Jurnal Pharmascience, Vol. 06 , No.02, Oktober 2019, hal: 33 - 39 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience

## Research Article

## Efek Hepatoprotektor Ekstrak Etanol Daun Kenikir

## ( Cosmos caudatus Kunth.) Pada Tikus Yang Diinduksi Doksorubisin
Junvidya Heroweti* , Ibrahim Arifin,  Nurul Arlin Hidayati, Rizki Suciantika
Fakultas Farmasi, Universitas Wahid Hasyim *email: junvidyaheroweti@gmail.com

## ABSTRAK
Doksorubisin  adalah  agen  kemoterapi  yang  mempunyai  efek  samping hepatotoksik dengan cara pembentukan radikal bebas. Daun kenikir (Cosmos caudatus Kunth.)  memiliki  potensi  untuk  mencegah  efek  hepatotoksik  akibat  penggunaan doksorubisin.  Penelitian  bertujian  untuk  membuktikan  potensi  Ekstrak  Etanol  Daun Kenikir  (EEDK)  sebagai  hepatoprotektor  pada  tikus  yang  diinduksi  doksorubisin. Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental  menggunakan randomized  matched post  only  control  group  design .  Sebanyak  25  ekor  tikus  galur  wistar  dibagi  menjadi  5 kelompok secara acak. Kelompok I, control normal diberi asupan aquadest, kelompok II kontrol hepatotoksik diberikan doksorubisin dosis 5 mg/KgBB. Kelompok III, IV dan V  merupakan  kelompok  perlakuan  EEDK  dengan  dosis  berturut-turut  250,500,  dan 1000  mg/kgBB  dengan  doksorubisin  dosis  5  mg/kgBB.  Pemberian  doksorubisin dilakukan  pada  hari  ke-1,  ke-5,ke-9  dan  hari  ke-13  secara  intraperitonial  (ip)  dan pemberian EEDK dilakukan 1 kali sehari selama 14 hari secara peroral (po). SEluruh hewan uji diambil darahnya pada hari ke-15. Kadar SGOT dan SGPT dievaluasi untuk melihat  adanya  kerusakan  hati.  Data  kadar  SGOT  dianalisis  dengan  one  way  anova, sedangkan data kadar SGPT dianalisis menggunakan Kruskall-wallis. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  doksorubisin  dapat  menyebabkan  hepatotoksik  ditandai  dengan peningkatan  kadar  SGOT  dan  SGPT.  Ekstrak  etanol  daun  kenikir  mampu memberikan  efek  hepatoprotektor  yang  signifikan  (p≤0,05) pada  tikus  yang diinduksi doksorubisin ditunjukkan dengan penurunan kadar SGOT dan SGPT.
Kata Kunci: doksorubisin, daun kenikir, hepatoprotektor, SGOT, SGPT

## ABSTRACT
Doxorubicin is a chemotherapeutic agent has hepatotoxic side effects through the formation of free radicals. Marigold leaves (Cosmos caudatus Kunth.) has the potential to  prevent  hepatotoxic  effects  caused  by  the  use  of  doxorubicin.  This  study  aims  to prove the potential of Ethanol Extract of Marigold Leaves (EEDK) as a hepatoprotector
in doxorubicin-induced rats. This study was an experimental study with a randomized matched  post  test  only  control  group  design.  25  wistar  male  rats  were  divided  into  5 groups  randomly.  Group  I  as  normal  control  was  given  aquadest  intake,  group  II  as hepatotoxic control was given doxorubicin dose 5 mg/Kg BW, group III, IV and V was EEDK  treatment  group  dose  250,  500  and  1000  mg/Kg  BW  and  doxorubicin  dose  5 mg/Kg BW. Doxorubicin was given on day 1, 5, 9 and 13intraperitoneal (i.p) and EEDK was given once a day for 14 days orally (p.o). All blood samples were taken on the 15 th day. SGOT and SGPT levels were evaluated to see liver damage. SGOT level data were analyzed  statistically  by  One  Way  Anova,  while  SGPT  level  data  were  analyzed  using Kruskall-Wallis. The  results  showed  that  doxorubicin-induced  hepatotoxity characterized by increased SGOT and SGPT levels. Ethanol extract of marigold leaves can  provide  hepatoprotector  effect  significantly  ( p≤0.05 )  in  doxorubicin-induced  rats indicate by decreased SGOT and SGPT levels.
Keywords: doxorubicin, marigold leaves, hepatoprotector, SGOT, SGPT

## I. PENDAHULUAN
Doksorubisin  merupakan  antibiotik golongan antrasiklik yang banyak digunakan sebagai agen kemoterapi.
Doksorubisin telah digunakan pada pengobatan  kanker  limfoma  ganas  dan aktif  terhadap  pengobatan  tumor  padat terutama  pada  kanker  payudara  (Brunton et  al .,  2008).  Penggunaan  doksorubisin sebagai  agen  kemoterapi  dapat  digunakan baik  secara  tunggal  maupun  kombinasi (Quiles et al., 2002). Penggunaan doksorubisin pada terapi kanker menyebabkan beberapa efek samping yang bersifat irreversible antara lain mempengaruhi sistem imun, rambut rontok, radang tenggorokan,
hepatotoksisitas, dan kardiotoksisitas
(Bustova et al ., 2009; Frias et al ., 2009).
Mekanisme  toksisitas  doksorubisin
telah banyak diketahui, salah satunya yaitu terjadinya  toksisitas  kronis  doksorubisin
yang  kemungkinan  diperantarai  oleh konversi  metabolit  doksorubisin  menjadi doksorubisinol dengan melibatkan berbagai  enzim,  antara  lain  karbonil reduktase.  Mekanisme  utama  toksisitas doksorubisin  terjadi  karena  interaksinya dengan  besi  dan  pembentukan Reactive Oxygen  Species (ROS)  yang  dapat menyebabkan stress  oxidative sehingga memacu  terjadinya  kematian  sel  (Minotti et al., 2004).
Salah  satu  upaya  pencegahan  efek samping doksorubisin akibat adanya Reactive  Oxygen  Species (ROS)  yaitu
dengan  pemberian  bahan  alam  yang mengandung  antioksidan.  Daun  kenikir
( Cosmos  caudatus Kunth.)  mengandung saponin,  flavonoid,  polifenol  dan  minyak atsiri (Hutapea et al ., 2001). Daun kenikir segar  mengandung  flavonoid  sebesar  143 mg/100  g  dengan  kandungan  kuersetin paling  tinggi  sebesar  51,3  mg/100  g
(Andarwulan et  al .,  2010).  Ekstrak etanolik daun kenikir terbukti mengandung flavonoid  glikosida  berupa  kuersetin  3-O- poliglikosida (Rachmani,  2009).  Ekstrak etanol  daun  kenikir  memiliki  daya antioksidan  kuat  dengan  harga  IC 50
sebesar  0,055  mg/mL  (Mediani  e t  al.,
2013)  serta  memiliki  aktivitas  sebagai hepatoprotektor  (Novianto and Hartono,
2016).
Peneliti  ingin  membuktikan  efek ekstrak  etanol  daun  kenikir  (EEDK) sebagai  hepatoprotektor.  Adanya  aktivitas antioksidan  dalam  ekstrak  etanol  daun kenikir, maka diduga bahwa ekstrak etanol daun kenikir mempunyai efek hepatoprotektor  pada  tikus  yang  diinduksi doksorubisin.

## II. METODE
Bahan  penelitian  yaitu  d aun  kenikir yang diperoleh dari Bandungan,
Kabupaten Semarang, Jawa Tengah. Daun yang  digunakan  adalah  daun  yang  segar dan tidak berpenyakit , doksorubisin hidroklorida  50  mg/25  ml,  Etanol  70%, CMC-Na 0,5%,
Alat yang digunakan Moisture
balance (Orpus),  timbangan  elektrik,  Alat untuk  pengujian  efek hepatotoksik ekstrak etanol daun kenikir, Alat pengukur SGOT dan SGPT adalah Autoanalyzer clinic
Daun kenikir basah ditimbang sebanyak  10  kg  selanjutnya  dikeringkan
menggunakan  oven  pada  suhu  50⁰C.  ).
Serbuk  daun  kenikir  yang  diperoleh sebanyak  1,52  kg.  Serbuk  simplisia  daun kenikir  diekstraksi  menggunakan  metode maserasi dengan pelarut etanol 70%.
Metode  yang  digunakan randomized post test only control group design dengan
25  ekor  tikus  jantan  galur  wistar,  dibagi menjadi  5  kelompok  secara random
sampling (Ekowati et al ., 2013).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Uji Efek Hepatotoksik Ekstrak

## Etanol Daun Kenikir
Suspensi  ekstrak  etanol  daun  kenikir dibuat  dalam  tiga  konsentrasi  yaitu  8% untuk  dosis  1000  mg/Kg  BB,  4%  untuk dosis  500  mg/Kg  BB  dan  2%  untuk  dosis 250  mg/Kg  BB.  Suspensi  ekstrak  etanol daun kenikir diambil dengan menggunakan  spuit  oral  2,5  cc.  Ekstrak diberikan  selama  14  hari  perlakuan  secara per oral (Ekowati et al., 2013)
Larutan  doksorubisin  dosis  5  mg/Kg BB  diambil  dengan  menggunakan  spuit  1 cc  lalu  diberikan  secara intraperitoneal
pada  hari  ke-1,  5,  9  dan  13.  Pada  hari  ke-
15 dilakukan pengambilan darah sebanyak
1  mL  dari sinus  orbitalis untuk  dilakukan
pengukuran kadar SGOT dan SGPT.
Doksorubisin  merupakan  antibiotik golongan  antrasiklik  banyak  digunakan untuk  terapi  berbagai  macam  jenis  kanker (Childs et  al .,  2002).  Doksorubisin  dapat
menyebabkan hepatotoksisitas pada pemakaian  jangka  panjang,  sehingga penggunaannya  dalam  klinis  menjadi terbatas.
Ekowati et al ., (2013), telah membuktikan  bahwa  induksi  doksorubisin pada  hari  ke-1,  5,  9,  dan  13  dapat menyebabkan hepatotoksik dengan
ditandai  peningkatan  kadar  SGOT  dan SGPT  pada  tikus.  Parameter  untuk mengetahui  tikus  mengalami  hepatotoksik akibat  induksi  doksorubisin  yaitu  dengan membandingkan  kadar  SGOT  dan  SGPT antara  kelompok  kontrol  normal  dan kelompok kontrol hepatotoksik. Kelompok kontrol normal digunakan untuk mengetahui  kadar  normal  SGOT  dan SGPT  pada  tikus,  sedangkan  kelompok kontrol  hepatotoksik  digunakan  sebagai kontrol validasi  adanya  peningkatan kadar SGOT  dan  SGPT  pada  tikus  (Ozer et  al .,
2008).
Ekstrak  etanol  daun  kenikir  memiliki kadar  flavonoid  total  (mg  ekuivalen kuersetin/g) sebesar 4.33 µg/mL (Wahyuni et  al .,  2018)  dan  nilai  IC 50 sebesar  0,055 mg/mL termasuk dalam kategori
antioksidan  kuat  (Mediani et  al., 2013).
Senyawa yang berperan sebagai antioksidan  pada  ekstrak  etanol  daun kenikir  yaitu  flavonoid  jenis  kuersetin  3- O-poliglikosida  (Rachmani,  2009)  yang mempunyai  efek  sebagai  hepatoprotektor (Miltonprabu et al., 2016).
Dosis  ekstrak  etanol  daun  kenikir  yang digunakan  adalah  250  mg/Kg  BB,  500 mg/Kg  BB  dan  1000  mg/Kg  BB. Doksorubisin  diberikan  dengan  dosis  5 mg/Kg  BB  pada  hari  ke-1,  5,  9  dan  13 pada  masa  perlakuan.  Konsentrasi  larutan stok doksorubisin yang digunakan adalah 2 mg/ml.
Gambar  1.  Hasil  rata-rata  (±SE)  kadar  SGOT (a)  dan  kadar  SGPT  (b)  setelah  induksi doksorubisin.
Keterangan: K1 : Kelompok kontrol normal dengan asupan aquadest ad libitum ; K2 : Kelompok kontrol hepatotoksik  dengan  induksi  doksorubisin  dosis  5 mg/Kg BB, SE : Standar Error ; *) Hasil uji T-test
Independent (a  dan  b)  menunjukkan  adanya perbedaan  signifikan  antara  kelompok  kontrol hepatotoksik  dengan  kelompok  kontrol  normal (p ≤0.05)
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa rata-rata  kadar  SGOT  dan  SGPT  pada kelompok  kontrol  hepatotoksik  (K2)  lebih besar  dibanding  dengan  kelompok  kontrol normal  (K1)  dan  berbeda  signifikan (p ≤0.05).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa induksi  doksorubisin  dosis  5  mg/Kg  BB yang diberikan pada hari ke-1, 5, 9 dan 13 mampu  meningkatkan  kadar  SGOT  dan SGPT dalam darah tikus.
336,03
78.85 ± 7.76
336.03* ± 8.00 K adar SG OT ( U /L )
K1 K2 Kadar SGPT 30,98 130,55 30.98 ± 2.02 130.55* ± 5.47
K ad ar S G P T (U /L )
K1 K2 Kadar SGPT 30,98 130,55 30.98 ± 2.02 130.55* ± 5.47
K ad ar S G P T (U /L )
B. Efek Hepatoprotektor Ekstrak

## Etanol Daun Kenikir
Sampel darah tikus  diambil dari sinus
orbitalis sebanyak  1  mL  menggunakan
capillary tube kemudian ditampung dalam eppendrof. Darah yang ada dalam eppendrof didiamkan  30  menit  hingga membentuk clot . Darah disentrifuge dengan  kecepatan  3000  rpm  selama  15 menit  untuk  diambil  serumnya  dan dilakukan  pengukuran  kadar  SGOT  dan SGPT  (Ekowati et  al., 2013).  Pengukuran kadar SGOT dan SGPT dilakukan di Balai Laboratorium  Kesehatan  Provinsi  Jawa Tengah.

## 1. Hasil Penetapan Kadar SGOT
Efek  hepatoprotektor  EEDK  terhadap kadar  SGOT  ditunjukkan  dengan  kadar SGOT  yang  lebih  rendah  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol  hepatotoksik (K2).  Data  rata-rata  kadar  SGOT  tikus dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Perbandingan rata-rata (±SE) kadar SGOT antara kelompok hepatotoksik dengan seluruh kelompok perlakuan.
Keterangan : K1: Kontrol normal; K2: Kontrol hepatotoksik;  P1:  Kelompok  perlakuan  EEDK dosis  250  mg/Kg  BB;  P2:  Kelompok  perlakuan EEDK  dosis  500  mg/Kg  BB;  P3:  Kelompok perlakuan  EEDK  dosis  1000  mg/Kg  BB;  SE:
Standar  Error .  *)  Hasil  uji Tukey menunjukkan adanya perbedaan signifikan dibandingkan kelompok kontrol hepatotoksik (p ≤0.05)
Uji  hepatoprotektor  dilakukan  dengan membandingkan  hasil  penetapan  kadar SGOT antara kelompok kontrol hepatotoksik (K2) dengan seluruh kelompok  perlakuan  setelah  pemberiaan suspensi  uji  EEDK  selama  14  hari. Berdasarkan  grafik  di  atas,  hasil  rata-rata kadar  SGOT  pada  kelompok  perlakuan EEDK  dosis  250  mg/Kg  BB,  500  mg/Kg BB,  dan  1000  mg/Kg  BB  (P1,  P2,  P3) lebih  rendah  dibanding  kelompok  kontrol hepatotoksik (K2). Penurunan kadar SGOT  pada  tikus  menunjukkan  bahwa EEDK  mempunyai  efek  hepatoprotektor pada  tikus  yang  diinduksi  doksorubisin. Kadar rata-rata SGOT kelompok perlakuan  EEDK  dosis  250  mg/Kg  BB (P1) dan kelompok perlakuan EEDK dosis 500  mg/Kg  BB  (P2)  berbeda  signifikan (p≤0.05)  dengan  kelompok  perlakuan EEDK  dosis  1000  mg/Kg  BB  (P3).  Hasil tersebut menunjukkan bahwa seluruh dosis EEDK memiliki efek hepatoprotektor.

## 2. Hasil Penetapan Kadar SGPT
Efek  hepatoprotektor  EEDK  terhadap kadar  SGPT  ditunjukkan  dengan  kadar SGPT lebih rendah dibandingkan
kelompok kontrol hepatotoksik (K2). Data rata-rata  kadar  SGPT  tikus  dapat  dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Perbandingan rata-rata (±SE) kadar SGPT antara kelompok hepatotoksik dengan seluruh kelompok perlakuan.
Keterangan: K1:  Kontrol  normal;  K2:  Kontrol hepatotoksik;
P1: Kelompok perlakuan  EEDK  dosis  250  mg/Kg BB; P2: Kelompok perlakuan EEDK
dosis 500 mg/Kg BB; P3: Kelompok perlakuan  EEDK  dosis  1000  mg/Kg BB;  SE: Standar  Error .  *)  Hasil  uji Mann-Whitney menunjukkan  adanya perbedaan  signifikan  dibandingkan kelompok kontrol hepatotoksik
(p ≤0.05).
Uji  hepatoprotektor  dilakukan  dengan membandingkan  hasil  pengukuran  kadar
SGPT antara kelompok kontrol hepatotoksik (K2) dengan seluruh kelompok  perlakuan  EEDK  selama  14 hari.  Hasil  rata-rata  kadar  SGPT  pada kelompok  perlakuan  EEDK  dosis  250 mg/Kg  BB,  500  mg/Kg  BB,  dan  1000 mg/Kg  BB  (P1,  P2,  P3)  lebih  rendah dibanding dengan kelompok kontrol hepatotoksik  (K2).  Hasil  analisis  statistik menggunakan  bahwa  terdapat  perbedaan yang signifikan antara kadar SGPT seluruh kelompok  perlakuan  dengan  kelompok kontrol  hepatotoksik  (p=0,009).  Hasil  ini menunjukkan  bahwa  EEDK  mempunyai efek hepatoprotektor yang ditandai dengan
penurunan  kadar  SGPT  pada  tikus  yang diinduksi doksorubisin

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  dapat  ditarik  dari penelitian ini adalah :
1. Doksorubisin dosis 5 mg/Kg BB yang diberikan  pada  hari  ke-1,  5,  9  dan  13 mampu  menyebabkan  hepatotoksik pada  tikus  galur  wistar  ditandai dengan  peningkatan  kadar  SGOT  dan SGPT.
2. Ekstrak etanol daun kenikir dosis 250,
500, dan 1000 mg/Kg BB mempunyai efek  hepatoprotektor  pada  tikus  yang diinduksi doksorubisin ditandai dengan  penurunan  kadar  SGOT  dan SGPT.

## DAFTAR PUSTAKA
Andarwulan,  N.,  Batari,  R.,  Sandrasari, D.A.,  Bolling,  B.,  and  Wijaya,  H., 2010,  Flavonoid  Content  and Antioxidant Activity of Vegetables from  Indonesia, Food  Chemistry , 121, 1231–1235.
Childs, A. C., Phaneuf, S. L., Dirks, A. J.,
Phillips,  T.,  and  Leeuwenburgh., 2002,  Doxorubicin  Treatment in Vivo Causes Cytochrome c Release and  Cardiomyocyte  Apoptosis,  As Well  As  Increased  Mitochondrial Efficiency,  Superoxide  Dismutase Activity,  and  Bcl-2:Bax  Ratio, Cancer Research , 62, 4592-4598.
Bustova,  I.,  2009,  Risk  of  Cardiotoxicity of Combination
Treatment Radiotherapy and Chemotherapy of Locally Advanced Breast
30.98 *± 2.02 103.95 ± 2.14 59.56 *± 4.39
43.24 *± 1.38 38.79 *±
0.41
K a da r SG P T ( U/L ) Kelompok
Carcinoma  Stage  III, Klin  Onkol , 22, 1, 17-21.
Brunton, L., Lazo, J. S., and Parker, K. L., 2008, Goodman  &  Gilman’s  The Pharmacological Basis of Therapeutics , 11th Edition,
McGrawHill, Lange, 1668-1834.
Ekowati, H., Sarmoko., and Widiastuti, R., 2013, Combination of Three Species  of  Zingiberaceae  Prevent
Doxorubicin-Induced Hepatotoxicity, Universa  Medica,
32, 1-9.
Frias,  M.  A.,  Lang,  U.,  Gerber-Wicht,  C.,
and  James,  R.  W.,  2009,  Native and  Reconstitured  HDL  Protect
Cardiomyocytes from Doxorubicin-Induced Apoptosis, Cardiovascular Research , 85, 118- 126
Hutapea,  J.R.,  dan  Syamsuhidayat,  S.S.,
2001, Inventaris  Tanaman  Obat
Indonesia  I  Jilid  2 ,  Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan
Sosial Republik Indonesia, Jakarta. Mediani,  A.,  Abas,  F.,  Khatib,  A.,  and Tan, C.P., 2013, Cosmos Caudatus as a Potential Source of
Polyphenolic Compounds: Optimisation  of  Oven  Drying Conditions  and  Characterisation  of Its Functional Properties,
Molecules , 18, 10452-10464.
Miltonprabu,  S.,  Tomczyk,  M.,  Wozniak,
K.S.,  Rastrelli,  L.,  Daglia,  M., Nabavi,  S.F.,  Alavian,  S.M.,  and Nabavi, S.M., 2016, Hepatoprotective Effect of Quercetin  From  Chemistry  to Medicine, Food  and  Chemical Toxicology , 1-37.
Minotti,  G.,  Menna,  P.,  Salvatorelli,  E., Cairo,  G.  and  Gianni,  L.,  2004, Anthracyclins Molecular Advances and  Pharmacologic  Developments
in Antitumor Activity and Cardiotoxicity, Pharmacol  Review , 56, 185-228.
Novianto,  A.,  dan  Hartono,  2016,  Uji
Aktivitas  Hepatoprotektor  Fraksi Etil Asetat Kenikir ( Cosmos caudatus )  Terhadap  Tikus  yang Diinduksi Paracetamol, IJMS , 3, 1, 35-41.
Ozer, J., Ratner, M., Shaw, M., Bailey, W., and  Schomaker,  S.,  2008,  The Current State of Serum Biomarkers of Hepatotoxicity, Toxicology , 245, 194-205.
Quiles,  J.L.,  Dolores,  M.,  Cesar,  L.,
Ramirez,  T.,  Concepcion,  M.,
Aguilera, Maurizio, Battino, Angel, G.,  and  Carmen  M.R.T.,  2002, Curcuma longa Extract Supplementation Reduces Oxidative  Stress  and  Attenuates Aortic  Fatty  Streak  Development in Rabbits , Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol., 22, 1225-1231.
Rachmani,  E.P.N.,  2012,  Penentuan  Mutu Ekstrak  Etanol  Daun  Kenikir ( Cosmos  caudatus Kunth.)  dengan Parameter  Flavonoid  Total  dan Minyak  Atsiri, Tesis ,  Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Wahyuni,  W.T.,  Darusman,  L.K.,  and Pitria,  A.R.,  2018,  Analisis  Kadar Flavonoid dan Antioksidan Ekstrak Daun  Kenikir  ( Cosmos  caudatus ), Rumput Mutiara ( Oldenlandia corymbosa ),  dan  Sirsak  ( Annona muricata ) dengan Teknik Spektrometri, Analytical and Environmental Chemistry , 3, 1, 38- 46..