Jurnal Vitek Bidang Kedokteran Hewan Vol.13 No.2, November 2023

## DAUN BINAHONG SEBAGAI BAKTERIOSTATIK
Sampurna Arya B, P 1 , Widhowati 2* , Hidayah, N 3
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Wijaya Kusuma Surabaya
email: dyahwidho@gmail.com
Received : 4 November 2023 Accepted : 10 November 2023 Published : 21 November 2023

## Abstract
This study aims to determine the sensitivity of binahong leaf (Anredera cordifolia) extract   against Salmonella sp. with 5 treatments, namely concentrations of 60%, 80% and 100%. The positive control was chloramphenicol and the negative control was blank disk.Susceptibility test against bacteria was carried out using the disk diffusin method ( Kirby-bauer).  The  results  of  this  study  indicated  that  binahong  leaf  extract  at concentrations  of  60%,  80%  and  100%  is  able  to reduce  the  growth  of Salmonella  sp , The  phytochemical  of  Binahong  leaf  extract  contain  antibacterial  active  ingredients include  Saponins,  alkaloids,  tannins,  phenol  .  The  inhibition  zone  from  Binahong  leaf extract was smaller than that of antibiotic chlorampenicol
Keywords: Binahong  Leaf  Extract,  Salmonella  sp,  Chlorampenicol,  Inhibitory  Zone, Phytochemicals .

## PENDAHULUAN
Salmonellosis masih menjadi penyakit yang angka kematian tertinggi pada unggas ( 46,6%) dan  menyebabkan  kerugian  ekonomi  di  dunia perunggasan  (Xinghua, et al ., 2017). Menurut Pui  C.F., et.  al (2011),  salmonellosis  tidak hanya  menyerang  pada  unggas,  dapat  juga menyerang  pada  manusia  yang  penularannya melalui olahan pangan asal hewan. Disebutkan angka  kematian  akibat  infeksi Salmonella sp. pada  manusia  akibat  dari  olahan  pangan  asal hewan sekitar 93,8 juta kasus.
Cara pencegahan Salmonellosis pada hewan menggunakan cara menyemprotkan biosecurity pembersihan  kandang  atau  menyemprotkan desinfektan di seluruh sudut kandang.
Kasus  penyakit  yang  disebabkan  oleh Salmonella sp.  pada  ayam  petelur  atau
pedaging  penanganan  sering  menggunakan antibakteri  spectrum  luas  yang  seharusnya dihindari  pemakaiannya.  Salah  satu  contoh antibakteri  yang sering  digunakan pada kasus infeksi  Salmonellosis  adalah  antibiotik  jenis golongan  beta  lactam,  Aminoglikosida  dan fluorokuinolon  untuk  mengendalikan  infeksi usus atau mengobati penyakit infeksira sistemik ( Rafael A, et,al.,2016) .
Timbulnya resistensi terhadap suatu antibiotic  pada  tahun  terkini  menunjukkan peningkatan,      keadaan  ini  terjadi  akibat  dari pemakaian penggunaan  antibiotik yang kurang bijak. Efek dari resistensi adalah infeksi bakteri yang akan diobati antibiotika tidak menimbulkan  kemajuan  kearah  kesembuhan (Pratiwi, 2017).
Binahong  yang  bahasa  latinya  adalah Anredera  cordifolia .,  adalah  tanaman  yang sudah  dikenal  lama    di  Indonesia  sebagai
tanaman  yang  yang  dapat  menyembuhkan demam tiphoid,
enteritis, stomatitis, pembesaran  hati  dan  jantung.  (  Hesti    dkk., 2015).  Jenis  senyawa  yang  terkandung    pada daun  binahong  adalah  alkaloid,  polifenol, flavonoid, saponin dan antrakuinon. Senyawa – senyawa diatas sudah diketahui bahwa bersifat bakteriotsatik ( Ade dan Nurul, 2019)
Adanya  kandungan  antibakteri  pada  daun binahong  perlu  dilakukan  penelitian  potensi ekstrak  binahong  sebagai  bakteriostatik  alami terhadap bakteri penyebab Salmonellosis

## MATERI DAN METODE

## Lokasi Dan Waktu
Uji kepekaan dilakukan tanggal 1 Mei – 25 Mei  2022,  yang  sebelumnya  diawali  dengan pembuatan ekstrak daun binahong, dilanjutkan uji  kwalitatif  kandungan  fitokimia    dan  uji sensitivitas.  Pelaksanaan  uji-uji  tersebut    di Laboratorium  Mikrobiologi      Fakultas  Ilmu
Kesehatan Universitas Muhammadiyah Sidoarjo Alat dan Bahan Peralatan yang digunakan meliputi: autoklaf,  incubator,  spektrofotometri,  vortex, jangka  sorong,  mikropipet  dan  yellow  tip, petridish, spreader glass , tabung reaksi dan rak tabung reaksi, tabung erlenmeyer, ose, bunsen, pipet, spuit 1 ml, aluminium foil, laminar flow, masker dan sarung tangan
Bahan  yang  digunakan  yaitu:  koloni Salmonella sp.,  ekstrak  daun  binahong,  media uji  kepekaan  bakteri Mueller-Hinton  Agar (MHA), Media Pepton water ,  standard larutan Mc.  Farland  0,5, Natrium  karboksilmetil selulosa (CMC - NA), antibiotik kloramfenikol 30µg dan cakram disk, aquadest steril

## Metode Penelitian
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental  dengan  5  perlakuan  masing- masing yaitu  perlakuan menggunakan  ekstrak daun binahong dengan  konsentrasi 60% ( P1), konsentrasi  80%  (  P2),  dan  konsentrasi  100% (P3) dan kontrol positif menggunakan antibiotik kloramfenikol, sedangkan kelompok kontrol negatif menggunakan blank disk. Lima perlakuann tersebut kemudian diulang sebanyak 5 kali ulangan, sehingga total ada 25 sampel.  Rancangan penelitian yang digunakan adalah rancangan acak lengkap ( RAL)

## Sampel Penelitian
Bakteri yang dipergunakan sebagai  sampel adalah  koloni Salmonella sp.  yang  sudah disetarakan  dengan  Mc.Farland  0,5,  kemudian diisolasi  dipermukaan  media Mueller  Hinton Agar (MHA). Bakteri tersebut ditantang dengan ekstrak  daun  binahong    dengan  metode  difusi kertas  cakram  ( Kirby-bauer) untuk  melihat kepekaan  terhadap  lima  perlakuan  (ekstrak daun  binahong  konsentrasi  60%,80%,  100%, Kloramfenikol    dan  blank  disk)  dan  masing masing dulang lima kali.

## Ekstrak Daun Binahong
Pembuatan larutan ekstrak daun binahong.terdiri dari:
a. Konsentrasi  ekstrak  daun  binahong 60%    yaitu,  0,6  gr  ekstrak  daun binahong  ditambah dengan  pelarut CMC- NA sampai 1 ml
b. Konsentrasi  ekstrak  daun  binahong 80%    yaitu,  0,8  gr  ekstrak  daun binahong  ditambah dengan  pelarut CMC- NA sampai 1 ml
c. Konsentrasi  ekstrak  daun  binahong 100%    yaitu,  1  gr  ekstrak  daun binahong  ditambah  dengan  pelarut CMC – NA sampai 1 ml

## Uji kepekaan antibakteri
Isolat bakteri Salmonella sp : Isolat Salmonella sp.  yang  sudah  diuji kemurniannya  dengan  mengkultur    dalam media  selektif Salmonella  Shigella  Agar ( SSA)  kemudian  inkubasi  suhu  37  derajat Celsius,  selama  24  jam.  Kemudian  dilanjut dengan  pewarnaan  Gram  dan  uji  biokimia  ( TSIA,  SIM,  Urease,  SCA,  MR/VP).  Setelah dipastikan isolate murni dilanjukan pembuatan suspense

## Suspensi  Salmonella  sp.  setara  dengan Mc.Farland 0,5 :
Isolat murni bakteri sampel dikultur selama 24  jam  pada  media Pepton  Water ,  diinkubasi pada  suhu  37°C  selama  6  jam.  Kemudian suspense Salmonella  sp dalam  pepton  water disetarakan kekeruhannya  dengan standart Mc Farland 0,5 (10 5 -10 8 /ml) menggunakan spektrofotometer.  Bakteri  yang  terkandung dalam  suspensi  kurang  lebih  1-  10  juta  sel bakteri.

## Metode Difusi Cakram (Kirby-Bauer)
Tujuan  dari  metode  difusi  cakram  ini adalah  untuk  melihat  zona  hambat  yang terbentuk  dari  suspensi  bakteri  yang  ditantang oleh beberapa perlakuan tersebut diatas ,  yaitu dengan  cara  suspense  bakteri  diteteskan  di media MHA, diratakan menggunakan spreader glass sampai  rata  dipermukaan  media  dan didiamkan hingga kering.
Kemudian menempelkan cakram  disk kontrol  positif yaitu  Kloramfenikol,  control  negatif  dengan blank disk dan cakram disk yang direndam oleh ekstrak daun binahong konsentrasi 60%, 80%, 100%  .    Penempelan cakram  disk pada  media sebaiknya diberi ruang diantara masing masing cakram  MHA.  Selanjutnya  media  yang  berisi bakteri  tantang  dan  berbagai cakram  disk perlakuan di masukkan dalam incubator dengan suhu  37°C  selama  ±24  jam,  Pelaksanaan  uji diffuse  tersebut  diulang  lima  kali  pada  setiap perlakuan. Zona hambat yang terbentuk berupa zona  bening    di  sekeliling cakram  disk .  Zona bening  di  amati  dan  diukur  dengan  jangka sorong..

## Parameter Penelitian
Kandungan fitokimia kualitatif dari ekstrak daun binahong dan pembentukan zona hambat berfungsi  sebagai  parameter  penelitian.  Zona hambat  di  sekitar  kertas  cakram  disk merupakan  kepekaan  bakteri  terhadap  bahan yang diuji .
Suatu bahan dikatakan mempunyai aktivitas antibakteri  apabila  diameter  hambatan  yang terbentuk  lebih  besar  sama  dengan  6  mm  ( Warbung, 2013)

## Analisis Data
Untuk  mengetahui kepekaan  ekstrak  daun binahong  sebagai  antibakteri    terhadap Salmonella sp. digunakan  analisis    Rancangan Acak Lengkap (RAL). Hasil data yang didapat dilanjutkan  dengan  ANOVA  ( analysis  of varian ) dan taraf kepercayaan yang digunakan dalam penelitian ini α= 0,05.
HASIL
Tabel 1. Kandungan fitokimia secara kualitatif ekstrak daun binahong
Parameter            Hasil       Keterangan Alkaloid               +              positif
Flavonoid             +              positif lemah Fenolik                 +              positif lemah Saponin                ++            positif sedang Tanin                    +              positif
Hasil  pengujian    kepekaan  ekstrak  daun binahong  dengan  tiga  macam  konsentrasi  ( 60%,80%,  100%)  terhadap Salmonella sp. dengan  metode  difusi  cakram  ( Kirby-  bauer ) ditunjukkan pada gambar 1 :

## A2

## A1     A3

## A                           B                            C
A. Kloramfenicol (kiri) , Konsentrasi 60% (atas) , blank disk ( kanan)
B. Kloramfenicol (kiri) ,Konsentrasi
80%(atas), blank disk ( kanan)
C. Konsentrasi  100%(atas)  ,  Kontrol(-) blank dis k (kanan )
Gambar  1. Uji  kepekaan  konsentrasi  ekstrak daun  binahong  60%,  80%,  100% terhadap pertumbuhan Salmonella sp,  Kloramfenikol, dan blank disk
Tabel 2. Diameter Zona Hambat pertumbuhan Salmonella sp.
Perlakuan Diameter ± SD (mm) P0- (Blank disk) P0+(Kloramfenikol) P1 60% P2 80% P3 100% 6 ± 0 a 19,30 ± 3,23 b 6,37 ± 0,34 ac
7,03 ± 0,66 ac 8,24 ± 0,69 c
Hasil  uji  ANOVA  dari  terbentuk  zona hambat pada perlakuan blank disk, kloramfenikol  dan  tiga  macam  konsentrasi ekstrak  daun  binahong  ditunjukkan  dengan superskrip yang berbeda yaitu a, b, ac,ac dan d. Jika  superskrip  menunjukkan  huruf  yang tidak  sama    diartikan  berbeda  nyata  (P<0,05)
dan jika huruf nya sama diartikan tidak  berbeda nyata (P>0,05).
Gambar 2. Diagram rata-rata luas zona bening (mm)  kelompok kelompok perlakuan

## PEMBAHASAN
Hasil penelitian dan analisis data menunjukkan  bahwa  zona  hambat  yang terbentuk  dari  kloramfenikol  berbeda  nyata dengan  ekstrak  daun  binahong  antara  60  %, 80%, dan 100%. Interpretasi zona hambat yang terbentuk  oleh  kloramfenikol  30ug  sebagai kontrol  positif  adalah  sensitif  karena  diameter yang terbentuk sebesar 19,30 mm. Zona hambat yang  terbentuk  dari  ekstrak  daun  binahong konsentrasi 60%( 6,37 mm), 80% ( 7,03 mm), 100%      (8,24  mm)  adalah    termasuk  resisten menurut  standart  zona  hambat  yang  terbentuk pada kloramfenikol  (CLSI , 2018).
Menurut  Rahmawati  (2015),  zona  hambat yang  terbentuk  dari  antibakteri  alami,  dinilai kategori  daya  hambat  kuat  jika  ukuran  zona hambat  adalah  10  –  20  mm,    zona  hambat kategori  sedang  jika  ukuran  zona  hambat sebesar 5 -10 mm,
Berdasar  pada  ukuran  zona  hambat tersebut  diatas,  zona  hambat  yang  terbentuk oleh ekstrak daun binahong 60%  sebeasar 6,37 mm  dinilai sebagai antibakteri alami yang daya hambatnya  sedang.    Ekstrak  daun  binahong 80% yang terbentuk 7,03 mm berarti juga daya hambatnya  sedang.  Konsentrasi  100%  ekstrak daun  binahong  100%  termasuk  sedang  karena ukuran zona  8,24 mm. (Rahmawati, 2015)
Kandungan antibakteri dalam daun binahong  antara  lain  saponin,  flavonoid, fenolik, alkaloid dan tannin mempunyai potensi sebagai antibakteri meskipun hasil zona hambat 6,36 – 8,23 mm ( Kurniawan, 2015).
Saponin mengandung zat yang membentuk komplek  polisakarida  pada  dinding  sel  yang mekanisme  kerjanya  adalah  menurunkan tegangan  permukaan  dinding  sel  bakteri, berakibat  terjadinya  gangguan  permeabilitas membrane  sehingga  menyebabkan  sel  protein dan  enzim  yang  berada  dalam  sel  mengalir keluar  sel,  mengakibatkan      sel  bakteri mengalami lisis ( Ernawati, 2015).
Alkaloid  mengandung  komponen  kimia berupa  Antrakuinon  glikosida  dan  resin  yang mampu  menembus  dinding  sel  dan  bersifat menghambat  replikasi  DNA  pada  inti  sel, sehingga  merusak  sel  bakteri  (  Mesy et  al. ,
2023)
Tanin merupakan salah satu senyawa aktif metabolit yang mampu mengikat radikal bebas dengan melarutkan lemak pada sel dan jaringan serta  menyebabkan  denaturasi  protein  dan DNA pada inti sel bakteri sehingga sel bakteri menjadi lisis (Venila M ., et al., 2020 )
Flavonoid    sebagai  salah  satu  bahan  anti bakteri,  merupkan  turunan  dari  phenol  yang mempunyai  peran  mampu  menembus  sel bakteri dengan cara absorbsi dan setelah berada dalam sel bakteri berpotensi untuk mendenaturasi  protein  bakteri,  menghambat fungsi enszim dalam sel bakteri dan mengganggu  metabolism  bakteri  sehingga bakteri mengalami lisis. ( Gulfraz et al ., 2014; Purwantiningsih, dkk., 2019) ),
Hipotesa  dalam  penelitian  ini  diterima, karena  ekstrak  daun  binahong  60%,80%  dan !00%  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Salmonella  sp., ditandai  dengan terbentuknya  zona  hambat  pada  media  MHA. .Potensi  antibakteri  ekstrak  daun  binahong dengan  konsentrasi  60%,  80%,  100%  yang ditantang  dengan Salmonella sp.,  semakin tinggi  konsentrasinya  ,  semakin  besar  ukuran zona  hambat  yang  dihasilkan,  akan  tetapi ukurannya  lebih  kecil  jika  dibandingkan dengan  antibiotik  Kloramfenikol  sebagai kontrol positif.

## KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah bahwa ekstrak  daun  binahong  mempunyai  potensi sebagai  antibakteri  alami  karena  mempunyai kemampuan  dalam  hambatan  pertumbuhan bakteri .  Konsentrasi  ekstrak  daun  binahong yang  menghasilkan  zona  hambatnya  terbesar adalah  100%,  diikuti  80%  dsn  yang  terkecil adalah 60%.
0 5 10 15 20 25 K(-) K(+) 60% 80% 100%
Diagram

## REFERENSI
Ade,  Nurul  H.,  2019.  Pemilihan  Prioritas Pemanfaatan  Daun  Binahong  ( Psidium guajava L. ) terhadap Salmonella pullorum secara invitro.Jurnal Ilmiah Ibnu Sina. Vol 3 (2) : 353-360
Clinical  and  Laboratory  Standards  Institute . 2014. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing;
Twenty-Second Informational Supplement . West Valley (US): Clinical and Laboratory Standards Institute.
Ernawati  dan  Kumala  S.,  2015.  Kandungan
Senyawa  Kimia dan Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Kulit  Buah  Alpukat  ( Persea
Americana  P.  Mill) terhadap  Bakteri Vibrio alginolyticus. Jurnal Kajian Veteriner 3 (2) : 203-211
Gulfraz, M., M. Imran and S. A. Khaam. 2014. Comparative  study  of  antimicrobial  and antioxidant  activities  of  garlic  (Allium sativum  L)  extract  in  various  localities  in Pakistan .  Africa  Journal  Plant  Science
8(6):298–306.
Hesti, Fajar U, .2015 Kualitas Daun Binahong
( Anredera cordifolia ) pada Suhu Pengeringan Berbeda. Jurnal Biologi 4 (2)
: 51-59
Kurniawan B., Wayan FerlyA., 2015. Binahong (Cassia  Alata  L.)  as  inhibitor  of Escherichia  coli  growth.  Medical  Journal of Lampung University. 4 (4): 100-104 Merino,  L.,  Procura,  F.,  Trejo,  F.M.,  Bueno, D.J.  and  Golowczyc,  M.A., 2019. Biofilm formation by Salmonella sp. in the poultry industry: Detection, control and eradication strategies . Food Research International, 119, pp.530-540.
Mesy M., Linda, A., Violita, Moralita C. 2023.
Karakteristik dan Fungsi Senyawa Alkaloid sebagai antifungi pada tumbuhan. Serambi  Biologi.ppj.unp.ac.id  vol.8  No.2
pp.231-236
Pratiwi,  R.H.,  2017.  Mekanisme  pertahanan bakteri patogen terhadap antibiotik. Jurnal Pro-Life :  Jurnal  Pendidikan  Biologi,
Biologi, dan Ilmu Serumpun, 4(3), pp.418- 429.
Purwatiningsih, T. I., A. Rusae, dan Z. Freitas. 2019. Uji  in  vitro  antibakteri  ekstrak bawang  putih  sebagai  bahan  alami  untuk menghambat bakteri Staphylococcus aureus  dan  Escherichia  coli .  Jurnal  Sains Peternakan. 17(1):1-4.
Pui  C.F.,  Wong  W.C.,  Chai  L.C.,  Tunung  R.,
Jeyaletchumi  P.,Noor  H.M.N.,  Ubong A.,Farinazleen M.G., Cheah Y.K. and Son R.,A foodborne pathogen Int.Food Res J., 18(1):465-473
Rafael A. et al. 2016. Antimicrobial susceptibilility  of  Salmonells  gallinarum and Salmonella pullorum isolated from ill poultry  in  Brazil.  Journal  Microbiology. 46(3):513-518 Rachmawaty,  D.U.  2016. Uji  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol, Etil Asetat Dan Petroleum  Rambut  Jagung  Manis  (Zea Mays Ssaccharata Sturt) Terhadap Bakteri Bakteri Staphylococcus Aureus dan Escherichia  Coli .  Skripsi.Fakultas  Sains dan  Teknologi,  Universitas  Islam  Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang.
Venila  M.,  Fatimawali,  Gerald  R.,  2020.
Analisis  Senyawa  Tanin  dan  Aktifitas Antibakteri Fraksi  Buah Sirih ( Piper betle L.) terhadap Streptococcus mutans. Jurnal
MIPA. Vol 9 (2) 75-80. https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jmu o/index Warbung Y. Y., V.N.S. Wowor  dan J.Posangi.2013.  Daya  Hambat  Ekstrak
Spon  Laut  Callyspongia  sp.  terhadap Pertumbuhan  Staphylococcus  aureus.  E- jurnal 1(2): 1-12 [https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/egi
gi/article/view/3151]
Xinghua Li, et. al. 2018. Evaluation of genetic resistance to Salmonella pullorum in three chicken lines. Journal Puoltry Science 97:
764-769.