## 1. Pendahuluan
Radikal bebas berupa atom atau molekul yang  reaktif  karena  elektron  pada  orbital terluarnya tidak berpasangan (Clarkson and Thompson, 2000). Radikal bebas tidak stabil sehingga  mencari  pasangan  elektron  dari molekul  disekitarnya  untuk  mencapai kestabilan (Prakash, 2001).
R e a k t i v i t a s   r a d i k a l   b e b a s   d a p a t m e n y e b a b k a n   g a n g g u a n   f u n g s i sel,kerusakan  struktur  sel,  modifikasi molekul sehingga tidak dikenali sistem imun, dan  bahkan  menyebabkan  mutasi.  Target utama  radikal  bebas  di  dalam  sel  tubuh adalah  protein,  asam  lemak  tak  jenuh, lipoprotein, dan unsur DNA (Winarsi, 2007).
R e a k t i v i t a s   r a d i k a l   b e b a s   d a p a t dinetralkan  oleh  antioksidan,  karena kemampuannya  menyumbangkan  elektron
(Prakash,  2001). Antioksidan  dapat  berasal dari  bahan  alam  maupun  sintetis.  Senyawa antioksidan  sintetissering  memiliki  efek samping tidak baik, sehingga banyak dicari alternatif  antioksidan  dari  bahan  alami (Sunarni, 2005).
Senyawa-senyawa  polifenol  mampu m e n g h a m b a t   a u t o o k s i d a s i   m e l a l u i mekanisme radikal  scavenging dengan menyumbangkan  satu  elektron  yang  tidak berpasangan  pada  radikal  bebas  (Pokorny, Yanishlieva, and Gordon,  2001).Penelitian yang  dilakukan  oleh  Lee,  Jiang,  Juan,  Lin, and Hou  (2006)  menunjukkanbahwa Diospyros  blancoi A.  DC.  mengandung senyawa  golongan  fenolat  lebih  dari  30 mgekivalen  asam  galat  per  gram  ekstrak tanaman.  Menurut  Duke  (2001)  kuersetin yang  merupakan  suatu  senyawa  golongan
JURNAL FARMASI SAINS DAN KOMUNITAS, November 2013, hlm. 101-110
ISSN : 1693-5683
PENETAPAN KANDUNGAN FENOLAT TOTAL  DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN MENGGUNAKAN RADIKAL DPPH FRAKSI ETIL ASETAT SARI BUAH APEL BELUDRU ( Diospyros blancoi A. DC.)

## JOHANES BAPTISTA YUNIO RAHMAWAN, YOHANES DWIATMAKA

## Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta
Abstract: Antioxidant plays a role in inhibiting oxidation by binding to free radicals. As a result, the  cell  damage  that  leads  to  degenerative  diseases  can  be  inhibited.  This  research  was conducted  to  determine  the  antioxidant  activity  and  total  phenolic  content  of  ethyl  acetate fraction of velvet aple (Diospyros blancoi A.DC.) juice. Previously known that other plants from genus  Diospyros  contain  phenolic  compounds  such  as  quercetin.  Antioxidant  activity  test performed  qualitatively  and  quantitatively  using  radical  of  1,1-diphenyl-2  pikrilhidrazil (DPPH) and expressed as the value Inhibition Concentration 50 (IC ). Determination of total 50 phenolic using Folin-Ciocalteu method expressed as equivalent mass of gallic acid. Phenolic compounds will be oxidized by the Folin-Ciocalteu under alkaline conditions, forming a blue solution. The results showed that the ethyl acetate fraction of velvet apple juice has very strong antioxidant activity with IC  of (30.0 ± 0.09) mg / mL. Total phenolic content of (393.5 ± 0.35) mg 50 gallic acid equivalents per gram of ethyl acetate fraction.
Keywords: antioxidant, velvet apple (Diospyros blancoi A. DC), ethyl acetate fraction, DPPH, total phenolic content.
flavonoid  ditemukan  pada  tanaman American persimmon ( Diospyros virginiana L.)  yang  masih  satu  genus  dengan  apel beludru ( Diospyros blancoi ).
D a r i   i n f o r m a s i   t e r s e b u t   d a p a t diperkirakan  apel  beludru  juga  memiliki kandungan  flavonoid.  Golongan  flavonoid juga  memiliki  kerangka  struktur  fenolat, maka  tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  dan kandunganfenolat  total  dari  buah  apel beludru. Buah apel beludrudapat dikonsumsi dan sering dijumpai di pedagang buah.
Penentuan  aktivitas  antioksidan  dalam penelitian ini menggunakan metode DPPH. R a d i k a l   D P P H   ( 1 , 1 -   d i f e n i l - 2 - p i k r i l h i d r a z i l ) d a p a t   d i r e d u k s i   a t a u distabilisasi oleh antioksidan. Larutan DPPH memiliki  panjang  gelombang  serapan maksimum  pada  517  nm.  Penurunan absorbansi  DPPH  dalam  larutan  campuran dengan antioksidan menjadi dasar pengujian antioksidan pada metode DPPH ini (Duh, Tu, and Yen,  1999).  Besarnya  aktivitas antioksidan  dinyatakan  dalam  nilai  IC , 50 yaitu konsentrasi senyawa antioksidan yang menyebabkan  penurunan  50%  dari konsentrasi  DPPH  awal  (Sunarni,  2005). Sedangkan  penetapan  kadar  fenolat  total dilakukan  dengan  metode  Folin-Ciocalteau menurut Aqil, Ahmad, dan Mehmood(2006). Kadar  fenolat  total  dinyatakan  dalam kesetaraan  dengan  massa  ekivalen  asam galat.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka penelitian  ini  ingin  mengetahui  kandungan fenolat  total  yangdinyatakan  dengan  massa
e k i v a l e n   a s a m   g a l a t   d a n   n i l a i aktivitasantioksidan  fraksi  etil  asetat  sari buah  apel  beludru  yang  dinyatakan  dengan IC . 50

## 2. Metode Penelitian
Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap  pola  searah.Beberapa  bahan  utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah: buah  apel  beludru,  methanol  (Merck), kuersetin  (Sigma),  DPPH  (Sigma),  reagen Folin-Ciocalteu  (Sigma),  asam  galat (Sigma).Peralatan  yang  digunakan  antara lain: spektrofotometer UV-VIS (Shimadzu), mikropipet  10-1000 μ L;  1-10  mL  (Acura 825, Socorex), neraca analitik (Scaltec SBC 22,  BP  160P), vacuum  rotary  evaporator ( Junke & Kunkel ).

## 2.1. Determinasi tanaman
Determinasi  tanaman  apel  beludru dilakukan  di  Laboratorium  Farmakognosi- Fitokimia,  Fakultas  farmasi  Universitas Sanata  Dharma  menurut  Morton  (1987) danUnited States of Department Agriculture NRCS.

## 2.2. Pengumpulan bahan
Buah apel beludru diperoleh dari kawasan Kampus  III  Universitas  SanataDharma Paingan,  Sleman,  Yogakarta.  Pemanenan buah masak yang tidak berbiji, pada pagi hari dilakukan akhirbulan januari.

## 2.3. Preparasi buah apel beludru
Buah  apel  beludru  masak  yang  segar
JOHANES BAPTISTA YUNIO RAHMAWAN, YOHANES DWIATMAKA 102
dikupas dan dibersihkan denganair mengalir kemudian  dipotong  sekecil  dan  setipis mungkin.  Diambil  350  gramdaging  buah segar  yang  telah  dipotong  kemudian ditambahkan  akuades  hinggaterendam selanjutnyadihaluskan  dengan  blender.  Sari buah  merupakan  filtrat  yangdiperoleh melalui  penyaringan  berulang  dengan bantuan  pompa  vakum.  Sari  buah  yang didapat  diekstraksi  cair-cair  menggunakan wash benzine dengan perbandingan (1:1 v/v), kemudian  didiamkan  sampai  terpisah sempurna.Langkah ini dilakukan sebanyak 3 kali.Fraksi wash  benzine disingkirkan, selanjutnya  sari  buah  diekstraksi  cair-cair m e n g g u n a k a n   e t i l   a s e t a t denganperbandingan  1:1  (v/v)  sehingga didapatkan  sari  buah  dan  fraksietil  asetat. Fraksi etil asetat dipekatkan dengan vacuum rotaryevaporator hingga  pelarut  etil  asetat tidak mengalir, lalu dikeringkan dalam oven
o pada  50  C  sampai  bobot  tetap,  selanjutnya disebut fraksi etil asetat buah apel beludru.

## 2.4. Uji kandungan fenolat

## 2.4.1. Pembuatan larutan baku asam galat
Asam galat dilarutkan dalam campuran akuades:metanol  (1:1)  dan  dibuat  seri pengenceran sehingga diperoleh konsentrasi larutan baku asam galat sebesar 50; 75; 100; 125;dan 150 μ g/mL.
2.4.2.  Pembuatan  larutan  uji  untuk penentuan kandungan fenolat total
Dibuat larutan uji fraksi etil asetat sari buah  apel  beludrudalam  metanol,  dengan konsentrasi 300 μ g/mL.

## 2.4.3. Uji pendahuluan keberadaan senyawa fenolat
Sejumlah  0,5  mL  larutan  uji  300,0 μ g/mL  dan  larutan  pembanding  asamgalat 150,0 μ g/mL  masing-masing  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  dan  ditambah  2,5  mL pereaksi  fenol  Folin-Ciocalteu  yang telahdiencerkan dengan akuades (1:10 v/v). Larutan  didiamkan  selama  10menit,  lalu ditambahkan 2 mL larutan natrium karbonat 1  M,  kemudian  dihomogenkan  dengan vortex  selama  30detik.  Perubahan  warna larutan  menjadi  biru  menunjukkan keberadaan golongan senyawa fenolat.
2.4.4. Penetapan kandungan fenolat total 1) Pembuatan kurva baku asam galat
Sebanyak 0,5 mL larutan asam galat 50, 75,  100,  125,  dan  150 μ g/mL  ditambah dengan  5  mL  reagen  Folin-Ciocalteu  yang telah  diencerkan  dengan  air  (1:10  v/v). Larutan selanjutnya ditambah dengan 4,0 mL natrium  karbonat  1M.  Setelah OT, absorbansinya dibaca pada λ yaitu 751 nm maks terhadap  blanko  yang  terdiri  atas  akuades  : metanol p.a (1:1),  reagen  Folin-Ciocalteu dan larutan natrium karbonat 1M. Pengerjaan dilakukan 3 kali.
2)  Estimasi  kandungan  fenolat  total  larutan uji
Diambil  0,5  mL  larutan  uji  300 μ g/mL, lalu dimasukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan dilanjutkan sebagaimana perlakuan pada pembuatan  kurva  baku  asam  galat. Kandungan fenolat total dinyatakan sebagai miligram ekivalen asam galat per gram fraksi etil asetat, dilakukan 3 kali replikasi.
2.5. Uji aktivitas antioksidan 2.5.1.  Pembuatan  larutan  pembanding kuersetin
Kuersetin dilarutkan dalam metanol dan  dibuat  seri  pengenceran  sehingga diperoleh  konsentrasi  larutan  kuersetin sebesar 5; 7,5; 10; 12,5; dan 15 μ g/mL.

## 2.5.2. Larutan uji untuk aktivitas antioksidan
Dibuat  seri  larutan  uji  fraksi  etil  asetat dalam  metanol,  dengan  konsentrasi  15,  20, 25, 30, dan 35 μ g/mL.

## 2.5.3. Pembuatan larutan DPPH
DPPH  sebanyak  15,7  mg  dilarutkan menggunakan  metanol  dalam  labu  ukur 100,0 mL sehingga diperoleh larutan DPPH dengan konsentrasi 0,4 mM. Larutan ditutup dengan  alumunium  foil  dan  harus  selalu dibuat baru.
2.5.4. Uji pendahuluan aktivitas antioksidan
Ke dalam tiga buah tabung reaksi masing- masing dimasukkan sebanyak 1 mL larutan DPPH.Selanjutnya masing-masing ditambah dengan  1  mL  metanol,  larutanpembanding kuersetin  37,5 μ g/mL,  dan  larutan  uji  200 μ g/mL. Selanjutnyalarutan ditambah dengan 3   m L  m e t a n o l .   K e m u d i a n   l a r u t a n dihomogenkan  dengan  vortex  selama  30 detik.  Perubahan  warna  larutan  menjadi kekuningan  menunjukkan  adanya  aktivitas antioksidan.
2.5.5. Uji aktivitas antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  ditentukan d e n g a n m e n g g u n a k a n metodespektrofotometri  sesuai  dengan penelitian Nusarini (2007).
1) Pengukuran  absorbansi  larutan DPPH (kontrol)
Pada  labu  ukur  10  mL,  dimasukan sebanyak 2 mL larutan DPPH.Ditambahkan larutan tersebut dengan metanol hingga tanda b a t a s .   K e m u d i a n l a r u t a n   d i b a c a absorbansinya pada saat OT (35 menit) dan panjang gelombangserapan maksimum yaitu 516  nm.  Pengerjaan  dilakukan  sebanyak  3 kali.
2) Pengukuran  absorbansi  larutan pembanding dan larutan uji
Sebanyak  2  mL  larutan  DPPH dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10 mLkemudian ditambah dengan 2 mL larutan pembanding  dan  uji  pada  berbagai s e r i k o n s e n t r a s i   y a n g   t e l a h   d i b u a t . Selanjutnya  larutan  tersebut  ditambah dengan metanol hingga tanda batas. Larutan tersebut  kemudian  dihomogenkan  dengan vortex  selama  30  detik  dandiamkan  selama OT (30 menit). Larutan dibaca absorbansinya dengan  spektrofotometervisibel  pada panjang gelombang serapan maksimum hasil optimasi,  yaitu  516  nm.  Pengujian dilakukandengan 3 kali replikasi.
3) Estimasi aktivitas antioksidan Data  hasil  pengukuran  absorbansi larutan  uji  (fraksi  etil  asetat  sari  buah  apel beludrudan  senyawa  pembanding  larutan rutin)digunakan untuk menghitung nilai %IC dan IC . 50 Aktivitas penangkapan radikal DPPH (%IC) dihitung dengan rumus :
Nilai aktivitas antioksidan yang dinyatakan denganIC 50 ditentukan dengan persamaan garis regresi linear antara
%IC= absorbansi larutan kontrol DPPH-absorbansi larutan uji absorbansi larutan kontrol DPPH x 100%
JOHANES BAPTISTA YUNIO RAHMAWAN, YOHANES DWIATMAKA 104
konsentrasi larutan uji (sumbu x) dengan % IC (sumbu Y).

## 3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Penyiapan bahan penelitian
Determinasi  menjadi  langkah  awal penelitian  untuk  mendapatkan  kepastian mengenai  kebenaran  tanaman  yang  hendak digunakan.  Determinasi  tanaman  dalam penelitian  inidilakukan  di  Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia,  Fakultas  Farmasi UniversitasSanata Dharma menurut Morton (1987)  dan  United  States  of  Department AgricultureNRCS.  Berdasarkan  hasil degterminasi  tersebut  diketahui  bahwa tanaman  yang  digunakan  adalah Diospyros blancoi A. DC yang umum dikenal dengan nama apel beludru.
Buah  dari  tanaman  apel  beludru  untuk penelitian  ini  diperoleh  dari  lingkungan Kampus  III  Universitas  SanataDharma Paingan,  Sleman,  Yogakarta.  Pemanenan buah  yang  sudah  masak  dilakukan akhirbulan  Januari  2013  dengan  kriteria warna  merahkusam,  tidak  berbiji,  utuh, segar.Buah  sesegera  mungkin  dikupas  dan daging buahnya dihaluskan. Menurut Evans and Hedger (2001) enzim polifenol oksidase cepat  mendegradasi  senyawa-senyawa polifenol.  Untuk  meminimalkan  kerusakan, maka  sari  buah  yang  didapatkan  segera diekstrasi  cair-cair  dengan wash  benzine kemudian  fraksi  air  diekstraski  dengan  etil asetat.
Ekstraksi  menggunakan washbenzine digunakan untuk menarik senyawa non polar seperti klorofil, vitamin, minyak dan lemak
(Snyder 1997). Kelompok senyawa-senyawa t e r s e b u t   k u r a n g   d i k e n a l   a k t i v i t a s antioksidannya, sehingga perlu disingkirkan. Fase  air  yang  didapat  dari  proses  ekstraksi dengan washbenzine kemudian  diekstraksi menggunakan  etil  asetat.  Ekstraksi  dengan etil asetat ditujukan untuk menarik senyawa a g l i k o n   t e r m a s u k   d a r i   g o l o n g a n polifenol.Hasil  ekstraksi  cai-cair  ini  akan menghasilkan  fraksi  etilasetat  yang  banyak mengandung  golongan  fenolat,  sehingga aktivitas  antioksidannya  diharapkan  cukup tinggi.  Fraksi  etil  asetat  yang  diperoleh kemudian  diuapkan  pelarutnya  dengan vacuumrotary  evaporator supaya  tidak merusak kestabilan senyawa fenolat. Setelah dikeringkan dalam oven sampai bobot tetap, rendemen  fraksi  etil  asetat  yang  didapat sebesar 0,046%.

## 3. 2. Uji senyawa fenolat
Langkah  awal  adalah  uji  kualitatif senyawa fenolat pada fraksi etil asetat.Uji ini menggunakan prinsipreaksi oksidasi-reduksi pada  suasana  basa.  Dalam  suasana  basa, senyawa  fenolat  akan  berubah  menjadi  ion fenolat.  Menurut  Singleton  dan  Rossi (1965)ion  fenolat  bersifatlebih  reaktif terhadap  adanya  pereaksi  fenol  Folin- Ciocalteu. Asam fosfomolibdatfosfotungstat dalam  pereaksi  fenol  Folin-  Ciocalteu  akan tereduksi  oleh  ion  fenolattersebut  sehingga akan  terbentuk  larutan  dengan  warna  biru. Pengujian  (Gambar  1)  menunjukkan  hasil positif bahwa fraksi etil asetat sari buah apel beludrumengandung senyawa fenolat.
Kandungan  fenolat  total  dinyatakan
sebagai  ekivalen  asam  galat.  Berdasarkan persamaan  kurva  baku  asam  galat  yang
-3 diperoleh (y = 5,3782.10  x – 0,0564 dan R= 0,9997) maka kandungan fenolat total dalam fraksi etil asetat sari buah apel beludru dapat ditentukan (Tabel I).
Berdasarkan hasil perhitungan didapatkan hasil kandungan fenolat total rata-rata pada sampel  sebesar  393,52  ±  0,35  mg  ekivalen asam  galat  per  gram  fraksi  etil  asetat  sari buah apel beludru. Kandungan fenolat total
i n i   b e r h u b u n g a n   d e n g a n   d a y a antioksidannya.  Namun  demikian  tidak selalu  kenaikan  kandungan  fenolik  total diikuti  naiknya  aktivitas  antioksidan.  Jenis senyawa  fenolat  yang  ada  juga  sangat menentukan  aktivitasnya.  Oleh  karena  itu masih  diperlukan  tahap  penelitian  lanjutan yaitu  menentukan  senyawa  yang  paling berperan dalam aktivitas antioksidan dalam fraksi etil asetat sari buah apel beludru ini.

## 3.3. Uji aktivitas antioksidan
Senyawa DPPH banyak digunakan untuk uji  aktivitas  antioksidan.  Senyawa  radikal DPPH  cukup  stabil  pada  suhu  ruangan  dan berwarnaviolet dalam metanol. Antioksidan a k a n   m u d a h m e r u s a k   r a n t a i   y a n g bertanggung jawab sebagai warna ungu dan menjadi  warnakuning  (Badarinath et  al ., 2010).
Senyawa  DPPH  memiliki  elektron  yang tidak berpasangan sehingga bersifat radikal. Ketika  elektronnya  menjadi  berpasangan karena  bereaksi  dengan  suatu  antioksidan ( p e n a n g k a p   r a d i k a l   b e b a s ) ,   m a k a absorbansinya  menurun  secarastoikiometri sesuai  jumlah  elektron  yang  diambil ( G a m b a r   2 ) .   K e b e r a d a a n senyawaantioksidan dapat mengubah warna l a r u t a n   D P P H   d a r i   u n g u   m e n j a d i kuning(Dehpour,  Ebrahimzadeh,  Nabavi, and Nabavi,  2009).  Sifat  inilah  yang
Replikasi Fenolik total (mg ekivalen) Rata-rata ± sd CV (%) I 393,12 393,52 ± 0,35 0,0877 II 393,75 III 393,68 Gambar 1. Hasil uji pendahuluan keberadaan senyawa fenolat (A = kontrol negatif [Folin
Ciocalteu danNa CO ], B = kontrol positif [asam 2 3
galat + Folin Ciocalteu dan Na CO ], C= larutan uji
2 3
[fraksietil asetat sari buah apel beludru + Folin Ciocalteu dan Na CO ], D =asam galat, E =fraksi
2 3 etilasetat sari buah apel beludru)
Tabel I. Hasil perhitungan kandungan fenolat total
JOHANES BAPTISTA YUNIO RAHMAWAN, YOHANES DWIATMAKA 106
digunakan sebagai dasar penggunaan radikal DPPH  sebagai  bahan  uji  aktivitas antioksidan.
Penelitian  ini  menunjukkan  hasil  positif dengan  larutan  uji  berwarna  kuningseperti kontrol  positif  (larutan  kuersetin).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  sari buah  apelbeludru  memiliki  aktivitas antioksidan (Gambar 3).
Parameter  aktivitas  antioksidan  dengan metodepenangkapan  radikal  DPPH  ini adalah  nilaiIC   yakni  konsentrasi  senyawa 50 uji  yangdibutuhkan  untuk  mengurangi jumlah radikal DPPH sebesar 50%. Nilai IC 50 diperoleh daripersamaan regresi linier yang m e n y a t a k a n   h u b u n g a n   a n t a r a konsentrasisenyawa  uji  dengan  persen aktivitas  antioksidan.  Semakin  kecil  nilai IC   senyawauji,  maka  semakin  poten 50 senyawa uji tersebut sebagai antioksidan.
Dari  hasil  penelitian  ini  diperoleh bahwa  bahan  uji  fraksi  etil  asetat  sari  buah
apel beludru memiliki daya antioksidan yang sangat  kuat  (IC =  29,920,09  µg/mL), 50 walaupun  tidak  sekuatkuersetin  (IC = 50 10,800,31 µg/mL).Hal ini disebabkan karena fraksi  etil  asetat  buah  apel  beludru  masih merupakan  campuran  berbagai  senyawa fenolat  yang  tidak  semuanya  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  kuat,  sementara kuersetin  merupakan  senyawa  murni. Berdasarkan  nilai  IC   yang  cukup  rendah 50
(aktivitas  sangat  kuat)  ini,  maka  fraksi  etil asetat  cukup  potensial  digunakan  sebagai salah  satu  alternatif  sumber  senyawa antioksidan.

## 4. Kesimpulan dan Saran
4.1. Kesimpulan
1. Kandungan fenolat total fraksi etil asetat sari  buah  apel  beludru  sebesar  393,5  ± 0,35  mgekivalen  asam  galat  per  gram fraksi.
2.  Fraksi  etil  asetat  sari  buah  apel  beludru memiliki  daya  antioksidan  sangat  kuat denga nilai IC  sebesar30,0 ± 0,09 μ g/mL. 50

## 4.2. Saran
Perlu  dilakukan  identifikasi  senyawa  yang paling  potensial  sebagai  antioksidan  dalam fraksi etil asetat sari buah apel beludru.

## Daftar Pustaka
Aqil,  F.,  Ahmad,I.,  and  Mehmood,  Z.,  2006, Antioxidant  and  Free  Radical  Scavenging Properties  of  Twelve  Traditionally  Used  Indian Medical Plants, Turk J Biol, 30,177-183
Badarinath,  A.V.,  Mallikarjuna,  K.,  ,  Chetty,  C., Sudhana,  M.,  Ramkanth,  S.,  Rajan,  T.V.S,  and Gnanaprakash,  K.,  2010,  A  Review  on  In-vitro Antioxidant Methods: Comparisons, Correlations
Gambar3. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan (A= kontrol negatif [blanko DPPH],
B=kontrolpositif [kuersetin + DPPH], C= larutan uji [fraksi etil asetat sari buah + DPPH],
D=kuersetin,E=fraksi etil asetat sari buah apel beludru)
and Considerations, Int. J. Pharm. Tech. Research, Vol.2, No.2, pp. 1276-1285.
Clarkson,  P.M.,  and  Thomson,  H.S.  2000. Antioxidants: What role do they play in physical activity and health, Am. J. Clin. Nutr . 729 (Suppl):
637.
Dehpour  AA,  Ebrahimzadeh  MA,  Nabavi  SF,  and Nabavi  SM  (2009),  Antioxidant  activity  of methanol  extract  of Ferula  assafoetida and  its essential  oil  composition, Grasas Aceites ,  60(4):
405-412.
Duh, P., Tu,Y. and Yen,G., 1999, Antioxidant activity of  water  extract  of  Harng  Iyur  ( Chrysanthemum morifolium Ramat), Lebensm Wiss U Technol 32: 269-277. Duke,  J.A.,  2001, Handbook  of  Phytochemical Constituents of Grass Herbs and Other Economic Plants, CRC Press, Washington D.C., pp.235 Evans, C.S., and Hedger, J.N., 2001, Degradation of Plant  Cell Wall  Polymers,  in  Gadd,  G.M.,  (Ed.), Fungi  in  Bioremediation ,  Cambridge  University Press, United Kingdom, 18.
Lee, M.H., Jiang, C.B., Juan, S.h., Lin, R.D. and Hou, W.C. 2006. Screening of medicinal plant extracts for antioxidant activity, Life Science , 73: 167-179. Morton,  J.,  1987, Fruit  of  Warm  Climate ,  Mabolo, Miami, FL, pp. 418-419.
Nusarini,  N.M.R.,  2007,  Uji  Aktivitas  Antioksidan Fraksi Etil Asetat Ekstrak metanolik Herba Ketul ( Bidens pilosa L.), Skrips i, 15-20, Fakultas Farmasi
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Pokorny, J., Yanishlieva, N., and Gordon, M., 2001, Antioxidant in Food, Practical Aplication , Wood publishing  Limite,  Cambridge,  England,  pp.  22- 123.
Prakash, A., 2001, “ Antioxidant Activity “ Medallion Laboratories : Analithycal Progress Vol 19 No : 2. 1 – 4.
Singleton,V.L.  and  Rossi,  J.A.,  1965,Colorimetry  of To t a l   P h e n o l i c s   w i t h P h o s p h o m o l y b d i c - phosphotungstic  Acid  Reagents, Am.  J.  Enol.
Vitic. 16:144-58.
Snyder,  L.R.,  Kirkland,  J.J.,  and  Glajch,  J.L.,  1997, nd Practical  HPLC  Method  Development ,  2   ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, pp. 67-68, 6.
Sunarni,  T.,  2005, Aktivitas Antioksidan  Penangkap Radikal  Bebas  Beberapa  kecambah  Dari  Biji Tanaman  Familia  Papilionaceae,  53-61 ,  Jurnal Farmasi Indonesia 2 ( 2 ) , Jakarta.
United  States  of  Department  Agriculture  (USDA)
NRSC, Plant database: Diospyros blancoi A. DC., http://plants.usda.gov/java/nameSearch,  diakses tanggal 31 Mei 2013.
Winarsi,  H.,  2007, Antioksidan  Alami  Dan  Radikal , edisi I, Kanisius, Yogyakarta, p.17.
World  Health  Organization,  2003, WHO  Guidelines on  Good  Agricultural  and  Collection  Practices (GACP) for Medicinal Plants , Government of the Grand Duchy of Luxembourg, pp. 11-15.
JOHANES BAPTISTA YUNIO RAHMAWAN, YOHANES DWIATMAKA 108