Pengaruh Ekstrak Daun Sirih Merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav.) terhadap Kadar Glukosa Darah dan Kadar Glutation Peroksidase Tikus Jantan Hiperglikemik
Syahrizal Ramadhan 1)* , Retno Sri Iswari 1) , Aditya Marianti 1)
1) Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Semarang, Kampus
Sekaran, Gunung Pati, Semarang, Jawa Tengah, Indonesia
*) Alamat korespondensi: syahrizal.ramadhan23@gmail.com

## ABSTRAK
Diabetes  mellitus  (DM)  merupakan  penyakit  metabolik  dengan  karakteristik  hiperglikemia.  Pada DM  mudah  terjadi pembentukan  radikal  bebas. Antioksidan dari flavonoid diketahui dapat mengatasi penyakit  disebabkan  radikal  bebas,  seperti  DM.  Beberapa  penelitian  melaporkan  ekstrak  daun  sirih merah memiliki aktivitas antioksidan dan antihiperglikemik. Belum ada data yang menunjukkan potensi tersebut  secara in  vivo .    Penelitian  ini  bertujuan  menganalisis  pengaruh  ekstrak  daun  sirih  merah terhadap  kadar  glukosa  darah  dan  kadar  antioksidan  glutation  peroksidase  (GPx)  tikus  jantan hiperglikemik.  Pada  penelitian  ini  terdapat  lima  kelompok  perlakuan  yang  terdiri  dari  kontrol  positif (K+), kontrol negatif (K-), perlakuan ekstrak daun sirih merah dosis 100, 200, dan 400 mg/kgBB. Hewan coba  yang  digunakan  adalah  tikus  jantan  strain Wistar berumur  8-12  minggu  dengan  berat  badan minimal  180  gram.  Prosedur  penelitian  meliputi  pengkondisisan  hiperglikemik  pada  hewan  uji  dengan induksi aloksan 120  mg/kgBB secara intraperitoneal,   ekstraksi  daun  sirih  merah  menggunakan  metode maserasi dengan pelarut etanol 70%, perlakuan dengan pemberian ekstrak daun sirih merah secara oral selama  28  hari,  serta  pengukuran  kadar  glukosa  darah  dan  kadar  GPx.  Hasil  penelitian  menunjukkan pemberian ekstrak daun sirih  merah berpengaruh signifikan  pada penurunan  kadar glukosa darah dan kenaikan  kadar  GPx.  Pengaruh  yang  diberikan  daun  sirih  merah  terhadap  penurunan  kadar  glukosa darah  sebesar  37,5%,  sedangkan  pengaruh  yang  diberikan  daun  sirih  merah  terhadap  kenaikan  kadar GPx sebesar 92,9%. Simpulan dari penelitian ini adalah pemberian ekstrak daun sirih merah pada tikus jantan  hiperglikemik  berpengaruh  terhadap  penurunan  kadar  glukosa  darah  dan  peningkatan  kadar GPx.  Dosis  100  mg/kgBB  merupakan  dosis  efektif  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah  dan menaikkan kadar GPx.
Kata kunci : antioksidan, flavonoid, hiperglikemik, radikal bebas
Effect of Red Betel ( Piper crocatum Ruiz & Pav.) Leaves Extract on Blood Glucose Levels and Glutathione Peroxidase Levels in Hyperglycemic Male Rats
Syahrizal Ramadhan 1)* , Retno Sri Iswari 1) , Aditya Marianti 1)
1) Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Science, State University of Semarang,
Campus of Sekaran, Gunung Pati, Semarang, Central Java, Indonesia
*) Email: syahrizal.ramadhan23@gmail.com

## ABSTRACT
Diabetes  mellitus  (DM)  is  metabolic  diseases  with  characteristics  of  hyperglycemia.  In  diabetes mellitus is very easy to occur the formation of excess free radicals. Antioxidants from flavonoids was knew to  overcome  diseases  caused  by  free  radicals,  such  as  DM.  Some  reasearch  reported  that  red  betel  leaf extract  has  antioxidant  and  antihyperglycemic  activity.  There  was  no  data  showing  its  in  vivo  potency. This  study  aimed  to  analyze  the  effect  of  red  betel  leaf  extract  on  blood  glucose  levels  and  Glutathione Peroxidase (GPx) levels of hyperglycemic male rats. This study consisted of  five treatment groups namely positive control,  negative control,  treatment  of  red betel leaf  extract dose 100  mg/kgBW,  200  mg/kgBW, and 400 mg/kgBW. The experimental animals used Wistar strain male rats with the age of 8-12 weeks and the  body  weight  of  180  grams  minimal.  The  procedure  was  the  conditioning  of  hyperglycemic experimental  animals  with  alloxan  induction  120  mg/kgBW  by  intraperitoneal,  extraction  of  red  betel used maceration method with 70% ethanol solvent, treatment by giving the red betel leaves extract orally
for 28 days, and measure the level of blood glucose and GPx used spectrophotometric. The result showed that red betel leaves extract that given to the male Wistar Rat exhibited a significant effect on the levels of blood glucose and GPx levels. The effect given by red betel leaves on reduced of blood glucose levels  was 3.75%.  While  the  effect  given  by  red  betel  leaves  towards  the  increase  of  GPx  levels  was  92.2%.  The conclusion  of  this  study  is  red  betel  leaves  extract  that  given  to  the  male  Wistar  Rat  gave  a  significant effect on reduced of  blood glucose levels and increased of GPx levels. The dosage of 100 mg/kgBW was an effective dose in reducing blood glucose levels and increasing GPx levels.

## Keywords: antioxidants, flavonoids, free radicals, hyperglycemic

## PENDAHULUAN
Diabetes mellitus (DM) merupakan penyakit metabolik dengan karakteristik hiperglikemia  yang  terjadi  karena  kelainan sekresi  insulin,  kerja  insulin,  atau  keduanya [1]. Hiperglikemia mempercepat pembentukan radikal  bebas  dan  senyawa  oksigen    reaktif (ROS)  sehingga    akan    terjadi    peningkatan stres  oksidatif.
Hiperglikemia kronis menyebabkan kerusakan sel-sel β pankreas penghasil insulin. Kerusakan  ini  dapat  disebabkan  oleh  faktor genetik,  infeksi  virus  seperti  virus Coxsackie , reaksi  autoimun  berupa  serangan  antibodi terhadap    sel-sel    β,    zat  diabetogenik  seperti aloksan  dan  streptozotocin,  serta  dapat disebabkan  pembentukan  radikal    bebas melalui    mekanisme  oksidasi-reduksi  dengan tambahan  donor    elektron    (NADH    dan FADH 2 )  ke  dalam rantai transpor elektron di mitokondria  [2].  Radikal  bebas  seperti superoksida,    hidrogen    peroksida,    dan  nitrit oksida    dapat  merusak  sel-sel  β  pankreas  dan membuat sel-sel β menjadi degranulasi [3].
Tubuh  dalam  keadaan  normal  terlindungi dari    serangan  radikal  bebas  oleh    antioksidan dalam  tubuh  seperti  superoksida    dismutase (SOD), katalase
(CAT/
H 2 O 2 oksidoreduktase),  dan  glutation  peroksidase (GPx)  [4]  [5].  Glutation  peroksidase    (GPx) merupakan    antioksidan    enzimatik  dalam tubuh  yang  mampu    mencegah    pembentukan radikal    bebas    baru.  Selain  itu  GPx  dapat mengubah  radikal  bebas dengan karakteristik molekul yang sangat reaktif  menjadi  molekul yang kurang reaktif [6]. GPx dengan gugus SH dapat  mendetoksifikasi    hidrogen    peroksida dan  lipid  hidroperoksida  dengan  mereduksi glutation [7]. Menurut penelitian Pasaouglu [8] kadar  antioksidan  GPx  turun  dalam  kondisi diabetes  dan  lebih  rendah  dari  kontrol  tanpa diabetes.  Sel  β  pankreas  yang  terganggu fungsinya karena stres oksidatif akan mengalami penurunan kadar enzim antioksidan, salah satunya adalah GPx [9].
Antioksidan berperan penting untuk menangkal  dan  menetralkan  adanya  radikal bebas  di  dalam  sel    [10].  Apabila  antioksidan dalam tubuh tidak mencukupi, tubuh membutuhkan  antioksidan  dari  luar  [11]. Aktivitas sebagai antioksidan dimiliki sebagian besar flavonoid dari tumbuhan [12]. Antioksidan  dari  flavonoid  secara  empiris diketahui  dapat  mengatasi  penyakit  yang disebabkan  oleh  radikal  bebas,  seperti  DM [13].  Beberapa  penelitian  melaporkan  bahwa ekstrak  daun  sirih  merah  memiliki  kandungan senyawa flavonoid sebagai antioksidan.
Daniel  [14]  telah  berhasil  mengisolasi senyawa  flavonoid  yang  terkandung  dalam ekstrak  etanol  daun  sirih  merah.  Penelitian Parildar  [15]  membuktikan  bahwa  daun  sirih merah  mengandung  sejumlah  senyawa  yang memiliki aktivitas antioksidan, seperti flavonoid, polifenol, golongan alkaloid, terpenoid, dan vitamin E. Aktivitas antioksidan ini  merupakan  faktor  berkhasiat  penting, sehingga    dapat  digunakan  sebagai  alternatif pengobatan  diabetes  mellitus.  Belum  banyak data yang menunjukkan daun sirih merah dapat menurunkan  kadar  glukosa  darah  sekaligus dapat  meningkatkan  antioksidan  dalam  tubuh penderita diabetes atau kondisi hiperglikemik.
Berdasarkan  uraian  di  atas  diperoleh permasalahan,    apakah  kadar  glukosa  darah dan    kadar  GPx  tikus    hiperglikemik  dapat dipengaruhi    oleh    pemberian    daun  sirih merah.  Tujuan    penelitian    ini    adalah mengetahui pengaruh ekstrak daun sirih merah terhadap  kadar  glukosa  darah  dan  kadar glutation  peroksidase  (GPx)  tikus  jantan hiperglikemik. Penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi ilmiah mengenai  efek    pemberian  ekstrak  daun  sirih merah  untuk    memperbaiki  kadar  antioksidan endogen tikus  jantan hiperglikemik dilihat dari aktivitas    glutation    peroksidase  (GPx)  dan kadar glukosa darah. Berdasarkan informasi ini diharapkan dapat menjadi acuan bagi penelitian  selanjutnya  untuk  pengembangan
potensi    daun    sirih    merah  sebagai  obat alternatif bagi penderita diabetes mellitus.

## METODE PENELITIAN
Hewan  Coba. Penelitian  ini  menggunakan 25  tikus  strain Wistar jantan  sehat  berumur  8- 10  minggu  dengan  berat  badan  minimal  180 gram.  Tikus  dalam  penelitian  ini  didapatkan dari laboratorium hewan coba Jurusan Biologi Universitas  Negeri  Semarang.  Perlakuan terhadap  hewan  uji  ini  sesuai  dengan  surat lulus  etik  yang  dikeluarkan  oleh  Komisi  Etik Penelitian  Kesehatan  (KEPK)  Universitas Negeri  Semarang.  Penelitian  dibagi  menjadi lima  kelompok  yaitu  kelompok  kontrol  positif (K+),  kelompok  kontrol  negatif  (K-),  dan  tiga kelompok  perlakuan.  Setiap  kelompok  terdiri dari  lima  tikus  jantan Wistar dan  ditandai dengan  pewarna  pikrat.  Tujuan  pewarnaan pikrat  adalah  memudahkan  peneliti  untuk identifikasi  hewan  coba  pada  tiap  kelompok yang terdiri lebih dari satu individu. Kelompok K+  adalah  kelompok  yang  diberi  obat glibenklamid 0,09 mg/200 gBB. Kelompok K- tidak  diberi  ekstrak  daun  sirih  merah,  hanya diberi minum ad libitum . Kelompok perlakuan P1, P2, dan P3 diberi ekstrak daun sirih merah dengan  dosis  masing-masing  100,  200,  dan 400  mg/kgBB.  Tikus  ditempatkan  di  kandang dengan  ukuran  35x  45x15  cm 3 yang berisi sekam  padi  dan  dilengkapi  pakan  standar. Kandang tikus dibersihkan dan diganti dengan sekam  baru  tiap  3  hari  sekali.  Tikus diaklimatisasi selama 7 hari sebelum perlakuan. Aklimatisasi  bertujuan  agar  tikus beradaptasi    dengan  lingkungan  baru  dan meminimalisasi  efek  stres  pada  tikus  yang dapat berpengaruh pada proses penelitian.
Ekstraksi  Daun  Sirih  Merah. Preparasi daun sirih merah dilakukan dengan menyiapkan  dan  mencuci  bersih  dengan  air mengalir.  Daun  sirih  merah  diiris  tipis  dan dikering  anginkan.  Pengeringan  daun  sirih merah diletakkan di atas wadah tampah bambu dan  diletakkan  di  tempat  terbuka  dengan sirkulasi  udara  baik  dan  tidak  terkena  sinar matahari  secara  langsung.  Daun  sirih  merah yang  telah  kering  dihaluskan  menggunakan blender sampai berbentuk serbuk. Serbuk halus ditimbang sebanyak 100 gram dan dimasukkan ke  dalam  botol  kaca,  kemudian  ditambahkan dengan pelarut etanol 70%  sebanyak 1000 mL (perbandingan serbuk dan pelarut adalah 1:10).
Botol kaca yang berisi serbuk daun sirih merah dan pelarut etanol ditutup dan dibiarkan selama tiga  hari  sambil  diaduk  setiap  sehari  sekali, kemudian  dilakukan  penyaringan  dengan kertas  saring  untuk  mendapatkan  cairan  dari hasil perendaman. Hasil penyaringan diuapkan dengan vacum  rotary  evaporator untuk mendapatkan  ekstrak  kental  daun  sirih  merah. Ekstrak  kental  kemudian  diuapkan  dengan oven  untuk  memperoleh  ekstrak  dalam  bentuk serbuk (kering).
Pengkondisian Hiperglikemik. Tikus dipuasakan (10-12 jam) terlebih dahulu namun tetap  diberikan  air  minum ad  libitum , selanjutnya  tikus  diinjeksi  dengan  aloksan monohidrat    yang  dilarutkan  dalam  larutan NaCl  fisiologis  steril  dengan  dosis  120 mg/kgBB secara intra peritoneal satu kali [16]. Setelah    diinjeksi  aloksan,  kemudian  satu  hari berikutnya  dilanjutkan  dengan  uji  toleransi glukosa  oral.  Pemberian  toleransi          glukosa secara     oral     bertujuan   agar   tidak terjadi hipoglikemik  secara  drastis  yang  dapat menyebabkan  kematikan  pada  hewan  uji. Pemberian toleransi glukosa dilakukan  selama tiga    hari    berturut-turut  dengan  volume pemberian    1,35  gram  dalam    2  mL  larutan. Parameter  keberhasilan  penginduksian  yaitu naiknya  kadar  glukosa  darah  puasa  yang melebihi 125 mg/dL [1].
Pengambilan  Darah. Tikus  penelitian dipuasakan    selama    (10-12  jam)  namun  tetap diberi  minum ad  libitum ,  kemudian  dilakukan pengambilan  darah  untuk  pemeriksaan  kadar glukosa  darah  puasa.  Pengambilan  darah dilakukan  melalui sinus  retro-orbitalis .  Tikus dikondisikan  senyaman  mungkin  dengan dipegang  dan  dijepit  di  bagian  tengkuk. Canthus medialis (di bawah bola mata) digores menggunakan  tabung      mikrohematokrit sampai      mengenai vena  retro  orbitalis . Sampel  darah  yang  keluar  ditampung  dalam microtube sebanyak  2  mL  (10%  total  volume darah). Pemberhentian darah dilakukan dengan menutup  mata  dengan  kertas tissue bersih sampai  luka  goresan  menutup  dan  darah  tidak terus-menerus keluar.
Pemberian  Perlakuan. Ekstrak  daun  sirih merah  dilarutkan  dengan  akuades  terlebih dahulu,  kemudian  diberikan  ke  kelompok  P1, P2,  dan  P3  sesuai  dengan  dosis  yang  telah ditentukan.  Kelompok  K+  adalah  kelompok
yang  diberi  obat  glibenklamid  dosis  0,09 mg/200gBB dengan pelarut akuades.
Kelompok  K-  tidak  diberi  ekstrak  daun  sirih merah,  hanya  diberi  minum ad  libitum . Perlakuan  ekstrak  daun  sirih merah maupun glibenklamid  pada  masing-masing  perlakuan diberikan pada pagi hari secara oral selama 28 hari  menggunakan  sonde  lambung.  Pemberian perlakuan  dilakukan  di  laboratorium  hewan coba Biologi Universitas Negeri Semarang.
Metode  Pengambilan  Data. Pengukuran kadar  glukosa  darah  dilakukan  sebanyak  tiga kali pada tiap kelompok perlakuan. Pengukuran pertama bertujuan untuk mengetahui  kadar  glukosa  awal  sebelum perlakuan  Kadar  Glukosa  Darah  0  (KGD  0). Pengukuran kedua dilakukan setelah tujuh hari induksi  aloksan    (KGD  1)  dan  toleransi glukosa  oral  untuk  mengetahui  kondisi hiperglikemik  pada  tiap  hewan  uji  (KGD  2). Pengukuran  ke  tiga  dilakukan  pada  hari  ke  29 untuk  mengetahui  hasil  akhir  kadar  glukosa darah setelah perlakuan oral ekstrak daun sirih merah.  Pengukuran  kadar  glukosa  darah dilakukan  di  laboratorium  Biokimia  Jurusan Biologi Universitas Negeri Semarang. Pengukuran kadar glukosa darah menggunakan metode Glucose Oxidase-Phenol 4- Aminoantipirin (GOD-PAP) pada
spektrofotometer  dengan  satuan  (mg/dL). Proses  pengukuran  kadar  glukosa  dengan mengambil  sampel  darah  dari  hematokrit kapiler  melalui sinus  retro-orbital tikus  dan disimpan  dalam  1,5  mL microtube .  Sampel darah disentrifugasi pada 3000 rpm selama 10 menit.  Serum  darah  diambil  sebanyak  10  µL dengan  mikropipet  dan  dimasukkan  ke  dalam kuvet,  kemudian  dicampur  dengan  pereaksi GOD-PAP  sebanyak  1000  µL  lalu  diinkubasi selama  10  menit.  Larutan  standar  yang digunakan  sebanyak  10  µL  dimasukkan  ke dalam  kuvet  lain.  Sedangkan  larutan  blanko yang digunakan adalah akuades sebanyak 1000 µL. Selanjutnya, pengukuran absorbansi sampel  uji  dan  absorbansi  standar  dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer dengan panjang  gelombang  546  nm.  Prinsip    metode GOD-PAP    ini    adalah  kadar  glukosa ditentukan  setelah  terjadi  oksidasi  enzimatis dengan  adanya  glukosa    oksidase,  hidrogen peroksida yang terbentuk akan bereaksi dengan peroksidase,  phenol  serta  4-aminophenazone membentuk  warna  quinoneimine  (merah violet).  Hasil  nilai  kadar  glukosa  darah  yang
ditetapkan adalah satuan (mg/dL). Pengukuran kadar  GPx  dilakukan  pada  hari  ke-29  setelah pemberian ekstrak daun sirih merah selama 28 hari. Pengukuran ini dilakukan di Laboratoeium  PAU  (Pusat  Antar  Universitas) Universitas  Gajah  Mada,  Yogyakarta.  Proses pengukuran  kadar  antioksidan glutathione peroxidase (GPx) dengan mengambil 100  µL serum  darah  dan  ditambahkan  200    µL    NaCl fisiologis.  Kemudian diambil  0,1  mL  larutan campuran tersebut  dan  ditambahkan  0,4  mL triton-X  0,5%,    dan    campuran  ini  disebut hemolisat.    Sebanyak  100    µL  hemolisat dimasukkan ke dalam  kuvet dan  ditambahkan 100  µL  larutan  Drabkin  lalu  dihomogenkan, kemudian  ditambahkan  2,6  mL  buffer  fosfat dan  dihomogenkan  kembali.  Selanjutnya ditambahkan  0,1  mL  NADPH;  0,01  mL GSSG-R; 0,01 mL NaN3;  0,1 mL GSH; 1  mL H 2 O 2 dan  dikocok  perlahan.  Larutan  blanko yang  digunakan  adalah  100  µL  akuades. Campuran pereaksi kemudian diukur absorbansinya  dengan  spektrofotometer  pada panjang gelombang  340  nm. Hasil nilai kadar GPx yang ditetapkan adalah satuan (U/mg).
Analisis  Data. Data    yang    diperoleh dianalisis    menggunakan  perhitungan   statistik one  way ANOVA  ( Analysis  of  Variance ). Kemudian  dilanjutkan post-hoc Tukey  HSD pada taraf uji 5%. Sedangkan untuk mengetahui mengetahui seberapa besar pengaruh  yang  diberikan  ekstrak  daun  sirih merah,  maka  digunakan  perhitungan  analisis statistik regresi linier. Analisis statistik dibantu dengan software program SPSS versi 23.0 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengkondisian  tikus  hiperglikemik  pada masing-masing  kelompok  didapatkan  data hasil  pengamatan  dengan  melihat  kadar glukosa  darahnya.  Kadar  glukosa  darah  yang didapat  sesuai  dengan  kriteria  hiperglikemik tikus  eksperimental  dengan  karakteristik  mirip diabetes  mellitus  tipe  1  pada  manusia.  Data kadar glukosa darah disajikan dalam Tabel 1.
Tabel  1 .  Rerata  kadar  glukosa  darah  puasa selama penelitian. Kelompok Rerata Kadar Glukosa Darah (mg/dL) KGD 0    X ± SD KGD 1    X ± SD KGD 2  X ± SD K+ 73,74±16,5  147,37±33 52,50±5,7 K- 120,97±4,8  178,66±22,1  108,79±27,8 P1 91,03±10,8  132,57±9,1  62,69±11,2 P2 106,19±25,4  141,49±10,9  56,49±8,8 P3 70,06±12,9  162,67±7,2  56,46±12,1
Keterangan:  X  (nilai  rata-rata);  SD  (standar  deviasi);  K+ (kelompok  kontrol  positif);  K-  (kelompok kontrol negatif);  P1  (kelompok  perlakuan  1);  P2 (kelompok perlakuan 2); P3 (kelompok perlakuan 3);  KGD  0  (kadar  glukosa  darah  puasa  sebelum induksi  aloksan);  KGD  1  (kadar  glukosa  darah puasa  setelah  induksi  aloksan  120  mg/kgBB); KGD  2  (kadar  glukosa  darah  puasa  setelah perlakuan ekstrak daun sirih merah);
Pemberian ekstrak daun sirih merah selama 28 hari terhadap kadar glukosa darah dan kadar GPx  tikus  jantan  hiperglikemik,  didapatkan data rerata kadar glukosa darah dan kadar GPx seperti pada Tabel 2.
Tabel  2. Kadar  glukosa  darah  puasa  (mg/dL) dan  kadar  GPx  (U/mg)  setelah perlakuan.
Kelompok Rerata KGD 2 (mg/dL) GPx (U/mg) X ± SD X ± SD K+ 52,50 ± 5,78 a 40,59 ± 2,08 a K- 108,79 ± 27,88 b 23,15 ± 2,61 b P1 62,69 ± 11,23 a 58,03 ± 2,85 c P2 56,49 ± 8,82 a 71,61 ± 1,48 d P3 56,46 ± 12,07 a 83,50 ± 2,40 e
Keterangan:  Angka  yang  diikuti  oleh  huruf  berbeda  pada kolom  yang  sama  menunjukkan  perbedaan signifikan dengan taraf ketelitian p<0,05.
Berdasarkan uji normalitas diketahui bahwa data kadar glukosa darah dan GPx berdistribusi normal  dan  memiliki  varians  sama  atau homogen.  Hasil  analisis One  Way ANOVA menunjukkan  ekstrak  daun  sirih  merah berpengaruh secara signifikan terhadap penurunan kadar glukosa darah dan kenaikkan kadar GPx tikus jantan hiperglikemik (p<0,05). Oleh karena itu dilanjutkan uji lanjut Tukey HSD.
Hasil  uji  Tukey  HSD  (notasi  huruf  pada kolom  Tabel  2)  menunjukkan  bahwa  kadar glukosa  darah  pada  kelompok  K+  berbeda nyata dengan kelompok K-   dan tidak berbeda nyata  dengan  kelompok  P1,  P2  dan  P3. Sedangkan  kadar  GPx  kelompok  K+  berbeda
nyata  dengan  kelompok  lainnya  (K-,  P1,  P2, P3).  Pada  kelompok  kontrol  negatif  memiliki kadar  glukosa  darah  tertinggi  dan  kadar  GPx terendah. Kelompok kontrol negatif digunakan sebagai  kontrol  hiperglikemik  yang  tidak diberikan perlakuan ekstrak daun sirih merah. Pada  penelitian  ini  untuk  mengetahui besarnya  pengaruh  yang  diberikan  ekstrak daun  sirih  merah  dalam  menurunkan  kadar glukosa  darah  dan  menaikkan  kadar  GPx, maka  dilakukan  uji  statistik  regresi  linier. Adapun  ringkasan  hasil  analisis  regresi  linier dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel  3. Hasil  analisis  regresi  linier  kadar glukosa  darah  dan  kadar  GPx  tikus jantan hiperglikemik.
Perlakuan Signifikansi ( p < 0,05) R 2 (%) Persamaan Ý KGD 2 0,04 37,5 Ý =90,36+(-0,110)x GPx 0,00 92,9 Ý =27,41+0,120x
Hasil  analisis  statistik  regresi  linier  dari data  kadar  glukosa  darah  diperoleh  p<0,05. Nilai  R 2 (koefisien  determinasi)  menunjukkan pengaruh  yang  diberikan  ekstrak  daun  sirih merah  terhadap  kadar  glukosa  darah  tikus jantan  hanya  sebesar  37,5%,  dan  persamaan regresinya  adalah  Y  =  90,36+(-0,110)x. Koefisien  bernilai  negatif  (-0,110)  artinya semakin  besar  dosis  ekstrak  daun  sirih  merah, maka kadar glukosa semakin turun. Sedangkan  analisis  statistik  pengaruh  regresi linier  data  kadar  GPx,  diketahui  bahwa  dosis ekstrak daun sirih merah memberikan hubungan  pengaruh  yang  signifikan  terhadap kadar GPx darah tikus jantan (p < 0,05).  Nilai R 2 menunjukkan  pengaruh  yang  diberikan ekstrak  daun  sirih  merah  terhadap  kadar  GPx sebesar    92,9%,  dan  persamaan  regresinya adalah    Y  =27,41+0,120x.  Koefisien  bernilai positif  artinya  semakin  besar  dosis  ekstrak daun  sirih  merah,  maka  kadar  GPx  semakin naik.
Pemberian  ekstrak  daun  sirih  merah  secara oral  selama  28  hari  memberikan  pengaruh signifikan  terhadap  penurunan  kadar  glukosa darah tikus jantan hiperglikemik.
Hasil penelitian memperlihatkan pemberian ekstrak  daun  sirih  merah  dosis  100,  200,  400 mg/kgBB/hari  pada tikus jantan hiperglikemik dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah.  Hasil penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Andhi  [17]  yang  menyatakan ekstrak etanol  daun sirih merah dosis 50, 100,
dan  200  mg/kgBB  dapat  menurunkan  kadar glukosa  darah  pada  tikus  Wistar  model diabetes mellitus. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak  daun  sirih  merah  mempunyai  potensi sebagai  obat  antidiabetes.  Penelitian  lainnya yang dilakukan Dewi [18] dengan menggunakan  ekstrak  etanol  70%  daun    sirih merah  pada    dosis    50    mg/kgBB    dan  dosis 100    mg/kgBB,    mampu    menurunkan  kadar glukosa    darah   tikus    putih   jantan  sebanding dengan  pemberian    glibenklamid    0,02% (dosis    1  mL/kg  BB).  Menurut  Wibawa  [19] pemberian  ekstrak  etanol buah  naga  daging putih  ( Hylocereus undatus ) yang mengandung flavonoid    memiliki    efek    sebanding  dengan glibenklamid    sebagai    penurun  kadar  glukosa darah.
Penurunan kadar glukosa darah dikarenakan  pemberian  ekstrak  daun  sirih merah dapat dijelaskan melalui dua mekanisme utama sebagai akibat kandungan antioksidan di dalamnya,  yaitu  secara  intrapankreatik  dan ekstrapankreatik.  Mekanisme  intrapankreatik bekerja  dengan  cara  memperbaiki  atau meregenerasi  sel  β  pankreas  yang  rusak, melindungi  sel  β  dari  kerusakan,  serta merangsang pelepasan insulin [20]. Peningkatan sekresi hormon insulin disebabkan  oleh  efek  perangsangan  flavonoid terhadap  saraf  simpatis  (simpatomimetik). Kappel  [18]  menegaskan  bahwa  flavonoid menghasilkan  peningkatan  konsentrasi  ion Ca 2+ intraseluler dan menghambat kanal KATP (ATP-  s ensitive  pottassium  channel )  di  pulau Langerhans pankreas. Di samping itu, mekanisme  ekstrapankreatik  dengan  melalui berbagai  mekanisme,  seperti  flavonoid  dapat menurunkan  kadar  glukosa  darah  dengan  cara menghambat  absorpsi  glukosa  dalam  usus, meningkatkan  transportasi  glukosa  di  dalam darah,  merangsang  sintesis  glikogen,  dan menghambat sintesis glukosa dengan menghambat  enzim  glukosa  6-fosfatase,  dan fruktosa 1,6-bifosfatase.
Pemberian  ekstrak  daun  sirih  merah  pada kelompok  P1,  P2,  dan  P3  menunjukkan pengaruh  signifikan  terhadap  kenaikkan  kadar GPx,  dan  nilai  kadar  GPx  ketiga  kelompok perlakuan  berbeda  nyata  dengan  kelompok kontrol  negatif.  Hal  ini  dikarenakan  ekstrak daun sirih merah mengandung senyawa seperti flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan  tanin, sehingga  diasumsikan  zat  tersebut  berfungsi sebagai  antioksidan  yang  berperan  dalam
menurunkan stres oksidatif pada tikus hiperglikemik pasca induksi aloksan [15].
Kelompok  kontrol  negatif  (K-)  penelitian ini  digunakan  sebagai  kontrol  hiperglikemik yang  hanya  diberikan  aloksan  120  mg/kgBB dan  tidak  diberikan  perlakuan  ekstrak  daun sirih merah. Induksi  aloksan digunakan  untuk membuat    tikus  hiperglikemik.    Berdasarkan hasil    penelitian    [16]  induksi    aloksan  dosis 120  mg/kgBB    menghasilkan    hewan    coba model    hiperglikemik  autoimun    yang    mirip dengan  DM  tipe-1  pada  manusia.
Kriteria  hiperglikemik  yaitu  kenaikkan kadar  glukosa  darah  puasa  >125  mg/dL  [1]. Pada penelitian ini keberhasilan penginduksian aloksan  dapat  dilihat  pada  (Tabel  1).  Aloksan dapat  menyebabkan  peningkatan  produksi radikal  bebas  dalam  tubuh.    Aloksan  bersifat sitotoksik  spesifik  pada  sel  β  pankreas  dan dapat memicu gugus radikal yang merusak sel β Langerhans akibat peningkatan radikal bebas dalam  tubuh.  Selain  kondisi  tersebut,  induksi aloksan  pada  hewan  coba  menyebabkan  stres oksidatif [22].
Stres      oksidatif  adalah  kondisi  ketidak- seimbangan antara  jumlah radikal  bebas yang ada  dengan    jumlah  antioksidan  di  dalam tubuh  [11]. Menurut Gumieniczek [23],  stres oksidatif    dapat    menurunkan    status antioksidan    pada  penderita  diabetes  akibat peningkatan    produksi  radikal  bebas.  Tabel  2 memperlihatkan  pada  kelompok      (K-)  nilai kadar GPx lebih rendah dibandingkan kelompok  lainnya  dimana  kelompok  K-  tikus hiperglikemik  tidak  diberi  perlakuan  apapun, sedangkan  kelompok  perlakuan  ekstrak  daun sirih  merah  memiliki  kadar  GPx  lebih  tinggi dibandingkan  kelompok  K-.  Hal  ini  terjadi peningkatan  kadar  GPx  tikus  hiperglikemik pasca pemberian ekstrak daun sirih merah.
Menurut  Parildar  [15]  ekstrak  daun  sirih merah mengandung senyawa flavonoid, alkaloid,  saponin,  dan  tanin,  yang  berfungsi sebagai  antioksidan  yang  berperan  dalam menurunkan stres oksidatif. Peningkatan kadar GPx pada penelitian ini dapat dijalskan melalui mekanisme  kerja  senyawa  yang  terkandung dalam daun sirih merah.  Senyawa  antioksidan ekstrak    daun    sirih    merah    mampu menetralkan  radikal  bebas  berlebih  di    dalam sel β pankreas  dengan  cara menyumbangkan elektronnya    atau    memutus  reaksi    berantai dan    menyebabkan    radikal  bebas  menjadi stabil  [24]  .  Kandungan  zat  antioksidan  daun sirih  merah  dapat  meredam  radikal  bebas
berlebih    melalui  pemberian  atom  hidrogen secara  langsung  dan  akan  meningkatkan aktivitas  antioksidan  endogen,  seperti  GPx [25].  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil  penelitian yang  dilakukan  Kalaivani  [26],  memberikan ekstrak    daun    Cassia    ( Cassia    auriculata ) yang  mengandung  senyawa  aktif  flavonoid pada    tikus    diabetes    dapat    meningkatkan aktivitas  GPx.  Demikian  pula  yang  dilakukan Bhattacharjee  [27],    hasil  penelitiannya membuktikan di dalam  biji kapulaga  terdapat senyawa    flavonoid  yang    dapat  menetralkan lipid  peroksida dan hidrogen peroksida seperti peran antioksidan GPx dalam tubuh.
Kelompok  K+  pada  penelitian      ini digunakan      obat  antihiperglikemik  oral sebagai   pembanding.    Obat  antihiperglikemik yang digunakan yaitu glibenklamid. Glibenklamid merupakan senyawa obat golongan sulfonilurea yang digunakan sebagai antidiabetik  oral  dan  merupakan  pilihan pengobatan      untuk    diabetes    melitus  pada pasien  dengan  hiperglikemia  [28].  Keadaan hiperglikemik  yang  terjadi  pada  tikus  jantan setelah diinduksi aloksan adalah kerusakan sel β  pankreas,  sehingga  produksi  dan  sekresi insulin akan terhambat. Pemilihan glibenklamid  sebagai  obat  antihiperglikemik pembanding dianggap tepat, karena mekanisme        kerja  glibenklamid  dalam  tubuh yaitu  dengan  cara  menstimulasi  produksi insulin  dari  sel  β  pankreas  dan  meningkatkan sekresi insulin dari sel β pankreas [29].
Pengukuran  aktivitas  antoksidan  suatu senyawa  dalam  kemampuannya  meredam radikal bebas dapat melalui penentuan IC 50 dan uji  DPPH  ( 2,2-  -diphenyl-1-picrylhydrazyl ). IC 50 merupakan  konsentrasi  substrat  atau sampel  yang  akan  menyebabkan  reduksi terhadap  aktivitas  DPPH  sebesar  50%. Semakin kecil nilai IC 50 berarti semakin tinggi aktivitas  antioksidan.  Ekstrak  etanol  sirih merah  memiliki  potensi  antioksidan  30,20% (IC 50 )    [30].  Penelitian  Tonahi  [31]  melalui pengujian antioksidan ekstrak daun sirih merah memiliki  nilai  IC 50 sebesar  47,45  ppm,  dan termasuk ke dalam golongan antioksidan yang kuat.
Senyawa    antioksidan    ekstrak    daun    sirih merah  mampu  menetralkan  radikal  bebas berlebih  di    dalam    sel    β  pankreas,    dengan cara  menyumbangkan    elektronnya    atau memutus  reaksi    berantai    dan    menyebabkan radikal  bebas  menjadi    stabil    [24],  sehingga dapat    menghentikan    atau  menghambat
kerusakan    oksidatif  pada    sel    β  pankreas karena  pemberian  aloksan.  Penelitian  Erviana [32] mengungkapkan bahwa kapasitas antioksidan  dari  sirih  merah  paling  tinggi adalah  senyawa  flavonoid  yang  berhasil diekstraksi dengan pelarut etanol.
Senyawa  fenolik  pada  tanaman    berperan terhadap  penangkapan  radikal  bebas  dengan kapasitasnya  sebagai  antioksidan.  Antioksidan pada  flavonoid  dapat menyumbangkan  atom hidrogennya  yang  akan  teroksidasi  dan berikatan  dengan  radikal  bebas  sehingga radikal    bebas    menjadi  senyawa  lebih  stabil. Mekanisme    lain    adalah  kemampuan flavonoid    terutama quercetin dalam menghambat  GLUT  2 mukosa usus sehingga dapat  menurunkan    absorbsi  glukosa.  Hal  ini menyebabkan pengurangan penyerapan glukosa    dan    fruktosa    dari  usus    sehingga kadar  glukosa  darah turun.  GLUT  2  diduga merupakan transporter  mayor glukosa  di  usus pada kondisi  normal [25].
Penelitian  yang  dilakukan  Song  [25] didapatkan bahwa flavonoid dapat menghambat  penyerapan  glukosa.  Ketika quercetin yang  tertelan  dengan  glukosa, hiperglikemia    secara    signifikan  menurun. Hal    ini  menunjukkan  bahwa quercetin dapat menghambat  penyerapan  glukosa  melalui GLUT-2 [25]. Flavonoid juga dapat menghambat
fosfodiesterase sehingga meningkatkan cAMP pada sel β pankreas [33]. Peningkatan cAMP akan menstimulasi pengeluaran  protein  kinase  A  (PKA)  yang dapat  merangsang  sekresi  insulin  semakin meningkat [34]. Untuk  keamanan penggunaan sirih  merah,  penelitian    Kendran  [35] membuktikan bahwa pemberian ekstrak etanol 70%  sirih  merah  tidak  memengaruhi  aktivitas aspartate  transaminase (AST)  dan alanine transaminase (ALT)  atau  disebut  sebagai SGOT  dan  SGPT  pada    tikus  diabetes  dan ekstrak tersebut  bersifat tidak toksik, sehingga penggunaannya dapat lebih
dipertanggungjawabkan.
Pada  penelitian  ini,  didapatkan  dosis ekstrak  sirih  merah  efektif  dalam  menurunkan kadar  glukosa  darah  yaitu  dosis  1  pada kelompok  P1  (100  mg/kgBB),  karena  tidak terdapat perbedaan bermakna antara efek yang ditimbulkan  oleh  kelompok  P1  dengan kelompok  P2,  serta  kelompok  P1  dengan kelompok  P3.  Kemungkinan  sudah  terjadi kejenuhan  pada  reseptor α-glukosidase sehingga peningkatan dosis tidak
menghasilkan  efek  yang  lebih  baik  [36-37]. Kadar  GPx  masing-masing  dosis  memiliki rata-rata yang berbeda signifikan dengan dosis lainnya,  artinya  masing-masing  dosis  dapat memberikan  efek  menaikkan  kadar  GPx  dan rerata masing-masing dosis berbeda signifikan satu  sama  lain.  Dosis  efektif  ditentukan berdasarkan  tingkatan  dosis  (seri  dosis). Penentuan dosis efektif diupayakan penggunaan  dosis  rendah  yang  sudah  atau dapat  memberikan  efek  yang  bermakna.  Hasil yang  dapat  ditarik  dari  penelititan  ini  adalah dosis  efektif  ekstrak  daun  sirih  merah  dalam menurunkan kadar glukosa darah dan menaikkan kadar GPx adalah 100 mg/kgBB.

## KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  daun  sirih  merah  pada tikus jantan hiperglikemik berpengaruh signifikan  terhadap  penurunan  kadar  glukosa darah dan kenaikan kadar glutation peroksidase  (GPx),  sedangkan  dosis  100 mg/kgBB  merupakan  dosis  efektif  dalam menurunkan kadar glukosa darah dan menaikkan kadar GPx.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] American    Diabetes    Association (ADA) (2014) Diagnoses and classification of diabetes mellitus, Diabetes Care 37(1): 81–90.
[2] Brownlee,  M  (2001)  Biochemistry  and molecular  cell  biology  of  diabetic complications. Nature 414: 813–820.
[3] Muhtadi,  Primarianti  AU,  Sujono  TA (2015)  Antidiabetic  activity  of  durian ( Durio  zibethinus Murr.)  and  rambutan ( Nephelium lappaceum L.) fruit peels in alloxan  diabetic  rats.  Procedia  Food Science 3: 255–261.
[4] Nair  SP,  Shah  NC,  Shah  RM  (2012)
Alteration  in  enzymatic  antioxidant defense in diabetes mellitus.
Biomedical Research 23(3): 402–404.
[5] Kabel  AM  (2014)  Free  radicals  and antioxidants:  role  of  enzymes  and nutrition. World Journal of Nutrition and Health 2(3): 35-38.
[6] Chevion  S,  Danny  SM,  Yuval  H,  Yoav S,  Gilad  R,  Benny  A,  Eduard  B,  Earl
RS, Yoram E (2003) Plasma antioxidant  status  and  cell injury after
severe  physical  exercise.  PNAS  100(9):
5119–5123.
[7] Ozden  M,  Maral  H,    Akydin    D, Cetnalp    P,    Kalender    B  (2002) Erythrocyte    glutathione    peroxidase activity,    plasma  malondialdehyde    and erythrocyte    glutathione    levels    in hemodialysis and CAPD patients.
Clinical Biochemistry 35: 269–273.
[8] Paşaoğlu  H,    Banu    S,    Neslihan    B (2004)    Lipid    peroxidation    and resistance    to    oxidation    in    pantiens with  type  2  diabetes mellitus. Tohoku Journal  Experimental  Medicine  203:
211–218.
[9] Poitout  V,  Robertson  RP  (2008)
Glucotoxicity:  fuel  excess  and  beta  cell dysfunction.  Endocrine  Reviews 29(3): 351-366.
[10] Pradhan  D,  Suri  K,  Pradhan  DK, Biswasroy P (2013) Golden heart of the nature: Piper betle. Journal of Pharmacogn Phytochem 1: 147–167.
[11] Werdhasari  A  (2014)  Peran  antioksidan bagi kesehatan. Jurnal Biotek Medisiana
Indonesia 3(2): 59-68. [12] Rohyami Y (2008) Penentuan
kandungan flavonoid dari ekstrak metanol  daging  buah  mahkota  dewa ( Phaleria  macrocarpa Scheff  Boerl).
Jurnal Logika 5(1): 1-8.
[13] Rosalina  TRT,  Mohamed  S,    Samaneh GF,    Noordin  MM,  Goh  YM,  Manap MYA  (2011)    Polyphenol  rich  oil  palm leaves    extract    reduce    hyperglycaemia and  lipid    oxidation    in    STZ-rats. International  Food  Research Journal  18: 179-188.
[14] Daniel  (2010)  Isolasi  dan  identifikasi senyawa flavonoid pada fraksi etil asetat dari  daun  tumbuhan  sirih  merah  ( Piper Crocatum Ruiz  &  Pav).  Mulawarman Scientiae 9(1): 17-26.
[15] Parildar  H,  Serter  R,  Yesilada  E  (2011) Diabetes  mellitus  and  phytotherapy    in Turkey.  Journal  of  Pakistan  Medical Association 61(11):  1116-1120.
[16] Jain S, Bhatia G, Barik R, Kumar P, Jain A, Dixit VD (2010) Antidiabetic activity of Paspalum  scrobiculatum Linn.  in alloxan induced diabetic rats. Journal of Ethnopharmacology 127: 325–328.
[17] Andhi  JS  (2016)  Antidiabetic  and antioxidant  activities  of  70%  ethanol- diluted extract of Piper crocatum leaves
in  stretozotocin  induced  diabetic  rats. Jurnal  Kedokteran  Brawijaya 29(1): 1- 4.
[18] Dewi  YF,  Anthara  MS,  Dharmayudha, AAGO  (2014)  Efektifitas  ekstrak  daun sirih  merah  ( Piper  crocatum )  terhadap penurunan  kadar  glukosa  darah  tikus putih jantan ( Rattus novergicus ) yang di induksi  aloksan.  Veteriner  Udayana 6(1): 73-79.
[19] Wibawa PAS, Antara MS,  Dharmayuda O  (2013)  Identifikasi    senyawa    kimia ekstrak    buah  naga    putih    dan pengaruhnya    terhadap  glukosa    darah tikus    diabetes.    Indonesia  Medicus Veterinus 2(2): 151-61.
[20] McWhorter LS (2011) Biological complementary  therapies:  a  focus  on botanical  products  in  diabetes.  Journal Diabetes Spectrum 14(4): 199-208.
[21] Kappel  VD,  Frederico  MJ,  Postal  BG, Mendes  CP,  Cazarolli  LH,    Silva  FR (2013) The role of calcium in intracellular  pathways  of  rutin  in  rat pancreatic islets: Potential insulin secretagogue  effect.  European  Journal Pharmacology 702: 264–268.
[22] Szkudelski T (2001) The  mechanism of alloxan and sreptozotocin action in cells of  the  rat  pancreas.  Physiological Research 50(6): 537-546.
[23] Gumieniczek A, Hanna H, Zbigniew W, Justyna N (2002) Changes in antioxidant status    of    heart    muscle    tissue    in experimental  diabetes  in  rabbits.  Acta Biochimica Polonica 49(2): 529–535.
[24] Suarsana  N,  Priosoeryanto  B,  Wresdiati T,  Bintang M (2006) Sintesis  glikogen hati  dan  otot  pada  tikus    diabetes  yang diberi  ekstrak  tempe.  Jurnal  Veteriner 11(3): 190-195.
[25] Song  J,  Kwon  O,  Chen  S,  Daruwala  R, Eck  P,  Park  JB,  Levine  M  (2002)
Flavonoid    inhibition    of  SVCT1  and
GLUT2, intestinal trasporters for vitamin    C    and    glucose.    Journal  of
Biological  Chemistry  277(18):  15252- 15260.
[26] Kalaivani A, Umamaheswari A, Vinayagam  A,  Kalaivani    K  (2008) Anti–hyperglycemic    and    antioxidant properties    of Cassia  auriculata leaves and flowers on alloxan induced diabetic rats. Pharmacologyonline 1: 204–217.
[27] Bhattacharjee  S,  Rana  T,  Sengupta    A (2007)  Inhibition  of  lipid peroxidation and  enhancement  of  GST  activity  by cardamom  and    cinnamon    during chemically induced colon carcinogenesis in  Swiss  albino  mice.  Asian  Pacific Journal  Of  Cancer  Prevention  8:  578– 582.
[28] Nathan    D,    Buse    J,    Davidson    M, Ferrannini  E,  Holman  R,  Sherwin  R
(2009) Medical management of hyperglycemia  in  type  2  diabetes:  A consensus  algorithm    for    the    initiation and  adjustment  of  therapy  a consensus statement    of    the    american  diabetes association    and    the    european association  for  the  study  of  diabetes. Diabetes Care 32: 193–203.
[29] Rajasekaran S, Sivagnanam K,
Subramanian  S  (2005)  Antioxidant Effect  of Aloe    vera gel    extract    in streptozotocin-induced  diabetes  in  rats. Pharmacology 57: 90-96.
[30] Maslikah  S,  Lestari  SR,  Wulandari  L, (2016)  Active  compounds  of  red  betel ( Piper  crocatum )  extract  for  safe antioxidant as cytotoxicity test revealed. Journal  of  ChemTech  Research  9(4): 513-520.
[31] Tonahi  JMM,  Nuryanti  S,  Suherman (2014)  Antioxidant  of  red  betel  ( Piper crocatum )  leaves.  Jurnal  Akademika Kimia 3(3): 158-164.
[32] Erviana  R,  Purwono  S  (2011)  Active compounds  isolated  from  red  betel ( Piper  crocatum Ruiz  &  Pav.)  leaves active  against  Streptococcus  mutans through its inhibition effect on glucosyltransferase  activity.  Journal  of Medical Sciences 43: 71–78. [33] Puspati NKS, Anthara MS, Dharmayudha AAGO (2013)
Pertambahan    bobot    badan    tikus diabetes  melitus  dengan  pemberian ekstrak  etanol    buah    naga    daging putih.  Indonesia  Medicus  Veterinus 2(2): 225-234.
[34] Harapan,  Jamil  KF,  Hayati    Z, Muhammad    I  (2010)  Peran    puasa dalam    remodelling    sel  enteroendokrin untuk  mencegah  diabetes melitus tipe 2 JIMKI 1(1): 36-40.
[35] Kendran  AAS,  Gelgel  KTP,  Pertiwi NWL,  Anthara,  MS,  Dharmayuda, AAGO, Anggreni LH (2013) Toxicity of
red  betel  extract  in  diabetic  white  rat. Jurnal Veteriner 14 (1): 527-533.
[36] Rang HP,  Dale MM, Ritter JM,  Flower RJ  (2007)  Pharmacology,  Elsevier’s Health  Sciences  Rights  Department, London.
[37] Rachmania RA,  Supandi, Cristina FAD (2016)  Analisis  penambatan  molekul senyawa  flavonoid  buah  mahkota  dewa ( Phaleria  macrocarpa (Scheff.)  Boerl.) pada  reseptor  α-glukosidase  sebagai antidiabetes. Pharmacy 13(2): 239-251.