PENGARUH EKSTRAK DAUN Elephantopus  scaber.L dan Polyscias obtusa TERHADAP MODULASI SEL T CD8 + dan CD8 + CD62L + MENCIT Balb/c
Nurul Faizah 1)* dan Muhammad Sasmito Djati 1)
1) Laboratorium Fisiologi Hewan, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas
Brawijaya, Jl. Veteran 65145 Malang.
Email: Nurul.Faizah777@gmail.com. No. Tlp: 085755912487

## ABSTRAK
Obat  herbal  saat  ini  menjadi  sangat  populer  dikalangan  masyarakat  terutama  untuk  mengobati infeksi mikroba seperti bakteri dan jamur. Hal ini disebabkan kesadaran masyarakat akan bahaya obat obatan  sintetis  misalnya  antibiotik  dan  antibaktei  akan  menyebabkan  dampak  negatif  jika  dikonsumsi dalam  jangka  panjang.  Jenis  tumbuhan  herbal  yang  dapat  digunakan  untuk  mengobati  sekaligus mencegah infeksi Salmonella typhii terutama pada ibu hamil misalnya E. scaber dan P. obtusa. Keduanya merupakan  tanaman  yang  dapat  mengobati  infeksi  bakteri  karena  mengandung  senyawa  saponin  dan flavonoid  untuk  meningkatkan  jumlah  sel  immunokompeten.  Tujuan  dari  percobaan  ini  untuk mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak  campuran  daun  tapak  liman  dan  kedondong  laut  terhadap jumlah  sel  limfosit  T  CD8 + dan sel  T  CD8 + CD62L + antara  mencit  kontrol  dan  mencit  perlakuan.  Hasil percobaan menunjukkan pemberian ekstrak campuran daun E. scaber dan P. obtusa dapat menurunkan jumlah relatif sel T CD8 + dibandingkan mencit kontrol pada hari ke-14 akan tetapi peningkatan tersebut tidak berbeda antar perlakuan, jumlah T CD8 + meningkat pada mencit P1 yang diberi perlakuan selama 18 hari, dengan peningkatan yang juga tidak signifikan, sebaliknya jumlah T CD8 + menurun pada mencit kontrol K2. Mencit K1 selalu  memperlihatkan jumlah sel T CD8 + paling tinggi dibandingkan perlakuan lain.  Sel  T  CD8 + semakin    berkurang  seiring  dengan  bertambahnya  dosis  ekstrak  P.  obtusa  yang diberikan.
Kata kunci: E. scaber, P. obtusa, Salmonella typhimurium, sel T CD8 + , sel T CD8 + CD62L +

## ABSTRACT
Medicinal herbal is highly recommended especially for pregnant women with bacterial infection to reduce  the  consumption  of  synthetic  antibiotics  that  are  harmful  to  their  body  and  also  fetus.  E.  scaber and  P.  obtusa  are  believed  to  increase  the  number  of  imunocompetent  cells  such  as  CD8 + and CD8 + CD62L + T cell cause both plants have biochemical compound such as saponin and flavonoid. These plants  good  for  immune  system,  but  optimum  dose  of  mixture  extracts  from  both  leaves  to  increase  the number of CD8 + and CD8 + CD62L + T cell in mice is doesnt know yet. This study to determine effect of E. scaber  and  P.  obtusa  leaf  extract  by  compared  the  number  of  CD8 + and  CD8 + CD62L + T  cell  between control mice and treated mice. E. scaber and P. obtusa leaf extract can not reduce relative number of CD8 + T  cells  compared  with  control  mice  after  14  days  treatment  and  18  days.  Even  it  show  little  different number but it was not significantly different, whereas the number of CD8 + decreased in K2 control mice also  not  significantly  different  than  other  treatments.  K1  group  is  always  show  the  highest  number  of CD8 + T cell compared to other treatments. CD8 + was decreased by increasing the doses of P. obtusa leaf extract.
Key word: E. scaber, CD8 + T cell, CD8 + CD62L + T cell, P. obtusa, Salmonella typhimurium.

## PENDAHULUAN

## Latar Belakang
Iklim  Indonesia  sangat  sesuai  untuk pertumbuhan  bakteri,  jamur  dan  beberapa mikroba  lain.  Sebagian  besar  mikroba  tersebut bersifat  patogen seperti  bakteri  Salmonella  typhi dan  S.  paratyphi.  Kedua  bakteri  tersebut meruakan penyebab demam tifoid pada manusia. Demam  tifoid,  atau  tifus  merupakan  ancaman serius bagi masyarakat, karena dapat menyebabkan kematian (Dewi, 2007).
Penyakit  ini  biasanya  diobati  dengan mengkonsumsi antibiotik atau antibakteri sintetis,  namun  seiring  meningkatnya  kesadaran akan  efek  negatif  obat  obatan  sintetis  seperti resiko  cacat  mental  atau  fisik  pada  janin menyebabkan masyarakat mulai beralih menggunakan  tanaman  herbal  yang  jauh  lebih aman.  Salah  satu  tanaman  berkhasiat  obat  yang diperkirakan memiliki  khasiat  obat yaitu tumbuhan  kedondong  laut (P.  obtusa)  dan tapak liman  (E.  scaber),  hal  ini dikarenakan  keduanya
E. scaber P. obtusa ke-14 ke-18 K1 - - - - 3 3 K2 √ - - - 3 3 P1 √ 50 0 √ 3 3 P2 √ 25 25 √ 3
3 Bunting Konsentrasi Ekstrak (mg/kg BB)
Infeksi Pembedahan hari & Jumlah ulangan
Kelompok Perlakuan
mempunyai  kandungan  berupa  saponin  dan flovonoid  yang  telah  dikenal  luas  sebagai imunomodulator  alami(Gondo,  2007;  Cheeke, 2000;  Fuente  dan  Victor,  2000;  Juniarianto, 1987)
Saponin  dan  flavonoid  adalah  bahan  aktif yang dapat meningkatkan respon imunitas tubuh karena  berfungsi  sebagai  imunomodulator  alami terutama meningkatkan jumlah sel sel imunokompeten  seperti  makrofag,  sel  T  dan  sel B.  Beberapa  penelitian  telah  membuktikan pemberian  ekstrak  tanaman  yang  mengandung saponin maupun flavonoid mampu meningkatkan jumlah  sel T  CD8 + dan T CD4 + .  Selain itu daun tapak  liman  juga  berkhasiat  merangsang  proses hematopoesis  (Pradana  dkk.,  2013;  pinca  dkk., 2013; Angulo dkk., 2000; Cheeke, 2000).
Kedua  tanaman  tersebut  memiliki  khasiat obat,  namun  belum  diketahui  efek  sinergisme keduanya  apabila  diberikan  secara  bersamaan. Sinergisme  keduanya  dapat  diestimasi  dengan cara  menghitung  jumlah  sel  T  CD8 + dan  T CD8 + CD62L (Santos dkk., 2001).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  penulis  ingin mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun E. scaber  dan    P.  obtusa  terhadap  jumlah  sel  T CD8 + dan  T  CD8 + CD62L  mencit  balb/c  yang diinfeksi antigen S. typhimurium.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan tempat
Percobaan  ini  dilaksanakan  pada  bulan Januari  2014  sampai  Juni  2014  di  Laboratorium
Fisiologi
Hewan, dan Laboratorium Mikrobiologi,  Jurusan  Biologi  Fakultas  MIPA Universitas Brawijaya Malang.

## Desain penelitian
Kelompok  perlakuan  dibagi  menjadi  5 kelompok yang dibedakan antara mencit bunting dan  non  bunting,  dengan  2  kali  pebedahan berdasarkan  lama  pemberian  ekstrak  daun dengan masing masing ulangan sebanyak 3 ekor.
Alur penelitian ialah sebagai berikut:

## 1. Uji Konfirmasi
Isolat S. typhimurium dikonfirmasi dengan:

## A. Uji media BSA
Isolat  murni  diambil  dengan  ose  dan dilakukan  streak  plate  pada  media  BSA kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama 24  jam.  Isolat  S.  typhimurium  membentuk koloni berwarna hitam.

## B. Uji katalase
Satu  ose  isolat  diambil  dari  media  NA secara  aseptis  ke  gelas  objek  yang  telah ditetesi  hidrogen  peroksida  H 2 O 2 .  Isolat positif akan menghasilkan gelembung gas.

## C. Uji cat gram
S.  typhimurium  diletakkan  pada  gelas objek,  kemudian  ditetesi  cat  Gram  A,  B,  C, dan  D  secara  berurut  turut,  masing  masing selama    2  menit,  1  menit,  30  detik,  dan  30 detik.  Preparat  dicuci  dengan  air  mengalir setiap  akan  diberi  pewarna  yang  berbeda untuk  menghilangkan  warna  sebelumnya. Preparat diamati menggunakan mikroskop. S. typhimurium berwarna merah karena tergolong bakteri Gram negatif.

## D. Uji KIA dan LIA
Koloni  positif  dari  uji  media  BSA diambil satu enten, ditusukkan ke media KIA dan  LIA  secara  vertikal  disepanjang  media. Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C selama  24  jam.  Koloni  S.  typhimurium  akan membentuk garis berwarna hitam.

## E. Uji patogenitas
Isolat  S.  typhimurium  diambil  satu  ose dan  digoreskan  pada  media  blood  agar. Diinkubasi pada 37 0 C selama 24 jam. Koloni yang terbentuk berwarna bening menandakan bakteri tersebut dapat menginfeksi organisme lain.

## 2. Pembuatan kurva standar
Bakteri S. typhimurium ditumbuhkan pada media  NB  selama  24  jam  hingga  membentuk biakan  murni.  Biakan  murni  ditambahkan  pada media NB steril dengan perbandingan konsentrasi  0%,  12,5%,  25%,  37,5%,  50%, 62,5%,  75%,  87,5%  dan  100%  sebanyak  4  ml. Masing  masing  suspensi  tersebut  dihitung absorbansinya berdasarkan spektrofotometer pada  panjang  gelombang  600nm  dengan  larutan blanko  berupa  NB  steril.  Masing  masing suspensi  bakteri  tersebut  dihitung  jumlah  selnya menggunakan haemocytometer.
3. Pap smear dan vaginal plug
Mencit yang dipilih untuk  diamati apabila tampilan  vagina  berwarna  merah  dan  terbuka sehingga  kemungkinan  terjadinya  fase  estrus lebih besar. Metode yang  dilakukan  yaitu cotton bud  dibilas  dengan  aquades  dan  dimasukkan kedalam vagina mencit betina dengan sudut ±45º sebanyak  2-3  putaran  untuk  dibuat  preparat apusan.  Preparat  tersebut  dimasukkan  dalam larutan  alkohol  fiksatif  70%  selama  5  menit kemudian diangkat dan dikeringanginkan. Preparat  yang  telah  jadi  diamati  morfologi  sel epitel dengan menggunakan mikroskop perbesaran 400x. Mencit yang sedang mengalami fase  estrus  kemudian  dikumpulkan  dengan pejantan  dan  dibiarkan  hingga  12  jam  untuk dilakukan  pengamatan  vaginal  plug  keesokan paginya ±05:30 WIB.
Mencit yang
memperlihatkan  vaginal  plug  dihitung  sebagai hari kebuntingan ke-0.

## 4. Pembuatan dan pemberian ekstak daun E. scaber dan P. obtusa
Masing  masing  daun  E.  scaber  dan  P. obtusa  dicuci  dan  dikering  anginkan  selama  2 hari.  Daun  yang  telah  kering  diblender  secara terpisah  sampai  halus.  Masing  masing  daun ditimbang 500 g untuk dilarutkan dalam etanol 5 L  dalam  wadah  yang  berbeda  dan  didiamkan selama  24  jam  untuk  diambil  supernatan. Supernatan  ini  selanjutnya  dimasukkan  dalam destilator  pada  suhu  78 0 C  hingga  pelarut  etanol menguap  dan  tersisa  endapan  seperti  pasta. Pemberian ekstrak daun E. scaber dan P. obtusa dilakukan  dengan  cara  disonde  setiap  hari  sejak hari ke-0 kebuntingan.

## 5. Infeksi S. typhimurium
Bakteri  S.  typhimurium  dalam  agar  slant dicuplik dengan menggunakan ose dan dimasukkan  dalam  media  NB  10  ml.  Biakan selanjutnya dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu  37 0 C  selama  24  jam.  Biakan  aktif  tersebut dituang  ke  dalam  NB  steril  90  ml.  Biakan  yang diperoleh  kemudian  diinjeksikan  pada  mencit dengan  konsentrasi  10 7 sel/ml  sebanyak  0,5  ml ketika usia kebuntingan mencit 7 hari.

## 6. Isolasi Sel Limfosit
Limpa  hasil  isolasi  digerus  dengan pangkal  spuit  dalam  cawan  berisi  PBS  dan disaring  menggunakan  wire.  Suspensi  sel tersebut  dipindah  ke  dalam  tabung  propilen  dan disentrifugasi  2500  rpm  selama  5  menit  pada suhu  4ºC.  Pelet  diresuspensi  dengan  1mL  PBS untuk  diambil  30µl    kemudian  dimasukkan dalam  microtube  berisi  1ml  PBS  untuk disentrifugasi kembali pada 1500 rpm suhu 10 0 C
selama 5 menit. Pelet selanjutnya ditambah PBS berisi  antibodi  monoklonal  FITC  anti-CD8  dan PE-anti  CD62L  sebanyak  50µl  dan  diinkubasi selama 20-30 menit sebelum dianalisis menggunakan flowcytometri.

## 7. Analisis Flowcytometri
Suspensi  sel  dipindahkan  ke  dalam  cuvet flowcytometer,  ditambah  500 µ l  PBS  dan dihomogenkan.  Selain  itu  dilakukan  koneksi antara  komputer  dan    flowcytometer  yang  telah berada  pada  keadaan    aquiring  .  Setelah  semua instrum  siap,  cuvet  dipasang  pada  nozzle  BD Bioscience  FACS  Calibur  TM  flowcytometry. Data  dari  flowcytometer  selanjutnya  diolah dengan  software  BD  CellQuest  ProTM  dan ditampilkan dalam bentuk histogram.

## 8. Analisis Data
Jumlah relatif sel T CD8 + dan CD8 + CD62L  dianalisis  menggunakan  program SPSS.  Dilakukan  transformasi  data  dikarenakan data  yang  diperoleh  memiliki  nilai  pada  kisaran angka  0-20%.  Desain  penelitian  menggunakan rancangan  acak  lengkap  analisis  one  way  anova dengan  selang  kepercayaan  >95%.  Apabila terdapat  perbedaan  nyata  pada  masing-masing perlakuan,  dilanjutkan  dengan  uji  Turkey  atau Games-Howell

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Profil jumlah relatif sel T CD8 + (CTL/Tc) dan  CD8 + CD62L + kelompok  K2,  P1  dan  P2 dilihat  saat    hari  kebuntingan  ke-14  dan  ke-18. Sedangkan  kelompok  kontrol  K1  (non  bunting) dilihat pada hari ke-14 dan 18 pasca aklimatisasi.
K1
K2
P1 P2
Gambar 1., Profil rata rata jumlah relatif sel T CD8 + dan CD8 + CD62L + hari ke-14. K1 K2 P1 P2 Gambar 2., Profil rata rata jumlah relatif sel T CD8 +
dan CD8 + CD62L + hari ke-18.
1. Sel T CD8 +
Berdasarkan  analisis  one  way  ANOVA, jumlah  relatif  sel  T  CD8 + atau  sel  T  memori pada  mencit  yang  dibedah  pada  hari  ke-14 maupun  hari  ke-18,  masing  masing  tidak memperlihatkan adanya perbedaan jumlah relatif yang  signifikan  antar  kelompok  perlakuan. Kelompok perlakuan  K1, K2, P1 dan P2 masing masing  memiliki  jumlah  relatif  sel  T  CD8 + sebanyak  10,15%,  8,34%,  3,81%  dan  2,55%. Jumlah relatif  sel T CD8 + pada hari kebuntingan ke-18  memperlihatkan  kelompok  perlakuan  P2 masih  memiliki  persentase  yang    paling  rendah yakni  3,51%.  Jumlah  tersebut  meningkat  pada mencit  perlakuan  K1  (10%),  P1(7,5%)  dan  K2 (4,49%)  akan  tetapi  peningkatan  tersebut  tidak signifikan.
Pemberian  infeksi  tidak  memberikan perbedaan  jumlah  sel  TCD8 + pada  setiap kelompok  perlakuan,  seharusnya  antigen  yang masuk  kedalam  tubuh  dapat  meningkatkan respon  imunitas  untuk  memproduksi  sel  sel imunokompeten  serta  meningkatkan  proliferasi dan differensiasi sel T naif menjadi sel T efektor atau  sel  T  memori  untuk  melakukan  eliminasi antigen  yang menginfeksi  tubuh  tersebut (Walton, 2008).
Mikroba  yang  menginfeksi  tubuh  akan memacu aktivitas sel sel imunokompeten seperti makrofag dan sel T memori sekaligus memproduksi sitokin IL2 yang mampu meningkatkan proliferasi dan aktivasi sel T lain. Produksi  sitokin  proinflamasi  tersebut  akan mengaktifkan  sejumlah  sel  imunokompeten  lain yakni  sel  NK,  sel  T  CD8 + ,  dan  sel  T  CD4 + menjadi  sel  Th1.    Sel  T  CD8 + atau  sel  T sitotoksik (Tc) merupakan jenis sel limfosit yang
mengekspresikan  molekul  permukaan  berupa CD8 + .  Keberadaan  Sel  T  CD8 + sangat  penting bagi  tubuh  terutama  saat  terjadi  infeksi  bakteri atau  virus.  Sel  Tc  dapat  memusnahkan  sel  yang terinfeksi  bakteri  atau  mikroba  intraseluler  lain yang  tidak  dapat  dikenali  sel  B  dan  makrofag. Sel  Tc  mampu  menghasilkan  perforin  dan granzim  saat  kontak  dengan  sel  terinfeksi. Perforin  menuju  membran  sel  target    dan membentuk pori. Sel T CD8 + menggunakan pori tersebut  untuk  memasukkan  isi  granul  yaitu granzim  kedalam  sitosol  sel  sasaran  sehingga memicu  sel  sasaran  melakukan  apoptosis (Baratawijaya dan Iris, 2010).
Gambar 6. Grafik jumlah relatif sel T CD8 +
Jumlah relatif sel T CD8 + pada pembedahan  hari  ke-18  menunjukan  jumlah  sel Tc  paling  banyak  ditemukan  pada  kelompok perlakuan  K1  yakni  mencit  nonbunting  yang tidak diinfeksi dan tidak diberi perlakuan ekstrak daun.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa    mencit bunting  yang  diinfeksi  bakteri  S.  typhimurium dan  diberi  pelakuan  berupa  ekstrak  daun  E. scaber  dan  P.  obtusa  (25:25  mg/kgBB)  dapat menurunkan  jumlah  sel  T  CD8 + .  Respon  imun untuk  memproduksi  sel  sel  imunokompeten pasca  pemberian  agen  imunomodulator  juga dipengaruhi  waktu  atau  lamanya  treatmen, terbukti pemberian ekstrak daun tapak liman dan kedondong laut selama 18 hari akan meningkatkan  jumlah  sel-sel  imunokompeten dibandingkan  jumlah  sel  T  CD8 + pada  mencit yang  diberi  perlakuan  selama  14  hari  meskipun peningkatan  tersebut  tidak  berbeda  secara signifikan antar perlakuan.
Rendahnya  jumlah  sel  T  CD8 + pada mencit  P1  yang  diberi  perlakuan  selama  14  hari kemungkinan  disebabkan  adanya  kandungan berupa isodeoxyelephantopin  pada  daun  tapak liman  yang  mampu  meningkatkan  jumlah  sel  T
regulator  sehingga  menekan  aktifitas  sel  sel imunokompeten yang berlebihan di dalam tubuh (Ichikawa,  2006).  Sel  T  regulator  berfungsi untuk  mensupresi  respon  imun  seperti  respon terhadap  patogen  misalnya  bakteri,  virus  dan jamur. Treg mengekspresikan dan melepas TGF- β dan  IL-10  yang  diduga  dapat  menekan proliferasi  sel  T,  fungsi  APC  dan  aktivasi makrofag (Baratawijaya dan Iris, 2010).
Menurut Marmi (2010), dosis ekstrak daun tapak  liman  yang  terlalu  tinggi  dapat  menekan jumlah sel T CD4 + . Jumlah sel T CD4 + menurun menyebabkan jumlah  sel  T  CD8 + juga  akan menurun  karena  sel  CD4 + yang  teraktivasi  akan berkembang  menjadi  sel  Th1  dan  Th2.  Sel  Th1 mampu mensintesis  sitokin  IL2  untuk meningkatkan  proliferasi  dan  aktivasi  sel imunokompeten lain seperti sel T CD8 + , sel NK, makrofag dll. Selain itu respon sel T CD8 + akan meningkat  dengan  fungsi  yang  lebih  optimal apabila jumlah sitokin proinflamasi yang dilepas sel limfosit T CD4 + semakin banyak (Linda dkk., 2012).  Selain  berfungsi  mengaktifkan  sel  sel imunokompeten,  sel  Th1  yang  telah  aktif tersebut  juga  memproduksi  sitokin  seperti  IFN γ yang  berperan  untuk  meningkatkan  ekspresi MHC I yang akan dikenali sel T CD8 + sehingga sel  T  CD8  naif  dapat  teraktivasi  menjadi  sel  T efektor,  maka  dari  itu  jumlah  sel  T  CD4 + yang menurun  akan  menyebabkan  sel  T  naif  tidak mampu  berdiferensiasi  menjadi  sel  T  CD8 + efektor  secara  optimal.  Menurunnya  jumlah sitokin  IFN γ juga  akan  berdampak  pada menurunnya  aktivasi  makrofag  yang  mempu mensekresi  IFN α ,  hal  ini  akan  menyebabkan penurunan  ekspresi  MHC  I  sebagai  komplek yang dikenali sel T CD8 + (Baratawijaya dan Iris, 2010).
2. Profil  Sel  T  CD8 + CD62L + pada  organ limpa
Jumlah sel T CD62L yang menurun dapat berakibat  pada  menurunnya  jumlah  sel  T    naif karena  sel T  CD62L  berfungsi  sebagai  mediator sel  T  naif  menuju  organ  limfoid  perifer  tempat antigen dan inisiasi respon imun.
Pemberian  ekstrak  daun  P.  obtusa  dan  E. scaber  dapat  meningkatkan  jumlah  relatif  sel  T CD8 + CD62L + setelah  pemberian  selama  14  hari. Jumlah  relatif  sel  T  CD8 + CD62L + paling  tinggi terlihat  pada  pemberian  ekstrak  daun  dengan perbandingan  dosis  E.  scaber  dan  P.  obtusa 25:25mg/kgBB  namun  peningkatan  ini  tidak berbeda signifikan dibanding kelompok perlakuan lain. Jumlah relatif sel T CD8 + CD62L + menurun setelah pemberian perlakuan selama 18
pada  semua  kelompok  perlakuan  kecuali kelompok K2. Jumlah sel T naif pada kelompok perlakuan  P2  menurun  dari  sebelumnya  5,6% pada  hari  ke-14  menjadi  3,9%  pada  hari  ke-18 pembedahan.  Kelompok  K1  yang  sebelumnya memiliki  jumlah  relatif  CD8 + CD62L + 5,46% menjadi  2,7%  setelah  hari  ke-18.  Kelompok  P1 memiliki jumlah sel T naif 4,3% pada hari ke-14 pembedahan,  menurun  hingga  1,5%  setelah pemberian  ekstrak  daun  E.  scaber  selama  18 hari. Berbeda dengan mencit kelompok perlakuan  P1  yang  mengalami  peningkatan  dari sebelumnya 3,6% menjadi 3,9% setelah kebuntingan mencapai 18 hari.
Gambar 7. Grafik jumlah sel relatif CD8 + CD62L + .
Sel  T  naif  CD62L  merupakan  sel  yang belum pernah terpapar antigen dan kurang reaktif terhadap  antigen  yang  masuk  ke  dalam  tubuh. Jumlah  sel  T  naif  dan  sel  T  teraktifasi  pada penelitian  ini  memiliki  hubungan  berkebalikan. Ketika  jumlah  sel  T  teraktifasi  menurun  maka jumlah  sel  T  naif  lebih  banyak  begitu  pula sebaliknya. Jumlah sel T CD62L akan berkurang seiring dengan meningkatnya jumlah sel T CD8 + yang  teraktifasi.  Menurut  Jan  dkk.  (2007), CD62L merupakan marker aktivasi sel, sehingga penurunan jumlah sel T CD62L mengindikasikan aktivasi sel T naif menjadi sel T CD8 + .
Tanaman tapak liman dan kedondong laut merupakan  2  tumbuhan  yang  memiliki  khasiat obat  akan  tetapi  belum  diketahui  sifat  keduanya apabila digunakan secara bersamaan. Kandungan biokimia  dalam  kedua  tanaman  tersebut  dapat bersifat  sinergis  atau  antagonis.  Hasil  dari penelitian  ini  menunjukkan  pemberian  ekstrak daun  tapak  liman  50mg/kgBB  tanpa  dapat meningkatkan  jumlah  sel  T  CD8 + dibandingkan pemberian campuran kedua ekstrak daun dengan dosis  25:25mg/kgBB  meskipun  menunjukkan
jumlah  yang    tidak  signifikan.  Kemungkinan ekstrak  campuran  daun  tapak  liman  dan kedondong laut bersifat antagonis.
Menurut  Lee  dan  Evelyn  (1996),  sifat antagonis  diartikan  aktifitas  suatu  komponen yang  dapat  menghambat  atau  menurunkan  suatu aktifitas    komponen  lainnya.  Daun  tapak  liman dan  kedondong  laut  yang  diberikan  secara bersamaan  tidak  dapat  meningkatkan  kerja  atau jumlah  relatif  CD8 + sebagai  komponen  imunitas seluler  yang  berperan  penting  untuk  eliminasi bakteri.

## KESIMPULAN
Hasil  dari  penelitian  ini  memperlihatkan bahwa  ekstrak  campuran  daun  tapak  liman  dan kedondong  laut  dapat  menaikkan  jumlah    relatif sel  T  CD8 + CD62L - mencit  infeksi  yang  diberi ekstrak daun tapak liman 50mg/kgBB dibandingkan  mencit  infeksi  pada  hari  ke-18 kebuntingan  dengan  peningkatan  yang  tidak signifikan.  Jumlah  relatif  sel  T  CD8 + CD62L + cenderung  selalu  lebih  tinggi  pada  mencit  P1 dibandingkan mencit K2 pada tiap pembedahan.
Ekstrak  daun  tapak  liman  dan  kedondong laut dengan dosis 50:0 dan 25:25 mg/kgBB tidak memberikan  pengaruh  terhadap  jumlah  sel  T CD8 + maupun sel T CD8 + CD62L + dibandingkan dengan kontrol.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Bapak  sasmito  djati,  bapak  muhaimin Rifa’i, mbak nanik, pak harmaji, fico, nida, ainun dan  smua  pihak  yang  telah  membantu  dalam penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Baratawidjaja,  K.  G.,  Iris  R.  2010.  Imunologi
Dasar  Edisi  Ke-10.  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta
Dewi,  P.  2007.  Karya  Tulis  Ilmiah:  Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Lidah  Buaya  (Aloe vera)  Terhadap  Proliferasi  Limfosit  Pada Mencit  Balb/C  Yang  Diinfeksi  Salmonella typhimurium.  FK  Universitas  Diponegoro. Semarang.
Fuente, M., Victor V. M. 2000. Anti-oxidants as modulators of immune function. Immunology and Cell Biology 78: 49-54. Jan,  T.  R.,  Wey  S.  P.,  Kuan  C.  C.,  Liao  M.  H.,
Wu  H.  Y.  2007.  Diosgenin,  A  Plant
Derived  Sapogenin,  Enchange  Regulatory T-cell  Immunity  In  The  Intestine  Of  Mice
With  With  Food  Allergy.  J.  PlantaMed.
73:421-426.
Juniarianto,  E.  1987.  Penetapan  Kandungan  Zat Besi  Pada    Akar  Dan  Daun  Tapak  Liman
(Elephantopus  scaber,  Linn.)  FF  UNAIR. Surabaya.
Lee, J. K. dan Evelyn R. H. 1996. Farmacology:
A Nurcing Process Approach. Penerjemah: Peter A. Gramedia. Jakarta Linda,  K.,  Sri  W.,  dan  Muhaimin  R.  2012.
Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol Daun  Sirsak  (Annona  muricata  Linn.) Terhadap Peningkatan Jumlah Sel T CD4 + dan CD8 + pada  Timus  Mencit  (Mus musculus). Jurusan Biologi FMIPA Universitas Brawijaya. Malang.
Marmi. 2010. Thesis: Aktivitas  Biologi  Ekstrak
Tapak  Liman    (Elephantopus  scaber,  L) Terhadap  Perkembangan  Limfosit  Pada Mencit      Balb/C.  Jurusan  Biologi  FMIPA Universitas Brawijaya. Malang.
Pinca, S., Muhammad S. D., Muhaimin R. 2013.
Analisis  Mobilisasi  Sel  T  CD4+  dan CD8+ pada Timus Ayam Pedaging Pasca Infeksi Salmonella typhimurium dan Pemberian  Simplisia  Polyscias  obtusa.
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Brawijaya. Malang.
Pradana,  A.,  Muhammad  S.  D.,  Muhaimin,  R.  . 2013. Mobilisasi CD4 + , CD8 + , dan B220 + pada  Spleen  Ayam  Broiler  dengan  Pakan yang Mengandung Polyscias obtusa Pasca Infeksi  Salmonella  typhimurium.  J.Exp. Life Sci.  2338-1655
Santos,  R.  L.,  Zhang  S.,  Tsolis  R.  M.,  Kingsley R.  A.,  Adams  L.  G.,  Baumler  A.  J.  2001. Animal  Models  of  Salmonella  Infections: Enteritis  Versus  Typhoid  Fever.  Microbes Infect. 3:1335–44.
Walton,  R.  E.  2008.  Principle  and  Practice  of Endodontic.  Penerjemah:  Surnawinata.
EGC. Jakarta.
Cheeke,  P.  R.    2000.  Actual  And  Potential Applications  Of    Yucca  schidigera  and Quillaja  Saponaria  Saponins  In  Human And  Animal  Nutrition.  J  Anim  Sci  2000, 77:1-10.
Gondo,  H.  K.  2007.  Penggunaan  Antibiotika pada  Kehamilan.  Wijaya  Kusuma,  Vol  I, No 1, Januari 2007, 57-62.