## IDENTIFIKASI SENYAWA FITOKIMIA DAN UJI TOKSISITAS
EKSTRAK  ETANOL DAUN  LOLA KAHORI ( Erythrina variegata L .) DARI TIDORE KEPULAUAN MENGGUNAKAN METODE BSLT
Stela G. Warara 1 ), Edwin De Queljoe 2 ), Herny Simbala 2)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Jurusan Biologi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Lola  Kahori  (Erythrina  variegata  L.)  is  a  medical  plant  used  empirically  as  anti- inflamatory, anti-cancer and anti-malarial. Lola Kahori Leafs is the most frequently parts used as  traditional  medicine.  This  research  aims  to  identified  phytochemical  compound  and  to determine the LC 50 toxicity value of ethanol extract from Lola Kahori leafs through the toxicity assay  using  BSLT  method.  Extraction  was  done  by  ultrasonication  method  using  ethanol  95% solvent. Phytochemical screening was done according to Harborne method include identification of alkaloids, triterpenoids, steroids, flavonoids and tannins. Toxicity assay had been used BSLT method to count the lethality amount of shrimp larvae that put in solution test provided in four concentration of 1 mg/L, 10 mg/L, 100 mg/L, 1000 mg/L and control solution. The observation has done every 60 minutes in 24 hours. The value of LC 50 obtained based from the calculation of shrimp  larvae  lethality  percentage  used  probit  analysis.  The  result  of  phytochemical  screening showed  that  ethanol  extract  from  Lola  Kahori  leafs  has  phytochemical  compounds  containing alkaloid  and  tannin.  Ethanol  extract  from  Lola  kahori  leafs  has  tended  the  most  toxic  to  brine shrimp according the value of LC 50 that is 55,719 mg/L.
Keywords :  Lola  Kahori  (Erythrina  variegata  L.),  Phytochemical  Screening,  Toxicity Assay, Brine Shrimp

## ABSTRAK
Tumbuhan  Lola  Kahori  (Erythrina  variegata  L.)  merupakan  tanaman  berkhasiat  obat yang  telah  digunakan  secara  empiris  sebagai  antiinflamasi,  antikanker  dan  antimalaria.  Bagian tumbuhan  ini  yang  biasa  digunakan  sebagai  bahan  pengobatan  tradisional  adalah  bagian  daun. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengidentifikasi  senyawa  fitokimia  dan  menentukan  nilai  toksik LC 50 ekstrak  etanol  daun  Lola  Kahori  melalui  uji  toksisitas  menggunakan  metode  BSLT. Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  Ultrasonikasi  menggunakan  pelarut  etanol  95%.  Pengujian fitokimia dilakukan dengan metode Harborne meliputi identifikasi alkaloid, triterpenoid, steroid, flavonoid  dan  tanin.  Uji  toksisitas  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  BSLT  untuk menghitung  jumlah  kematian  larva  udang  yang  dimasukkan  dalam  empat  larutan  uji  dengan konsentrasi  larutan  yaitu  1  mg/L,  10  mg/L,  100  mg/L  ,1000  mg/L  dan  larutan  kontrol. Pengamatan  dilakukan  setiap  60  menit  selama  24  jam.  Nilai  LC 50 didapatkan  berdasarkan
perhitungan  persen  kematian  larva  udang  menggunakan  analisis  probit.  Hasil  identifikasi fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Lola kahori mengandung alkaloid dan tanin. Ekstrak  etanol  daun  Lola  kahori  bersifat  sangat  toksik  terhadap  larva  udang  berdasarkan  nilai LC 50 yang diperoleh yaitu 55,719 mg/L.
Kata  kunci :  Lola  Kahori  (Erythrina  variegata  L.),  Identifikasi  Fitokimia,  Uji Toksisitas, Larva Udang.

## PENDAHULUAN
Tumbuhan  Lola  Kahori (Erythrina variegata
L. ) Famili Leguminosae merupakan  tumbuhan  obat  Indonesia  yang telah  banyak  digunakan  oleh  masyarakat dalam pengobatan secara tradisional sebagai antikanker,  antimalaria  dan  antiinflamasi (Mursito,2002).
Bagian  tumbuhan    Lola  Kahori (Erythrina  variegata L. ) yang  digunakan dalam  pengobatan  tradisional  adalah  kulit batang,  daun,  akar  dan  biji.  Di  daerah Marabahan  Provinsi  Kalimantan  Selatan,
Lola  Kahori (Erythrina  variegata L. ) digunakan oleh masyarakat untuk pengobatan  radang  dengan  cara  merebus daun  yang  telah  dikeringkan  kemudian  air rebusannya  diminum.  Cara  yang  lain  ialah dengan  menumbuk  daun  yang  masih  segar dan  menempelkannya  di  permukaan  kulit yang bengkak (Mustofa,2005).
Berdasarkan  hal  tersebut  peneliti tertarik  untuk  melakukan  penelitian  yang bertujuan  untuk  mengidentifikasi  senyawa fitokimia  yang  terkandung  didalam  ekstrak etanol daun Lola Kahori (Erythrina variegata L. ) dan menentukan nilai toksisitas  LC 50 ekstrak  etanol  daun  Lola Kahori (Erythrina  variegata L. ) terhadap larva  udang  ( Artemia  salina), sehingga kandungan  senyawa  fitokimia  dan  kadar toksik ekstraknya dapat diketahui.

## METODOLOGI PENELITIAN Bentuk Penelitian
Jenis  Penelitian  ini  ialah  Eksperimen Laboratorium yang mengidentifikasi kandungan  senyawa  fitokimia    ekstrak etanol  daun  Lola  Kahori  dan  menentukan nilai  toksik  LC50  ekstrak  etanol  daun  Lola Kahori  terhadap  Larva  udang  melalui  Uji Toksisitas menggunakan metode BSLT yang dibagi  dalam  empat  konsentrasi  uji  yaitu  1 mg/L,
10 mg/L,
100 mg/L dan 1.000 mg/L.

## Alat
Alat-alat  yang digunakan antara lain : masker,  handskun,  alat-alat  gelas,neraca analitik,  corong,  kertas  saring,  rak  tabung reaksi, pipet tetes, pipet volum, mikro pipet, ultrasonic  bath , rotary  evaporator ,  kaca pembesar,  batang  pengaduk  dan  penangas air.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun tumbuhan  Lola  kahori  dan  Larva    udang. Bahan  kimia  yang  digunakan  ialah  etanol, kloroform,  amoniak,    natrium  hidroksida, asam sulfat, asam klorida, besi (III) klorida, magnesium,  NaCl,  KCl,  MgSO 4, Eter, pereaksi Meyer, pereaksi Dragendorf,
pereaksi  Wagner  dan  Pereaksi  Lieberman- buchard.

## Penyiapan sampel
Daun  Lola  Kahori  dipisahkan  dari tangkainya  dengan  cara  dipetik    kemudian dibersihkan  dengan  cara  dicuci  dengan  air
bersih  yang  mengalir.  daun  Lola  Kahori yang  telah  dibersihkan  kemudian  di  angin- anginkan  di  dalam  ruangan  selama  4  hari.
Setelah  itu,  daun  Lola  Kahori  dirajang menjadi ukuran yang lebih kecil.

## Ekstraksi
Sebanyak  175  g  daun  Lola  Kahori ditimbang  dan  dimasukkan  dalam  beaker gelas  kemudian  diekstrasi  menggunakan metode ultrasonikasi dengan  cara  sampel direndam dalam pelarut etanol 95% kemudian  di  letakkan  di  dalam ultrasonic bath lalu  disonikasi  selama  50  menit  pada temperatur  40 0 C    dan  frekuensi  50  khz. Sampel disaring menggunakan kertas saring lalu  filtrat  dipekatkan  menggunakan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak pekat etanol daun Lola Kahori.

## IDENTIFIKASI FITOKIMIA
(Harborne,1987)

## a. Identifikasi Alkaloid
Sebanyak  4  gr  ekstrak  etanol  daun Lola  kahori  dimasukkan  dalam  tabung reaksi kemudian  ditambahkan 2 mL kloroform  secukupnya  dan  10  mL  amoniak lalu ditambahkan 10 tetes H 2 SO 4 , Campuran dikocok dan dibiarkan hingga membentuk 2 lapisan. Lapisan H 2 SO 4 dipindahkan dalam 3 tabung  reaksi  dengan  volume  masing- masing  2,5  mL.  ketiga  larutan  diuji  dengan pereaksi  Meyer,  Dragendorf  dan  Wagner.
Terjadinya  endapan  putih  (untuk  Meyer), merah jingga (untuk Dragendorf) dan coklat (untuk Wagner) menandakan adanya alkaloid.

## b. Identifikasi  Triterpenoid/Steroid
Sebanyak  2  gr  ekstrak  etanol  daun Lola  kahori  dimasukkan  dalam  tabung reaksi  dan  ditambahkan  etanol  sebanyak  25 mL  lalu  dipanaskan  dan  disaring.  Filtratnya diuapkan  hingga  volume  filtrat  tinggal separuh  dan  ditambahkan  7  tetes  eter. Lapisan  eter  dipipet  dan  diuji  dengan pereaksi Lieberman-Buchard. Adanya warna merah  ungu  menunjukkan  positif  terhadap triterpenoid  dan  warna  hijau  menunjukkan positif mengandung steroid.

## c. Identifikasi Flavonoid
Sebanyak  200  mg  ekstrak  etanol daun Lola kahori dimasukkan dalam tabung reaksi,  ditambahkan  5  ml  etanol  dan dipanaskan  selama  5  menit  dalam  tabung reaksi.  ekstrak  yang  telah  dipanaskan kemudian dipipet dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi lain. Selanjutnya ditambahkan 10  tetes  HCl  pekat.  Kemudian  ditambahkan 0,2  g  serbuk  Mg.  adanya  flavonoid ditunjukkan  oleh  timbulnya  warna  merah coklat.

## d. Identifikasi Tanin
Sebanyak 20 mg ekstrak etanol daun
Lola  kahori  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi, ditambahkan 2  mL air  lalu dipanaskan  kemudian  ditambahkan  10  tetes FeCl 3 .  Terbentuknya  warna  biru  kehitaman
atau  hijau  kehitaman  menunjukkan  adanya tanin.

## UJI TOKSISITAS
Pembuatan Air Laut Sintetik (ASL)
Dibuat  2  L  Air  laut  sintetik  (ASL) dengan cara mencampurkan NaCl  sebanyak 25  g/L,  KCl  2  g/L  dan  MgSO 4 sebanyak  6 g/L  yang  telah  terlebih  dahulu  ditimbang menggunakan  timbangan  analitik  kemudian di  larutkan  dengan  aquadest  yang  diukur dengan  gelas  ukur  1.000  mL  kemudian dilarutkan  dalam  beaker  gelas  1.000  mL hingga
mencapai
tanda tera (Austin,1996).
Penetasan telur Artemia salina
Larva Udang ( Artemia salina) ditetaskan  dengan  cara  merendam  telur udang  tersebut  dalam  air  laut  sintetik,  yang dilakukan  48  jam  sebelum  dilakukan  uji toksisitas.  Penetasan  dilakukan  dengan bantuan  pencahayaan  pada  suhu  25-30 0 C (Mujiman,1998).

## Pembuatan  Larutan Uji dan Kontrol
Dibuat  empat  konsentrasi  larutan  uji yaitu  1  mg/L,10  mg/L,  100  mg/L,  1.000 mg/L dan  kontrol  dengan cara pengenceran dari larutan stok 2000 mg/L.
Pengujian terhadap Larva udang
( Artemia salina)
Sebanyak  10  ekor  larva  udang ( Artemia salina) dimasukkan kedalam botol berisi  10  mL  larutan  uji  konsentrasi  1.000 mg/L.  Hal  yang  sama  dilakukan  untuk
larutan uji konsentrasi 100 mg/L, 10 mg/L, 1 mg/L  dan  kontrol.  Pengujian  dilakukan secara  duplo.  Pengamatan  dilakukan  setiap 60 menit dalam rentang waktu pengujian 24 jam  dengan  menghitung  jumlah  larva  yang mati  dari  total  larva  yang  dimasukkan  ke dalam  botol.Pengamatan  memakai  bantuan kaca pembesar.

## Analisis data
Aktivitas sitotoksik dianalisis berdasarkan  probit  LC 50 .  Pengolahan  data persen  mortalitas  kumulatif  menggunakan analisis probit LC 50 dengan selang kepercayaan  95  %.  Analisis  probit  LC 50 menggunakan  perhitungan  manual  dan dilaporkan  dalam  bentuk  tabel  dan  grafik dengan  menggunakan  aplikasi Microsoft Office Excel 2007

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengambilan  dan  Identifikasi  Sampel Sampel tumbuhan Lola Kahori diperoleh  dari  Desa  Gurabati,  Kecamatan Tidore  Selatan,  Kota  Tidore  kepulauan.
Identifikasi tumbuhan Lola Kahori dilakukan  di  Laboratorium  Taksonomi Tumbuhan  Program  Studi  Biologi  FMIPA UNSRAT Manado. Preparasi Sampel
Daun Lola kahori dipetik dari tangkainya  kemudian  dicuci  dengan  air bersih  yang  mengalir  untuk  menghilangkan debu  yang  melekat  di  permukaan  daun kemudian  daun  yang  telah  bersih  di
keringkan dengan cara di angin-anginkan di dalam ruangan dengan suhu kamar selama 4 hari.  Sampel  daun  Lola  kahori yang  telah kering kemudian dirajang.

## Ekstraksi
Sebanyak  175  g  daun  Lola  kahori
diekstraksi menggunakan
metode
ultrasonikasi dengan  cara  sampel  direndam dalam pelarut etanol 95%. Pelarut ini  ditambahkan  hingga  melewati  batas tinggi  sampel  di  dalam  beaker  gelas sehingga sampel terendam sempurna.
Sampel  direndam  selama  50  menit  dan
diaduk setiap 10 menit. kemudian sampel di letakkan  di  dalam ultrasonic  bath lalu disonikasi selama 50 menit pada temperatur 40 0 C dan frekuensi 50 khz.
Berdasarkan  hasil  ektraksi  daun  Lola kahori    maka  didapatkan  jumlah  rendemen sampel yaitu 12,8 %.

## Identifikasi senyawa fitokimia
Tabel 1 . Hasil identifikasi  senyawa fitokimia No Identifikasi Hasil Keterangan 1 Alkaloid (+) - Pereaksi  Meyer :  terdapat endapan putih  (+) - Pereaksi  dragendorf :  tidak ada perubahan warna dan tidak terdapat  endapan. - Pereaksi Wagner : tidak ada perubahan  warna dan tidak terdapat endapan. 2 Triterpenoid / steroid (-) Tidak terjadi perubahan warna 3 Tanin (+) Terjadi perubahan warna menjadi hijau kehitaman 4 Flavonoid (-) Tidak terjadi perubahan warna keterangan:     (+) =
terdapat dalam ekstrak etanol daun Lola kahori (-) = tidak terdapat dalam ekstrak etanol daun Lola kahori

## Identifikasi Alkaloid
Pengujian  alkaloid  dengan  pereaksi Meyer  menghasilkan  endapan  putih  pada larutan  yang  menandakan  hasil  positif alkaloid.  Pereaksi  ini  berikatan  dengan alkaloid  melalui  ikatan  koordinasi  antara atom  N  alkaloid  dan  Hg  pereaksi  Meyer sehingga  menghasilkan  senyawa  kompleks merkuri  nonpolar  yang  mengendap  dan berwarna putih.  Alkaloid banyak ditemukan
dalam  pelarut  polar  karena  golongan senyawa  alkaloid  yang  berpotensi  sebagai antioksidan  adalah  senyawa-senyawa  polar yang  akan  terekstrak    pada  pelarut  yang bersifat polar (Sudirman, 2011).

## Identifikasi Tanin
Pada  identifikasi  tanin  didapatkan hasil positif yang ditandai dengan perubahan warna pada larutan menjadi hijau kehitaman.
Menurut    Bettelheim  (2005)  terjadinya perubahan  warna  hijau  kehitaman  setelah penambahan  FeCl 3 disebabkan  karena terjadi  reaksi  kimia,  yaitu  reaksi  subtitusi antara  FeCl 3 dengan  gugus  OH  pada  fenol
dari  tanin.  ion  Fe 3+ akan  berikatan  dengan cincin  benzen  membentuk  FeO  yang mengubah  warna  dari  kuning  transparan menjadi  hijau  kehitaman  yang  menandakan hasil identifikasi positif tanin.

## Uji Toksisitas dengan Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test)
Tabel 2 .  Persentase Jumlah Kematian Larva Udang ( Artemia salina)
Lola kahori
( Erythrinna variegata L. ) Kontrol 1000
mg/L
100 mg/L 10
mg/L 1 mg/L Pengamatan I 0 10 6 3 0 Pengamatan  II 0 10 6 1 0 Rata-Rata 0 10 6 2 0 % Kematian 0 10 60 20 0
Berdasarkan  Tabel  2  didapatkan  hasil bahwa  pada  larutan  uji    dengan  konsentrasi tertinggi  yaitu  1.000  mg/L  terdapat  jumlah kematian  yang  cukup  besar  yaitu  pada seluruh  larva  udang  dan  kematian  dalam jumlah  rendah,  yaitu  total  4  larva  udang pada  larutan  uji  konsentrasi  10  mg/L.  Pada larutan  uji  1  mg/L  tidak  ada  kematian  larva begitu juga pada kontrol. Menurut Reskiyanti  (2013),  jika  pada  kontrol  tidak ditemukan  larva  udang  yang  mati    hal  ini dapat  membuktikan  bahwa  kematian  larva udang    murni  karena  pengaruh    zat  aktif pada ekstrak bukan karena adanya pengaruh pelarut yang masih tersisa didalam ekstrak. Nilai LC 50 didapatkan dari perhitungan data  jumlah  kematian  larva  udang  pada pengamatan I dan pengamatan II. Berdasarkan  perhitungan  dari    pengolahan persamaan  garis  y  =  2,536x  +  0,571  maka
didapatkan hasil nilai LC 50 yaitu 55,719 mg/ L.  Menurut  Juniarti  (2009),  Suatu  ekstrak dikatakan  toksik  berdasarkan  metode  BSLT jika  harga  LC50  <  1000  mg/  L . dengan demikian  berdasarkan  hasil  perhitungan LC 50 didapatkan  bahwa  ektrak  etanol  daun Lola  kahori  bersifat  toksik  terhadap  larva udang.

## KESIMPULAN
1.Ekstrak etanol daun Lola Kahori
( Erythrinna  variegata L. ) dari  Tidore Kepulauan positif    mengandung  senyawa Fitokimia yaitu Alkaloid dan Tanin.
2.Pada  uji  toksisitas  ekstrak  etanol  daun Lola  Kahori  ( Erythrinna  variegata L. ) didapatkan  Nilai  LC 50 yaitu  55,718  mg/L sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak
etanol  daun  Lola  Kahori  bersifat  sangat toksik.

## DAFTAR PUSTAKA
Austin,  George  T.  1996. Industri  Proses Kimia . Penerbit Erlangga : Jakarta.
Bettelheim. 2005. Pengantar Kimia Organik dan  Hayati .  Institut  Tekhnologi Bandung : Bandung.
Harborne,  J.  B.  1987. Phytochemical Methods  : A  Guide  to  Modern Techniques of  Plant  Analysis 2 nd . Chapman and Hall :  USA.
Mudjiman, A. 1998. Udang Renik Air Asin .
Bhrata Karya Aksara : Jakarta.
Mursito,B. 2002. Ramuan Tradisional untuk
Penyakit
Malaria . Cetakan
Pertama  PT. Penebar Swadaya : Jakarta.
Mustofa,  2005. Herbal  Medicine  di  Era Evidence Based Medicine . Bagian Farmakologi dan Toksikologi,        Fakultas Kedokteran  UGM.  Jurnal Tekhnologi Obat Alam: Yogyakarta.
Reskiyanti,  T.  2013. Uji  toksisitas  ekstrak teripang Holothuria scabra terhadap Artemia salina. Fakultas Ilmu kelautan &
Perikanan. UNHAS :Makassar
Sudirman,  2011. Aktivitas  Antioksidan  dan Komponen  Bioaktif  Kangkung
Air  (Ipomea  aquatic  Forsk). Skripsi. IPB : Bogor.