Sheilla  Rachmania,  Rosita  Dewi,  Dina  Helianti,  Ayu  Munawaroh  (2022)  Ekstrak  Etanol  Kulit  Bawang Merah ( Allium Cepa L.) Menurunkan Kadar Advanced Oxidation Protein Product (Aopp) Plasma Pada Tikus Wistar Terpapar Diazinon, Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia, (7) 10 , E-ISSN: 2548-1398 Published by: Ridwan Institute
Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia p–ISSN: 2541-0849 e- ISSN: 2548-1398 Vol. 7, No. 10, Oktober 2022
EKSTRAK  ETANOL  KULIT  BAWANG  MERAH  ( ALLIUM  CEPA L.) MENURUNKAN  KADAR ADVANCED  OXIDATION  PROTEIN  PRODUCT
(AOPP) PLASMA PADA TIKUS WISTAR TERPAPAR DIAZINON
Sheilla Rachmania, Rosita Dewi, Dina Helianti, Ayu Munawaroh Histology Department, Faculty of Medicine, University of Jember, Indonesia Email: sheilla.dr.fk@unej.ac.id, rosita.fk@unej.ac.id, dina_helianti@yahoo.co.id, ayu.fk@unej.ac.id

## Abstrak
Penggunaan  diazinon  secara  ekstensif  menimbulkan  dampak  buruk  terutama  bagi pekerja di bidang agroindustri. Efek karsinogenik dan toksik diazinon pada organ terjadi melalui jalur stres oksidatif. Flavonoid kuersetin yang terkandung dalam kulit bawang merah ( Allium cepa L.) dapat menetralisir kondisi stres oksidatif, terlebih turunan kuersetin, 2-(3,4-dihydroxybenzoyl)-2,4,6-trihydroxy-3(2H)-benzofuranone (BZF), mempunyai efek antioksidan jauh lebih tinggi dibandingkan kuersetin. Studi ini  bertujuan  mengetahui  efek  antioksidan  ekstrak  etanol  kulit  bawang  merah (EKBM)  terhadap  stres  oksidatif  pada  tikus  Wistar  terpapar  diazinon  melalui pengukuran kadar AOPP plasma dan memprediksi target protein BZF. Sebanyak 25 ekor tikus Wistar jantan dibagi dalam kelompok normal, kontrol, dan tiga kelompok perlakuan.  Diazinon  per  oral  diberikan  dengan  dosis  40  mg/kgBB  pada  7  hari pertama, dilanjutkan EKBM dengan dosis 600, 900, dan 1200 mg/kgBB pada 7 hari berikutnya. Kadar AOPP plasma diukur dengan metode kolorimetri Witko-Sarsat. Analisis  karakterisasi  BZF  dilakukan  dengan  pendekatan  bioinformatika Swiss Target Prediction . Kadar AOPP pada ketiga kelompok perlakuan secara signifikan lebih rendah dibandingkan kelompok normal (p<0,05) dan antara dosis 600 mg/kg BB  dan  900  mg/kgBB  menunjukkan  perbedaan  tidak  bermakna  (p>0,05). Karakterisasi BZF menghasilkan prediksi target protein, yaitu pada Kanal Potasium Kv1.3 (skor probabilitas >0,65) yang berperan dalam proses inhibisi reaksi oksidasi protein. Sebagai kesimpulan, pada penelitian ini EKBM dengan dosis 600 mg/kgBB paling  efektif  untuk  menetralisir  stres  oksidatif  akibat  paparan  diazinon  yang ditunjukkan dengan penurunan kadar AOPP plasma. BZF diprediksi memiliki target protein dengan probabilitas tertinggi, yaitu pada Kanal Potasium Kv1.3.
Kata Kunci : diazinon, bawang merah, AOPP, antioksidan

## Abstract
The extensive use of diazinon has a negative impact, especially for workers in the agro-industry  sector.  Carcinogenic  and  toxic  effects  of  diazinon  on  organs  occur through oxidative stress pathways. The flavonoid quercetin contained in the skin of shallots  (Allium  cepa  L.)  can  neutralize  oxidative  stress  conditions,  especially quercetin derivatives, 2-(3,4-dihydroxybenzoyl)-2,4,6-trihydroxy-3(2H)-
Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah ( Allium Cepa L.) Menurunkan Kadar Advanced Oxidation Protein Product (AOPP) Plasma Pada Tikus Wistar Terpapar Diazinon
benzofuranone  (BZF)),  has  a  much  higher  antioxidant  effect  than  quercetin.  This study aims to determine the antioxidant effect of ethanolic onion peel extract (ECBM) on oxidative stress in Wistar rats exposed to diazinon by measuring plasma AOPP levels and predicting BZF protein targets. A total of 25 male Wistar rats were divided into normal, control, and three treatment groups. Diazinon orally was given at a dose of 40 mg/kgBW for the first 7 days, followed by EKBM at a dose of 600, 900, and 1200 mg/kgBW for the next 7 days. Plasma AOPP levels were measured by the Witko- Sarsat colorimetric method. BZF characterization analysis was carried out using the Swiss Target Prediction bioinformatics approach. AOPP levels in the three treatment groups were significantly lower than the normal group (p<0.05) and between doses of  600  mg/kg  body  weight  and  900  mg/kg  body  weight  showed  no  significant difference (p>0.05). The characterization of BZF resulted in the prediction of protein targets,  namely  the  Kv1.3  Potassium  Channel  (probability  score  >0.65)  which played a role in the inhibition of protein oxidation reactions. In conclusion, in this study EKBM with a dose of 600 mg/kgBW was the most effective for neutralizing oxidative stress due to exposure to diazinon as indicated by a decrease in plasma AOPP levels. BZF is predicted to have a protein target with the highest probability, namely the Kv1.3 Potassium Channel.
Keywords: diazinon, bawang merah, AOPP, antioksidan

## Pendahuluan
Selama ratusan tahun, manusia telah menggantungkan kebutuhan pangan dunia melalui  industri  pertanian.  Kemajuan  dunia  agrikultur  melalui  penggunaan  pestisida untuk  meningkatkan  perlindungan  terhadap  produk  pertanian,  kuantitas,  kualitas,  dan preservasi makanan menambah frekuensi dan jumlah penggunaan pestisida di berbagai sektor agroindustri sehingga memperluas resiko pajanan pestisida terutama pada pekerja di  bidang  agroindustri  (Dalmolin  et  al.,  2020a;  Singleton  et  al.,  2015). World  Health Organization (WHO)  memperkirakan  bahwa  70%  kasus  intoksikasi  pestisida  terjadi akibat pajanan okupasi dan telah menyebabkan berbagai morbiditas dan mortalitas bagi pekerja agroindustri setiap tahunnya (World Health Organization, 2018).
Di  Indonesia,  berbagai  jenis  pestisida  digunakan  dalam  skala  besar  meskipun laporan  mengenai  dampak  buruknya  terhadap  lingkungan  dan  pekerja  telah  banyak dilaporkan (Mariyono et al., 2018). Berdasarkan hasil analisis residu pestisida di tanah dan produk hasil pertanian, jenis pestisida organofosfat diazinon masih menjadi pestisida yang banyak digunakan meski penggunaannya telah dilarang di beberapa negara karena dapat mencemari lingkungan serta menyebabkan kerusakan ginjal, hati dan karsinoma (Guyton et al., 2015; Indratin et al., 2020). Berbagai studi menunjukkan dampak diazinon terhadap  kerusakan  ginjal  dan  hati  melalui  mekanisme  terbentuknya  stres  oksidatif (Hadichegeni et al., 2018; Kunti Sri Panca Dewi et al., 2018; Rahima et al., 2022).
Salah satu upaya untuk menetralisir efek stres oksidatif pada jaringan tubuh adalah melalui  penggunaan  senyawa  antioksidan.  Salah  satu  antioksidan  yang  banyak dieksplorasi  karena  potensi  dan  jumlahnya  adalah  flavonoid  kuersetin.  Senyawa  ini
banyak ditemukan pada bahan alam, dan studi yang dilakukan pada lima tahun terakhir banyak menunjukkan potensi kuersetin yang terkandung di dalam kulit bawang merah ( Allium cepa L.) (Ajibade et al., 2016; Fuentes et al., 2020a; Lusi et al., 2017; Park et al., 2018; Rahayu et al., 2015; Rahima et al., 2022b). Pengujian lebih lanjut menunjukkan bahwa  kuersetin  pada  kulit  bawang  merah  mengalami  proses  oksidasi  alami  sehingga menghasilkan  turunan  dari  kuersetin  yang  disebut  2-(3,4-dihydroxybenzoyl)-2,4,6- trihydroxy-3(2H)-benzofuranone  (BZF).  Senyawa  ini  dikenal  sebagai  senyawa  yang serba  guna  karena  berperan  sebagai scaffold dalam  pengembangan  berbagai  agen farmakologi (Farhat et al., 2022) dan diduga memiliki peranan penting dalam aktivitas antioksidan  yang  dihasilkan  kulit  bawang  merah  (Atala  et  al.,  2017a;  Fuentes  et  al., 2017a, 2020a). Pathway dan mekanisme kerja BZF yang ditemukan pada kulit bawang merah  masih  membutuhkan  eksplorasi,  salah  satunya  adalah  melalui  penentuan  target reseptor  dan  interaksinya  dengan  protein  lain  yang  berperan  dalam  mekanisme pembentukan stres oksidatif.  ….
Aktivitas  antioksidan  kulit  bawang  merah  bekerja  secara  langsung  dan  tidak langsung  melalui  mekanisme radical  scavenging dan  sintesis  enzim  antioksidan. Penurunan  kadar  produk  stres  oksidatif  salah  satunya  dapat  dideteksi  melalui  kadar advanced oxidative protein product (AOPP) yang merupakan hasil oksidasi protein oleh reactive oxygen species (ROS). AOPP merupakan parameter yang dapat dideteksi dengan metode sederhana dan memiliki waktu paruh yang panjang mencapai 19 hari sehingga dapat  digunakan  sebagai  penanda  stres  oksidatif.  Meskipun  demikian,  penggunaannya sebagai biomarker intoksikasi pestisida masih belum banyak dimanfaatkan (Dalmolin et al.,  2020a;  Gryszczyńska  et  al.,  2017).  Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui  efek antioksidan EKBM terhadap stres oksidatif pada tikus Wistar terpapar diazinon melalui pengukuran kadar AOPP plasma dan memprediksi target protein BZF.

## Metode Penelitian

## Pembuatan ekstrak etanol kulit bawang merah
Ekstrak  etanol  kulit  bawang  merah  diperoleh  dengan  mencuci  lapisan  terluar pertama dan kedua dari umbi bawang merah yang diperoleh dari limbah industri bawang goreng  di  Kecamatan  Silo,  Kabupaten  Jember.  Kulit  bawang  merah  yang  sudah dibersihkan dan dijemur kemudian dimaserasi dan dilarutkan dengan etanol 96%. Ekstrak yang  dihasilkan  diflitrasi  dengan  kertas  saring  sebanyak  tiga  kali,  kemudian  diuapkan menggunakan rotary evaporator dengan suhu 60 o C.

## Perlakuan hewan coba
Perlakuan  pada  hewan  coba  dimulai  dengan  aklimatisasi  25  ekor  tikus  Wistar jantan  berusia  2-3  bulan  yang  dibagi  secara  acak  dalam  lima  kelompok  (kelompok normal, kelompok kontrol diazinon, dan kelompok EKBM). Pada hari 1 sampai dengan 7,  kelompok  normal  diberikan  minyak  jagung  per  oral,  sedangkan  empat  kelompok lainnya diberikan diazinon 40 mg/kgBB per oral. Pada hari ke-8 sampai dengan hari ke- 14,  kelompok  normal  dan  kelompok  kontrol  diazinon  diberikan  DMSO  3%  per  oral, sedangkan  tiga  kelompok  perlakuan  mendapat  EKBM  600,  900,  dan  1200  mg/kgBB.
Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah ( Allium Cepa L.) Menurunkan Kadar Advanced Oxidation Protein Product (AOPP) Plasma Pada Tikus Wistar Terpapar Diazinon
Pada  hari  ke-15,  darah  diekstraksi  dan  diproses  untuk  memperoleh  plasma  yang  akan digunakan untuk pengukuran kadar AOPP. Seluruh prosedur yang dilakukan pada hewan coba telah disetujui oleh Komisi Etik Fakultas Kedokteran Universitas Jember dengan surat ijin etik No. 1463/H25.1.11/KE/2021.

## Pengukuran kadar AOPP plasma
Pengukuran kadar AOPP dilakukan dengan metode yang dilakukan oleh Witko- Sarsat et al. (Ronique Witko-Sarsat et al., 2003; Witko-Sarsat et al., 1996). Sampel darah diambil  dari  jantung  tikus  dan  ditampung  di  tabung  EDTA,  kemudian  disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit untuk mendapatkan plasma. Sebanyak 200 µl plasma ditambahkan 600 µl phosphate buffer saline (PBS) dan 100 µl KI kemudian diinkubasi selama 2 menit sebelum ditambahkan 200 µl asam asetat. Absorbansi diukur menggunakan  spektrofotometer  dengan  panjang  gelombang  340  nm.  Larutan  blanko dibuat dengan menggunakan 800 µl PBS dan 100 µl KI.

## Analisis statistik kadar AOPP plasma
Data rerata ± standard deviation kadar AOPP plasma setiap kelompok dianalisis secara  statistik  menggunakan One-Way ANOVA .  Untuk  mengetahui  perbedaan antarkelompok,  analisis  statistik  dilanjutkan  dengan  uji Least  Significant  Difference (LSD) post hoc test (multiple comparisons) .

## Prediksi target protein BZF
Prediksi  target  protein  BZF  dilakukan  menggunakan platform bioinformatika Swiss  Target  Prediction ( http://www.swisstargetprediction.ch/ ).  S implified  molecular- input  line-entry  system (SMILES)  dari  senyawa  BZF  dimasukkan  sesuai  dengan karakterisasi yang dilakukan oleh Fuentes et al (Fuentes et al., 2020a) untuk menentukan probabilitas target proteinnya.

## Hasil dan Pembahasan Hasil Penelitian
Berdasarkan uji normalitas dan homogenitas, didapatkan nilai p>0,05 sehingga disimpulkan data terdistribusi normal dan varian data homogen (p=0,234). Hasil nilai p pada uji One-Way ANOVA adalah 0,000 (p<0,05), yang berarti bahwa terdapat perbedaan yang  signifikan  antarkelompok.  Kadar  AOPP  plasma  pada  seluruh  kelompok  tikus disajikan pada Gambar 1. Kelompok diazinon yang diberikan diazinon pada hari ke-1 sampai dengan hari ke-7 menunjukkan kadar AOPP lebih tinggi (0,372 µm/L ± 0,011) dibandingkan  kelompok  normal  (0,339  µm/L  ±  0,01)  (p<0,05).  Seluruh  kelompok perlakuan  yang  diberikan  EKBM  (P600,  P900,  dan  P1200)  pada  hari  ke  8-14 menunjukkan penurunan kadar AOPP (berturut-turut 0,286 µm/L ± 0,026; 0,274 µm/L ± 0,014, dan 0,2384 µm/L ± 0,0142) lebih rendah dibandingkan dengan kelompok normal (p<0,05).

## Gambar 1 Kadar AOPPs plasma tikus Wistar yang diinduksi diazinon
Uji post hoc (multiple comparisons) menggunakan LSD menunjukkan perbedaan yang signifikan antarkelompok (p 0,000), kecuali kelompok P600 dan P900 dengan nilai p sebesar 0,174.
Probabilitas target protein dari BZF pada kulit bawang merah berdasar pada hasil analisis bioinformatika menggunakan Swiss Target Prediction ditampilkan pada Tabel 1. Terdapat empat target protein yang memiliki skor probabilitas >0,65, yaitu KCNA3, KIT, FGR1, dan PSMB5. Target protein dengan skor di atas 0,65 menunjukkan bahwa protein tersebut  memiliki  indeks  similiaritas  di  atas  ambang  untuk  dapat  berikatan  dengan molekul BZF. Skor 1,0 merupakan skor maksimal yang menunjukkan bahwa molekul yang diuji identik dengan molekul bioaktif lain yang telah diketahui mampu berikatan dengan target protein.
Tabel 1 Probabilitas target protein dari BZF Target Common name Target Class Voltage-gated potassium channel subunit Kv1.3 KCNA3* Voltage-gated ion channel Stem cell growth factor receptor KIT* Kinase Fibroblast growth factor receptor 1 FGFR1* Kinase Proteasome Macropain subunit MB1 PSMB5* Protease Fucosyltransferase 5 FUT5 Enzyme NORMAL DIAZINON P600 P900 P1200
Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah ( Allium Cepa L.) Menurunkan Kadar Advanced Oxidation Protein Product (AOPP) Plasma Pada Tikus Wistar Terpapar Diazinon
CMP-N-acetylneuraminate-beta- galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 1 ST3GAL1 Transferase Beta-galactoside alpha-2,6- sialyltransferase 1 ST6GAL1 Transferase Matrix metalloproteinase 12 MMP12 Protease Metabotropic glutamate receptor 2 (by homology) GRM2 Family C G protein-coupled receptor Monoamine oxidase B MAOB Oxidoreductase Kallikrein 1 KLK1 Protease Kallikrein 2 KLK2 Protease Cyclooxygenase-1 PTGS1 Oxidoreductase Cyclooxygenase-2 PTGS2 Oxidoreductase
*)target  protein  dengan  indeks  similaritas  BZF  terhadap  molekul  bioaktif  yang  telah diketahui sebelumnya

## Pembahasan
Stres oksidatif merupakan kondisi yang terjadi akibat ketidakseimbangan antara oksidan  dan  antioksidan  yang  menyebabkan  terganggunya  proses redox dan  akhirnya mengakibatkan kerusakan selular. Stres oksidatif diketahui memainkan peranan penting dalam  berbagai  penyakit  yang  diakibatkan  oleh  proses  inflamasi  seperti  penyakit kardiovaskular,  hipertensi,  gagal  ginjal,  diabetes  mellitus,  dislipedemia,  dan  kanker (Gonçalves et al., 2021).
Salah satu biomarker stres oksidatif adalah AOPP, merupakan produk oksidasi protein  yang  mengandung  gugus  ditirosin,  pentosidin,  dan  karbonil.  Biomarker  ini pertama  kali  digunakan  untuk  mendeteksi  pasien  dengan  penyakit  ginjal  oleh  Witko- Sarsat et  al pada  tahun  1996.  Secara  kuantitatif,  AOPP  menunjukkan  intensitas  stres oksidatif  terkait  dengan  kemampuannya  dalam  menginduksi  sitokin  pro-inflammatori dan adhesive  molecules (Conti  et  al.,  2019).  Secara  struktur,  AOPP  analog  dengan biomarker stres oksidatif lain pada penyakit degeneratif, yaitu advanced glycation end- product (AGEs) yang memiliki reseptor sama dengan AOPP sehingga menunjukkan hasil uji  kimia  klinik  yang  sama  (Conti  et  al.,  2019).  AOPP  dapat  dideteksi  dalam  plasma dengan  jangka  waktu  yang  cukup  panjang  karena  waktu  paruhnya  mencapai  19  hari (Gryszczyńska et al., 2017).
Pada penelitian ini, kadar AOPP plasma pada kelompok diazinon menunjukkan peningkatan yang signifikan dibanding kelompok normal tanpa perlakuan (Uji post hoc LSD p<0,05). Hal ini menunjukkan adanya proses stres oksidatif yang diakibatkan oleh pemberian diazinon. Stres oksidatif akibat pestisida golongan organofosfat diazinon dapat terjadi akibat inhibisi dari asetilkolinesterase, blok kanal sodium dan potasium, ROS, dan disfungsi  fisiologi  selular  yang  kemudian  menyebabkan  perubahan  fungsi  vital  dan metabolisme dari sel. Semua proses tersebut pada akhirnya dapat menyebabkan kematian sel termasuk nekrosis selular dan apoptosis (Deyashi & Chakraborty, 2016). Pemberian diazinon  secara  oral  sebelumnya  dilaporkan  dapat  menginduksi  produksi  ROS  dalam kadar yang tinggi dan oksidasi makro-molekul selular seperti lipid, DNA, asam nukleat,
dan  protein  melalui  proses  reduksi  glutation.  Proses  ini  dapat  menyebabkan  inflamasi jaringan pada sistem vaskular, ginjal, dan saraf. Oksidasi makromolekul protein oleh ROS akan  menghasilkan  senyawa  AOPP  yang  dapat  dideteksi  pada  plasma  dan  jaringan, sehingga AOPP utamanya menunjukkan jumlah agregat protein yang rusak akibat stres oksidatif dan menunjukkan level stres oksidatif yang terjadi pada tubuh (Georgiadis et al., 2018). Keberadaan AOPP pada plasma juga disebutkan berkorelasi dengan aktivitas paraoxonase-1  (PON-1)  seperti arylesterase (AREase)  dan cytidine  monophosphatase (CMPase)  yang  merupakan  biomarker  intoksikasi  organofosfat  sehingga mengindikasikan bahwa kadar AOPP secara spesifik dapat digunakan sebagai biomarker baru  terhadap  kerusakan  oksidatif  pada  subjek  yang  terpapar  pestisida  organofosfat (Dalmolin et al., 2020b).
Seperti  yang  ditampilkan  pada  Gambar  1,  kadar  AOPP  pada  ketiga  kelompok perlakuan secara signifikan lebih rendah dibandingkan kelompok normal (p<0,05) dan antara kelompok P600 dan P900 menunjukkan perbedaan tidak bermakna (p>0,05). Hal ini mengindikasikan bahwa pemberian EKBM pada dua dosis tersebut memiliki kapasitas yang sama dalam menurunkan kadar AOPP plasma sehingga dosis 600 mg/kgBB sudah cukup untuk menetralisir stres oksidatif akibat paparan diazinon. Hal ini mengindikasikan adanya peranan flavonoid yang terkandung dalam EKBM sebagai senyawa antioksidan. Studi yang dilakukan oleh Rahima et al menunjukkan bahwa total flavonoid pada EKBM mencapai  228,1  mg  QE/g  (ekuivalen  dengan  kandungan  kuersetin),  sehingga  600 mg/kgBB EKBM ekuivalen dengan 136,86 mg QE/kgBB (Rahima et al., 2022a). Dosis kuersetin  60-2000  mg  disebutkan  sebagai range dosis  terapetik  kuersetin  yang  dapat memberikan efek antioksidan dalam terapi inflamasi hingga karsinoma (El-Saber Batiha et al., 2020).
Kuersetin  pada  kulit  bawang  merah  mencapai  3-5  kali  lipat  lebih  banyak dibanding  bagian  bulbus  dari  bawang  merah  (Škerget  et  al.,  2009).  Kuersetin  dapat menetralisir ROS dan oksidan yang terbentuk akibat paparan zat kimia seperti diazinon, baik secara langsung melalui mekanisme radical scavenging pada reaksi redox seperti hydrogen  atom  transfer  (HAT),  sequential  proton  loss  electron  transfer  (SPLET),  dan electron transfer-proton transfer (ET-PT) (Vásquez-Espinal et al., 2019), maupun secara tidak langsung melalui regulasi ekspresi gen yang mengatur proses eliminasi ROS dan atau  mensintesis  enzim-enzim  antioksidan  (Fuentes  et  al.,  2017b).  Kuersetin  dapat mengikat  ion  logam  seperti  Fe 2+ dan  Cu + yang  berperan  dalam  proses  terbentuknya radical hydroxyl dan superoxide sehingga secara simultan menekan pembentukan AOPP. Selain  itu,  kuersetin  dapat  menstimulasi glutation yang  berperan  dalam  memecah superoxide menjadi H 2 O dan O 2 (Oktaviyanti et al., 2016; Xu et al., 2019).
Peran  langsung  kuersetin  sebagai  antioksidan  secara in  vivo diragukan  karena rendahnya kadar kuersetin yang dideteksi pada plasma setelah konsumsi bahan makanan yang  kaya  akan  kuersetin.  Perlakuan  seperti  pemanasan  pada  bahan  makanan  yang mengandung  kuersetin  juga  dapat  menghilangkan  potensi  antioksidannya.  Studi  yang dilakukan  oleh  Fuentes et  al pada  tahun  2017  dan  2020  menunjukkan  bahwa  proses oksidasi alami pada kulit bawang merah menghasilkan turunan-turunan kuersetin dengan
Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah ( Allium Cepa L.) Menurunkan Kadar Advanced Oxidation Protein Product (AOPP) Plasma Pada Tikus Wistar Terpapar Diazinon
kapasitas  antioksidan  yang  justru  lebih  besar,  salah  satunya  adalah  2-(3,4- dihydroxybenzoyl)-  2,4,6-trihydroxy-  3(2H)-benzofuranone  (BZF).  BZF  hanya ditemukan pada bagian kulit dari kelompok bawang, hampir tidak ditemukan pada bagian bulbus.  Senyawa  ini  memiliki  aktivitas  antioksidan  200  kali  lipat  lebih  tinggi dibandingkan kuersetin (Atala et al., 2017; Fuentes et al., 2017, 2020).
…..  Struktur  kimia  BZF  yang  dianalisis  melalui platform bioinformatika SwissTargetPrediction  ( http://www.swisstargetprediction.ch/ )  yang  ditampilkan  pada Tabel  1  menunjukkan  probabilitas  target  protein  BZF  terhadap  molekul  bioaktif  yang telah  diketahui  sebelumnya.  Skor  prediksi  tertinggi  menunjukkan  probabilitas  ikatan antara  BZF  dengan  KCNA3,  yaitu voltage-gated  potassium  channel  subunit  Kv1.3 . Senyawa BZF diprediksi dapat memodulasi kanal Kv1.3 yang berperan secara langsung dalam pembentukan ROS (Deyashi & Chakraborty, 2016). Kanal Kv1.3 yang merupakan protein membran integral ini diekspresikan pada mitokondria sel limfosit T, makrofag, fibroblas,  platelet,  osteoklas,  mikroglia,  oligodendrosit,  dan  pada  jaringan  otak,  paru, pankreas,  timus,  limpa,  limfe  nodi,  dan  testis.  Mitokondria  merupakan  lokasi  utama produksi ROS sehingga modulasi kanal Kv1.3 mempengaruhi konsentrasi ROS dalam sel (Styles et al., 2021). Masih diperlukan penelitian lebih lanjut mengenai bentuk interaksi antara BZF dan kanal Kv1.3 dan efek yang ditimbulkan.

## Kesimpulan
EKBM dengan dosis efektif 600 mg/kgBB dapat menetralisir stres oksidatif akibat paparan  diazinon  yang  ditunjukkan  dengan  penurunan  kadar  AOPP  plasma.  BZF diprediksi  memiliki  target  protein  dengan  probabilitas  tertinggi,  yaitu  pada  Kanal Potasium Kv1.3.

## BIBLIOGRAFI
Ajibade, T. O., Oyagbemi, A. A., Omobowale, T. O., Asenuga, E. R., Afolabi, J. M., & Adedapo,  A.  A.  (2016).  Mitigation  of  diazinon-induced  cardiovascular  and  renal dysfunction  by  gallic  acid. Interdisciplinary  Toxicology , 9 (2),  66–77. https://doi.org/10.1515/intox-2016-0008
Atala, E., Fuentes, J., Wehrhahn, M. J., & Speisky, H. (2017a). Quercetin and related flavonoids  conserve  their  antioxidant  properties  despite  undergoing  chemical  or enzymatic oxidation. Food Chemistry , 234 , 479–485. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2017.05.023 Atala, E., Fuentes, J., Wehrhahn, M. J., & Speisky, H. (2017b). Quercetin and related flavonoids  conserve  their  antioxidant  properties  despite  undergoing  chemical  or enzymatic oxidation. Food Chemistry , 234 , 479–485.
https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2017.05.023
Conti, G., Caccamo, D., Siligato, R., Gembillo, G., Satta, E., Pazzano, D., Carucci, N.,
Carella, A., del Campo, G., Salvo, A., & Santoro, D. (2019). Association of higher advanced oxidation protein  products (AOPPs) levels in patients with diabetic  and hypertensive nephropathy. Medicina (Lithuania) , 55 (10). https://doi.org/10.3390/medicina55100675
Dalmolin, S. P., Dreon, D. B., Thiesen, F. V., & Dallegrave, E. (2020a). Biomarkers of occupational  exposure  to  pesticides:  Systematic  review  of  insecticides. Environmental Toxicology and Pharmacology , 75 .
https://doi.org/10.1016/j.etap.2019.103304
Dalmolin, S. P., Dreon, D. B., Thiesen, F. V., & Dallegrave, E. (2020b). Biomarkers of occupational  exposure  to  pesticides:  Systematic  review  of  insecticides.  In Environmental  Toxicology  and  Pharmacology (Vol.  75).  Elsevier  B.V. https://doi.org/10.1016/j.etap.2019.103304
Deyashi, M., & Chakraborty, S. B. (2016). Pesticide Induced Oxidative Stress and The Role of Antioxidant Defense System in Animal Body. Harvest , 2 (1), 1–14.
El-Saber Batiha, G., Beshbishy, A. M., Ikram, M., Mulla, Z. S., Abd El-Hack, M. E., Taha, A. E., Algammal, A. M., & Ali Elewa, Y. H. (2020). The pharmacological activity,  biochemical  properties,  and  pharmacokinetics  of  the  major  natural polyphenolic  flavonoid:  Quercetin.  In Foods (Vol.  9,  Issue  3).  MDPI Multidisciplinary Digital Publishing Institute. https://doi.org/10.3390/foods9030374
Farhat,  J.,  Alzyoud,  L.,  Alwahsh,  M.,  &  Al-Omari,  B.  (2022).  Structure–Activity Relationship  of  Benzofuran  Derivatives  with  Potential  Anticancer  Activity.  In Cancers (Vol. 14, Issue 9). MDPI. https://doi.org/10.3390/cancers14092196
Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah ( Allium Cepa L.) Menurunkan Kadar Advanced Oxidation Protein Product (AOPP) Plasma Pada Tikus Wistar Terpapar Diazinon
Fuentes,  J.,  Arias-Santé,  M.  F.,  Atala,  E.,  Pastene,  E.,  Kogan,  M.  J.,  &  Speisky,  H.
(2020a).  Low  nanomolar  concentrations  of  a  quercetin  oxidation  product,  which naturally  occurs  in  onion  peel,  protect  cells  against  oxidative  damage. Food Chemistry , 314 . https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.126166
Fuentes,  J.,  Arias-Santé,  M.  F.,  Atala,  E.,  Pastene,  E.,  Kogan,  M.  J.,  &  Speisky,  H. (2020b).  Low  nanomolar  concentrations  of  a  quercetin  oxidation  product,  which naturally  occurs  in  onion  peel,  protect  cells  against  oxidative  damage. Food Chemistry , 314 . https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.126166
Fuentes, J., Atala, E., Pastene, E., Carrasco-Pozo, C., & Speisky, H. (2017a). Quercetin Oxidation  Paradoxically  Enhances  its  Antioxidant  and  Cytoprotective  Properties. Journal  of  Agricultural  and  Food  Chemistry , 65 (50),  11002–11010. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.7b05214
Fuentes, J., Atala, E., Pastene, E., Carrasco-Pozo, C., & Speisky, H. (2017b). Quercetin Oxidation  Paradoxically  Enhances  its  Antioxidant  and  Cytoprotective  Properties. Journal  of  Agricultural  and  Food  Chemistry , 65 (50),  11002–11010. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.7b05214
Georgiadis, G., Mavridis, C., Belantis, C., Zisis, I. E., Skamagkas, I., Fragkiadoulaki, I., Heretis,  I.,  Tzortzis,  V.,  Psathakis,  K.,  Tsatsakis,  A.,  &  Mamoulakis,  C.  (2018). Nephrotoxicity  issues  of  organophosphates. Toxicology , 406–407 ,  129–136. https://doi.org/10.1016/j.tox.2018.07.019
Gonçalves,  R.  V.,  Costa,  A.  M.  A.,  &  Grzeskowiak,  L.  (2021).  Oxidative  Stress  and Tissue Repair: Mechanism, Biomarkers, and Therapeutics. In Oxidative Medicine and Cellular Longevity (Vol. 2021). Hindawi Limited.
https://doi.org/10.1155/2021/6204096
Gryszczyńska, B., Formanowicz, D., Budzyń, M., Wanic-Kossowska, M., Pawliczak, E., Formanowicz, P., Majewski, W., Strzyzewski, K. W., Kasprzak, M. P., & Iskra, M. (2017).  Advanced  Oxidation  Protein  Products  and  Carbonylated  Proteins  as Biomarkers  of  Oxidative  Stress  in  Selected  Atherosclerosis-Mediated  Diseases. BioMed Research International , 2017 . https://doi.org/10.1155/2017/4975264
Guyton, K. Z., Loomis, D., Grosse, Y., el Ghissassi, F., Benbrahim-Tallaa, L., Guha, N., Scoccianti, C., Mattock, H., Straif, K., Blair, A., Fritschi, L., McLaughlin, J., Sergi, C.  M.,  Calaf,  G.  M.,  le  Curieux,  F.,  Baldi,  I.,  Forastiere,  F.,  Kromhout,  H.,  ’t Mannetje, A., … Zeise, L. (2015). Carcinogenicity of tetrachlorvinphos, parathion, malathion,  diazinon,  and  glyphosate. The  Lancet  Oncology , 16 (5),  490–491. https://doi.org/10.1016/S1470-2045(15)70134-8
Hadichegeni,  S.,  Goliaei,  B.,  Taghizadeh,  M.,  Davoodmanesh,  S.,  Taghavi,  F.,  & Hashemi,  M.  (2018).  Characterization  of  the  interaction  between  human  serum albumin  and  diazinon  via  spectroscopic  and  molecular  docking  methods. Human and Experimental Toxicology , 37 (9), 959–971. https://doi.org/10.1177/0960327117741752
Indratin,  Arief  Budihardjo,  M.,  &  Helmi,  M.  (2020).  Geospatial  model  of organophosphate  insecticide  residues  in  shallot  land  in  Wanasari  Sub-district, Brebes Regency, Central Java Province, Indonesia. E3S Web of Conferences , 202 . https://doi.org/10.1051/e3sconf/202020206010
Kunti Sri Panca Dewi, I. G. A., Putra Manuaba, I. B., Sutirta Yasa, I. W. P., & Satriyasa, B.  K.  (2018).  Methanol  extract  of  mangosteen  peel  (Garcinia  mangostana  L.) increase activity acetylcholinesterase and glutathione peroxidase and reduce MDA in diazinon exposed rat. Bali Medical Journal , 7 (3). https://doi.org/10.15562/bmj.v7i3.979
Lusi, A. S., Sari, B. L., Indriani, L., & Jupersio, J. (2017). Penentuan Kadar Flavonoid Ekstrak Etanol 70% Kulit Bawang Merah (Allium cepa L.) dengan Metode Maserasi dan MAE (Microwave Assisted Extraction). Fitofarmaka , 7 (2), 15–22.
Mariyono,  J.,  Kuntariningsih,  A.,  &  Kompas,  T.  (2018).  Pesticide  use  in  Indonesian vegetable farming and its determinants. Management of Environmental Quality: An International Journal , 29 (2), 305–323. https://doi.org/10.1108/MEQ-12-2016-0088
Oktaviyanti,  I.  K.,  Thalib,  I.,  &  Suhartono,  E.  (2016).  The  Protective  Efficacy  of
Quercetin on Mefenamic Acid-Induced Gastric Mucosal Damage. In International Journal of Pharmaceutical and Clinical Research (Vol. 8, Issue 10). www.ijpcr.com Park,  M.  J.,  Ryu,  D.  H.,  Cho,  J.  Y.,  Ha,  I.  J.,  Moon,  J.  S.,  &  Kang,  Y.  H.  (2018). Comparison of the antioxidant properties and flavonols in various parts of Korean red  onions  by  multivariate  data  analysis. Horticulture  Environment  and Biotechnology , 59 (6), 919–927. https://doi.org/10.1007/s13580-018-0091-2
Rahayu,  S.,  Kurniasih,  N.,  &  Amalia,  V.  (2015).  Ekstraksi  dan  Identifikasi  Senyawa Flavonoid  Dari  Limbah  Kulit  Bawang  Merah  Sebagai  Antioksidan  Alami. Al Kimiya , 2 (1), 1–8.
Rahima, S. A., Dewi, R., Rumastika, N. S., & Helianti, D. (2022a). Shallot (Allium cepa L.)  Skin  Ethanol  Extract  Neutralizes  Liver  Oxidative  Stress  in  Diazinon-Induced Wistar Rats. Qanun Medika - Medical Journal Faculty of Medicine Muhammadiyah Surabaya , 6 (1). https://doi.org/10.30651/jqm.v6i1.8038
Rahima, S. A., Dewi, R., Rumastika, N. S., & Helianti, D. (2022b). Shallot (Allium cepa L.)  Skin  Ethanol  Extract  Neutralizes  Liver  Oxidative  Stress  in  Diazinon-Induced Wistar Rats. Qanun Medika - Medical Journal Faculty of Medicine Muhammadiyah Surabaya , 6 (1). https://doi.org/10.30651/jqm.v6i1.8038
Ronique  Witko-Sarsat,  V.  É.,  Gausson,  R.,  Nguyen,  A.-T.,  Touam,  M.,  Dru¨eke,  T., Dru¨eke,  D.,  Santangelo,  F.,  &  Atrice  Descamps-Latscha,  B.  É.  (2003).  AOPP- induced  activation  of  human  neutrophil  and  monocyte  oxidative  metabolism:  A potential  target  for  N-acetylcysteine  treatment  in  dialysis  patients. Kidney International , 64 (1), 82–91.
Ekstrak Etanol Kulit Bawang Merah ( Allium Cepa L.) Menurunkan Kadar Advanced Oxidation Protein Product (AOPP) Plasma Pada Tikus Wistar Terpapar Diazinon
Singleton, S. T., Lein, P. J., Dadson, O. A., McGarrigle, B. P., Farahat, F. M., Farahat,
T.,  Bonner,  M.  R.,  Fenske,  R.  A.,  Galvin,  K.,  Lasarev,  M.  R.,  Anger,  W.  K., Rohlman,  D.  S.,  &  Olson,  J.  R.  (2015).  Longitudinal  assessment  of  occupational exposures  to  the  organophosphorous  insecticides  chlorpyrifos  and  profenofos  in Egyptian cotton field workers. International Journal of Hygiene and Environmental Health , 218 (2), 203–211. https://doi.org/10.1016/j.ijheh.2014.10.005
Škerget,  M.,  Majheniè,  L.,  Bezjak,  M.,  &  Knez,  D.  (2009).  Antioxidant,  Radical Scavenging and Antimicrobial Activities of Red Onion (Allium cepa L) Skin and Edible Part Extracts. Chem. Biochem. Eng , 23 (4), 435–444.
Styles, F. L., Al-Owais, M. M., Scragg, J. L., Chuntharpursat-Bon, E., Hettiarachchi, N. T.,  Lippiat,  J.  D.,  Minard,  A.,  Bon,  R.  S.,  Porter,  K.,  Sukumar,  P.,  Peers,  C.,  & Roberts,  L.  D.  (2021).  Kv1.3  voltage-gated  potassium  channels  link  cellular respiration to proliferation through a non-conducting mechanism. Cell Death and Disease , 12 (4). https://doi.org/10.1038/s41419-021-03627-6
Vásquez-Espinal, A., Yañez, O., Osorio, E., Areche, C., García-Beltrán, O., Ruiz, L. M., Cassels, B. K., & Tiznado, W. (2019). Theoretical Study of the Antioxidant Activity of Quercetin Oxidation Products. Frontiers in Chemistry , 7 .
https://doi.org/10.3389/fchem.2019.00818
Witko-Sarsat, V., Friedlander, M., Capeillere-Blandin, C., Nguyen-Khoa, T., Nguyen, A. T., Zingraff, J., Jungers, P., & Descamps-Latscha, B. (1996). Advanced oxidation protein  products  as  a  novel  marker  of  oxidative  stress  in  uremia.  In Kidney International (Vol. 49).
World Health Organization. (2018). Global report on insecticide resistance in malaria vectors: 2010-2016 Global Malaria Programme .
Xu, D., Hu, M. J., Wang, Y. Q., & Cui, Y. L. (2019). Antioxidant activities of quercetin and its complexes for medicinal application. In Molecules (Vol. 24, Issue 6). MDPI AG. https://doi.org/10.3390/molecules24061123
Copyright holder:
Sheilla Rachmania, Rosita Dewi, Dina Helianti, Ayu Munawaroh (2022)

## First publication right:
Syntax Literate: Jurnal Ilmiah Indonesia
This article is licensed under: