## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETANOL DAUN
BINAHONG ( Andredera cordifolia (Ten.) Steenis) DENGAN METODE Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Putri Ayu Andany Surbakti 1) , Edwin De Queljoe 1) , Widdhi Boddhi 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Binahong Leaves (Andredera cordifolia (Ten.) Steenis) is a medicinal plant that can be used for various  treatments  one  of  which  is  used  as  an  anticancer.  One  of  the  earliest  methods  for cytotoxic  testing  is  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT).  This  research  aims  to  determine  the contain  of  secondary  metabolite  compounds  and  the  potential  toxicity  of  the  leaves  binahong. Result of  this  research showed that the extract of  ethanol leaves binahong contain Flavanoids, Steroids,  Saponins.  Leaves  binahong  has  toxicity  value  with  Lethality  Concentration  50  (LC 50 ) was  97,  797  µg/mL  tested  using  BSLT  methods,  this  show  that  the  extract  of  ethanol  leaves binahong is toxic.
Keywords: Binahong Leaves, Phytochemical Screening, Toxicity, BSLT, LC 50

## ABSTRAK
Daun  Binahong  ( Andredera  cordifolia (Ten.)  Steenis)  merupakan  tanaman  obat  yang  dapat digunakan untuk berbagai macam pengobatan salah satunya digunakan sebagai antikanker. Salah satu metode awal untuk uji sitotoksik adalah Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder  dan  potensi  toksisitas  dari  daun binahong.  Hasil  penelitian  ini  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  binahong  memiliki kandungan Flavanoid, Steroid, Saponin. Daun binahong mempunyai nilai toksisitas dengan LC 50 sebesar  97,  797  µg/mL  menggunakan  metode  BSLT,  hal  ini  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol daun binahong bersifat toksik.
Kata kunci: Daun Binahong, Skrining Fitokimia, Toksisitas, BSLT, LC 50

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  sekitar  30.000
spesies tanaman, 940 di antaranya digunakan sebagai tanaman obat. Penggunaan tanaman obat sebagai pengobatan  tradisional  merupakan  pilihan pengobatan  yang  kini  makin  diminati, terlebih  lagi  dengan  kesadaran  untuk kembali  ke  alam  dan  juga  karena  relatif aman dan murah, bahkan dengan perkembangan yang kini ada makin mendapat perhatian bagi alternatif pelayanan kesehatan.  Dari  berbagai  penelitian,  obat tradisional  telah  diakui  keberadaannya  oleh masyarakat, dengan demikian meningkatkan manfaat  tanaman  bagi  kesehatan  dan menciptakan  kondisi yang  mendorong pengembangan obat tradisional (Hendrawati, 2009).
Salah  satu  tanaman  tradisional  yang biasa digunakan oleh masyarakat yaitu daun Binahong  mempunyai  nama  latin Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis.  Daun  Binahong juga  mempunyai  nama  umum  dari  berbagai negara.  Di  negara  Cina  binahong  dikenal dengan  nama teng  san  chi ,  sedangkan  di Inggris  nama  umum  dari  binahong  yaitu heartleaf  madeiravine atau madeira  vine . Binahong merupakan tumbuhan yang diduga berasal  dari  Australia,  Afrika  Selatan, Hawaii,  New  Zealand  dan  Pulau  Pasifik lainnya.  Tumbuhan  ini  mudah  tumbuh  di dataran rendah maupun dataran tinggi (Pink, 2004).
Penyakit  yang  dapat  disembuhkan dengan  menggunakan  tanaman  ini  adalah kerusakan  ginjal,  diabetes,  pembengkakan jantung,  muntah  darah,  tifus,  stroke  wasir, rhematik, pemulihan pasca operasi, pemulihan pasca melahirkan,
menyembuhkan  segala  luka  dalam  dan khitanan,  radang  usus,  melancarkan  dan menormalkan  peredaran  dan  tekanan  darah, sembelit,  sesak  napas,  sariawan  berat, pusing-pusing,  sakit  perut,  menurunkan panas  tinggi,  menyuburkan  kandungan, maag,  asam  urat,  keputihan,  pembengkakan hati,  meningkatkan  vitalitas  dan  daya  tahan tubuh, dan juga digunakan sebagai antikanker (Manoi, 2009).
Saat  ini  penyakit  kanker  menempati urutan  kedua  sebagai  penyebab  kematian setelah  penyakit  jantung  (Apantaku,  2002). Usaha  penyembuhan  dengan  obat  kanker yang  ada  saat  ini  kurang  memuaskan  selain efek samping  yang besar, harga  yang mahal dan sulit diperoleh. Hal tersebut mendorong dilakukannya pencarian sumber baru senyawa antikanker dari alam.
Salah  satu  metode  awal  untuk  uji sitotoksik  adalah Brine  Shrimp  Lethality Test (BSLT).  BSLT  merupakan  salah  satu metode  yang  banyak  digunakan  untuk pencarian  senyawa  antikanker  baru  yang berasal  dari  tanaman.  Metode  BSLT  telah terbukti  memiliki  korelasi  dengan  aktivitas antikanker.  Selain  itu,  metode  ini  juga mudah  dikerjakan,  murah,  cepat,  dan  cukup akurat.  Suatu  ekstrak  dinyatakan  bersifat toksik menurut  metode  BSLT jika memiliki LC 50 kurang  dari  1000  µg/mL.  Jika  hasil BSLT menunjukkan bahwa ekstrak tumbuhan  bersifat  toksik  maka  dapat dikembangkan  ke  penelitian  lebih  lanjut untuk mengisolasi senyawa sitotoksik tumbuhan  sebagai  usaha  pengembangan obat  alternatif  anti  kanker.  Jika  hasil  uji BSLT menunjukkan bahwa ekstrak tumbuhan  tidak  bersifat  toksik  maka  dapat dikembangkan  ke  penelitian  lebih  lanjut
untuk  meneliti  khasiat-khasiat  lain  dari ekstrak (Meyer et al. , 1982).
Skrining  fitokimia  dalam  penelitian ini  bertujuan  untuk  mengetahui  golongan senyawa  yang  terkandung  pada  ekstrak etanol  daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis). Skrining fitokimia merupakan  metode  yang  sederhana,  cepat, serta  sangat  selektif,  yang  dapat  digunakan untuk  mengidentifikasi  golongan  senyawa serta  mengetahui  keberadaan  senyawa- senyawa  aktif  biologis  yang  terdistribusi dalam jaringan tanaman (Nohong, 2009).

## METODOLOGI PENELITIAN
Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Daun binahong
( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), CH 3 COOH  glacial,  NaOH,  aquades,  FeCl 3 , pereaksi Mayer, pereaksi Dragendorf, pereaksi wagner, amonia, natrium hidroksida, asam klorida, serbuk magnesium,  asam  asetat  anhidrat,  eter, magnesium sulfat, asam sulfat, Etanol 96 %, kloroform,  telur  udang Artemia  Salina Leach, air laut.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu Ayakan mesh 200, kertas saring  whatman  42,  cawan  petri,  tabung reaksi,  rak  tabung,  pipet,  baker  glass, timbangan  analitik,  gelas  ukur,  Erlemenyer, pot  salep,  toples,  lup,  lampu,  batang pengaduk, alumuium foil, rotary evaporator ,  blender,  spatula,  corong,  labu takar, kertas label, oven, hotplate .
Pengambilan dan Persiapan sampel Sampel yang digunakan adalah daun binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis),  yang  diambil  di  Batu  Kota,
Kecamatan  Malalayang,  Sulawesi  Utara. Daun  yang  diambil  adalah  daun  yang  tidak terlalu tua atau terlalu muda, daun berwarna hijau  dan  segar  dengan  ukuran  daun  yang sama  (sedang).  Daun  dipetik  satu  persatu secara manual, selanjutnya sampel dibersihkan dan dikeringkan, setelah sampel menjadi  kering  sampel  diblender  hingga sampel  halus  lalu  diayak  dengan  ayakan mesh 200.

## Ekstraksi Daun
Ekstrak bahan aktif dilkukan dengan maserasi dengan pelarut etanol 96%. Serbuk
Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ditimbang sebanyak 100 gram dan dimasukkan ke dalam baker gelas, kemudian ditambahkan  pelarut  hingga  volume akhir mencapai  500  mL  dengan  perbandingan  1  : 5  (w/v).  Hasil  maserasi  kemudian  disaring dengan  kertas  saring  Whatman  42  sehingga dihasilkan  filtrat  dan  residu.  Perendaman dilakukan 1 kali lagi remaserasi. Filtrat yang diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan vacum  rotary  evaporator  pada  suhu  40 C hingga  diperoleh  ekstrak  kental  berupa pasta.

## Skrining Fitokimia

## Pemeriksaan Alkaloid
Sebanyak 0,5 gram ekstrak dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  kemudian ditambahkan  2  mL  kloroform  secukupnya dan  10  mL  amonia  lalu  ditambahkan  10 tetes  H 2 SO 4 .  Campuran  dikocok  dan dibiarkan  hingga  membentuk  2  lapisan. Lapisan H 2 SO 4 dipindahkan dalam 3 tabung reaksi  dengan  volume  masing-masing  2,5 mL.  Ketiga  larutan  diuji  dengan  pereaksi Meyer,  Dragendorf  dan  Wagner.  Larutan positif  pada  pereaksi  Meyer  karena  adanya
endapan  putih,  larutan  positif  pada  pereaksi Dragendorf  dengan  berubahnya  larutan menjadi  warna  merah  jingga,  sedangkan larutan positif pada pereaksi Wagner dengan berubahnya  warna  larutan  menjadi  warna coklat.

## Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak 0,5 gram ekstrak dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambahkan  5  mL  etanol  dan  dipanaskan selama  5  menit  dalam  tabung  reaksi. Selanjutnya  ditambahkan  10  tetes  HCl pekat.  Kemudian  ditambahkan  0,2  gram serbuk  Mg.  Adanya  flavonoid  ditunjukkan oleh timbulnya warna merah coklat.

## Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid
0,5 gram ekstrak ditambahkan CH 3 COOH  glacial  sebanyak  10  tetes  dan H 2 SO 4 pekat  sebanyak  2  tetes.  Larutan dikocok  perlahan  dan  dibiarkan  selama beberapa  menit.  Larutan  menjadi  positif pada  triterpenoid  jika  larutan  berubah menjadi warna merah atau ungu, dan larutan positif  pada  steroid  jika  larutan  berubah menjadi warna biru atau hijau.

## Pemeriksaan Saponin
Sebanyak 0,5 gram ekstrak ditambahkan  dengan  10  mL  akuades kemudian dikocok kuat selama kurang lebih 1  menit.  Selanjutnya  didiamkan  selama  10 menit  dan  diamati  buih  atau  busa  yang terbentuk.  Keberadaan  senyawa  saponin dalam  sampel  ditandai  dengan  terbentuknya buih  yang  stabil  selama  10  menit  dengan tinggi 1 - 3 cm.

## Pemeriksaan Tanin
Sebanyak 0,5 gram ekstrak ditambahkan  dengan  10  mL  air  panas,
kemudian  ditetesi  menggunakan  besi  (III) klorida,  keberadaan  tanin  dalam  sampel  di tandai  dengan  timbulnya  warna  hijau kehitaman.
Penyiapan Larva Artemia Salina Leach Penetasan  telur Artemia  Salina Leach  dilakukan  dengan  cara  merendam sebanyak 30 mg telur Artemia Salina Leach dalam wadah berisi air laut dibawah cahaya lampu  25  watt.  Telur Artemia  Salina Leach akan  menetas  dan  menjadi  larva  setelah  24 jam.

## Pembuatan Konsentrasi Sampel Uji
Konsentrasi Larutan uji BSLT adalah 1000  μg/mL,  500  μg/mL,  250  μg/mL,  l00 μg/mL,  10  μg/ml,  dan  0  μg/mL  (sebagai kontrol  negatif).  Untuk  pembuatan  larutan stok  ekstrak  kental  etanol  96%  ditimbang sebanyak  50  mg,  kemudian  dilarutkan dengan  kedalam  air  laut  sebanyak  50  mL, hingga  diperoleh  konsentrasi  larutan  stok 1000 μg/ml.

## Pelaksanaan Uji Toksisitas
Pada  uji  toksisitas  disiapkan  wadah untuk  pengujian,  untuk  masing  -  masing konsentrasi  ekstrak  sampel  membutuhkan  3 wadah  dan  1  wadah  sebagai  kontrol  untuk masing  –  masing  pengulangan.  Selanjutnya pada  tiap  konsentrasi  larutan  dimasukan  10 ekor larva Artemia Salina Leach. Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam terhadap  kematian  larva Artemia  Salina Leach,  dimana  setiap  konsentrasi  dilakukan 3  pengulangan  dan  dibandingkan  dengan kontrol.  Kriteria  standar  untuk  menilai kematian  larva  Artemia  Salina  Leach  yaitu bila  larva Artemia  Salina Leach  tidak menunjukkan  pergerakkan  selama  beberapa detik observasi.

## Analisis Data
Data hasil penelitian akan diolah dan disajikan  dalam  bentuk  tabel.  Data  dari  uji toksisitas  akan  dianalisis  dengan  analisis regresi  linier  menggunakan  SPSS  23  untuk menentukan nila LC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penyiapan Sampel
Tanaman  yang  digunakan  adalah daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis)  yang  diambil  di  daerah  Batu  Kota, Manado, Sulawesi Utara. Pada penelitian ini daun  yang  dipetik/diperoleh  adalah  daun binahong  dengan  batang  yang  berwarna merah. Daun yang diambil adalah daun yang tidak  terlalu  tua  atau  terlalu  muda,  daun berwarna  hijau  dan  segar  dengan  ukuran daun yang sama (sedang). Daun dipetik satu persatu  secara  manual.  Setelah  daun diperoleh  kemudian  dilakukan  sortasi  dan pencuncian, serta pengeringan.
Tujuan  dari  sortasi  dan  pencucian adalah  untuk  memisahkan  benda-benda asing  seperti  bagian-bagian  tanaman  yang tidak  diinginkan  dan  kotoran  lain  yang masih tertinggal pada daun dengan menggunakan  air  bersih  yang  mengalir. Sebelum  dilakukan  pengeringan  terlebih dulu  dilakukan  perajangan  yang  bertujuan untuk  mempermudah  proses  pengeringan, karena  semakin  tipis  atau  kecil  daun  maka semakin  cepat  proses  penguapan,  kemudian pengeringan dilakukan dengan cara dikeringkan  pada  suhu  kamar,  bukan  di bawah  sinar  matahari  tapi  hanya  diangin- anginkan.  Tujuan  pengeringan  ialah  untuk mendapatkan  simplisia  yang  tidak  mudah rusak, sehingga dapat disimpan dalam waktu yang lebih lama.
Setelah  daun  kering,  dilakukan tahapan  pembuatan  serbuk  simplisia  kering (penghalusan) dengan cara diblender,
kemudian  diayak  dengan  ayakan  mesh  200 bertujuan  agar  serbuk  simplisia  yang diperoleh homogen.

## Ekstraksi
Serbuk  simplisia  daun  binahong kemudian diekstraksi dengan metode maserasi.  Serbuk  simplisia  daun  binahong yang  digunakan  100  gram  dan  diekstraksi dengan pelarut etanol 96% selama 5 hari dan dilakukan  remaserasi  1  kali  selama  2  hari. Pemilihan  metode  maserasi  dikarenakan metode  maserasi  sangat  menguntungkan dalam  isolasi  senyawa  bahan  alam  karena selain  murah  dan  mudah  dilakukan,  dengan perendaman  sampel  tumbuhan  akan  terjadi pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan  tekanan  antara  di  dalam  dan  di luar  sel,  sehingga  metabolit  sekunder  yang ada di dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut  (Harbone,  1987).  Setelah  dilakukan ekstraksi, ekstrak yang diperoleh dimasukkan  kedalam  alat  rotary  evaporator bertujuan  untuk  memekatkan  konsentrasi larutan  sehingga  didapatkan  larutan  dengan konsentrasi  yang  lebih  tinggi  (ekstrak kental).  Ekstrak  kental  daun  binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) ditimbang sebanyak 12,6 gram.

## Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan  berdasarkan metode  Harbone  (1987),  dan  dilakukan  5 pengujian  untuk  senyawa  kimia  yakni Alkaloid,  Flavonoid,  Steroid/Tripterpenoid, Tanin, Saponin. Skrining fitokimia bertujuan untuk mengetahui senyawa-senyawa metabolit  sekunder  pada  tanaman.  Hasil
pengujian  dari  skrining  fitokimia  daun
binahong dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis).
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk mengetahui  adanya  senyawa  metabolit sekunder  pada  daun  binahong  ( Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis),  dan  metabolit sekunder  yang  diperoleh  positif  yaitu flavonoid  dan  terjadi  perubahan  warna merah cokelat, berdasarkan penelitian Seniwaty et  al., (2009)  hasil  positif  pada flavonoid  pada  skrining  fitokimia  pada tanaman  lidah  ular  terjadi  perubahan  warna larutan  menjadi  merah  cokelat,  hal  ini dikarenakan  terbentuknya  garam  flavilium.
Skrining  fitokimia  daun  binahong pada steroid positif karena adanya perubahan  warna  hijau,  hal  ini  dikarenakan terjadi  reaksi  antara  steroid  dan  asam  asetat yang  menghasilkan  kompleks  asetil  steroid,
sedangkan  skrining  fitokimia  positif  pada saponin, terbentuknya buih atau busa, hal ini dikarenakan  saponin  merupakan  senyawa yang  memiliki  gugus  polar  dan  nonpolar bersifat  aktif  permukaan  sehingga  ketika saponin dikocok dapat membentuk buih atau busa.
Menurut  Setiawan  (2013)  sampel dikatakan  mengandung  alkaloid  jika  reaksi positif  yang  membentuk  endapan  sekurang- kurangnya  dua  reaksi  dari  golongan  reaksi pengendapan yang dilakukan. Dan dari hasil pengujian  pada  alkaloid,  dari  3  golongan reaksi pengendapan yang dilakukan, hanya 1 yang menghasilkan positif (pereaksi meyer), maka  untuk  pengujian  alkaloid,  diperoleh hasil  negatif  atau  daun  binahong  tidak
Senyawa  Metabolit Hasil  Pengujian Perubahan Yang Terjadi Alkaloid Positif (Meyer) Negatif (Dragendrof) Negatif (Wagner) Meyer (Putih, ada endapan putih), Dragendrof (Kuning pucat), Wagner (Kuning terang) Flavonoid Positif Warna merah cokelat Steroid/ Triterpenoid Positif Hijau (Steroid) Saponin Positif Terbentuknya buih atau busa Tanin Negatif Warna merah kecoklatan
mengandung  alkaloid.  Ketiga  senyawa metabolit  sekunder  yang  diperoleh  dalam pengujian  ini  dapat  memberikan  efek farmakologi pada manusia.
Uji  toksisitas  dengan  Metode  Brine Shimp Lethaly Test (BSLT)
Pengujian toksisitas dilakukan dengan  metode  BSLT  ( Brine  Shrimp Lethality  Test )  menggunakan  Larva  udang Artemia  Salina Leach.  Konsentrasi  untuk tiap  perlakuan  ada  terbagi  atas  1000,  500, 250,  100,  10 g/mL  dan  kontrol  negatif. Namun  dalam  hal  ini,  saat  penelitian didapatkan  kendala,  dimana  saat  akan dilakukan penetasan untuk telur larva udang tidak  menetas,  sehingga  peneliti  mengganti telur  larva  udang  yang  baru  dan  air  laut dengan air
laut  buatan  yang  dibuat  dengan  cara melarutkan  20  gram  garam  non  yodium kedalam  1  liter  aquades,  kemudian  larva udang  menetas.  Setelah  48  jam  larva  udang dipindahkan dalam wadah tiap-tiap konsentrasi, saat dilakukan pengenceran, air laut juga diganti dengan air laut buatan. Hal ini dikarenakan untuk menyesuaikan lingkungan  hidup  dari  larva  udang,  karena air yang digunakan untuk penetasan yaitu air laut  buatan  maka  saat  perlakuan  untuk  tiap konsentrasi  dibuat  sama  yaitu  air  laut buatan.  Setelah  larva  diberikan  pengujian dan  diamati  selama  24  jam,  hasilnya  dapat dilihat pada Tabel 2.
Pengujian  Kontrol Negatif Jumlah Kematian Setiap Konsentrasi 10 g/mL  100 g/mL  250 g/mL  500 g/mL  1000 g/mL 1 0 3 6 10 10 10 2 0 3 6 10 10 10 3 0 4 8 8 9 10 Total Kematian Larva 0 10 20 28 29 30 Rata- rata 0 3,3 6,6 9,3 9,6 10 Presentase Kematian 0 33% 66% 93% 96% 100%
Berdasarakan  Tabel  2  dapat  dilihat bahwa pada konsentrasi  1000 g/mL adalah tingkat  kematian  tertinggi,  dan  tingkat kematian  terendah  pada  konsentrasi  10 g/mL.  Untuk  tiap  konsentrasi  dimasukkan larva  udang  sebanyak  10  ekor,  dan dibandingkan  dengan  kontrol,  setelah  itu dilakukan perhitungan analisis probit menggunakan  SPPS  23  dan  hasilnya  yaitu 97,  797 g/mL.  Berdasarkan  penelitian Sukandar et  al., (2009)  pada  pengujian toksisitas  ekstrak  daun  pandan  wangi, mendapatkan  nilai  LC 50 <  1000 g/mL sekaligus berpotensi sebagai antikanker.
Suatu  ekstrak  dinyatakan  aktif  dan bersifat  toksik  jika  dapat  menyebabkan kematian  50%  hewan  uji  pada  konsentrasi kurang  dari  1000  ppm  dan  bersifat  tidak toksik jika ditemukan pada konsentrasi lebih dari  1000  ppm,  dan  kematian  larva  udang Artemia Salina Leach disebabkan keberadaan  senyawa  metabolit  sekunder yang  bersifat  toksik,  senyawa  toksik  yang ada  pada  ekstrak  dapat  masuk  melalui bagian  mulut  larva  udang Artemia  Salina Leach  dan  diabsorbsi  masuk  ke  dalam saluran  pencernaan  terjadi  proses  absorbsi melalui  membran  sel.  Setelah  proses absorbsi dilanjutkan dengan proses distribusi senyawa toksik ke dalam tubuh larva udang Artemia  Salina Leach,  dan  terjadi  proses kerusakan  reaksi  metabolisme  (Raineri, 1981).
Struktur  anatomi  tubuh  larva  udang Artemia  Salina Leach  pada  tahap  naupli masih  sangat  sederhana,  yaitu  terdiri  dari lapisan  kulit,  mulut,  anthena,  saluran pencernaan atau digesti yang masih sederhana, dan calon thoracopoda.
Perubahan  gradien  konsentrasi  yang  drastis
antara  di  dalam  dan  di  luar  sel  yang menyebabkan senyawa toksik mampu menyebar dengan baik ke tubuh larva udang Artemia  Salina Leach.  Efek  kerusakan metabolisme yang ditimbulkan terjadi secara cepat  dapat  dideteksi  dalam  waktu  24  jam, hingga  menyebabkan  50%  kematian  larva udang Artemia  Salina Leach  (Raineri, 1981).

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  sebagai berikut:
1) Metabolit  sekunder  yang  terkandung dalam  Ekstrak  etanol  daun  binahong ( Andredera  cordifolia (Ten.)  Steenis) yaitu Flavonoid, Steroid, Saponin.
2) Ekstrak etanol daun binahong ( Andredera  cordifolia (Ten.)  Steenis) memiliki potensi toksisitas dengan nilai LC 50 sebesar 97, 797 µg/mL.

## Saran
Dengan  hasil  penelitian  ini  perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengisolasi  senyawa  sitotoksik  tumbuhan sebagai usaha pengembangan obat antikanker mengingat bahwa daun binahong ( Andredera cordifolia (Ten.) Steenis) bersifat toksik.

## DAFTAR PUSTAKA
Alam,  G.  2002.  Bhrine  Shrimp  Letholity Test  (BSLT) Sebagai Senyawa Bioaktif  dari  Bahan  Alam. Majalah Farmasi  dan  Farmakologi .  Jurusan Farmasi MIPA Universitas Hasanuddin. 6(2) : 432-435.
Apantaku,  L.M.  2002, Breast-conseving surgery  for  breast  cancer. Am. Fam.Physician. 66(12) : 2271-2278.
Bougis, P. (1979). Marine Plankton
Ecology . American Elsevier Publishing Copany, New York.
Badan POM RI. 2008. Direktorat Obat Asli Indonesia . Badan POM, Jakarta.
Gunawan,  S.  G.  2007. Farmakologi  dan Terapi Edisi 5 . Departement
Farmakologi  dan  Terapeutik  FK  UI, Jakarta.
Gritter, R. J. 1991. Pengantar Kromatografi . ITB, Bandung.
Harbone, J.B.1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan . ITB, Bandung.
Hendrawati  A.  R.  S.  2009.  Uji  Toksisitas Akut  Ekstrak  Etanol  Daun  Kemangi (Ocimum  sanctum  Linn.)  Terhadap
Artemia salina Leach Dengan Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Skripsi : Universitas
Diponegoro, Semarang.
Khrisnaraju  A.  V.,  Rao  dan  Sundraraju,  A. 2005. Assestment  of  Biooctivity  of Indian  Medical  Plants  tlsing  Brine Shrimp  (Artemia  salina)  Lethality Assay .  lnternational  Journal  Applied Science  and  Engineering. 2 :  125-
134.
Mansyur.  2004. Toxycology  Efek  -  Efek Yang Tidak  Diinginkan .  USU  digital library, Medan.
Manoi,  F.  2009. Binahong  (Anredera cordifolia)  Sebagai  Obat .  Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Jakarta. Meyer,  B.  N.,  Ferrigni,  Putnam,  J.  E., Jacobsen, L. B., Nichols  dan
Mclaughin.  1982.  Brine  Shrimp:  A
Cowenient  General  Bioassay  for Active  Plant  Constituenls. Planta Medica . 45 : 31-34.
Ngatidjan.  1997. Metode  Laboratorium dalam  Toksikologi .  Pusat  Antar
Universitas Bioteknologi
Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Nohong. 2009. Skrining Fitokimia Tumbuhan Ophiopogon jaburan Lodd dari Kabupaten Kolaka Provinsi  Sulawesi  Tenggara. Jurnal Pembelajaran Sains . 5(2) : 172-178. Pissuthanan,  S.,  dkk.  2004.  Brine  Shrimp Lethality  Activity  of  Thai  Medicinal Plants  in  the  Family  Melioceoce. Naresuan  University  Joumal . 12(2) : 13-18.
Pink  A.  2004. Gardening  for  the  million. Project Gutenberg Literary Archive. Paget,  G.  E.  1970. Method  In  Toxicology .
Blackwell Scientific Publication
Oxford and Edinburgh, England.
Raineri,  M.  Histochemical  Localization  of Chitin  in  Larvae  of  Artemia  salina Leach  (Phyllopoda).  1981.  Italian Journal of Zoology 48 (2) : 139 -141. Rice,  S.  A.,  Maness,  I.  B.  2009. Brine Shrimp Bioassoy: A Usefull Technique in Biological Investigatiozs. The American Biology Teacher [Serial  Online].  66(3):208- 215.
Rossiana,  Nia.  2006.  Uji  Toksisitas  Limbah Cair  Tahu  Sumedang  Terhadap Reproduksi  Daphnia  carinata  King.
Skripsi: Universitas Padjajaran, Bandung.
Setiawan,  P.Y.B.  2013.  Penerapan  Metode Simplex  Lattice  Design  Dalam penentuanh  Komposisi  Etanol-  Air Pada  Proses  Ekstraksi  Daun  Pepaya (Carica  Papaya)  Dengan  Respon Aktivitas  Larvasida  Nyamuk  Aedes Aegypti. Skripsi :  Universitas  Gadjah Mada, Yogyakarta. Seniwaty., Raihanah., Nugraheni. I.K., Umaningrum. D. 2009. Skrining Fitokimia Dari Alang-Alang (Imperata Cylindrica L. Beauv) Dan Lidah Ular (Hedyotis Corymbosa L.
Lamk). Sains dan Terapan Kimia.
3(2) : 124-133.
Sukandar,  D.,  Hermanto.  S.,  Lestari.  E. 2009.  Uji  Potensi  Aktivitas  Anti Kanker Ekstrak Daun Pandan Wangi
(Pandanus amaryllifolius Roxb.)
Dengan Metode Brine Shrimp
Lethality Test (BSLT). Jurnal Karya
Tulis Ilmiah. 11(1) : 32-38.
Suyanto,  D.  2009.  Khasiat  Binahong [online]. Tersedia:http;//carahidup.um.ac.id./a uthor /didik-suyanto/page37/[8 maret 2011]. Walters,  S.M.  1989. The  European  Garden Flora Dicotyledons (part 1) . Cambridge University Press, Cambridge. Warren Photographics.
http://www.warrenphotographic.co.u k/05378-brine-shrimp-female-with- eggs. [20 Juli 2016].