Vol. 16, No. 1, 2023, Hal. 62-73 ISSN: 0216-3098 DOI: 10.20884/1.mandala.2023.16.1.8397

## PERBANDINGAN BAKTERI ASAM LAKTAT YOGHURT SINGLE

## DAN DOUBLE STRAIN DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN Shigella dysenteriae

## THE COMPARISON BETWEEN SINGLE AND DOUBLE STRAIN YOGHURT LACTIC ACID BACTERIA ON INHIBITING THE GROWTH OF Shigella dysenterie
Bella Khoirunisa Prihandini 1 , Anriani Puspita Karunia Ning Widhi 1 , Nendyah Roestijawati 1
1 Fakultas Kedokteran Jenderal Soedirman, Universitas Jenderal Soedirman

## ABSTRAK
Disentri  adalah  penyakit  infeksi  usus  yang  ditandai  dengan  adanya  darah  dalam  feces. Upaya  pencegahan  salah  satunya  dengan  mengkonsumsi  susu  fermentasi  dalam  bentuk yoghurt.  Yoghurt  merupakan  produk  susu  fermentasi  yang  menggunakan  bakteri  asam laktat  (BAL).  Tujuan  penelitian  membandingkan  BAL single dan double  strain pada yoghurt  dalam  menghambat  pertumbuhan Shigella  dysentriae dengan  menghitung  zona hambat  yang  terbentuk.  Desain  penelitian  menggunakan  metode experimental  design dengan postest  only  with  control  group  design. Bakteri  diuji  dengan  difusi  sumuran, sampel  yang  digunakan  sebanyak  15,  terbagi  dalam  5  kelompok  konsentrasi  masing- masing  0%,  20%,  40%,  60%,  dan  80%.  Rancangan  percobaan  adalah  Rancangan  Acak Lengkap  (RAL),  data  dianalisis  menggunakan  uji Kruskal  Wallis dan Post  Hoc  Mann Whitney .  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  median  diameter  zona  hambat  BAL  untuk yoghurt double  strain  Streptococcus  thermophilus dan Lactobacillus  bulgaricus  >  single strain L. blugaricus > single strain S. thermophilus . Uji Kruskal Wallis memberikan nilai p=0,002,  terdapat  perbedaan  antara  kelompok  yang  diberi  perlakuan  dan  tidak  diberi perlakuan. Hasil  penelitian menunjukkan bahwa  median diameter zona hambat signifikan pada  beberapa  kelompok.  Kesimpulan  dari  penelitian  menunjukan  bahwa  BAL double strain lebih  baik  dalam  menghambat  pertumbuhan S.  dysenteriae dibandingkan  dengan BAL single strain L. Bulgaricus maupun S. Thermophilus .
Kata kunci : Bakteri asam laktat , Lactobacillus bulgaricus, Streptococus thermophilus, Shigella dysenteriae.

## ABSTRACT
Dysentery  is  an  infectious  intestinal  disease  characterized  by  the  appearance  of  blood  in the stool. One of the prevention efforts is consuming fermented milk as yogurt. Yoghurt is a fermented  milk  using  lactic  acid  bacteria  (LAB).  LAB  used  as  single  strains  of Streptococcus  thermophilus,  Lactobacillus  bulgaricus,  and  double  strains  of  S.
thermophilus  and  L.  bulgaricus.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  ratio  of LAB  of  single  strain  and  double  strain  yoghurt  in  inhibiting  the  growth  of  Shigella dysenteriae  by  calculating  the  inhibition  zone  formed.  This  research  used  experimental design method with postest only with control group design. This study uses well diffusion. The  total  sample  was  15,  divided  into  5  groups  with  0%,  20%,  40%,  60%,  dan  80% concentration  respectively  as  controls.  The  experimental  design  in  this  study  used  the Completely  Randomized  Design  (CRD)  method.  Data  analysis  used  Kruskal  Wallis  test and Mann Whitney Post Hoc test. The results show that the average diameter of the LAB inhibition zone for double strains of  S. thermophilus and L. bulgaricus > single strain  L. blugaricus > S. thermophilus. In the Kruskal Wallis test, the p value was obtained = 0.002, it  was  found  that  the  difference  between  the  treated  and  untreated  groups  was  obtained. The  test  results  found  a  significant  difference  in  the  median  inhibition  zone  diameter between  groups.  The  conclusion  of  this  study  shows  that  the  LAB  double  strains  of  S. thermophilus and L. bulgaricus are better at inhibiting growth S. dysenteriae compared to LAB single strains of L. bulgaricus or S. thermophilus yoghurt.
Keywords: lactic acid bakteria, lactobacillus bulgaricus, streptococus thermophilus, shigella dysenteriae.
Penulis korespondesi:
Anriani Puspita Karunia Ning Widhi Fakultas Kedokteran Jenderal Soedirman, Universitas Jenderal Soedirman Jl. Dr. Gumbreg No.1Purwokerto Kode Pos 53147 Email: anrianipuspita@unsoed.ac.id

## PENDAHULUAN
Disentri  merupakan  diare  disertai  darah,  mukus,  dan  sel  polimorfonuklear  di  dalam feses.  Disentri  dapat  disebabkan  oleh  bakteri Shigella  dysenteriae yang  dikenal  dengan istilah disentri basiler (Chang et al., 2016). Kasus disentri basiler yang disebabkan oleh S. dysenteriae dapat  menyebabkan  penyakit  disentri  paling  berbahaya  jika  dibandingkan dengan infeksi Shigella spesies lain (Sjahriani dan Patiyah, 2019). Karakteristik diare yang disebabkan  oleh S.  dysenteriae memiliki  manifestasi  klinis  mirip  seperti  diare  yang disebabkan  oleh Escherichia  coli .  Karakteristik  khas  yang  membedakan  diare  yang disebabkan  oleh E.  coli bersifat  sitotonik  menginduksi  sekresi  elektrolit  Cl-  oleh  mukosa usus  halus  sedangkan  diare  yang  disebabkan  oleh S.  dysenteriae pada  usus  besar  dengan mekanisme  dosis  infeksius  lebih  rendah  sehingga  penyakit  yang  ditimbulkan  lebih  berat dibandingkan dengan E. coli (WHO, 2018; Pasqua et al ., 2017).
Shigella diidentifikasi  sebagai  patogen  utama  yang  menyebabkan  disentri  terutama pada  anak-anak  di  seluruh  dunia  dan  mengakibatkan  1,1  juta  kematian  per  tahun,  61% diantaranya  adalah  anak-anak  <5  tahun.  Disentri  basiler  merupakan  penyakit  endemik  di negara berkembang. Data Kemenkes RI (2019) menunjukkan bahwa 29% kematian akibat diare  antara  usia  1  sampai  4  tahun  disebabkan  oleh  disenti  basiler.  Penyakit  diare  yang
serius  masih  menjadi  masalah  kesehatan  di  negara  berkembang  seperti  di  Indonesia, menurut  profil  kesehatan  Indonesia  tahun  2018  jumlah  penderita  diare  balita  sebanyak 1.637.708 atau 40,90%. Proporsi kasus diare terpantau di Jawa Tengah tahun 2018 sebesar 62,7%, meningkat dari proporsi tahun 2017 sebesar 55,8% (Dinkes Jateng, 2018).
Data  di  atas  menunjukkan  jika  kasus  diare  masih  terbilang  cukup  tinggi,  sehingga diperlukan  upaya  pencegahan.  Salah  satu  upaya  pencegahan  disentri  yaitu  dengan mengkonsumsi  yoghurt.  Yoghurt  dapat  menggunakan  bakteri  asam  laktat  (BAL) single atau double  strain spesifik  (Mcfarland,  2020).  BAL  asam  laktat  yang  digunakan  yaitu S. thermophilus dan L.  bulgaricus .  Beberapa  manfaat  BAL  yoghurt  bagi  kesehatan  yaitu adanya aktivitas antimikroba berupa asam laktat, bakteriosin, dan H 2 O 2 (Fitrianarni et al., 2014).  Senyawa  antimikroba  tersebut  mampu  menurunkan  pH  lingkungan,  mengganggu permeabilitas  membran  bakteri  patogen,  mengurangi  infeksi  saluran  pencernaan,  dan sebagai upaya pencegahan penyakit saluran pencernaan seperti disentri basiler (Sari et al.,
2018).  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  perbandingan  BAL yoghurt  single strain S.  thermophilus atau L.  bulgaricus dan double  strain  S.  thermophilus dan L. bulgaricus dalam menghambat pertumbuhan S. dysenteriae.

## METODE PENELITIAN
Metode  yang  digunakan  berupa experimental  design dengan pos  test-only  with  control group design . Sampel berupa  yoghurt dibuat dalam beberapa konsentrasi 0%, 20%, 40%, 60%, dan 80% yang mengandung BAL single atau double strain yaitu S. thermophilus dan L.  bulgaricus .  Bakteri  uji  dalam  penelitian  ini  yaitu Shigella  dysenteriae .  Penelitian  ini dilakukan  secara  in-vitro  menggunakan  metode  sumuran.  Jumlah  pengulangan  sampel sebanyak 3 kali dengan total sampel sebanyak 15 sampel. Dalam pembuatan yoghurt single strain ,  masing-masing strain dimasukan  ke  dalam  susu  sapi  sedangkan  yoghurt double strain , kedua strain BAL dimasukan ke dalam susu dan diinkubasi selama 24 jam hingga terbentuk yoghurt. Penelitian ini mengunakan media MHA sebagai media uji, penanaman S.  dysenteriae menggunakan swab  steril setelah  itu  dilubangi  menggunakan cork  borer kemudian  masing-masing  diisi  yoghurt  sebanyak  60µl  dan  di  inkubasi  pada  suhu  37 o C selama 6 jam-24 jam. Penghambatan S. dysenteriae apabila terbentuk area bening disekitar sumuran.  Pengukuran  zona  hambat  menggunakan  penggaris  satuan  mm.  Penelitian  ini menggunakan  uji  normalitas Saphiro  Wilk dan  homogenitas Levene  test (p>0,05).  Hasil data  tidak  terdistribusi  normal  maka  menggunakan  uji Kruskal  Wallis dan  uji Post  Hoc Mann  Whitney .  Analisis  data  menggunakan Kruskal  Wallis menunjukan  bahwa  p=0,002 (p<0,05)  terdapat  perbedaan  signifikan  diameter  zona  hambat S.  dysenteriae yang diberikan.  Uji Post  Hoc  Mann  Whitney didapatkan  hasil  pada  kelompok  konsentrasi  0% terdapat  perbedaan  bermakna  dengan  kelompok  perlakuan  20%,  40%,  60%,  dan  80% (p<0,05) dan terdapat perbedaan signifikan pada beberapa kelompok perlakuan.

## Alat dan Bahan
Autoklaf  ( All  American Model  No.  25X),  tabung erlenmeyer ,  cawan  petri,    jarum ose  ( Germany  Handle ), swab  steril ,  inkubator  ( Memmert  incubator ),  penggaris, neraca digital  (AND  EK-1200),  vortex,  pH  meter,  tabung  reaksi,  tabung  ukur, cork  borer ,
mikroskop,  termometer, object  glass , cover  glass, mikropipet, becker  glass (Pyrex). Salmonella  shigella  Agar (SSA), Triple  Sugar  Iron  Agar (TSIA), Sulfid  Indol  Motility (SIM), Mueller  Hinton  Agar (MHA), de  Mann  Rogosse  and  Sharpe  Broth (MRSB), de Mann  Rogosse  and  Sharpe  Agar (MRSA),  susu  sapi  murni,  bubuk  susu  skim,  akuades, bakteri S.  dysenteriae dari stok  laboratorium  mikrobiologi  FK  Unsoed  diperoleh  dari pasien  penderita  disentri,  biakan  bakteri asam  laktat  ( S.  thermophilus dan L.  bulgaricus ), alkohol  70%,  kristal  ungu,  kalium  iodida,  safranin,  lisol, emersi  oil ,  larutan  standar Mc Farland 0,5, H 2 O 2 3%.

## Jalannya Penelitian
Sampel  berupa  yoghurt  dibuat  dalam  beberapa  konsentrasi  0%,  20%,  40%,  60%, dan  80%  yang  mengandung  BAL single atau double  strain yaitu S.  thermophilus dan L. bulgaricus .  Bakteri  uji  dalam  penelitian  ini  yaitu Shigella  dysenteriae .  Penelitian  ini dilakukan  secara  in-vitro  menggunakan  metode  sumuran.  Jumlah  pengulangan  sampel sebanyak 3 kali dengan total sampel sebanyak 15 sampel. Dalam pembuatan yoghurt single strain ,  masing-masing strain dimasukan  ke  dalam  susu  sapi  sedangkan  yoghurt double strain , kedua strain BAL dimasukan ke dalam susu dan diinkubasi selama 24 jam hingga terbentuk yoghurt. Penelitian ini mengunakan media MHA sebagai media uji, penanaman S.  dysenteriae menggunakan swab  steril setelah  itu  dilubangi  menggunakan cork  borer kemudian  masing-masing  diisi  yoghurt  sebanyak  60µl  dan  di  inkubasi  pada  suhu  37 o C selama 6 jam-24 jam. Penghambatan S. dysenteriae apabila terbentuk area bening disekitar sumuran.  Pengukuran  zona  hambat  menggunakan  penggaris  satuan  mm.  Penelitian  ini menggunakan  uji  normalitas Saphiro  Wilk dan  homogenitas Levene  test (p>0,05).  Hasil data  tidak  terdistribusi  normal  maka  menggunakan  uji Kruskal  Wallis dan  uji Post  Hoc Mann  Whitney .  Analisis  data  menggunakan Kruskal  Wallis menunjukan  bahwa  p=0,002 (p<0,05)  terdapat  perbedaan  signifikan  diameter  zona  hambat S.  dysenteriae yang diberikan.  Uji Post  Hoc  Mann  Whitney didapatkan  hasil  pada  kelompok  konsentrasi  0% terdapat  perbedaan  bermakna  dengan  kelompok  perlakuan  20%,  40%,  60%,  dan  80% (p<0,05) dan terdapat perbedaan signifikan pada beberapa kelompok perlakuan.

## Analisis Data
Analisa data menggunakan analisa univariat dan analisa bivariat. Analisa univariat mendeskripsikan  karakeristik  variabel  yang  di  uji  berupa  konsentrasi  tiap  yoghurt  dan pertumbuhan S.  dysenteriae sedangkan  analisa  bivariat  untuk  menentukan  perbandingan BAL  yoghurt single  strain dan double  strain dalam  menghambat  pertumbuhan S. dysenteriae .  Data  hasil  penelitian  berupa  data  kuantitatif  dengan  skala  rasio.  Data  zona hambat  pertumbuhan S.  dysenteriae merupakan  rata-rata  diameter  terpanjang  yang dihasilkan pada fase pertumbuhan jam ke 6 diperoleh dari hasil pengukuran menggunakan M.I.C evaluator oxoid, data ditampilkan sebagai median dan quartil.
Pada penelitian ini pengujian statistik menggunakan uji normalitas data  Saphiro wilk dan  uji  homogenitas  Levene  test.  Hasil  uji  normalitas  didapatkan  bahwa  data  tidak terdistribusi  normal  pada  beberapa  kelompok  (lampiran  5)  dan  hasil  uji  Levene  test didapatkan  p=0,003  menunjukan  data  tidak  homogen,  setelah  dilakukan  ditransformasi data,  didapatkan  hasil  uji  Saphiro  Wilk  pada  beberapa  kelompok  p<0,05  dan  Levene  test p=0,075  menunjukan  data  tidak  terdistribusi  normal  dan  homogen.  Sehingga  uji
signifikansi menggunakan uji Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis menunjukan bahwa terdapat  perbedaan  diameter  zona  hambat  antar  kelompok  setidaknya  2  kelompok ditunjukkan  oleh  p<  0,05  (lampiran  6).  Hasil  dari  uji  Kruskal  Wallis  akan  di  analisis menggunakan  Post  Hoc  Mann  Whitney  untuk  mengetahui  antar  kelompok  mana  yang memiliki perbedaan signifikan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil identifikasi terhadap BAL ( S. thermophilus dan L. bulgaricus ) dan bakteri uji S. dysentriae terangkum pada Tabel 1 dan Gambar 1, Gambar 2, dan Gambar 3.
Tabel 1 Hasil Identifikasi Bakteri Bakteri Morfologi Koloni Morfologi Sel Uji Biokimia S. thermophilus Bulat, tidak sedap, kecil sampai sedang, rata, halus, warna putih susu, cembung. Cocus atau bulat, warna ungu (gram positif), susunan tunggal maupun berpasangan. Uji katalase: negatif L.bulgaricus Bulat, tidak sedap, kecil sampai sedang, rata, halus, putih susu, cembung. Batang, berwarna ungu, bakteri gram positif, susunan tunggal maupun berpasangan Uji katalase: negatif S. dysenteriae Bulat, tidak sedap, kecil sampai sedang, rata, halus, putih pucat, cembung Batang,warna merah bakteri gram negatif susunan tunggal atau berpasangan Uji TSIA Slant : merah Butt : Kuning (memfermentasi glukosa) Uji SIM Sulfide : tidak terbentuk H 2 S Indol: positif (terbentuk cincin merah) Motility: tidak motil (A) (B)
(C)
Gambar 1.  A. Morfologi Koloni; B. Morfologi Sel; C. Uji katalase S.thermophilus
(A) (B) (C)
Gambar 2 A. Morfologi koloni; B Morfologi sel,; C Uji katalase bakteri L.bulgaricus (A) (B) (C)
Gambar 3 A. Morfologi koloni; B. Morfologi sel; C. Uji TSIA dan SIM) bakteri S.dysenteriae
Uji  keasaman  yoghurt  pada  masing-masing  jenis  dan  konsentrasi  yoghurt  diukur mengunakan  pH  meter.  Uji  tingkat  keasaman  yoghurt  dari  masing-masing  jenis  dan konsentrasi yoghurt tertera pada tabel 2.
Tabel 2. Uji Tingkat Keasaman Yoghurt Yoghurt Konsentrasi pH Lb 0% 6,8 20% 4,4 40% 4,3 60% 4,3 80% 4,2 St 0% 6,8 20% 4,4 40% 4,4 60% 4,3 80% 4,3 Ds 0% 6,8 20% 4,3 40% 4,2 60% 4,1 80% 4,1 Keterangan:
Lb  : L. bulgaricus
St  : S. thermophilus Ds  : Double Strain (L. bulgaricus dan S. thermophilus)
Hasil  pengukuran  tingkat  keasaman  yaitu  pH  yoghurt double  strain lebih  rendah  jika dibandingkan dengan yoghurt single strain . Sedangkan, perbandingan yoghurt pada single strain antara L. bulgaricus dan S. thermophilus yaitu L. Bulgaricus memiliki pH yang lebih rendah.
Zona hambat BAL yoghurt terhadap penghambatan pertumbuhan S. dysenteriae diukur dengan  menghitung  diameter  zona  hambat  terpanjang  pada  jam  ke  6  fase  pertumbuhan. Pada  jam  tersebut  telah  terlihat  zona  hambat  yang  dihasilkan  dan  data  menunjukan  zona hambat jam ke 6 lebih luas dibandingkan dengan jam ke 12, 16, dan 18. Hasil pengukuran diameter  zona  hambat  yoghurt single  strain dan double  strain pada  setiap  cawan ditampilkan sebagai median dan quartil zona hambat. Hasil analisis univariat ditampilkan dalam  bentuk  median  zona  hambat  dan  quartil  menunjukan  peningkatan  median  zona hambat BAL single strain dan double strain mencakup data median dan quartil disajikan dalam tabel 3.
Tabel 3. Median (Q1-Q3) zona hambat yoghurt terhadap S. Dysenteriae Variabel ∑Sampel Median (Q1-Q3) K1 0% 3 0 (0-0) K2 St 20% 3 0 (0-6) K3 Lb 20% 3 8 (6-10) K4 Ds 20% 3 10 (8-11) K5 St 40% 3 10 (8-11) K6 Lb 40% 3 10 (10-10) K7 Ds 40% 3 12 (12-13) K8 St 60% 3 10 (8-10) K9 Lb 60% 3 11 (10-12) K10 Ds 60% 3 12 (12-13) K11 St 80% 3 10 (10-12) K12 Lb 80% 3 12 (10-13) K13 Ds 80% 3 14 (12-14)
Gambar 4. Perbandingan zona hambat penghambatan antar kelompok yoghurt terhadap S. dysenteriae pada konsentrasi 0%, 20%, 40%, 60%, dan 80%
Grafik  tersebut  menunjukan  perbandingan  median  dan  quartil  penghambatan  antar kelompok yoghurt terhadap S. dysenteriae pada masing-masing kelompok perlakuan. Hasil penelitian  menunjukan  nilai  median  zona  hambat  yang  terbentuk  pada  setiap  kelompok paling  tinggi  berasal  dari  kelompok  K13,  K10,  K7,  dan  K4  BAL  yoghurt double  strain konsentrasi  80%,60%,40%,20%  yang  diikuti  oleh  kelompok  K12,  K9,  K6,  dan  K3  BAL yoghurt single  strain  L.  bulgaricus konsentrasi  80%,60%,40%,20%,  pada  urutan  terakhir pada  kelompok  K11,  K8,  K5,  dan  K2  BAL  yoghurt single  strain  S.  thermophilus konsentrasi  80%,60%,40%,20%.    Namun,  beberapa  konsentrasi  yoghurt  yaitu  pada  K5 ( yoghurt single strain S. thermophilus ) konsentrasi 40% dan K6 ( yoghurt  single strain L. bulgaricus ) konsentrasi 40% memiliki median zona hambat yang sama yaitu 10 mm.
Analisis  bivariat  meliputi  hasil  uji  normalitas  dan  homogenitas  setelah  ditansformasi.
Hasil  uji Kruskal  Wallis menunjukan  perbedaan  median  diameter  zona  hambat  pada minimal  dua  kelompok  perlakuan,  yaitu  nilai  p=0,002  (p<0,05)  artinya  H1  diterima dilanjutkan  dengan  analisis Post  Hoc  Mann  Whitney untuk  menentukan  kelompok  yang memiliki perbedaan signifikan.
Tabel 4. Uji Post Hoc Mann Whitney
Tabel 4. uji Post Hoc Mann Whitney didapatkan hasil yang signifikan terhadap median diameter  zona  hambat  (p<0,05)  pada  kelompok  kontrol  K1  dengan  kelompok  perlakuan yang  diberi  yoghurt single  strain S.  thermophilus (K2,  K5,  K8,  K11), single  strain  L. bulgaricus (K3, K6, K9, K12), dan double strain (K4, K7, K10, K13). K2 single strain S. thermophilus 20% dengan single strain L. bulgaricus 40%,60%,80% (K6, K9, K12), single strain  S.  thermophilus 40%,60%,80%  (K5,  K8,  K11),  dan double  strain 20%  (K4).  K3 single strain L. bulgaricus 20% dengan double strain 40%,60%,80% (K7, K10, K13). K4 double  strain 20%  dengan double  strain 40%,60%,80%  (K7,  K10,  K13).  K5 S. thermophilus 40% dengan double strain 40%,60%,80% (K7, K10, K13). K6 single strain L.  bulgaricus 40%  dengan  dengan double  strain 40%,  60%,  80%  (K7,  K10,  K13).  K7 double  strain 40%  dengan single  strain  S.  thermophilus 60%  (K11).  K8 single  strain  S. thermophilus 60% dengan double strain 60%, 80% (K10, K13).
Hasil dari perhitungan zona hambat S. dysenteriae didapatkan nilai p < 0,002 (p < 0,05) artinya  pemberian  berbagai  konsentrasi  yoghurt  yang  mengandung  BAL single  strain  S. thermophilus,  single  strain  L.  bulgaricus ,  dan double  strain ( S.  thermophilus dan L. bulgaricus ) dapat mempengaruhi pertumbuhan koloni S. dysenteriae . Pada uji lanjut Post- Hoc  Mann  Whitney terdapat  perbedaan  signifikan  pada  beberapa  kelompok.  Hal  tersebut menunjukan  bahwa  intervensi  yang  dilakukan  memberikan  pengaruh  dalam  menghambat pertumbuhan S. dysenteriae .
Hasil  median  diameter  zona  hambat  dan  quartil  digunakan  untuk  menentukan  jenis yoghurt yang paling baik dalam menghambat pertumbuhan S. dysenteriae. Terdapat 3 jenis yang  digunakan  dalam  penelitian  yaitu  yoghurt  St,  Lb,  dan  Ds  dengan  konsentrasi  20%, 40%, 60%, 80%, dan 0% sebagai kontrol. Median (Q1-Q3) zona hambat pada konsentrasi 20%  yoghurt  Ds  >  Lb  >  St  masing-masing  10  (8-11)  mm  >  8  (6-10)  mm  >  0  (0-6)  mm. Median zona hambat pada konsentrasi 40% yoghurt Ds > Lb > St masing-masing memiliki zona hambat yaitu 12 (12-13) mm> 10 (10-10) mm > 10 (8-11) mm. Median (Q1-Q3) zona hambat  pada  konsentrasi  60%  yoghurt  Ds  >  Lb  >  St  masing-masing  12  (12-13)  mm>  11 (10-12) mm> 10 (8-10) mm. Median zona hambat pada konsentrasi 80% yoghurt Ds > Lb > St masing-masing 14 (12-14) mm> 12 (10-13) mm> 10 (10-12) mm. Hasil yang didapat menunjukan  bahwa  yoghurt  Ds  ditetapkan  memiliki  kemampuan  yang  lebih  baik  dalam menghambat pertumbuhan S. dysenteriae .
Zona  hambat  yang  terbentuk  menunjukan  penghambatan  pertumbuhan  bakteri S. dysenteriae disebabkan  oleh  aktivitas  BAL.  Yoghurt double  strain memiliki  kemampuan yang lebih baik dalam menghambat pertumbuhan S. dysenteriae . Aktivias kombinasi BAL S. thermophilus dan L. bulgaricus pada yoghurt double strain kedua bakteri ini bersinergis dalam  menghambat  bakteri  patogen S.  dysenteriae dengan  menghasilkan  zat-zat  anti mikroba. Terdapat 4  mekanisme BAL dalam menghambat S. dysenteriae yaitu perubahan pH  lingkungan,  kerusakan  membrane  sel,  kegagalan  pompa  proton,  dan  penghambatan biosintesis  protein.  Zat  anti  mikroba  yang  dihasilkan  berupa  asam  laktat,  H 2 O 2 ,  dan bakteriosin.
Asam laktat mudah berpenetrasi ke dalam sel bakteri sehingga dapat merusak membran luar S.  dysenteriae yang  menyebabkan  bakteriosin,  H 2 O 2 masuk  ke  dalam  membran sitoplasma dan menghambat pertumbuhan S. dysenteriae (Rahmiati dan Mumpuni, 2017).
Selain  itu,  pH  asam  dapat  menyebabkan  proses  depurinisasi  materi  genetik  yang menyebabkan  hilangnya  materi  genetik.  Adanya  ion  H + yang  terbentuk  menyebabkan rendahnya pH lingkungn sehingga kurang sesuai dengan tempat tumbuhnya S. dysenteriae . pH  optimum S.  dysenteriae yaitu  pH  7,4  (An et  al., 2017;  Sharma et  al., 2017).  H 2 O 2 merupakan oksidator yang kuat mengakibatkan oksidasi membran sel bakteri, yaitu gugus sulfihidril  dari  protein  yang  mengakibatkan  terjadinya  denaturasi  sejumlah  enzim  dan terjadi peningkatan permeabilitas membran patogen melalui mekanisme peroksidase lemak membran  sel  (Tian et  al., 2018).  Bakteriosin termophilin dan bulgarican ,  penempelan bakteriosin pada membran sel akan mempengaruhi permeabilitas sehingga sel kehilangan
proton  seiring  dengan  perubahan  gradien  pH  pada  membran  sel.  Hal  ini  menyebabkan rusaknya molekul yang berperan  sebagai penyusun sintesis protein dalam sel dan memiliki kemampuan memodifikasi ribosom sehingga dapat menghambat bakteri gram negatif (Bali et al., 2016).
BAL  yoghurt single strain L. bulgaricus memiliki kemampuan yang lebih baik dalam menghambat  pertumbuhan S.  dysenteriae dibandingkan  dengan S.  thermophilus .  Hal  ini dikarenakan  faktor  pH  yang  lebih  rendah. L.  bulgaricus mengubah  laktosa  menjadi  asam laktat.  Asam  laktat  merupakan  metabolit  primer  yang  dihasilkan  pada  fase  logaritmik, L. bulgaricus tumbuh  dalam  pH  optimal  yaitu  5,2-5,5  dan  pertumbuhannya  akan  terhenti pada  pH  3,8-4.  Pada  pH  5  selama  fase  logaritmik  viabilitas  (aktivitas  enzimatik)  serta aktivitas  pengasaman  lebih  tinggi  dan  lebih  stabil  selama  pertumbuhan.  Selama  fase logaritmik,  pertumbuhan L.  bulgaricus mencapai  puncak  sehingga  asam  laktat  yang dihasilkan  maksimal  (Bostan et  al., 2017;  Stephens  dan  Turner,  2015).  Kelangsungan hidup  dan  aktivitas  proteolitik L.  bulgaricus berkontribusi  pada  pengasaman  yoghurt sehingga pH yang dihasilkan lebih rendah jika dibandingkan dengan S. thermophilus (Tian et al., 2018).
Bakteriosin merupakan  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  pada  fase  stationer. Bakteriosin bulgarican (bakteriosin  kelas  III)  merupakan  modifikasi  ribosomal  bakteri yang  memiliki  spektrum  aktivitas  antibakteri. Bulgarican memiliki  aktivitas  hidrolitik menghambat sintesis dinding sel, sehingga mampu melisiskan bakteri gram positif dengan peptidoglikan yang tebal. Active peptides melintasi membran sitoplasma dengan adenosine tri-phosphate-binding cassette transporters (ABC transporters) menginduksi pembentukan pori-pori sehingga dapat menghambat sel patogen. Target utama yaitu integritas membran bakteri dan membran sitoplasma patogen yang sensitif (Bali et al., 2016; Sieuwerts, 2016).
S.thermophilus dan L. bulgaricus tumbuh secara sinergis. Diawali oleh pertumbuhan S. thermophilus dengan pertumbuhan optimal pada pH 6,5 mendekati pH susu yaitu 6,6 - 6,8 dan pertumbuhannya terhenti ketika keasaman mencapai pH 4,2-4,4. Asam laktat terbentuk lebih  awal  pada  yoghurt S.  thermophilus dibandingkan  yoghurt L.  Bulgaricus (Anondita dan Soyi, 2017; Stephens dan Turner, 2015). Namun, yoghurt yang dihasilkan single strain S.  thermophilus memiliki  pH  yang  lebih  tinggi  dibandingkan single  strain  L.  bulgaricus dikarenkan S.  thermophilus memiliki  aktivitas  proteolitik  yang  lemah  dan  hanya memanfaatkan  penggunaan  asam  amino  serta small  peptide yang  terdapat  dalam  susu untuk  mendukung  pertumbuhan  optimalnya  (Bostan et  al., 2017).  Sehingga  pH  yang dihasilkan  tidak  lebih  asam  daripada  yang  dihasilkan  oleh L.  bulgaricus ,  oleh  karena  itu kemampuan  menghambat  nya  lebih  rendah. S.  thermophilus menghasilkan  bakteriosin thermophilin (bakteriosin  kelas  II  b),  peptida  bakteriosin thermophilin mempengaruhi permeabilitas  membran  sel  target  depolarisasi  dengan  bocornya  ion  serta  penurunan konsentrasi ATP intaseluler (Bali et al., 2016).
Faktor lain yang mempengaruhi selain dari zat antimikroba yang dihasilkan yaitu faktor lingkungan. S. dysenteriae dapat tumbuh pada kisaran pH 7,4, suhu 37 o C. Intervensi yang
diberikan  pada  penelitian  ini  berupa  yoghurt  pada  setiap  kelompok  perlakuan  dengan konsentrasi  yoghurt  yang  berbeda-beda  dan  memberikan  nilai  pH  di  bawah  optimum pertumbuhan S. dysenteriae (Sari et al., 2018; Sharma et al., 2017).
K5 dan K6 memiliki median yang sama yaitu 10, K7 dan K10 memiliki median yang sama yaitu 12, serta K5 dan K8 memiliki median yang sama yaitu 10. Hal tersebutt dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  meliputi  ketebalan  media,  inokulum,  dan  laju  difusi yoghurt dalam media (Haryati et al., 2017).

## KESIMPULAN
BAL  yoghurt double  strain  (S.  thermophilus dan L.bulgaricus) merupakan  BAL yogurt  yang  paling  baik  dalam  menghambat  pertumbuhan S.  dysenteriae dibandingkan BAL single  strain  S.  thermophilus atau single  strain  L.  bulgaricus sedangkan,  BAL yoghurt single  strain  L.  bulgaricus lebih  baik  dalam  menghambat  pertumbuhan S. dysenteriae dibandingkan BAL yoghurt single strain S. thermophilus.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasi kepada Anriani Puspita Karunia Ning Widhi, S.Si,. M.Si dan Dr. dr. Nendyah Roestijawati, M.K.K, yang telah membimbing, memberi masukan, dan saran selama penilitian sehinga penelitian ini berjalan lancar dan selesai.

## DAFTAR PUSTAKA
An, R., Dong, P., Komiyama, M., Pan, X., & Liang, X. 2017. Inhibition of Nonenzymatic Depurination of Nucleic Acids by Polycations. Federation of European Biochemical Societies . 7 (1): 1707–1714.
Anindita,  N.  S.,  &  Soyi,  D.  S.  2017.  Studi  kasus:  Pengawasan  Kualitas  Pangan  Hewani melalui  Pengujian  Kualitas  Susu  Sapi  yang  Beredar  di  Kota  Yogyakarta. Jurnal Peternakan Indonesia (Indonesian Journal of Animal Science) . 19 (2): 93. Bali, V., Panesar, P. S., Bera, M. B., Kennedy, J. F., Bali, V., Panesar, P. S., Bera, M. B., dan  Kennedy,  J.  F.  2016.  Bacteriocins :  Recent  Trends  and  Potential  Applications Bacteriocins :  Recent  Trends  and  Potential  Applications. Critical  Review  in  Food Science and Nutritio n. 56 (1): 817-834.
Bostan,  K.,  Unver  Alcay,  A.,  Yalçin,  S.,  Eren  Vapur,  U.,  &  Nizamlioglu,  M.  2017. Identification and Characterization of Lactic Acid Bacteria Isolated from Traditional Cone Yoghurt. Food Science and Biotechnology . 26 (6). 1625–1632.
Chang, Z., Zhang, J., Ran, L., Sun, J., Liu, F., Luo, L., Zeng, L., Wang, L., Li, Z., Yu, H., &  Liao,  Q.  2016.  The  Changing  Epidemiology  of  Bacillary  Dysentery  and Characteristics of Antimicrobial Resistance of Shigella Isolated in China from 2004- 2014. BMC Infectious Diseases . 16 (1). 1–10.
Darna, Turnip, M., dan Rahmawati. 2018. Identifikasi Bakteri Anggota Enterobacteriaceae pada Makanan Tradisional Sotong Pangkong. Jurnal Labora Medika . 2 (2). 6–12. Fitrianarni, D., Ibrahim, M., dan Trimulyono, G. 2014. Aktivitas Antibakteri Yoghurt Susu Sapi  dan  Yoghurt  Susu  Kedelai  terhadap Shigella  dysenteriae secara  In  Vitro. LenteraBio . 3 (1). 97–102.
Haryati,  S.  D.,  Darmawati,  S.,  dam  Wilson,  W.  2017.  Perbandingan  Efek  Ekstrak  Buah
Alpukat  ( Persea  Americana  Mill )  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri  Pseudomonas Aeruginosa  dengan  Metode  Disk  dan  Sumuran. Prosiding  Seminar  Nasional Publikasi  Hasil-Hasil  Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat  Universitas Muhammadiyah Semarang . 1(1). 348–352. Kemenkes RI. 2019. Profil Kesehatan Indonesia 2018 . Kementrian Republik Indonesia.
Linares,  D.  M.,  Callaghan,  T.  F.  O.,  Connor,  P.  M.  O.,  Ross,  R.  P.,  &  Stanton,  C.  2016. Streptococcus  thermophilus  APC151 Strain  is  Suitable  for  the  Manufacture  of Naturally GABA-Enriched Bioactive Yogurt. Frontier In Microbiology. 7(1): 1–9. Mahmood,  T.,  Masud,  T.,  Ali,  S.,  Abbasi,  K.  S.,  &  Liaquat,  M.  2015.  Optimization  and Partial  Characterization  of  Bacteriocin  Produced  by Lactobacillus  bulgaricus - TLBFT06 Isolated from Dahi.1(1): 1-6.
Mcfarland,  L.  V.  2020.  Efficacy  of  Single  ‑  Strain  Probiotics  Versus  Multi  ‑  Strain Mixtures :  Systematic  Review  of  Strain  and  Disease  Specificity. Digestive  Diseases and Sciences , 1 (1):1-11.
Putri, A. A.Erina, dan Fakhrurrazi. 2018. Isolasi Bakteri Asam Laktat Genus Lactobacillus Dari Feses Rusa Sambar ( Cervus unicolor ). Jurnal Ilmiah Veteriner . 2(1): 170–176. Rahman, I. R., Nurkhasanah, dan Kumalasari, I. 2019. Optimasi Komposisi Lactobacillus bulgaricus dan Streptococcus  thermophilus pada  Yogurt  Terfortifikasi  Buah  Lakum ( Cayratia  trifolia  (L.)  Domin )  sebagai  Antibakteri  terhadap Escherichia  coli . Pharmaceutical Sciences and Research . 6 (2). 99–106.
Rahmiati, R., dan Mumpuni, M. 2017. Eksplorasi Bakteri Asam Laktat Kandidat Probiotik Dan Potensinya Dalam Menghambat Bakteri Patogen. Journal of Islamic Science and Technology. 3 (2), 141–150.
Sari,  N.,  Erina,  Abrar,  M.,  Wardani,  E.,  Fakhrurrazi,  &  Daud,  R.  2018.  Isolasi  dan Identifikasi Salmonella  Sp dan Shigella  Sp pada  Feses  Kuda  Bendi. Journal  of Chemical Information and Modeling . 2 (3). 401–410.
Sharma,  C.,  Singh,  B.  P.,  Thakur,  N.,  Gulati,  S.,  Gupta,  S.,  Mishra,  S.  K.,  &  Panwar,  H. 2017. Antibacterial Effects of Lactobacillus Isolates of Curd and Human Milk Origin Against  Food-Borne  and  Human  Pathogens. Biotech  Springer  Berlin  Heidelberg . 7(1): 1–9.
Sieuwerts, S. 2016. Microbial Interactions in the Yoghurt Consortium: Current Status and Product  Implications. Symbiosis  Online  Journal  Microbiology  and  Infectious Diseases . 4 (2): 1–5.
Stephens,  J.,  dan  Turner,  D.  2015. Streptococcus  thermophilus Bacteraemia  in  a  Patient with  Transient  Bowel  Ischaemia  Secondary  to  Polycythaemia. Journal  Imact Prediction System Case Reports . 2 (3). 1–3.
Surono,  I.  S.  2016.  Probiotik,  Mikroorganisme  dan  Pangan  Fungsional.Yogyakarta : CV.Budi Utama.
Tian, H., Li, B., Evivie, S. E., dan Sarker, S. K.2018. Technological and Genomic Analysis of  Roles  of  the  Cell-Envelope  Protease  PrtS  in  Yoghurt  Starter  Development. International Journal of Molecular Science. 1(1) 1–17.