## Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan

## GAMBARAN HISTOPATOLOGI GINJAL MENCIT (Mus musculus) GALUR DDY PADA UJI TOKSISITAS AKUT EKSTRAK ETANOL DAUN SALAM
(Syzygium polyanthum)

## (THE KIDNEY HISTOPATHOLOGY OF DDY MICE (Mus musculus) ON
ACUTE TOXICITY TEST OF BAY LEAF (Syzygium polyanthum) ETHANOL EXTRACT
Ris Kristiana 1 , Nurul Aida Fathya 2 , Endah Hamidah Abbas 1 , Henny Juliastuti 3 ,
Desy Linasari 4 , Rika Rachmawati 5
1 Bagian Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
2 Bagian Forensik dan Medikolegal, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
4 Bagian Biokimia, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
5 Bagian Kedokteran Komunitas, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
6 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Jawa Barat, Indonesia
E-mail korespondensi: kristiana1980@gmail.com

## ABSTRAK
Penggunaan  obat-obatan  yang  berasal  dari  bahan  alam,  tetap  dibutuhkan  suatu  uji  untuk mengetahui tingkat keamanannya. Tingkat keamanan zat tertentu dapat diamati dari efek toksik yang ditimbulkan pada berbagai organ, salah satunya pada ginjal yang berperan penting dalam sistem ekskresi melalui uji praklinik. Daun salam ( Syzygium polyanthum ) merupakan salah satu tanaman obat yang sering digunakan oleh masyarakat Indonesia. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui adanya  perubahan  histopatologi  ginjal  mencit  jantan  dan  betina  pada pemberian akut  ekstrak  etanol  daun  salam  (EEDS).  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  observasional mengenai  histopatologi  ginjal  mencit  ( Mus  musculus )  putih  jantan  dan  betina  galur  DDY. Sediaan  berjumlah  48  buah,  yang terbagi  menjadi  empat  kelompok,  yaitu  kelompok  kontrol negatif  (K),  kelompok  perlakuan  yang  diberikan  ekstrak  etanol  daun  salam  dosis  1250 mg/kgBB (P1), dosis 2500 mg/kgBB (P2), dan dosis 5000 mg/kgBB (P3). Sampel organ ginjal dibuat  preparat  histopatologi  dengan  metode  pewarnaan  HE,  lalu  dilakukan  pemeriksaan histopatologi. Gambaran histopatologi yang diamati berupa inflamasi, degenerasi lemak, dan nekrosis  pada  ginjal  serta  data  dianalisis  dengan  uji Kruskal-Wallis .  Hasil  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  etanol  daun  salam  dosis  1250  mg/kgBB,  2500 mg/kgBB, dan 5000 mg/kgBB pada mencit jantan dan betina tidak mengakibatkan perubahan
Kristiana, R Medika Kartika : Jurnal Kedokteran dan Kesehatan (2024); 7(1): 34-44
DOI:
DOI

## ARTIKEL PENELITIAN
10.35990/mk.v7n1.p34-44
bermakna terhadap gambaran histopatologi ginjal. Efek toksik dapat timbul apabila suatu zat telah  mencapai  organ  target  dengan  konsentrasi  cukup  tinggi  dan  waktu  yang  cukup  untuk menimbulkan  efek  tersebut.  Walaupun  menunjukkan  tidak  adanya  toksisitas,  namun  tetap dibutuhkan  uji  klinis  lebih  lanjut  untuk  mengkonfirmasi  keamanan  daun  salam  sebagai fitofarmaka.
Kata kunci: daun salam, histopatologi ginjal, uji toksisitas akut

## ABSTRACT
The  use  of  drugs  derived  from  natural  products  still  needed  a  test  to  determine  the  level  of safety. The safety level of certain substances can be observed from the toxic effects that are inflicted on various organs, one of which is the kidneys which plays an important role in the excretory system through preclinical tests. Bay leaf is one of the medicinal plants that is often used by Indonesian people. This study aims to determine the histopathological changes in the kidneys  of  male  and  female  mice  in  the  acute  administration  of  EEDS.  This  research  is  an observational study on the kidney histopathology of white male and female DDY mice. There were 48 preparations, divided into 4 groups, namely the negative control group, the treatment group with dose of EEDS 1250 mg/kgBW, 2500 mg/kgBW, and 5000 mg/kgBW. Kidney samples were made histopathology preparations with the HE staining method, then histopathological examination was performed. The histopathological features observed were inflammation, fatty degeneration, and necrosis of the kidneys and data were analyzed using Kruskal-Wallis test. The results of this study showed that the administration of EEDS at doses of 1250 mg/kgBW, 2500  mg/kgBW,  and  5000  mg/kgBW  in  male  and  female  mice  did  not  result  in  significant changes  in  the  histopathological  features  of  the  kidneys.  Toxic  effects  can  appear  when  a substance has reached the target organ with high concentration and sufficient time to cause that effect. Although it indicates no toxicity, further clinical studies are needed to confirm the safety of bay leaf as phytopharmaca.
Keywords: acute toxicity test, bay leaf, kidney histopathology

## PENDAHULUAN
Beberapa  dekade  terakhir,  terjadi peningkatan  penggunaan  obat  tradisional, baik  di  negara  berkembang  maupun  di negara maju. Data menunjukkan sekitar 60- 80%  masyarakat  di  berbagai  negara  masih memanfaatkan  obat  tradisional  sebagai prioritas  utama  pengobatan,  termasuk  di Asia Tenggara. Sekitar 30.000 dari 40.000 jenis  tumbuhan  obat  di  dunia  terdapat  di Indonesia. Dari total tersebut, kira-kira 25% atau 7.500 jenis telah diketahui mempunyai khasiat  herbal  atau  tanaman  obat. 1,2 Dari
ribuan  jenis  spesies  tanaman  obat,  salah satunya  yang  sering  digunakan  oleh masyarakat  Indonesia  adalah Syzygium polyanthum atau yang lebih dikenal sebagai daun  salam.  Daun  salam  umumnya digunakan  sebagai  penyedap  masakan  dan dimanfaatkan pula oleh masyarakat sebagai pengobatan, seperti untuk diabetes melitus, hipertensi, serta dapat membantu menurunkan  kadar  kolesterol.  Kandungan senyawa  yang  terdapat  pada  daun  salam antara  lain  tanin,  minyak  atsiri,  flavonoid, steroid, saponin, fenolik, dan alkaloid, serta
mengandung  pula  berbagai  vitamin. 3,4,5 Di antara kandungan senyawa tersebut, flavonoid  termasuk  senyawa  utama  pada daun  salam,  yang  salah  satu  sifatnya sebagai  antioksidan  yang  merupakan  efek paling  penting  yang  dapat  menetralisir radikal  bebas. 4,6-8 Tubuh  dapat  pula memproduksi  antioksidan  endogen  untuk menetralisir  radikal  bebas.  Apabila  kadar dari  radikal  bebas  cukup  tinggi,  maka antioksidan endogen tidak dapat menetralisir radikal bebas tersebut sehingga dapat  terjadi  ketidakseimbangan  antara radikal  bebas  dengan  antioksidan,  yang disebut sebagai stres oksidatif. 9,10
Antioksidan  dapat  pula  menunjukkan aktivitas prooksidan. Dalam kondisi tertentu,  seperti  konsentrasi  antioksidan yang  tinggi  dan  adanya  logam  transisi (terutama  Fe  dan  Cu),  antioksidan  dapat menunjukkan  aktivitas  prooksidan  yang dapat menimbulkan terjadinya stres oksidatif. 8
Penggunaan  obat-obatan  yang  berasal dari  bahan  alam,  bilamana  digunakan secara  berlebihan  bukan  berarti tidak  akan menimbulkan bahaya. Bahaya dari paparan suatu  zat  dapat  diketahui  dari  dosis  yang mengakibatkan  efek  toksik  pada  manusia, oleh karena itu dibutuhkan suatu uji untuk mendeteksi  efek  toksik  tersebut,  salah satunya  yaitu  uji  praklinik  pada  hewan  uji untuk  mengetahui  tingkat  keamanan  serta kebenaran  khasiat  dari  suatu  zat  dengan
melakukan  uji  toksisitas. 11,12 Efek  toksik dari  suatu  zat  bisa  dilihat  dari  beberapa organ,  salah  satunya  ialah  ginjal  yang berperan  penting  dalam  sistem  ekskresi. Salah satu fungsi ginjal ialah mengekskresikan  sebagian  besar  toksin, obat, serta zat kimia lainnya. 13,14 Perubahan histopatologi yang dapat terjadi pada ginjal yaitu  berupa  inflamasi,  degenerasi,  dan nekrosis. 10 Perubahan  histopatologi  ini dapat  berkaitan  dengan  kejadian  stres oksidatif. 15
Penelitian  ini  lanjutan  dari  dua penelitian  sebelumnya.  Penelitian  yang pertama  mengenai  uji  toksisitas  akut ekstrak  etanol  daun  salam  (EEDS)  dengan pemberian  dosis  1250  mg/kgBB,  2500 mg/kgBB,  dan  5000  mg/kgBB  didapatkan bahwa  daun  salam  termasuk  praktis  tidak toksik  berdasarkan  klasifikasi  dari  Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  (BPOM) tahun  2014. 16 Sementara  itu,  penelitian yang kedua mengenai efek EEDS terhadap hepar  mencit  pada  uji  toksisitas  akut didapatkan bahwa terjadi perubahan histopatologi  hepar  dan  pemberian  akut EEDS dosis bertingkat memiliki efek toksik akibat aktivitas prooksidan dan peningkatan stres oksidatif pada pemberian antioksidan dosis  tinggi. 17 Penelitian  ini  dilakukan untuk  mengetahui  efek  toksik EEDS  dosis 1250 mg/kgBB, dosis 2500 mg/kgBB, dan dosis  5000  mg/kgBB  terhadap  gambaran
dan  adanya  perubahan  histopatologi  ginjal mencit jantan dan betina.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian
dilaksanakan di Laboratorium  Patologi  Anatomi  Fakultas Kedokteran  Universitas  Jenderal  Achmad Yani pada  bulan  Januari  sampai  Februari 2022.

## Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian observasional dengan melakukan pengamatan  dan  mendokumentasikan  efek toksik  ekstrak  etanol  daun  salam  terhadap gambaran histopatologi ginjal mencit ( Mus musculus )  putih  jantan  dan  betina  galur DDY.

## Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan untuk pembuatan  preparat  histopatologi  adalah larutan  bufer  formalin  10%,  alkohol bertingkat,  larutan Xylol ,  parafin,  akuades, dan pewarna Hematoksilin-Eosin (HE).

## Objek Penelitian
Pada  penelitian  ini  digunakan  48 buah  organ  ginjal  mencit  ( Mus  musculus ) putih jantan dan betina galur DDY sebagai sampel  yang  didapat  dari  penelitian sebelumnya,  yang  dibagi  menjadi  empat kelompok,  terdiri  dari  1  kelompok  kontrol negatif (K) dan 3 kelompok perlakuan yang diberikan EEDS dosis 1250 mg/kgBB (P1), dosis 2500 mg/kgBB (P2), dan dosis 5000
mg/kgBB  (P3)  untuk  diamati  secara histopatologi.
Histopatologi
Pembacaan preparat histopatologi dilakukan  di  bawah  mikroskop  cahaya dengan  pembesaran  400x  dalam  lima lapang  pandang,  kemudian  melakukan rerata  dari  lima  lapang  pandang  tersebut. Metode  yang  digunakan  saat  pembacaan preparat  ialah  metode  semikuantitatif eyeballing dengan  menggunakan  indra penglihatan  peneliti  untuk  melihat  sel  dan diperkirakan daerah kerusakannya.

## Cara Pengukuran
Derajat  peradangan  ginjal  dinilai menggunakan sistem skoring, yaitu: Skor 1 =  infiltrasi  sel  radang  bersifat  fokal (ringan),  Skor  2  =  infiltrasi  sel  radang bersifat  multifokal  (sedang),  Skor  3  = infiltrasi sel radang bersifat difusa (berat). 18
Sementara  itu,  persentase  kerusakan  sel (degenerasi  dan  nekrosis)  dinilai  dengan menggunakan kriteria Venient et al , yaitu:
Skor 1 = lesi kurang dari 25% total lapang pandang, Skor 2 = lesi 25% sampai dengan kurang dari 50% total lapang pandang, Skor 3  =  lesi  50%  sampai  dengan  kurang  dari 75%  total  lapang  pandang,  Skor  4  =  lesi lebih  dari  sama  dengan  75%  total  lapang pandang. 19,20

## Analisis Statistik
Data  hasil  pembacaan  preparat histopatologi  yang  didapatkan  setelah melakukan penelitian diolah dalam
program  SPSS  dengan  dilakukan  uji normalitas  menggunakan  uji Shapiro  Wilk dan dilanjutkan dengan uji Kruskal Wallis .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Gambaran  Histopatologi  Ginjal  Mencit Jantan
Gambaran
histopatologi yang ditemukan pada ginjal mencit jantan, yaitu berupa  inflamasi,  degenerasi  lemak,  dan nekrosis. Inflamasi dinilai dengan menggunakan  skor  derajat  peradangan ginjal,  sedangkan  degenerasi  lemak  dan nekrosis  dinilai  menggunakan  kriteria Venient et al . Pengamatan dilakukan dalam
lima lapang pandang, kemudian melakukan rerata  dari  lima  lapang  pandang  tersebut, sehingga didapatkan skor rerata pada setiap kelompok perlakuan. Skor hasil pembacaan pada  masing-masing  kelompok  mencit jantan disajikan pada Tabel 1.
Pada  Tabel  1  menunjukkan  bahwa kelompok P2 memiliki skor rerata inflamasi tertinggi  pada  ginjal  mencit  jantan  yaitu sebesar 1,500. Sedangkan kelompok kontrol negatif, kelompok P1, dan kelompok P3 memiliki skor rerata inflamasi terendah  yaitu  masing-masing  sebesar 1,000.
Tabel 1 Skor hasil pembacaan inflamasi, degenerasi lemak, dan nekrosis mencit jantan
Kelompok Skor Rerata Inflamasi Degenerasi Lemak Nekrosis Kontrol Negatif 1,000 0,033 1,000 P1 (EEDS dosis 1250 mg/kgBB) 1,000 0,000 0,967 P2 (EEDS dosis 2500 mg/kgBB) 1,500 0,033 1,000 P3 (EEDS dosis 5000 mg/kgBB) 1,000 0,000 1,000 Ket : EEDS (Ekstrak etanol Daun salam)
Selanjutnya,  kelompok  kontrol  negatif dan  kelompok  P2  mempunyai  skor  rerata degenerasi  lemak  tertinggi  pada  ginjal mencit jantan yaitu masing-masing sebesar 0,033, serta kelompok P1 dan kelompok P3 mempunyai  skor  rerata  degenerasi  lemak terendah  yaitu  masing-masing  sebesar 0,000.
Kemudian,  kelompok  kontrol  negatif, kelompok  P2,  dan  kelompok  P3  memiliki
skor  rerata  nekrosis  tertinggi  pada  ginjal mencit jantan yaitu masing-masing sebesar 1,000.  Sementara  itu,  kelompok  P1 memiliki skor rerata nekrosis terendah yaitu sebesar  0,967.  Gambaran  histopatologi inflamasi,  degenerasi  lemak,  dan  nekrosis pada ginjal dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambaran  Histopatologi  Ginjal  Mencit Betina
Gambaran  histopatologi  ginjal  mencit betina  yang  ditemukan  pada  kelompok perlakuan,  yaitu  berupa  inflamasi  dan nekrosis.  Skor  hasil  pembacaan  pada masing-masing  kelompok  mencit  betina disajikan pada Tabel 2.
Pada  Tabel  2  menunjukkan  bahwa kelompok P1 memiliki skor rerata inflamasi tertinggi  pada  ginjal  mencit  betina  yaitu sebesar 1,167 sedangkan kelompok kontrol negatif,  kelompok  P2,  dan  kelompok  P3
memiliki  skor  rerata  inflamasi  terendah yaitu masing-masing sebesar 1,000.
Selanjutnya,  kelompok  kontrol  negatif mempunyai  skor  rerata  degenerasi  lemak tertinggi  pada  ginjal  mencit  betina  yaitu sebesar 0,033. Sementara itu, kelompok P1, kelompok P2, dan kelompok P3 mempunyai  skor  rerata  degenerasi  lemak terendah  yaitu  masing-masing  sebesar 0,000.
Gambar 1 Gambaran histopatologi ginjal mencit. KN : Kontrol Negatif, P1: Perlakuan 1, P2 : Perlakuan 2, P3 : perlakuan 3.Pada KN, P1 dan P2 menununjukkan gambaran inflamsi pada parenkim ginjal yang ditandai dengan infiltrasi sel-sel radang limfosit diserta proliferasi pembuluh darah. Pada P3 terdapat sel-sel epitel yang nekrosis (panah).
Kemudian, kelompok P3 memiliki skor rerata nekrosis tertinggi pada ginjal mencit betina  yaitu  sebesar  1,033.  Sedangkan kelompok  kontrol  negatif,  kelompok  P1,
dan  kelompok  P2  memiliki  skor  rerata nekrosis  terendah  yaitu  masing-masing sebesar 1,000.
KN P1 P2 P3
Tabel 2 Skor hasil pembacaan inflamasi, degenerasi lemak, dan nekrosis mencit betina
Kelompok Skor Rerata Inflamasi Degenerasi Lemak Nekrosis Kontrol Negatif 1,000 0,033 1,000 P1 (EEDS dosis 1250 mg/kgBB) 1,167 0,000 1,000 P2 (EEDS dosis 2500 mg/kgBB) 1,000 0,000 1,000 P3 (EEDS dosis 5000 mg/kgBB) 1,000 0,000 1,033 EEDS : ekstrak etanol daun salam

## Gambaran  Perubahan  Histopatologi Ginjal Mencit Jantan
Untuk  menentukan  adanya  gambaran perubahan  histopatologi  yang  bermakna antar kelompok, perlu dilakukan uji analisis statistik.
Efektivitas  Setiap  Perlakuan  Terhadap Inflamasi, Degenerasi Lemak, Nekrosis
Selaajutnya  dilakukan  analisis  dengan uji Kruskal Wallis . Hasil uji Kruskal Wallis dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Hasil Uji Kruskal Wallis Kelompok Rerata± SD Kruskal Wallis Nilai p inflamasi ginjal Kontrol Negatif 1,000 ± 0,000 6,261 0,100 Dosis 1250 mg/kgBB 1,000 ± 1,000 Dosis 2500 mg/kgBB 1,500 ± 0,837 Dosis 5000 mg/kgBB 1,000 ± 0,000 Degenerasi Lemak Kontrol Negatif 0,033 ± 0,082 2,091 0,554 Dosis 1250 mg/kgBB 0,000 ± 0,000 Dosis 2500 mg/kgBB 0,033 ± 0,082 Dosis 5000 mg/kgBB 0,000 ± 0,000 Nekrosis Kontrol Negatif 1,000 ± 0,000 3,000 0,392 Dosis 1250 mg/kgBB 0,967 ± 0,082 Dosis 2500 mg/kgBB 1,000 ± 0,000 Dosis 5000 mg/kgBB 1,000 ± 0,000
Berdasar  pada  hasil  uji Kruskal  Wallis pada Tabel 3 diperoleh nilai p sebesar 0,100 pada  komponen  inflamasi,  0,554  pada degenerasi lemak, 0,392 pada nekrosis. Hal ini  menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat
perbedaan  yang  bermakna antar  kelompok perlakuan.  Oleh  sebab  itu  tidak  perlu dilakukan uji lanjut untuk melihat kelompok yang memiliki perbedaan bermakna.
Dari hasil di atas, menunjukkan bahwa
efektivitas setiap perlakuan tidak mengakibatkan perubahan
bermakna
terhadap  gambaran  histopatologi  ginjal mencit  jantan.  Merujuk  pada  penelitian yang  dilakukan  oleh  Sumiwi et  al (2018) mengenai  uji  toksisitas  subkronis  ekstrak etanol  daun  salam  ( Syzygium  polyanthum ) pada  tikus  Wistar  hingga  pemberian  dosis 1000  mg/kgBB  tidak  mengakibatkan
perubahan  gambaran  histopatologi  ginjal tikus jantan. 21
Gambaran  Perubahan  Histopatologi Ginjal Mencit Betina
Efektivitas  Setiap  Perlakuan  Terhadap Inflamasi
Analisis dilanjutkan dengan menggunakan  uji Kruskal Wallis . Hasil uji Kruskal Wallis dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4 Hasil Uji Kruskal Wallis inflamasi ginjal Kelompok Mean ± SD Kruskal Wallis Nilai p Kontrol Negatif 1,000 ± 0,000 3,000 0,392 Dosis 1250 mg/kgBB 1,167 ± 0,408 Dosis 2500 mg/kgBB 1,000 ± 0,000 Dosis 5000 mg/kgBB 1,000 ± 0,000 Degenerasi Lemak Kontrol Negatif 0,033 ± 0,082 3,000 0,392 Dosis 1250 mg/kgBB 0,000 ± 0,000 Dosis 2500 mg/kgBB 0,000 ± 0,000 Dosis 5000 mg/kgBB 0,000 ± 0,000 Nekrosis Kelompok Mean ± SD Kruskal Wallis Nilai p Kontrol Negatif 1,000 ± 0,000 3,000 0,392 Dosis 1250 mg/kgBB 1,000 ± 0,000 Dosis 2500 mg/kgBB 1,000 ± 0,000 Dosis 5000 mg/kgBB 1,033 ± 0,082
Hasil  uji Kruskal  Wallis pada  Tabel  4 dari komponen inflamasi, degenerasi lemak kelompok  untuk  melihat  kelompok  yang memiliki perbedaan bermakna.
Berdasarkan hasil di atas, menunjukkan bahwa  efektivitas  setiap  perlakuan  tidak mengakibatkan perubahan bermakna terhadap  gambaran  histopatologi  ginjal mencit  betina.  Berdasar  pada  penelitian Sumiwi et  al (2018)  tentang  uji  toksisitas
subkronis  ekstrak  etanol  daun  salam ( Syzygium  polyanthum )  pada  tikus  Wistar hingga  pemberian  dosis  1000  mg/kgBB tidak  mengakibatkan  perubahan  gambaran histopatologi ginjal tikus betina. 21
Penelitian  ini  dilakukan  pada  mencit jantan  dan  betina.  Perbedaan  di  antara kedua  jenis  kelamin  tersebut  ialah  pada mencit  jantan  tidak  memiliki  hormon estrogen,  walaupun  ada  jumlahnya  relatif
sedikit. 22 Dalam beberapa penelitian disebutkan  bahwa  hormon  estrogen  dapat memberikan efek protektif pada ginjal. 23,24
Hasil  dari  suatu  penelitian  menunjukkan bahwa perubahan pada siklus hormon dapat memengaruhi  homeostasis  sel  ginjal, sehingga berpotensi meningkatkan resistensi terhadap kerusakan ginjal. 23 Hasil pada penelitian ini menunjukkan baik pada ginjal mencit jantan maupun mencit betina, tidak  mengakibatkan  perubahan  bermakna terhadap gambaran histopatologi ginjal.

## KESIMPULAN
Dapat  disimpulkan  bahwa  pada  uji toksisitas  akut  ekstrak  etanol  daun  salam pada  mencit  jantan  terdapat  gambaran histopatologi  berupa  inflamasi,  degenerasi lemak,  dan  nekrosis,  sedangkan  pada mencit betina terdapat gambaran histopatologi berupa inflamasi dan nekrosis.  Pemberian  ekstrak  etanol  daun salam  pada  mencit  jantan  dan  betina tidak mengakibatkan perubahan bermakna terhadap gambaran histopatologi ginjal.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Tidak  terdapat  konflik  kepentingan dalam artikel ilmiah yang kami tulis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  penulis  ucapkan  kepada profesional yang telah membantu penelitian dan penyusunan naskah ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Munadi E, Nugroho RA, Ningsih EA,
Paryadi  D.  Info  komoditi  tanaman obat.  Dalam:  Salim  Z,  Munadi  E, editors.  Jakarta:  Badan  Pengkajian dan  Pengembangan  Perdagangan, Kementerian  Perdagangan  Republik Indonesia, 2017.
2. Menteri
Kesehatan Republik Indonesia. Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia
Nomor
HK.01.07/MENKES/187/2017 Tentang  Formularium  Ramuan  Obat Tradisional  Indonesia.  Menkes  RI. Jakarta. 2017.
3. Redaksi  AgroMedia.  Buku  pintar tanaman  obat.  Jakarta:  Agromedia Pustaka, 2008 : 212-3.
4. Harismah K, Chusniatun.
Pemanfaatan  daun  salam  ( Eugenia polyantha )  sebagai  obat  herbal  dan rempah  penyedap  makanan.  Warta LPM,  2016;  19(2):  110-8.  Available from:
https://doi.org/10.23917/warta.v19i2.
2742
5. Nurcahyati  E.  Khasiat  dahsyat  daun salam.  Jakarta:  Jendela  Sehat,  2014: 71-113
6. Silalahi  M. Syzygium  polyanthum
(Wight)  Walp.  (botani,  metabolit sekunder  dan  pemanfaatan).  Jurnal
Dinamika Pendidikan, 2017; 10(1): 1- 16.
7. Hasanah  N.  Aktivitas  antioksidan ekstrak  etanol  daun  salam.  Jurnal Pena Medika, 2015; 5(1): 55-9.
8. Procházková D, Boušová I,
Wilhelmová  N.  Antioxidant  and
prooxidant  properties  of  flavonoids. Fitoterapia,  2011;  82(4):  513-23.
Available
from:
https://doi.org/10.1016/j.fitote.2011. 01.018
9. Adwas  AA,  Elsayed  AS,  Azab  AE,
Quwaydir  FA.  Oxidative  stress  and antioxidant  mechanisms  in  human body.  J  Appl  Biotechnol  Bioeng, 2019;  6(1):  43-7.  Available  from: https://doi.org/10.15406/jabb.2019.0 6.00173
10. Kumar V, Abbas AK, Aster JC. Buku
Ajar Patologi Robbins. Dalam: Nasar IM,  Cornain  S,  editors.  Ed.9. Singapore:  Elsevier  Saunders,  2015:
5-31
11. Rahayu  M,  Solihat  MF.  Bahan  Ajar Teknologi Laboratorium Medik
(TLM)  Toksikologi  Klinik.  Jakarta: BPPSDMK  Kementerian  Kesehatan Republik Indonesia, 2018: 72-79
12. Halim FX, Sampurno OD, Widowati L,  Setiawaty  V.  Konsep  dasar  uji klinik. Dalam: Tjitra E, editor. Bunga Rampai Uji Klinik. Jakarta: Lembaga
Penerbit Badan Penelitian dan
Pengembangan  Kesehatan,  2019:  7-
14. 13. Hall JE. Buku ajar fisiologi kedokteran. Dalam: Widjajakusumah MD,  Tanzil  A,  editors.  Ed.  Revisi Berwarna ke-12. Singapore: Elsevier, 2016: 299-338.
14. Tortora GJ, Derrickson B. Principles of  anatomy  and  physiology.  14 th ed. Hoboken: John Wiley and Sons, Inc., 2014: 979-85.
15. Kurniawidjaja LM, Lestari F,
Tejamaya  M,  Ramdhan  DH.  Konsep dasar  toksikologi  industri.  Ed.  1. Depok: Fakultas Kesehatan
Masyarakat  Universitas  Indonesia,
2021: 106-17.
16. Djamaludin M, Kristiana R, Permana BY. Uji toksisitas akut ekstrak etanol daun  salam  ( Syzygium  polyanthum ) pada  mencit  galur  DDY  ( Mus musculus ).  Medika  Kartika:  Jurnal Kedokteran  dan  Kesehatan,  2021;
4(4): 355-68. Available from:
https://doi.org/10.35990/mk.v4n4.p3 55-368 17. Kristiana R, Pradini A, Kusumaningsih  MI.  Efek  ekstrak etanol daun salam ( Syzygium polyanthum )  terhadap  hepar  mencit ( Mus  musculus )  galur  DDY  pada  uji toksisitas  akut.  Medika  Kartika: Jurnal  Kedokteran  dan  Kesehatan, 2021; 4(5): 493-506. Available from:
https://doi.org/10.35990/mk.v4n5.p4 93-506
18. Darmayanti  MD,  Samsuri,  Setiasih NL, Berata IK. Perubahan histopatologi ginjal tikus putih setelah
21  hari  mengkonsumsi  ragi  tape. Indonesia  Medicus  Veterinus,  2020; 9(6): 889-99. 19. Putra  IM.  Pengaruh  pemberian formalin  peroral  selama  2  minggu pada  gambaran  histopatologi  ginjal dan hepar tikus galur Wistar. Cimahi: Fakultas Kedokteran Universitas Jenderal Achmad Yani; 2020. 20. Adiatma MA, Indriawati R. Effects of prenatal  hipoxic-ischemic  on  renal histopathological  image  of Rattus
Norvergicus Sprague-dawley strain.
2016; 1–13.
21. Sumiwi  SA,  Zuhrotun  A,  Hendriani R,  Rizal  M,  Levita  J,  Megantara  S.
Subchronic toxicity of ethanol extract of Syzygium  polyanthum (Wight)
Walp.  leaves  on  Wistar  rat.  The Indonesian Biomedical Journal, 2019; 11(1): 30-5. Available from:
https://doi.org/10.18585/inabj.v11i1. 458
22. Yusuf M, Al-Gizar MR, Rorrong YY, Badaring DR, Aswanti H, Ayu SM, et al . Teknik manajemen dan pengelolaan hewan percobaan.
Dalam: Mu’nisa A, Jumadi O, Junda M,  Caronge  MW,  Hamjaya  H.  T, editors.  Makassar:  Jurusan  Biologi FMIPA UNM, 2022: 1-2.
23. Seppi T, Prajczer S, Dörler MM, Eiter O, Hekl D, Nevinny-Stickel M, et al . Sex  differences  in  renal  proximal tubular  cell  homeostasis.  Journal  of the American Society of Nephrology, 2016;  27(10):  3051-62.  Available from:
https://doi.org/10.1681/ASN.201508
0886
24. Garovic VD, August P. Sex differences  and  renal  protection: keeping in touch with your feminine side. Journal of the American Society of  Nephrology,  2016;  27(10):  2921- 24. Available from: https://doi.org/10.1681/ASN.201604 0454