## Uji toksisitas akut limbah pengeboran minyak (serbuk bor) terhadap Artemia salina
Acute toxicity test of oil drilling waste (drill cuttings) on Artemia salina
E. Sriwahyuni 1* , M. Krisanti 1
1 Departemen Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB University, Bogor, Indonesia
Abstrak .
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui toksisitas akut limbah  pengeboran  eksplorasi  minyak  dan  gas  bumi berupa  serbuk  bor  ( cutting ) pada brine  shrimp ( Artemia salina )  dan  pengaruhnya  terhadap  morfologi  biota  uji. Konsentrasi yang digunakan dalam uji toksisitas akut yaitu 22.000,  39.000,  70.000,  126.000  dan  226.000  ppm.  Nilai konsentrasi akut (LC50) diperkirakan dengan menggunakan  metode  probit.  Estimasi  konsentrasi  akut limbah serbuk bor ( dril cutting ) berupa LC50 96 jam adalah 34.260 ppm. Biota uji Artemia salina memberikan respons terhadap paparan limbah cutting , berupa perubahan pada posisi  berenang,  keaktifan  biota  uji,  tingkat  stres,  serta kerusakan pada morfologi dan anatomi tubuh biota uji.
Kata kunci: Artemia salina , limbah, LC50
Abstract . This  study  aimed  to  determine  acute  toxicity  of  cutting  as drilling  waste  of  oil  and  gas  exploration  on  brine  shrimp (Artemia salina) and its influence on the morphology of the test biota. The concentration used in the acute toxicity test namely  22,000,  39,000,  70,000,  126,000  and  226,000  ppm. Acute  concentration  value  (LC50) was  estimated by  probit methods. The concentration of acute toxicity (LC50) 96 hours of drilling cutting was 34,260 ppm. The test biota responded to  exposure  of  cutting  waste,  in  the  form  of  changes  in swimming position, activity, stress level and damage in the morphology and anatomy of the body.
Keywords: Artemia salina, cutting, LC50

## 1. PENDAHULUAN
Kegiatan pertambangan minyak dan gas mencakup beberapa tahap, yakni eksplorasi,  eksploitasi,  pemurnian  dan  pemasaran.  Kegiatan  ini  juga menghasilkan limbah seperti produced water (air yang dipisahkan selama proses produksi minyak dan gas), lumpur bor bekas, serbuk bor ( drill cutting ), air panas dari proses pendinginan, minyak, asap pembakaran, sampah dan jenis limbah lainnya.  Serbuk  bor  ( drill  cutting )  merupakan  hasil  operasi  pengeboran  dari potongan  lapisan  bebatuan  ketika  mata  bor  menekan  dan  berputar  di  dalam perut  bumi.  Serbuk  bor  harus  segera  dikeluarkan  dari  sumur  bor  agar  tidak mengganggu proses  pengeboran.  Pada prosesnya  terjadi  pencampuran  antara material  hasil  pengeboran  (serbuk  bor , lumpur,  pasir)  dengan  lumpur  bor. Lumpur  bor  merupakan  campuran  air,  lumpur  khusus,  beberapa  mineral  dan bahan  kimia  (EPA  1993).  Hasil  sampingan  tersebut  berpotensi  toksik  apabila tidak dilakukan pengolahan terlebih dahulu, sehingga dapat mencemari perairan sekitar anjungan di laut dan lokasi pemboran di darat (Mukhtasor 2007).
* Korespondensi Penulis Email : endangsriwahy@gmail.com
Dampak toksisitas limbah terhadap biota dapat timbul secara langsung dan tidak  langsung.  Dampak  secara  tidak  langsung  adalah  terjadinya  penurunan kualitas perairan (Kumar et al. 2013) yang dapat mengganggu kehidupan biota perairan.  Biota  perairan  yang  terganggu  dapat  berpengaruh  terhadap keseimbangan  ekosistem  perairan.  Oleh  sebab  itu,  untuk  mengetahui  apakah limbah tersebut dapat mengganggu perairan maka diperlukan uji toksisitas akut. Uji toksisitas merupakan uji yang digunakan untuk mengetahui efek negatif suatu zat terhadap biota. LC50 yaitu nilai konsentrasi pemaparan zat toksik yang menyebabkan 50% biota uji mati (Moe et al. 2001). Uji toksisitas menggunakan makhluk hidup sebagai biota uji. Pemilihan biota uji didasarkan dengan kriteria biota  uji  yang  harus  dipenuhi  berdasarkan Organization  for  Economic Cooperation and Development (OECD) dan US Environmental Protection Agency (US-EPA). Biota uji yang digunakan merupakan biota uji yang dapat mewakili kondisi lingkungan dari suatu perairan (APHA 2005 dalam DWMS 2007).
Biota uji pada penelitian ini adalah nauplius Artemia salina . Penggunaan Artemia salina sebagai biota uji laut bertujuan untuk mengetahui toksisitas akut serbuk  bor  ( drill  cutting )  sebelum  diperkenankan  dibuang  ke  perairan  laut. Artemia salina sangat baik digunakan sebagai organisme uji dalam uji toksisitas akut  perairan  laut  karena  sederhana  dan  akurat  untuk  semua  jenis  toksikan (Shaala et  al. 2015).  Organisme  sederhana  ini  mudah  dikultur  dan dikembangbiakkan  dalam  kondisi  laboratorium  (Kanwar  2007).  Berdasarkan hal  tersebut,  maka  penelitian  ini  bertujuan  menentukan  nilai  toksisitas  akut limbah pengeboran minyak dan gas berupa serbuk bor terhadap Artemia salina , serta pengaruhnya terhadap morfologi biota uji.

## 2. METODOLOGI

## 2.1. Lokasi kajian dan waktu penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Februari  hingga  April  2016  di Laboratorium  Riset  Plankton,  Departemen  Manajemen  Sumberdaya  Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, IPB University.

## 2.2. Prosedur penelitian
Nauplius  merupakan  anak Artemia yang  baru  menetas.  Stadia  ini merupakan  stadia  yang  paling  optimum  untuk  digunakan  sebagai  biota  uji. Penelitian  menggunakan  10  ekor Artemia  salina terhadap  10  mL  media  uji  di setiap  konsentrasi  percobaan.  Air laut  sebagai  media  diaerasi  terlebih dahulu selama satu jam. Kista Artemia salina sebanyak 1 g dimasukkan ke dalam wadah penetasan yang berisi 1 L air laut. Kista menetas setelah sekitar 24 jam. Setelah kista  menetas,  dilakukan  pemisahan  cangkang  kosong  dengan  nauplius. Setengah bagian atas wadah penetasan ditutup dengan plastik hitam agar tidak
ada cahaya yang masuk, sedangkan setengah bagian bawah dibiarkan terbuka. Aerator dikeluarkan dari wadah penetasan. Nauplius berenang ke arah dengan intensitas  cahaya  lebih  tinggi  yakni  ke  bagian  bawah  wadah  tetas,  sehingga Nauplius dapat dengan mudah dialirkan keluar wadah melalui pipa konektor. Limbah  pengeboran  yang  dijadikan  toksikan  berupa  serbuk  bor  ( drill cutting )  dalam  bentuk  supernatan.  Supernatan  merupakan  bagian  atas  hasil pencampuran  antara  serbuk  bor  dengan  akuades.  Perbandingan  antara  bobot cutting (kg)  dengan  volume  akuades  (L)  yakni  1:1.  Proses  pencampuran diasumsikan dapat melarutkan bahan toksik dari serbuk bor.

## 2.3. Prosedur analisis data
2.3.1. Penentuan nilai ambang atas dan ambang bawah
Uji pendahuluan dilakukan untuk mendapatkan selang konsentrasi serbuk bor  yang  digunakan  pada  uji  toksisitas  akut. Artemia  salina yang  digunakan berjumlah 10 ekor nauplius yang dipaparkan pada media toksikan bervolume 10 mL.  Pada  uji  pendahuluan  ditentukan  konsentrasi  ambang  atas  (N)  dan konsentrasi ambang bawah (n). Nilai ambang atas dan ambang bawah digunakan untuk menentukan selang konsentrasi dalam uji toksisitas akut.
Konsentrasi  ambang  atas  (N)  merupakan  konsentrasi  terendah  toksikan yang menyebabkan seluruh hewan uji mati pada pemaparan 24 jam. Konsentrasi ambang  bawah  (n)  merupakan  konsentrasi  tertinggi  toksikan  yang  tidak menyebabkan kematian hewan uji pada pemaparan 24 jam. Penentuan selang konsentrasi ditentukan dengan menggunakan Persamaan 1 dan Persamaan 2 (Koesoemadinata 1983).
Log N n = k log a n ..................................................................................................................................................................(1)
a n = b a = c b = d c = N e ..................................................................................................................................................................(2)
Keterangan :
N :  Konsentrasi tertinggi n :  Konsentrasi terendah K :  Jumlah konsentrasi yang diuji
a, b, c, d dan e  :  Konsentrasi antara konsentrasi terendah dan konsentrasi tertinggi, a adalah konsentrasi terendah

## 2.3.2. Uji toksisitas akut
Artemia salina yang dijadikan biota uji pada uji utama diusahakan memiliki ukuran yang seragam. Artemia salina dimasukkan ke dalam wadah uji yang berisi kontaminan  sebanyak  10  mL.  Jumlah Artemia  salina yang  dipaparkan  pada setiap perlakuan adalah 10 ekor. Perlakuan kontaminasi sebanyak lima buah dan satu buah perlakuan kontrol .
Pada uji toksisitas diamati respons tingkah laku biota uji, kerusakan tubuh dan mortalitas. Pengamatan tingkah laku dilakukan berdasarkan geometrik seri yaitu  pada  pemaparan  0,  3,  6,  12,  24,  48,  72  dan  96  jam  (Franson  1995). Pengamatan  respons  tingkah  laku  biota  dilakukan  dengan  membandingkan tingkah  laku  biota  pada  kontrol  dan  perlakuan.  Selama  pemaparan  juga dilakukan  pengamatan  kerusakan  morfologi  tubuh  dan  tingkat  mortalitas. Kerusakan  tubuh  biota  uji  divisualisasi  dengan  mikroskop  binokuler. Pengamatan mortalitas biota uji dilakukan secara visual dengan bantuan kaca pembesar.
Pendugaan  nilai  konsentrasi  akut  (LC50)  menggunakan  metode  probit. Metode  probit  merupakan  prosedur  statistik  parametrik  pada  selang kepercayaan 95%. Analisis data dilakukan dengan software EPA Probit Analysis Program versi 1.5.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Uji pendahuluan dan uji toksisitas akut
Uji  pendahuluan  dilakukan  untuk  menemukan  nilai  konsentrasi  ambang atas  dan  ambang  bawah. Tabel  1 merupakan beberapa  hasil  uji  pendahuluan pada tiga kelompok konsentrasi yang berdekatan dengan kelompok konsentrasi ambang  atas  dan  ambang  bawah.  Berdasarkan  beberapa  uji  pendahuluan, didapatkan nilai ambang (N) atas dan ambang bawah (n) masing-masing sebesar 200.000 ppm dan 12.500 ppm.
Tabel 1. Hasil uji pendahuluan. Konsentrasi serbuk bor Mortalitas Artemia salina (%) (%) (ppm) 20,00 200.000 100 10,00 100.000 80 5,00 50.000 70 2,50 25.000 50 1,25 12.500 0
Uji toksisitas akut dilakukan dengan pemaparan lima konsentrasi dan satu kontrol  sebagai  perlakuan  terhadap  10  ekor  nauplius Artemia  salina . Konsentrasi yang digunakan dalam uji toksisitas akut ditentukan berdasarkan konsentrasi ambang atas dan ambang bawah. Lima konsentrasi tersebut adalah 22.000, 39.000, 70.000, 126.000 dan 226.000 ppm. Kematian biota uji pada uji utama  terus  meningkat  dengan  semakin  tingginya  konsentrasi  dan  lama pemaparan. Estimasi konsentrasi akut limbah diperoleh melalui analisis probit. Tabel 2 menunjukkan estimasi konsentrasi akut (LC50) cutting .
Tabel 2. Estimasi nilai toksisitas akut (LC50) cutting . Exposure EPA probit Selang kepercayaan 95% 24 110.152 81.745 – 155.393 48 88.493 60.850 – 137.572 72 51.664 26.650 – 82.104 96 34.260 14.655 – 51.992
Nilai LC50 merupakan nilai yang menunjukkan besarnya konsentrasi suatu bahan  uji  yang  dapat  menyebabkan  kematian  50%  hewan  uji  setelah  24  jam pemaparan. Brine Shrimp Test (BST) dianggap sebagai cara yang berguna untuk penilaian awal terhadap toksisitas karena sangat sederhana, murah dan sensitif (Jegathambigai et al. 2014). Konsentrasi akut yang mematikan 50% hewan uji pada  studi  ini  sebesar  34.260  ppm.  Menurut  PerMenESDM  Nomor  45  Tahun 2006  tentang  Pengelolaan  Lumpur  Bor  dan  Serbuk  Bor  pada  Kegiatan Pengeboran Minyak dan Gas Bumi, nilai batas LC50-96 jam limbah yang dapat dibuang ke laut adalah ≥ 30.000 ppm. Berdasarkan peraturan tersebut, limbah yang  diamati  pada  studi  ini  dapat  dibuang  langsung  ke  laut,  namun  harus memperhatikan  lingkungan  sensitif  di  sekitarnya  dan  harus mengantongi  izin pembuangan dari pemerintah.

## 3.2. Tingkah laku dan kerusakan morfologi nauplius
Nauplius Artemia sering  digunakan  untuk  evaluasi  toksisitas  bahan pencemar  dan  studi  ekotoksikologi  (Manzanares et  al .  2015).  Biota  uji menunjukkan  respons  terhadap  limbah  berupa  tingkah  laku  selama  uji toksisitas. Tingkah laku yang ditunjukkan meliputi keaktifan pergerakan, posisi berenang, tingkat stres dan perubahan tingkah laku lainnya. Tingkah laku biota uji sangat beragam berdasarkan tingkat konsentrasi yang dipaparkan. Semakin tinggi  konsentrasi  dan  lama  pemaparan,  maka  biota  uji  semakin  stres  hingga terjadi kematian. Data kematian pada toksisitas Artemia dapat dikaitkan dengan sifat toksik dari bahan uji (Hartl and Humpf 2000) . Respons yang ditunjukkan biota sudah terlihat pada awal waktu pemaparan. Respons tingkah laku biota uji sangat  terlihat  pada  konsentrasi  tertinggi  perlakuan  yakni  226.000  ppm. Respons biota uji secara keseluruhan adalah berupa stres yang terlihat dari cara berenang  yang  sangat  cepat  tak  beraturan  di  kolom  air.  Hari  kedua  dan selanjutnya  terlihat  pergerakan  biota  uji  sangat  lemah.  Hal  ini  diduga  karena energi  yang  sudah  banyak  dipakai  pada  hari  pertama  pemaparan.  Posisi berenang  biota  uji  pada  hari-hari  selanjutnya  cenderung  ke  arah  dasar  atau permukaan air. Pada jam ke 72 dan ke 96, terlihat banyak biota uji yang pingsan. Biota uji dikatakan pingsan karena biota uji terlihat mati tidak bergerak, namun biota uji kembali bergerak setelah diberi suatu aksi sentuhan.
Biota  uji  yang  terpapar  serbuk  bor  tidak  hanya  merespons  dengan perubahan  tingkah  laku,  namun  juga  dengan  timbulnya  kerusakan  bentuk morfologi  tubuh  berdasarkan  lama  pemaparan  sebelum  akhirnya  mati. Kerusakan  bentuk  morfologi  dapat  diketahui  dengan  perbandingan  morfologi tubuh Artemia salina kontrol dengan perlakuan serbuk bor. Ilustrasi kerusakan morfologi tubuh nauplius hanya dilakukan pada konsentrasi 39.000 ppm karena kerusakannya  terlihat  paling  mencolok  dan  konsentrasi  tersebut  mendekati konsentrasi  akut  LC50.  Hasil  dokumentasi  pada  konsentrasi  lain  tidak memberikan gambaran yang cukup jelas.
Artemia  salina mengalami  kerusakan  secara  bertahap  mulai  dari  bagian dalam  tubuh  hingga  ke  bagian  luar  ( Gambar  1 ).  Biota  uji  yang  mati  akibat pemaparan  selama  24  jam  memperlihatkan  bentuk  kerusakan  pada  bagian kepala,  sedangkan  pemaparan  selama  48  jam  menyebabkan  kecenderungan rusak  pada  bagian  dalam  tubuh,  khususnya  bagian  pencernaan.  Pemaparan selama  72  jam  menyebabkan  kerusakan  pada  bagian  dalam  tubuh  biota  uji, sedangkan  kerusakan  total  dalam  dan  luar  tubuh  biota  uji  terjadi  pada pemaparan 96 jam. Kerusakan bagian dalam dan luar tubuh, serta kematian pada Artemia  salina yang  terkena  paparan  limbah yang  memiliki  kandungan  logam berat  dapat  menyebabkan  penghambatan  pada  pertumbuhan  dan perkembangannya (Shaojie and Wenli 2012). Pada penelitian dengan biota uji post  larva Penaeus  monodon, kematian  biota  uji  yang  terpapar drilling  muds disebabkan oleh kerusakan bentuk gill filamen berupa reduksi atau hilangnya bagian tubuh (Soegianto et al. 2008). Tubuh Artemia  salina terdiri  dari  kepala,  toraks  dan  perut  (Dumitrascu 2011).  Kerusakan  tubuh  biota  uji  secara  bertahap  terjadi  berdasarkan  lama pemaparan. Tahapan kerusakan terjadi pada bagian kepala (mulut, mata, dsb.), saluran  pencernaan,  kerusakan  total  seluruh  bagian  dalam  tubuh  biota,  lalu kerusakan  total  bentuk  tubuh  biota  uji.  Tahapan  kerusakan  tubuh  ini menunjukkan bahwa kerusakan terjadi berdasarkan tingkat interaksi terendah hingga  tertinggi  antara  organ  tubuh  biota  dengan  bahan  toksik. Artemia  sp . memiliki  cara  makan  non  selektif  filter  yang  membuatnya  rentan  terhadap bahan pencemar yang masuk dalam badan perairan. Hal tersebut menyebabkan bagian kepala mengalami kerusakan terlebih dahulu.
Toksisitas  merupakan  kemampuan  suatu  molekul  atau  senyawa  kimia untuk menimbulkan kerusakan pada bagian yang sensitif di dalam maupun di luar tubuh makhluk hidup. Suatu senyawa kimia dapat dikatakan sebagai racun apabila ketika senyawa tersebut bereaksi dengan satu objek dapat menimbulkan efek  yang  merusak  (Durham  1975).  Efek  toksik  yang  dihasilkan  memberikan indikasi terganggunya proses morfologi maupun fisiologis biota uji (Anderson et al. 1991), dalam hal ini bentuk morfologi tubuh Artemia sebagai biota uji.
(a) (b) (c) (d)
Gambar 1. Kerusakan morfologi biota uji pada pemaparan serbuk bor 39.000 ppm.
(a) jam ke-24, (b) jam ke-48, (c) jam ke-72, (d) jam ke-96
Kecenderungan  kerusakan  bagian  kepala  (antena  dan  antenula) terlebih dahulu pada jam ke 24 diduga karena antena banyak menyaring limbah. Antena berfungsi  sebagai filter  feeder ,  sehingga  kondisi  lingkungan  yang  terpapar limbah  menyebabkan Artemia sangat  intensif  berinteraksi  dalam  menyaring limbah.  Berdasarkan Gambar  1 ,  kerusakan  biota  uji  yang  terpapar  limbah selama 48 jam mengalami kerusakan pada saluran pencernaan. Hal ini diduga karena serbuk bor yang masuk mulai bereaksi toksik pada bagian dalam tubuh biota,  khususnya  saluran  pencernaan.  Hal  ini  didukung  dengan  pernyataan Shaojie and Wenli (2012) yang menyatakan bahwa Artemia sp. dianggap sebagai organisme yang paling baik untuk uji toksisitas karena Artemia memiliki cara makan  non  selektif  filter  yang  membuat  mereka  rentan  terhadap  bahan pencemar yang masuk dalam badan perairan. Kerusakan biota uji yang terpapar limbah selama 72 hingga 96 jam mengalami kerusakan total pada bagian dalam tubuh hingga bentuk luar tubuh biota uji.
Tingkah  laku  biota  uji  yang  bertahan  hidup  dalam  paparan  limbah memberikan respons yang sinergis dengan tingkat konsentrasi. Sesuai dengan pernyataan Loomis (1978), efek yang ditimbulkan oleh senyawa beracun sangat bergantung pada kadar racun yang diberikan. Dengan demikian, kematian biota uji terhadap pemaparan serbuk bor diduga diakibatkan oleh bahan kimia yang terkandung dalam limbah pengeboran. Meskipun menurut PerMenESDM Nomor 45  Tahun  2006  tingkat  toksisitas  serbuk  bor  masih  memenuhi  baku  mutu, namun  kerusakan  tubuh  hingga  kematian  pada  biota  uji  selama  pengamatan perlu menjadi pertimbangan dan perlu dilakukan pengkajian lanjutan mengenai volume limbah yang aman terhadap suatu luasan badan tampung limbah.

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN
Konsentrasi  toksisitas  akut  (LC50)  serbuk  bor  adalah  34.260  ppm. Pengaruh limbah pengeboran migas berupa serbuk bor terhadap brine shrimp ( Artemia salina ) yakni terjadinya kerusakan pada seluruh morfologi dan anatomi tubuh biota uji secara bertahap berdasarkan lamanya pemaparan. Berdasarkan kerusakan tubuh yang mulai terjadi pada konsentrasi terendah uji utama, maka perlu  dilakukan  uji  toksisitas  kronik  limbah  pengeboran.  Diperlukan  uji toksisitas  menggunakan  organisme  bentik  perairan  dengan  tujuan  untuk mengetahui pengaruh limbah terhadap organisme dasar dan sedimen perairan.

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Penelitian  ini  didukung  oleh  Pusat  Penelitian  Lingkungan  Hidup  (PPLH) IPB University.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
Anderson JE, Goetz CM and McLaughlin JL. 1991. A blind comparison of simple bench-top  bioassay  and  human  tumor  cell  cytotoxicities  as  antitumor prescrenss. Phytochemical Analysis Journal 2(1):107-111.
Dumitrascu M. 2011. Artemia salina . Balneo-Research Journal 2(4):119-122. Durham WF. 1975. Toxicity. In: Sax NI. 1975. Dangerous properties of industrial materials, 4th ed. Van Nostrand Reinhold Co. New York.
[DWMS] Drilling Waste Management System. 2007. Drilling waste management information system [internet]. Tersedia di: http://web.ead.anl.gov/dwm/ techdesc/index.cfm.
[EPA]  Environmental  Protection  Agency.  1993.  Development  document  for effluent limitation guidelines and new source performance standards for offshore subcategory of the oil and gas extraction point source category. EPA. Washington DC.
Franson  MAH.  1995.  Standard  methods:  for  the  examination  of  water  and wastewater, 19th ed. APHA. Washington DC.
Hartl M and Humpf HU. 2000. Toxicity assessment of fumonisins using the brine shrimp  ( Artemia  salina )  bioassay.  Food  and  Chemical  Toxicology 28(2000):1097-1102.
Jegathambigai R, Rusli I and Sreenivasan S. 2014. Acute oral toxicity and brine shrimp  lethality  of  methanol  extract  of Mentha  spicata L  ( Lamiaceae ).
Tropical Journal of Pharmaceutical Research 13(1):101-107.
Kanwar  AS.  2007.  Brine  shrimp  as  a  marine  animal  for  simple  and  rapid biological assays. Journal of Chinese Clinical Medicine 2(4):236-240.
Koesoemadinata  S.  1983.  Pedoman  umum  pengujian  laboratorium  toksisitas lethal pestisida pada ikan untuk keperluan pendaftaran komisi pestisida. Departemen Pertanian. Jakarta.
Kumar RT, Sampson AL, Dorathy E, Wokoma I and Ablorh MA. 2013. Study on environmental  impact  on  oil  and  gas  activities  in  Ghana  -  analysis  by graphical  approaches  using  matlab.  International  Journal  of  Engineering Trends and Technology 4(3):344-348.
Loomis  TA.  1978.  Toksikologi  dasar,  edisi  III.  Ed.  Donatus  IA.  Semarang  Pr. Semarang.
Manzanares DL, Morilla LJG, Malawani AD, Lagare NJS and Abrenica-Adamat LR. 2015. Effects of oregano ( Origanum vulgare ) leaf extract on early life stages of Artemia salina . International Journal of the Bioflux Society 7(3):468-474. Moe J, Stenseth NC and Smith R. 2001. Effects of a toxicant on population growth rates:  sublethal  and  delayed  responses  in  blowﬂy  populations.
International Journal of Functional Ecology 15:712-721.
Mukhtasor. 2007. Pencemaran pesisir dan laut. Paradya Paramita. Jakarta. PerMenESDM (Peraturan Menteri Energi dan Sumberdaya Mineral) Nomor 45 Tahun 2006 tentang pengelolaan lumpur bor dan serbuk bor pada kegiatan pengeboran minyak dan gas bumi.
Shaala  NMA,  Zulkifli  SZ,  Ismail  A,  Azmai  MNA  and  Mohamat-Yusuff  F.  2015. Selected morphological changes in nauplii of brine shrimp ( Artemia salina ) after  tributyltin  chloride  (TBTCL)  exposure.  World  Applied  Sciences Journal 33(8):1334-1340.
Shaojie DZ and Wenli. 2012. Responses of growth and development of Artemia salin to four kinds of heavy metals stress. Procedia Environmental Sciences 12(2012):1164-1171.
Soegianto  A,  Irawan  B  and  Affandi  M.  2008.  Toxicity  of  drilling  waste  and  its impact on gill structure of post larvae of tiger prawn ( Penaeus monodon ).
Global Journal of Environmental Research 2(1):36-41.