## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETIL ASETAT KULIT AKAR SENGGUGU ( Clerodendrum serratum ) ASAL IMOGIRI, YOGYAKARTA
Nasrudin 1,2) , Wahyono 3) , Mustofa 4) dan Ratna Asmah 3 )
e-mail : nasrud_la@yahoo.co.id
1) Mahasiswa Program  Studi S3 Ilmu Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
2) Universitas Halu Oleo, Kendari, Sulawesi Tenggara
3) Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta
4) Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta

## ABSTRACT
Senggugu  ( Clerodendrum  serratum )  is one of  the  potential  plants  as  the source of natural antioxidant. Traditionally, some Asian countries, as well as Indonesia, has been applied this plant for  treatment  in  various  diseases.  The  leaf  and  stems  of Clerodendrum  pholimidis and Clerodendrum viscosum that are the same genus with senggugu indicated that they are potential as an antioxidant. The Senggugu plants growing in India, China and Malaysia have been reported that the  extracts  of  the  plant  are  also  active  as  an  antioxidant.  The  objective  of  this  work  is  to  study antioxidant  activity  of  ethyl  acetate  extracts  of  the  senggugu  root-stem  collected  from  Imogiri, Yogyakarta.  The  extract  was  obtained  through  sequential  maceration  technique  using  n-hexane, ethyl acetate, and methanol solvents. The antioxidant activity of the extract was then examined by DPPH (2,2-dipphenyl-1-pycryl hydrazyl) and rutin as the standard antioxidant. The results showed that the ethyl acetate extracts of root-stem of the senggugu have antioxidant activity property with IC 50 of 30.968±0.686 µg/mL and IC 50 of 1.741±0.091 µg/mL for rutin as the standard antioxidant.
Key words: Root-stem, Clerodendrum serratum , antioxidant

## PENDAHULUAN
Senggugu  ( Clerodendrum  serratum )  merupakan  salah  satu  tumbuhan  yang  berpotensi menjadi  sumber  antioksidan  alami.  Secara  etnobotani,  tumbuhan  ini  telah  dimanfaatkan  sebagai obat  rakyat  di  India,  China,  Thailan,  Korea  dan  Jepang.  Senggugu  digunakan  secara  tradisional untuk  mengobati  berbagai  penyakit,  diantaranya  sipilis,  tipoid,  kanker,  penyakit  kuning  dan hipertensi  (Shrivastava  dan  Patel,  2007).  Senggugu  di  Indonesia  merupakan  salah  satu  obat tradisional untuk asma, bronkitis, peluruh air seni, obat batuk dan untuk memperoleh suara yang jernih (Heyne, 1950).
Eksplorasi  terhadap  aktivitas  biologis  ekstrak Clerodendrum  serratum di  Indonesia  yang dikenal dengan nama senggugu telah banyak dilakukan, utamanya spesies yang tumbuh di India. Bagian  tumbuhan  senggugu  yang  sudah  dilaporkan  aktivitas  ekstraknya  antara  lain,  daun menunjukkan aktivitas antioksidan dan antibakteri (Prasad dkk., 2012), aerial parts menunjukkan aktivitas  antioksidan  (Ismail  dan  Leelavathi,  2011),  sedangkan  akar  menunjukkan  aktivitas antioksidan,  antikanker,  hepatoprotektif,  antinosiseptif,  anti-inflamasi  dan  antipiretik  (Narayanan dkk., 1999; Vidya dkk., 2007).
Senggugu  di  Indonesia  yang  dilaporkan  adalah  ekstrak  kulit  akar  menunjukkan  aktivitas mukolitik  (Wahyono,  1998),  anti-inflamasi  (Wahyono,  2001)  dan  trakeospasmolitik  (Wahyono, 2004).  Namun,  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat  kulit  akar  senggugu  khususnya  dari daerah  Imogiri  Yogyakarta  belum  banyak  dilaporkan.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat  kulit  akar  senggugu  asal  Imogiri Yogyakarta.

## METODE PENELITIAN

## Bahan Penelitian
Bahan  tumbuhan  yang  digunakan  sebagai  sampel  adalah  kulit  akar  senggugu ( Clerodendrum serratum ) yang diperoleh dari daerah Imogiri Yogyakarta. Pelarut yang digunakan untuk mengekstraksi sampel yaitu etil asetat. Bahan uji aktivitas antioksidan menggunakan radikal DPPH (Sigma) dan rutin (Sigma) sebagai antioksidan standar.

## Alat Penelitian
Alat  yang  akan  digunakan  untuk  ekstraksi  yakni  seperangkat  alat  gelas  laboratoroum  dan vakum evaporator (Buchi Rotavapor R-125). Alat yang digunakan untuk uji aktivitas antioksidan adalah mikropipet, spektrofotometer UV- vis (Shimadzu UV-1800, Kyoto, Japan).

## Pembuatan Ekstrak Etil Asetat Kulit Akar Senggugu
Ekstraksi kulit akar senggugu  dilakukan  dengan  cara  maserasi bertingkat,  mulai n -heksan, kemudian etil asetat. Filtrat hasil ekstraksi dipekatkan sehingga diperoleh ekstrak kental etil asetat. Ekstrak tersebut selanjutnya diuji aktivitas antioksidannya.

## Uji Aktivitas Antioksidant Ekstrak Etil Asetat Kulit Akar Senggugu
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  uji  aktivitas  penangkapan  radikal  DPPH berdasarkan  metode  yang  dilakukan  Samal  dan  Dangi  (2014).  Aktivitas  penangkapan  radikal bebas  ekstrak  dievaluasi  menggunakan  stabilitas  radikal  DPPH.  Larutan  ekstrak  etil  asetat (sampel)  dalam  etanol  dibuat  dengan  variasi  konsentrasi  (3,91;  7,81;  15,63;  31,25  dan  62,50) µg/mL.  Sebanyak  1,0  mL  larutan  tersebut  ditambahkan  1,0  mL  larutan  DPPH  (0,1  mM)  dalam etanol,  kemudian  didiamkan  selama  35  menit  pada  suhu  27 0 C.  Absorbansi  sampel  diukur  pada 515,5  nm  dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV- vis (Shimadzu  UV-1800,  Kyoto,  Japan). Prosedur  yang  sama  dilakukan  untuk  rutin  sebagai  standar.  Aktivitas  penangkapan  radikal  bebas (APR) DPPH dinyatakan sebagai persentase, dihitung menggunakan persamaan :
𝐴𝑃𝑅  %  = 𝐴 𝐷𝑃𝑃𝐻 − (𝐴 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 − 𝐴 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 ) 𝐴 𝐷𝑃𝑃𝐻 𝑥 100%
Dimana,  A DPPH adalah  absorbansi  larutan  DPPH  (0,1  mM)  dalam  etanol  tanpa  sampel  uji, A sampel adalah absorbansi sampel uji yang dicampur dengan larutan DPPH (0,1 mM) dalam etanol dan A kontrol adalah absorbansi sampel uji tanpa larutan DPPH (0,1 mM) dalam etanol. APR DPPH sampel dibandingkan dengan rutin dengan konsentrasi yang sama.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  penangkapan  radikal  bebas  ( radical scavenging )  menggunakan  radikal  DPPH.  Pengukuran  aktivitas  antioksidan    dengan  metode  ini berdasarkan  pada  kemampuan  suatu  senyawa  uji  menangkap  radikal  dan  mengurangi  intensitas warna  radikal  DPPH  yang  diukur  oleh  spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  yang  telah ditentukan  sebelumnya,  yaitu  515,5  nm.  Hal  ini  sesuai  yang  dikemukakan  Molyneux  (2004) bahwa  panjang  gelombang  teoritis  untuk  pengukuran  DPPH  berkisar  antara  515  nm  –  520  nm. DPPH  merupakan  radikal  nitrogen  organik  yang  tidak  stabil.  DPPH  akan  tereduksi  oleh  proses donasi  hidrogen  atau  elektron  dan  warnanya  akan  berubah  dari  violet  ke  kuning.  Senyawa  yang dapat menyebabkan ini dapat dipertimbangkan sebagai antioksidan atau bahkan penangkap radikal (Halliwell  dan  Gutteridge  ,  2000).  Oleh  karena  itu,DPPH    sangat  penting  digunakan  untuk mengetahui  aktivitas  penangkapan  radikal  oleh  senyawa  polihidroksi  aromatik  (Nishizawa  dkk., 2005).
Penelitian ini menggunakan rutin sebagai antioksidan standar dalam melakukan uji aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat kulit akar senggugu. Rutin merupakan senyawa golongan flavonoid yang telah diketahui mempunyai aktivitas antioksidan. Struktur senyawa rutin menunjukan bahwa rutin  mempunyai  aktivitas  antioksidan  karena  adanya  gugus  –OH  fenolat.  Gugus  ini  yang

## Nasrudin
bertanggung jawab terhadap aktivitas antioksidan yang dimiliki oleh rutin. Penambahan senyawa yang bersifat antioksidan akan menyebabkan satu elektron bebas yang terdapat pada DPPH akan mengikat  H  yang  berasal  dari  senyawa  antioksidan,  sehingga  sifat  radikal  DPPH  akan  hilang. Hilangnya  sifat  radikal  bebas  ini  menyebabkan  tidak  terjadinya  delokalisasi  elektron  dalam molekul DPPH, sehingga warna violet lama-kelamaan akan berkurang intensitasnya. Pengurangan intensitas warna ini sebanding dengan jumlah radikal bebas DPPH yang ditangkap oleh senyawa antioksidan.  Persentase  berkurangnya  intensitas  warna  DPPH  sebanding  dengan  konsentrasi senyawa  antioksidan.  Parameter  yang  digunakan  untuk  aktivitas  antioksidan  dengan  metode penangkapan radikal DPPH ini adalah IC 50 yakni konsentrasi senyawa uji yang dibutuhkan untuk mengurangi  radikal  DPPH  sebesar  50%.  Nilai  IC 50 diperoleh  dari  suatu  persamaan  regresi  linier yang  menyatakan  hubungan  antara  konsentrasi  senyawa  uji  dengan  persen  aktivitas  antioksidan (Zou dkk., 2004).
Hasil pengukuran menunjukkan bahwa aktivitas penghambatan radikal DPPH pada ekstrak etil  asetat  kulit  akar  senggugu  lebih  rendah  dibanding  rutin.    Pada  konsentrasi  yang  sama,  yaitu 15,625  µg/mL  misalnya,  ekstrak  etil  asetat  menunjukkan  aktivitas  penghambatan  radikal  DPPH sebesar 47,9 % sedangkan rutin mampu menghambat radikal DPPH sebesar 80,38 % sebagaimana ditunjukkan pada gambar 1.

## Gambar  1.  Persentase  aktivitas  penghambatan  radikal  DPPH  oleh  ekstrak  etil  asetat  kulit akar senggugu dan rutin
Selanjutnya,  berdasarkan  hasil  perhitungan  persentase  penghambatan  radikal  DPPH  pada setiap  konsentrasi  uji  malalui  persamaan  regresi  linear,  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat kulit akar  senggugu  dapat  ditentukan dengan IC 50 = 30,968  ±  0,686  µg/mL.  Sementara itu,  rutin sebagai  antioksidan  standar  menunjukkan IC 50 =  1.741  ±  0,091  µg/mL.  Hal  ini  membuktikan bahwa  rutin  memiliki  aktivitas  antioksidan  lebih  kuat  dibandingkan  ekstrak  etil  asetat  kulit  akar senggugu. Aktivitas antioksidan ekstrak etil asetat kulit akar senggugu lebih lemah dibanding rutin karena senyawa yang terkandung dalam ekstrak belum diketahui dengan pasti sifat keaktifan dan struktur senyawanya. Oleh karena itu, perlu dilakukan isolasi senyawa aktif dari ekstrak tersebut dan  uji  aktivitas  senyawa  isolat.  Rutin  memiliki  aktivitas  antioksidan  lebih  kuat  karena  rutin merupakan  senyawa  flavonoid  murni  dan  bersifat  aktif  sebagai  antioksidan  yang  tampak  dari struktur  molekulnya  yang  mengandung  sejumlah  gugus  hidroksil  serta  adanya  ikatan  rangkap terkonyugasi yang memberikan efek resonansi (Rice-evans dkk., 1995). Senyawa flavonoid dapat menunjukkan  aktivitas  antioksidan  dengan  beberapa  mekanisme,  salah  satu  diantaranya  adalah menangkap  langsung  radikal  bebas  (Procházková  dkk.,  2011).  Flavonoid  mampu  menangkap radikal  bebas  secara  langsung  dengan  menyumbangkan  radikal  hidrogen.  Radikal  menjadi  tidak aktif seperti ditunjukkan pada Gambar 2, dimana R• adalah radikal bebas dan Fl-O• adalah suatu radikal fenoksil flavonoid.
Aktivitas  antioksidan  tergantung  pada  susunan gugus  fungsi  dan  struktur  inti.  Konfigurasi keduanya  sangat  mempengaruhi  mekanisme  aktivitas  antioksidan  (Heim  dkk.,  2002).  Susunan hidroksil  pada  cincin  B  sangat  signifikan  mementukan  penangkapan  radikal  bebas  (Burda  dan
Rutin Ekstrak Etil Asetat Kulit Akar Senggugu 45 50 55 60 65 70 75 80 85 0 10 20 30 40 50 60 70 Persent ase Pengh ambatan DP PH Konsentrasi (µg/mL) Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etil Asetat Kulit Akar Senggugu
Oleszek, 2001), sedangkan subtitusi pada cincin A dan C, berpengaruh sedikit pada penangkapan radikal anion superoksida (Taubert dkk., 2003; Amic dkk., 2007).
OH FI OH O FI OH R RH FI-OH FI-O B B O FI OH O FI O R RH FI-quinone FI-O B B
Gambar 2. Penangkapan spesies oksigen reaktif (R•) oleh flavonoid (Pietta, 2000)

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Nilai  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat  kulit  akar  senggugu  dengan  menggunakan  radikal bebas DPPH yang dinyatakan sebagai IC 50 sebesar (30,968 ± 0.686) µg/mL.

## Saran
Untuk  mengetahui  jenis  senyawa  yang  berperan  sebagai  antioksidan  pada  ekstrak  kulit  akar senggugu, maka perlu dilakukan isolasi senyawa aktif antioksidan yang terkandung dalam ekstrak etil asetat kulit akar senggugu.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kepada Dirjend  Dikti Kemenristek  RI yang telah  memberikan  biaya berupa BPPDN dalam mengikuti program pascasarjana S3 Ilmu Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

## Daftar Pustaka
Amic  D.,  Davidovic-Amic  D.,  Beslo  D.,  Rastija  V.,  Lucic  B.  and  Trinajstic  N.,  2007,  SAR  and QSAR of the Antioxidant Activity of Flavonoids, Curr. Med. Chem. , 14 ( 7 ), 827–845
Burda  S.  and  Oleszek  W.,  2001,  Antioxidant  and  Antiradical  Activities  of  Flavonoids, J.  Agric. Food Chem. , 49 (6), 2774–2779
Halliwell  B.  and  Gutteridge  J.M.C.,  2000, Free  Radical  in  Biology  and  Medicine ,  Oxford University Press, New York
Heim  K.E.,  Tagliaferro  A.R.  dan  Bobilya  D.J.,  2002,  Flavonoid  Antioxidants:  Chemistry, Metabolism and Structure-Activity Relationships, J. Nutr. Biochem. , 13 (10), 572–584
Heyne  K.,  1950, Tumbuhan  Berguna  Indonesia ,  diterjemahkan  oleh  Badan  Litbang  Kehutanan, Jilid III Ed. I, 1686, Penerbit Yayasan Sarana Wanarja, Jakarta
Ismail  S.M.  dan  Leelavathi  S.,  2011,  Evaluation  of  Antioxidant  of  Anisolmales  R  Br  and Clerodendrum  serratum L.  Extracts  against  Rheumatism, Res.  J.  Pharm.  Biol.  Chem. Sci. , 2 (4), 488–495
Molyneux  P.,  2003,  The  Use  of  Stable  Free  Radical  Diphenylpicryl  Hydrazyl  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin J. Sci. Tecnol., 26 (2), 211-219
Narayanan  N.,  Thirugnanasambantham  P.,  Vismanthan  S.  and  Vijayasekaran  V.,  1999,
Antinociceptive,  Anti-inflammatory  and  Antipyretic  Effects  of  Ethanol  Extract  of Clerodendron  serratum Roots  in  Experimental  Animals, J.  Ethno-Pharmacol. , 65 (1999), 237–241
Nishizawa  M.,  Kohno  M.,  Nishimura  M.,  Katigawa  A.  dan  Niwano  Y.,  2005,  Non-reductive Scavenging  of  1,1-diphenil-2-picryllhhydrazil  (DPPH)  by  Peroxyradical:  A  useful Method for Quatitatif Analysis and Peroxyradical, J .Chem. Pharm , 53 , 714-716
Pietta P.G., 2000, Flavonoids as Antioxidants, J. Nat. Prod. , 63 ( 7 ), 1035–1042
Prasad  M.P.,  Sushant  S.  and  Chikkaswamy  B.K.,  2012,  Phytochemical  Analysis,  Antioxidant Potential,  Antibacterial  Activity  and  Molecular  Characterization  of Clerodendrum serratum species, Int. J. Mol. Biol. , 3 (3), 71–76
Procházková D., Boušová I. and Wilhelmová N., 2011, Antioxidant and Prooxidant Properties of Flavonoids. Fitoterapia , 82 (4), 513–523
Rice-evans C.A., Miller N.J., Bolwell P.G., Bramley P.M. dan Pridham J.B., 1995, The Relative Antioxidant  Activities  of  Plant-derived  Polyphenolic  Flavonoids, Free  Radic.  Res. , 22 (4), 375–383
Samal  P.K.  dan  Dangi  J.S.,  2014,  Isolation,  Preliminary  Characterization  and  Hepatoprotective Activity of Polysaccharides from Tamarindus indica L., Carbohydr. Polym. , 102 , 1–7
Shrivastava  N.  and  Patel  T.,  2007, Clerodendrum and  Heathcare:  An  Overview, Med.  Aromat. Plant Sci. Biotechnol. , 1 (1), 142–150
Taubert D., Breitenbach T., Lazar A., Censarek P., Harlfinger S., Berkels R et.al ., 2003, Reaction Rate  Constants  of  Superoxide  Scavenging  by  Plant  Antioxidants, Free  Radic.  Biol. Med. , 35 (12), 1599–1607
Vidya  S.M.,  Krishna  V.,  Manjunatha  B.K.,  Mankani  K.I.,  Ahmed  M.  and  Singh  S.D.J.,  2007, Evaluation  of  Hepatoprotective  Activity  of Clerodendrum  serratum L., Indian  J.  Exp.
Biol. , 45 , 538–542
Wahyono, 1998, Isolasi Senyawa Aktif dari Kulit Akar dan Kulit Batang Clerodendron serratum Spreng.  yang  Berkhasiat  sebagai  Mukolitik, Laporan  Penelitian ,  Majalah  Farmasi Indonesia, Lembaga Penelitian UGM, Yogyakarta
Wahyono,  2001,  Isolasi  Senyawa  Aktif  dari  Kulit  Akar Clerodendron  serratum Spreng.  yang Berkhasiat  sebagai  Anti-inflamasi, Laporan  Penelitian ,  Majalah  Farmasi  Indonesia, Lembaga Penelitian UGM,Yogyakarta
Wahyono, 2004, Isolasi dan Karakterisasi Senyawa yang Berkhasiat Trakeospasmolitik dari Kulit Akar  Senggugu  ( Clerodendron  serratum Spreng.), Laporan  Penelitian , Grant  Que Proyect -Fakultas Farmasi UGM, Yogyakarta
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etil Asetat Kulit Akar Senggugu
Zou  Y.,  Lu  Y.  and  Wei  D.,  2004,  Antioxidant  activity  of  Flavonoid-rich  extract  of Hypericum perforatum L. in vitro , J. Agric, Food Chem , 52 , 5032-5039
Nasrudin