https://doi.org/10.30644/rik.v7i1.129
Skrining antikanker menggunakan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) pada ekstrak metanol daun saga (Abrus precatorius L.) dengan partisi etanol
Kurnia Ritma Dhanti 1
1 Program Studi Teknologi Laboratorium Medik Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Purwokerto Email korespondensi : Kurniaritmadhanti@ump.ac.id

## Abstrak
Latar  belakang :  Pengembangan  senyawa  antikanker  dari  bahan  alami  perlu  dilakukan untuk  meminimalisir  efek  samping  dari  penanganan  penyakit  kanker  yang  saat  ini  banyak dilakukan.  Suatu  senyawa  dapat  diketahui  potensi  antikankernya  dengan  pendekatan menggunakan  metode  BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test ).  Ekstrak  metanol  daun  saga ( Abrus  precatorius L.)  bersifat  toksik  terhadap  larva A.  salina Leach.  Tujuan  penelitian adalah  mengetahui  bagian  teraktif  dari  ekstrak  metanol  daun  saga  yang  dipartisi (dipisahkan) menggunakan pelarut etanol.
Metode :  Ekstrak  metanol  daun  saga  dipartisi  dengan  pelarut  etanol  hingga  terbentuk bagian  larut  dan  tidak  larut.  Kedua  bagian  tersebut  diuji  menggunakan  metode  BSLT dengan  5  kali  ulangan  dan  3  replikasi  yang  masing-masing  menggunakan  10    ekor  larva A.salina . Hasil :  Dari  perhitungan  didapatkan  nilai  LC 50 bagian  larut  etanol  sebesar  144,544  ppm sedangkan nilai LC 50 bagian tidak larut etanol sebesar 151,356 ppm. Kesimpulan :  Bagian  larut  etanol  menyebabkan  persentase  kematian  yang  lebih  tinggi daripada  bagian  tidak  larut.  Nilai  LC 50 bagian  larut  etanol  lebih  rendah  dibanding  bagian tidak  larutnya.  Semakin  rendah  nilai  LC 50 senyawa,  maka  semakin  berpotensi  pula  untuk dikembangkan sebagai agen antikanker.
Kata kunci : toksisitas , Abrus precatorius L., Artemia salina Leach., antikanker, partisi.

## Abstract
Background : the development of anticancer compounds from natural ingredients need to be performed to minimize the side effects of the handling of the disease cancer that nowadays many  do.  A  compound  can  be  known  to  potential  anti-cancer  with  the  approach  using  the methods  of  the  BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test ).  The  methanol  extract  of  leaves  of  the saga ( Abrus precatorius L) are toxic against larvae of A. salina Leach.
Objective :  know  the  most  active part  of  the methanol  extract  of  leaves of  the  saga  that  is partitioned (separated) uses ethanol solvent.
Methods :  Extract  the  methanol  solvent  is  partitioned  into  the  saga  leaves  ethanol  until formed part of the soluble and insoluble. The second part is tested using the method of the BSLT with 5 times the replication and 3 replicates each using 10 tail larva of A. salina .
Results : From the calculation of the LC50 value obtained by ethanol soluble part of 144.544 ppm while the LC50 value ethanol insoluble part of 151.356 ppm.
Conclusion : ethanol soluble part caused the percentage of deaths higher than the insoluble. LC50 values of a soluble part of ethanol are lower than the insoluble parts. The lower LC50 value compounds, the potential to be developed as anticancer agents.
Keywords : Abrus precatorius toxicity, l., Artemia salina Leach, anticancer, partitions.

## Juni 2018

## PENDAHULUAN
Kanker merupakan salah satu penyakit  penyebab  kematian  tertinggi  di negara-negara berkembang (1), yang disebabkan  adanya  pertumbuhan  sel  tidak terkendali  dan  mampu  menyerang  jaringan biologis lainnya. Hingga saat ini, pengobatan  kanker  yang  efektif  dan  efisien belum  banyak  ditemukan  karena  masih menimbulkan  banyak  efek  samping  (2). Salah  satu  pengobatan  utama  kanker  yang banyak diterapkan adalah kemoterapi dengan  efek  samping  seperti  kerontokan rambut, mual, muntah, sariawan, gangguan pencernaan dan warna kulit yang menghitam.
Keberadaan  senyawa  aktif  dari suatu  ekstrak  bahan  alam  dapat  diketahui dengan  uji  aktivitas  ( bioassay )  dan  salah satu  metode  yang  dapat  digunakan  adalah metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) [3].  Dalam  metode  ini  digunakan  larva Artemia  salina Leach  sebagai  hewan  uji untuk menentukan ketoksikan suatu senyawa  dalam  ekstrak  tumbuhan  yang berupa racun.
Tanaman  saga  ( Abrus  precatorius L.)  merupakan  salah  satu  tanaman  yang banyak  digunakan  secara  tradisional  di beberapa  negara.  Ekstrak  metanol  daun saga  yang  diuji  toksisitas  dengan  metode BSLT  lebih  aktif  dibandingkan  ekstrak  n- heksan dan etil asetat [4]. Nilai LC 50 ekstrak metanol  daun  saga  adalah  606,736  ppm dan  dikatakan  bersifat  toksik  (LC 50 kurang dari 1000 ppm) (3).
Tanaman saga mengandung senyawa bersifat toksik yaitu senyawa abrin (5).  Selain  itu  tanaman  saga  mengandung abruquinone  G  (2)  yang  aktif  sebagai antiviral dan bersifat toksik [6,7].
Kandungan kimia tanaman saga diantaranya  saponin,  flavonoid,  polefenol, alkaloid,  protein,  vitamin  A,  B1,  B6,  C, kalsium oksalat, glisirin, flisirizinat, polygalacturomic acid dan pentosan (8).
Berdasarkan  hal  tersebut  dapat dikatakan  bahwa  tanaman  saga  berpotensi untuk dikembangkan sebagai obat baru
kandidat antikanker. Perlu dilakukan penelitian  lebih  lanjut  untuk  mengetahun bagian  mana  dari  ekstrak  metanol  daun saga  tersebut  yang  lebih  aktif  untuk dikembangkan sebagai senyawa antikanker.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui  lebih  lanjut  bagian  komponen bioaktif  dari  ekstrak  metanol  daun  saga yang  lebih  bersifat  toksik  terhadap  larva Artemia salina Leach.

## METODE Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  oven,  blender, rotary  evaporator , water  bath, bejana  maserasi,  bejana pengembang,  sentrifuse  makro,  lampu UV 254 dan  UV 366 ,  pipa  kapiler,  penyemprot spot, flakon, vortex, spatula, pipet tetes dan aerator.
Bahan yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  daun  saga  ( Abrus precatorius
L.) yang diambil dari Tawangmangu,
Karanganyar,
Jawa
Tengah,  plat  silika  gel  60  PF 254 (E.Merck), aquadest,  kloroform,  metanol,  telur Artemia salina Leach.,  air  laut  5%,  suspensi  ragi (Fermipan ®), pereaksi semprot serium (IV) sulfat,  reagen  Dragendorf,  FeCl 3, dan reagen Lieberman-Burchard.

## Pemisahan Komponen Bioaktif
Serbuk  daun  saga  dimaserasi  dengan pelarut  metanol  kemudian  dipartisi  dengan pelarut  etanol.  Larutan  dipisahkan  dengan sentrifugasi  pada  kecepatan  3000  rpm selama  10  menit  sehingga  didapat  bagian larut dan tidak larut etanol.

## Penyiapan konsentrasi yang akan diujikan dengan uji BSLT
Sampel  dibuat  dengan  5  seri  konsentrasi, yaitu  0  ppm  (kontrol),  125  ppm,  250  ppm, 500 ppm dan 750 ppm dengan pelarut CMC 0,1%.  Telur A.  salina ditetaskan  pada  air laut  berkadar  garam  38%.  Larva  yang digunakan  untuk  uji  toksisitas  adalah  larva berumur 48 jam (9).

## Penetasan larva udang
Telur A.  salina ditetaskan  dalam  toples besar.  Air  laut  dengan  kadar  garam  38% dimasukkan ke dalam wadah, serta diaerasi menggunakan  aerator.  Telur  akan  menetas setelah kira-kira 24 jam menjadi larva. Larva yang  berumur  48  jam  dapat  digunakan untuk uji toksisitas (9).

## Uji toksisitas
Pengujian  dilakukan  terhadap  sepuluh  ekor larva A. salina yang dipilih secara acak dan dimasukkan dalam flakon berisi sampel dan air  laut  1  ml.  Setelah  larva  dimasukkan ditambah  air  laut  hingga  volume  5  ml  dan satu  tetes  suspensi  ragi Saccharomyces cerevisiae (3  mg/10  ml  air  laut)  sebagai makanan.

## Perhitungan Nilai LC
50 Efek  toksik  ekstrak  metanol  daun  saga terhadap  larva A.  salina dianalisis  dengan cara menghitung persentase kematian larva uji  setelah  24  jam  perlakuan.  Perhitungan nilai LC 50 kedua bagian hasil partisi tersebut dihitung  dengan  menggunakan  persamaan yang  didapat  dari  kurva  regresi  linear  yang menunjukkan  hubungan  log  konsentrasi hasil  partisi  ekstrak  metanol  dengan  nilai probit kematian larva A. salina.

## HASIL Ekstraksi
Proses ekstraksi dilakukan dengan menggunakan pelarut metanol, dan dimonitoring menggunakan KLT.
Gambar  1.  Kromatogram  hasil  KLT  ekstrak metanol daun saga deteksi dengan (A) sinar tampak, (B) sinar UV 254 , (C) sinar UV 366 (D) deteksi semprot serium (IV) sulfat.

## Partisi dengan pelarut etanol
Partisi  dilakukan  dengan  pelarut  etanol kemudian  disentrifugasi  hingga  didapat bagian larut (1)  dan tidak larut etanol (2).
Gambar  2.  Kromatogram  hasil  KLT  partisi ekstrak  metanol  daun  saga  deteksi  dengan (A)  sinar  tampak,  (B)  sinar  UV 254 ,  (C)  sinar UV 366 (D) deteksi semprot serium (IV) sulfat.

## Uji Toksisitas Komponen Bioaktif
Kedua  bagian  hasil  partisi  pelarut  etanol kemudian  diujikan  dengan  metode  BSLT. Konsentrasi yang digunakan adalah 0 ppm, 125 ppm, 250 ppm, 500 ppm dan 750 ppm. Penggunaan konsentrasi  ini  mengacu pada nilai  LC 50 ekstrak  metanol  daun  saga  yaitu 606,703 ppm (4).
Masing-masing
konsentrasi  diujikan  dengan  5  ulangan  dan 3 replikasi.
Tabel  1.  Hasil  uji  BSLT  bagian  larut  etanol ekstrak  metanol  daun  saga  terhadap A. salina

## Replikasi I
Konsentra si (ppm) Jumlah larva A. salina yang mati tiap flakon Rata-rata persentase kematian (%) A B C D E 125 4 6 6 4 5 50 250 10 8 9 10 9 92 500 10 10 9 10 10 98 750 9 9 9 10 10 94 0 (Kntrl) 2 2 2 1 1 16

## Replikasi II
Konsentrasi (ppm) Jumlah larva A. salina yang mati tiap flakon Rata-rata persentase kematian (%) A B C D E 125 6 4 4 4 5 46 250 10 8 9 9 9 90
500 9 10 10 10 10 98 750 10 10 10 9 10 98 0 (Kontrol) 3 2 2 2 2 22

## Replikasi III
Konsentrasi (ppm) Jumlah larva A. salina yang mati tiap flakon Rata-rata persentase kematian (%) A B C D E 125 5 6 5 10 9 70 250 6 9 7 10 8 80 500 8 10 10 8 10 92 750 10 10 9 10 10 98 0 (Kontrol) 1 1 1 1 0
8
Catatan : huruf A-E menunjukkan nomor flakon, tiap flakon berisi 10 larva A. salina
Tabel  2.  Hasil  uji  BSLT  bagian  tidak  larut etanol ekstrak metanol daun saga terhadap A. salina

## Replikasi I
Konsentrasi (ppm) Jumlah larva A. salina yang mati tiap flakon Rata-rata persentase kematian (%) A B C D E 125 10 5 9 6 5 70 250 10 8 9 10 9 92 500 7 8 8 8 9 80 750 9 10 10 7 8 94 0 (Kontrol) 2 2 2 1 1 16

## Replikasi II
Konsentrasi (ppm) Jumlah larva A. salina yang mati tiap flakon Rata-rata persentase kematian (%) A B C D E 125 3 5 6 6 7 54 250 7 8 8 8 4 70 500 10 10 8 10 6 88 750 10 9 10 10 9 96 0 (Kontrol) 3 2 2 2 2 22

## Replikasi III
Konsentrasi (ppm) Jumlah larva A. salina yang mati tiap flakon Rata-rata persentase kematian (%) A B C D E 125 9 10 6 8 7 80 250 8 7 5 7 7 76 500 8 8 10 10 10 92 750 5 10 10 7 10 84 0 (Kontrol) 1 1 1 1 0 8
Catatan : huruf A-E menunjukkan nomor flakon, tiap flakon berisi 10 larva A. salina
Gambar  3.  Diagram  hasil  uji  toksisitas bagian  larut  dan  tidak  larut  etanol  ekstrak metanol daun saga.

## Perhitungan nilai LC 50
Gambar  4.  Kurva  regresi  linier  hasil  uji toksisitas  bagian  larut  etanol  ekstrak metanol daun saga terhadap A. Salina
Gambar  5.  Kurva  regresi  linier  hasil  uji toksisitas  bagian  tidak  larut  etanol  ekstrak metanol daun saga terhadap A. salina

## Riset Informasi Kesehatan, Vol.7, No.1

## Juni 2018
Tabel  3.  Tabel  nilai  probit  persentase kematian A. salina [10]

## PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  daun  saga  dengan pelarut  metanol  dimonitor  dengan  KLT. Hasil KLT ekstrak metanol daun saga dapat dilihat  pada  Gambar  1.  Berdasarkan  profil kromatogram  hasil  KLT  ekstrak  metanol tersebut  terlihat  bahwa  dengan  deteksi semprot  serium  (IV)  sulfat  (Gambar  1.D.) terbentuk spot berwarna kecoklatan dengan nilai  Rf  0,36;  0,43;  0,63  dan  0,7.  Yang menunjukkan  adanya  kandungan  senyawa organik secara umum (11).
Ekstrak  metanol  kemudian  dipartisi dengan menggunakan pelarut etanol. Setelah  disentrifus,  didapatkan  dua  bagian yang terpisah, yaitu bagian larut etanol dan bagian  tidak  larut  etanol.  Kedua  bagian dimonitoring  dengan  KLT.  Berdasarkan hasil  KLT  terlihat  bahwa  profil  spot  bagian larut  dan  tidak  larut  etanol  tidak  tumpang tindih (Gambar 2).
Pada  tabel  1  dan  2,  diketahui  hasil perhitungan  kematian  larva A.  salina pada masing-masing  konsentrasi.  Pada  tabel tersebut  terlihat  bahwa  semakin  besar konsentrasi senyawa yang digunakan maka semakin  besar  pula  tingkat  kematian  larva. Persentase  kematian  bagian  larut  maupun
tidak  larut  etanol  dihitung  dengan  cara mengurangi  persentase  kematian  larva  tiap konsentrasi  dengan  persentase  kematian larva  pada  botol  kontrol.  Hal  ini  bertujuan untuk mengurangi tingkat kesalahan karena seharusnya pada botol kontrol tidak terdapat  larva  mati.  Hasil  dari  perhitungan ini dapat dilihat pada gambar 3.
Metode  BSLT  diterapkan  dengan menentukan  nilai  LC 50 setelah  perlakuan selama  24  jam.  Melalui  metode  BSLT pelaksanaan  skrining  awal  dapat  dilakukan dengan biaya yang relatif mudah, sederhana,  dan  relatif  cepat  terhadap standarisasi  bioaktifitas  pada  produksi tumbuhan  heterogen  (12).  Suatu  ekstrak dikatakan  bersifat  toksik  jika  memiliki  nilai LC 50 (konsentrasi  yang  mampu  membunuh 50%  larva  udang)  kurang  dari  1000  ppm setelah waktu kontak 24 jam (13).
Perhitungan  nilai  LC 50 kedua  bagian hasil  partisi  tersebut  dihitung  dengan menggunakan persamaan yang didapat dari kurva  regresi  linear  yang  menunjukkan hubungan  log  konsentrasi  hasil  partisi ekstrak metanol dengan nilai probit kematian larva A. salina (Tabel 3).
Berdasarkan  persamaan  dari  kurva regresi  linier  pada  gambar  4  dan  5,  dapat dilakukan  perhitungan  nilai  LC 50 sebagai berikut :
a)  Bagian  larut  etanol  ekstrak  metanol daun saga Berdasarkan kurva regresi linear hubungan nilai probit (persentase kematian A. salina ) dengan log konsentrasi  bagian  larut  etanol  ekstrak metanol  daun  saga  didapat  persamaan sebagai berikut :
y = 1.478x + 1.797, dimana y = 5 (LC 50 ) 5 = 1.478x + 1.797 x = 5−1.797 1.478 ; x = 2.16
LC 50 = antilog x = antilog 2.16 = 144.544 ppm
b)  Bagian tidak larut etanol ekstrak metanol daun saga Berdasarkan kurva regresi linear hubungan nilai probit (persentase

## Juni 2018
kematian A. salina ) dengan log konsentrasi  bagian  tidak  larut  etanol ekstrak  metanol  daun  saga  didapat persamaan sebagai berikut : y = 0.964x + 2.903, dimana y = 5 (LC 50 ) 5 = 0.964x + 2.903 x = 5 – 2.903 0.964 ; x = 2.18
LC 50 = antilog x = antilog 2.18 = 151.356 ppm
Dari  perhitungan  didapatkan  nilai LC 50 bagian  larut  etanol  sebesar  144,544 ppm sedangkan nilai LC 50 bagian tidak larut etanol  sebesar  151,356  ppm.  Nilai  LC 50 yang didapat menunjukkan tingkat ketoksikan  suatu  bagian  senyawa  terhadap A.  salina .  Semakin  kecil  nilai  LC 50 maka semakin besar tingkat ketoksikannya.
Terdapat  hubungan  antara  letalitas larva A.salina dengan  sifat  toksik  suatu senyawa  dari  ekstrak  tanaman  (14).  Jika suatu  ekstrak  tanaman  bersifat  toksik menurut  metode  BSLT  maka  ekstrak tersebut  berpotensi  untuk  dikembangkan sebagai obat antikanker. Cara kerja senyawa toksik yang menyebabkan kematian  larva  A.  salina  adalah  dengan bertindak  sebagai  stomach  poisoning  atau racun  perut.  Senyawa  toksik  ini  dapat mengganggu alat pencernaan dan menghambat  reseptor  perasa  pada  daerah mulut  larva.  Hal  inilah  yang  menyebabkan kegagalan larva mendapatkan stimulus rasa sehingga tidak mampu mengenali makanannya  dan  menyebabkan  kematian larva (15).

## KESIMPULAN
Bagian  larut  etanol  ekstrak  metanol  daun saga  memiliki  nilai  LC 50 yang  lebih  rendah dari  bagian  tidak  larutnya.  Bagian  larut etanol lebih berpotensi untuk dikembangkan sebagai senyawa antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Indrayani,  L,  H.  Soetjipto,  L.  Sihasale.
Skrining  Fitokimia  dan  Uji  Toksisitas Ekstrak Daun Pecut Kuda ( Stachytarpheta  jamaicensis L.  Vahl) Terhadap  Larva  Udang Artemia  salina
Leach. Berkala  Penelitian  Hayati 2006; 12 : 57-61.
2.  Katzung,  BG. Basic  and  Clinical Pharmacology. 8 th edition. Philladelphia : Mc. Graw-Hill companies; 2001
3.  Wahyuningsih,  MSH,  S.  Wahyuono,  D.
Santoso, J. Septiadi,
Soekotjo, Widiastuti,  R.  Rakhmawati,  D.  Sari. Eksplorasi Tumbuhan dari Hutan Kalimantan  Tengah  sebagai  Sumber Senyawa Bioaktif. Biodiversitas 2008; 9 (3) : 169-172.
4.  Juniarti, Delvi O, Yuhernita. Kandungan Senyawa  Kimia,  Uji  Toksisitas  ( Brine Shrimp  Lethality  Test )  dan  Antioksidan ( 1,1-diphenyl-2-pikrilhydrazyl ) dari Ekstrak  Daun  Saga  ( Abrus  precatorius L.). Makara Sains 2009; 13 (1) : 50-54.
5.  Ohba,  H,  S.  Moriwaki,  R.  Bakalova,  S. Yasuda,  N.  Yamasaki.  Plant-Derived Abrin-a  Induces  Apoptosis  in  Cultured Leukemic  Cell  Lines  by  Different Mechanisms.
Toxicology Appl Pharmacol 2004; 195 (2) : 182-193.
6.  Huang,  RS,  YX  Yu,  Y.  Hu,  XB  Sheng,
Zhongguo Zhong Yao Za Zhi.
Determination  of  total  flavonoids  in Abrus  cantoniensis and  its  dynamic changes. China  Journal  of  Chinese Materia  Medica 2006; 31 (17)  :  1428- 1431.
7.  Limmatvapirat, C, S. Sirisopanaporn, P.
Kittakoop. Antitubercular and
Antiplasmodial  Constituents  of Abrus precatorius . Planta Media 2004; 70 (3) : 276-278.
8.  Syamsuhidayat,  SS,  Hutapea,  JR. Inventaris  Tanaman  Obat  Indonesia  I . Depkes RI. Jakarta; 1991
9.  McLaughlin,  JL.  Crown  Gall  Tumours on  Potato  Disc  and  Brine  Shrimp Lethality:  Two  Simple  Bioassay  for
Higher Plant Screening and Fractination. Methods in Plants
Biochemistry 1991; 6 (1): 1-30.
10.  Mursyidi,  A. Statistik  Farmasi  Dan Biologi .  Ghalia  Indonesia,  Cetakan  I, Jakarta; 1984.
11.  Cannell,  RJP.  (Ed). How  to  approach the isolation of a natural product . In R.J.

## Juni 2018
P. Cannell (Ed.). Methods in Biotechnology . Vol. 4: Natural Products
Isolation,  Humana,  Totowa,  NJ,  pp.  1 – 51; 1998.
12.  McLaughlin, JL, LL Rogers, JE Anderson.  The  Use  of  Biological Assays  to  Evaluate  Botanicals. Drug Information Journal 1998; 32 : 513-524.
13.  Rakhmawati,  R,  E.  Anggarwulan,  E. Retnaningtyas. Potency of Lobak Leaves  ( Raphanus  sativus L.  var. hortensis  Back)  as  Anticancer  and
Antimicrobial  Candidates. Biodiversitas 2009; 10 (3) : 158-162.
14.  Carballo JL, Hernandez-Inda ZL, Perez P,  Garcia-Gravaloz  MD.  Comparison Between  Two  Brine  Shrimp  Assays  to Detect  In  Vitro  Cytotoxicity  in  Marine Natural  Products. BMC  Biotechnology 2002; 2 :1472-6570.
15.  De Padua LSN, Bunyapraphatsana RH,
Lemmens MJ. Medicinal and Poisinous Plant  Research  of  South-East  Asia . Pudoc Scientific Publisher. Wageningen, the Netherland; 1999