________________________________________________________________

## Penetapan Kadar Fenol Total dengan Spektrofotometer UV-Vis dan Uji
Sitotoksisitas Ekstrak Air Daun Lidah Mertua (Sansevieria masoniana C.)

## Terhadap Sel Kanker Paru
A-549

## Lilis Febriyanti, Ayu Nala El Muna Haerussana
Program Studi Farmasi, Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Bandung, Jl. Prof. Eyckman No.24, Pasteur, Sukajadi, Kota Bandung, Jawa Barat 40161

## *Corresponding author: febriyanti.lis@gmail.com
Received: 29 December 2022; Accepted:  28 April 2023
Abstract : Cancer is the second most common cause of mortality globally, following cardiovascular disease, according to the World Health Organization (WHO). Leading the list of fatal cancers annually are lung, breast, stomach, liver, and colorectal cancers. Hence, the discovery and development of effective agents to treat various types of cancer is urgently needed. Mother- in-law tongue ( Sansevieria masoniana Chahin) leaves contain flavonoids and saponins. However, information regarding the total phenolic content of the aqueous extract of the S. masoniana Chahin leaves is currently unavailable. Hence, this research aims to determine the total phenol content using a UV-Vis spectrophotometer and assess the invitro anticancer activity of the water extract of S. masoniana Chahin through the MTT Assay. From the results of measuring the total phenolic content, the water extract of the leaves contained a phenol content of 3.3061 mgGAE/g. Meanwhile, the results of the cytotoxicity assay on lung cancer cells A-549 showed that the IC 50 value of the aqueous extract of S. masoniana Chahin leaves was above 100 ppm, indicating that the extract has less potential as an anti-lung cancer agent.
Keywords: anticancer, A-549 , phenol, Sansevieria masoniana C
Abstrak : Kanker  menempati  peringkat  kedua  sebagai  penyebab  kematian  paling  umum  secara  global,  setelah  penyakit kardiovaskular, menurut Organisasi Kesehatan Dunia (WHO). Kanker paru-paru, payudara, perut, hati, dan kolorektal adalah penyebab kematian terbesar di seluruh dunia setiap tahun, Dengan demikian penemuan dan pengembangan agen yang sesuai untuk  mengobati  berbagai  jenis  kanker  sangat  dibutuhkan.  Daun  lidah  mertua  ( Sansevieria  masoniana Chahin)  positif mengandung flavonoid dan saponin. Namun, hingga saat ini belum terdapat informasi mengenai  kadar fenol total dari ekstrak air  daun  lidah  mertua  ( S.  masoniana Chahin).  Oleh  karena  itu,  tujuan  penelitian  ini  adalah  menentukan  kadar  fenol  total menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dan  menguji  aktivitas  antikanker  ekstrak  air S.  masoniana Chahin  secara in  vitro dengan  MTT  Assay.  Berdasarkan  pengukuran  kadar  fenol  total,  ekstrak  air  daun  lidah  mertua  memiliki  kandungan  fenol sebanyak 3,3061 mgGAE/g. Sedangkan untuk hasil pengujian sitotoksisitas terhadap sel kanker Paru A-549 menunjukkan nilai IC 50 dari ekstrak air daun lidah mertua di atas 100 ppm yang menunjukkan bahwa ekstrak daun lidah mertua kurang potensial sebagai antikanker paru.
Kata Kunci: A-549, antikanker, fenol, lidah mertua

## DOI: 10.15408/pbsj.v5i2.30080

## 1. PENDAHULUAN
Dari  data  yang  dirilis  oleh  WHO,  kanker  menduduki tempat kedua sebagai penyebab kematian utama  di dunia setelah penyakit kardiovaskular (Sulistiowati et al., 2016). Tentunya,  kanker  paru-paru,  payudara,  perut,  hati,  dan kolorektal  merupakan  penyebab  kematian  terbesar  di seluruh dunia setiap tahunnya. Oleh karena itu penemuan dan  pengembangan  agen  yang  sesuai  untuk  mengobati berbagai jenis kanker sangat diharapkan (Kamilah, Nazir
et al., 2017). Produk yang berasal dari alam telah menjadi kategori senyawa terkemuka dalam meningkatkan desain obat  rasional  untuk  terapi  anti  kanker  baru.  Tanveer Ahamad  dkk  (2017)  pada  penelitiannya  menyatakan bahwa daun Sansevieria cylindrica mengandung flavonoid,  steroid,  tanin,  saponin,  dan  asam  fenolat. Karena kandungan senyawa tersebut, ekstrak metnol daun Sansevieria  cylindrica memiliki  aktivitas  antioksidan dengan  kadar  fenol  total  sebanyak  86,2  mgGAE/g  pada.

## Pharmaceutical and Biomedical Sciences Journal Volume 5(2), 2023, 80-85
Metabolit sekunder seperti flavonoid, glikosida, tanin, dan steroid pun terkandung pada Daun Sansevieria trifasciata . Pinky dkk (2020) dalam penelitiannya menyatakan bahwa daun Sansevieria  trifasciata mengandung  fenol  total sebanyak 10.78 dan 31.99 mgGAE/g. Ternyata flavonoid dan  saponin  pun  terkandung  pada  daun Sansevieria masoniana Chahin.  (Siregar  et  al.,  2020).  Namun, informasi  mengenai  kadar  fenol  total  dari  daun Sansevieria  masoniana Chahin  masih  belum  dapat ditemukan.  Dengan  demikian,  penelitian  ini  dirancang dengan  tujuan  untuk  mengukur  kadar  fenol  total  dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  dan  menguji aktivitas  antikanker  ekstrak  air Sansevieria  masoniana Chahin secara in vitro dengan MTT Assay.
2. METODE
2.1 Alat dan Bahan
Alat: spatula,  neraca  analitik,  alat-alat  gelas  satu  set vacuum  rotary  evaporator ,  oven,  Spektrofotometer  Uv- Vis.  Untuk  menguji  aktivitas  antikanker  terhadap  sel kanker Paru A-549 antara lain: inkubator CO 2 . microplate ELISA reader , microplate 96 well , microplate mixer , pipet mikro.
Bahan: Daun lidah mertua, air, kertas whatsman no. 41. Bahan  yang  digunakan  dalam  uji  sitotoksisitas  meliputi: sampel uji, sel kanker paru dalam kultur, DMSO (Dimetil sulfoksida),  FBS  (Fetal  Bovine  Serum),  media  RPMI 1640, PBS (Larutan buffer fosporik pH 7.30-7.65), MTT [3-  (4,5-  dimetil  thiazol-2-il)  -  2,5-difenil  tetrazolium bromida],  Doksorubisin,  dan  SDS  (Sodium  duodesil Sulfat).
2.2 Metode Penelitian
a. Pembuatan Ekstrak Air Daun Lidah Mertua
Simplisia daun lidah mertua yang sudah dijadikan Serbuk kering  dimaserasi  dengan  pelarut  air  sambil  sesekali
diaduk. Perbandingan antara pelarut dan serbuk adalah 1: 2.  Filtrat  di  maserasi  yang  dihasilkan  kemudian  disaring menggunakan  kertas  saring  Whatsman  no.  41,  sampai residu  tidak  ditemukan.  Kemudian  dilakukan  proses pengeringan Filtrat yang diperoleh  dengan freeze drier.

## b. Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  melibatkan  pengujian  keberadaan alkaloid,  saponin,  flavonoid  dan  polifenol  serta  tanin. Alkaloid dilakukan dengan menimbang 0,5 gram ekstrak air  daun  lidah  mertua  ditambahkan  5  ml  HCl  2N, dipanaskan  di  atas  bunsen  dan  didiamkan  hingga  dingin selanjutnya ditambahkan 300 mg NaCl dam ditambahkan 5 ml HCl 2N dan diaduk sampai homogen. Dibagi menjadi 4 bagian yaitu untuk larutan dengan ditambahkan pereaksi mayer, pereaksi wagner, pereaksi dragendroff dan sebagai blanko atau pembanding. Hasil positif  dapat diamati dari terbentuknya  endapan  putih  saat  menggunakan  larutan pereaksi  Mayer,  terbentuknya    endapan  berwarna  merah bata  ketika  pereaksi  Wagner  ditambahkan,  dan  endapan berwarna coklat muda hingga kuning. Penapisan saponin dilakukan  dengan  metode  uji  busa,  yaitu  dengan menimbang  0,5  g  ekstrak  dalam  air  suling,  kemudian dipanaskan, disaring, dan dikocok secara  vertikal selama 10 detik. Keberhasilan uji ditunjukkan oleh terbentuknya busa  yang  stabil.  Untuk  penyaringan  favonoid,  ekstrak ditimbang  500  mg,  ditambahkan  3  ml  n-heksana  dan disaring,  residu  dilarutkan  dalam  etanol  dan  dibagi menjadi 3 bagian yaitu larutan uji Bare Smith, uji Metcalf dan  uji  Wilstater.  Uji  skrining  polifenol  dan  tanin dilakukan dengan cara menimbang 500 mg ekstrak dalam 10 ml air
c. Validasi Metode Analisis
a) Linearitas dan Kurva Baku
Larutan  stok  asam  galat  dibuat  sebagai  standar  dengan konsentrasi  20,  30,  40,  50  dan  60  ppm.  Selanjutnya diambil  500  µL  dan  tambahkan  2,5  mL  reagen Folin-
Ciocalteu .  Setelah  diaduk,  diamkan  selama  5  menit kemudian  tambahkan  2  mL  natrium  karbonat  7,5%. Setelah diinkubasi  selama 60 menit, serapan larutan untuk kontrol  diukur  dengan  UV-  Vis  spektrometer  bentuk gelombang puncak dari pemindaian sebelumnya.
Kurva  kalibrasi  dihasilkan  kemudian  persamaan  regresi linier dan koefisien korelasi ditentukan untuk mengevaluasi  linearitas.  Dari  nilai  di  atas  dapat  dilihat apakah  linearitas  yang  diperoleh  baik  atau  tidak.  Nilai koefisien  korelasi  yang  dapat  diterima  adalah  r  ≥  0,98. (Arikalan et al., 2018)

## b) Akurasi
Standar asam galat ditambahkan pada ekstrak lidah mertua dengan rata-rata kandungan asam galat pada sampel 10, 15 dan  20 ppm,  lalu dianalisis  menggunakan  prosedur  yang sama seperti pada sampel. Hasilnya diekspresikan dalam bentuk  persen  pemulihan  (%  recovery)  (Arikalang  et  al, 2018).  Hasil  dinyatakan  dalam  persentase  pemulihan  (% pemulihan)  dan  diterima  jika  memenuhi  persyaratan akurasi,  yaitu  kisaran  persentase  pemulihan  rata-rata (Harmita et al, 2004).

## c) Presisi
Larutan dengan konsentrasi 30 ppm sampai dengan 500 μl dicampurkan  dengan  2,5  mL  reagen Folin  Ciaocalteu , dihomogenisasi dan dibiarkan selama 5 menit. Selanjutnya 2  mL  natrium  karbonat  7,5%  ditambahkan  ke  dalam larutan  kemudian  diinkubasi  selama  60  menit.  Pada panjang  gelombang  maksimum,  serapan  diukur  dengan spektrometer UV-Vis pada panjang gelombang yang telah ditentukan dan ulangi tes tersebut sebanyak enam kali.

## d) Batas Deteksi (LoD) dan Batas Kuantitas (LoQ)
Dari  larutan  standar  1000  ppm,  encerkan  hingga konsentrasi  20,  30,  40,  50,  dan  60  ppm  dalam  10  ml metanol.  Sebanyak  100  µL  dari  setiap  konsentrasi
dicampurkan  dengan  2,5  mL  reagen Folin-Ciaocalteu (1:10), dihomogenkan dan dibiarkan selama 5 menit. Selanjutnya  ke  dalam  larutan  ini  ditambahkan  2  mL natrium karbonat 7,5% dan dilakukan inkubasi selama 60 menit. Panjang gelombang puncak diukur dengan serapan menggunakan  spektrometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang yang telah ditentukan (Arikalang dkk, 2018).
d. Penentuan Kandungan Total Fenol
Ekstrak  daun  lidah  mertua  ( Sansevieria  masoniana Chahin) ditimbang hingga 100 mg dan dilarutkan dengan aquades dalam labu takar 10 ml. Sebanyak 500 μl larutan sampel  ditambahkan  ke  reagen  Folin-Ciocalteau  (1:10) menjadi  2,5  mL  kemudian  kocok  dan  biarkan  selama  5 menit  pada  suhu  kamar.  Ditambahkan  2  ml  natrium karbonat 7,5 μn dan didiamkan selama 60 menit pada suhu kamar  (Susanti  dkk,  2019).  Absorbansi  masing-masing larutan  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis pada  panjang  gelombang  maksimum  (Johari  dan  Heng, 2019). Hasil dinyatakan sebagai massa setara asam galat di setiap massa sampel.

## e. Uji  Sitotoksisitas  Ekstrak  Daun  Lidah  Buaya terhadap Sel Kanker Paru A-549
Media  kultur  DMEM  F12  lengkap  (mengandung  serum sapi  janin  sapi  (FBS)  10%  antibiotik  penisilin- streptomisin)  telah  disiapkan.  Sampel  disinari  sinar  UV selama  24  jam.  Sel  yang  digunakan  memiliki  pertemuan minimal 80%. Lalu tuang media ke dalam labu, lalu cuci sel  sebanyak  dua  kali  dengan  10  mL  FBS.  Kemudian tambahkan  3  ml  larutan  trypsin-EDTA  dan  inkubasi selama 5 menit untuk membubarkan lapisan sel (di bawah mikroskop, sel yang terbalik tampak mengapung). Sel-sel tersebut  kemudian  dipindahkan  ke  tabung  sentrifus  yang mengandung  medium.  Sentrifugasi  dilakukan  dengan dengan  kecepatan  1500  rpm  selama  5  menit.  Supernatan dihilangkan,  dan  pelet  sel  dilarutkan  kembali  dengan media  segar.  Jumlah  sel  dan  viabilitas  ditentukan
(menggunakan  larutan  tripan  biru).  Sel  dihitung  dan diencerkan  hingga  diperoleh  kepadatan  sel  10.000 sel/sumur untuk diinokulasi pada pelat 96 sumur dengan volume  200  µL  per  sumur.  Langkah  selanjutnya  adalah menyemai/membiakkan  sel  dalam 96-well  plate diikuti dengan  inkubasi  selama  24  jam  (atau  hingga  setidaknya 80%  konfluen)  pada  suhu  370°C  dan  5%  CO 2 .  Pelat  96 sumur yang berisi sel dikeluarkan dari inkubator dan diberi label dengan nama sampel. Media yang dikeluarkan dari setiap  sumur  kemudian  diisi  dengan  sampel  dan  sel kontrol. Setiap lubang diisi dengan 200 µL media lengkap. Sel  dalam  lubang  ditempatkan  sesuai  papan  nama  yang tertera diatas/tutup pelat dengan tang steril. Kemudian sel diinkubasi  dengan memberi perlakuan yang sama dengan sampel selama 48 jam.
Sebanyak 9 mL medium lengkap dan 1 mL MTT assay kit dalam tabung sentrifus 15 mL disiapkan dan dihomogenkan. Kemudian ditambahkan 100 µL campuran reagen  ke  dalam  masing-masing  sumur.  Selanjutnya diinkubasi  selama  2  hingga  4  jam  dalam  inkubator  pada suhu  370°C  dan  5%  CO 2 hingga  terbentuk  kristal formazan. Setelah formazan terbentuk, larutan dikeluarkan dari peralatan dengan piring terbalik langsung ke  atas  tisu.  Selanjutnya  DMSO  ditambahkan  sebagai pereaksi penghentian untuk menghentikan reaksi pembentukan kristal formazan pada sel hidup. Selanjutnya absorbansi  diukur  pada  reader  Elisa  Multiskan  EX  pada panjang gelombang 550 nm.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  mengidentifikasi senyawa-senyawa metabolit sekunder dalam suatu bahan alam.  Hasil  pengujian  alkaloid,  saponin,  dan  tanin  pada Tabel  1  menunjukkan  kesesuaian    hasil  dengan  literatur Siregar(2020)  yang  telah  melaporkan  bahwa  terdapat kandungan  saponin pada  daun  lidah  mertua.  Untuk  hasil pada uji flavonoid terjadi perubahan warna walaupun tidak
begitu  signifikan.  Untuk  pengujian  skrining  polifenol dengan  uji  FeCl 3 hasil  yang  didapatkan  yaitu  terdapat perubahan warna merah sedangkan uji gelatin untuk tanin tidak menghasilkan perubahan.
Tabel 1. hasil skrining fitokimia ekstrak air daun lidah mertua
Tabel 2. hasil pengukuran kadar fenol total ekstrak air daun lidah mertua
Penentuan kadar total fenol dilakukan dengan menggunakan  metode  Folin-Ciocalteu  dan  diukur menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis.  Metode  ini merupakan pendekatan yang umum yang sering digunakan untuk  mengukur  kandungan  fenolik  total  pada  tanaman. Keunggulan  teknik  terletak  pada  sedrehananya  prosedur dan  penggunaan  pereaksi  Folin-Ciocalteau  yang  bersifat reaktif pada  senyawa fenolik dengan membentuk larutan dengan daya serap terukur ( Lombogia et al, 2016).
Dalam analisis ini, digunakan standar berupa asam galat, asam  galat  yang  merupakan  fenolik  alami  memiliki stabilitas  yang  baik.  Asam  galat  akan  bereaksi  dengan Folin-Ciocalteu  dan  menghasilkan  perubahan  warna menjadi  kuning,  menunjukkan  adanya  senyawa  fenolik, Penambahan natrium karbobat dialkukan untuk membuat media basa.  Pada saat terjadinya Reaksi,  gugus hidroksil
Metabolit sekunder Hasil Alkaloid 1. uji mayer 2. uji wagner 3. uji drafendroff - - - Saponin + Flavonoid + Polifenol dan Tanin 1. uji gelatin 2. Uji FeCl 3 - + ekstrak
Kadar fenol total
Air daun lidah mertua  3,3061mgGAE/g
pada  senyawa  fenolik  akan  bereaksi  dengan  Folin- Ciocalteu membentuk kompleks yang dapat diukur.
Gambar  1.  Hasil  uji  sitotoksisitas  ekstrak  air  daun  lidah  mertua terhadap sel kanker Paru A-549 .
Hasil pengujian menunjukkan bahwa nilai IC 50 ekstrak air daun  lidah  mertua  berada  di  atas  100  ppm,  sementara doksorubisin  yang  menjadi  kontrol  positif  memiliki  nilai IC 50 sebesar 0.2072 ppm. Hal ini mengindikasikan bahwa ekstrak  air  daun  lidah  mertua  tidak  menunjukkan  potensi sebagai  agen  antikanker  paru-paru.  Sebuah  ekstrak dianggap  aktif  memiliki  aktivitas  antikanker  apabila memiliki  nilai  IC 50 kurang  dari  100  μg/mL  menurut National Cancer Institute (2001).

## 4. KESIMPULAN
Kadar  fenol  total  dinyatakan  dalam  satuan  mg  ekuivalen asam  galat  per  gram  sampel  (mgGAE/g)  dengan kandungan fenol total ekstrak  air daun lidah mertua sebesar 3,3061mgGAE/g.  Hasil  pengujian  menunjukkan  bahwa nilai  IC 50 di  atas  100  ppm,  menunjukkan  bahwa  ekstrak tersebut tidak  miliki potensi sebagai agen antikanker paru- paru .

## 5. UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  disampaikan  kepada  Poltekkes  Kemenkes
Bandung  atas  dukungan  finansial  yang  telah  diberikan untuk mendanai penelitian ini. Serta terima kasih kepada Jurusan  Farmasi  Poltekkes  Kemenkes  Bandung  atas fasilitas  dan  bantuan  yang  telah  diberikan  dalam pelaksanaan penelitian ini.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
Harmita  (2004).  Petunjuk  Pelaksanaan  Validasi  Metode dan Cara Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian (Vol.1) Departemen Farmasi FMIPA UI.
Indrie  Ambasari,  anytah,  dan  S.  (2013).  Perubahan
Aktivitas  Antioksidan  Pada  Bawang  Putih  ( Allium Sativum L .) Selama Proses Pengolaha dan Penyimpanan. Buletin Teknologi Pascapanene Pertanian 9 (2) : 64 -73. Julianto,  Tatang  Shabur.  (2019).  Fitokimia  Tinjauan Metabolit Sekunder dan Skrining Fitokimia. Buku Ajar Fitokimia Yogyakarta: Universitas Islam Indonesia.
Kemenkes.  Rencana  Strategis  Kementerian  Kesehatan Tahun  2015-2019.  Jakarta:  Kementerian    Kesehatan RI; 2015
Kamilah,  Nazir.  (2017).  Hubungan  Umur,  Riwayat Keluarga,  Media  Informasi  Dan  Dukungan  Teman Sebaya Dengan Perilaku Sadari Pada Mahasiswi Fkm Unand. Universitas Andalas
K. G.Rahmawat  dan  J.-M.  Merillion.  (2013). Natural product  phytocgemistry,  botany  and  metabolism  of alkaloids,  phenolic  and  terpenes .  London:  Springer Verlag.
Lombogia, B., Budiarso, F., & Bodhi, W. (2016). Uji daya hambat  ekstrak  daun  lidah  mertua  (Sansevieriae trifasciata  folium)  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli  dan  Streptococcus  sp. Jurnal  E- Biomedik, 4(1).
L. G.Rahmawat  dan  J.-M.  Merillion.  (2013). Natural product  phytocgemistry,  botany  and  metabolism  of alkaloids,  phenolic  and  terpenes .  London:  Springer Verlag.
Meiyanto,E.,Susidarti,  RA.,  Handayani,S.,&Rahmi,F., 2008.  Ekstrak  Etanolik  Biji  Buah  Pinang  ( Areca catechu L.)  mampu  menghambat  proliferasi  dan memacu  apoptosis  sel  MCF-7. majalah  Farmasi Indonesia . Vol 19, No 1:12-19.
Mukhriani.T. (2014). Ekstraksi, Pemisahan Senyawa, dan Identifikasi Senyawa Aktif, Jurnal Kesehatan .
Pratama,R.,EmaN,k.,Dondin,S.,,  Departemen  Biokimia, Fakultas Matematika, D. A. N. Ilmu, and Pengetahuan Alam.  2010.  “Potensi  Antioksidan  Dan  Toksisitas Ekstrak Daun Sansevieria Cylindrica. Skripsi. Institut Pertanian Bogor.FMIPA.
Rahmawati,  Emma,  dkk.  2013.  Aktivitas  antikanker Ekstrak n-Heksan dan ekstrak Metanol herba pacar air terhadap  sel  kanker  payudara  T47D.  Media  Farmasi. Vol 10 No.2.pp 47-55.
Siregar,  A.  R.  S.,  Mawardi,  &  Elfrida.  (2020).  Uji Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Daun  Lidah  Mertua (Sansevieria  masoniana  Chahin)  dengan  Metode DPPH  (1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil). Jurnal  Jeumpa , 7(1), pp  310–318.
Sulistiowati,  Eva,  Lolong,  Dina  Bisara,  &  Pangaribuan, Lamria. (2016). Gambaran Penyebab Kematian Kanker di  15  Kabupaten/kota  di  Indonesia  2011.  Buletin Penelitian Sistem Kesehatan, 19(2), PP.119-125
Susanti,  dkk.  (2019).  Pengaruh  lama  ekstraksi  terhadapa kadar fenol total ekstrak metanol daging umbi gadung (Dioscorea hipida Dennst). Journal of pharmacopolium, volume 2, No 3, Desember 2019, 149-155.