## A R T I K E L
Perbedaan Komposisi dan Oligomer FOS Inulin dari Umbi Dahlia Merah ( Dahlia sp. L) Menggunakan Enzim Inulinase dari Kapang S copulariopsis sp.- CBS 1 dan β-Amylase sebagai Anti Kolesterol Differences of Composition and Oligomer of FOS Inulin from Red Dahlia Tubers (Dahlia sp.L) Using Inulinase Enzymes of Scopulariopsis sp.- CBS 1 and β-Amylase as Anti-Cholesterol
Agustine Susilowati, Yeti MI, Puspa D Lotulung, dan Hakiki Melanie dan Aspiyanto Pusat Penelitian Kimia – Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Kawasan PUSPIPTEK, Serpong,
Tangerang Selatan-15314 E-mail: agustine_1408@yahoo.co.id Diterima : 17 Juni 2015 Revisi : 23 Juni 2014 Disetujui : 25 Juni 2015

## ABSTRAK
Isolasi mikroba pada kulit umbi dahlia merah ( Dahlia sp.L) lokal (Sukabumi) menghasilkan kapang dominan ( Scopulariopsis sp.-CBS 1 ) yang berpotensi sebagai sumber enzim inulinase. Aplikasinya dilakukan dalam hidrolisis inulin dari umbi yang sama dengan pembanding hidrolisis menggunakan enzim β -Amylase yang masing-masing menghasilkan hidrolisat inulin A dan hidrolisat inulin B sebagai fruktooligosakarida (FOS). Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui perbedaan karakteristik oligomer dan komposisi FOS sebagai anti kolesterol. Hasil penelitian menunjukkan bahwa enzim inulinase dari kapang Scopulariosis sp-CBS 1 menghasilkan hidrolisat inulin (A) dengan oligomer dominan pada T1,87, T2,63 dan T3,48 berturut-turut dengan berat molekul (BM) 185,99, 174,11 dan 174 Dalton (Da) dengan total oligomer 79, BM antara 75,71–924,94 Da. Pada hidrolisat dengan enzim β -Amylase (B) dihasilkan oligomer dominan pada T1,7, T2,0 dan T2,45 berturut-turut dengan BM 174,11, 173,31 dan 181 Da dengan total oligomer 67, BM antara 143 – 949 Da. Disimpulkan bahwa enzim inulinase Scopulariosis sp.-CBS 1 lebih berpotensi sebagai bahan anti kolesterol dibandingkan dengan enzim β -Amylase karena lebih mampu menghidrolisis polimer fruktosa inulin, sehingga lebih mudah difermentasi oleh bakteri-bakteri usus.
kata kunci: Scopulariopsis sp.-CBS 1 , β-Amylase, FOS, oligomer, serat inulin.

## ABSTRACT
Isolation of microbes in red dahlia (Dahlia sp. L) tuber skin from local (Sukabumi) produces dominant (Scopulariopsis sp.-CBS 1 ) fungi as source of inulinase enzyme. Its application as crude inulinase enzyme that is conducted in inulin hydrolysis from similar tuber with the comparison of hydrolysis using β-Amylase enzyme yields in hydrolysate A and hydrolysate B, respectively as fructooligosaccharides (FOS). The goal of this experiment is to find out characteristic difference of oligomeric and composition of FOS as anti- cholesterol. Result of experiment shows that inulinase enzyme of Scopulariopsis sp.-CBS 1 produces inulin hydrolysate (A) with dominant oligomer at T1.87, T2.63 and T3.48 of molecular weight (MW) of 185.99, 174.11 and 174 Dalton (Da.), at intensity of 100 percent with oligomeric total of 79 with MW range of 75.71– 924.94 Da. At hydrolysate using β-Amylase (B) enzyme, it produces dominant oligomer under  T1.7, T2.0 and T2.45 with MW of 174.11, 173.31 and 181 Da., and at intensity of 100 percent with oligomeric total of 67 with MW range of 143–949 Da. The conclusions indicate that inulinase enzyme of Scopulariopsis sp.-CBS 1 has more potential compared to that of β-Amylase enzyme as an anti-cholesterol agent, which can better hydrolyse inulin fructose polymer, so that the dietary fibers are  easier to be fermented by colon bacteria.
keywords: Scopulariopsis sp.-CBS 1 , β-Amylase, FOS, oligomeric, inulin fiber.

## I. PENDAHULUAN
F ruktooligosakarida (FOS) dapat dihasilkan melalui hidrolisis inulin dari umbi dahlia merah ( Dahlia sp. L) lokal (Sukabumi) dengan menggunakan enzim inulinase. Enzim ini dihasilkan oleh kapang Scopulariopsis sp.-CBS 1 yang diisolasi dari umbi yang sama (Susilowati, dkk., 2012). Proses hidrolisis enzimatik pada inulin memungkinkan untuk diperoleh oligoglukosa dan oligofruktosa sebagai serat larut air ( Soluble Dietary Fiber , SDF), sedangkan komponen yang tak terhidrolisis sebagai serat tak larut air ( Insoluble Dietary Fiber , IDF). Telah diketahui bahwa inulin merupakan polimer yang terdiri dari unit-unit monomer fruktosa yang dihubungkan satu dengan lain oleh ikatan β-(2- 1) glikosidik dengan satu unit terminal glukosa dan termasuk dalam polimer fruktan, seperti ditunjukkan pada Gambar 1.
FOS mengandung campuran oligomer dan polimer b-(2-1)-fruktosa yang terdiri dari 2- > 60 fruktosil. Struktur kimia FOS ditunjukkan dengan simbol GFn (G, unit glukosil, F, unit fruktosil, n = jumlah unit terikat oleh (2-1)-fruktosa (Gallagher, 2008;   Coussement & Franck, 2001; Vandamme & Derycke, 1983; Roberfroid, 2007). FOS dapat dimanfaatkan oleh ( Bifidobacterium sp dan Bacteroides sp) dalam usus besar dan memiliki kemampuan untuk membentuk piruvat, selanjutnya membentuk asam lemak rantai pendek ( Short Chain Fatty Acids, SCFAs) diantaranya asam asetat, asam propionat dan asam butirat  yang dapat menghambat sintesa kolesterol dan menurunkan sekresi triglycerol (Ooi & Liong, 2010). Dengan demikian, FOS merupakan bahan pangan supplemen yang dapat membantu mengatasi masalah kelebihan kolesterol dan berbagai penyakit jantung dan pembuluh darah.
Kapang Scopulariopsis sp secara bebas ditemukan di alam dan mampu memiliki aktifitas  galactosyltransferase  karena  dapat menghasilkan  enzim  β-galaktooksidase sehingga dapat menghasilkan galaktooligosa- karida (Pastore & Park, 1980). Isolat kapang Scopulariopsis sp-CBS 1 diketahui memiliki aktifitas  inulinase  sebesar  0,0872  U/mL,  yang mampu meningkatkan SDF dalam hidrolisat inulin 86,04 persen dari SDF inulin (1,84 persen berat kering) menjadi SDF pada hidrolisat inulin sebesar 13,182 pada pH 5, konsentrasi enzim inulinase 12 persen (v/b inulin) dan 30ºC selama 120 jam  (Susilowati & Lotulung, 2012). Gambar 2 memperlihatkan kapang Scopulariopsis sp- CBS 1 .
Hidrolisis enzimatik untuk memperoleh FOS dalam bentuk  SDF dan IDF dapat juga dilakukan dengan menggunakan enzim
pemotong polimer pati lainnya yaitu enzim β-Amylase  (α-l,4-glukanmaltohidrolase  E.C. 3.2.1.2.) yang akan memotong glukosa yang terdapat pada ujung rantai linier inulin dan merupakan enzim golongan hidrolase pada
Gambar 1 . (a) Struktur Kimia Inulin (Roberfroid, 2007) dan (b) fruktooligosakarida (Leenheer  and Hoebregs, 1994).
Gambar 2. Kapang Scopulariopsis sp-CBS 1 (Susilowati, 2013).
Perbedaan Komposisi Dan Oligomer FOS Inulin dari Umbi Dahlia Merah ( Dahlia sp. L) Menggunakan Enzim Inulinase dari Kapang Scopulariopsis Sp.- CBS1 dan β-Amylase sebagai Anti Kolesterol Agustine Susilowati, Yeti MI, Puspa D Lotulung, Hakiki Melanie dan Aspiyanto
proses  sakarifikasi  pati  yang  berperan  dalam permecahan  makromolekul karbohidrat untuk menghasilkan molekul karbohidrat rantai pendek (sederhana). Dalam proses hidrolisis enzimatik pada inulin dengan menggunakan jenis enzim berbeda, memungkinkan untuk diperoleh karakteristik oligomer inulin yang potensial sebagai anti kolesterol. Karakteristik FOS sebagai SDF dan IDF dari hidrolisat dipengaruhi oleh faktor kondisi proses hidrolisis diantaranya aktifitas inulinase, pH, konsentrasi enzim, suhu dan waktu hidrolisis. Dengan perbedaan kondisi proses dimungkinkan untuk diperoleh komposisi hidrolisat yang lebih optimal. Penggunaan Liquid Chromatography-Mass Spectrocopy (LC- MS) dalam idensifikasi ini dipilih karena LC-MS merupakan gabungan dari chromatography dan mass spectroscopy . Dengan chromatography akan terpisahkan campuran molukuler ber- dasarkan perbedaan kecepatan migrasi dan distribusi molekul dalam fasa diam (adsorben) dan fasa gerak (eluen), sedangkan mass spectroscopy akan mengionisasi analit ber- dasarkan prinsip electrospray ionisation (ESI)  menjadi  fase  gas  (fineaerosol  LC-MS akan memisahkan monomer hidrolisat dan mengidentifikasikan  berat  molekulnya  (Djulia Onggo, dkk., 1998). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan karakteristik oligomer fruktooligosakarida hasil hidrolisis enzim inulinase kasar dari Scopulariopsis sp–CBS 1 dan  enzim  β-Amylase  sebagai  SDF, melalui  idensifikasi  monomer  dengan  metoda analisis LC-MS, sehingga diketahui lebih dalam tentang sifat fungsionalnya sebagai anti kolesterol.

## II.  METODOLOGI

## 2.1. Bahan dan Peralatan
Bahan utama penelitian ini adalah umbi dahlia merah ( Dahlia sp. L) lokal (Sukabumi), enzim inulinase kasar dari Scopulariopsis sp– CBS 1 dari  P2K-LIPI,  enzim  β-Amylase  dari NOVO, bahan-bahan kimia untuk proses dan analisis. Peralatan proses yang digunakan adalah peralatan hidrolisis skala laboratorium yaitu water bath dilengkapi dengan shaker , sistem  mikrofiltrasi  sel  berpengaduk  (Amicon), membran  mikrofiltrasi  0,15  µm,  homogenizer dan instrument analisis utama adalah spektrofotometer dan pH-meter dan LC-MS dengan LC (Eichhorn & Knepper, 2001).

## 2.2. Rancangan Penelitian dan Analisis
Penelitian ini dilakukan menggunakan inulin umbi dahlia merah  ( Dahlia sp. L) lokal (Sukabumi) hasil ekstraksi, gelatinisasi dan pengendapan dengan etanol pada kondisi terbaik (pelumatan pada rasio 1 : 2, pH 10, etanol 50 persen)  (Susilowati, dkk., 2012). Inulin tersebut masing-masing dihidrolisis menggunakan enzim inulinase kasar Scopulariopsis sp–CBS 1 (konsentrasi  24  persen  v/b  inulin,  suhu  30ºC selama 120 jam, pH 5) dan enzim β-Amylase (konsentrasi 0,02 persen  (v/b inulin), suhu 60ºC selama 120 menit, pH 5). Analisis dilakukan terhadap SDF, IDF dan total padatan (metode Gravimetri), gula reduksi (metode Somogyi- Nelsen), total gula (Metode Fenol-Sulfat) (Anonymous, 1995), inulin (metode N. Nelson) (Chaplin & Kennedy, 1994) dan aktifitas spesifik enzim inulinase (metode DNS) (Niness, 1999). Identifikasi oligosakarida sebagai SDF dilakukan terhadap ekstrak atau permeat hasil pemurnian melalui LC-MS (Mariner Biospectrometry) dengan LC (Hitachi L 6200) (Eichhorn & Knepper, 2001). Proses dilakukan dengan 2 kali ulangan proses, pengolahan data dilakukan secara diskriptif berdasarkan hasil rata-rata analisis.

## 2.3. Tahapan Proses

## 2.3.1. Pembuatan dan Hidrolisis Inulin
Umbi dahlia dicuci bersih, dilumat dengan penambahan air (2 bagian) pada umbi (1 bagian), disaring  lolos 60 mesh, diatur pH 10, digelatinisasi pada 85 – 90°C selama 30 menit dan dihomogenisasi 4000 rpm selama 15 menit. Suspensi gel selanjutnya ditambahkan etanol  50  persen  (v/v),  didekantasi  pada  suhu 10ºC  selama  18  jam  dan  dilelehkan  (thawing) pada suhu ruang sehingga diperoleh suspensi inulin (Anonymous, 2002a). Pada suspensi ini selanjutnya dilakukan hidrolisis masing-masing menggunakan enzim inulinase Scopulariopsis sp–CBS 1 pada kondisi masing-masing konsentrasi  24  persen  (v/b  inulin),  suhu  30ºC selama 120 jam, pH 5 dalam shaker disertai agitasi sehingga diperoleh hidrolisat inulin (A), sedangkan hidrolisis menggunakan enzim β-Amylase  dilakukan  pada  konsentrasi  0,02 persen (v/b inulin), suhu 60ºC selama 120 menit, pH 5 sehingga diperoleh hidrolisat inulin (B).

## 2.3.2. Analisis dan Perolehan SDF dan IDF
Hidrolisat inulin diisikan dalam sistem sel MF dengan pengaduk berkapasitas 180 mL  dan  menggunakan  membran  mikrofiltrasi 0,15  µm.  Kemudian  suspensi  diaduk  dengan kecepatan putar pengaduk 400 rpm, tekanan 40 psia selama 30 menit dengan mengalirkan gas nitrogen dari tabung nitrogen. Permeat yang lolos ditampung sebagai SDF, sedangkan retentat/pekatan  sebagai  IDF  (Anonymous, 2002a). Pada akhir proses MF, membran dalam sel berpengaduk dibilas dengan aquadest. Percobaan yang sama dilakukan pada sampel lain sesuai rancangan penelitian dengan kondisi operasi (tekanan, kecepatan putar pengaduk) yang  sama.  Retentat/pekatan  dan  permeat/ ekstrak selanjutnya dipresipitasi menggunakan etanol masing sebagai IDF dan SDF dengan cara melarutkan dalam 4 volume etanol 95 persen, disaring, dicuci dengan etanol 70 persen 3 kali, etanol 95 persen 2 kali   dan aseton 2 kali (Porski, dkk., 1983). Komponen yang tercuci selanjutnya dikeringkan selama 2 - 3 jam pada suhu 105°C dan serbuk kering yang terbentuk dari pekatan/
retentat dan ekstrak/permeat hidrolisat masing- masing merupakan IDF dan SDF murni. Proses hidrolisis enzimatik untuk memperoleh serat inulin ditunjukkan pada Gambar 3.

## 2.3.3.   Idensifikasi Oligomer Hidrolisat Inulin Melalui LC-MS.
Permeat atau ekstrak hasil pemurnian hidrolisat inulin A dan hidrolisat inulin B digunakan sebagai contoh. Analisis oligomer dilakukan melalui LC-MS menggunakan Mariner Biospectrometry. Sistem LC diintergrasikan dengan Q-t of mass spectrometer melalui sistem ESI ( Electrospray Ionisation ) dimana scan mode dilakukan pada kisaran 100 – 1200 mz pada suhu 140°C, LC (Hitachi L 6200) menggunakan kolom C18 (RP 18) Supelco dengan panjang kolom 250 x 2 mm dengan ukuran partikel 5 μ . Jenis pelarut adalah air yang mengandung 0,3 persen asam asetat (A) dan methanol yang mengandung 0,3 persen asam asetat (B) pada rasio 90 bagian methanol dan 10 bagian air dengan laju alir 1 mL/menit dan volume injeksi 20 ul (Eichhorn & Knepper, 2001).
Keterangan:*variasi perlakuan penelitian.
Gambar 3. Skema Proses Perolehan Inulin, SDF dan IDF Melalui Hidrolisis Enzimatik Menggunakan Enzim Inulinase Scopulariopsis sp–CBS 1 dan Enzim β-Amylase

## III.  HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Karakteristik Inulin dan Enzim Inulinase
Scopulariopsis sp–CBS 1
Ekstraksi inulin dilakukan melalui pelumatan dari umbi dahlia merah 1 bagian dengan 2 bagian air pada pH 10, yang akan menghasilkan gel inulin sebagai suspensi keruh, kecoklatan. Penambahan etanol 50 persen menjadikan suspensi ini menjadi lebih kental serta berwarna putih susu sebagai inulin yang berpotensi sebagai sumber serat inulin. Komposisi inulin menunjukkan total padatan sebesar  4,24  persen.  Gula  reduksi  2  mg/mL, inulin 57,12 persen (berat kering), total gula 1 mg/mL,  SDF  1,84  persen  (berat  kering)  dan IDF 5,817 persen (berat kering). Dari komposisi ini memperlihatkan bahwa  IDF lebih dominan daripada SDF, sehingga inulin ini lebih berpotensi
sebagai pengikat lemak karena memiliki tingkat kemurnian < 92 persen (57,12 persen), total padatan < 95 persen (4,239 persen) dan derajat polimerisasi ± 50. Namun inulin ini masih dibawah standar inulin menurut standar ORAFTI (Belgia) oleh karena proses pembuatannya berdasarkan proses kimia (gelatinisasi, pengendapan dengan etanol) sedangkan inulin standar melalui hidrolisis enzimatik menggunakan enzim inulinase spesifik (Anne & Franck, 2000). Enzim
inulinase kasar Scopulariopsis sp–CBS 1 berupa suspensi encer dengan gradasi warna antara kuning kecoklatan sampai coklat tua menyerupai air teh. Enzim kasar ini dihasilkan dari hasil centrifuge (4000 rpm, 15 menit) suspensi Scopulariopsis sp–CBS 1 yang dihasilkan pada pertumbuhannya pada media selektif yang mengandung inulin 1 persen dan bahan-bahan pengkaya lainnya selama 5 hari pada suhu 45ºC dari  stock  kultur  dalam  media  PDA.  Aktifitas inulinase Scopulariopsis sp–CBS 1 adalah 0,012 U/mL (Susilowati dan Lotulung, 2012). Gambar 4a, 4b dan 4c berturut-turut menunjukkan isolat Scopulariopsis sp–CBS 1, suspensi inulin umbi dahlia merah lokal, enzim inulinase kasar dari Scopulariopsis sp–CBS 1 .

## 3.2. Pengaruh Proses Hidrolisis Terhadap Komposisi Hidrolisat Inulin
Hidrolisis inulin dari umbi dahlia merah lokal dengan menggunakan enzim inulinase kasar Scopulariopsis sp–CBS 1 dan enzim β -Amylase masing-masing pada kondisi optimal pH  5,  konsentrasi  24  (persen  v/b  inulin),  suhu 30ºC  selama  120  jam  dan    pH  5,  sedangkan konsentrasi  0,1  (persen  v/b  pati  inulin),  suhu 30ºC selama 120 menit masing-masing meng- hasilkan suspensi kental berwarna coklat sebagai hidrolisat inulin A dan hidrolisat inulin  B
Gambar 4 .   (a) Suspensi inulin umbi dahlia merah lokal . (b) Isolat Scopulariopsis sp–CBS 1 ,  (c) enzim inulinase kasar dari Scopulariopsis sp–CBS 1 .
Tabel 1. Komposisi Hidrolisat Inulin Hasil Hidrolisis Menggunakan Enzim Inulinase Kasar Scopulariopsis sp–CBS 1 dan enzim β -Amylase pada Kondisi Optimal
Keterangan:* inulin sebelum mengalami hidrolisis.
dengan perolehan komposisi berbeda, seperti ditunjukkan pada Tabel 1.
Perbedaan komposisi pada  kedua jenis hidrolisat diduga disebabkan terutama oleh jenis enzim dan kondisi optimal hidrolisisnya. Enzim β-Amylase (NOVO) memiliki tingkat kemurnian dan  aktifitas  tinggi  dengan  kondisi  hidrolisis telah teruji dan stabil sehingga dihasilkan hidrolisat dengan komposisi lebih baik. Meskipun demikian, hal ini juga dipengaruhi oleh faktor-faktor lainnya, seperti jenis substrat. Inulin merupakan polimer fruktosa yang memiliki gugus glukosa pada ujung terminal rangkaian fruktosa, sehingga diduga hanya gugus tersebut
yang dapat dipotong oleh enzim β-Amylase. Hal ini menyebabkan perolehan SDF lebih rendah (1,73 persen berat kering) daripada hidrolisat A (6,28 persen berat kering). Komposisi komponen lain cenderung tidak memperlihatkan perbedaan nyata terkecuali terhadap gula reduksi dan inulin. Hal ini berkaitan dengan aktifitas enzim dalam menghidrolisis inulin, dimana enzim inulinase Scopulariopsis sp–CBS 1 akan lebih mampu memotong polimer fruktosa apabila dibandingkan dengan enzim β -Amylase. Enzim β -Amylase bekerja  dengan  menginversi  konfigurasi  posisi atom C(l) atau C nomor 1 molekul glukosa dari α menjadi β dan memutus ikatan amilosa maupun amilopektin dari luar molekul dan menghasilkan unit-unit maltosa dari ujung non pereduksi pada rantai polisakarida. Bila tiba pada ikatan alfa-1,6 glikosida aktivitas enzim ini akan berhenti (Anonymous, 2002 b). Diketahui Scopulariopsis brevicaulis juga berkemampuan untuk menghasilkan enzim fruktosyltransferase
dan enzim galactooligosaccharida yang mampu menghasilkan FOS (Akhmad, 2010 ; Santos, dkk., 2009) sehingga akan berkontribusi terhadap perolehan SDF. Pada keadaan ini, hidrolisat B menunjukkan kadar inulin  lebih tinggi (87,56 persen berat kering) daripada hidrolisat inulin A (32,97 persen berat kering) karena tidak seluruh inulin dapat diihidrolisis oleh enzim β -Amylase. Secara keseluruhan hidrolisis inulin menggunakan enzim inulinase Scopulariopsis sp–CBS 1 dan β -Amylase pada masing-masing kondisi hidrolisis mampu meningkatkan SDF dan IDF masing-masing 70,71 persen dan 1,71 persen, sedangkan hidrolisis inulin menggunakan enzim β -Amylase menurunkan SDF sebesar 6,7 persen namun meningkatkan IDF sebesar 8,67 persen apabila dibandingkan dengan inulin sebelum mengalami hidrolisis dengan kata lain komposisi hidrolisat inulin menggunakan enzim inulinase Scopulariopsis sp–CBS 1 lebih baik daripada hidrolisat inulin menggunakan enzim β -Amylase.

## 3.3. Identifikasi  SDF  Sebagai  Oligomer Fruktooligosakarida (FOS)
Identifikasi  FOS  memperlihatkan  bahwa terdapat perbedaan karakteristik oligomer yang ditunjukkan dalam kromatogram pada kedua jenis hidrolisat  tersebut. Hidrolisat inulin A dengan waktu retensi antara 0 – 10 menit diperoleh 3 puncak ( peak ) dominan sebagai T1,9, T2,1 dan T3,1 dengan intensitas berturut- turut 50, 40 dan 100 persen, seperti ditunjukkan Gambar 5.
Gambar 6 memperlihatkan  kromatogram T1,87  (≈  1,9).  Dengan  mass  spektra  antara 99  –  1000  m/z  memperlihatkan  25  oligomer dengan BM berkisar 75,71 – 921,6 Da. Oligomer
0 2.8 5.6 8.4 11.2 14.0 Retention Time (Min) 0 435.7 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % In te n si ty BPI =>NF0.7 T3.1 T2.7 T1.9
Gambar 5. Kromatogram oligomer FOS sebagai SDF antara 0 – 14 menit dari hidrolisat inulin A menggunakan enzim inulinas kasar Scopulariopsis sp–CBS 1 . 39.0 231.2 423.4 615.6 807.8 1000.0 Mass (m/z) 0 160.9 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n te n s it y Mariner Spec /50:51 (T /1.87:1.91) -41:44 (T -1.87:1.91)  ASC=>NR(2.00)[BP = 187.0, 161] 186.9922 268.9325 309.1241 164.9336 246.8604 328.8271 432.7897 514.7422 187.9810 310.1108 596.6682 433.7891 738.1700 674.8412 922.5943
76.7145
Gambar 6. Mass spectra dari T 1,87 antara 99 -1000 m/z dari kromatogram inulin A.
didominasi BM masing-masing 185,99 dan 267,93 Da., yang ditunjukkan dengan intensitas masing-masing 100 dan 58 persen, sedangkan oligomer lainnya menunjukkan intensitas lebih rendah, bervariasi antara 0 – 15 persen.
Kromatogram T2,63 (≈ 2,68) dengan mass spektra antara 99 – 1000 m/z memperlihatkan 22 oligomer dengan BM berkisar 48,67 – 924,94 Da. Oligomer didominasi BM masing-masing 174,11 dan 202,03 Da., yang ditunjukkan dengan intensitas masing-masing 100 dan 43 persen, sedangkan oligomer lainnya menunjukkan intensitas lebih rendah, bervariasi antara 0 – 22 persen, seperti ditunjukkan pada Gambar 7 dan Kromatogram T3,48 (≈ 3,05) diperlihatkan pada Gambar 8.
Dengan mass spektra antara 99 – 1000 m/z  memperlihatkan  32  oligomer  dengan  BM berkisar 53,17 – 848,48 Da. Oligomer didominasi
BM berturut-turut 174,11 dan 132 Da., yang ditunjukkan dengan intensitas masing-masing 100 dan 58 persen, sedangkan oligomer lainnya menunjukkan intensitas lebih rendah, bervariasi antara 0 - 46 persen.
Pada hidrolisat dari hidrolisis menggunakan enzim β -Amylase, dihasilkan 3 puncak ( peak ) dominan sebagai T1,7, T2,0 dan T2,5 dengan waktu retensi antara 0 - 10 menit, masing-masing dengan intensitas 50, 43 dan 100 persen seperti ditunjukkan pada Gambar 9.
Mass spektra T1,7 yang ditunjukkan pada Gambar 10. Dihasilkan 26 oligomer yang didominasi oleh oligomer dengan  berat molekul 174,23, 206,21, 234,15, 234,16, 218,13 dan
39.0 231.2 423.4 615.6 807.8 1000.0 Mass (m/z) 0 390.9 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n te n s it y Mariner Spec /70:71 (T /2.63:2.67) -56:57 (T -2.63:2.67)  ASC=>NR(2.00)[BP = 175.1, 391] 175.1105 203.0385 219.0024 155.0552 138.0817 231.0448 364.9661 526.8643 147.0917 229.0959 382.9512 160.0464 527.8252 235.0001 688.7804 381.9199 308.8906 763.4669 846.8531 925.9427 590.7756 49.6706
Gambar 7. Mass spectra dari T 2,63 antara 99
-1000 m/z dari Kromatogram inulin A 39.0 231.2 423.4 615.6 807.8 1000.0 Mass (m/z) 0 78.6 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n te n s it y Mariner Spec /92:93 (T /3.48:3.52) -74:76 (T -3.48:3.52)  ASC=>NR(2.00)[BP = 175.1, 79] 175.1141 133.0863 156.0879 191.0071 207.0050 182.0273 250.9787 147.0465 247.0782 183.1067 324.9343 260.9676 526.1151 418.0045 693.6133 849.4864 627.4385 119.4545 54.1721
Gambar 8. Mass spectra dari T 3,48 antara 99 -1000 m/z dari kromatogram inulin A.
0 2 4 6 8 10 Retention Time (Min) 0 634.8 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n t en si t y BPI=>NR(2.00) T2.5 T1.7 T2.0
Gambar 9. Kromatogram oligomer FOS sebagai SDF antara 0 – 10 menit dari hidrolisat inulin B menggunakan enzim β -Amylase.
99.0 279.2 459.4 639.6 819.8 1000.0 Mass (m/z) 0 318.2 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n te n s it y Mariner Spec /35:37 (T /1.65:1.75) -28:32 (T -1.65:1.75)  ASC=>NR(2.00)[BP = 175.2, 318] 175.2307 207.2080 235.1590 219.1357 203.1814 191.1828 208.2113 279.0531 217.1747 147.2673 204.1783 263.0984 189.2054 252.0982 317.9982
Gambar 10. Mass spectra dari T 1,7  antara 99 -1000 m/z dari kromatogram inulin B.
202,18 dengan intensitas berturut-turut 100, 70, 65, 45 dan 33 persen sedangkan oligomer lainnya pada berat molekul antara 143 – 949 Da., dengan intensitas antara 9 – 20 persen.
Pada mass spektra T2,0 (≈ 2) menunjukkan dominasi hanya pada oligomer dengan berat molekul 174,31 Da., pada intensitas 100 persen. Oligomer lainnya memiliki intensitas rendah (< 5 persen) sejumlah 22 dengan berat molekul antara 146 – 910 Da. seperti ditunjukkan pada Gambar 11.
Pada  mass  spektra  T2,45  (≈  2,499) menunjukkan dominasi pada oligomer dengan berat molekul 132,29, 181,25, dan 146,29  Da., pada intensitas berturut-turut 79, 100 dan 34 persen. Oligomer lainnya (19 oligomer) memiliki intensitas lebih rendah antara 0 – 25 persen dengan berat molekul antara 113 - 846,33 Da., seperti ditunjukkan pada Gambar 12.
Dari  identifikasi  karakteristik  oligomer yang dihasilkan oleh kedua jenis hidrolisat, tampak bahwa hidrolisat dari Scopulariopsis sp–CBS 1 secara keseluruhan menghasilkan oligomer dominan pada T1,87, T2,63 dan T3,48 berturut-turut dengan berat molekul 185,99, 174,11 dan 174 Da., masing-masing pada intensitas 100 persen dengan total oligomer 79 dengan berat molekul antara 75,71 - 924,94 Da. Pada hidrolisat dari enzim β -Amylase secara keseluruhan menghasilkan oligomer dominan pada T1,7, T2,0 dan T2,45 berturut- turut dengan berat molekul 174,11, 173,31 dan 181 Da., masing-masing pada intensitas
100 persen dengan total oligomer 67 dengan berat molekul antara 143 – 949 Da. Keragaman berat molekul oligomer dengan kisaran berat molekul lebih rendah (75,71 - 924,94  Da. < 143 - 949 Da.) menjelaskan bahwa enzim inulinase lebih mampu menghidrolisis inulin karena seluruh polimer fruktosa dimungkinkan dapat lebih terpotong apabila dibandingkan dengan penggunaan enzim β -Amylase.

## IV. KESIMPULAN
Dari proses hidrolisis inulin menggunakan enzim inulinase kasar dari Scopulariopsis sp–CBS 1 dan  enzim  β-Amylase  dihasilkan komposisi hidrolisat dan karakteristik oligomer fruktooligosakarida yang berbeda. Komposisi hidrolisat inulin dengan menggunakan Scopulariopsis sp–CBS 1 lebih baik daripada hidrolisat inulin dengan menggunakan enzim β-Amylase.  Pada  hidrolisat  inulin  dengan menggunakan Scopulariopsis sp–CBS 1 terjadi peningkatan SDF dan IDF masing- masing sebesar 70,71 persen dan 1,71 persen, sedangkan hidrolisis inulin dengan menggunakan  enzim  β-Amylase  diperoleh penurunan SDF sebesar 6,7 persen namun terjadi peningkatan IDF sebesar 8,67 persen apabila dibandingkan dengan inulin sebelum hidrolisis.  Identifikasi  oligomer  sebagai  FOS menunjukkan bahwa proses hidrolisis dengan menggunakan Scopulariopsis sp–CBS 1 meng- hasilkan oligomer lebih banyak (79) dan dengan BM lebih rendah (75,71 - 924,94 Da.) apabila dibandingkan tanpa hidrolisis (67) dengan kisaran berat molekul lebih tinggi (143 - 949 Da.) Atau dengan kata lain hidrolisat inulin
99.0 279.2 459.4 639.6 819.8 1000.0 Mass (m/z) 0 20.9 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n te n s it y Mariner Spec /42:43 (T /2.00:2.05) -40:41 (T -2.00:2.05)  ASC=>NR(4.00)[BP = 175.3, 21] 175.3195 831.0582 219.2737 911.9404 669.1639 750.2065 278.8381 840.9960 212.1594 588.2923 511.6202 147.0654 431.6413 360.7785
Gambar 11. Mass spectra dari T 2,0  antara 99
-1000 m/z dari kromatogram inulin B.
99.0 279.2 459.4 639.6 819.8 1000.0 Mass (m/z) 0 20.9 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % I n te n s it y Mariner Spec /42:43 (T /2.00:2.05) -40:41 (T -2.00:2.05)  ASC=>NR(4.00)[BP = 175.3, 21] 175.3195 831.0582 219.2737 911.9404 669.1639 750.2065 278.8381 840.9960 212.1594 588.2923 511.6202 147.0654 431.6413
360.7785
Gambar 12. Mass spectra dari T 2,0  antara 99 -1000 m/z dari kromatogram inulin B.

## dengan menggunakan
Scopulariopsis sp– CBS 1 dimungkinkan sebagai bahan untuk anti kolesterol lebih baik apabila dibandingkan hidrolisat inulin dengan menggunakan enzim β-Amylase.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonymous. 1995. Official  Methods  of  Analysis  of the Association  of Analytical  Chemistry . AOAC Inc., Washington D.C.
Anonymous. 2002 a. Katalog  dan  Manual  Stirred Ultrafiltration Cells , Amicon. Anne M.E. & Franck. 2000. Inulin and Oligofruktose , ORAFTI Active Food Ingredients, Research and Development, Belgium, dalam LFRA INGREDIENTS HANDBOOK, Prebiotics and Probiotics, Glen Gibson & Fiona Angus, LFRA Limited Randalls Roads, Leatheerhead, Surrey KT22 7RY.
Anonymous. 2002 b. Amylase , Wikipedia. Available at “ http://en.wikipedia.org/ wiki/Amylases.
Chaplin, M. F. & J. F. Kennedy. 1994. Carbohydrate Analysis  :  A  Practical  Approach . 2 nd . Edition. Oxford University Press. Oxford.
Coussement P. & Franck A. 2001. Inulin and Oligofructose. 2001. Dalam : Cho S. S., Dreher M. L., editor. Handbook  of  Dietary  Fiber . New York : Marcel Dekker. Hal. 721 – 32.
Djulia Onggo, et al ,. 1998. General Principles in Electrospray Mass Spectrometry: A New Technique in Mass Spectral Analysis, Journal JMS Vol. 3 No. 2, hal. 115 – 131, Wikipedia. Available from 3 Februari 2013.
Eichhorn, P. & Knepper, T. P. 2001. Electrospray Ionization Mass Spectrometric Studies on the Amphoteric Surfactant Cocamidopropylbetaine, Journal  of  Masspectrometry : 36 : 677 – 684, ESWE Institute for water Research and water Technology, Soecheinstr, 158, D-65201Wiesbaden, Germany.
Gallagher M. L. 2008. The Nutrients and Their Metabolism. Dalam : Mahan L. K., Stump S. E., editor. Krause’s Food and Nutrition Therapy.
Edisi ke-12. Missouri : Saunders Elsevier. 2008. Hal. 47 – 8.
Leenheer, D & L., Hoebregs, H. 1994. Progress in evolucidation of composition of chicory inulin, Starch; 1994; 46(5); 193 – 6 dalam Anne M. E. Frank. 2000. Inulin  and  Oligofructose, ORAFTI  Active  Food  Ingredients , Research and Development, Belgium, LFRA Ingredients Handbook, Prebiotics and Probiotics, Glen Gibson & Fiona Angus, LFRA Limited Randalls
Roads, Leatheerhead, Surrey KT22 7RY.
Niness, K. R. 1999. Inulin and Oligofructose : What Are They ? Journal  of  Nutrition . Suppl. 129, 1402S - 14604S.
Ooi, L. G. & Liong, M.T. 2010. Cholesterol-Lowering Effects of Probiotics and Prebiotics: A Review of in Vivo and in Vitro Findings, Int. J. Mol. Sci. , Vol. 11, pp. 2499-2522.
Pastore,G.M. & Park, Y.K. 1980. Production  of Galactooligosaccharide by Scopulariopis sp. Ciênc. Tecnol. Aliment [online]. 2009, Vol. 29 , n.3, pp. 682-689. ISSN 1678-457X. Available from http://dx.doi.org/10.1590/S0101-20612009000 300035, Wikipedia Diunduh 14 November 2012.
Porsky, L., N. G. Johansson, C. G., Halima. H. and Siljestron, M. 1983. Rapid Enzymatic Assay of Insoluble and Soluble Dietary Fiber. J.  Agric Food Chem ., Vol. 31. pp. 476-482 Roberfroid. 2007. Inulin-type Fructans : Functional Food Ingredients. J.  Nutr 2007;137: 2493- 502S. Available from: http://jn.nutrition.org/cgi/ reprint/249302502 . Diunduh 14 November 2012. Santos, Rosângela dos, Simiqueli, Ana Paula Resende & Pastore, Gláucia Maria. 2009. Production  of  Galactooligosaccharide  by Scopulariopis sp.. Ciênc. Tecnol. Aliment . [online]. Vol. 29, n.3, pp. 682-689. ISSN 1678- 457X..  Available at http://dx.doi.org/10.1590/ S0101-20612009000300035, Av. Brasil, 2880 Caixa Postal 27113001-970 Campinas SP- Brasil.  Diunduh dari revista@sbcta.org.br, 30 Januari 2013.
Susilowati, A & Lotulung, P. D. 2012. Alternatif Enzim  Inulinase  dari  Aspergillus  sp-CBS 3 dan Scopulariopsis sp–CBS 1 dalam Perolehan Serat Inulin  dari  Umbi  Dahlia  Merah  (Dahlia  spp.  L) Local  untuk Anti  Kolesterol. Prosiding  Seminar Nasional  XXI  Jaringan  kerjasama  Kimia Indonesia (JASAKIAI) , Yogyakarta, 6 Desember. ISSN : 0854-4778.
Susilowati, A. 2013. Alternatif Enzim Inulinase Dari Kapang  Endofit  Hasil  Isolasi  Kulit  Umbi  Dahlia Merah  (Dahlia spp) Lokal dan Aplikasinya Sebagai Sumber Enzim Inulinase untuk Perolehan Serat Inulin. Prosiding Seminar Nasional Sains dan Teknologi 4 . Fakultas Teknik Universitas Wahid Hasyim, Semarang 19 Juni. ISBN 978-602-99334-2-0.
Susilowati, A., Melanie, H., Maryati, Y., Aspiyanto. 2012. Pengembangan  Pangan  Fungsional Berbasis Inulin dari Umbi Dahlia (Dahlia sp. L ) Sebagai Serat Pangan Larut Air (SDF) untuk Anti Kolesterol . Laporan Hasil Penelitian, Program Tematik, Kedeputian IPT, Tahun Anggaran
2012, Pusat Penelitian Kimia - LIPI, Kawasan PUSPIPTEK, Serpong, Tangerang.
Vandamme & Derycke. 1983. Microbial Inulinases Process, Properties and Applications. Adv. App1. Microb. 29 : 139 – 176.
BIODATA :
Agustine Susilowati lahir di Brebes, 14 Agustus 1958. Menyelesaikan S1 di Jurusan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Industri Universitas Pasundan Bandung tahun 1991 dan S2 Pascasarjana Magister Management, Institut Pengembangan Wiraswata Indonesia (IPWI), Jakarta, tahun 1998.
Jeti Mulyati Iskandar lahir di Rangkasbitung, 27 November 1951. Menyelesaikan S1 di Jurusan Biologi Fakultas MIPA, ITB Bandung, lulus tahun 1976 dan S2 Pascasarjana Jurusan Kimia Fakultas MIPA, ITB, Bandung  tahun 1989.
Aspiyanto lahir di Curup (Curup (Bengkulu), 20 Oktober 1957. Menyelesaikan S1 di Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknologi Industri, Institut Teknologi Sepuluh November  (ITS), Surabaya, lulus tahun 1983.
Puspa Dewi Narrij Lotulung lahir di Bandung 1 Oktober 1958. Menyelesaikan S1 di Jurusan Kimia Fakultas MIPA UNPAD, Bandung, lulus tahun 1984 dan S2 Pascasarjana, Kimia, Science and Engeneering, Waseda University, Tokyo, Jepang lulus tahun 1991.
Hakiki Melanie lahir di Padang 01 Juni 1980. Menyelesaikan S1 di Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Andalas, Padang tahun 2002 dan S2 Pascasarjana Food Science, University of Queensland, Brisbane, Australia,  lulus 2009.