## ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

## Artikel Penelitian
SEDIAAN GEL DARI KOMBINASI EKSTRAK BUAH GANDARIA ( Bouea macrophylla Griff.) DAN EKSTRAK BELIMBING WULUH
( Averrhoa bilimbi L . ) DAN BIOAKTIVITASNYA
Dhyneu D Jayantie 1* , Arini Khaerunnisa 1 , Renaldy 1 , Nani Suryani 2 , Tarso Rudiana 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar Banten, Pandeglang, Indonesia, 42273
2 Program Studi Kimia, Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar Banten, Pandeglang, Indonesia, 42273

## IINFO ARTIKEL ABSTRAK
Riwayat Artikel Diterima 04 September 2023 Direvisi 24 Desember 2023 Tersedia online 27 Maret 2024 Email korespodensi: dhyneudj@gmail.com DOI: 10.18860/al.v12i1.23451 Melanin  is  the  main  pigment  functions  to  protect  the  skin  from  exposure  to ultraviolet light, excessive melanin synthesis can cause skin hyperpigmentation. A. bilimbi and B. macrophylla fruits have bioactive compounds such as phenolics, flavonoids that function as antioxidants and tyrosinase inhibitors. This study aims to formulate a gel preparation of a combination of fruit extracts of A. bilimbi and B. macrophylla , test antioxidant activity using the DPPH method, and test tyrosinase inhibition  enzymes.  Three  formulas  were  made,  namely  F0  (Basis),  FI  (50x extract),  and  FII  (100x  extract).  Physical  evaluation  includes  organoleptic, homogeneity, pH, adhesion, spreadability, viscosity, viscosity and irritation. Test of  antioxidant  activity  and  tyrosinase  enzyme  inhibition.  Then  the  data  were analyzed  descriptively  and  statistically.  The  results  of  the  evaluation  of homogeneous  preparations,  dispersion,  pH,  viscosity,  mandatory,  meet  the standards. Adhesion below standard, irritation test (mild irritation). The results of IC50 antioxidants were F0 (2,352 ppm), FI (1,448 ppm), FII (419,74 ppm) and gel brand x (77,429 ppm). The results of the tyrosinase inhibition test were the highest concentration  of  10%  F0  (7.828%),  a  concentration  of  10%  FI  (18.245%),  a concentration of 10% FII (25.814) kojic acid gel (brand x) as a comparison with a concentration of 10% (51.211%). The higher the concentration used, the greater the inhibition of the tyrosinase enzyme produced.
Keywords: Averrhoa  bilimbi L., Bouea  macrophylla Griff,  gel,  tyrosinase hyperpigmentation.
Melanin  merupakan  pigmen  utama  yang  berfungsi  melindungi  kulit  akibat kerusakan  paparan  sinar  ultraviolet,  sintesis  melanin  berlebihan  dapat meyebabkan terjadinya hiperpigmentasi kulit. Buah A. bilimbi dan B. macrophylla memiliki  senyawa  bioaktif  seperti  fenolik,  flavonoid  yang  berfungsi  sebagai antioksidan dan inhibitor tirosinase. Penelitian ini bertujuan untuk memformulasi sediaan gel kombinasi ekstrak buah A. bilimbi dan B. macrophylla, uji aktivitas antioksidan dengan metode DPPH, serta uji inhibibisi enzim tirosinase. Formulasi dibuat  tiga  formula  yaitu  F0  (Basis),  FI  (ekstrak  50x),  dan  FII  (ekstrak  100x). Evaluasi  fisik  meliputi  organoleptis,  homogenitas,  pH,  daya  lekat,  daya  sebar, viskositas,  stabilitass  dan  iritasi.  Uji  aktivitas  antioksidan  dan  inhibisi  enzim tirosinase. Kemudian data dianalisis secara deskriptif dan statistik. Hasil evaluasi sediaan homogen, daya sebar, daya lekat, pH, viskositas, stabilitas, memenuhi standar. Uji iritasi (iritasi ringan).  Hasil IC50 antioksidan F0 (2.352 ppm), FI (1.448 ppm),  FII  (419,74  ppm)  dan  gel  merk  x  (77,429  ppm).  Hasil  uji  inhibisi  enzim tirosinase konsentrasi tertinggi 10% F0 (7,828%), konsentrasi 10% FI (18,245%), konsentrasi 10% FII (25,814) gel asam kojat (merk x) sebagai pembanding dengan

## 1. Pendahuluan
Kulit merupakan organ reseptor yang selalu berhubungan dengan eksternal lingkungan hidup. Seiring bertambahnya usia serta pengaruh lingkungan, kulit akan berubah mengalami penuaan, penurunan dalam hal fungsional dan estetika. Kulit yang sehat, putih serta cerah meupakan impian dan keinginan bagi setiap Wanita [1]. Warna kulit manusia berasal dari lapisan epidermis tempat melanosit sel penghasil pigmen terlokalisasi untuk menghasilkan melanin [2].
Melanin merupakan pigmen utama yang memiliki fungsi melindungi kulit dari kerusakan akibat dari paparan sinar ultraviolet (UV) [3]. Enzim tirosinase berperan penting dalam proses produksi melanin [4]. Namun, Produksi melanin yang berlebihan menyebabkan kelainan seperti hiperpigmentasi [5]. Hiperpigmentasi adalah kelainan yang dapat menyebabkan pigmentasi kulit berubah warna, bercak, atau lebih gelap dari kulit normal [4].
Enzim tirosinase berfungsi sebagai katalisis antara dua reaksi yang berbeda yaitu hidroksilasi senyawa monofenol menjadi  O-difenol  dan  oksidasi  O-difenol  menjadi  O-kuinon.  Enzim  tersebut  mengubah  L-tirosin  menjadi  L-3,4- dihidroksifenilalanin  (L-DOPA)  (aktivitas  monofenolase)  dan  mengoksidasi  L-DOPA  menjadi  dopaquinone  (aktivitas difenolase)  yang  berperan  penting  dalam  biosintesis  melanin  [6].  Salah  satu  cara  untuk  mencegah  produksi  melanin berlebih adalah dengan menghambat aktivitas tirosinase [7]. Oleh karena itu, inhibitor tirosinase penting ditambahkan pada kosmetik atau skin whitening [8].
Produk kosmetik whitening yang memiliki efek penghambatan enzim tirosinase biasanya mengandung asam kojat, arbutin, nikotinamida, asam hialuronat, hidrokuinon dan merkuri. Senyawa ini memiliki daya whitening sangat besar, namun merkuri dan hidrokuinon bersifat karsinogenik [2];[7]. Efek samping pada senyawa tersebut sangat berbahaya sehingga perlu adanya bahan alami sebagai penghambat tirosinase.
Menurut [9] Bahan kimia alam seperti polifenol dan flavonoid lebih efektif dibandingkan bahan kimia sintetis karena efek jangka panjangnya terutama melawan kerusakan kulit yang ditimbulkan radikal bebas dengan pemblokiran sinar UV. Tanaman belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi) dan gandaria (Bouea macrophylla) merupakan bahan alami yang sangat potensial kandungannya sebagai bahan produk whitening [10]. Berdasarkan hasil penelitian [10] Ekstrak etanol 96% buah A. bilimbi memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 2331,69 mg/mL serta memiliki aktivitas penghambat tirosinase dengan nilai IC50 sebesar 186,85 mg/mL. Jus buah B. macrophylla memiliki aktivitas antioksidan yang sangat baik dengan nilai IC50 sebesar 36,3 mg/Ml [11].
Buah A. bilimbi dan B. macrophylla diduga mengandung vitamin C dan flavonoid, sehingga memiliki aktivitas inhibitor tirosinase.  Dengan  menghambat  pembentukan  dopakrom  dan  melanin,  vitamin  C  menghambat  pembentukan  DOPA menjadi O-dopaquinon. Flavonoid, atau komponen fenol, dapat mencegah pembentukan dopakrom karena memiliki afinitas yang kuat dengan enzim [12]. Hasil ini menunjukan bahwa A. bilimbi dan B. macrophylla merupakan bahan alami yang berpotensi sebagai bahan dalam produk skin whitening.
Demi  kemudahan  dalam  memanfaatkan  kedua  tanaman  sebagai  inhibitor  tirosinase,  maka  dibuat  dalam  bentuk formula gel. Gel merupakan sediaan semi padat berwarna bening dan tembus pandang, mempunyai kandungan zat aktif [13].  Gel  dapat  digunakan  sebagai  obat  topikal  lebih  baik  daripada  salep.  Keunggulan  gel  adalah  tidak  lengket,  tidak membutuhkan banyak bahan kimia untuk diformulasikan, stabil, dan mempunyai tampilan yang bagus [14]. Dari penjelasan di atas, maka penelitian akan dilakukan tentang “Formulasi Gel Kombinasi Ekstrak Etanol Buah Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L.) dan Buah Gandaria ( Bouea macrophylla Griff), sebagai Inhibitor Enzim Tirosinase”.

## 2. Bahan dan Metode
2.1 Bahan
Dalam  penelitian  ini,  bahan – bahan  yang  akan  digunakan  yaitu  ekstrak  buah  A.  bilimbi,  dan  ekstrak  buah  B. macrophylla,  substrat  L-DOPA,  TEA,  dimetil  sulfoksida  (DMSO),  1,1 – diphenyl-2-picrylhydrazyl  (DPPH),  buffer  fosfat, akuades, etanol 70%, propil glikol, gliserin, karbopol 940, Na EDTA (merck), metil paraben, propil paraben, gel (merk x) mengandung kojic acid dan gel (merk x) mengandung vitamin C.
konsentrasi  10%  (51,211  %).  Semakin  tinggi  konsentrasi  yang  digunakan, semakin besar inhibisi enzim tirosinase yang dihasilkan.
Kata  Kunci: Averrhoa  bilimbi L., Bouea  macrophylla Griff,  gel,  hiperpigmentasi tirosinase.

## 2.2 Metode

## 2.2.1 Determinasi
Tanaman  A.  bilimbi  dan  B.  macrophylla  yang  akan  digunakan  sebagai  bahan  utama  penelitian,  terlebih  dahulu dideterminasi  di  Herbarium  Bogoriense,  pusat  penelitian  LIPI  Bogor,  Jawa  Barat,  untuk  memastikan  bahwa  tanaman tersebut benar dan untuk mencegah kesalahan dalam pemilihan tanaman.

## 2.2.2 Preparasi dan Ekstraki
Preparasi sampel dan ekstraksi berdasarkan hasil penelitian dari [15] . Berat sampel basah B. macrophylla sebanyak 10 kg dan A. bilimbi sebanyak 15 kg, dan didapatkan sejumlah 1 kg serbuk simplisia buah B. macrophylla dan A. bilimbi. Maserasi dengan pelarut etanol 70% adalah metode ekstraksi yang digunakan, kemudian hasil ekstrak di rotary evavorator dengan suhu 50 0 C untuk mendapatkan ekstrak kental. Hasil ekstrak kental buah B. macrophylla didapatkan sebanyak 467,7 g dan memiliki persen rendemen 46,77% sedangkan ekstrak kental A.bilimbi didapatkan 431,5 g dan memiliki persen rendemen 43,15%.

## 2.2.3 Formulasi Sediaan Gel
Sediaan gel yang dibuat berdasarkan formula dasar [16]. Sedangkan standar konsentrasi menurut [17] ditampilakn pada Tabel 1.
Tabel 1. Formulasi Sediaan Gel Bahan F0 FI FII Fungsi Standar konsentrasi Ekstrak A. bilimbi - 0,981 g (0,981%) 1,962 g (1,962%) Zat aktif Ekstrak B. macrophylla - 0,470 g (0,470%) 0,940 g (0,940%) Zat aktif Karbopol 940 1,6 g 1,6 g 1,6 g Gelling agent 0,5-2,0 % TEA 0,8 mL 2 mL 3 mL Alkalizing agent 2 - 4 % Na EDTA 0,1 g 0,1 g 0,1 g Chelating agent 0,1 % Propilglikol 15 mL 15 mL 15 mL Humektan 15 % Gliserin 15 mL 15 mL 15 mL Humektan < 30 % Propil paraben 0,02 g 0,02 g 0,02 g Pengawet 0,01-0,6 % Metilparaben 0,18 g 0,18 g 0,18 g Pengawet 0,02-0,3 % Akuades Ad 100 mL Ad 100 mL Ad 100 mL Pelarut Ad 100 mL Keterangan : F0 : Basis gel
FI : Gel kombinasi ekstrak 50x (IC 50 195,967 dan 47,064 ppm) FII : Gel kombinasi ekstrak 100x (IC 50 195,967 dan 47,064 ppm)

## 2.2.4 Pembuatan Sediaan Gel [16]
Konsentrasi yang digunakan dalam formulasi berdasarkan pada nilai IC 50 antioksidan pada ekstrak buah A. bilimbi dan buah B. macrophylla . Basis gel dibuat dengan menimbang 1,6 g karbopol 940, kemudian dikembangkan terlebih dahulu dalam 50 g akuades sambil diaduk konstan (menggunakan stirrer ). Metilparaben dan propilparaben dilarutkan dalam 5 mL propilen glikol. Selanjutnya Na EDTA dilarutkan dalam 5 mL akuades.
Larutan karbomer kemudian ditambahkan Na EDTA dan larutan propilglikol secara perlahan sambil terus diaduk. Selanjutnya ditambahkan gliserin sambil tetap diaduk konstan. Tambahkan TEA (Trietanolamine) sedikit demi sedikit untuk mengatur pH (4,5-6,5) tambahkan ekstrak buah A. bilimbi dan buah B. macrophylla lalu tambahkan sisa akuades hingga menjadi 100 mL.

## 2.2.5 Evaluasi Sediaan
2.2.5.1. Uji Organoleptis
Pengamatan secara langsung untuk melihat bentuk sediaan gel secara fisik dengan melihat warna, bau, dan tekstur sediaan yang telah dibuat. [16].

## 2.2.5.2. Uji Homogenitas
Sampel  gel  dioleskan  Pada  kaca  preparat  (transparan),  ada  tiga  bagian:  atas,  tengah,  dan  bawah.  Sediaan menunjukkan tidak adanya partikel atau zat yang belum tercampur secara merata [17]. Sediaan yang baik sediaan gel yang tidak mengandung gumpalan atau butiran kasar [18].

## a. Uji pH
Untuk  memastikan  bahwa  sediaan  gel  tidak  menyebabkan  iritasi  pada  kulit,  uji  pH  dilakukan  untuk  mengetahui seberapa asam sediaan gel. pH standar SNI No. 06-2588 adalah 4,5 – 6,5 [19].

## b. Uji Daya Lekat
Setelah diukur luasnya, 0,25 g sediaan gel ditempatkan pada kaca objek kaca dan ditutup dengan kaca objek yang lain. Setelah kedua kaca objek saling melekat dipasang pada alat uji dengan beban 80 g, waktu dicatat hingga kedua kaca terlepas [16]. Daya lekat yang baik dalam waktu lebih dari satu detik [20].

## c. Uji Daya Sebar
Uji daya sebar dilakukan untuk memastikan bahwa gel merata dengan benar di kulit. Gel ditimbang menjadi 0,5 gram dan ditempatkan di tengah kaca. Setelah itu, kaca lain diletakkan di atas gel, ditambahkan 100 gram beban tambahan, dan didiamkan selama satu menit. Setelah itu, dicatat diameternya. Daya sebar gel yang baik adalah antara 3 hingga 5 cm [20].
d. Uji Viskositas
Cara yang dilakukan untuk pengukuran viskositas yaitu menempelkan sampel gel yang akan di uji dalam viskometer sampai spidel terendam. Kecepatan spindel diatur 50 rpm [21]. Berdasarkan SNI 16-4399-1996 viskositas sediaan gel mempunyai standar yaitu 6000-50000 Mpa.S [20].

## e. Uji Stabilitas
Cycling test merupakan metode yang digunakan untuk uji stabilitas sediaan gel.  Gel disimpan pada suhu 40 ⁰ , 25 0 C dan 4 0 C selama 3 bulan. Diamati perubahan fisik gel yang meliputi organoleptis, viskositas dan pengukuran pH.

## f. Uji Iritasi
Uji iritasi dilakukan menggunakan hewan coba berupa kelinci jantan (kelinci albino) dengan berat antara 1,5-2 kg. mengacu pada uji iritasi akut dermal [22]. Kelinci tiga ekor yang semuanya sehat digunakan dalam penelitian ini. Dengan menggunakan spidol, empat pola dibuat pada bagian punggung kelinci: dua bagian sebelah kanan dan dua bagian sebelah kiri. Pola-pola ini berbentuk persegi panjang dengan jarak antar bagian 2 cm dan ukuran 3 x 2 cm. Pola-pola ini kemudian dibersihkan dan diolesi etanol 95%. Setelah itu, diberikan perlakuan gel yang terdiri dari basis formula gel sebagai kontrol negatif dan gel kombinasi dari formula I dan II. Gel sebanyak 0,5 g atau 0,5 mL ditimbang dan diterapkan pada punggung kelinci, kemudian ditutup dengan kasa steril. Penelitian dilakukan pada tanggal 24, 48, dan 72 jam setelah tempelan dibuka. setiap keadaan kulit diberi nilai yang ditampilkan pada Tabel 2: Nilai dari setiap kelinci percobaan setelah 24, 48 dan 72 jam  pemberian  sampel  iritan  dijumlahkan  dan  kemudian  dibagi  4  untuk  menghasilkan  indeks  iritasi.  Penilaian  iritasi ditampilkan pada Tabel 3.
Tabel 2. Skor Derajat Eritema Reaksi kulit Skor Tidak ada eritema 0 Eritema sangat ringan (hampir tidak dapat dibedakan) 1 Eritema terlihat sangat jelas 2 Eritema sedang 3 Eritema parah 4 Tabel 3. Respon Iritasi Pada Kelinci Kategori respon Nilai Rata-rata Sangat ringan ( negligible ) 0,0 – 0,4 Iritasi ringan ( slight ) 0,5 – 1,9 Iritasi sedang ( moderate ) 2,0 – 4,9 Iritasi kuat ( severe ) 5,0 – 8,0

## 2.2.6 Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH 2.2.6.1. Pembuatan Larutan DPPH 0,5 mM
Serbuk DPPH (BM : 349,32) 0,009858 g dilarutkan dengan metanol, kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL, dan ditambahkan metanol hingga ada tanda batas.

## 2.2.6.2. Pembuatan Blanko
Pipet 0,6 mL dari larutan DPPH 0,5 mM dimasukkan ke dalam tabung dan ditambahkan 2,4 mL metanol. Setelah 30 menit, diinkubasi dan diukur serapannya pada panjang gelombang 515 nm.

## 2.2.6.3. Uji Aktivitas Antioksidan Gel Ekstrak F0, FI, FII, dan gel x (kontrol positif)
a. Pembuatan larutan induk sampel konsentrasi 1000 ppm
Timbang 50 mg sampel, campurkan dengan metanol, masukkan ke labu ukur 50 mL, dan tambahkan metanol sampai tanda batas.
b. Pembuatan larutan deret standar 0,3125 ; 0,625 ; 1,25 ; 1,25 ; 2,5 ; 5 dan 10 %.
Larutan induk sampel dipipet 0,03125; 0,0625; 0,125; 0,25; 0,5 dan 1 mL, dimasukan ke dalam labu ukur 10 mL dan ditambahkan metanol sampai tanda batas.

## c. Pengukuran serapan dengan menggunakan spektrofotometer
Pipet 2,4 mL dari larutan uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 0,6 mL DPPH 0,5 mM ke dalamnya. Selama 30 menit, diinkubasi pada suhu ruang, dan serapan diukur pada panjang gelombang 515 nm [23].

## 2.2.6.4. Uji Inhibisi Tirosinase Gel kombinasi Ekstrak A. bilimbi dan B. macrophylla
Sebanyak 1 g gel kombinasi dan gel merk x yang mengandung asam kojat dilarutkan dalam 100 mL. larutan stok gel 10.000 ppm ini setelah itu diencerkan dalam 50 mM buffer fosfat (pH 6,5), larutan gel disentrifugasi untuk memisahkan supernatan dengan basis gel. Larutan gel diuji pada tingkat konsentrasi antara 0,3125 sampai 10%. Uji dalam plat 96 sumuran. 70 µg dari setiap pengenceran larutan gel dikombinasikan dengan 30 µL enzim tirosinase Sigma 333 unit/ mL -1 dalam buffer fosfat, inkubasi selama 5 menit pada suhu ruang. Setelah inkubasi ditambahkan 110 µL substrat (L-DOPA) pada masing-masing plat. Inkubasi kembali pada suhu ruang selama 30 menit. Densitas optikal lubang 96-well micro plate diukur pada panjang gelombang 510 nm dengan menggunakan multi-well plate reader (ELISA) untuk menentukan persen inhibisi [24].

## 2.2.7 Analisis Data
Data hasil penelitian meliputi evaluasi sediaan gel, uji stabilitas dan uji iritasi dianalisis secara deskriptif dalam bentuk tabel serta melakukan analisis perbandingan dengan literatur. Sedangkan data aktivitas antioksidan dan data inhibisi enzim tirosinase dianalisis secara statistik.
Aktivitas  antioksidan  ditentukan  dengan  nilai  IC 50 menggunakan  rumus  persamaan  regresi  linier.  Aktivitas penghambatan dapat ditentukan dari % inhibisi dan IC 50 dihitung dengan rumus :
% inhibisi = Absorbansi (sampel − kontrol) Absorbansi kontrol × 100% (1)
Aktivitas penghambatan enzim tirosinase diukur dengan menggunakan alat micoplate reader (ELISA) dengan panjang gelombang optimum untuk mendapatkan nilai absorbansi. Dari absorbansi tersebut dihitung presentase inhibisi tirosinase dengan rumus sebagai berikut :
% inhibisi = (𝐵 1 − 𝐵 0 ) − (𝑆 1 − 𝑆 0 ) (𝐵 1 − 𝐵 0 ) × 100% (2)
Keterangan: B 1 = Absorbansi blanko B 0 = Absorbansi kontrol blanko S 1 = Absorbansi larutan uji S 0 = Absorbansi kontrol larutan uji

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Preparasi dan Ekstraksi
Ekstraksi  buah B.  macrophylla dan A.  bilimbi menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  70%.  Hasil ekstraksi  dapat  dilihat  pada  Tabel  4.  Kemudian  ekstrak  yang  diperoleh  di  rotary  evavorator  dengan  suhu  50 0 C  untuk mendapatkan ekstrak kental [25]. Hasil ekstrak kental buah B. macrophylla didapatkan sebanyak 467,7 g dan memiliki persen rendemen 46,77% sedangkan ekstrak kental A.bilimbi didapatkan 431,5 g dan memiliki persen rendemen 43,15%.
Tabel 4. Hasil Preparasi Sampel
Sampel Berat Simplisia (g)  Berat Ekstrak (g)  %Rendemen Buah B. macrophylla 1.000 467,7 46,77 Buah A. bilimbi 1.000 431,5 43,15

## 3.2. Evaluasi Sediaan Gel
Uji organoleptis dilakukan untuk mendeskripsikan sediaan gel secara kasat mata meliputi warna, tekstur, dan aroma [26]. Hasil pengamatan secara organoleptis yang meliputi warna, tekstur dan aroma masing-masing formula sediaan dapat dilihat  pada  Tabel  5  dan  Gambar  1.  Hasil  pengamatan  yang  dilakukan  pada  ketiga  formulasi  sediaan  gel  diperoleh perbedaan warna, tekstur dan aroma, untuk F0 didapatkan warna tidak berwarna, tekstur lembut tidak lengket, sangat kental, aromanya wangi, pada FI hasil organoleptis diperoleh warna coklat muda, tekstur lembut tidak lengket, kental, memiliki aroma khas ekstrak. Sedangkan FII diperoleh warna coklat tua, tekstur lebut tidak lengket, sedikit kental, dan memiliki aroma khas ekstrak.
Tabel 5. Hasil Evaluasi Sediaan Gel Pemeriksaan Sediaan Gel F0 (Basis) FI (Gel Kombinasi Ekstrak ) FII (Gel Kombinasi Ekstrak) Organoleptis Tidak berwarna, Harum, Lembut, tidak terasa lengket Coklat Muda, Bau Ekstrak, Lembut, tidak terasa lengket Coklat Tua, Bau Ekstrak, Lembut, tidak terasa lengket Homogenitas Homogen Homogen Homogen pH 5,63 4,53 4,26 Daya Lekat (80g) 3,35 2,65 2,38 Daya Sebar (100g) 4,0 4,2 4,5 Viskositas  (Mpa,S) 14.000 11.000 9.000
(a) (b) (c)
Gambar 1. Hasil Uji Organoleptis (a) F0, (b) FI, dan (c) FII
(a) (b) (c)
Gambar 2. Hasil Homogenitas (a) F0, (b) FI, dan (c) FII
Salah satu metode untuk mengukur stabilitas secara visual adalah uji homogenitas. Ada atau tidaknya gumpalan atau endapan yang terbentuk adalah subjek dari pengamatan yang dilakukan. dalam sediaan secara untuk mengetahui kualitas sediaan yang dibuat dan disimpan [27].
Pengujian homogenitas sediaan gel kombinasi ekstrak etanol buah A. bilimbi dan B. macrophylla bertujuan untuk mengetahui sediaan telah tercampur merata sehingga memberikan kualitas yang maksimal ketika digunakan. Pemeriksaan homogenitas pada seluruh formula gel dapat dilihat pada Gambar 2 dengan menunjukan hasil yang homogen ditandai dengan tidak adanya partikel dan penggumpalan dalam pengamatan dikaca objek sediaan gel akan terdispersi secara merata pada saat penggunaan gel pada kulit [26].
Salah satu parameter yang digunakan untuk memastikan keamanan sediaan gel adalah pH. pH sediaan harus antara 4,5 sanpai 6,5, karena pH yang terlalu asam dapat menyebabkan iritasi kulit dan pH yang terlalu basa dapat menyebabkan kulit kering. pH yang baik untuk gel adalah pH yang hampir sama dengan pH kulit [26].
Hasil pengujian pH dapat dilihat pada Tabel 5, pH gel kombinasi ekstrak etanol buah A. bilimbi dan B. macrophylla basis gel didapatkan pH 5,63 sedangkan formula I didapatkan pH 4,53 dan pada formula II didapatkan pH 4,26. Hal ini menunjukan  bahwa  pengujian  ini  sudah  memenuhi  standar  pH  kulit  yang  telah  ditentukan.  Perbedaan  nilai  pH  yang diperoleh disebabkan oleh adanya penambahan ekstrak  A. bilimbi dan B. macrophylla sebagai zat aktif dimana pH A. bilimbi  adalah  1,5  dan  pH  B.  macrophylla  1  sehingga  pH  sediaan  yang  dihasilkan  menjadi  asam.  pH  FII  lebih  asam dikarenakan  konsentrasi  ekstrak  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  FI.  Tingkat  keasaman  ekstrak  bisa  disebabkan kandungan beberapa senyawa metabolit sekunder pada ekstrak buah yang bersifat asam seperti asam salisilat, asam asetat, trimetiasetat anhidrat, asam kaprilat, asam oktanoat, asam galat, asam oleat, yang dapat mempengaruhi keasaman ekstrak. Pengujian daya lekat merupakan parameter pengujian yang dilakukan untuk melihat kemampuan gel melekat pada kulit [26]. Sediaan gel umumnya tetap melekat pada permukaan kulit dalam waktu yang cukup lama sebelum dicuci atau dibersihkan. Gel lebih baik jika lebih lama melekat pada kulit karena zat aktif lebih banyak dapat berdifusi pada kulit. Ini dapat memberikan hasil yang optimal [26].
Hasil pengujian daya lekat gel dapat dilihat pada Tabel 5, yang menunjukan sediaan gel F0 yaitu 3,35 detik, FI yaitu 2,65  detik  dan  FII  yaitu  2,38  detik  yang  memenuhi  syarat  uji  daya  lekat.  Semakin  banyak  konsentrasi  ekstrak  yang ditambahkan. Karena sifat gellingnya yang semakin berkurang, karbopol akan mengubah konsistensi sediaan gel menjadi lebih cair. Akibatnya, daya lekatnya akan berkurang. Hal ini memenuhi persyaratan daya untuk melekat pada sediaan semi padat lebih dari satu detik [20].
Parameter  yang  digunakan  dalam  pembuatan  sediaan  topikal  adalah  pengujian  daya  sebar.  Ini  dilakukan  untuk memastikan bahwa sediaan menyebar dengan baik di kulit dan tetap nyaman bagi pengguna. Kemampuan zat aktif untuk bersentuhan dan menyebar pada kulit ditentukan oleh daya sebar sediaan gel. Kriteria daya sebar menunjukkan bahwa masuk dalam jangkauan 3 hingga 5 cm [20]. Untuk uji daya sebar, beban 150 g ditambahkan. [16].
Pengukuran daya sebar dapat dilihat pada Tabel 5 yang menunjukan hasil F0 (4.0 cm), FI (4,2 cm), sedangkan FII (4,5 cm). Apabila viskositas meningkat maka daya sebar sediaan semakin menurun. F0 menunjukan hasil yang paling rendah dikarenakan nilai viskositasnya tinggi. Hasil pengukuran daya sebar pada gel kombinasi ekstrak etanol buah A. bilimbi dan buah B. macrophylla adalah 4-4,5 cm yang menunjukan bahwa sediaan sediaan yang diperoleh menunjukan daya sebar yang baik dan sesuai dengan kriteria yang telah ditentukan.
Uji daya sebar menunjukkan kemampuan sediaan untuk menyebar pada permukaan kulit, sehingga aplikasinya lebih mudah. Daya sebar berkorelasi negatif dengan viskositas: lebih tinggi viskositas, lebih sedikit daya sebar. Sebaliknya, daya sebar yang dihasilkan akan lebih besar jika viskositasnya lebih rendah [28].
Uji viskositas dilakukan untuk mengetahui seberapa kental sediaan gel yang mempengaruhi kekentalan dan daya sebar. Nilai viskositas yang semakin besar maka akan menghasilkan tingkat kekentalan yang semakin besar pula, karena semakin besar nilai viskositas maka daya sebar akan semakin kecil [29].
Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan alat Viscometer Brookfield dan menghasilkan nilai yang temasuk dalam standar.  Menurut  SNI  16-4399-1996  viskositas  sediaan  gel  mempunyai  standar  yaitu  6000-50000  Mpa.S.  Hasil  uji viskositas dapat dilihat pada Tabel 5, yang menunjukkan bahwa viskositas F0 yaitu 14.000 Mpa.s, FI yaitu 11000 Mpa.s dan FII yaitu 9000 Mpa.s, hal ini menunjukan bahwa semua formulasi gel yang diuji sesusai dengan yang diperyaratkan. Semakin tinggi nilai konsentrasi ekstrak dalam sediaan maka nilai viskositas yang didapatkan akan semakin rendah.

## 3.3. Stabilitas
Tabel 6. Hasil Uji Stabilitas Sampel Suhu ( ° C) Pengamatan (Bulan) Evaluasi Organoleptis pH Viskositas (Mps.S) Warna Aroma Tekstur F0 25 Ke-1 Tak berwarna Harum  Lebut, tidak lengket, kental 5,62 14000 Ke-2 Tak berwarna Harum  Lebut, tidak lengket, kental 5,62 14000 Ke-3 Tak berwarna Harum  Lebut, tidak lengket, kental 5,62 14000 FI 4 Ke-1 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,53 11000 Ke-2 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,44 10000 Ke-3 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,43 10000 25 Ke-1 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,53 11000 Ke-2 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,39 10000 Ke-3 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,44 9000 40 Ke-1 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,53 11000 Ke-2 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,69 9000 Ke-3 Coklat muda Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,76 8000 FII 4 Ke-1 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,28 9000 Ke-2 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,25 8400 Ke-3 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,21 8000 25 Ke-1 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,28 9000 Ke-2 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,32 8000 Ke-3 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,26 7400 40 Ke-1 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,28 9000 Ke-2 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,38 7400 Ke-3 Coklat tua Harum  Lebut, tidak lengket, kental 4,87 6400
Uji stabilitas yang dilakukan pada penelitian ini adalah uji stabilitas pada suhu 40 0
C, 25 0 C, dan suhu 4 0 C selama 3 bulan. Hasil pengamatan stabilitas terhadap uji organoleptis pada masing-masing suhu tidak memiliki perubahan selama penyimpanan. Nilai pH pada ketiga formula pada masing-masing suhu penyimpanan secara umum berubah-ubah, terjadi penurunan dan kenaikan nilai pH yang bervariasi, tetapi perubahan tersebut masih masuk dalam range pH kulit (4,5-6,5). Perbedaan nilai pH yang diperoleh disebabkan oleh adanya penambahan ekstrak A. bilimbi dan B. macrophylla sebagai zat aktif dimana pH A. bilimbi adalah 1,5 dan pH B. macrophylla 1 sehingga pH sediaan yang dihasilkan menjadi asam akan tetapi pada FII memiliki nilai pH dibawah range pH kulit dikarenakan penambahan konsentrasi ekstrak lebih tinggi dibandingkan  dengan  FI  dan  juga  disebabkan  oleh  gelling  agent  sediaan,  yang  merupakan  karbopol  asam  dari  basis karbopol selama penyimpanan. Penurunan pH sediaan masih berada di bawah ambang pH kulit, jadi masih dapat diterima.
Hasil  pengamatan stabilitas  terhadap pengukuran viskositas  sediaan  gel  dapat  dilihat pada  Tabel  6  untuk  ketiga formula pada masing-masing pada suhu penyimpanan, terjadi penurunan setiap bulannya tetapi perubahan tersebut masih temasuk dalam standar. Faktor yang dapat menurunankan atau meningkatkan nilai viskositas adalah pengaruh suhu yang menyebabkan polimer basis menjadi lebih rapat atau lebih renggang [30]. Menurut SNI 16-4399-1996 viskositas sediaan gel mempunyai standar yaitu 6000-50000 Mpa.S.

## 3.4. Iritasi
Tabel 7. Hasil Uji Iritasi No.  Efek Iritasi Kelompok Uji Waktu 24 Jam Waktu 48 Jam Waktu 72 Jam F0 FI FII F0 FI FII F0 FI FII 1. Eritema 0 0 1 0 0 1 0 0 0 2. Eritema 0 0 1 0 0 0 0 0 0 3. Eritema 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Total 0 0 2 0 0 1 0 0 0 Indeks Iritasi - - 0,67 - - 0,33 - - - Kesimpulan F0 Tidak mengiritasi  FI tidak mengiritasi FII Iritasi ringan Blanko F0 Blanko F0 Blanko F0 FI FII FI FII FI FII (a) (b) (c)
Gambar 3. Hasil Uji Iritasi gel Kombinasi ekstrak A. bilimbi dan B. macrophylla selama (a) 24, (b) 48, dan (c)72 jam Pengujian iritasi gel kombinasi ekstrak A. bilimbi dan B. macrophylla dilakukan pada punggung kelinci albino New Zeeland dengan No. Sertifikat 470/40/1/2019. Uji iritasi dengan menggunakan hewan uji berupa kelinci albino. Pengujian dilakukan  dengan  pengamatan  secara  kualitatif  dan  kuantitatif.  Parameter  penilaian  untuk  uji  iritasi  terbagi  kedalam beberapa kategori sangat ringan (0,0-0,4); iritasi ringan (0,5-1,9); iritasi sedang (2,0-4,9); iritasi kuat (5,0-8,0) (PerKaBPOM Nomor 7 2014) (Tabel 2).
Pengujian  iritasi  pada  sediaan  gel  dilakukan  untuk  mengetahui  seberapa  aman  sediaan  gel  untuk  kulit  setelah diterapkan. Tujuan dari pengujian ini adalah untuk menghindari efek samping pada kulit. Pengujian dilakukan selama 24, 48, dan 72 jam untuk mengidentifikasi potensi iritasi kulit.
Hasil pengamatan dan nilai parameter yang dilakukan secara kualitatif diduga menunjukan adanya iritasi ringan yang terjadi  sedangkan  untuk  F0  dan  FI  tidak  terjadi  iritasi.  Bahan-bahan  yang  digunakan  pada  formula  diduga  dapat menyebabkan iritasi kulit. Berdasarkan material safety data sheet (MSDS) ada kemungkinan trietanolamine menyebabkan iritasi kulit. Jika dibandingkan dengan propilparaben, metil paraben dapat menyebabkan iritasi kulit. Sedangkan pengujian secara kuantitatif eritema muncul iritasi ringan pada FII dengan nilai 0,67.

## 3.5. Uji Aktivitas Antioksidan Gel
Pengujian ini dilakukan pada gel kombinasi ekstrak etanol buah A. bilimbi dan B. macrophylla yang digunakan dalam penelitian ini. Aktivitas antioksidan diuji menggunakan metode DPPH karena metode ini paling efektif dan efisien diantara metode FIC ( Ferrous Ion Chelating ) dan FRAF ( Feric Reducing Antioxidant Power ) [31]. Data hasil pengukuran antioksidan ditampilakan pada Tabel 8.
Tabel 8. Nilai IC 50 Krim Sampel IC 50 ( μg/mL ) Aktivitas Antioksidan Basis Gel 2.352 Tidak Memiliki FI (50x) 1.448 Tidak Memiliki FII (100x) 419,74 Sangat Lemah Kontrol Positif 77,429 Kuat
Menurut [32], Jika IC 50 senyawa kurang dari 50 μg/mL, senyawa tersebut dianggap sangat kuat, kuat 50- 100 μg/mL, sedang  100- 150  μg/mL,  lemah  150 - 200  μg/mL,  dan  sangat  lemah  dalam  hal  aktivitas  antioksidan. Berdasarkan  hasil pengujian aktivitas antioksidan, sediaan gel kombinasi ekstrak etanol buah A. bilimbi dan B. macrophylla pada FI tidak memiliki aktivitas antioksidan, FII memiliki aktivitas antioksidan sangat lemah karena IC 50 >200, sedangkan F0 tidak memiliki aktivitas antioksidan karena tidak ada penambahan ekstrak. Kontrol positif yaitu gel vitamin C (merk x) memiliki aktivitas antioksidan  kuat  dibandingkan  kombinasi  ekstrak  etanol  buah A.  bilimbi dan B.  macrophylla pada  FI  dan  FII  memiliki aktivitas  antioksidan  jauh  lebih  rendah.  Hal  ini  dikarenakan  vitamin  C  merupakan  senyawa  murni,  sedangkan  ekstrak memiliki banyak kandungan senyawa [33].

## 3.6. Uji Aktivitas Inhibisi Enzim Tirosinase
Pengujian aktivitas inhibisi enzim tirosinase dilakukan untuk mengetahui kemampuan senyawa bioaktif pada sediaan gel yang terdiri dari kombinasi ekstrak etanol dari buah B. macrophylla dan A. bilimbi untuk menghambat aktivitas enzim tirosinase. Sebagai hasil dari oksidasi L-DOPA oleh enzim tirosinase, aktivitas inhibitor tirosinase diukur secara in vitro. Setelah terbentuk, dopakrom akan berwarna oranye tua hingga merah. Absorbansi dapat diukur dengan menggunakan mikroplate reader (ELISA) dengan panjang gelombang maksimal 510 nm jika aktivitas enzim tirosinase terhambat.
Tabel 9. Hasil Uji Aktivitas Inhibisi Enzim Tirosinase Sampel Konsentrasi (10) % Rata-rata % Inhibisi L-DOPA KB/KS + e Absorbansi rata-rata Gel Kontrol Positif 0,073 0,142 51,211 F0 (Basis Gel) 0,056 0,663 7,828 FI (Gel Kombinasi ) 0,055 0,599 18,245 FII (Gel Kombinasi ) 0,070 0,594 25,814
Hasil uji aktivitas enzim tirosinase sediaan gel kombinasi ekstrak etanol buah B. macrophylla dan A. bilimbi pada FI konsetrasi  10%  merupakan  konsentrasi  tertinggi  yang  mempunyai  penghambatan  terhadap  persen  inhibisi  L-DOPA 18,245%  dengan  standar  deviasi  ±0,2.  Sedangkan  FII  pada  konsentrasi  10%  merupakan  konsentrasi  tertinggi  yang mempunyai penghambatan terhadap persen inhibisi L-DOPA 25,814%. F0 sebagai basis pada konsetrasi 10% merupakan konsentrasi tertinggi yang mempunyai penghambatan terhadap persen inhibisi L-DOPA 7,828% dengan standar deviasi ±0,05.  Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  jelas  bahwa  FII  mampu  menghentikan  aktivitas  enzim  tirosinase  lebih  baik daripada  FI.  Ini  disebabkan  oleh  fakta  bahwa  konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan  dalam  sediaan  gel  FII  lebih  tinggi daripada FI. Ini menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak yang digunakan sebanding dengan persen inhibisinya [34]. Hasil uji aktivitas penghambatan enzim tirosinase menunjukkan bahwa gel kontrol positif (merk x) pada konsentrasi 10% memiliki tingkat  penghambatan  tertinggi  terhadap  persen  inhibisi  L-DOPA,  dengan  standar  deviasi  ±0,02.  Jadi,  lebih  banyak konsentrasi yang digunakan berarti lebih banyak inhibisi. Penurunan pembentukan dopakrom dan penurunan intensitas warna yang terbentuk adalah tanda kemampuan inhibisi yang tinggi [34].
Hasil dihitung dalam bentuk persentase, yang dimaksudkan untuk mengetahui tingkat perbandingan aktivitas inhibisi enzim pada konsentasi sampel yang berbeda [35]. Pada sediaan gel yang menggabungkan ekstrak etanol dari buah B. macrophylla dan A. bilimbi , persentase penghambatan enzim tirosinase adalah sedikit lebih rendah daripada asam kojat, yang berfungsi sebagai kontrol positif untuk aktivitas tirosinase.
Flavonoid dan senyawa fenolik lainnya memiliki fungsi untuk menghentikan produksi melanin yang berlebihan. Mereka juga dapat berfungsi sebagai substrat alternatif untuk enzim tirosinase. Sebagai hasil dari afinitasnya yang kuat dengan enzim,  flavonoid  dapat  membantu  mencegah  pembentukan  dopakrom.  Semakin  banyak  dopakrom  yang  diproduksi, semakin  sedikit  penghambatan  terhadap  enzim  tirosinase;  sebaliknya,  apabila  tidak  ada  dopakrom  yang  diproduksi, penghambatan terhadap enzim tirosinase maksimal [36].

## Moluceular docking
Gambar 4. Dugaan Reaksi Inhibisi Enzim Tirosinase Dengan Asam Kojat Secara In silico [37].
Reaksi penghambatan enzim tirosinase dengan asam kojat ditunjukkan pada bagian hidroksimetil pada posisi ke-6 cincin  piranon  yang  merupakan  tempat  untuk  mengikat  salah  satu  ion  tembaga  dari  sisi  aktif  enzim  tirosinase  yang membentuk kompleks dengan logam [37].

## 4. Kesimpulan
Ekstrak etanol buah A. bilimbi dan Buah B. macrophylla dapat dikombinasikan serta diformulasikan menjadi sediaan gel. Aktivitas antioksidan gel kombinasi ekstrak etanol buah A. bilimbi dan B. macrophylla pada F1 tidak memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 (1.448 ppm), F2 memiliki aktivitas antioksidan sangat lemah dengan nilai IC 50 (419,74 ppm), sedangkan  kontrol  positif  gel  vitamin  C  (merk  x)  memiliki  aktivitas  antioksidan  kuat  yaitu  (77,429  ppm).  Aktivitas penghambatan enzim tirosinase menunjukan inhibisi tertinggi pada F1 (18,245 %), F2 (25,814 %), dan kontrol positif gel asam kojat (merk x) (51,211 %). Semakin tinggi konsentrasi yang digunakan maka semakin besar persen nhibisi yang dihasilkan. Diperoleh F1 (kombinasi ekstrak A. bilimbi dan B. macrophylla dengan 50x IC 50 hasil uji antioksidan) merupakan formula dengan stabilitas terbaik yaitu viskositas (11.000 mPa.s), pH (4,53), daya sebar (4,2 cm), homogen, memiliki aroma khas, tidak berwarna, lembut tidak lengket dan tidak mengiritasi kulit.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kepada  Kementerian  Pendidikan,  Kebudayaan,  Riset  dan  Teknologi  untuk  dana  Penelitian Dosen Pemula sehingga penelitian ini bisa berjalan dengan lancar.

## Daftar Pustaka
[1] R. Mustarichie and D. Gozali, “Formulation and evaluation of alpha arbutin skin lightening cream using polyacrylate base by cold process,” Int. J. Appl. Pharm. , vol. 11, no. 1, pp. 100 – 105, 2019.
[2] J. M. Gillbro and M. J. Olsson, “The melanogenesis and mechanisms of skin -lightening agents - Existing and new approaches,” Int. J. Cosmet. Sci. , vol. 33, no. 3, pp. 210 – 221, 2011.
[3] H. Hasim, Y. Y. Arifin, D. Andrianto, and D. N. Faridah, “Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi) sebagai Antioksidan dan Antiinflamasi,” J. Apl. Teknol. Pangan , vol. 8, no. 3, p. 86, 2019.
[4] M. Miyazawa and N. Tamura, “Inhibitory compound of tyrosinase activity from the sprout of Polygonum hydropiper L. (Benitade),” Biol. Pharm. Bull. , vol. 30, no. 3, pp. 595 – 597, 2007, doi: 10.1248/bpb.30.595.
[5]  M. C. Kang et al. , “Up256 inhibits hyperpigmentation by tyrosinase expression/dendrite formation via rho -dependent signaling and by primary cilium formation in melanocytes,” Int. J. Mol. Sci. , vol. 21, no. 15, pp. 1 – 12, 2020.
[6] L. L. Lima, R. M. Lima, A. F. Da Silva, A. M. R. Do Carmo, A. D. Da Silva, and N. R. B. Raposo, “Azastilbene analogs as tyrosinase inhibitors: New molecules with depigmenting potential,” Sci. World J. , vol. 2013, pp. 12 – 14, 2013.
[7] S. U. Noor, Faridah, and P. Magdalena, “Uji Aktivitas Inhibisi Enzim Tirosinase In -Vitro Krim Ekstrak Akar Manis (Glycyrrhiza glabra L.),” J. Ilmu Kefarmasian Indones. , vol. 16, no. 2, pp. 150 – 158, 2018.
[8]  D. S. Solanki, S. D. Prof. Sagrule, Q. B. Unhale, Shrikrushna Subhash Ansar, M. G. Prof.Chitte, and K. R. Prof. Dr. Biyani, “Formulation , Development And Evaluation Of Instant Whitening World Journal of Pharmaceutical Research,” Anuradha Coll. Pharmacy, Chikhli, Dist. Buldana India 443201. , vol. 9, no. 5, pp. 2541 – 2557, 2020.
[9] R. Suharsanti, N. Sugihartini, E. Lukitaningsih, and M. R. R. Rahardhian, “Effect of Different Solvent on Total Phenolic, Total  Flavonoid,  and  Sun  Protection  Factor  of  Belimbing Wuluh  (Averrhoa  Bilimbi  linn.)  Fruits  Fraction,” J. Glob. Pharma Technol. , vol. 11, no. 1, pp. 154 – 162, 2019.
[10] R. Suharsanti, N. Sugihartini, E. Lukitaningsih, and M. R. R. Rahardhian, “Potency Of Belimbing Wuluh (Averrhoa Bilimbi) As Antioxidat And Tyrosinase Inhibitor For Skin Whitening Product,” J. Pharma Res. , vol. 8, no. 4, pp. 151 – 154, 2019.
[11]  T. Rudiana et al. , “Characterization of antioxidative fraction of plant stem Bouea macrophylla Griff,” J. Phys. Conf. Ser. , vol. 1341, no. 7, 2019.
[12] Z. Sagala, R. W. Pratiwi, N. U. Azmi, and Maap, “Uji Aktivitas Inhibisi terhadap Enzim Tirosinase dari Ekstrak Etanol Daun Pepaya ( Carica papaya L .) Secara In Vitro,” J. Penelit. Farm. Indones. , vol. 7, no. 2, pp. 34 – 38, 2019.
[13] W. Taurina, M. Andrie, and L. Anjeli, “The gel formulation of the aqueous phase of snakehead fish (Channa striata) extract with various combinations of HPMC K4M and Carbopol 934,” Pharmaciana , vol. 8, no. 1, p. 97, 2018.
[14] K.  Madan  and  S.  Nanda,  “In -vitro  evaluation  of  antioxidant,  anti-elastase,  anti-collagenase,  anti-hyaluronidase activities of safranal and determination of its sun protection factor in skin photoaging,” Bioorg. Chem. , vol. 77, pp. 159 – 167, 2018.
[15] J. Dhyneu Dwi, F. Yunahara, and T. Shelly, “ Aktivitas Antioksidan Dan Inhibisi Enzim Tirosinase Ekstrak Etanol Buah Gandaria (Bouea macrophylla Griff.) SECARA IN VITRO,” Pharmacoscript , vol. 5, no. 1, pp. 63 – 70, 2022.
[16] M. Sholikha, A. Febriani, and A. Wahyuningrum, “Formulasi Gel Ekstrak Lobak ( Raphanus sativus L . ) sebagai Antioksidan dan Inhibitor Tirosinase,” J. Ilmu Kefarmasian , vol. 13, no. 1, pp. 15 – 20, 2020.
[17] T. A. Sujono, M. Honniasih, and Y. R. Pratimasari, “the Influence of Carbomer 934 and Hpmc Concentration As Gelling Agent  in,” Pengaruh  Konsentrasi  Gelling  Agent  Carbomer  934  dan  HPMC  Pada  Formulasi  Gel  Lendir  Bekicot (Achatina Fulica) Terhadap Kecepatan Penyembuhan Luka Baka Pada Punggung Kelinci , vol. 13, no. 1, pp. 6 – 11,
2012.
[18] M. A. Putri, M. E. Saputra, I. N. Amanah, and V. A. Fabiani, “Uji Sifat Fisik Sediaan Gel Hand Sanitizer Ekstrak Daun Pucuk Idat (Cratoxylum glaucum),” Proc. Natl. Colloq. Res. Community Serv. , vol. 3, pp. 39 – 41, 2019.
[19] M. Singh and V. Mittal, “Formulation and Evaluation of Herbal Gel Containing Ethanolic Extract of Ipomoea Fistulosa,” Int. J. Sci. Res. , vol. 3, no. 7, pp. 1862 – 1866, 2014.
[20] S. Tantiningrum, “ Formulasi Dan Evaluasi Sediaan Gel Ekstrak Daun Kemangi (Ocimum bacilicum L.),” Farm. Politek. Indonusa Surakarta , vol. 3, no. 1, pp. 1 – 4, 2019.
[21] N. A. Sayuti, “Formulasi dan Uji Stabilitas Fisik Sediaan Gel Ekstrak Daun Ketepeng Cina (Cassia alata L.) Formulation and Physical Stability of Cassia alata L. Leaf Extract Gel,” J. Kefarmasian Indones. , vol. 5, no. 2, pp. 74 – 82, 2015.
[22] BPOM, “Persyaratan Mutu Obat Tradisional,” Badan Pengawas Obat dan Makanan , pp. 1 – 25, 2014.
[23] M. Charissa, J. Djajadisastra, and B. Elya, “Uji Aktivitas Antioksidan dan Penghambatan Tirosinase serta Uji Manfaat Gel Ekstrak Kulit Batang Taya (Nauclea subdita) terhadap Kulit,” J. Kefarmasian Indones. , vol. 6, no. 2, pp. 98 – 107,
2017.
[24] I. Batubara and M. Adfa, “Potensi daun kayu bawang (Protium javanicum) sebagai penghambat kerja enzim tirosinase,” Sains Mat. , vol. 1, no. 2, pp. 52 – 56, 2013.
[25] I. Wardaniati and R. Yanti, “ Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Propolis Lebah Trigona ( Trigona itama ),” vol. 2, no. 2012, pp. 14 – 21, 2018.
[26] L. M. M. Sani, W. A. Subaidah, and Y. Andayani, “Formulasi dan evaluasi karakter fisik sediaan gel ekstrak etanol daun salam (Syzygium polyanthum),” Sasambo J. Pharm. , vol. 2, no. 1, pp. 16 – 22, 2021.
[27] M. Charissa, J. Djajadisastra, and B. Elya, “Uji Aktivitas Antioksidan dan Penghambatan Tirosinase serta Uji Manfaat Gel Ekstrak Kulit Batang Taya (Nauclea subdita) terhadap Kulit,” J. Kefarmasian Indones. , vol. 6, no. 2, 2017.
[28]  T. Irianti et al. , “Antioksidan,” no. November 2018, 2017.
[29] M. Zaky, N. Rusdiana, and A. Darmawati, “ Formulasi Dan Evaluasi Fisik Sediaan Gel Antioksidan Ekstrak Etanol 70% Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Menggunakan Metode Dpph ,” J. Farmagazine , vol. 8, no. 2, pp. 26 – 36, 2021.
[30] Y. D. Mardhiani, H. Yulianti, D. P. Azhary, and T. Rusdiana, “Formulasi Dan Stabilitas Sediaan Serumdari Ekstrak Kopi Hijau (Coffea Canephora Var. Robusta)Sebagai Antioksidan,” Indones. Nat. Res. Pharm. J. Univ. 17 Agustus 1945 Jakarta , vol. 2, no. 2, pp. 19 – 33, 2018.
[31] S. Kinari, E. Girsang, A. Napiah, and I. N. Ehrich, “Antioxidant and Anti -Collagenase Effectivity of Red Dragon Fruit Peel and Kaempferol 3-0- Rutinoside,” Am. Sci. Res. J. Eng. Technol. Sci. , vol. 59, no. 1, pp. 244 – 251, 2019.
[32] D. Purwanto, S. Bahri, and A. Ridhay, “Issn: 2477 - 5398 uji aktivitas antioksidan ekstrak buah purnajiwa (,” vol. 3, no. April, pp. 24 – 32, 2017.
[33] R. V. Mokoginta, H. E. I. Simbala, and K. L. . Mansauda, “U ji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr) Dengan Metode Dpph (1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl),” Pharmacon , vol. 9, no. 3, p. 451, 2020.
[34] Z. Sagala and K. Telaumbanua, “Formulasi, Uji stabilitas dan Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Sediaan Krim dari Ekstrak Buah Harendong (Melastoma affine D.Don),” Indones. Narutal Res. Pharm. J. , vol. 5, no. 2, pp. 149 – 173,
2020.
[35] S. Syamsuri, Khaerani, and Hasrawati, “ Pengujian Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Ekstrak N-Heksan Dari Umbi Wortel ( Daucus carrota L.),” J. Farm. Fak. Kedokt. dan Ilmu Kesehat. UIN Alaudin Makassar , vol. 8, no. 2, pp. 1 – 8, 2020.
[36] R. Mustika, S. Hindun, and N. Auliasari, “Potensi Tanaman Sebagai Pencerah Wajah Alami,” J. Sains dan Kesehat. , vol. 2, no. 4, pp. 558 – 562, 2020.
[37] G. Karakaya, A. Türe, A. Ercan, S. Öncül, and M. D. Aytemir, “Synthesis, computational molecular docking analysis and effectiveness on tyrosinase inhibition of kojic acid derivatives,” Bioorg. Chem. , vol. 88, no. April, p. 102950, 2019.