## INTENSITAS DAN WAKTU ESTRUS PADA BERBAGAI PARITAS INDUK SAPI PERAH FRIES HOLLAND PASCA PARTUS
Bambang Hadisutanto 1) ; Bambang Purwantara 2) ; Siti Darodjah 3)
1) Program Studi Produksi Ternak Politeknik Pertanian Negeri Kupang, 2) Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor, 3) Fakultas Peternakan Universitas Padjajaran Bandung

## ABSTRACT
Profile Intensity And  Estrus Time In Various Parity Fries Holland Dairy Cattle  Postpartum .  Parity  is  a  period  in  the  reproductive  cycle  of  cattle  with an  indication  of  the  amount  of  carrier  confinement  livestock.    Feliciano,  et  al, (2003)  states  that  the  parity  is  classified  into  three  parts,  namely:  (1) nuliparous , (2) primiparous and (3) pluriparous / multiparous. This study used one-way classification design with the observed 90 cows  post- partum  is composed of 30 first parity,  30 second parity   and  30  third parity. Time  of  estrus  observation  data  were  analyzed  with  General  Linear  Model (GLM) followed by Duncan Multiple Range Test (DMRT).
This  study  used  one-way  classification  design  with  the  observed  90  cows post-partum   was composed  of 30 first parity,  30 second parity   and 30  third parity.  Data  observation  of    estrus  time    were  analyzed  with  General  Linear Model (GLM) followed by Duncan Multiple Range Test (DMRT).
It could be concluded that the parity  I, II and III with two estrus intensity (+ +), each for 63.3%, 46.7% and 73.4% and third estrus intensity (+ + +) respectively amounted to 36.6%, 53.3% and 26.6%. While the second estrus postpartum in various parity indicates a difference in means that the parity gives effect to the second  estrus  postpartum.  While  the  second  estrus  postpartum  in  various parity  indicated  a  significance  difference  that  the  parity  gave  effect  to  the second estrus postpartum.
Keywords: Fries Holland, Parity, Estrus Intensity, Estrus Time

## PENDAHULUAN
Paritas merupakan suatu periode dalam proses siklus reproduksi ternak dengan  indikasi  jumlah  partus  induk  ternak.  Paritas  digolongkan  menjadi  tiga bagian, yaitu: (1) nuliparous (sapi perah dara), (2) primiparous (induk sapi perah yang  sudah  partus  satu  kali)  dan pluriparous/multiparous (induk  sapi  perah yang  sudah  partus  lebih  dari  satu  kali)  (Feliciano,  dkk.,  2003).  Paritas  dapat memberikan  gambaran  aktualisasi  kematangan  fisik  induk  sapi  perah. Primipara  atau  induk  sapi  perah  yang  mengalami  satu  kali  partus  memiliki tingkat  kematangan  fisik  berkisar  82-90  %,  artinya  bahwa  induk  sapi  perah belum  mencapai  tingkat  pertumbuhan  yang  optimal  (Wathes,  dkk.,  2005). Sedangkan pluripara  atau induk sapi perah yang mengalami lebih dari satu kali partus sudah memiliki tingkat kematangan fisik.
Intensitas  estrus  atau  derajat  penampakan  estrus  merupakan  tanda- tanda yang membedakan penampilan estrus yang ditunjukkan oleh induk sapi. Katagori intensitas estrus 2 (++) penampilan estrus yang ditandai gejala gelisah, vulva  berwarna  merah,  agak  bengkak  dan  terdapat  lendir  transparan. Sedangkan  katagori  intensitas  estrus  3  (+++)  ditandai  oleh  gelisah  dan  sering melenguh terutama pada malam hari, vulva berwarna merah, agak bengkak dan keluar  lendir  transparan  dari  bagian  vulva.  Perilaku  estrus  akan diaktualisasikan melalui intensitas estrus dan kondisi tersebut akan bergantung pada  konsentrasi  estrogen  yang  disekresikan  oleh  folikel  de  Graaf  saat  estrus. Beberapa  hasil  penelitian  menyatakan  bahwa  intensitas  estrus  tidak dipengaruhi  oleh  paritas  induk  melainkan  disebabkan  faktor  manajemen  dan lingkungan serta fisiologis induk sapi terutama penurunan produksi susu yang disebabkan  oleh  stres  yang  berhubungan  dengan  pengaturan  suhu  tubuh, keseimbangan  energi  serta  perubahan  hormonal.  Hal  tersebut  mengganggu terhadap  keseimbangan  estrogen  sehingga  memengaruhi  performan  intensitas estrus (Yoshida dan Nakao, 2005).
Estrus  kedua  pasca  partus  akan  dialami  oleh  induk  sapi  yang  sudah mengalami keseimbangan energi positif karena titik nadir keseimbangan energi negatif  berlangsung  hingga  3  minggu  pasca  partus.  Kondisi  ini  berhubungan dengan  leptin,  insulin  dan insulin-like  growth  factor-I (IGF-I)  yang  mempunyai kontribusi  dalam  meningkatnya feed  intake dan  pengikatan  protein  bagi kepentingan pertumbuhan folikel serta maturasi folikel dominan sehingga terjadi peningkatan  estrogen  yang  akan  menimbulkan  estrus  kedua  pasca  partus  dan LH  bagi  kepentingan  ovulasi.  Estrus  kedua  pasca  partus  umumnya  digunakan sebagai  langkah  awal  dalam  melakukan  inseminasi  buatan  pertama  pasca partus.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  percobaan  Klasifikasi  Satu  Arah ( one  way  classification ).  Dalam  penelitian ini  diamati  90 ekor  induk  sapi  perah pasca partus yang terdiri dari 30 ekor induk paritas I, 30 ekor induk paritas II dan 30 ekor induk paritas III.
Kerangka  pengambilan  sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah Purposive  Random  Sampling berdasarkan  paritas  induk  kesatu,  kedua dan  ketiga  (Supranto,  2000).    Populasi  sapi  yang  diambil  adalah dara  bunting, induk  paritas  kesatu  dan  induk  paritas  kedua  dengan  cara  melakukan  sensus semua  sapi  dara  bunting  dan  induk  bunting  yang  mempunyai  umur kebuntingan 7-9 bulan yang ada di lokasi penelitian. Dari hasil sensus tersebut diperoleh 110 ekor sapi yang terdiri dari dara bunting , induk paritas kesatu dan induk  paritas  kedua  yang  semuanya  dalam  kondisi  umur  kebuntingan  7-9 bulan.
Berdasarkan  Tabel  Krecjie  maka  untuk  jumlah  populasi  sebanyak  110 ekor  dibutuhkan  sampel  minimal  86  ekor  sapi  (dibulatkan  90  ekor)  (Sugiyono, 2003).  Dari  jumlah  populasi  tersebut  diambil  secara  acak  sebanyak  90  ekor dengan  perincian  masing-masing  30  ekor  dara  bunting,  induk  paritas  kesatu dan induk  paritas kedua yang mempunyai umur kebuntingan 7-9 bulan.
Data  pengamatan  performan  intensitas  estrus  dipersentasekan berdasarkan  intensitas  estrus  II  (++)  dan  III  (+++)  pada  setiap  paritas  induk. Sedangkan    data    waktu  estrus  kedua  pasca  partus  dianalisis  dengan menggunakan General Linear Model (GLM) procedure Statistical Analysis System (SAS) .  Melalui  prosedur  tersebut  juga  dilakukan Duncan’s Multiple  Range  Test (DMRT)  untuk  mengetahui  tingkat  siginifikansi  performan  waktu  estrus  kedua pasca partus antar paritas induk (Mattjik dan Sumertajaya, 2002; Hojsgaard & Jorgensen, 2006).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Intensitas Estrus
Hasil  persentase  intensitas estrus  2  (++)  dan  3  (+++)  pada  setiap  paritas induk  pada  estrus  kedua  pasca  partus  dapat  dilihat  pada  Grafik  1.  Perilaku estrus  akan  diaktualisasikan  melalui  intensitas  estrus  dan  kondisi  tersebut
akan  bergantung  pada  konsentrasi  estrogen  yang  disekresikan  oleh  folikel  de Graaf  saat  estrus.  Beberapa  hasil  penelitian  menyatakan  bahwa  intensitas estrus  tidak  dipengaruhi  oleh  paritas  induk  melainkan  disebabkan  faktor manajemen  dan  lingkungan  serta  fisiologis  induk  sapi  terutama  penurunan produksi  susu  yang  disebabkan  oleh  stres  yang  berhubungan  dengan pengaturan  suhu  tubuh,  keseimbangan  energi  serta  perubahan  hormonal.  Hal tersebut  mengganggu  terhadap  keseimbangan  estrogen  sehingga  memengaruhi performan intensitas estrus (Yoshida dan Nakao, 2005).
Grafik 1. Intensitas Estrus Berbagai Paritas Induk Sapi Perah Fries Holland Pasca Partus
Berdasarkan data tersebut di atas bahwa performan intensitas estrus dari 30 ekor induk sapi perah pada setiap paritas induk menunjukkan bahwa paritas induk I, II dan III dengan intensitas estrus 2 (++) masing-masing sebesar 63,3 %, 46,7 % dan 73,4 % dan intensitas estrus 3 (+++) masing-masing sebesar 36,6 %, 53,3 % dan 26,6 %. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa induk paritas I dan III memberikan  performan  intensitas  estrus  2  (++)  masing-masing  sebesar (63,3  %)  dan  (73,4  %)  lebih  besar  dibandingkan  induk  paritas  II  (46,7  %). Sedangkan  induk  paritas  II  memberikan  performan  intensitas  estrus  3  (+++) (53,3 %) lebih besar dibandingkan induk paritas I (36,6 %) dan induk paritas III (26,6 %).
Perubahan  manajemen  pakan  yang  terjadi  musim  dingin  dan  musim panas  pada  daerah  empat  musim  akan  menimbulkan  stres  sehingga memengaruhi  intensitas  estrus  (Nebel,  2003).  Induk  laktasi  memiliki
kemampuan menghasilkan folikel dominan yang mampu diovulasikan lebih dari satu  ( double ovulating )  dibandingkan  sapi  dara.  Hal  ini  menyebabkan  volume folikuler  saat  estrus  meningkat  sehingga  terpenuhinya  ketersediaan  estrogen bagi estrus dan kondisi tersebut teraktualisasi dalam intensitas estrus. Sartori, dkk., (2002) mengungkapkan bahwa induk sapi laktasi (primipara dan pluripara) mempunyai  volume  folikuler  (2674,4±126,8  mm³)  lebih  banyak  dibanding  sapi dara (2202,8±168,5 mm³). Hal tersebut menunjukkan bahwa paritas induk tidak berpengaruh terhadap performan intensitas estrus.
Perbedaan relatif antar paritas induk dalam jumlah persentase intensitas estrus disebabkan karena perilaku estrus tersebut bergantung pada konsentrasi estrogen yang disekresikan oleh folikel de Graaf saat estrus berlangsung. Secara normal  akan  terjadi  peningkatan  konsentrasi  estrogen  dan  penurunan konsentrasi progesteron saat proestrus dan estrus berlangsung. Kondisi tersebut sangat dipengaruhi oleh faktor manajemen, lingkungan dan fisiologis induk sapi terutama  penurunan  produksi  susu  yang  disebabkan  oleh  stres  yang berhubungan  dengan  pengaturan  suhu  tubuh,  keseimbangan  energi  serta perubahan  hormonal.  Hal  tersebut  akan  berdampak  terhadap  fluktuasi progesteron  hingga  di  atas  1,0  ng.  mL -1 sehingga  menekan  aktifitas  estrogen. Tingginya  progesteron  akan  menurunkan  intensitas  estrus  sehingga  aktifitas estrus nampak melemah.
Konsentrasi  progesteron  di  bawah  1,0  ng.  mL -1 akan  mampu meningkatkan  aktivitas  estrogen.  Yoshida  dan  Nakao  (2005)  dan  (2006) mengungkapkan  dalam  hasil  penelitiannya  bahwa  peningkatan  progesteron bukan  bersumber  dari corpus  luteum melainkan  korteks  adrenal  sebagai  hasil sintesis kortisol. Hal tersebut  melalui ovariektomi sapi yang dilanjutkan dengan induksi  ACTH  ( Adrenocorticotropic  Hormone )  guna  merangsang  progesteron adrenal  melalui  peningkatan  sintesis  kortisol.    Dalam  kondisi  stres,  ACTH  dari hipofisa  anterior  akan  merangsang  sekresi  glukokortikoid  dari  korteks  adrenal terutama  kortisol  untuk  disintesis  menjadi  progesteron  adrenal  (Mc.Donald, 1975  dan  Yoshida,  2006).  Peningkatan  progesteron  tersebut  akan  mengganggu keseimbangan  estrogen  sehingga  memengaruhi  intensitas  estrus.  Proses peningkatan  kortisol  dapat  juga  terjadi  karena  adanya  stres  yang  dialami  oleh induk sapi seperti pasca pemerahan (14,0-19,6 ng. mL -1 ) dan palpasi rektal (12-
14 ng. mL -1 ), sedangkan konsentrasi kortisol basal pada sapi berkisar 3,8 – 4,4 ng. mL -1 (Yoshida dan Nakao, 2005).
Hasil penelitian terhadap induk sapi berbagai paritas induk menunjukkan performan  intensitas  estrus  yang  baik  artinya  gejala  estrus  dapat  nampak dengan  jelas.  Hal  ini  membuktikan  bahwa  adanya  perbedaan  relatif  terhadap kualitas  pakan  (hijauan  dan  konsentrat),  menurunnya feed  intake ,  proses pemerahan  dan  produksi  susu  tidak  memberikan  kontribusi  yang  nyata terhadap  performan  intensitas  estrus.  Volume  folikuler  saat  estrus  sangat memengaruhi  konsentrasi  estrogen  dan  kondisi  tersebut  teraktualisasi  dalam intensitas estrus. Volume folikuler dipengaruhi oleh jumlah folikel dominan yang mampu  untuk  diovulasikan  dan  kondisi  ini  terutama  lebih  besar  dimiliki  oleh induk sapi laktasi dibandingkan sapi dara ( heifer ). Hasil penelitian Sartori, dkk.,
(2002)  mengungkapkan  bahwa  induk  sapi  laktasi  mempunyai  volume  folikuler (2674,4±126,8  mm³)  lebih  besar  dibanding  sapi  dara  (2202,8±168,5  mm³).  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  paritas  induk  tidak  berpengaruh  terhadap performan intensitas estrus.

## Waktu Estrus Pasca Partus
Dari analisis statistika dapat diketahui bahwa rataan estrus kedua pasca partus  pada  berbagai  paritas  menunjukkan  adanya  perbedaan  artinya  bahwa paritas  induk  memberikan  pengaruh  terhadap  estrus  kedua  pasca  partus. Performan waktu estrus kedua pasca partus dari 30 ekor induk sapi perah pada setiap  paritas  induk,  ternyata  induk  paritas  I  nyata  berbeda  (83,5±25,74  hari) dibandingkan  induk  paritas  II  (68,23±22,83  hari)  dan  induk  paritas  III (74,1±24,75 hari) (P<0.05)
Grafik 2. Waktu Estrus Berbagai Paritas Induk Sapi Perah Fries Holland Pasca Partu
Kehadiran  performan  estrus  kedua  pasca  partus  menunjukkan  bahwa induk  sapi  perah  sudah  mengalami  keseimbangan  energi  positif    karena  titik nadir  keseimbangan energi  negatif  berlangsung  hingga  3  minggu  pasca  partus. Kondisi  leptin,  insulin  dan  IGF-I  sudah  berangsur  mengalami  peningkatan kearah  normal.  Leptin  dalam  kondisi  keseimbangan  energi  positif  akan meningkatkan feed intake yang diikuti peningkatan insulin dan IGF-I. Jorritsma, dkk., (2003) menyatakan bahwa insulin dan IGF-I sangat memengaruhi tingkat proliferasi folikel, produksi progesteron, estrogen sel granulosa dan androgen sel theca.  Insulin  dan  i nsulin-like  growth  factor-I (IGF-I)  mampu  mengikat  protein bagi  kepentingan  pertumbuhan  folikel  dan  maturasi  folikel  dominan  sehingga terjadi  peningkatan  estrogen  yang  akan  menimbulkan  estrus  kedua  pasca partus  dan  LH  bagi  kepentingan  ovulasi.  Kontribusi  leptin,  insulin  dan  IGF-I dalam  metabolisme  energi  induk  paritas  I  lebih  diutamakan  pada  pemenuhan kebutuhan  pertumbuhan  untuk  mencapai  kematangan  fisiknya.  Sedangkan induk paritas II dan III lebih mengutamakan hasil metabolisme energi digunakan untuk  memenuhi  kebutuhan  pertumbuhan  dan  maturasi  folikel  ataupun produksi susu.
Hasil  penelitian  Wathes,  dkk.,  (2005)  mengungkapkan  bahwa  primipara memberikan  performan  estrus  kedua  pasca  partus  (78,5±2,42  hari)  lebih  lama dibandingkan  pada  pluripara  (72,9±1,12  hari).  Performan  estrus  kedua  pasca partus  juga  menggambarkan  uterus  sudah  mengalami  involusi  artinya  secara
fisiologis  induk  mampu  menerima  kebuntingan  berikutnya.  Oleh  sebab  itulah, estrus  kedua  pasca  partus  umumnya  digunakan  sebagai  langkah  awal  dalam melakukan inseminasi buatan pertama pasca partus.
Inseminasi buatan adalah suatu proses mendeposisikan semen ke dalam uterus (intrauterin) atau cervix (intracervical) dengan menggunakan alat artificial copulation . Inseminasi buatan memberikan kontribusi penting dalam days open dan calving interval karena keberhasilan inseminasi pertama pasca partus yang menghasilkan  kebuntingan  akan  memengaruhi  lamanya  performan  reproduksi tersebut.    Waktu  yang  tepat  untuk  inseminasi  merupakan  dasar  bagi  deposisi semen  ke  dalam  organ  reproduksi  induk.  Pelaksanaan  inseminasi  yang  baik dilakukan pada 12-18 jam yang dihitung dari sejak awal berlangsungnya estrus. Penentuan  waktu  tersebut  didasarkan  pada  kemampuan  spermatozoa  dapat hidup  dengan  baik  pada  saluran  reproduksi  betina  selama  18-24  jam,  waktu ovulasi  sel  telur  dan  daya  hidup  sel  telur  untuk  dapat  dibuahi  10-20  jam. Sedangkan  deposisi  semen  saat  inseminasi  dapat  dilakukan  pada corpus  uteri , cornua  uteri bagian  kanan  dan cornua  uteri bagian  kiri  (O’Connor  dan  Peters, 2003). Indikator tingkat keberhasilan pelaksanaan inseminasi pada estrus kedua pasca  partus  dapat  diamati  melalui service  per  conception dan conception rate (Wells dan Burton, 2002).
Induk paritas I berlangsung lebih lama dibandingkan induk paritas II dan III  karena  kontribusi  leptin,  insulin  dan  IGF-I  dalam  metabolisme energi  induk paritas  I  lebih  diutamakan  pada  pemenuhan  kebutuhan  pertumbuhan  untuk mencapai  kematangan  fisiknya.  Sedangkan  induk  paritas  II  dan  III  lebih mengutamakan  hasil  metabolisme  energi  digunakan  untuk  memenuhi kebutuhan  pertumbuhan  dan  maturasi  folikel  ataupun  produksi  susu. Walaupun  dalam  pemberian  pakan  tidak  membedakan  paritas  induk  tetapi penggunaan  hasil  metabolisme  antar  paritas  induk  terdapat  perbedaan.  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  paritas  induk  sangat  memengaruhi  waktu performan  estrus  kedua  pasca  partus.  Di  samping  metabolisme  energi, performan  estrus  kedua  pasca  partus  juga  menggambarkan  uterus  sudah mengalami  involusi  artinya  secara  fisiologis  induk  mampu  menerima kebuntingan  berikutnya.  Oleh  sebab  itulah,  estrus  kedua  pasca  partus
umumnya  digunakan  sebagai  langkah  awal  dalam  melakukan  inseminasi buatan pertama pasca partus.
Hasil  penelitian  Wathes,  dkk.,  (2005)  mengungkapkan  bahwa  primipara memberikan  performan  estrus  kedua  pasca  partus  (78,5±2,42  hari)  lebih  lama dibandingkan  pada  pluripara  (72,9±1,12  hari).  Dari  hasil  penelitian  terhadap induk sapi perah dari berbagai paritas induk menunjukkan bahwa induk paritas II memberikan waktu yang lebih pendek (68,23±22,83 hari) dibandingkan induk paritas III (74,1±24,75 hari) dalam timbulnya estrus kedua pasca partus. Hal ini disebabkan karena induk paritas III menghasilkan produksi susu lebih banyak (puncak  laktasi)  dari  pada  induk  paritas  II  sehingga  lemak  susu  lebih  banyak mengikat  estrogen  sedangkan  estrogen  sangat  dibutuhkan  untuk  aktualisasi estrus.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  paritas  induk  I,  II dan  III  dengan  intensitas  estrus  2  (++)  masing-masing  sebesar  63,3  %,  46,7  % dan 73,4 % dan intensitas estrus 3 (+++) masing-masing sebesar 36,6 %, 53,3 % dan  26,6  %.      Sedangkan  waktu  estrus  kedua  pasca  partus  pada  berbagai paritas  menunjukkan  adanya  perbedaan  artinya  bahwa  paritas  induk memberikan pengaruh terhadap waktu estrus kedua pasca partus.

## DAFTAR PUSTAKA
Feliciano,  M.C,  Lu ί sa  Mateus  dan  Lu ί s  Lopez  da  Costa.  2003. Luteal  Function and  Metabolic  Parameters  in  Relation  to  Conception  in  Inseminated  Dairy Cattle. Revista Portuguesa de Cĕncias Veterinárias 98 (545) 25 -31.
Hojsgaard,  S  dan  E.  Jorgensen.  2006. Mixed  Models  Applied  in  Agricultural Sciences  (I).Based  on  A  Course  on  Mixed  Models  for  use  in  Animal  Health and    Animal  Welfare  Research. Danish  Institute  of  Agricultural  Sciences Research Centre Foulum.
Jorritsma, R., Theo Wensing, Theo A.M. Kruip, Peter L.A.M. Vos dan Jos P.T.M. Noordhuizen.  2003. Metabolic  Change  in  Early  Lactation  and  Impaired Reproductive    Performance  in  Dairy  Cows. Review  Article.  Vet.Res.34:11- 26.
Mattjik, A.A. dan Sumertajaya. 2002. Perancangan Percobaan dengan   Aplikasi SAS dan Minitab. Jilid I Edisi Kedua. IPB Press.
McDonald, 1975. Veterinary Endocrinology and Reproduction. Second Edition. Lea & Febiger. Philadelphia.
Nebel, R.L. 2003. Components of a Successful Heat Detection Program. Advances in Dairy Technology. Volume 15:191-203.
O’Connor, M dan Jana Peters. 2003. Reviewing Artificial Insemination Technique. Department of Dairy Science and Animal Science. The Pennsylvania State University.
Sartori,  R.,  G.J.  M.  Rosa  dan  M.  Wiltbank.  2002. Ovarian  Structures  and Circulating Steroids in Heifers dan Lactating Cows in Summer and Lactating and Dry Cows in Winter. J. Dairy Sc. 85:2813- 2822.
Sugiyono.2003. Statistika  Untuk  Penelitian.  Cetakan  Kelima. Penerbit  CV. Alfabeta. Bandung.
Supranto, J. 2000. Teknik Sampling Untuk Survei & Eksperimen. Cetakan Ketiga. Penerbit Rineka Cipta, Jakarta.
Wathes,  D.C.,  N.  Bourne,  J.  Brickell,  A.  Swali  dan  V.J.  Taylor.  2005.
Relationship  Beetwen  Production  and  Reproduction. The  26th  European Holstein and Red Holstein Conference, Prague.
Wells, E.M. dan Clifford H. Burton. 2002. Reproductive Efficiency in Dairy Cattle.
Oklahoma Cooperative Extension Service.
Yoshida,  C.  dan  Nakao,  T.  2005. Response  of  Plasma  Cortisol  and  Progesterone after  ACTH  Challenge in  Ovariectomized  Lactating  Dairy  Cows. Journal of Reproduction and Development, Vol.51, No. 1.
Yoshida,  C.  2006. Shortened  Estrous  and  a  Possible  Endoclinological  Role  in Suppression  Estrous  Signs  in  Dairy  Cows. Bull.Facul.Agric.Niigata Univ., 59(1):1-9.