Khikmah et al.

## Aktivitas Antibakteri Metabolit
Rhizopus sp.

## Asal Usar Daun Jati terhadap Salmonella typhi
Antibacterial Activity of Rhizopus sp. Metabolites from Teak Leaf Usar Against Salmonella typhi.
Nur Khikmah 1 * dan Anindita Vidya Jatiswara 1
1 Program Studi DIII Teknologi Laboratorium Medis, Akademi Analis Kesehatan Manggala, Yogyakarta, Indonesia
Abstrak Kapang Rhizopus sp. berperan sebagai inokulum utama dalam fermentasi tempe. Inokulum dalam fermentasi tempe juga dapat diperoleh secara alami dari usar daun jati. Rhizopus sp. yang tumbuh pada kedelai akan menghasilkan metabolit yang telah dikaji sebagai antidiare yang disebabkan bakteri Salmonella typhi sebagai penyebab demam tifoid yang masih menjadi penyakit endemis di Indonesia. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari aktivitas antibakteri metabolit Rhizopus sp . asal usar daun jati terhadap S. typhi . Metabolit Rhizopus sp. diproduksi pada media Sabouraud Dextrose Broth (SDB) selama 5 hari. Uji antibakteri metabolit mengunakan metode difusi kertas.  Isolasi dari usar daun jati memperoleh satu isolat kapang yang teridentifikasi Rhizopus sp. Hasil uji menunjukkan bahwa crude metabolit Rhizopus sp. mempunyai aktivitas antibakteri kategori sedang terhadap S. typhi .
Kata Kunci: Rhizopus sp . , usar daun jati, metabolit, antibakteri, Salmonella typhi
Abstract The mold Rhizopus sp. plays a role as the main inoculum in Tempeh fermentation. Inoculum for Tempeh fermentation can also be naturally obtained from the leaves of the Teak tree. The mold Rhizopus sp. that grows on soybeans will produce metabolites that have been studied as anti-diarrheal agents against Salmonella typhi, the bacterium causing typhoid fever, which remains an endemic disease in Indonesia. This research aimed to study the antibacterial activity of metabolites from Rhizopus sp. originating from teak tree leaves against S. typhi. Metabolites from Rhizopus sp. are produced in Sabouraud Dextrose Broth (SDB) media for 5 days. The antibacterial test of metabolites was conducted using the paper diffusion method. Mold isolation from Teak tree leaves yields an isolate identified as Rhizopus sp. The test results indicate that the crude metabolites of Rhizopus sp. have a moderate antibacterial activity against S. typhi.
Keywords: Rhizopus sp., teak leaves wrap, metabolites, antibacterial, Salmonella typhi
* Corresponding author:

## Nur Khikmah
Program Studi DIII Teknologi Laboratorium Medis, Akademi Analis Kesehatan Manggala Yogyakarta, Jl. Bratajaya 25 Sokowaten, Banguntapan, Bantul, Indonesia,
E-mail: khikmahnr@gmail.com
Khikmah et al.
Pendahuluan Rhizopus sp. berperan sebagai inokulum utama dalam pembuatan tempe yang berfungsi sebagai agensia pengubah kedelai rebus menjadi tempe melalui proses fermentasi.  Pertumbuhan miselium Rhizopus sp.  menjadikan biji  kedelai merekat sehingga terbentuk tekstur yang memadat. Rhizopus sp. berperan merombak senyawa kompleks protein menjadi senyawa-senyawa lebih sederhana yang mudah diserap oleh tubuh. Pertumbuhan Rhizopus sp. pada kedelai akan menghasilkan metabolit yang dapat dimanfaatkan sebagai penghambat pertumbuhan  bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif seperti kelompok Enterobacteriaceae.  Menurut Brooks et al . (2012), kelompok Enterobacteriaceae merupakan bakteri Gram negatif penyebab diare dengan contoh spesies diantaranya adalah Escherichia coli , Salmonella typhi , Shigella dysenteriae , dan Vibrio cholerae .   Hasil penelitian Maskar (2013), menyatakan bahwa terapi tempe pada anak yang terkena diare menyebabkan periode diare lebih pendek sehingga penderita lebih cepat sembuh. Hal tersebut disebabkan oleh adanya komponen antidiare yang dikandung tempe. Hasil penelitian Babu et al . (2009) menyebutkan bahwa orang Indonesia yang secara rutin mengonsumsi tempe akan terhindar dari penyakit disentri dan gangguan pencernaan. Konsumsi kacang kedelai yang difermentasi Rhizopus sp dapat mengurangi keparahan dan waktu diare pada anak babi yang disebabkan oleh Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) K88 dibandingkan kacang kedelai panggang (Kiers et al ., 2003).
Senyawa metabolit R. oligosporus NRRL 2710 menunjukkan aktivitas penghambatan terhadap patogen yang diuji dengan urutan penghambatan tertinggi pada E. coli dan S. typhi , diikuti Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus aureus , Corynebacteria diphtheriae dan Klebsiella pneumoniae (Fadahunsi et al ., 2013). Rhizopus sp. IP dan Rhizopus sp. IJ yang diisolasi dari inokulum tempe komersial juga mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Vibrio cholerae dengan kategori yang sama besar.  (Khikmah & Haloho, 2021).
Rhizopus sebagai inokulum pada tempe
yang digunakan pengrajin tempe pada saat ini sebagian besar berasal dari inokulum komersial yang dijual di pasaran dalam bentuk serbuk kering pembawa spora. Inokulum juga dapat berasal dari usar berupa kapang Rhizopus yang diperoleh langsung dari daun pembungkus tempe.  Daun tersebut di antaranya daun jati ( Tectona grandis ), dan daun waru ( Hibiscus tiliaceus L). Permukaan bawah daun jati dan daun waru secara alami memiliki bulu-bulu halus (trikoma) sebagai tempat penempelan spora Rhizopus dari udara.  Spora akan tumbuh menjadi miselium berwarna putih. Penggunaan usar sebagai inokulum tempe pada saat ini semakin berkurang karena alasan ketidakpraktisan dalam penyiapannya sehingga pengrajin tempe banyak menggunakan inokulum komersial.
Usar merupakan sumber inokulum Rhizopus bersifat indigenous yang didapatkan secara alami. Penggunaan inokulum indigenous dalam fermentasi tempe dapat diarahkan sebagai salah satu upaya untuk menjaga keanekaragaman dan kelestarian Rhizopus yang ada di Indonesia agar tidak punah. Metabolit yang dihasilkan oleh kapang indigenous berbasis usar diharapkan akan sesuai sebagai antibakteri patogen lokal, khususnya bagi bakteri penyebab diare di Indonesia.
Bakteri Salmonella typhi merupakan penyebab demam tifoid, yaitu infeksi akut pada usus halus.  Gejala infeksi adalah diare, demam, lemas, mual-mual, muntah, nyeri perut, nyeri kepala, dan nyeri otot (Brooks et al ., 2012). Di Indonesia, penyakit tersebut merupakan penyakit endemis.  Kasus diare di Indonesia tidak terlapor secara kumulatif di pusat data dan informasi kesehatan Kementerian Kesehatan RI. Data yang tersedia saat ini di Indonesia adalah data diare yang bersifat umum. Diare yang terdata tersebut disebabkan oleh banyak hal dan tidak spesifik, didasarkan pada gejala klinis atau keterangan melalui proses wawancara tanpa penunjang diagnostik laboratorium. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari aktivitas antibakteri senyawa metabolit Rhizopus sp . asal usar daun jati terhadap S. typhi .
Khikmah et al.
Materi dan Metode Sumber Isolat Sumber isolat Rhizopus sp. berasal dari usar daun jati yang diperoleh dari pedagang tempe di pasar Bantengan, Wonocatur, Banguntapan, Bantul. Bakteri uji S. typhi diperoleh dari Balai Laboratorium Kesehatan (BLK) Yogyakarta.

## Isolasi dan Identifikasi Rhizopus sp. dari
Usar Daun Jati Isolasi Rhizopus sp. dilakukan dengan memotong usar daun jati berukuran 2 x 2 cm secara aseptis, kemudian diinokulasikan pada Potato Dextrose Agar (PDA), dan diinkubasi selama 4 x 24 jam. Setelah inkubasi, pertumbuhan kapang diamati dan dilakukan pemurnian isolat.
Isolat yang telah murni kemudian diidentifikasi berdasarkan pengamatan secara makroskopis dan mikroskopis mengacu pada Introduction to Food and Airborne Fungi (Samson et al ., 2004)
Produksi Metabolit  Rhizopus sp.
Isolat Rhizopus sp. yang telah teridentifikasi diinokulasi kembali pada PDA, diinkubasi selama 4 hari, kemudian diambil sebanyak 4 bulatan dengan perforator berdiameter 5 mm untuk diinokulasikan pada 20 mL Sabouraud Dextrose Broth (SDB).
Inkubasi dilakukan dalam shaker selama 5
hari dengan kecepatan 100 rpm pada suhu kamar. Setelah inkubasi, kultur disentrifus 3000 rpm selama 15 menit.  Supernatan yang diperoleh digunakan untuk uji aktivitas antibakteri  (Sukron et al ., 2014).
Aktivitas Antibakteri Metabolit Rhizopus sp terhadap Salmonella thypi Uji aktivitas antibakteri Rhizopus sp. terhadap S. typhi dilakukan menggunakan metode difusi kertas ( disc diffusion ).
Material berupa blank disc dengan diameter 5 mm  direndam dalam supernatan, lalu diletakkan pada permukaan medium Nutrien Agar (NA) yang sudah ditumbuhi S. typhi. Kloramfenikol dengan jumlah 30 µg digunakan sebagai kontrol positif dan akuades steril digunakan sebagai kontrol negatif.  Medium uji diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Kemampuan antibakteri metabolit Rhizopus sp. terhadap S. typhi ditunjukkan dengan terbentuknya zona hambat di sekitar disc (Sukron et al .,  2014).
Zona hambat yang terbentuk diamati dan diukur diameternya menggunakan mistar standar (mm) tanpa dikurangi dengan nilai diameter disc .  Diameter zona hambat pada kloramfenikol (30 µg) mengacu pada CLSI (2019), diukur tanpa dikurangi diameter disc .
Gambar 1 .  Pertumbuhan isolat dari usar daun jati pada media Potato Dextrose Agar (A) dan pengamatan mikroskopis pada perbesaran 40x objektif (B). Bagian-bagian yang ditunjukkan pada gambar, meliputi: sporangium (1), sporangifor (2), sporangiospora (3), rizoid (4), dan stolon (5).

## HASIL
Isolasi dan Identifikasi Rhizopus sp. dari Usar Daun Jati
Satu isolat kapang berhasil diisolasi dari usar daun jati.  Koloni berwarna abu- abu kehitaman, warna sebalik koloni berwarna kuning, tidak memiliki eksudat, tidak memiliki garis radial, tidak memiliki lingkaran konsentris, koloni berfilamen dan tekstur cottony (Gambar 1A).  Morfologi mikroskopis menunjukkan adanya sporangispora berwarna coklat kehitaman, sporangium bulat berwarna coklat kehitaman, memiliki kolumela berwarna coklat berbentuk setengah bulat, sporangofor, rizoid dan hifa tidak bersekat.  Sporangiospora berbentuk bulat coklat kehitaman (Gambar 1B).

## A
B
Gambar 1.  Pertumbuhan isolat dari usar daun jati pada PDA (A) dan pengamatan mikroskopis (B) pada perbesaran 40x objektif.  Bagian-bagian yang ditunjukkan pada gambar, meliputi:  sporangium  (1),  sporangifor  (2),  sporangiospora  (3),  rizoid  (4),  dan stolon (5).
Isolat kapang diidentifikasi berdasarkan karakterisasi morfologi makroskopis dan mikroskopis dengan mengacu pada Introduction to Food and Airborne Fungi (Samson et al ., 2004), maka isolat teridentifikasi sebagai anggota Rhizopus dengan ciri khas rizoid.
1 3 2 4 5
Khikmah et al.

## HASIL
Isolasi dan Identifikasi Rhizopus sp. dari Usar Daun Jati Satu isolat kapang berhasil diisolasi dari usar daun jati. Koloni berwarna abu-abu kehitaman, warna sebalik koloni berwarna kuning, tidak memiliki eksudat, tidak memiliki garis radial, tidak memiliki lingkaran konsentris, koloni berfilamen dan tekstur cottony (Gambar 1A).  Morfologi mikroskopis menunjukkan adanya sporangispora berwarna coklat kehitaman, sporangium bulat berwarna coklat kehitaman, memiliki kolumela berwarna coklat berbentuk setengah bulat, sporangofor, rizoid dan hifa tidak bersekat. Sporangiospora berbentuk bulat coklat kehitaman (Gambar 1B).
I s o l a t   k a p a n g   d i i d e n t i f i k a s i berdasarkan karakterisasi morfologi makroskopis dan mikroskopis dengan mengacu pada Introduction to Food and Airborne Fungi (Samson et al ., 2004), maka isolat teridentifikasi sebagai anggota Rhizopus dengan ciri khas rizoid.
Aktivitas Antibakteri Metabolit Rhizopus sp terhadap Salmonella thypi Uji aktivitas antibakteri metabolit Rhizopus sp. dari usar daun jati menunjukkan bahwa Rhizopus sp. mampu menghambat pertumbuhan S. typhi. Kemampuan tersebut terlihat dengan terbentuknya zona hambat berupa zona jernih di sekitar disc (Gambar 2). Kriteria zona hambat dihitung berdasarkan diameternya.  Hasil pengukuran diameter zona hambat disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1 . Rata-rata diameter zona hambat antibakteri terhadap S. typhi Antibakteri Diameter zona hambat (mm) Metabolit Rhizopus sp. 7,14 Kloramfenikol 10 µg (kontrol +) 34 Akuades steril (kontrol -) 0

## Pembahasan
Isolasi dan Identifikasi Rhizopus dari Usar Daun Jati Isolat kapang dari usar daun jati teridentifikasi sebagai anggota Rhizopus dengan ciri adanya rizoid. Identifikasi belum dilakukan sampai spesies.  Menurut Samson et al . (2004), koloni Rhizopus tumbuh cepat, hifa tidak bersepta, mempunyai stolon, rizoid dan sporangiofor. Sporangiofor dapat tunggal atau berkelompok, biasanya tidak bercabang dan berfungsi untuk  menyangga sporangium yang banyak mengandung sporagiospora.  Sporangium hialin menjadi coklat kehitaman dengan bertambahnya umur kultur.  Kolumela berwarna coklat dan berbentuk globose . Sporangiospora berbentuk ovoid atau elips, berwarna coklat kehitaman. Rhizopus pada usar daun jati didapatkan secara alami dari spora Rhizopus yang terdapat di udara.  Spora akan  menempel pada daun jati di permukaan daun bagian bawah yang mempunyai rambut-rambut halus (trikoma), kemudian tumbuh menjadi miselium.    Proses pembuatan dan pengeringan usar dilakukan secara alami sehingga jumlah mikroorganisme pada usar lebih banyak dibandingkan inokulum komersial.
Jenis kapang yang terkandung pada usar
Gambar 2 . Aktivitas antibakteri metabolit Rhizopus sp. terhadap Salmonella typhi Keterangan: Kontrol positif (K+), kontrol negatif (K-), dan metabolit (U1-U7). Zona jernih ditunjukkan dengan tanda panah
Aktivitas Antibakteri Senyawa Metabolit Rhizopus terhadap S. thypi
Uji aktivitas antibakteri senyawa metabolit Rhizopus sp.  dari usar daun jati menunjukkan bahwa Rhizopus sp.  mampu menghambat pertumbuhan S.  typhi.
Kemampuan tersebut  terlihat dengan terbentuknya zona hambat berupa zona jernih di sekitar disc (Gambar 2).  Kriteria zona hambat dihitung berdasarkan diameternya.
Hasil pengukuran diameter zona hambat disajikan pada Tabel 1.
Gambar 2. Aktivitas antibakteri metabolit Rhizopus sp. terhadap S. typhi
Keterangan: Kontrol positif (K+), kontrol negatif  (K-), dan metabolit (U1-U7). Zona jernih ditunjukkan dengan tanda panah
Tabel 1. Rata-rata diameter zona hambat antibakteri terhadap S. typhi Antibakteri Diameter zona hambat (mm) Metabolit Rhizopus sp. 7,14 Kloramfenikol 10 µg (kontrol +) 34 Akuades steril (kontrol -) 0

## PEMBAHASAN
Isolasi dan Identifikasi Rhizopus dari Usar Daun Jati
Isolat kapang dari usar daun jati teridentifikasi sebagai anggota Rhizopus dengan ciri adanya rizoid. Identifikasi belum  dilakukan sampai spesies.  Menurut Samson et al .
(2004), koloni Rhizopus tumbuh cepat, hifa tidak bersepta, mempunyai stolon, rizoid
K + K - U2 U1 U7 U6 U5 U4 U3
Khikmah et al.
juga bervariasi, terdiri dari Rhizopus spp. dan mikroorganisme lainnya. Hasil penelitian Dewi dan Aziz (2011) mengidentifikasi sepuluh isolat Rhizopus oligosporus dari usar daun waru, daun jati, dan daun pisang. Hasil penelitian lain seperti Wipradnyadewi et al (2005) mengidentifikasi R. oligosporus dari satu isolat USR3 usar daun waru dan Ayun et al (2022) mendapatkan satu isolat teridentifikasi R. stolonifer dari tempe yang dibungkus daun pisang. Isolat-isolat tersebut diidentifikasi berdasarkan morfologi makroskopis dan mikroskopis.  Babu et al . (2009) menyatakan
R. oligosporus mempunyai peranan utama dalam fermentasi tempe.  Codex Alimentarius (2015) menuliskan bahwa kapang inokulum dalam pembuatan tempe adalah Rhizopus spp., yaitu R . oligosporus , R. oryzae , dan atau R. stolonifer.
Aktivitas Antibakteri Metabolit Rhizopus sp. terhadap Salmonella thypi Aktivitas antibakteri Rhizopus sp. terhadap S. typhi disebabkan oleh metabolit yang dihasilkan oleh Rhizopus sp. saat fermentasi biji kedelai menjadi tempe. Metabolit yang dihasilkan ini bersifat antibakteri. Aktivitas antibakteri tersebut ditandai dengan terbentuknya zona jernih pada media uji yang telah ditumbuhi S. typhi yang menunjukkan bahwa metabolit Rhizopus sp. mampu menghambat pertumbuhan S. typhi . Kemampuan antibakteri metabolit Rhizopus sp yang diperoleh dalam penelitian ini sejalan dengan beberapa hasil penelitian dari peneliti lain. Hasil penelitian McCue et al (2004) menunjukkan bahwa kapang Rhizopus oligosporus NRRL 2770 pada fermentasi kedelai menghasilkan senyawa fenolik. Kadar fenol tertinggi diperoleh setelah 6 hari fermentasi dan dapat menghambat pertumbuhan bakteri Helicobacter pylori penyebab infeksi dan kanker lambung. Penelitian Fadahunsi et al . (2013) yang melakukan fermentasi R. oligosporus NRRL
2770 pada medium Potato Dextrose Broth (PDB) menunjukkan bahwa setelah 8 hari, filtrat bebas sel dari R. oligosporus NRRL 2770 dapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif dan Gram negatif.
Filtrat antibakteri tersebut bekerja optimum pada pH 4 dan suhu 37°C. Urutan aktivitas penghambatan metabolit Rhizopus terhadap patogen uji pada penelitian Fadahunsi et al (2013) adalah E. coli , S. typhi , P. aeruginosa , dan B. subtilis dengan diameter zona 8 mm; S. aureus , K. pneumoniae , dan C.diphtheriae dengan diameter zona 7 mm, dan Proteus mirabilis dengan diameter zona 6,5 mm. Hasil penelitian Sukron et al . (2014) juga membuktikan bahwa senyawa yang bersifat antibakteri terdapat pada R. oligosporus Saito yang berpengaruh terhadap pertumbuhan E. coli dengan diameter zona hambat 5,68 mm. Filtrat tersebut menghambat pertumbuhan bakteri E. coli secara in vitro , sedangkan filtrat ekstrak tempe kedelai tidak menghambat pertumbuhan bakteri.
Filtrat atau supernatan yang dihasilkan oleh Rhizopus sp asal usar daun jati pada penelitian ini mempunyai aktivitas penghambatan terhadap S. typhi dengan diameter 7,14 mm. Nilai ini lebih rendah dari hasil penelitian McCue et al . (2004), tetapi lebih tinggi dari penelitian Sukron et al . (2014). Perbedaan hasil tersebut kemungkinan dikarenakan perbedaan jenis metabolit antibakteri yang dihasilkan oleh setiap spesies Rhizopus .
Pada penelitian ini metabolit antibakteri yang dihasilkan oleh Rhizopus sp. masih dalam bentuk  kasar (crude) dan belum diidentifikasi. Metabolit yang dihasilkan kemungkinan termasuk golongan asam organik karena fermentasi karbohidrat dalam medium PDB oleh Rhizopus sp. akan menghasilkan asam organik. Efek aktivitas antibakteri oleh asam organik didukung oleh kemampuan  molekul asam organik melintasi membran sel. Molekul asam yang tidak terdisosiasi akan berdifusi melintasi membran sel menuju sitoplasma yang lebih basa sehingga mengganggu fungsi metabolisme bakteri (Šušković et al ., 2010). Gangguan tersebut terwujud dalam bentuk terganggunya transpor nutrien ke dalam sel yang menyebabkan metabolit internal keluar dari sel dan menyebabkan kerusakan sel pada bakteri (Parada et al ., 2007).
Dihasilkannya asam organik pada fermentasi substrat oleh Rhizopus sp. juga
Khikmah et al.
ditunjukkan oleh hasil penelitian Oda et al (2002). Tiga puluh delapan strain R. oryzae yang digunakan pada fermentasi limbah kentang selama 6 hari menghasilkan asam laktat, asam fumarik, dan etanol. Kadar L (+) asam laktat tertinggi (10 mg/g) dihasilkan oleh R. oryzae IFO 4707. Hasil analisis juga menunjukkan R. oryzae mampu menghasilkan enzim yang menghidrolisis secara parsial dinding sel.  Hasil penelitian Ito et al . ( 2020) juga mendapatkan asam linoleik dari R. oligosporus NBRC 30816 pada fermentasi tempe. Asam tersebut mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Streptococcus mutans 25175 penyebab karies gigi.
B e b e r a p a   p e n e l i t i a n   t e l a h mengidentifikasi metabolit selain asam organik yang dihasilkan dari fermentasi oleh Rhizopus spp. Hasil penelitian Sohail et al . (2014) menunjukkan bahwa ekstrak asetonitril dan n-heksana dari miselium R. stolonifer mempunyai potensi sebagai antifungi dan antibakteri. Bakteri patogen yang diuji adalah P. aeruginosa , E. coli , S. aureus , S. aureus (resisten metisilin), dan S. aureus (resisten vankomisin). Aktivitas penghambatan metabolit R. stolonifer terhadap patogen uji menunjukkan bahwa ekstrak dalam pelarut asetonitril lebih efektif dibandingkan pelarut n-heksana.
Kapang Rhizopus oryzae 15 yang ditumbuhkan  pada Potato Dextrose Broth (PDB) selama 21 hari menghasilkan metil euginol yang mempunyai aktivitas antibiotik, benzena dan asam lemak (Peeran et al ., 2018).
Metabolit sekunder metil eugenol dari R. oryzae 6975 yang diperoleh dari fermentasi padat selama 21 hari bersifat antijamur, antibakteri dan feromon (Faisal & Prasad, 2016).
Ekstrak etil asetat dari R. stolonifer yang ditumbuhkan pada medium PDB selama 12 hari mempunyai kemampuan antibakteri terhadap Ervinia carotovora dan Xanthomonas campestris (Iqbal et al ., 2014). Kapang Rhizopus oryzae GY18 menghasilkan asam laktat dalam jumlah tinggi pada medium minimal dengan sumber karbon glukosa (Guo et al ., 2010). Hasil fermentasi kedelai oleh R. oligosporus menghasilkan metabolit asam lemak bebas, monogliserida, dan etil asam
lemak ester. Di antara senyawa tersebut, asam linoleat dan asam α-linolenat menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan B. subtilis . (Kusumah et al ., 2020) Asam lemak jenuh rantai sedang dan asam lemak bebas rantai panjang cenderung lebih aktif menghambat bakteri Gram positif daripada Gram negatif (Desbois & Smith, 2010). Target utama asam lemak sebagai antibakteri adalah membran sel. Mekanisme antibakteri melalui peningkatan permeabilitas membran dan lisis sel, gangguan rantai transpor elektron dan pelepasan fosforilasi oksidatif, serta penghambatan aktivitas enzimatik dan penyerapan nutrien (Yoon et al ., 2018).
Hasil penelitian Liasi et al . (2009), mengkategorikan daya hambat senyawa antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri dalam media uji menjadi empat kategori yaitu lemah (<5 mm), sedang (6-9 mm), kuat (10-14 mm), dan sangat kuat (15-18 mm). Diameter zona hambat Rhizopus sp. asal usar daun jati lebih rendah dibandingkan kloramfenikol 30 µg sebagai kontrol positif (Tabel 1). Berdasarkan kategori daya antibakteri, daya antibakteri Rhizopus sp. asal usar daun jati masuk dalam kategori sedang dan daya hambat kloramfenikol 30 µg dikategorikan sangat kuat.  Kloramfenikol (30 µg) digunakan sebagai kontrol positif mampu menghambat S. typhi dengan diameter zona hambat 34 mm. Menurut CLSI (2019), interpretasi tanggapan S. typhi terhadap kloramfenikol berdasarkan diameter zona hambat dikelompokkan menjadi 3 yaitu susceptible atau sensitif (≥18 mm), intermediate (13-17 mm) dan resistant (≤12 mm). Hasil uji antibakteri pada penelitian ini menunjukkan bahwa metabolit Rhizopus sp. asal usar daun jati  mempunyai potensi sebagai antibakteri terhadap S. typhi dengan kategori penghambatan sedang.  Karakterisasi dan identifikasi metabolit tersebut diperlukan untuk mengetahui jenis metabolit yang bersifat sebagai antibakteri pada crude hasil fermentasi menggunakan medium SDB.
Kesimpulan Metabolit Rhizopus sp. asal usar daun jati mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Salmonella typhi dengan kategori daya hambat sedang.
Khikmah et al.

## Daftar Pustaka
Aýun, Q., Suryani, S., & Kurnia, C. (2022). Identifikasi Kapang Pada Tempe Bungkus Daun Pisang Dan Plastik asal Pengrajin Tempe Jatiasih, Bekasi. Bioed: Jurnal Pendidikan Biologi , 10 (2),
45-51. https://doi.org/http://dx.doi. org/10.25157/jpb.v10i2.8685
Babu, P. D., Bhakyaraj, R., & Vidhyalakshmi, R. (2009). A Loa Cost Nutritious Food Tempe. World Journal of Diary and Food Sciences , 4 (1), 22–27.
Brooks, G. F., Carroll, K. C., Butel, J. s, Morse, S. A., & Mietzner, T. A. (2012). Jawetz, Melnick, & Adelberg Mikrobiologi Kedokteran (A. Adityaputri, C. Salim, F. Sandra, M. Iskandar, Nalurita, P. Ayuningtyas, R. Soeharsono, Rifky, & S. Debby (eds.); 25th ed.). Penerbit Buku Kedokteran EGC.
CLSI. (2019). M100 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing (29th ed., Vol. 39, Issue 1).
http://www.emeraldinsight.com/ doi/10.1108/08876049410065598
Codex Alimentarius. (2015). Regional standard for Tempe (CODEX STAN 313R-2013) . Desbois, A. P., & Smith, V. J. (2010).
Antibacterial Free Fatty Acids: Activities, Mechanisms of Action and Biotechnological Potential. Applied Microbiology and Biotechnology , 85 , 1629–1642. https://doi.org/10.1007/
s00253-009-2355-3
Dewi, R. S., & Aziz, S. (2011). Isolasi Rhizopus oligosporus Pada Beberapa Inokulum Tempe di Kabupeten Banyumas.
Molekul , 6 (2), 93–104. Fadahunsi, I. F., Ogunbanwo, S. T., &
Ogundana, D. T. (2013). Heat Stability And Optimization Of Invitro
Antimicrobial Activity Of Metabolites Produced By Rhizopus oligosporus NRRL 2710 Against Some Pathogenic Bacteria. Trakia Journal of Sciences , 11 (2), 110–117. Faisal, M. ., & Prasad, L. (2016). A Potential Source of Methyl-Eugenol From
Secondary Metabolite of Rhizopus oryzae 6975. International Journal of Applied Biology and Pharmaceutical
Technology , 7 (4), 187–192. https://doi. org/10.21276/Ijabpt.2016.7.4.22
Guo, Y., Yan, Q., Jiang, Z., Teng, C., & Wang, X. (2010). Efficient production of lactic acid from sucrose and corncob hydrolysate by a newly isolated Rhizopus oryzae GY18. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology , 37 (11), 1137–1143. https:// doi.org/10.1007/s10295-010-0761-2 Iqbal, M., Amin, M., Iqbal, Z., Bibi, H., Iqbal, A., Din, Z., Suleman, M., & Shah, H. .
(2014). Antimicrobial, cytotoxic and phytotoxic potency of ethyl acetate extract of Rhizopus stolonifer culture. Tropical Journal of Pharmaceutical Research , 13 (1), 87–92. https://doi. org/10.4314/tjpr.v13i1.13 Ito, M., Ito, T., Aoki, H., Nishioka, K.,
Shiokawa, T., Tada, H., Takeuchi, Y., Takeyasu, N., Yamamoto, T., & Takashiba, S. (2020). Isolation and Identification of the Antimicrobial Substance included in Tempeh using Rhizopus stolonifer NBRC 30816 for fermentation. International Journal of Food Microbiology , 325 , 1–9. https:// doi.org/https://doi.org/10.1016/j.
ijfoodmicro.2020.108645
Khikmah, N., & Haloho, A. S. (2021). Uji Antibakteri Rhizopus sp. Asal Inokulum Tempe terhadap Vibrio cholerae. Sciscitatio , 2 (2), 82–89. https:// doi.org/10.21460/sciscitatio.2021.22.72 Kiers, J. L., Meijer, J. C., Nout, M. J. R.,
Rombouts, F. M., Nabuurs, M. J. A., & Van Der Meulen, J. (2003). Effect of fermented soya beans on diarrhoea and feed efficiency in weaned piglets. Journal of Applied Microbiology , 95 (3), 545–552. https://doi.org/10.1046/ j.1365-2672.2003.02011.x
Kusumah, D., Wakui, M., Murakami, M., Xie, X., Yukihito, K., & Maeda, I. (2020). Linoleic Acid, α-Linolenic Acid, and Monolinolenins as Antibacterial Substances in the Heat-Processed Soybean Fermented with Rhizopus oligosporus. Bioscience, Biotechnology and Biochemistry , 84 (6), 1285–1290. https://doi.org/10.1080/09168451.20 20.1731299
Khikmah et al.
Liasi, S. A., Azmi, T. I., Hassan, M. D.,
Shuhaimi, M., Rosfarizan, M., & Ariff, A. B. (2009). Antimicrobial Activity and
Antibiotic Sensitivity of Three Isolates of Lactic Acid Bacteria from Fermented
Fish Product, Budu. Malaysian Journal of Microbiology , 5 (1), 33–37. https://doi. org/10.21161/mjm.15008
Maskar, D. (2013). Ayo Makan Tempe, Bisa Jadi Obat Diare dan Mampu Cegah Kanker . https://finance.detik.com/
berita-ekonomi-bisnis/d-2271201/ayo- makan-tempe-bisa-jadi-obat-diare- dan-mampu-cegah-kanker- McCue, P., Lin, Y. T., Labbe, R. G., & Shetty, K. (2004). Sprouting and solid-state bioprocessing by Rhizopus oligosporus increase the In Vitro antibacterial activity of aqueous soybean extracts against Helicobacter pylori. Food Biotechnology , 18 (2), 229–249. https:// doi.org/10.1081/FBT-200025669 Oda, Y., Saito, K., Yamauchi, H., & Mori, M. (2002). Lactic Acid Fermentation of Potato Pulp by the Fungus Rhizopus oryzae. Current Microbiology , 45 , 1–4. https://doi.org/10.1007/s00284-001- 0048-y Parada, J. L., Caron, C. R., Medeiros, A. B.
P., & Soccol, C. R. (2007). Bacteriocins from Lactic Acid Bacteria: Purification,
Properties and Use as Biopreservatives. Brazilian Archives of Biology and Technology , 50 (3), 521–542. https://doi. org/10.1590/s1516-89132007000300018 Peeran, M. ., Prasad, L., & Kamil, D. (2018).
Characterization of Secondary Metabolites from Rhizopus oryzae and Its Effect on Plant Pathogens.
International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences , 7 (03), 705–710. https://doi.org/10.20546/ ijcmas.2018.703.082
Samson, R. A., Hoekstra, E. S., & Frisvad,
J. C. (2004). Introduction To Food And AirBorne Fungi (7th ed.). CBS. Sohail, Afzal, M., Iqbal, Z., Sheena, Khan, S. ., Rahman, U., Khan, W., Asghar, A., Ullah, M., & Numan, M. (2014). Antimicrobial activity of mycelial extracts of Rhizopus stolonifer
against different fungal and bacterial pathogenic strains. International Journal of Biosciences (IJB) , 4 (7), 276–282. https://doi.org/10.12692/ijb/4.7.276- 282
Sukron, M. A., Suarsini, E., & Witjoro, A.
(2014). Pengaruh Ekstrak Tempe Kedelai (Glycine max (L) Merr.) dan Ekstrak Inokulum Kapang Tempe Terhadap Penghambat Esherichia coli Secara in Vitro . Universitas Negeri Malang, Malang.
Šušković, J., Kos, B., Beganović, J., Pavunc,
A. L., Habjanič, K., & Matoć, S. (2010). Antimicrobial Activity - The most Important Property of Probiotic and Starter Lactic Acid Bacteria. Food Technology and Biotechnology , 48 (3), 296–307. Wipradnyadewi, P. A. S., Rahayu, E. S.,
& Raharjo, S. (2005). Isolasi dan Identifikasi Rhizopus Oligosporus pada Beberapa Inokulum Tempe. Jurnal Agrotekno , 11 (2), 1–9. Yoon, B. K., Jackman, J. A., Valle-González, E. R., & Cho, N. J. (2018). Antibacterial Free Fatty Acids and Monoglycerides:
Biological Activities, Experimental Testing, and Therapeutic Applications. In International Journal of Molecular Sciences, 19 , 1-40. https://doi. org/10.3390/ijms19041114