Vol. 18, No. 2, Desember 2023, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/10.36086/jpp.v18i2.1832

## PERBANDINGAN HASIL MIKROSKOPIS PREPARAT JARINGAN DENGAN MINYAK DAUN KAYU MANIS SEBAGAI AGEN CLEARING PADA PEMATANGAN JARINGAN

## COMPARISON OF MICROSCOPIC RESULTS OF TISSUE PREPARATION WITH CINNAMIN LEAF OIL AS A CLEARING AGENT IN TISSUE MATURATION
Info artikel Diterima: 19 September 2023 Direvisi: 1 Desember 2023 Disetujui: 20 Desember 2023
Asrul Yudha Fadhiila L 1 , Adang Durachim 2 , Wiwin Wiryanti 3 , Ani Riyani 4 1,2,3,4 Poltekkes Kemenkes Bandung, Jawa Barat, Indonesia (E-mail penulis korespondensi: asrulyudhafadhiila@gmail.com)

## ABSTRACT
Background Clearing is one of the stages in network processing. Clearing aims to remove alcohol and other dehydrants from the tissue. Xylol is a reagent that is commonly used as a clearing agent, but xylol is a toxic substance. The purpose of this research is to replace xylol with alternative reagents in the clearing process.
Method The type of research used is quasi-experimental with a comparative descriptive research design. The sample used was Rattus norvegicus rat kidney tissue. The statistical test used is the Independent TTest when  the  data  is  normally  distributed  and  the  Mann-Whitney  U  test  when  the  data  is  not  normally distributed.
Results Based on the results of the Independent T-Test test, namely the cell nucleus color intensity value Sig 0.55 and the cytoplasm color intensity value Sig 0.582, both of which are > 0.05, meaning that there is no significant difference between the use of xylol and cinnamon leaf oil as a clearing agent. Conclusion In this study, cinnamon leaf oil can be used as a clearing agent to replace xylol. Keywords Tissue Maturation, Clearing, Xylol, Cinnamon Leaf Oil, Eugenol

## ABSTRAK
Latar Belakang Clearing adalah salah satu tahapan pada prosessing jaringan. Clearing memiliki tujuan untuk menghilangkan alkohol dan juga larutan dehidran lain dari dalam jaringan. Xylol adalah senyawa kimia yang biasa digunakan sebagai agen clearing, namun xylol memiliki kekurangan yaitu bersifat toksik. Tujuan dari penelitian ini adalah mengganti xylol dengan reagen alternatif pada proses clearing . Metode Jenis penelitian ini adalah quasi eksperimen dengan desain penelitian yakni deskriptif komparatif. Sampel yang digunakan adalah jaringan ginjal tikus Rattus norvegicus. Uji statistik yang digunakan adalah uji Independent T-Test pada saat data berdistribusi normal dan uji Mann-Whitney U pada data yang tidak berdistribusi normal.
Hasil Berdasarkan hasil nilai uji Independent T-Test yaitu nilai intensitas warna inti sel Sig 0.55 dan nilai intensitas  warna  sitoplasma  Sig  0.582  yang  mana  keduanya  bernilai  >  0.05  artinya  tidak  menunjukkan adanya  perbedaan  yang  bermakna  antara  penggunaan  xylol  dan  minyak  daun  kayu  manis  sebagai  agen clearing.
Kesimpulan Pada  penelitian  ini,  minyak  daun  kayu  manis  dapat  digunakan  sebagai  agen clearing pengganti xylol.
Kata Kunci Pematangan Jaringan, Clearing, Xylol, Minyak Daun Kayu Manis, Eugenol
Vol. 18, No. 2, Desember 2023, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/10.36086/jpp.v18i2.1832

## PENDAHULUAN
Hingga  saat  ini  pemeriksaan  histologi masih  menjadi  standar  emas  yang  digunakan dalam  patologi  diagnostik.  Jaringan  yang  dapat digunakan  untuk  pemeriksaan  histologi  yaitu jaringan  keras  seperti  tulang  dan  gigi,  serta jaringan  lunak  seperti  hati,  ginjal,  dan  lain sebagainya.  Jaringan  yang  akan  diperiksa  tentu harus melalui berbagai proses, mulai dari fiksasi jaringan, dehidrasi, clearing (clearing), infiltrasi, embedding, trimming, dan pewarnaan (Mescher, 2016).
Pada  prossesing  jaringan  diperlukan tahapan clearing agar sediaan dapat dilihat dengan lebih jelas dan mudah diamati. Clearing bertujuan untuk  menghilangkan  alkohol  dan  dehidran  lain dari  dalam  jaringan.  Reagen  clearing  harus mempunyai  sifat  tidak  mudah  terbakar,  tidak menyebabkan  kerusakan  jaringan  yang  berlebih, mempunyai  toksisitas  yang  rendah,  murah  serta mudah dijangkau (Khristian et al ., 2017).
Xylol  merupakan  senyawa  hidrokarbon aromatik  yang  tidak  berwarna,  mudah  terbakar dan memiliki bentuk  gas atau  cair. Xylol adalah reagen yang biasa digunakan pada proses clearing karena sifatnya sehingga xylol bisa menghilangkan  alkohol  dalam  sediaan  jaringan dengan cepat sehingga jaringan yang akan diamati dapat terlihat lebih jernih (Alwahaibi et al ., 2018). Kendala  pada  penggunaan  xylol  adalah mempunyai toksisitas yang tinggi. Paparan xylol baik  melalui  inhalasi,  menelan  dan  kontak langsung  bisa  mengakibatkan  keracunan  pada organ  tubuh  seperti  hati,  kulit,  paru  paru  dan sistem saraf (Bordoloi, 2018).
Banyak  penelitian  yang  dikembangkan untuk  meminimalisir  penggunaan  xylol  di laboratorium. Pada hasil penelitian oleh Septiani, et  al (2018)  ditemukan  bahwa  penggunaan minyak  cengkeh  sebagai  media  alternatif  xylol memiliki  hasil  yang  baik.  Minyak  cengkeh mengandung eugenol dengan kadar tinggi. Selain minyak  cengkeh  salah  satu  bahan  lainnya  yang mengandung  senyawa  eugenol  adalah  minyak daun  kayu  manis  yang  memiliki  kandungan eugenol  70%  pada  daunnya  (Wang,  R.,  et  al, 2009).
Kayu  manis  atau Cinnamomum burmanni adalah  tanaman  obat  yang  banyak digunakan masyarakat sebagai obat masuk angin,
kembung,  sakit  kepala,  dll.  Kayu  Manis mengandung eugenol yang cukup tinggi terutama pada  bagian  daun.  Daun  minyak  kayu  manis mengandung  70%  eugenol  dan  sisanya  adalah sinamaldehid  (Djarot,  et  al,  2019).  Eugenol adalah  senyawa  kimia  non  polar  yang  dapat menarik  alkohol  dalam  proses  dealkoholisasi. (Erizal, 2019).

## METODE
Jenis  penelitian  yang  digunakan  pada perbandingan  kualitas  preparat  jaringan  ginjal tikus  yang  menggunakan  minyak  kayu  manis sebagai  agen clearing pada  proses  pematangan jaringan  adalah  penelitian  quasi  eksperimen. Pada  penelitian  ini,  jaringan  ginjal  tikus  akan melalui  proses  clearing  dengan  menggunakan minyak kayu manis dan xylol. Selanjutnya akan melalui tahap pewarnaan jaringan dan dilakukan penilaian kualitas preparat.
Desain penelitian yang dilakukan adalah dengan menggunakan deskriptif komparatif yaitu menyeleksi dua kelompok (kelompok eksperimen  dan  kelompok  kontrol)  dalam penelitian.  Dalam  desain  ini  kelompok eksperimen  menerima  perlakuan  yakni clearing menggunakan  minyak  kayu  manis.  Hasil  ini kemudian  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol yakni jaringan ginjal yang melalui proses clearing menggunakan xylol.
Subjek pada penelitian ini adalah minyak kayu  manis.  Sampel  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  jaringan  ginjal  tikus.  Unit penelitian  yang  akan  dilakukan  yaitu  jaringan ginjal tikus dibagi menjadi dua kelompok, yaitu kelompok  jaringan  ginjal  yang clearing dengan xylol  sebagai gold  standard dan  jaringan  ginjal yang clearing dengan  minyak  ka yu  manis sebagai pembanding.

## HASIL
Berdasarkan  hasil  pemeriksaan  terhadap  preparat jaringan ginjal mencit dengan clearing menggunakan  xylol  dan  minyak  daun  kayu  manis didapatkan hasil sebagai berikut :
Vol. 18, No. 2, Desember 2023, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/10.36086/jpp.v18i2.1832
Dari  hasil  uji Independent  T-Test dapat  dilihat bahwa  data  intensitas  inti  sel  didapat  nilai signifikansi sebesar 0,582 yang mana > 0,05 dan berdasarkan  hasil  tersebut  dapat  disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan dari sebaran kedua data diatas.
Dari  uji  normalitas  diatas  dapat  dilihat  bahwa data  intensitas  inti  sel  didapat  nilai  signifikansi sebesar  0,055  yang  mana  >  0,114  dan  dapat disimpulkan  bahwa  data  diatas  terdistribusi normal dan dapat dilanjutkan dengan pengolahan data Independent T-Test. \

## PEMBAHASAN
Fiksasi  jaringan  adalah  langkah  awal dalam  pembuatan  preparat  histologi  jaringan. Tujuan  dari  fiksasi  jaringan  adalah  untuk mencegah terjadinya autolisis, pembusukan pada jaringan, dan mengawetkan sel-sel jaringan agar sama  seperti  jaringan  tersebut  masih  dalam
keadaan  hidup.  (Musyarifah  &  Agus,  2018). Dalam histologi rutin, media yang paling umum digunakan untuk embedding adalah parrafin. Air yang  terkandung  jaringan  tidak  dapat  langsung digantikan  oleh  paraffin,  tetapi  harus  melalui tahap  dehidrasi  dan  clearing  terlebih  dahulu sebagai  perantara.  Pada  penelitian  ini  jaringan ginjal di clearing dengan xylol dan minyak daun kayu manis.
Clearing adalah salah satu tahapan pada proses  pematangan  jaringan  yang  memiliki tujuan  untuk  membersihkan  jaringan  dari  sisa- sisa  alkohol  dari  proses  dehidrasi.  Rongga kosong  yang  disebabkan  oleh  air  yang terdehidrasi  kemudian  diganti  dengan  agen clearing seperti xylol, sehingga jaringan menjadi bening.  (Rusch  et  al.,  2021).  Larutan  clearing berfungsi sebagai media antara larutan dehidrasi dan  infiltrasi  karena  sifatnya  larut  dalam  kedua larutan  dan  sebagian  besar  merupakan
Tabel 1. Penilaian Mikroskopis Preparat Jaringan Oleh Panelis
Panelis Nilai Total Preparat Xylol Nilai Total Preparat Kayu Manis Panelis 1 60 60 Panelis 2 60 60 Panelis 3 55 52 Nilai Rata Rata 2,75 2,60
Dalam penilaian mikroskopis xylol mendapatkan nilai lebih tinggi yakni 2,75 dibandingkan dengan minyak daun kayu manis yang memiliki nilai mean yang lebih rendah yaitu 2,60.
Tabel 2. Pengukuran Intensitas Warna Inti Sel Preparat Jaringan
Kriteria Nilai OD Xylol Nilai OD Kayu Manis Inti 136,771 136,771 Sitoplasma 148,662 149,902
Adapun hasil uji statistic T-Test terhadap intensitas warna pada inti sel adalah sebagai berikut  :
Tabel 3. Uji Statistik
Kriteria Hasil .Sig Uji Normalitas Hasil .Sig T-Test Inti Sel .055 .582 Sitoplasma .114 .292
Vol. 18, No. 2, Desember 2023, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/10.36086/jpp.v18i2.1832
hidrokarbon  dengan  indeks  bias  yang  mirip dengan protein.
Pelarut nonpolar yang banyak digunakan dalam  tahap  clearing  adalah  xylol  (Subowo, 2009).  Xylol  merupakan  larutan  yang  biasa digunakan  untuk  proses  clearing  karena kemampuannya  untuk berikatan dengan alkohol dan paraffin (Sumanto, 2014). Tetapi, penggunaan  xylol  dalam  jangka  waktu  panjang dapat mengganggu kesehatan, selain itu harganya yang mahal, dan xylol termasuk larutan yang sulit didapat  karena  berasal  dari  import.  Hal  ini menyebabkan  banyak  peneliti  berusaha  untuk mencari  agen  clearing  alternatif  yang  lebih rendah  toksisitasnya,  murah  dan  lebih  mudah didapat pelarutnya.
Pada penelitian ini dilakukan percobaan penggantian  reagen  clearing  pada  proses pematangan  jaringan.  Minyak  daun  kayu  manis digunakan sebagai pengganti xylol dalam proses clearing.  Minyak  daun  kayu  manis  adalah senyawa  organik  non  polar  yang  mengandung senyawa  eugenol  sebanyak  70%  (Thompson  & Ablard  (2022).  Eugenol  sendiri  mengandung gugus  karbon  yang  mana  sangat  berperan  pada proses dealkoholisasi. Dealkoholisasi merupakan proses  ketika  gugus  karbon  menyerap  sisa alkohol  dari  proses  sebelumnya  sehingga  kedua senyawa berikatan (Jacobson & McLean (2003). Berdasarkan itu minyak daun kayu manis sesuai dengan  kriteria  larutan  yang  bisa  digunakan untuk proses clearing.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  tidak  terdapat  perbedaan  kualitas pewarnaan  preparat  jaringan  ginjal  yang signifikan  dengan  menggunakan  xylol  dan minyak  daun  kayu  manis  sebagai  agen  clearing pada  proses  pematangan  jaringan.  Ditunjukkan dari statistik dengan menggunakan uji Independent  T-Test  dengan  hasil  data  homogen dengan nilai Sig 0.582 pada inti sel dan Sig 0.292 pada  sitoplasma  keduanya  bernilai  >  0.05  yang berarti hasil pengamatan intensitas warna ( optical density )  inti  sel  dan  sitoplasma  menunjukkan bahwasanya  tidak  terdapat  perbedaan  signifikan pada  penggunakan  xylol  dan  minyak  daun  kayu manis.  Pada  penelitian  ini  minyak  daun  kayu manis dapat digunakan sebagai agen clearing.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Alwahaibi, N., Aljaradi, S., & Alazri, H. (2018). Alternative to xylene as a clearing agent  in  histopathology. Journal  of Laboratory Physicians , 10 (02), 189-193.
2. Ankle,  M.  R.,  &  Joshi,  P.  S.  (2011).  A study to evaluate the efficacy of xylene-free  hematoxylin  and  eosin staining  procedure  as  compared  to  the conventional  hematoxylin  and  eosin staining: An  experimental  study.  Journal of oral and maxillofacial   pathology: JOMFP, 15(2), 161.
3. Aprianto, A.  (2011). Ekstraksi  Oleoresin Dari  Kayu  Manis  Berbantu  Ultrasonik Dengan  Menggunakan  Pelarut  Alkohol (Doctoral dissertation, Universitas Diponegoro).
4. Bordoloi,  B.  (2018).  Xylene  Its  Health Hazards And Biocompatible Susbtitutes.
5. Djarot, P., & Ambarwati, D. (2019). Lilin aromatik minyak atsiri kulit batang kayu manis (Cinnamomum burmannii) sebagai repelen  lalat  rumah  (Musca  domestica). Ekologia: Jurnal Ilmiah Ilmu Dasar dan Lingkungan Hidup , 19 (2), 5564.
6. Erizal,  E.  (2019).  Immobilisasi  eugenol pada  matriks  TMPT  dengan  induksi radiasi. Jurnal  Sains  Materi  Indonesia ,
124128.
7. Gartner,  L.  P.  (2020). Textbook  of histology e-book . Elsevier Health Sciences.
8. Jacobson,  G. A.,  &  McLean,  S.  (2003). Biological  monitoring  of  low  level occupational xylene exposure and the role of recent exposure. Annals of Occupational Hygiene. 47(4): 331-336.
9. Jusuf,  A.  A.  (2009).  Histoteknik  dasar. Bagian  Histologi  Fakultas  Kedokteran. Universitas Indonesia. Jakarta .
10. Idris, H., & Mayura, E. (2019). Teknologi Budidaya Dan Pasca Panen  Kayu Manis (Cinnamomum Burmanii).
11. Iswara,  A.,  &  Tri,  W.  (2017).  Pengaruh Variasi Waktu Clearing Terhadap Kualitas Sediaan   Awetan Permanen Ctenocephalides  felis. Jurnal  Labora Medika , 1 (1), 12-15.
Vol. 18, No. 2, Desember 2023, e ISSN 2654-3427 DOI: https://doi.org/10.36086/jpp.v18i2.1832
12. Kartika, A. A., Hotnida, H. C. H., & Fuah,
A.  M.  (2013).  Strategi  Pengembangan Usaha Ternak
Tikus   (Rattus norvegicus)  dan  Mencit  (Mus  musculus) di   Fakultas Peternakan IPB. Jurnal Ilmu Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan , 1 (3), 147-154.
13. Khristian,  E.,  &  Inderiati,  D.  (2017). Sitohistoteknologi. Pusat  Pendidikan Sumber Daya Manusia Kesehatan .
14. Kunhua,  W.,  Chuming,  F.,  Tao,  L., Yanmei, Y.,  Xin, Y.,  Xiaoming,  Z.,  ...  & Xun,
15. L.  (2012).  Novel  Non-Toxic  Xylene Substitute  (SBO)  for  histology. African Journal  of  Traditional,  Complementary and Alternative Medicines ,
9 (1), 43-49.
16. Mescher,  A.,  &  Mescher,  A.  (2013). Junqueira's Basic  Histology:  Text  and Atlas 14e . McGraw  Hill Medical Publishing Division.
17. Musyarifah, Z., & Agus, S. (2018). Proses fiksasi  pada  pemeriksaan  histopatologik. Jurnal Kesehatan Andalas , 7 (3), 443-453.
18. Mutiarahmi,  C.  N.,  Hartady,  T.,  & Lesmana,  R.  (2021).  Kajian  Pustaka: Penggunaan Tikus  Sebagai  Hewan  Coba di  Laboratorium  yang  Mengacu  pada Prinsip  Kesejahteraan  Hewan. Jurnal Indonesia Medicus Veterinus , 10 .
19. Rajan, S. T., & Malathi, N. (2014). Health hazards  of  xylene:  a  literature  review.
Journal  of  clinical  and  diagnostic research: JCDR , 8 (2), 271. 20. Rusch,  H.,  Brammerloh,  M.,  Stieler,  J., Sonntag, M., Mohammadi, S., Weiskopf, N., Morawski, M. (2021). Finding the best clearing approach  -  Towards  3D  wide- scale multimodal. Elsevier Inc.
21. Septiani,   F.
(2018). Perbedaan Kualitas  Preparat  Permanen  Pediculus Humanus   Capitis Pada Proses Clearing Menggunakan Xylol Dan Minyak Cengkeh 22. Slaoui,  M.,  &  Fiette,  L.  (2011). Histopathology procedures: from tissue sampling to histopathological   evaluation. Drug Safety Evaluation:  Methods  and
Protocols , 69-82. 23. Subowo.   (2009). Histologi Umum.
Jakarta: Sagung Seto. 24. Ablard, K.  (2022).  Cinnamomum verum (leaf)  monograph.  Certified
Master Aromatherapist Program v12022- 06. Essence of Thyme College of Holistic Studies.
25. Wang, R., Wang, R., & Yang, B. (2009).
Extraction   of essential oils from five cinnamon leaves   and
identification  of  their  volatile  compound compositions. Innovative Food Science &
Emerging Technologies, 10(2)