aktivitas antibakteri  fraksi  daun  belimbing  wuluh  terstandar  flavonoid  dengan  tujuan  sebagai pertimbangan  pada  pembuatan  produk  obat  herbal  terstandar  berbahan  dasar  fraksi  daun belimbing wuluh (Hernani et.al ., 2009).

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat
Etanol  70%  teknis,  Aquadest  bratachem,  n-Heksana  teknis,  Etilasetat  teknis  dan  pro analisis, Rutin (Merck), Silica Gel GF254, Tetrasiklin, Asam asetat glasial, Asam Sulfat pekat, HCl  pekat,  Serbuk  Mg,  Pereaksi  Mayer,  Wagner,  Dragendorf,  Lieberman  Bucard,  FeCl 3 , Aseton  pro  analisis,  Uap  ammonia,  Suspensi  McFarland,  NaCl  Fisiologis,  Nutrient  Agar (Oxoid),  Nutrient  Broth  (Oxoid),  MHA  (Oxoid).  Simplisia  daun  belimbing  wuluh  dari  Pare Kabupaten Kediri.
Perangkat  KLT,  Corong  pisah,  Rotavapor,  Cawan  penguap,  Plate,  Tabung  reaksi, Bunsen.

## Prosedur Kerja

## 1. Prosedur Penyiapan Sampel
Daun  belimbing  wuluh  diperoleh  dari  daerah  Pare  dan  diterminasi  di  MMI  Batu Malang.  Metode  pembuatan  ekstrak  dengan  maserasi  selama  3  hari  menggunakan pelarut etanol 70% dan  remaserasi selama 2 hari.  Fraksinasi dilakukan dengan prinsip ekstraksi cair-cair menggunakan corong pisah. Sepuluh gram ekstrak kental dilarutkan dalam  100  mL  etanol  70%  dimasukkan  dalam  corong  pisah  dengan  penambahan  n- heksan  (1:1)  untuk  menarik  senyawa  non  polar.  Dua  lapisan  yang  berbeda  kepolaran dipisahkan,  kemudian  lapisan  etanol  ditambahkan  etil  asetat  (1:1)  untuk  memisahkan senyawa  semi  polar  dan  senyawa  polar  pada.  Fraksi  polar  dan  semi  polar  dipisahkan dan diuapkan hingga pekat
2. Prosedur  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  dan  Fraksi  Semi  Polar  Daun  Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)
Skrining  golongan  senyawa  flavonoid  dengan  cara  tambahkan  serbuk  Mg  dan  1  mL HCl  pekat  pada  sampel  kemudian  dikocok.  Hasil  postif  akan  menunjukkan  warna merah, jingga atau ungu (Markam, 1998).
Skrining golongan senyawa saponin dengan cara menambahkan HCl 2N sebanyak 5 mL  pada  sampel.  Larutan  didinginkan  kemudian  dikocok,  hasil  positif  ditunjukkan dengan timbulnya busa konstan selama 30 detik. Skrining golongan senyawa alkaloid dengan cara menambahkan HCl 2N sebanyak 5 mL  pada  sampel,  kemudian  dilakukan  uji  dengan  reagen  Mayer,  Wagner,  dan
Dyah Aryantini | Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi….. Jurnal Wiyata, Vol. ... No. ... Tahun ...
Dragendorf.  Hasil  positif  menunjukkan  endapan  putih  dengan  pereaksi  Mayer,  warna coklat muda dengan pereaksi Wagner, warna merah jingga dengan pereaksi Dragendorf. Skrining golongan senyawa tannin dengan cara 1 mL sampel dimasukkan ke dalam tabung reaksi dengan 10 mL aquadest kemudian disaring dan diteteskan 2-3 tetes FeCl 3. Hasil positif menunjukkan perubahan warna menjadi hijau kehitaman. Skrining  golongan  senyawa  triterpenoid  dengan  menambahkan  3  tetes  reagen Lieberman-Buchard.  Hasil  positif  akan  menunjukkan  warna  merah  atau  ungu  pada larutan sampel.
3. Prosedur Uji Bebas Etanol Terhadap Fraksi Etil Asetat (semi polar)
Dengan  cara  memasukkan  sejumlah  kecil  masing-masing  fraksi  dalam  tabung  reaksi yang  berbeda  dengan  penambahan  1  mL  asam  asetat  glasial  dan  1  mL  asam  sulfat pekat,  homogenkan  kemudian  panaskan,  bagian  atas  tabung  ditutup  kapas.  Jika  tidak berbau etanol maka positif bebas etanol.
4. Prosedur Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat (semi polar) Pengujianaktivitas  antibakteri  terhadap S.  aureus dimulai  dengan  sterilisasi  alat  yang digunakan dan  pembuatan media Muller Hilton Agar sebagaimedia uji.
Pembuatan  suspensi  bakteri  dengan  cara  kulturisasi  koloni  bakteri  dalam  5  mL Nutrient  Broth diinkubasi  1x24  jam  suhu    37 0 C  dan  dibandingkan  dengan  kekeruhan standar McFarland skala 0,5.
Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi cakram ( Kierby Bauer ) dengan membuat  larutan  uji  pada  konsentrasi  10%,  7,5%  dan  5%.  Konsentrasi  10%  b/v diperoleh  dengan  menimbang  100  mg  sampel  fraksi  dilarutkan  dengan  1  mL  aquadest steril, konsentrasi 7,5% b/v dengan menimbang 75 mg sampel dilarutkan dengan 1 mL aquadest  steril,  konsentrasi  5%  b/v  diperoleh  dengan  menimbang  50  mg  dilarutkan dengan 1 mL aquadest steril. Pengujian dibuat dengan 3 replikasi.
Disk direndam  selama  15  menit  pada  seri  konsentrasi  sampel  dan  ditempelkan  pada media  uji  MHA  bersama disk kontrol  positif  tetrasiklin  dan  kontrol  negatif  aquadest steril.  Selanjutnya  plate  uji  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C.  Zona  bening yang terbentuk diukur menggunakan mistar atau jangka sorong.
5. Prosedur Uji Kualitatif Fraksi Terstandar Flavonoid Dengan Metode  KLT Pengujian  secara  kualitatif  dimaksudkan  untuk  mengkonfirmasi  keberadaan  golongan senyawa  flavonoid  yang  diduga  merupakan  senyawa  yang  memberikan  aktivitas antibakteri.
Sampel fraksi yang sudah dilarutkan ditotolkan dalam fase diam  plat KLT GF 254 aktif  dengan  pembanding  rutin  dan  dikembangkan  pada  fase  gerak  butanol:asam asetat:air (4:1:5).
Hasil positif menunjukkan pemisahan yang sempurna dan bercak yang muncul pada Rf  yang  sama  dengan  Rf marker pembanding,  pengamatan  secara  visual,  di  bawah lampu  UV  254  nm  dan  366  nm.  Selanjutnya  uji  kualitatif  terhadap  golongan  senyawa flavonoid  dilanjutkan  dengan  memberikan  uap  ammonia  pada  plat  dan  mengamati perubahan warna yang terjadi.
6. Analisa Data
Pengaruh  pemberian  fraksi  etil  asetat  sebagai  anti  bakteri  terhadap Staphyllococcus aureus diuji  dengan  analisa  parametric  One  Way  Anova  untuk  mengetahui  perbedaan antara kelompok perlakuan dan kontrol (Notoadmojo, 2010)

## HASIL PENELITIAN
1. Hasil Fraksinasi Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.)
Serbuk  simplisia  sebanyak  200  gram  yang  disari  dengan  1600  mL  etanol  70%  dengan metode  maserasi  dan  proses  remaserasi  untuk  memperbanyak  sari  terlarut  menghasilkan ekstrak kental dengan rendemen 16,83% b/b.
Dyah Aryantini | Judul artikel 4 kata di awal judul….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 2 Tahun 2017
Fraksinasi dengan metode ekstraksi cair-cair mengasilkan 2 fraksi yaitu fraksi terlarut dalam etil asetat  dan  fraksi  yang  tak  larut.    Fraksi  etil  asetat  (lapisan  semi  polar)  yang  diduga mengandung  golongan  senyawa  flavonoid  dan  senyawa-senyawa  antibakteri  dipisahkan kemudian diuapkan hingga mengental dan dilakukan skrining fitokimia.
2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrakdan Fraksi Semi Polar Daun Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)
Hasil  penapisan  golongan  senyawa  kimia  pada  ekstrak  daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi L.) dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia ekstrak daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) Kand ungan kimia Pengujian Hasil (+) literatur Hasil pengujian Ket Flavonoid + serbuk Mg + HCl pekat 1 ml Terbentuk warna orange, merah atau kuning. Warna jingga kemerahan Positif  (+) Flavonoid Saponin + aquadest, dipanaskan lalu di kocok Terbentuk busa Terbentuk busa Positif (+) Saponin Alkaloid + HCl 2N + pereaksi Mayer, Wagner dan Dragendroff Terbentuk endapan putih, coklat muda dan jingga Terbentuk endapan putih, coklat muda dan jingga Positif (+) Alkaloid Tanin + 10 ml aquadest lalu disaring + FeCl 3 1% Terbentuknya warna biru tua  atau hitam menunjukkan adanya tannin Terbentuk hijau kehitaman Positif (+) Tanin
Hasil penapisan golongan senyawa kimia pada fraksi semi polar daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil skrining fitokimia fraksi daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) Kandungan kimia Pengujian Hasil (+) literature Hasil pengujian Ket Flavonoid + serbuk Mg + HCl pekat 1 ml Terbentuk warna orange, merah atau kuning. Warna jingga kemerahan Positif  (+) Flavonoid Saponin + aquadest, dipanaskan lalu di kocok Terbentuk busa Terbentuk busa Positif (+) Saponin Alkaloid + HCl 2N + pereaksi Mayer, Wagner dan Dragendroff Terbentuk endapan putih, coklat muda dan jingga Terbentuk endapan putih, coklat muda dan jingga Positif (+) Alkaloid Tanin + 10 ml aquadest lalu disaring + FeCl 3 1% Terbentuknya warna biru tua atau  hitam menunjukkan adanya tanin . Terbentuk hijau kehitaman Positif (+) Tanin
Dyah Aryantini | Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi….. Jurnal Wiyata, Vol. ... No. ... Tahun ...
Triterpenoid + 3 tetes pereaksi Liberman- Burchard Terbentuk warna merah atau ungu Terbentuk warna merah atau ungu Positif (+) Triterpenoid 3. Hasil Uji Bebas Etanol Fraksi Etil Asetat (semi polar)
Hasil  uji  bebas  etanol  fraksi  semi  polar  daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.) menunjukkan tidak adanya bau ester pada sampel.
4. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat (semi polar) Uji  aktivitas  antibakteri  fraksi  semi  polar  terhadap  bakteri  Staphyllococcus  aureus ditunjukkan pada gambar 1

## R1

## R2                                      R3
Gambar 1. Uji aktivitas fraksi semi polar terhadap bakteri S. aureus dengan metode difusi cakram
Hasil pengukuran zona hambat fraksi etil asetat (semi polar) terhadap bakteri Staphyllococcus aureus ditunjukkan pada grafik 1.
Grafik 1. Aktivitas Antibakteri Fraksi Semi Polar Daun Belimbing Wuluh

## 5. Hasil Uji Kualitatif Fraksi Terstandar Flavonoid (Rutin) Dengan Metode KLT
Bercak  dan  pemisahan  senyawa  yang  terbentuk  pada  uji  kualitatif  secara  KLT  dari  sampel fraksi semi polar terhadap marker flavonoid (rutin) ditunjukkan pada gambar 2.
Dyah Aryantini | Judul artikel 4 kata di awal judul….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 2 Tahun 2017
Gambar 2. Hasil Uji Kualitatif  KLT Fraksi Semi Polar Terhadap Standar Flavonoid (Rutin) Keterangan gambar: Fase Diam: Plat KLT GF 254 Fase Gerak : BAA (4:1:5) Gambar 2.A: plat KLT diamati secara visual Gambar 2.B : plat KLT diamati di bawah lampu UV 254 nm Gambar 2.C: plat KLT diamati di bawah lampu UV 36 nm Gambar 2.D: plat KLT direaksikan dengan uap ammonia (visual)

## 6. Hasil Analisa Data
Hasil  uji  anova  menunjukkan  bahwa  kelima  perlakuan  pada  uji  aktivitas  antibakteri terdapat  perbedaan  yang  bermakna  karena  nilai  probability  menunjukkan  bahwa  nilai  p <0,05 yaitu sebesar 0,035.

## PEMBAHASAN
Metode maserasi dalam penelitian ini digunakan karena metode tersebut relatif mampu menarik senyawa aktif yang berada dalam sel simplisia dalam jumlah yang besar  karena waktu kontak  yang  panjang  dengan  pelarut,  aman  untuk  senyawa  yang  labil  dan  tidak  tahan pemanasan  (BPOMRI,  2012).  Penggunaan  pelarut  etanol  70%  karena  bersifat  universal sehingga  kemungkinan  dapat  menarik  semua  jenis  golongan  senyawa,  mudah  didapat  dan bersifat  semipolar  (Rahmi,  2015).  Etanol  juga  efektif  menghambat  pertumbuhan  kapang  dan kuman, etanol juga mampu bercampur dengan air pada berbagai perbandingan (Pasaribu, 2013). Fraksinasi terhadap ekstrak daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) dengan metode partisi ekstraksi cair-cair menggunakan corong pisah. Penggunaan pelarut n-heksana diharapkan dapat menarik senyawa non polar dan zat pengganggu lainnya, lapisan yang taklarut n-heksan kembali dipisahkan dengan pelarut  etil asetat.  Fraksi  semi polar inilah  yang dipisahkan dan dipekatkan dengan  dugaan  bahwa  pada  fraksi  tersebut  kemungkinan  berkumpul  senyawa  yang  aktif menghambat  pertumbuhan  bakteri,  diantaranya S.  aureus (Wulandari  dkk,  2017) . Menurut Anggraini,  2016  ekstrak  daun  belimbing  wuluh  mengandung  senyawa  flavonoid,  saponin, tannin,  alkaloid,  dan  triterpen.  Dalam  ekstrak  maupun  fraksi  daun  belimbing  wuluh  pada penelitian  ini  mengandiung  senyawa  metabolit  yang  sama  yaitu  flavonoid,  saponin,  tannin, alkaloid dan triterpen.
Pengujian  aktivitas  antibakteri  yang  diawali  dengan  uji  bebas  etanol  terhadap  sampel dimaksudkan untuk memastikan bahwa sampel terbebas dari etanol sehingga tidak berpengaruh pada aktivitas antibakteri yang dimiliki senyawa dalam sampel. Sampel fraksi etil asetat diduga mengandung  senyawa  antibakteri  dibandingkan  dengan  fraksi  polar  dan  non  polar  (Abraham, 2016). Aktivitas fraksi  semipolar pada konsentrasi 10% v/v menunjukkan aktivitas terkuat, hal ini  membuktikan  bahwa  semakin  meningkatnya  konsentrasi  fraksi  maka  meningkat  pula aktivitas  (Kumar et.al , 2013). Berdasarkan penggolongan  antibakteri berdasar zona hambatnya menunjukkan bahwa pada konsentrasi 10% termasuk antibakteri kuat ( zona hambat 10-20 mm).
Dyah Aryantini | Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi….. Jurnal Wiyata, Vol. ... No. ... Tahun ...
Diduga  senyawa  metabolit  dalam  fraksi  tersebut  yaitu  alkaloid,  tannin,  flavonoid  dan  triterpen memiliki aktivitas antibakteri. Flavonoid mampu menyebabkan kerusakan permeabilitas dinding sel  bakteri,  mikrosom,  dan  lisosom  (Dima,  2016).  Oleh  karena  itu  untuk  mengkonfirmasi keberadaan golongan senyawa flavonoid yang terkandung dalam fraksi tersebut dilakukan KLT dengan  pembanding  rutin.  Hasil  positif  terlihat  pada  pemisahan  golongan  senyawa  dengan metode  KLT  menggunakan  fase  gerak  yang  polar  yaitu  BAA  (4:1:5).  Pada  gambar2    terlihat rutin  (marker)  yang  sejajar  dengan  senyawa  dalam  fraksi  semi  polar  tersebut  pada  Rf  0,55. Kandungan  rutin  dalam  fraksi  tersebut  dapat  pula  menjadi  acuan  untuk  penelitian  lebih  lanjut terkait  dengan  aktivitas  rutin  secara  farmakologis  yang  sekaligus  menjadi  salah  satu  alternatif pengembangan produk herbal terstandar.

## SIMPULAN
Fraksi  semi  polar  terstandar  flavonoid  (rutin)  aktif  menghambat  pertumbuhan Staphyllococcus aureus pada konsentrasi 5% v/v, 7,5% v/v dan 5% v/v

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk identifikasi dan karakterisasi senyawa lain yang terlihat dalam pemisahan KLT. Serta perlunya isolasi senyawa-senyawa aktif dalam fraksi tersebut untuk optimalisasi efek farmakologi.

## REFERENSI
Abraham,  C.  Merin.  2016.  Antibacterial  Effects  Of Averrhoa  bilimbi L.  Fruit  Extracts. International  Research  Jounal  Of  Biological  Sciences .  Vol.  5(8).  Agustus  2016. E-ISSN 2278-3202
Badan  Pengawasan  Obat  Makanan  Republik  Indonesia.  2012. Pedoman  Teknologi  Formulasi Sediaan  Berbasis  Ekstrak .  Jakarta:  Badan  Pengawasan  Obat  Makanan  Republik Indonesia
Dima,  Lusi,  L.R.H.,  Fatimawali.,  Widya,  Astuty,  L.  2016. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Daun  Kelor  (Moringa  Oleifera  L.)  Terhadap  Bakteri  Escherichia  Coli DanStaphylococcus  Aureus .  Jurnal  Ilmiah  Farmasi  UNSRAT.  Vol.  5  No.  2  Mei 2016 ISSN: 2302-2493.
Hernani.,  Winarti,  C.,  Marwati,  T.2009. Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Daun  Belimbing  Wuluh Terhadap  Penurunan  Tekanan  Darah  Pada  Hewan  Uji .  Jurnal  Pascapanen .  Vol 6(1). 2009. Halaman: 54-61
Kumar, K. Ashok, Gousia, S.K., M., Anupama dan Latha, J. Naveena Lavanya. 2013. A Review On  Phytochemical  Constituents  And  Biological  Assays  Of  Averrhoa  Bilimbi . International  Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Science  Research 2013; 3(4): 136-139 ISSN: 2249-0337.
Markham,  K.R.  1998. Cara  Pengidentifikasi  Flavonoid .  Diterjemahkan  oleh  Kosasih Padmawinata. Bandung : ITB Press.
Pasaribu, Sabar P., Wahidatul Nuriah dan Erwin. 2013. Uji Toksisitas Dan Aktivitas Antibakteri Berbagai  Ekstrak  Daun  Tanaman  Kamboja  (Plumeria  acuminate  Ait. ) . Jurnal KimiaMulawarman . Vol 10(2). Mei 2013. ISSN: 1693-5616
Dyah Aryantini | Judul artikel 4 kata di awal judul….. Jurnal Wiyata, Vol. 4 No. 2 Tahun 2017
Rahmi, Anggita, H., Tri, Cahyanto., Toni, Sujarwo., Rahayu, Indri, Lestari. 2015.  Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Daun  Beluntas (  Pluchea  Indica (L.)  Less.  )  Terhadap Propionibacterium  Acnes  PenyebabJerawat. Jurnal  Kajian  Islam,  Sains  dan Teknologi. Edisi Juni 2015 Volume  10(1). Juni 2015.ISSN: 1979-8911.
Saputra,  O.,  Anggraini,  N.Khasiat  Belimbing  Wuluh  (Averrhoa  bilimbi  L.)  terhadap Penyembuhan Acne Vulgaris . Majority. Volume 5 (1). Februari 2016
Wulandari,  N.  Dyah  Ayu.,  Yuliawati,  K.  Mulkiya.,  Kodir,  R.  Abdul.2016.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Buah  Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)Terhadap Propionibacterium  acnes Menggunakan  Metode  Bioautografi . Prosiding Farmasi . Gelombang 2. 2016. ISSN: 2460-6472