## ANTIOXIDANT ACTIVITY TESTING OF Theonella swinhoei SPONGE ETHANOL EXTRACT COLLECTED FROM MANADO TUA ISLAND
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL SPONS Theonella swinhoei DIKOLEKSI DARI PULAU MANADO TUA
Gloria S. Maukar 1)* , Adithiya Yudistira 1) , Karlah L.R Mansauda 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
* gmaukar@gmail.com

## ABSTRACT
This  sponge  is  a  marine  organism  that  has  a  lot  of  potential  to  produce  active  compounds.  Theonella swinhoei produces primary and secondary metabolites, one type of secondary metabolite is antioxidants. Antioxidants are substances that inhibit oxidation reactions due to free radicals that can cause damage to unsaturated fatty acids, causing disease. This study aimed to analyze the antioxidant activity of the sponge Theonella swinhoei. Theonella swinhoei sponge was obtained from Manado Tua Island, North Sulawesi. This  research  is  a  laboratory  experiment  with  maceration  extraction  method.  Testing  on  the  ethanolic extract  fraction  of  Sponge  Theonella  swinhoei  using  the  DPPH  method  (1,1diphenyl-2-  picrylhydrazil) which  was  measured  by  means  of  a  UV-Vis  spectrophotometer.  The  results  showed  that  the  ethanolic extract  fraction  of Theonella  swinhoei  sponge  had  antioxidant  activity  in  each  fraction,  ethanol  extract (59.66), N-Hexan fraction (59.5%), CHCl 3 fraction (59.23%) with a concentration of 100 mg. /L, and the MeOH fraction was 65.93%. From these results, it can be seen that the MeOH fraction has the highest yield compared to other solvents, which is 65.93%. This shows that the sponge Theonella swinhoei contains many polar bioactive components.
Keywords : Antioxidant, DPPH, Theonella swinhoei , Manado Tua Islands

## ABSTRAK
Spons ini merupakan organisme laut yang banyak memiliki potensi untuk menghasilkan senyawa aktif. Theonella  swinhoei memproduksi  metabolit  primer  dan  sekunder,  salah  satu  jenis  metabolit  sekunder yaitu antioksidan. Antioksidan adalah zat penghambat reaksi oksidasi akibat radikal bebas yang dapat menyebabkan kerusakan asam lemak tak jenuh sehingga menimbulkan penyakit. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  dari  spons Theonella  swinhoei. Spons Theonella  swinhoei dikoleksi dari Pulau Manado Tua, Sulawesi Utara. Penelitian ini merupakan eksperimental laboratorium dengan metode ekstraksi maserasi. Pengujian terhadap fraksi ekstrak etanol Spons Theonella swinhoei menggunakan metode DPPH (1,1difenil-2-pikrilhidrazil) yang diukur dengan alat spektrofotometer UV- Vis.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  fraksi  ekstrak  etanol  Spons Theonella  swinhoei memiliki aktivitas antioksidan pada masing-masing fraksi, ekstrak etanol (59,66), fraksi N- Hexan (59,5%), fraksi CHCl 3 (59,23%) dengan konsentrasi 100 mg/L, dan fraksi MeOH 65,93 %.  Dari hasil ini terlihat bahwa Fraksi  MeOH  memiliki  hasil  paling  tinggi  dari  pelarut  yang  lain  yaitu  sebanyak  65,93  %.  Hal  ini menunjukkan bahwa dalam spons Theonella swinhoei terdapat banyak komponen bioaktif yang bersifat polar.
Kata Kunci : Antioksidan, DPPH, Theonella swinhoei , Manado Tua.

## PENDAHULUAN
Indonesia  sebagai  negara  yang  kaya akan  sumber  daya  alam  luas  laut  yang  terdiri dari 5,8 juta km² atau sekitar 70% dari luas total wilayah di Indonesia. Wilayah lautan Indonesia memiliki  berbagai  macam  spesies  organisme laut yang sangat baik untuk tumbuhan maupun hewan.  Salah  satunya  invertebrata  yang memiliki  jumlah  sangat  banyak  dilautan Indonesia  yaitu  spons.  Spons  laut  memiliki potensi  bioaktif  yang  besar.  Selama  beberapa tahun  kurang  lebih  50  Tahun  terakhir  telah banyak kandungan bioaktif yang telah ditemukan pada spons (Haedar et al , 2016).
Spons  merupakan  biota  laut  yang berpotensi  untuk  menghasilkan  metabolit sekunder sehingga memiliki sifat bioaktif. Hasil metabolit sekunder dari beberapa spons terbukti mengandung  senyawa-senyawa  aktif  sebagai "lead  compound"  dalam  pengembangan  obat antibiotik,  antikanker,  antivirus,  antibakteri, antioksidan  dan  Iain-lain,  Spons  tidak  hanya kaya  akan  metabolit  sekunder,  tapi  memiliki kemampuan untuk menyintesis berbagai macam senyawa, seperti alkaloid, peptide, dan terpenoid. Senyawa- senyawa tersebut dilaporkan memiliki aktifitas sebagai antitumor, antijamur,  antibakteri,  dan  juga  sebagai antioksidan (Arai, 2014).

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Bentuk penelitian ini ialah eksperimental laboratorium yang akan menguji aktivitas  antioksidan  hasil  fraksinasi  ekstrak etanol  dari  spons Theonella  swinhoei yang diperoleh dari Pulau Manado Tua.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan November 2021 - Maret 2022 di Laboratorium Program  Studi  Farmasi  Fakultas  Matemarika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  sam Ratulangi
Alat
tabung  oksigen,  snorkel,  fins, zipper  lock  bag , botol  600  ml,  talenan, cool  box ,  pisau, Erlenmeyer (Pyrex), corong, rotary evaporator, timbangan  analitik,  corong  pisah,  gelas  ukur, gelas  kimia  (Pyrex),  cawan  petri,  autoklaf, pinset, pembakar spritus, magnetic stirrer , pipet tetes, micro  tubes , hot plate,  batang  pengaduk, Laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi,  tabung reaksi,  lemari  pendingin,  inkubator,  cakram ( paper disc) , kertas label dan spidol permanen.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu spons Theonella swinhoei,
N-heksan,
kloroform,  metanol  80%,  etanol  95%,  DPPH (1,1 difenil -2- pikrilhidrazil ).

## Preparasi Sampel
Sampel  spons Theonella  swinhoei diperoleh  dari  Pulau  Manado  Tua  Sulawesi Utara.  Sampel  diambil  dengan  menggunakan alat  bantu  (masker,  snorkel,  fins,  tabung oksigen, ziplok dan pisau), kemudian dimasukkan  dalam  ziplok  dan  diberikan  label. Sampel yang telah didapat langsung dibersihkan dari  pengotor,  lalu  dipotong  kecil-  kecil  dan langsung dimasukkan kedalam botol yang berisi pelarut  etanol  95%.  Botol  sampel  dimasukkan kedalam kotak dingin ( cool box ) yang berisi es batu  dan  tidak  terpapar  matahari  secara langsung,  di  laboratorium  sampel  tersebut diekstraksi menggunakan metode maserasi.

## Ekstraksi
Sampel  spons Theonella  swinhoei diekstraksi  dengan  cara  maserasi.  Sampel dipotong  kecil-kecil  lalu  dimasukkan  ke  dalam botol  600  ml,  sampel  direndam  dengan  pelarut etanol  95%  sebanyak  200  mL  dan  didiamkan selama  24  jam,  hasil  maserasi  kemudian disaring dengan kertas saring untuk mendapatkan  filtrat,  dilakukan  pengulangan sebanyak  3  kali.  Kemudian  diuapkan  dengan rotary  evaporator  sehingga  dihasilkan  ekstrak kasar  dari  spons Theonella  swinhoei .  Ekstrak yang diperoleh kemudian ditimbang.
Alat yang digunakan dalam penelitian
ini yaitu masker, sarung tangan, gunting,
Fraksinasi Ekstrak etanol Spons Theonella swhinhoei dimasukkan  kedalam  Erlenmeyer, kemudian  dilarutkan  dengan  metanol  80% sebanyak 100 mL. Setelah sampel larut, sampel dimasukkan  kedalam  corong  pisah  lalu ditambahkan  pelarut  N-heksan  sebanyak  100 mL  setelah  itu  dikocok  berulangkali  sampai homogen.  Dibiarkan  sampai  terbentuk  dua fraksi  yaitu  fraksi  MeOH  dan  N-heksan. Masing-masing  lapisan  ditampung  dalam wadah  yang  berbeda.  Lapisan  N-heksan selanjutnya  dievaporasi  menggunakan  rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental, lalu ditimbang.  selanjutnya  untuk  fraksi  MeOH ditambahkan dengan aquades sebanyak 100 mL dipartisi  dengan  pelarut  kloroform  dengan perbandingan  1:1  v/v,  dikocok  dalam  corong pisah  hingga  homogen.  Dibiarkan  sampai terbentuk  dua lapisan  yaitu lapisan MeOH  dan kloroform.  Masing-masing  lapisan  ditampung dalam wadah yang berbeda. Lapisan kloroform dalam wadah selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh  ekstrak  kental  lalu  ditimbang.  fraksi MeOH  yang  ditampung  pada  wadah  yang  lain kemudian  dievaporasi  menggunakan  rotary evaporator  hingga  kering  lalu  ditimbang  berat sampel. Ketiga fraksi tersebut digunakan dalam pengujian  antioksidan  dengan  menggunakan metode dpph.

## Pembuatan  Larutan  100  ppm  Ekstrak  dan Fraksi Spons Theonella swinhoei
Untuk membuat larutan ekstrak dengan konsentrasi  100  ppm  dilakukan  dengan  cara melarutkan  10  mg  ekstrak  etanol  spons Theonella  swinhoei kedalam  100  mL  etanol 95% dalam labu ukur kemudian dikocok hingga homogen. Perlakuan yang sama dilakukan pada fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi metanol. Pembuatan larutan ditentukan menggunakan persamaan :
Pembuatan Larutan DPPH 50 ppm Untuk pembuatan larutan DPPH ditimbang  sebanyak  5  mg  serbuk  DPPH  dan dilarutkan  dalam  100  mL  etanol  95%,  dalam labu  ukur  di  kocok  hingga  homogen  sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 50 ppm.

## Pembuatan Larutan Kontrol
Larutan kontrol dibuat dengan mencampur  2  ml  etanol  95%  dan  2  ml  larutan DPPH  50  ppm  dikocok  hingga  homogen  dan diinkubasi dalam ruangan gelap selama 30 menit kemudian  diukur  panjang  gelombang  yang optimal.

## Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  dengan metode DPPH
Larutan  uji  sampel  dibuat  dengan  cara sebanyak  2  mL  larutan  DPPH  ditambahkan kedalam  2  mL  larutan  sampel  ekstrak  etanol, fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi metanol  kemudian  divortex  dan  diinkubasi selama  30  menit  pada  suhu  ruangan  yaitu  37  ْ˚ C hingga terjadi perubahan  warna dari aktivitas DPPH.  Perubahan  warna  ungu  menjadi  kuning menandakan  efisiensi  penangkal  radikal  bebas, Masing-masing  sampel  dilakukan  3  kali pengulangan.  Semua  sampel  yaitu  sampel ekstrak  dan  fraksi  yang  telah  di  inkubasi  diuji nilai
absorbansinya
menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang  517  nm.  Aktivitas  penangkapan radikal  bebas  (persen  inhibisi)  dihitung  sebagai persentase  DPPH  yang  tereduksi  dengan menggunakan rumus sebagai berikut :
%Inhibisi = 1 ― A bsorbansi sampel 𝑥 100% Absorbansi  kontrol

## HASIL DAN PEMBAHASAN Persiapan Sampel
Spons Theonella  swinhoei dicuci  dan dibersihkan  dari  kotoran  bertujuan  untuk membersihkan  sampel  dari  kotoran  yang  bisa mengontaminasi  sampel  yang  akan  diuji, kemudian  sampel  dipotong  kecil  kecil  untuk memperluas ukuran permukaan sampel, karena semakin luas permukaan sampel maka semakin banyak  senyawa  aktif  yang  dapat  ditarik  atau terlarut kedalam pelarut (Kristanti dkk, 2008).

## Ekstrak
Ekstraksi menggunakan metode maserasi.  Hasil  sampel  1228  gram  spons Theonella swinhoei dipotong-potong, dan direndem. Pelarut yang di gunakan adalah etanol 95%  karena  pelarut  ini  mudah  didapatkan  dan memiliki  tingkat  popularitas  yang  lebar  mulai dari  senyawa  polar,  non-polar  dan  semi  polar (Sulastri dkk., 2015). Proses maserasi dilakukan selama 3x24 jam,  dengan
tiga kali remaserasi atau pergantian pelarut yang baru.  Maserasi  lebih  efisian  jika  dilakukan berulang  kali  agar  senyawa  aktif  yang  tertarik bisa  optimum  (Khopkar,  2008).  Hasil  ekstrak kasar yang diperoleh yaitu 613 gram (Maulida, 2010).

## Fraksinasi
Ekstrak  etanol  difraksinasi,  metode fraksinasi yang digunakan yaitu fraksinasi cair- cair  dimana  menggunakan  tiga  pelarut  dengan tingkat  kepolaran  yang  berbeda  seperti  n- heksan,  kloroform  dan metanol.  Proses fraksinasi dilakukan secara bertingkat berdasarkan  tingkat  kepolaran  pelarut  yaitu mulai  dari  pelarut  non  polar  selanjutnya  semi polar  dan  yang  terakhir  pelarut  polar  (Engka, 2016).
Pada  proses  fraksinasi  dengan  pelarut yang  berbeda  berdasarkan  tingkat  kepolaran, akan terbentuk 2 lapisan, dimana pelarut dengan massa  jenis  lebih  besar  akan  berada  di  bagian bawah  dan  pelarut  dengan  massa  jenis  kecil akan berada di lapisan atas. Terjadinya 2 lapisan pelarut  ini  bertujuan  agar  kandungan  11  kimia yang  terdapat  dalam  sampel  secara  selektif dapat  ditarik  oleh  pelarut  yang  digunakan. Massa fraksi beserta rendemen yang dihasilkan dalam proses fraksinasi ditunjukkan pada Tabel 1.
dengan hasil ekstrak dan fraksi spons Theonella swinhoei .

## Pembuatan Larutan Kontrol
Hasil  pembuatan  larutan  ini  bertujuan agar bisa melihat nilai presentase absorbansi dari kontrol DPPH. Theonella swinhoei .
Pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH
Hasil  pengujian  ini  terdapat  perbedaan karena nilai rendemen hal ini disebabkan karena pelarut  yang  berbeda  akan  melarutkan  senyawa yang  berbeda  juga  sesuai  tingkat  kepolarannya (Mujipradhana dkk, 2018).
Dari  hasil  ini  terlihat  bahwa  Fraksi Metanol memiliki hasil paling tinggi dari pelarut yang  lain  yaitu  sebanyak  65,93  %.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  dalam  spons Theonella swinhoei terdapat  banyak  komponen  bioaktif yang  bersifat  polar.  Hasil  rendemen  ekstrak tergantung  pada  metode  ekstraksi,  kondisi senyawa,  waktu  ekstraksi,  ukuran  partikel sampel,  Berikut  uraian  hasil  pengujian  aktivitas antioksidan dengan fraksinasi ekstrak etanol dari spons Theonella  swinhoei ditunjukkan  pada Tabel 2.
Tabel  2. Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan dengan  fraksinasi  ekstrak  etanol  dari spons Theonella swinheoi
Tabel 1 . Rendemen ekstrak dan fraksi Spons Theonella swinhoei No Sampel Berat (g) Rendemen (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 63 5,13 Hijau Kecoklatan 2 Fraksi n-Heksan 2 6,34 Hijau Kecoklatan 3 Fraksi Kloroform 16 50,79 Hijau Tua 4 Fraksi Metanol 1 3,17 Coklat

## Hasil Pembuatan Larutan 100 ppm Ekstrak
dan Fraksi Spons Theonella swinhoei Hasil  yang  dilarutkan  10  mg  esktrak etanol  spons Theonella  swinhoei ke  100  mL etanol 95 %, telah diberi perlakuan pada setiap masing-masing fraksi n-heksan, fraksi kloroform  dan  fraksi  metanol,  dan  divortex hingga  homogen.  Digunakan  100  ppm  agar konsentrasi yang paling baik untuk dilihat hasil ukuran presentase.

## Pembuatan larutan DPPH 50 ppm
Hasil pembuatan larutan ini bertujuan untuk stok sediaan DPPH yang akan diuji bersama
Etanol  merupakan  pelarut  yang  dapat melarutkan  senyawa  dari  yang  semi  polar hingga  polar,  salah  satu  senyawa  yang  dapat dilarutkan  oleh  etanol  ialah  senyawa  fenolik. Etanol dapat melarutkan senyawa fenolik karena mampu  mendegradasi  dinding  sel  sehingga senyawa  bioaktif  lebih  mudah  keluar  dari  sel, etanol  memiliki  gugus  hidroksil  yang  dapat berikatan  dengan  gugus  hidrogen  dari  gugus hidroksil dengan senyawa fenolik yang menyebabkan  peningkatan  kelarutan  senyawa fenolik dalam etanol (Prayitno et al ., 2016).
Konsentrasi 100 mg/L dan Fraksi Pengulangan I II III Rata -rata Ekstrak 67,8 % 55,1 % 56,1 % 59,6 6 % CHCl 3 55,1 % 40,9 % 81,7 % 59,2 3 % MeOH 70,8 % 56,7% 70,3 % 65,9 3 % N-Heksan 59,7 % 63,1 % 55,7 % 59,5 %
Proses  ekstraksi  yang  dilakukan  pada spons Theonella swinhoei dengan menggunakan metode  maserasi,  dipilih  karena  melihat  cara kerja  dan  peralatan  yang digunakan  sederhana, mampu menarik senyawa-senyawa yang berkhasiat,  dan  untuk  menghindari  kerusakan beberapa  senyawa  aktif dari  spons Theonella swinhoei (Kristiani, 2014). Kemudian
dilakukan  evaporasi,  bertujuan  untuk  proses pengentalan  larutan  dengan  cara  mendidihkan dan  menguapkan  pelarut  (Poedjiadi,  1994). Setelah dihasilkan ekstrak kental. Ekstrak spons Theonella  swinhoei ini  digunakan  untuk pengujian aktivitas antioksidan.
Pada uji aktivitas antioksidan menggunakan  metode  DPPH  (1,1 -Difenil -2- pikrilhidrazil).  Metode  DPPH  untuk  panjang gelombang  517  nm  maksimum  memberikan serapan maksimum dan menghasilkan kepekaan  dan  keakuratan  yang  lebih  tinggi, DPPH  merupakan  radikal  stabil  yang  dapat diukur intensitas pada panjang gelombang 515, 516, dan 517 nm (Rohman et al ., 2005).
Pada  pengujian  ini  panjang  gelombang maksimum  DPPH  yaitu  517  nm,  pengukuran absorbansi  yang  dilakukan  pada  larutan  DPPH dengan  menggunakan  panjang  gelombang  400 nm  sampai  600  nm  dan  hasil  yang  didapatkan pada absorbansi DPPH adalah 0,719 dan untuk fraksi  CHCl 3 ,  MeOH,  N-Heksan,  dan  Ekstrak masing-masing  menggunakan  konsentrasi  100 mg/L.  Dari  konsentrasi  tersebut  dicampurkan dengan  DPPH  lalu  divortex,  Vortex  bertujuan agar  larutan  dapat  tercampur  hingga  homogen melalui  proses  vibrasi.  Dan  diinkubasi  selama 30  menit.  Inkubasi  ini  bertujuan  agar  larutan sampel  dan  larutan  DPPH  50  ppm  dapat tercampur  dengan  baik  dan  cara  yang  telah direkomendasikan oleh peneliti-peneliti sebelumnya (Molyneux, 2004). Setelah
diinkubasi, dilakukan pengukuran  absorbansi  dengan  menggunakan alat  spektrofotometer  UV-Vis  dengan  panjang gelombang  517  nm,  pada  setiap  fraksi  dengan konsentrasi  100  mg/L  dilakukan  sebanyak  tiga kali  pengulangan.  Pada  hasil  penelitian  yang didapatkan  menunjukkan  nilai  presentase inhibisi pada setiap fraksi ekstrak etanol, spons Theonella  swinhoei yang  memiliki  aktivitas antioksidan  dari  setiap  fraksi  masing-  masing dilakukan  tiga  kali  pengulangan  nilai  rata-rata N-Heksan,  CHCl 3 ,  Ekstrak,  dan  MeOH  telah terjadi  peningkatan  ini  menunjukkan  bahwa sampel  tersebut  memiliki  kadar  antioksidan (Molyneux,  2004)
menyatakan  bahwa  nilai  standar  kadar  15 antioksidan adalah 50%.
Pada  nilai  rata-rata  65,93  %  yang didapat  dari  fraksi  MeOH  ekstrak  etanol spons Theonella  swinhoei memiliki  kadar antioksidan  lebih  tinggi  karena  nilai  yang ada  lebih  mendekati  dari  standar  kadar antioksidan  sehingga  bisa  dibandingkan bahwa  dari  fraksi-  fraksi  yang  ada diantaranya fraksi CHCl3, N- Heksan , dan Ekstrak, yang memiliki nilai rata- rata 59,05 %  sampai  59,66  %,  bisa  diketahui  bahwa setiap  nilai  absorbansi  yang  tidak  stabil, naik  turunnya  nilai  absorbansi  sehingga mengakibatkan  hasil  inhibisi  yang  didapat terlihat  jauh  untuk  mendekati  dari  standar kadar antioksidan  dari  fraksi  MeOH  yang ada,  MeOH juga  mempunyai  kemampuan yang  lebih  baik  dibanding  dengan  etanol dalam melarutkan senyawa polar.
Pelarut  MeOH  merupakan  jenis pelarut  polar  sehingga  MeOH  dapat melarutkan senyawa-senyawa bersifat polar (Maulida et  al ,  2010).  Pada  fraksi  MeOH ekstrak  etanol  lebih  peka  akan  antioksidan, bisa  dilihat  senyawa-  senyawa  yang  ada pada  spons Theonella  swinhoei dapat  larut dan  bisa  dilihat  akan  penelitian  hasil  uji aktivitas  antioksidan  hal  ini  dikarenakan senyawa  bioaktif  yang  terkandung  pada spons Theonella swinhoei lebih mudah larut dalam  polar  yang  dapat  berfungsi  sebagai bahan  antioksidan,  dibandingkan  dengan pelarut non  polar,  dan  semi  polar,  membuat senyawa  bioaktif  agak  sulit  untuk  larut dalam nilai kadar standar antioksidan.

## KESIMPULAN
Aktivitas  fraksinasi  ekstrak  etanol spons Theonella  swinhoei yang  diperoleh dari Pulau Manado Tua yaitu ekstrak etanol 59,66 %,  pada  fraksi  CHCl 3 59,23  %,  fraksi  N- Heksan 59,5 %, dan fraksi MeOH 65,93 %, sehingga  aktivitas  antioksidan  yang  paling tinggi adalah MeOH 65,93 %

## SARAN
Perlu  di  lakukan  perhitungan  IC 50 untuk  mengetahui kategori kekuatan antioksidan  spons Theonella  swinhoei ,  dan perlu  dilakukan  pengujian  lain  untuk mengetahui  manfaat  dari  spons Theonella swinhoei seperti uji aktivitas antibakteri..

## DAFTAR PUSTAKA
Arai  M,  Chisu  H,  Yoshi  Y,  A  Setiawan, Motomasa  K.  2014.  Aaptamines, Marine  Spongean  Alkaloids,  as
Anti- Dormant Mycobacterial
Substances. J.  Nat  Med. 68:  372-
376.
Haedar,  Sadarun,  B.,  Palupi,  Ratna,  D., 2016. Potensi  keanekaragaman  jenis dan  sebaran  spons  di  Perairan  pulau saponda  laut  kabupaten  konawe. Sapa Laut. 1 (1): 1-9.
Khopkar,  S.  2008. Konsep  Dasar  Kimia Analitik. UI Press, Jakarta
Kristiani,  V  2014. Pengaruh  Konsentrasi etanol dan Waktu Maserasi Terhadap Perolehan Fenolik, Flavonoid, dan Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Rmbut  Jagung. Fakultas  Teknik  universitas  Katolik
Widya Mandala, Surabaya.
Kristanti, A. N., N.S. Aminah., M. Tanjung.,
B. Kurniadi. 2008. Buku Ajar Fitokimia. Unair Press ,
Surabaya.
Maulida  D.  dan  Naufal  Z.  2010. Ekstraksi Antioksidan (Likopen) Dengan Menggunakan  Solvent  Campuran,
N-  heksana,  Aseton  dan  Etanol. Universitas Dipenegoro.
Membri,  D.K.,  Yudistira,  A.,   Sumantri ,  S. (2021).  Uji  Aktivitas  Antioksidan
Ekstrak Etanol Spons Liosina paradoxa Yang  Dikoleksi  Dari Pulau Mantehage. Pharmacon ,
10(2), 775–777.
Molyneux,  P.  2004. The  Use  Of  The  Stable Free Radical Diphenyl picrylhydrazyl DPPHF or Estimating  Antioxidant  Activity. Journals  Songklanakarin  Science Technology, 26 (2): 211-219.
Poedjiadi, 1994. Dasar-dasar  Biokimia .
Jakarta: UI-Press
Prayitno,  S.A.,  J.  Kusnadi,  E.S.  Murtini. 2016 . Antioxidant  activity  of  red betel  leaves  extract  (Piper  crocatum
Ruiz and Pav.)  by different concentration  of solvents. Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Science 7(5):1836-1843. Rohman,  A.  dan  Sugeng  R.  2005.  Daya antioksidan  ekstrak  etanol  daun kemuning  (Murraya  paniculata  (L)
Jack)  secara  in  vitro. Farmasi Indonesia. 16(3): 136- 140.
Sulastri,  dkk.  2015.  Formulasi  Mikroemulsi Ekstrak  Bawang  Hutan  dan  Uji Aktivitas Antioksidan. Jurnal
Pharmascience. 2(2) :  2-5
Adithya, Karlah. 2022. Aktivitas antioksidan dari  ekstrak  tongkol  jagung  (Zea mays  L.)  LP  Saleh,  E  suryanto, Pharmacon 1 (2), 2012.24,2012.