## EFEKTIVITAS ISOLAT-ISOLAT MIKROB RIZOSFER TERHADAP PERTUMBUHAN SEMAI
Paraserianthes falcataria DAN Enterolobium cyclocarpum

## DI TAILING YANG TERKONTAMINASI MERKURI
Hanna Artuti Ekamawanti dan Wiwik Ekyastuti Fakultas Kehutanan Universitas Tanjungpura, Jalan Imam Bonjol, Pontianak

## ABSTRAcT
THE EFFECTIVENESS OF RHIZOSPHERE MICROBE ISOLATES ON PARASERIANTHES FALCATARIA AND ENTEROLOBIUM CYCLOCARPUM SEEDLINGS GROWTH IN MERCURY- CONTAMINATED TAILINGS. Utilization of rhizosphere microbes such as arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) and mercury-resistant bacteria (MRB) is one of the alternative technologies that can be used synergisti- cally to overcome the main problem in biologically rehabilitation of marginal and mercury (Hg) contaminated tailings in ex gold mining area.  The research was aimed to get an effective combination of AMF isolates (Glomus sp. SS11, Glomus sp.SS15, Glomus sp.SS18) with MRB isolates (Bacillus sp. HgTA1 and Pseudomonas HgRA) in supporting seedlings growth of sengon laut (Paraserianthes falcataria (L.) Nielsen) and sengon buto (Enterolo- bium cyclocarpum Griseb) in mercury-contaminated tailings. Dual inoculation of Glomus sp. SS15 with Bacillus sp. HgTA1 or Pseudomonas sp. HgRA isolates; dual inoculation of Glomus sp. SS18 with Bacillus sp. HgTA1 or Pseudomonas sp. HgRA isolates; single inoculation or dual inoculation of Glomus sp. SS11 with Pseudomonas sp. HgRA isolates were proven to be very effective in increasing P. falcataria seedlings height. However, only single inoculation of Bacillus sp. HgTA1 isolate was effective in increasing E. cyclocarpum seedlings height. Hg accumulation in plant tissue of P. falcataria and E. cyclocarpum, either with or without rhizosphere microbial inoculation, indicated that both plants were highly potential as Hg phytoextraction or phytostabilization agents. Key words : arbuscular mycorrhizal fungi, Enterolobium cyclocarpum Griseb, mercury, mercury-resistant bacteria, Paraserianthes falcataria (L.) Nielsen, tailings

## PENDAHLUAN
Mengingat dampak negatif yang sangat serius berupa rendahnya kualitas lingkungan dan potensi bahaya jangka panjang akibat penambangan emas di Mandor, maka rehabilitasi areal tersebut menjadi sangat urgen untuk segera dilakukan. Kendala utama apabila rehabilitasi areal bekas penambangan emas akan dilakukan adalah rendahnya kandungan bahan organik dan unsur hara, rendahnya aktivitas mikrob tanah, dan  adanya kandungan merkuri (Hg) dalam air tanah (Widiastuti dan Astiani, 2001; Ekamawa- nti et al. . 2005). Oleh karena itu, rehabilitasi secara biologi dengan memanfaatkan kerja mikrob rizosfer potensial, seperti FMA dan BRM dalam mendukung pertumbuhan tanaman di lahan yang sangat marjinal dan tercemari Hg merupakan salah satu alternatif bioteknologi yang ramah lingkungan dan mudah di- aplikasikan. Selain itu, kendala rendahnya kandungan bahan organik dapat diatasi dengan menggunakan tanaman cover crop ( Pueraria javanica dan Centrose- ma pubescens ) dan kompos.
Mengingat adanya kandungan Hg dalam air ta- nah di areal bekas penambangan emas, Ekamawanti et al. (2006) meneliti potensi kultur campuran FMA dan satu isolat BRM ( Pseudomonas HgTL2) dalam mendukung pertumbuhan serta toleransi dan aku- mulasi Hg dalam jaringan P. falcataria, E. cyclocar- pum, P. javanica dan C. pubescens . Hasil penelitian
menunjukkan bahwa keempat jenis tanaman tersebut memiliki toleransi yang tinggi terhadap Hg (konsen- trasi HgCl 2 hingga 10 ppm), baik tanpa atau dengan inokulasi mikrob rizosfer. Kultur campuran FMA se- lanjutnya dibuat kultur murni (monosenik) dengan teknik spora tunggal dan diperoleh 19 isolat FMA (Ekamawanti and Astiani, 2007). Dari 19 isolat terse- but terpilih tiga isolat yang untuk diuji efektivitasnya pada skala lapang, yaitu Glomus sp. SS11, Glomus sp. SS15 dan Glomus sp. SS18. Beberapa isolat BRM hasil isolasi dari rizosfer beberapa tumbuhan pionir yang tumbuh di areal bekas penambangan emas (Eka- mawanti et al. , 2005) diuji efektivitasnya secara in vi- tro dan diperoleh dua isolat ( Bacillus sp. HgTA 1 dan Pseudomonas HgRA) yang efektif dalam mengaku- mulasi Hg (Ekyastuti and Ekamawanti, 2007). Sebelum isolat-isolat mikrob rizosfer tersebut siap digunakan dalam skala lapang secara sinergis dengan beberapa tanaman inang, penting sekali di- lakukan pengujian lanjutan untuk menyeleksi isolat- isolat yang unggul dan efektif. Hal ini mengingat adanya  spesifisitas  FMA  dengan  tanaman  inangnya (Bever, 2002) sehingga dapat berpengaruh pada efektivitasnya dalam memacu pertumbuhan tanaman inang yang berbeda, serta belum terujinya efektivitas dua isolat BRM  secara in vivo . Inokulasi ganda ked- ua jenis mikrob rizosfer pada semai P. falcataria dan E. cyclocarpum untuk ditanam di lapang (lahan tail- ing ) yang tercemari Hg merupakan teknologi hayati

## Ekamawanti et al.: Efektivitas mikroba terhadap pertumbuhan semai di tailing
yang masih baru. Tujuan penelitian ini adalah untuk mendapatkan kombinasi isolat FMA ( Glomus sp. SS11, Glomus sp. SS15, Glomus sp. SS18) dan isolat BRM ( Bacillus sp. HgTA 1 dan Pseudomonas HgRA) yang efektif dalam mendukung pertumbuhan jenis pohon legum ( P. falcataria dan E. cyclocarpum ) di lahan tailing yang marjinal dan tercemari Hg.

## BAHAN DAN METODE
Tempat dan Waktu Penelitian dilaksanakan di rumah kasa dan laboratorium Silvikultur Fakultas Kehutanan Uni- versitas Tanjungpura, dan areal bekas penambangan emas Mandor, Kabupaten Landak Kalimantan Barat. Penelitian dilaksanakan selama sembilan bulan, sejak Maret sampai dengan November 2010.
Bahan dan Alat Benih-benih P. falcataria dan E. cyclocarpum , pasir sungai steril untuk pengecambahan benih, cam- puran tanah bakar dan kompos untuk media semai, air suling steril, inokulum FMA ( Glomus sp. SS11, Glo- mus sp. SS15, Glomus sp. SS18), isolat BRM ( Bacil- lus sp. HgTA1 dan Pseudomonas HgRA), media cair Canstein (Canstein dkk. 2000) steril, benih C. pube- scens dan P. javanica , bahan kimia untuk pewarnaan akar.
Alat-alat yang digunakan berupa bak penge- cambahan, polybag , cangkul, mistar untuk mengukur tinggi semai, kaliper untuk mengukur diameter, ajir, oven, mikroskop stereo dan mikroskop slide, gelas objek dan kaca penutup.
Persiapan semai di rumah kasa Benih-benih P. falcataria dan E. cyclocarpum disterilisai dalam larutan NaOCl 5,25% selama 1 me- nit, dicuci dengan air suling steril tiga kali dan diren- dam dalam air suling hangat selama 15 menit kemu- dian dalam air dingin selama 1 jam. Benih-benih yang diinokulasi FMA dikecambahkan dalam bak-bak perkecambahan yang telah diisi dengan pasir sungai steril dan inokulum FMA ( Glomus sp. SS11, Glomus sp. SS15, Glomus sp. SS18), sedangkan yang tidak diinokulasi dikecambahkan dalam bak perkecamba- han yang telah diisi dengan pasir sungai steril.
Setelah terjadi infeksi awal (setelah 2 minggu), semai yang berukuran seragam disapih dalam poly- bag yang telah diisi media campuran tanah bakar dan kompos. Semai bermikoriza disapih pada media yang telah diberi inokulum FMA 5 g/ polybag sesuai per- lakuan, dan yang tidak diinokulasi diberi inokulum FMA yang sudah disterilkan 5 g/ polybag dan filtrat inokulum FMA (500 gram inokulum FMA dicampur dengan 2 liter air suling dan disaring dengan kertas saring). Inokulasi isolat BRM ( Bacillus sp. HgTA1 dan Pseudomonas HgRA) 10 ml/ polybag sesuai per- lakuan dilakukan 2 minggu setelah semai disapih dengan cara injeksi di perakaran pada 5 titik, sedan- gkan yang tidak diinokulasi BRM diberi media cair Canstein (Canstein dkk. 2000) steril 10 ml/ polybag .
Rancangan percobaan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap. Setiap satu set pene- litian (satu jenis tanaman) ada 12 perlakuan, yaitu tanpa inokulasi mikrob rizosfer, inokulasi tung- gal isolat Glomus sp. SS11, Glomus sp. SS15, Glo- mus sp. SS18, Bacillus sp. HgTA1, Pseudomo- nas sp. HgRA, inokulasi ganda isolat Glomus sp. SS11+ Bacillus sp. HgTA 1 , Glomus sp. SS15+ Bacillus sp. HgTA1, Glomus sp. SS18+ Bacillus sp. HgTA1, Glomus sp. SS11+ Pseudomonas sp. HgRA, Glo- mus sp. SS15+ Pseudomonas sp. HgRA, Glomus sp. SS18+ Pseudomonas sp. HgRA. Selama 11 minggu, pemeliharaan semai dilakukan dengan pemupukan NPK sebagai starter untuk membantu pertumbuhan awal tanaman dan penyiraman air suling kapasi- tas lapang, di rumah kasa Laboratorium Silvikultur Fakultas Kehutanan Universitas Tanjungpura.
Persiapan lokasi penanaman dan penanaman se- mai di lapang Lokasi penanaman di areal bekas penamban- gan emas Mandor, Kabupaten Landak Kalimantan Barat berupa lahan tailing (pasir 94,52%); dengan si- fat kimia tanah yang buruk dengan pH H 2 O 3,69; kan- dungan C-organik sangat rendah (0,32%), kandungan hara makro dan mikro sangat rendah (N total 0,05%; P tersedia 29,20 ppm; K 0,02 cmol/kg; Na 0,03 cmol/ kg, Ca 0,09 cmol/kg; Mg 0,02 cmol/kg); kapasitas tu- kar kation dan kejenuhan basah yang sangat rendah (3,49 cmol/kg dan 4,58%). Persiapan lokasi tanam di lapangan, meliputi pemasangan ajir di lubang tanam dengan jarak 3 m x 4 m; pembuatan lubang tanam; pemberian kompos di lubang tanam 1 bulan sebelum penanaman, sehingga memberikan waktu inkubasi bagi lubang tanam tersebut sebelum ditanami; pena- buran benih C. pubescens dan P. javanica (3:1) seban- yak 3 g per lubang sebagai cover crop . Penanaman semai dilakukan pada lubang ta- nam yang telah dipersiapkan sesuai dengan perlakuan. Inokulasi FMA yang kedua dilakukan bersamaan den- gan penanaman semai. Setiap perlakuan ditanam se- banyak sepuluh semai. Pemeliharaan dilakukan den- gan penyiraman air setiap hari dan pemberian pupuk organik (campuran tera buster dan bioremedy) pada minggu ke-6, ke-8 dan ke-10. Tanaman dipanen pada minggu ke-12 setelah penanaman di lapang.
Variabel Pengamatan dan Analisis Data Pengukuran tinggi (cm) dan diameter (mm) se- mai dlakukan selama 12 minggu sejak semai ditanam di lapang. Bobot kering akar dan tajuk (g/tan) diukur pada akhir minggu ke-12 setelah dikeringovenkan pada suhu 60˚C hingga bobot konstan dengan neraca analitik.
Analisis data pertambahan tinggi, diameter, dan bobot kering tajuk dan akar dilakukan den- gan bantuan program CoStat. Kadar Hg total (mg/ kg) tajuk dan akar dilakukan dengan mengacu pada metode SM Ed. 20 Th. 1998 (AOAC) di laboratorium Balai Riset Standarisasi Industri Pontianak.
Pendekatan kelas efektivitas dilakukan den-
gan menggunakan pendekatan nilai tanaman kontrol (tanpa inokulasi isolat mikrob rizosfer) dan nilai ten- gah percobaan (rerata dari semua percobaan termasuk kontrol) sebagai standar untuk setiap variabel (modi- fikasi Sieverding 1991).  Kelas efektivitas tersebut di - tentukan dari hasil analisis ragamnya sebagai berikut: tidak efektif, bila variabel yang diuji tidak berbeda dengan kontrol; efektivitas rendah, bila variabel yang diuji berbeda nyata lebih tinggi dari kontrol, tetapi lebih rendah dari rerata percobaan; efektivitas sedang, bila variabel yang diuji berbeda nyata lebih tinggi dari kontrol, tetapi sama dengan rerata percobaan; efekti- vitas tinggi (sangat efektif), bila variabel yang diuji berbeda nyata lebih tinggi dari kontrol maupun rerata percobaan.
Selanjutnya, untuk mengetahui translokasi in- ternal Hg di dalam jaringan tanaman, dilakukan den- gan menghitung faktor translokasi (FT) = kadar Hg tajuk/kadar Hg akar, dan bila nilai FT < 1 berarti lo- gam berat lebih banyak ditahan di bagian akar dari pada yang ditranslokasi ke bagian tajuk (Stoltz & Gre- ger 2002). Penentuan kolonisasi mikoriza arbuskula (%) ditentukan dengan melakukan pewarnaan contoh akar semai dengan pewarna biru Trypan (mengacu Koske and Gemma, 1989) dan perhitungannya den- gan metode slide (mengacu McGonigle et al., 1990).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan semai P. falcataria Pada Tabel 1 diketahui bahwa inokulasi gan- da isolat Glomus sp. SS15 baik dengan Bacillus sp. HgTA1 maupun Pseudomonas sp. HgRA;  inokulasi ganda isolat Glomus sp. SS18 baik dengan Bacillus sp. HgTA1 maupun Pseudomonas sp. HgRA; dan inokulasi ganda isolat Glomus sp. SS11 dengan Pseu- domonas sp. HgRA; serta inokulasi tunggal Glomus sp. SS11 nyata meningkatkan pertambahan tinggi se- mai P. falcataria bila dibandingkan dengan pertam- bahan semai yang tidak diinokulasi mikrob rizosfer selama 12 minggu setelah penanaman di lapang.
Mikrob Rizosfer Rataan Pertambahan Tinggi* (cm) Rataan Pertambahan Diameter* (mm) Rataan Bobot Kering ** Kelas Efektivitas Tajuk (mg) Akar (mg) Tanpa 7,53 f 7,5 21,23 23,6 Tidak efektif SS11 10,93 abcde 7,4 23,33 6,87 Sangat efektif SS15 7,97 ef 6,1 15,53 6,07 Tidak efektif SS18 9,29 cdef 7,9 23,97 8,23 Tidak efektif HgTA1 8,61 def 6,9 19,37 8,43 Tidak efektif HgRA 7,70 f 6,4 18,43 7,1 Tidak efektif SS11+ HgTA1 9,73 bcdef 6,1 17,40 8,03 Tidak efektif SS15+ HgTA1 11,30 abcd 6,9 20,63 11,03 Sangat efektif SS18+ HgTA1 12,79 a 8,1 36,7 12,33 Sangat efektif SS11+ HgRA 12,06 abc 7,4 23,17 6,7 Sangat efektif SS15+ HgRA 10,93 abcde 6,5 29,40 17,87 Sangat efektif SS18+ HgRA 12,56 ab 7,1 25,53 14,43 Sangat efektif
Berdasarkan kriteria kelas efektivitas, kelima kombinasi inokulasi ganda isolat-isolat mikrob rizosfer maupun secara tunggal (isolat Glomus sp. SS11) sangat efektif dalam meningkatkan pertam- bahan tinggi semai P. falcataria . Namun perlakuan inokulasi mikrob rizosfer belum mampu meningkat- kan pertambahan diameter dan bobot kering semai P. falcataria . Dari hasil pemeriksaan contoh akar semai P. fal- cataria , ada kecenderungan kolonisasi MA lebih me- ningkat bila diinokulasi ganda dengan BRM. Hal ini terjadi pada inokulasi ganda Glomus sp. SS11 dengan Bacillus sp. HgTA1 (43,3%) dibanding bila Glomus sp. SS11 diinokulasi tunggal (20%), dan pada inoku- lasi ganda Glomus sp. SS15 dengan Pseudomonas sp. HgRA (46,7%) dibanding bila Glomus sp. SS15 dii- nokulasi tunggal (23,3%). Namun, hal ini tidak terjadi pada Glomus sp. SS18, kolonisasi MA baik dengan atau tanpa BRM sama saja (33,3%). Dikaitkan dengan pertambahan tinggi tanaman, peningkatan kolonisasi MA tidak selalu diikuti dengan peningkatan pertam- bahan tinggi tanaman. Hasil penelusuran kembali BRM di perakaran semai P. falcataria dari lapang di akhir penelitian menunjukkan bahwa morfologi bak- teri sama dengan yang diberikan sebelum inokulasi. Dengan demikian disimpulkan bahwa bakteri yang tumbuh adalah Bacillus sp. HgTA1dan Pseudomonas sp. HgRA yang diinokulasi di awal penelitian.
Pertumbuhan semai E. cyclocarpum Pada Tabel 2 diketahui bahwa pertambahan tinggi semai E. cyclocarpum yang diinokulasi tunggal Bacillus sp. HgTA1 dan Pseudomonas sp. HgRA ber- beda nyata dibandingkan dengan pertambahan tinggi semai yang tidak diinokulasi mikrob rizosfer atau perlakuan inokulasi lainnya. Meskipun pertambahan tinggi semai yang diinokulasi tunggal Pseudomonas sp. HgRA berbeda tidak nyata dengan pertambahan
Tabel 1 . Pertambahan tinggi, diameter, bobot kering tajuk dan akar semai P. falcataria yang diinokulasi isolat mikrobrizosfer (umur 12 mst)
Keterangan: SS11 = Glomus sp. SS11; SS15 = Glomus sp. SS15; SS18 = Glomus sp. SS18; HgTA1= Bacillus sp. HgTA1 ; HgRA= Pseudomonas sp. HgRA. *) = Rerata dari 7 ulangan; **) = Rerata dari 3 ulangan mst = minggu setelah tanam

## Ekamawanti et al.: Efektivitas mikroba terhadap pertumbuhan semai di tailing

## Ekamawanti et al.: Efektivitas mikroba terhadap pertumbuhan semai di tailing
tinggi semai yang diinokulasi tunggal isolat Bacillus sp. HgTA1, isolat Pseudomonas sp. HgRA termasuk kelas tidak efektif. Inokulasi mikrob rizosfer, mening- katkan pertambahan diameter dan bobot kering semai E. cyclocarpum selama 12 minggu setelah penana- man. Kolonisasi mikoriza arbuskula pada akar se- mai E. cyclocarpum juga mengalami peningkatan bila isolat FMA diinokulasi ganda dengan isolat BRM dibanding hanya diinokulasi tunggal. Hal ini terjadi pada Glomus sp. SS11 dan Glomus sp. SS15 yang masing-masing diinokulasi ganda dengan isolat Pseudomonas sp. HgRA  (berturut-turut (persentase kolonisasi MA 50% dan 33,3%). Sama halnya pada P. falcataria , hasil penelusuran kembali BRM di pera- karan semai E. cyclocarpum menunjukkan bahwa
morfologi bakteri sama dengan yang diinokulasi di awal penelitian, yaitu Bacillus sp. HgTA1dan Pseu- domonas sp. HgRA.
Kadar Hg total tajuk dan akar semai Hasil analisis kadar Hg pada contoh tajuk dan akar semai menunjukkan bahwa P. falcataria menga- kumulasi Hg di jaringan tanaman, baik pada semai yang diinokulasi mikrob rizosfer maupun yang tidak diinokulasi (Tabel 3). Ada kecenderungan bahwa translokasi internal Hg lebih besar ke bagian tajuk dari pada yang ditahan di akar (FT > 1) semai P. fal- cataria , baik yang tidak diinokulasi maupun yang dii- nokulasi mikrob rizosfer. Namun, ada juga Hg yang lebih banyak ditahan di bagian akar yaitu pada semai yang diinokulasi tunggal isolat Glomus sp. SS11 dan Tabel 2. Pertambahan tinggi, diameter, bobot kering tajuk dan akar semai E. cyclocarpum yang diinokulasi  isolat mikrob rizosfer (umur 12 mst)
Keterangan: SS11 = Glomus sp. SS11; SS15 = Glomus sp. SS15; SS18 = Glomus sp. SS18; HgTA1= Bacillus sp. HgTA 1; HgRA= Pseudomonas sp. HgRA *) = Rerata dari 8 ulangan; **) = Rerata dari 3 ulangan mst = minggu setelah tanam
Tabel 3. Kadar Hg total tajuk dan akar semai P. falcataria yang diinokulasi isolat mikrob rizosfer (umur 12 mst)
Mikrob Rizosfer Rataan Pertambahan Tinggi* (cm) Rataan Pertambahan Diameter* (mm) Rataan Bobot Kering **) Kelas Efektivitas Tajuk (mg) Akar (mg) Tanpa 16,94 bc 6,44 42,57 31,07 Tidak efektif SS11 15,20 cd 7,00 41,77 35,53 Tidak efektif SS15 12,14 d 7,75 26,40 26,00 Tidak efektif SS18 15,58 cd 7,06 32,37 21,30 Tidak efektif HgTA1 21,75 a 7,13 39,97 19,40 Sangat efektif HgRA 19,21 ab 6,65 51,4 40,87 Tidak efektif SS11+ HgTA1 14,18 cd 6,88 28,83 24,63 Tidak efektif SS15+ HgTA1 14,18 cd 7,25 49,23 32,93 Tidak efektif SS18+ HgTA1 14,26 cd 7,56 29,07 16,97 Tidak efektif SS11+ HgRA 13,34 cd 7,28 44,10 26,23 Tidak efektif SS15+ HgRA 14,74 cd 6,30 46,40 27,40 Tidak efektif SS18+ HgRA 15,20 cd 7,00 44,47 23,20 Tidak efektif Mikrob Rizosfer Kadar Hg total Faktor Translokasi (FT) Tajuk (mg/kg) Akar (mg/kg) Tanpa 1,111 0,948 1,172 SS11 0,493 0,786 0,672 SS15 0,029 0,951 0,030 SS18 1,065 0,579 1,839 HgTA1 0,849 0,784 1,082 HgRA 0,184 0,094 1,957 SS11+ HgTA1 0,828 0,346 2,393 SS15+ HgTA1 2,750 0,683 4,026 SS18+ HgTA1 0,687 0,561 1,225 SS11+ HgRA 1,752 1,136 1,542 SS15+ HgRA 0,370 0,921 0,402 SS18+ HgRA 1,175 0,278 4,226 Keterangan: SS11 = Glomus sp. SS11; SS15 = Glomus sp. SS15; SS18 = Glomus sp. SS18; HgTA1= Bacillus sp. HgTA 1; HgRA= Pseudomonas sp. HgRA mst = minggu setelah tanam
pada semai yang diinokulasi baik tunggal isolat Glo- mus sp. SS15 maupun ganda dengan isolat Pseudo- monas sp. HgRA.
Mikrob Rizosfer Kadar Hg total Faktor Translokasi (FT) Tajuk (mg/kg) Akar (mg/kg) Tanpa 0,427 0,935 0,457 SS11 1,127 0,137 8,226 SS15 2,101 0,413 5,087 SS18 0,291 1,559 0,251 HgTA1 0,534 0,154 3,468 HgRA 0,085 0,248 0,343 SS11+ HgTA1 0,520 0,348 1,494 SS15+ HgTA1 0,955 0,353 2,705 SS18+ HgTA1 0,174 0,128 1,359 SS11+ HgRA 0,893 0,141 6,333 SS15+ HgRA 0,725 0,494 1,468 SS18+ HgRA 1,156 0,358 3,229
Hasil analisis kadar Hg pada contoh tajuk dan akar semai juga menunjukkan bahwa E. cyclocar- pum mengakumulasi Hg di jaringan tanaman (Tabel 4). Berbeda dengan P. falcataria , translokasi internal Hg pada semai E. cyclocarpum yang tidak diinokulasi mikrob rizosfer cenderung lebih besar ke bagian akar (FT < 1). Namun, dengan inokulasi mikrob rizosfer baik secara tunggal maupun ganda, translokasi inter- nal Hg lebih meningkat ke bagian tajuk (FT > 1).
Rehabilitasi secara biologi areal bekas penam- bangan emas yang tercemari Hg memerlukan bibit- bibit tanaman yang mampu tumbuh pada lahan yang marjinal dan tercemari Hg. Bibit tanaman yang digu- nakan harus dapat mengatasi cekaman hara sekaligus cekaman Hg. Untuk meningkatkan kemampuan tana- man dalam menyerap unsur hara yang sangat terbatas, FMA berpotensi membantu tanaman dalam mengek- splorasi unsur hara yang ada di larutan tanah, khusus- nya fosfor. Toleransi tanaman terhadap Hg merupakan hal yang esensial jika perakaran tanaman mempen- etrasi dan mengekstrak Hg secara efisien dari tanah yang terkontaminasi (Meagher & Heaton 2005). Han- ya perakaran tanaman yang toleran Hg yang secara efisien kontak dengan substrat yang tercemari unsur ini. Penggunaan BRM diharapkan dapat mengurangi tingkat toksisitas Hg terhadap tanaman dan secara ti- dak langsung membantu pertumbuhan tanaman.
Pada semai P. falcataria dan E. cyclocarpum , inokulasi ganda maupun inokulasi tunggal FMA dan BRM terbukti dapat meningkatkan pertambahan tinggi semai selama 12 minggu setelah semai ditanam di areal tailing yang tercemari Hg. Ada kecender- ungan bahwa inokulasi ganda mikrob rizosfer lebih efektif memacu pertumbuhan awal semai P. falca-
Tabel 4 . Kadar Hg total tajuk dan akar semai E. cyclocarpum yang diinokulasi isolat mikrob rizosfer (umur 12 mst)
Keterangan: SS11 = Glomus sp. SS11; SS15 = Glomus sp. SS15; SS18 = Glomus sp. SS18; HgTA1= Bacillus sp. HgTA 1; HgRA= Pseudomonas sp. HgRA mst = minggu setelah tanam
taria dari pada bila hanya inokulasi tunggal mikrob rizosfer. Sebaliknya, inokulasi ganda mikrob rizosfer belum cukup efektif dalam membantu pertambahan tinggi semai E. cyclocarpum . Bever (2002) membuk-
tikan bahwa jenis inang yang berbeda menyebabkan adanya variasi respon pertumbuhan tanaman yang dii- nokulasi FMA dan juga perkembangan FMA itu send- iri. Beberapa penelitian lain yang telah dilakukan juga membuktikan peranan FMA dalam membantu me- ningkatkan pertumbuhan tanaman yang diinfeksinya pada media yang tercemari logam berat Pb, Cu, Cd dan  Zn (Diaz dkk. 1996; Huang dkk. 2000). Pada se- mai E. cyclocarpum , inokulasi tunggal BRM terbukti efektif meningkatkan pertambahan tinggi semai. Pen- garuh BRM secara tidak langsung pada pertumbuhan awal semai tanaman diduga karena BRM (seperti ge- nus Bacillus, Pseudomonas ) berperan penting dalam mereduksi Hg 2+ menjadi Hg 0 melalui mekanisme detoksifikasi (Nakamura dkk. 1990; Andrea 2003) di lingkungan yang tercemari Hg sehingga tidak bersi- fat racun bagi tanaman. Hal ini menunjukkan adanya potensi mikrob rizosfer dalam membantu pertum- buhan awal semai P. falcataria dan E. cyclocarpum di lahan yang marjinal dan tercemari Hg, meskipun untuk variabel pertumbuhan lainnya belum menun- jukkan hasil yang optimal. Bobot kering yang belum dipengaruhi oleh mikrob rizosfer yang diinokulasikan menunjukkan bahwa mikrob rizosfer tersebut belum memberikan kontribusi yang nyata pada serapan hara yang menyusun biomassa semai P. falcataria dan E. cyclocarpum selama 12 minggu setelah semai dita- nam di lapang.
Adanya kolonisasi MA pada perakaran semai P. falcataria dan E. cyclocarpum mengindikasikan bahwa FMA yang diinokulasi dapat menginfeksi akar semai yang tumbuh di tailing yang tercemari merkuri. Ada kecenderungan bahwa kolonisasi MA meningkat dengan keberadaan BRM yang juga diinokulasi pada

## Ekamawanti et al.: Efektivitas mikroba terhadap pertumbuhan semai di tailing

## Ekamawanti et al.: Efektivitas mikroba terhadap pertumbuhan semai di tailing
perakaran kedua semai tersebut. Hal ini mengindika- sikan adanya sinergisme antara kedua mikrob rizosfer tersebut dalam kolonisasi pada akar semai tanaman inang. Hasil penelusuran kembali isolat BRM yang diinokulasi pada perakaran semai P. falcatria dan E. cyclocarpum di tailing yang tercemari Hg menunjuk- kan bahwa bakteri tersebut mampu bertahan hidup (tumbuh dan berkembang biak) di lingkungan yang tercemari Hg. Hal ini sangat penting artinya karena untuk dapat berperan di lingkungan, suatu mikrob harus memiliki kemampuan tumbuh dan berkembang biak. Kemampuan tumbuh P. falcataria dan E. cy- clocarpum pada lahan tailing yang tercemari Hg menunjukkan adanya toleransi jenis tersebut terhadap kandungan Hg yang terdapat di air tanah di lahan tail- ing . Adanya kandungan Hg pada tajuk dan akar semai kedua jenis tanaman yang diuji menunjukkan adanya mekanisme toleransi tanaman terhadap Hg dengan menyerap dan mengakumulasi Hg di jaringan tana- man. Hg merupakan salah satu logam paling beracun bagi tanaman dan umumnya tanaman mengendapkan ion-ion yang bersifat toksik dalam kompleks di sito- plasma  untuk  melindungi  ancaman  fitotoksisitasnya (Wang & Greger 2004). Menurut Meagher & Heaton (2005), mekanisme fisiologi tanaman terhadap ceka - man Hg, secara garis besar meliputi: (1) toleransi tanaman; (2) aktivitas rizosfer; (3) sistem angkutan jarak pendek dan jarak jauh merkuri; (4) keadaan ele- ktrokimia dan spesiasi kimia merkuri; (5) tangkapan kimia untuk akumulasi merkuri; dan (6) tangkapan fisik untuk akumulasi merkuri.
Translokasi internal Hg di dalam jaringan tana- man sangat ditentukan oleh interaksi antara tanaman dan mikrob tanah yang ada di rizosfer maupun yang bersimbiosis dengan tanaman. Yu dkk. (2010) yang menunjukkan bahwa inokulasi MA mengurangi ket- ersediaan fraksi Hg di tanah dan serapan Hg oleh akar, dan selanjutnya menyebabkan akumulasinya di jagung lebih rendah dari pada yang tidak diinokulasi MA. Hal ini berbeda dengan hasil dalam penelitian ini. Pada semai P. falcataria yang tidak diinokulasi mikrob rizosfer, Hg yang diserap selanjutnya ditrans- lokasikan dan diakumulasi lebih banyak di tajuk dari pada di akar. Demikian juga pada semai yang diinoku- lasi tunggal maupun ganda dengan mikrob rizosfer, cenderung meningkatkan translokasi internal Hg dari akar ke tajuk meskipun ada beberapa isolat yang dii- nokulasikan menyebabkan Hg lebih banyak ditahan di akar. Pada semai E. cyclocarpum yang tidak dii- nokulasi mikrob rizosfer, Hg yang diserap lebih ban- yak ditranlokasikan dan ditahan di akar dari pada ke tajuk, dengan FT 0,457. Hasil ini sejalan dengan hasil penelitian Esteban dkk. (2008), bahwa tanaman dapat menyerap Hg yang diberikan di larutan hara tetapi hanya sekitar 30-40% Hg yang diakumulasi dalam tanaman, dan sekitar 0,48-0,62% Hg yang diserap ke- mudian ditranslokasikan ke tajuk dengan FT sekitar 0,5. Namun, pada saat semai E. cyclocarpum diinoku- lasi ganda mikrob rizosfer, Hg lebih banyak ditranslo- kasikan dari akar ke bagian tajuk.
Dang dkk. (2004) menyatakan bahwa jenis tanaman yang dapat mengakumulasi kadar logam be- rat relatif tinggi di bagian atas tanaman (batang/tajuk) menjadi kandidat yang bagus untuk agen fitoekstrak - si, dan jenis tanaman yang memiliki kemampuan kuat untuk mengurangi translokasi logam berat dari akar ke tajuk layak sebagai agen fitostabilisai untuk reveg - etasi tanah yang tercemari logam berat. Fitoekstraksi adalah pemanfaatan tumbuhan untuk mengangkut dan mengkonsentrasikan logam-logam dari tanah ke bagian akar dan tajuk di bagian atas tanah yang dapat dipanen (Garbisu dkk. 2002). Fitostabilisasi, yaitu menggunakan tanaman untuk menstabilkan matriks tanah dan imobilisasi pencemar dari migrasi berikut- nya, dan berfungsi mencegah terjadinya erosi tanah (McIntyre 2003). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa isolat-isolat mikrob rizosfer yang diinokula- sikan pada semai P. falcataria dan E. cyclocarpum dapat digunakan secara efektif sebagai agen hayati yang mendukung pertumbuhan tanaman di lahan tailing yang marjinal. Selain itu juga, isolat-isolat tersebut juga memungkinkan kedua tanaman sangat berpotensi  sebagai  kandidat  agen  fitoekstraksi  dan fitostabilisasi  dalam  rehabilitasi  areal  bekas  penam - bangan emas berupa lahan tailing yang tercemari Hg.

## KESIMPULAN
Hingga umur semai 12 minggu setelah tanam di lapang, inokulasi ganda Glomus sp. SS15 baik dengan Bacillus sp. HgTA1 maupun Pseudomonas sp. HgRA;  inokulasi ganda Glomus sp. SS18 baik dengan Bacillus sp. HgTA1 maupun Pseudomonas sp. HgRA; dan inokulasi ganda Glomus sp. SS11 den- gan Pseudomonas sp. HgRA; serta inokulasi tunggal Glomus sp. SS11 terbukti sangat efektif dalam me- macu pertambahan tinggi semai P. falcataria . Inoku- lasi tunggal Bacillus sp. HgTA 1 terbukti sangat efektif dalam memacu pertambahan tinggi semai E. cyclo- carpum . Akumulasi Hg di tajuk semai P. falcataria yang tidak maupun yang diinokulasi mikrob rizos- fer menunjukkan tanaman berpotensi sebagai agen fitoekstraksi. Akumulasi Hg di akar semai E. cyclo- carpum yang tidak diinokulasi mikrob rizosfer ber- potensi sebagai agen fitostabilisasi dan jika diinoku - lasi mikrob rizosfer Hg lebih banyak diakumulasi di tajuk menunjukkan tanaman berpotensi sebagai agen fitoekstraksi di lahan tailing yang tercemari Hg. Im- plikasi dari penelitian ini adalah bahwa P. falcataria dan E. cyclocarpum dapat digunakan bersamaan den- gan aplikasi mikrob rizosfer dalam rehabilitasi secara biologi lahan tailing yang marjinal dan tercemari Hg.

## UcAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Direktorat Penelitian dan Pengabdian Kepada Ma- syarakat, Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi De- partemen Pendidikan Nasional yang telah mendanai penelitian ini, pada tahun anggaran 2010. Tulisan ini merupakan bagian dari hasil penelitian yang berjudul
“Uji Efektivitas Isolat-isolat Mikrob Rizosfer Terha- dap Pertumbuhan Beberapa Jenis Tanaman di Media Tailing yang Tercemar Merkuri (Tahun ke-2)”

## DAFTAR PUSTAKA
Andrea MA, N. Cimento, E.C. Souza. 2003. Operon mer: Bacterial resistance to mercury and poten- tial for bioremediation of contaminated environ- ments; http://funpecrp.com.br/gmr/year2003/ vol1-2/pdf/sim0005.pdf Astiani, D., H.A. Ekamawanti, E. Susanti . 2001. Studi keanekaragaman cendawan mikoriza arbuskula (CMA) pada tumbuhan pionir di areal bekas per- tambangan emas kawasan hutan alam Mandor kabupaten Landak. Laporan Penelitian . Fakultas Kehutanan Universitas Tanjungpura. Pontianak. Astiani, D. and H.A. Ekamawanti . 2002. Studi potensi inokulum fungi Glomalean lokal dari areal bekas pertambangan emas rakyat. Laporan Penelitian. Fakultas Kehutanan Universitas Tanjungpura. Pontianak.
Bever . 2002. Host-specificity of AM fungal popula - tion growth rates can generate feedback on plant growth. Plant and Soil 244 (1-2):281-290. Canstein, H.V., Y. Li, J. Leonhauser, E. Haase, A. Feiske, W.D. Deckwer, I.W. Dobler . 2002. Spa- tially oscillating activity and microbial succes- sion of mercury-reducing biofilms in a technical- scale bioremediation system. Appl. Environ. Microbiol. 68: 1938-1946. Dang, H., Z.H. Ye, M.H. Wong. 2004. Accumula- tion of lead, zinc, copper and   cadmium    by 12   wetland   plant  species  thriving  in  metal- contaminated sites in China. Environ Pollut. 132: 29-40.
Diaz, G., C. Azcon-Aguilar and M. Honrubia. 1996. Influence  of  arbuscular  mycorrhizae  on  heavy metal (Zn and Pb) uptake and growth of Lygeum spartum and Anthyllis cytisoides . Plant and Soil 180: 241-249. Ekamawanti, H.A. and D. Astiani. 2005. Uji kes- esuaian fungi Glomalean lokal dari areal bekas pertambangan emas dengan beberapa jenis tana- man inang untuk perbanyakan inokulum. Lapo- ran Akhir Penelitian Dosen Muda . Fakultas Ke- hutanan Universitas Tanjungpura. Pontianak. Ekamawanti, H.A., R.S. Utomo, Liwono . 2005. Restorasi terestrial, riparian, dan perairan areal bekas penambangan emas dengan teknologi bio- remediasi di kecamatan Mandor kabupaten Lan- dak Kalimantan Barat. Laporan Akhir Penelitian Kegiatan Insentif Riset Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Fakultas Kehutanan Univer- sitas Tanjungpura. Pontianak. Ekamawanti, H.A., Liwono, D. Wahyuasti . 2006. Restorasi terestrial, riparian, dan perairan areal bekas penambangan emas dengan teknologi bio- remediasi di kecamatan Mandor kabupaten Lan- dak Kalimantan Barat (Tahun II). Laporan Akhir Penelitian Kegiatan Insentif Riset Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam Fakultas Kehutanan Universitas Tanjungpura. Pontianak. Ekamawanti, H.A. and D. Astiani. 2007. Produksi inokulum mikoriza arbuskula indigen dari areal bekas penambangan emas dengan beberapa jenis tanaman inang. Makalah dalam Seminar Nasi- onal Mikoriza pada Kongres Mikoriza Indonesia II. Bogor, Jawa Barat. Ekyastuti, W., T.R. Setyawati,  Rafdinal . 2004. Pe- manfaatan isolat bakteri rhizosfer untuk mem- perbaiki kualitas lahan bekas penambangan emas ( tailing ) di kecamatan Mandor kabupaten Pontianak dalam usaha reklamasi secara biologi . Laporan akhir Hasil Penelitian Hibah Bersaing X. Fakultas Kehutanan Universitas Tanjungpura. Pontianak.
Ekyastuti, W. and H. Artuti. 2007. Isolasi dan efek- tivitas in vitro bakteri resisten merkuri lokal sebagai agen bioremediasi lahan bekas penam- bangan emas. Makalah dalam Seminar Nasional Pertemuan Ilmiah Tahunan Perhimpunan Mik- robiologi Indonesia. Banjarmasin, Kalimantan Selatan.
Esteban,  E, E. Moreno, J. Peňalosa, J.I. Cabrero,  R. Millán, P. Zornoza. 2008. Short and long-term uptake of Hg in white lupin plants: kinetics and stress indicators. Environ Exp Bot 62:316–322. Garbisu, C., J. Hernandez-Allica, O. Barrutia, I. Alkorta, J.M. Becerril. 2002. Phytoremedia- tion: a technology using green plants to remove contaminants from polluted areas. Rev. Environ Health 17(3):173-188.
Huang Y., Y. Chen and S. Tao. 2000. Effect of rhi- zospheric environment of VA-mycorrhizal plants on forms of Cu, Zn, Pb and Cd in polluted soil. Ying Yong Sheng Tai Xue Bao 11(3): 431-434. Koske, R.E. and J.N. Gemma . 1989. A modified pro - cedure for staining roots to detect VA mycorrhi- zas. Mycol. Res . 92 (4):486-505.
McGonigle, T.P., M.H. Miller, D.G. Evans, G.L. Fair- child, J.A.  Swan . 1990.  A new method  which gives objective measure of collonisation of roots by  vesicular-arbuscular mycorhirrizal fungi. New Phytol . 115:495-501. McIntyre, T. 2003. Phytoremediation of heavy met- als from soils. Adv. Biochem. Eng. Biotechnol . 78:97-123.
Meagher, R.B. and A.C.P. Heaton . 2005.  Strategies for the engineered phytoremediation of toxic ele- ment pollution: Mercury and arsenic. J. Ind. Mi- crobiol Biotechnol. 32: 502–513
Nakamura, S.K.M., F. Uchiyama, O. Yagi . 1990. Organomercurial-Volatilizing Bacteria in The Mercury-Polluted Sediment of Minamata Bay, Japan. Appl. Environ. Microbial 50:304-305. Rabie, G.H . 2005. Contribution of arbuscular mycor- rhizal fungus to red kidney and wheat plants tol- erance grown in heavy metal-polluted soil. Afri- can Journal of Biotechnology 4(4): 332-345. Sieverding, E . 1991. Vesicular-Arbuscular Mycor- rhiza Management in Tropical Agrosystems.

## Ekamawanti et al.: Efektivitas mikroba terhadap pertumbuhan semai di tailing
Deutsche Gesellschaft fur Technische Zusam- menarbeit (GTZ) GmbH, Eachborn. Stoltz,  E, and M. Greger M. Accumulation properties of As, Cd, Cu , Pb and Zn by four       wetland plant species growing on submerged mine tail- ings. Environ. Exp. Bot. 47: 271-280.
Wang, Y. and M. Greger. 2004. Clonal differences in mercury tolerance, accumulation, and distribu- tion in willow. J. Environ. Qual. 33:1779–1785.
Widiastuti, T. and D. Astiani. 2001. Studi karakteris- tik tanah bekas pertambangan emas rakyat dan suksesi vegetasinya di sekitar hutan kerangas kecamatan Mandor kabupaten Landak. Laporan Penelitian Dosen Muda DIKTI. Pontianak.
Yu, Y., S. Zhang, H. Huang. 2010. Behavior of mer- cury in a soil–plant system as affected by inocu- lation with the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus mosseae . Mycorrhiza 20:407–414.
o