## ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF EXTRACTS AND FRACTIONS OF Callyspongia aerizusa OBTAINED FROM MANADO TUA ISLAND

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAN FRAKSI DARI Callyspongia aerizusa

## YANG DIPEROLEH DARI PULAU MANADO TUA
Melisa O. Makalunsenge 1)* , Adithya Yudistira 2) ,  Erladys M. Rumondor 3)
1) Program Studi FMIPA  UNSRAT, 95115 *melisaoktafiani13@gmail.com

## ABSTRACT
Callyspongia aerizusa is a family of sponges that have compounds with high activity and a porous body surface structure, so they are included in the phylum Porifera. Antioxidants are substances the body needs to neutralize free radicals and prevent the damage caused by free radicals to normal cells, proteins, and fats. This study aims to determine the antioxidant activity of the extract and fraction of Callyspongia aerizusa obtained from the island  of  Manado  Tua.  Samples  of Callyspongia  aerizusa were  extracted  with  ethanol  as  a  solvent  and fractionated using three solvents, namely methanol, n-hexane, and chloroform. Antioxidant activity testing was carried  out  using  the  DPPH  method  ( 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazil )  and  measured  using  UV-Vis Spectrophotometry at 517 nm. The results of testing the antioxidant activity of the extract and Callyspongia aerizusa fraction had antioxidant activity at a concentration of 100 ppm ethanol extract with an average value of  64.8%,  the  concentration  of  n-hexane  fraction  100  ppm  with  an  average  value  of  66.8%,  chloroform concentration of 100 ppm with the average value is 60.4%, and the concentration of the methanol fraction is 100 ppm with an average value of 67.3%. The highest antioxidant content was found in the methanol fraction, which reached 67.3%.
Keywords : Callyspongia aerizusa, Antioxidant, Spectrophotometry

## ABSTRAK
Callyspongia  aerizusa ialah  salah  satu  famili  spons  yang  memiliki  senyawa  dengan  aktivitas  tinggi  dan memiliki  struktur  permukaan  tubuh  yang  berpori-pori  sehingga  dimasukkan  kedalam  filum  porifera. Antioksidan  adalah  substansi  yang  diperlukan  oleh  tubuh  untuk  menetralisir  radikal  bebas  dan  mencegah kerusakan yang ditimbulkan oleh radikal bebas terhadap sel normal, protein dan lemak. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak  dan  fraksi Callyspongia  aerizusa yang  diperoleh  dari pulau Manado Tua. Sampel Callyspongia aerizusa diekstraksi dengan etanol sebagai pelarut dan difraksinasi dengan menggunakan tiga pelarut yaitu methanol, n-heksan, dan kloroform. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan menggunakan metode DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazil) dan diukur menggunakan alat Spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm. Hasil pengujian aktivitas antioksidan ekstrak dan fraksi Callyspongia aerizusa memiliki aktivitas antioksidan pada konsentrasi ekstrak etanol 100 ppm dengan nilai rata-rata 64,8%, konsentrasi fraksi n-heksan 100 ppm dengan nilai rata-rata 66,8%, konsentrasi kloroform 100 ppm dengan nilai rata-rata 60,4%, dan konsentrasi fraksi methanol 100 ppm dengan nilai rata-rata 67,3%. Kadar antioksidan tertinggi terdapat pada fraksi methanol yaitu mencapai 67,3%.
Kata kunci : Callyspongia aerizusa , Antioksidan, Spektrofotometri

## PENDAHULUAN
Indonesia adalah negara kepulauan terbesar di dunia, memiliki wilayah perairan sangat luas, dua pertiga  merupakan  wilayah  laut,  dan  didalamnya terhadap sumber daya alam hayati laut yang besar, sehingga  bukan  tanpa  alasan  jika  populasi  dan jumlah  spesies  spons  di  Indonesia  cukup bervariasi.  Salah  satu  sumber  daya  alam  yang belum  banyak  dieksplorasi  dan  pemanfaatannya dalam berbagai bidang kehidupan manusia seperti sumber  bahan  pangan,  sumber  bahan  utama  atau bahan  tambahan  obat  material  pendukung  dalam perbaikan lingkungan dan penanganan pencemaran adalah pada ekosistem terumbu karang. Ekosistem terumbu karang merupakan bagian  dari ekosistem laut yang menjadi sumber kehidupan bagi beraneka ragam biota laut (Marzuki, 2018).
Spons  laut  merupakan  salah  satu  sumber molekul  yang  tidak  biasa  ditemukan  di  bebatuan jauh sebelum ledakan Kambrium. Bukti paleontologis  dan  genetik  merupakan  bukti  kuat tentang  hal  ini,  berdasarkan  data  fosil  hasil dieksplorasi  diyakini  genetik  dari  molekul  spons. Callyspongia aerizusa ialah salah satu famili spons yang memiliki senyawa dengan aktivitas tinggi dan memiliki  struktur  permukaan  tubuh  yang  berpori- pori sehingga dimasukkan kedalam filum porifera (Sari dkk., 2014). Callyspongia aerizusa menghasilkan  metabolit  sekunder  berupa  steroid, alkaloid, flavonoid dan terpenoid yang kedepannya dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan  baku  obat (Manggala dkk., 2015).
Antioksidan  dalam  pengertian  kimia  adalah senyawa  pemberi  elektron  (electron  donors)  dan secara  biologis  antioksidan  merupakan  senyawa yang  mampu  mengatasi  dampak  negatif  oksidan dalam  tubuh  seperti  kerusakan  elemen  vital  sel tubuh. Antioksidan merupakan suatu senyawa yang memperlambat  atau  mencegah  proses  oksidasi dengan  cara  menghentikan  reaksi  berantai  dari radikal bebas (Erlidawati dkk., 2018).
Berdasarkan  uraian  diatas  penulis  tertarik untuk  menguji  aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak dan  fraksi  spons Callyspongia  aerizusa yang diambil  dari  perairan  Pulau  Manado  Tua  dengan menggunakan metode DPPH ( 1,1-difenil-2 pikrilhidrazil).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Peneliatian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Oktober  2021-Maret  2022  di  Laboratorium Farmasi  Lanjut  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  masker,  sarung  tangan,  talenan,  gunting, pisau, scuba diving, kertas, label, spidol permanen, botol,  zipper  lock  bag,  cool  box,  aluminium  foil, Erlenmeyer, timbangan analitik, rotary evaporator, gelas  ukur,  gelas  kimia,  kertas  saring,  autoklaf, pinset,  laminary  air  flow,  pipet  tetes,  lemari pendingin, inkubator, vortex

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu spons Callyspongia aerizusa , etanol 95%, n- heksana, kloroform, methanol, dan DPPH.
Prosedur Kerja

## Pengambilan Sampel
Sampel Callyspongia  aerizusa diambil  dari perairan Pulau Manado Tua dengan menggunakan alat  bantu  (Scuba  diving).  Sebelum  sampel diambil,  sampel  difoto  menggunakan  kamera bawah  laut  lalu  dimasukkan  ke  dalam  ziplock kemudian diberi label dan disimpan di dalam cool box.  Setelah  itu  sampel  langsung  dibawa  ke Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi.

## Determinasi Sampel
Determinasi
sampel dilakukan di Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi,  untuk mengetahui  sampel  yang  diambil  dari  pulau Manado  Tua  adalah  sampel  yang  sesuai  untuk digunakan dalam penelitian yaitu spons Callyspongia aerizusa .

## Preparasi Sampel
Sampel Callyspongia  aerizusa yang  telah diambil kemudian dicuci dan dipotong kecil-kecil menggunakan  pisau  atau  gunting.  Setelah  itu sebanyak 356 gr sampel dimasukkan ke dalam botol lalu  sampel  dimaserasi  dengan  etanol  95% sebanyak 200 mL kemudian tambahkan lagi etanol sampai sampel terendam secara keseluruhan.

## Ekstraksi
Sampel Callyspongia  aerizusa sebanyak  356 gr  dimaserasi  dengan  etanol  95%  dengan  3  kali pengulangan  selama  24  jam.  Setelah  itu  sampel disaring  untuk  menghasilkan  filtrat.  Hasil  yang didapatkan  setelah  disaring  kemudian  diuapkan menggunakan alat evaporator sehingga didapatkan
hasil  ekstrak  kasar  dari  sampel Callyspongia aerizusa.

## Fraksinasi
Dimasukkan  sebanyak  5  gr  ekstrak  etanol Spons Callyspongia aerizusa ke dalam Erlenmeyer, kemudian dilarutkan dengan metanol 80%  sebanyak  100  mL.  Setelah  sampel  larut, sampel  dimasukkan  kedalam  corong  pisah  lalu ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  100  mL setelah itu dikocok berulang kali sampai homogen. Dibiarkan  sampai  terbentuk  lapisan  MeOH  dan heksan.  Masing-masing  lapisan  ditampung  dalam wadah  yang  berbeda.  Lapisan  heksan  selanjutnya dievaporasi  menggunakan  rotary evaporator hingga kering, lalu ditimbang dan ini disebut fraksi heksan.  Selanjutnya  lapisan  MeOH  ditambahkan dengan aquades sebanyak 100 mL dipartisi dengan pelarut  kloroform  dengan  perbandingan  1:1 v/v,dikocok dalam corong pisah hingga homogen. Dibiarkan  sampai  terbentuk  dua  lapisan  yaitu lapisan  MeOH  dan  kloroform.  Masing-masing lapisan  ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  kloroform  dalam  wadah  selanjutnya dievaporasi  menggunakan  rotary evaporator hingga  kering  lalu  ditimbang.  Ini  disebut  fraksi kloroform.  Lapisan  MeOH  yang  ditampung  pada wadah yang lain kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga kering lalu ditimbang berat sampel. Ini disebut fraksi MeOH. Ketiga fraksi  tersebut digunakan dalam pengujian antioksidan.
Pembuatan  Larutan  Ekstrak Callyspongia aerizusa
Larutan sampel dibuat dengan konsentrasi 100 ppm  dengan  menimbang  10  mg  ekstrak  etanol Spons  dilarutkan  dalam  100  ml  etanol  95%  dan dikocok  hingga  homogen.  perlakuan  yang  sama dilakukan  pada  fraksi  n-heksan,  kloroform  dan metanol.

## Pembuatan Larutan DPPH
DPPH  sebanyak  5  mg  ditimbang  dan dilarutkan di dalam 100 mL etanol 95% dalam labu ukur. Kemudian didiamkan selama 30 menit.

## Pembuatan Larutan Kontrol DPPH
Pembuatan  larutan  kontrol  DPPH  dengan melarutkan  2  ml  etanol  95%  dengan  2  ml  larutan DPPH  50  ppm  dan  kemudian  dikocok.  Larutan kontrol  diuji  menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis dengan panjang gelombang 517 nm.
Pengujian Aktivitas Antioksidan
Pembuatan  larutan  uji  sampel  dibuat  dengan dimasukkan 2 mL larutan DPPH kedalam masing- masing  larutan  sampel  kemudian  divortex  dan diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu  ruangan yaitu  37 o C  hingga  terjadi  perubahan  warna  dari aktivitas  DPPH.  Semua  sampel  dilakukan  3  kali pengulangan dan kemudian diukur nilai absorbansinya menggunakan spektrofotometer Uv- vis  pada  panjang  gelombang  517  nm.  Aktivitas penangkapan  radikal  bebas  (persen  inhibisi) dihitung  sebagai  persentase  DPPH  yang  tereduksi dengan menggunakan rumus sebagai berikut :
% Inhibisi = 1 - 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 x 100% 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari percobaan diatas sebanyak 356 gr spons Callyspongia  aerizusa diekstraksi  menggunakan pelarut  etanol  95%  dengan  metode  maserasi sebanyak  tiga  kali,  kemudian  dievaporasi  sampai menghasilkan ekstrak kasar sebanyak 10 gr. Setelah itu  diambil  sebanyak  5  gr  kemudian  difraksinasi menggunakan tiga pelarut yaitu metanol, n-heksan, dan  kloroform. Hasil  randemen ekstrak  dan  fraksi Callyspongia aerizusa dapat dilihat pada tabel 1. Tabel     1. Randemen     ekstrak     dan     fraksi Callyspongia aerizusa
N o Sampel Massa ekstra k (g) Rendeme n (%) Warn a 1 Ekstrak etanol 10 2,81 Cokla t pekat 2 Fraksi n- heksan 0,022 0,44 Putih keruh 3 Fraksi klorofor m 0,05 1 Putih keruh 4 Fraksi methano l 3 60 Kunin g
Setelah itu hasil ekstrak dan fraksi diuji untuk mengetahui adanya aktivitas antioksidan. Pengujian dilakukan menggunakan metode DPPH dengan  alat  spektrofotometri  UV-Vis  diukur  pada panjang gelombang 517 nm. Hasil pengujian dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel  2. Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan ekstrak dan fraksi Callyspongia aerizusa.
Pada  penelitian  ini  sampel  yang  digunakan yaitu Spons Callyspongia aerizusa yang diperoleh dari  Pulau  Manado  Tua.  Sampel  dibawah  ke Laboratorium  Farmasi  Lanjut  Program  Studi Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi.  Setelah  itu sampel  dipreparasi  dengan  cara  dicuci  dan dipotong  kecil-kecil  menggunakan  pisau  atau gunting.  Hal  ini  bertujuan  untuk  memperluas permukaan  sampel  sehingga  dalam  proses ekstraksi  didapatkan  senyawa  yang  diinginkan secara  maksimal  (Amanah,  2019).  Dihasilkan sampel  sebanyak  356  g  kemudian  dimasukkan  ke dalam  botol  dan  diekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol 95%. Alasan memilih metode maserasi karena metode ekstraksi dengan  cara  dingin  seperti  maserasi  mempunyai banyak  keuntungan  dibandingkan  dengan  metode ekstraksi  lainnya,  diantaranya  prosedur  dan peralatan yang digunakan sederhana dan sehingga dapat menjaga bahan alam yang tidak tahan panas. Disamping itu ekstraksi dingin juga memungkinkan  banyak  senyawa  terekstraksi, meskipun  beberapa  senyawa  memiliki  kelarutan terbatas  dalam  pelarut  pada  suhu kamar (Puspitasari  dan  Lean,  2017).  Digunakan  pelarut etanol pada proses ekstraksi karena etanol bersifat polar,  universal,  dan  mudah  didapat  (Trifani, 2012). Maserasi dilakukan sebanyak 3 x 24 jam dan setiap 24 jam ekstrak disaring dan dimaserasi lagi menggunakan  pelarut  yang  baru.  Hal  ini  disebut remaserasi yang bertujuan untuk menarik kandungan  senyawa  yang  masih  tertinggal  pada saat  maserasi  pertama.  Setelah  itu  filtrat  yang diperoleh dievaporasi menggunakan rotary evaporator  pada  suhu  40 o C  karena  pada  suhu  ini tidak  dapat  merusak  senyawa-senyawa  aktif  pada sampel  (Woran  dkk,  2021).  Tujuan  dilakukan penguapan  adalah  untuk  memisahkan  pelarut dengan  ekstrak  sehingga  diperoleh  ekstrak  kental (Selfiana, 2019).
Setelah  itu  ekstrak  kental  yang  diperoleh sebanyak 10 g selanjutnya dilakukan proses
raksinasi.  Pada  proses  fraksinasi  digunakan metode fraksinasi cair-cair. Metode ini merupakan emisahan dengan  menggunakan  pelarut  yang idak saling  bercampur  sehingga  senyawa  yang  ersifat polar akan larut dalam pelarut polar, enyawa yang bersifat non polar akan  larut  ke alam pelarut non polar,  dan  senyawa  yang  bersifat  emi  polar  akan larut  ke  dalam  pelarut  semi  polar  Woran  dkk, 2021).  Pada  proses  fraksinasi  menggunakan  tiga pelarut  yaitu  n-heksan  sebagai  elarut  non  polar, kloroform sebagai pelarut semi olar, dan methanol sebagai  pelarut  polar.  Fraksinasi  dengan  cair-cair dilakukan  dengan pengocokan.  Prinsip  pemisahan pada  proses  fraksinasi  adalah  didasarkan  pada perbedaan  tingkat kepolaran dan perbedaan bobot jenis  antara dua  fraksi  (Pratiwi  dkk,  2016).  Hasil randemen ekstrak dan fraksi yang dihasilkan dapat dilihat  pada  tabel  1.  Berdasarkan  hasil  fraksinasi menunjukkan bahwa randemen tertinggi ditunjukkan  pada  fraksi  methanol  yaitu  60% dibandingkan dengan n-heksan dan kloroform. Hal ini  sesuai  dengan  penelitian  Meldha  (2021)  yang menyatakan bahwa tingginya nilai randemen pada methanol  menunjukkan  bahwa  terdapat  banyak komponen  senyawa  yang  bersifat  polar  dalam sampel Callyspongia  aerizusa .  Perbedaan  nilai randemen  ini  disebabkan  oleh  perbedaan  jenis pelarut yang digunakan. Pelarut yang berbeda akan melarutkan senyawa-senyawa yang berbeda tergantung  tingkat  kepolarannya.  Oleh  sebab  itu, jumlah  ekstrak  yang  dihasilkan  tergantung  jenis pelarutnya (Mujipradhana dkk, 2018).
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan untuk mengetahui aktivitas dari penangkal radikal bebas. Antioksidan di definisikan sebagai senyawa yang  mampu  melindungi  sel  dari  bahaya  radikal bebas  oksigen  reaktif.  Tubuh  manusia  tidak mempunyai  cadangan  antioksidan  dalam  jumlah berlebih,  sehingga  apabila  terbentuk  banyak radikal  maka  tubuh  membutuhkan  antioksidan eksogen  (Yenrina  dan  Sayuti,  2015).  Radikal bebas yang biasa digunakan sebagai model dalam mengukur daya penangkapan radikal bebas adalah 1,1-difenil-2-pikrihidazil (DPPH) (Tristantini, 2016). Ekstrak dan fraksi yang diperoleh dilakukan pengukuran  aktivitas  antioksidan  menggunakan metode  DPPH.  Metode  ini  dipilih  karena sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka  serta  hanya memerlukan  sedikit  sampel  untuk  pengujian aktivitas  antioksidan  dari  senyawa  bahan  alam (Ridho,  A.,  2013).  Alat  yang  digunakan  untuk menguji aktivitas antioksidan yaitu Spektrofotometer UV-Vis. Pada uji ini pengukuran nilai absorbansi DPPH diukur pada panjang
Konsentrasi Ekstrak dan Fraksi Pengulangan Rata- f rata p I II III 100 ppm Ekstrak Etanol 58,3%  69,5%  66,8%  64,8% t b s 100 ppm Fraksi  n- Heksan 64,4%  66,5%  69,6%  66,8% d s 100 ppm Fraksi Kloroform 62,1%  61,2%  57,9%  60,4% (
100 ppm Fraksi Metanol 66,1%  69,9% 66% 67,3% p p
gelombang  antara  400-600  nm.  Hasil  absorbansi yang  didapat  yaitu  517  nm  sebagai  panjang gelombang  maksimum  untuk  DPPH.  Sebelum larutan  sampel  diuji,  sampel  diinkubasi  terlebih dahulu pada suhu 37 o C di tempat gelap selama 30 menit  hal  ini  dilakukan  untuk  menghindari kontaminasi  dan  pengujian  aktivitas  antioksidan diinkubasi  pada  suhu  37 o C  karena  pada  suhu  ini reaksi  antara  radikal  DPPH  dengan  senyawa metabolit sekunder berlangsung lebih optimal (Aji, 2014).  Adanya  aktivitas  antioksidan  dapat  dilihat dari perubahan warnanya dari ungu pekat menjadi kuning  pucat.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Denny  (2021)  bahwa  tingkat  perubahan  warna yang  terjadi  mengindikasikan  potensi  senyawa antioksidan  dalam  kemampuannya  mendonorkan atom hidrogen.
Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak dan fraksi Callyspongia aerizusa dapat dilihat pada tabel  2.  Pada  hasil  penelitian  yang  didapatkan menunjukkan nilai persen inhibisi pada ekstrak dan fraksi  spons Callyspongia  aerizusa memiliki aktivitas  antioksidan  pada  konsentrasi  ekstrak etanol  100  ppm  dengan  nilai  rata-rata  64,8%, konsentrasi fraksi n-heksan 100 ppm dengan nilai rata-rata  66,8%,  konsentrasi  kloroform  100  ppm dengan nilai rata-rata 60,4%, dan konsentrasi fraksi methanol  100  ppm  dengan  nilai  rata-rata  67,3%. Nilai  persen  inhibisi  tertinggi  terlihat  pada konsentrasi  fraksi  methanol  100  ppm  yang mencapai 67,3%. Hal ini didukung oleh penelitian Lisnawati  (2014)  yang  menunjukkan  bahwa tingkat  kepolaran  pelarut  sangat  berpengaruh terhadap  aktivitas  antioksidan  yang  diperoleh. Aktivitas  antioksidan  tertinggi  diperoleh  dari ekstraksi  menggunakan  pelarut  polar  (85,95%), semi  polar  (74,49%),  dan  pelarut  non  polar (51,82%).  Fraksi  methanol  memiliki  aktivitas antioksidan yang lebih tinggi dibandingkan dengan n-heksan  dan  kloroform,  hal  ini  diduga  karena adanya  kandungan  senyawa  aktif  dari  golongan senyawa  antioksidan  yang  bersifat  polar  lebih banyak  dibandingkan  yang  bersifat  non  polar dalam spons Callyspongia aerizusa.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa ekstrak dan fraksi Callyspongia aerizusa yang  diperoleh  dari  Pulau  Manado  Tua memiliki aktivitas
antioksidan.
Aktivitas
antioksidan  tertinggi  terlihat  pada  konsentrasi fraksi  methanol  100  ppm  dengan  nilai  rata-rata 67,3%.

## SARAN
Sebaiknya  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  senyawa  aktif  yang  terkandung dalam Spons Callyspongia aerizusa dan pengujian lain seperti Antimikroba dan Anticancer.

## DAFTAR PUSTAKA
Aji,  R,  M.  2014.Uji  Aktivitas  Antioksidan  Pada Ekstrak  Daging  Lidah  Buaya  ( Aloe  vera )
Menggunakan Metode DPPH ( 1,1- Diphenyl-2-picrylhydrazil ), Skripsi, Fakultas  Kedokteran,  Universitas  Islam
Negeri Syarif Hidayatullah. Jakarta
Abdullah,  S.  S.,  Antasionasti,  I.,  Rundengan,  G., Abdullah,  R.  P.  I.  (2022). Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Biji Dan Daging Buah  Pala  ( Myristica  fragrans )  Dengan Metode  DPPH. Chemistry  Progress, 15(2) , 70–75
Amanah,  W.  2019.  Biokonversi  Antosianin Menjadi  Antosianidin  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan  dari  Kubis  Ungu  ( Brassica oleracea var. capitata L .) Melalui Fermentasi Ragi Tempe ( Rhyzopus oligosporus ).  Universitas  Islam  Indonesia.
Yogyakarta
Antasionasti I, Jayanto I, Abdullah S S, and Siampa J  P.  Karakterisasi  Nanopartikel  Ekstrak Etanol Kayu Manis ( Cinnamomum burmanii ) Dengan Kitosan Sodium
Tripolifosfat Sebagai Kandidat Antioksidan. Chemistry Progress, 2020, 13(2) : 77-85.
Denny,  R.,  Adithya,  Y.,  Deby,  A,  M.  2021.  Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Stylissa  carteri dari  Pulau  Mentehage Minahasa  Utara.  Pharmacon  –  Program Studi  Farmasi,  FMIPA  Universitas  Sam Ratulangi, Volume  11  Nomor 1 Februari
2022
Dwi  Puspitasari.,  Anita.,  Lean  S.  P.,  2017. Perbandingan  Metode  Ekstraksi  Maserasi dan Sokletasi Terhadap Kadar Fenolik Total Ekstrak  Etanol  Daun  Kersen  ( Muntingia Calabura ).  Jurnal  Ilmiah  Cendekia  eksakta 1(2)1-8
Erlidawati,  Safrida,  Mukhlis.  2018.  Potensi
Antioksidan Sebagai Antidiabetes. University Press Darussalam. Banda Aceh
Lisnawati.  2014.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Daun  Kelor  ( Moringa  olefera  L .)  dari Berbagaitingkat Kepolaran Pelarut, [Skipsi] Palu:  FMIPA  Kimia.  Universitas Tadulako.
Manggala,  F.  P.,  J.  Posangi,  M.P.  Wowor, Bara R.  2015.  Uji  Efek  Antibakteri  Jamur Endosimbion Spons Laut terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Escherichia coli . Ebm. 3(1): 277
Meldha., Defny, S. W., Karlah, L. R. M. 2021. Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi Spons Callyspongia  aerizusa dari  Perairan Pulau  Mantehage  Manado.  Pharmacon. 10(3) : 955
Membri, D.K., Yudistira, A.,  Sumantri , S. (2021). Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol Spons Liosina  paradoxa Yang  Dikoleksi Dari  Pulau  Mantehage. Pharmacon , 10(2) , 775–777
Mujipradhana  V.N.,  D.  S.  Wewengkang.,  E. Suryanto. 2018. Aktivitas Antimikroba dari Ekstrak Ascidian  Herdmania  momus pada Mikroba  Patogen  Manusia.  Pharmacon. 7(3): 338-347
Pratiwi, L., Achmad, F., Ronny, M., Suwidjiyo, P. 2016.  Ekstrak  etanol,  Ekstrak  etil  asetat, Fraksi etil asetat, dan Fraksi n-heksan Kulit Manggis ( Garcinia mangostana L .) Sebagai Sumber  Zat  Bioaktif  Penangkal  Radikal Bebas.  Journal  of  Pharmaceutical  Science and Clinical Research, 2016, 01, 71 – 82
Ridho,  E.  A,.  (2013).  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Metanol  Buah  Lakum  ( Cayratia trifolia ) Dengan Metode DPPH ( 2,2-Difenil- 1-Pikrilhidrazil ). Naskah Publikasi. Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura Pontianak.
Sari,  N.I.,  Ahmad  A.,  Dali  S.  2014.  Isolasi  dan karakterisasi  protein  bioaktif  dari  spons Callyspongia sp . sebagai zat antioksidan.
Makassar: Universitas Hasanuddin
Selfiana,  A.  2019.  Identifikasi  Senyawa  Aktif Antrakuinon Fraksi Etil Asetat Kayu Songga ( Strychnos ligustrida ) Sebagai Anti Malaria
Melalui Uji Aktivitas Penghambatan Polimerisasi  Heme.  Universitas  Islam Indonesia. Yogyakarta Soleman, P., Adithya, Y., Meilani, J. M. 2021. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons Callyspongia aerizusa dari Pulau Mantehage  Kabupaten  Minahasa  Utara. Pharmacon. 10(3) : 964
Trifani.  2012.  Ekstraksi  Pelarut  Cair-Cair. Universitas Indonesia. Depok
Tristantini,  D.,  Alifah,  I.,  Bhayangkara,  T,  P., Jason,  G,  J.  2016.  Pengujian  Aktivitas Antioksidan  Menggunakan  Metode  DPPH pada  Daun  Tanjung  ( Mimusops  elengi  L ). Program  Studi  Teknik  Kimia,  FTI,  UPN "Veteran". Yogyakarta
Woran,  F.,  Defny,  W.,  Meilani,  J.  2021.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi Ascidian ( Lissoclinum badium ) dari Perairan Pulau  Mentehage.  Pharmacon  –  Program Studi  Farmasi,  FMIPA,  Universitas  Sam Ratulangi, Volume 10 Nomor 2 Mei 2021
Yenrina,  R.,  Sayuti,  K.  2015.  Antioksidan  Alami dan Sintetik. Padang. University Press.