J. Teknol. dan Industri Pangan Vol. 31(1): 21-28 Th. 2020 ISSN: 1979-7788 Terakreditasi Ristekdikti: 51/E/KPT/2017

## STUDI IN VITRO BAKTERI  ASAM  LAKTAT  KANDIDAT  PROBIOTIK  DARI MAKANAN  FERMENTASI  INDONESIA
[In  Vitro Evaluation of Probiotic Candidate Bacteria from Indonesian Food]
Gunawan Priadi*, Fitri Setiyoningrum, Fifi Afiati, Rohmatussolihat Irzaldi, dan Puspita Lisdiyanti
Pusat Penelitian  Bioteknologi  Lembaga  Ilmu Pengetahuan  Indonesia,  Cibinong,  Bogor
Diterima  6 Agustus 2019  / Disetujui 6 Februari  2020

## ABSTRACT
Indonesia has a rich variety of fermented foods. The lactic acid b acteria contained in such fermented foods  can act as prob otics providing positive effects on digestive health. Lack of information ab out the characteristics of the native LAB caused insufficient use of them in functional food products. The purpose of this study was to carry out in vitro selection of potential prob iotics  of lactic acid b acteria isolated from non-dairy fermented foods i.e. pickle, cassava tape, terasi and dadih. The prob iotic property tests are acid and  b ile  salt tolerance assays, hydrophob icity test, adhesion test and  coaggregation test . LAB isolates passing all tests indicate that they are potential as prob iotics. This study ob tained 4 LABs having prob iotics properties  b y  in  vitro  tests,  i.e.  L.  plantarum   LIPI12-2-LAB004  from pickle (Yogyakarta), L. plantarum LIPI12-2-LAB031 from cassava tape (Yogyakarta), L. plantarum LIPI13-2-LAB011 from terasi (Bali), and L. plantarum LIPI13-2-LAB087 from terasi (Solok). The four LAB were ab le to survive high acid and b ile salt concentrations ab ove 85%, had hydrophobicities ab ove 95%, capab le of adhering to solid surfaces for 24 hours, and were ab le to co-aggregate with other LAB isolates.
Keywords: adhesion, b ile salt, coagregation, hidrofobicity, prob iotic properties

## ABSTRAK
Indonesia memiliki beragam makanan fermentasi yang kaya akan manfaat. Kandungan bakteri asam laktat (BAL) pada makanan tersebut mampu memberikan dampak positif pada kesehatan saluran pencer- naan  sebagai  probiotik.  Informasi  karakteristik  BAL  asli  Indonesia  yang  sedikit  menyebabkan belum banyaknya pemanfaatan BAL tersebut menjadi produk pangan fungsional. Tujuan dari penelitian ini ada- lah menyeleksi BAL yang potensial sebagai probiotik secara in vitro yang berasal dari pangan fermentasi bukan produk susu yaitu acar, tape singkong, terasi dan dadih. Uji karakteristik probiotik yang dilakukan adalah daya tahan hidup pada kondisi asam dan garam empedu konsentrasi tinggi, uji hidrofobisitas, uji penempelan pada lempeng tipis dan uji koagreasi. Jika isolat BAL lolos semua pengujian mengindikasikan bahwa isolat tersebut bersifat probiotik. Hasil penelitian memperoleh 4 BAL yang bersifat probiotik (secara in vitro ) yaitu L. plantarum LIPI12-2-LAB004 yang diisolasi dari acar Yogyakarta, L. plantarum LIPI12-2- LAB031 dari tape singgkong Yogyakarta, L. plantarum LIPI13-2-LAB011 dari terasi Bali dan L. plantarum LIPI13-2-LAB087 dari terasi Solok. Keempat BAL tersebut mampu bertahan pada kondisi asam dan garam konsentrasi tinggi di atas 85%, memiliki kemampuan hidrofobisitas di atas 95%, mampu menempel pada lempeng tipis selama 24 jam, dan mampu berkoagregasi dengan isolat BAL lainnya.
Kata kunci: garam empedu, hidrofobisitas, koagregasi, penempelan, probiotik
PENDAHULUAN 1
Pengembangan  produk  pangan  saat  ini  berfo- kus  dalam  menciptakan  produk  pangan  fungsional. Salah  satu  pangan  yang  dikembangkan  adalah  ma- kanan yang mengandung probiotik. Produk makanan  yang  telah  diketahui  memiliki  kandungan
*Penulis Korespondensi: E-mail:  gunaw an.priadi@ymail.com
probiotik  adalah  produk  fermentasi  susu  oleh  bakteri asam  laktat  (BAL)  seperti  yogurt,  kefir  dan  dadih. Probiotik  diartikan  sebagai  mikroba  hidup  yang  da- lam  jumlah  cukup  mampu  memberikan  manfaat  bagi inangnya  (Fijan,  2014). Manfaat  probiotik  didapat jika  mengonsumsi  makanan  yang  mempunyai  kan- dungan  probiotik  10 6 -10 7 per  mL  atau  g  (Lähteinen et  al., 2010).  Mikroba  BAL  mempunyai  potensi  yang besar  sebagai  probiotik.
Penelitian  tentang  sumber  BAL  yang  berpotensi sebagai  probiotik  diantaranya  berasal  dari  produk susu  (Kaur et  al., 2017),  makanan  fermentasi  (Yang et  al., 2017),  bagian  buah  dan  sayuran  (Pundir et al., 2013),  hewan  dan  bagian  dari  hewan  (Kizerwetter- Świda  dan  Binek,  2016)  dan  minuman  (García-Ruiz et  al., 2014).  BAL  menjadi  pilihan  dalam  penelitian pengembangan  produk  fungsional  karena  karak- teristiknya  yang  aman  dan  telah  ditetapkan  dalam generally  recommended  as  safe (GRAS) (Fijan, 2014).  Manfaat  probiotik  diantaranya  menjaga  ke- seimbangan  mikroflora  saluran  pencernaan,  men- cegah  diare,  menurunkan  kadar  kolesterol,  tidak  me- nimbulkan  iritasi  pada  usus,  berpotensi  sebagai  anti kanker,  meningkatkan  kekebalan  tubuh,  membantu menjaga  berat  tubuh,  dan  produk  susu  fermentasi BAL  dapat  membantu  bayi  yang  alergi  dan  intoleran terhadap  susu.
Pangan  fermentasi  merupakan  sumber  bakteri probiotik  baru  yang  dapat  digunakan  untuk  mem- produksi  berbagai  macam  pangan  fungsional.  Bak- teri  ini  dapat  dikonsumsi  dan  bermanfaat  bagi  kese- hatan.  Proses  fermentasi  mengubah  karakteristik fisikokimia,  mikrobiologis  dan  organoleptik  dari  ba- han  yang  difermentasi.  Fermentasi  pangan  bertu- juan  untuk  diversifikasi  produk  dan  memperpanjang umur  simpan.  Tujuan  lainnya  adalah  untuk  mening- katkan  kecernaan  dan  nutrisi  serta  menambah  ke- baikan  nilai  organoleptik  seperti  flavor,  aroma,  dan tekstur  produk  (Nuraida,  2015).  Indonesia  memiliki banyak  makanan  fermentasi  dari  berbagai  bahan seperti  tape  dari  singkong  dan  beras;  tempe,  tauco, dan  kecap  dari  kedelai;  acar  dari  mentimun;  terasi dari  udang;  oncom  dari  kacang  tanah;  dadih  dari susu  kerbau;  brem  dari  beras;  dan  tempoyak  dari buah  durian.  Mikroba  yang  berperan  dalam  pangan fermentasi  Indonesia  adalah  khamir  (tempe,  tape, kecap,  dan  tauco),  yeast  (tape  dan  brem),  bakteri (tape,  dadih,  dan  terasi)  dan  campuran  diantaranya. Penelitian  terdahulu  mengenai  isolasi  dan  karakteri- sasi  mikroba  dalam  pangan  fermentasi  Indonesia diantaranya  dilakukan  oleh  Ismail  dan  Yulvizar (2017)  dan  Hartini et  al .  (2019).  Penelitian  karak- teristik  probiotik  mikroba  dari  pangan  fermentasi  da- pat  memberikan  manfaat  dalam  menambah  alter- natif  pamanfaatan  mikroba  tersebut.
Pengujian in  vitro yang  digunakan  dalam  me- nentukan  karakteristik  probiotik  mikroba  diantaranya resisten  terhadap  keasaman  lambung  dan  garam empedu,  kemampuan  untuk  menempel  pada  salur- an  pencernaan,  mempunyai  aktivitas  anti  mikroba patogen  atau  menurunkan  jumlah  mikroba  patogen, dan  mempunyai  aktivitas  hidrolisis  garam  empedu (Kumar et  al., 2015).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengevaluasi  dan  menyeleksi  secara in  vitro karak- teristik  probiotik  dari  BAL  yang  berasal  dari  acar, tape  singkong,  terasi  dan  dadih.  Sebanyak  7  isolat BAL  dari  makanan  fermentasi  diujikan  karakteristik
probiotiknya  yaitu  ketahanan  hidup  pada  konsentrasi keasaman  dan  garam  empedu  yang  tinggi,  uji  hidro- fobisitas,  uji  penempelan  pada  lempeng  tipis  dan  uji koagregasi.

## BAHAN  DAN METODE

## Bahan
Tujuh  isolat  BAL  diperoleh  dari Indonesian  Cul- ture  Collection ( InaCC ).  Asal  dan  jenis  BAL  ditampil- kan  pada  Tabel  1.  Terdapat  tiga  spesies  BAL  yang digunakan  yaitu Lactobacillus  plantarum,  Leuconos- toc  mesenteroides, dan Lactobacillus  farciminis. Pe- nelitian  dilaksanakan  di  Pusat  Penelitian  Bioteknolo- gi, LIPI.
Tabel  1.   BAL  yang  digunakan  untuk  seleksi  kandi-
dat probiotik No. Nomor Seri Isolat Asal Isolat Galur 1 LIPI12-2- LAB004 Acar, Yogyakarta Lactob acillus plantarum 2 LIPI12-2- LAB030 Tape singkong, Yogyakarta Leuconostoc mesenteroides 3 LIPI12-2- LAB031 Tape singkong, Yogyakarta Lactob acillus plantarum 4 LIPI13-2- LAB087 Terasi, Solok, Sumbar Lactob acillus plantarum 5 LIPI13-2- LAB011 Terasi, Bali Lactob acillus plantarum 6 LIPI12-2- LAB033 Tape singkong, Yogyakarta Lactob acillus farciminis 7 LIPI13-2- LAB077 Dadih, Solok, Sumbar Lactob acillus plantarum

## Persiapan kultur bakteri
Satu  mL  kultur  stok  bakteri  ditumbuhkan  pada 5 mL  media de  mann  rogosa  sharpe  broth (MRS  cair) (Merck,  Germany)  secara  aseptis.  Kultur  bakteri  di- inkubasi  (suhu  30°C,  48  jam)  menggunakan  inkuba- tor  (Raypa,  Spain).  Kultur  bakteri  tersebut  kemudian diambil  1  mL  dan  ditumbuhkan  kembali  ke  dalam  5 mL  media  MRS  cair,  kemudian  diinkubasi  (suhu 30°C,  48  jam).  Kultur  terakhir  ini  yang  diujikan karak- teristik probiotiknya.
Ketahanan  isolat  BAL  terhadap  asam  lambung dan garam empedu (modifikasi Kaur et al., 2017) Uji  ketahanan  hidup  dalam  konsentrasi  ke- asaman  tinggi  dilakukan  dengan  mengambil  0,1  mL suspensi  bakteri  kandidat  probiotik  dari  media de mann  rogosa  sharpe  broth (MRS  cair)  (Merck, Germany)  diinokulasikan  kedalam  2  mL  MRS  cair pH  2,5  (pH  diatur  dengan  menambahkan  HCl  0,1  N (Merck,  Germany).  Kemudian  diinkubasi  (suhu 37°C)  dalam  inkubator  (Raypa,  Spain).  Total  jumlah bakteri  dihitung  menggunakan  metode total  plate count (TPC)  pada  waktu  inkubasi  0,  4,  8,  dan 24 jam
menggunakan colony  counter (J  Selecta,  Spain). Prosedur  yang  sama  dilakukan  untuk  pengujian  ke- tahanan  terhadap  garam  empedu,  tetapi  HCl  diganti dengan oxgall (Merck,  Germany)  sehingga  konsen- trasi oxgall dalam  MRS  cair  menjadi  0,3%.  Perhi- tungan  persentase  bakteri  yang  mampu  bertahan pada  kondisi  asam  atau  kondisi  garam,  mengguna- kan persamaan:
i x
dimana,  N 1 =    Jumlah  bakteri  setelah  perlakuan  (jam ke-24);  N 0 = Jumlah  bakteri awal  (jam  ke-0).
Uji hidrofobisitas  isolat BAL  (Canzi et  al., 2005) Kultur  bakteri  diperbanyak  dengan  menumbuh- kan  pada  media de  mann  rogosa  sharpe  broth (MRS cair)  (Merck,  Germany).  Kemudian  diinkubasi  (suhu 37°C,  24  jam)  di  inkubator  (Raypa,  Spain).  Pema- nenan  sel  bakteri  dilakukan  dengan  cara  sentrifugasi pada  3500  g  selama  10  menit  menggunakan  Multi- fuge  X3R  (Thermoscientific,  USA).  Pellet  dibilas  dan dilarutkan  dalam phospate  buffered  saline (PBS) (Merck,  Germany)  hingga  mencapai optical  density (OD)  0,4-0,6  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis (Shimadzu,  USA)  dengan  panjang  gelombang  600 nm.  Tiga  ml  suspensi  bakteri  dimasukkan  ke  tabung uji  steril  dan  ditambah  10  µL  heksadekana  (Merck, Germany), dihomogenkan menggunakan vortex (Heidolph,  Germany)  2  kali  (satu  kali  homogenisasi 10  detik)  dengan  interval  5  detik.  Suspensi  bakteri didiamkan  selama  10  menit  agar  terjadi  pemisahan, kemudian  diukur  OD-nya  menggunakan  spektofoto- meter  pada  panjang  gelombang  600  nm.  Bakteri yang  berpindah  ke  heksadekana  dihitung  dengan persamaan:
id     i i x
dimana,  A 0 =  Nilai  OD  600  nm  suspensi  awal;  A= Nilai  OD setelah  dicampur  heksadekana.
Uji  penempelan  isolat  BAL  pada  lempeng  tipis (Dewanti dan Wong, 1995)
Lempeng stainless  stell (SS)  dipotong  dengan ukuran  3x3  cm,  kemudian  disterilisasi  (suhu  121°C, 15  menit)  pada  autoklaf  (Raypa,  Spain).  Selanjut- nya  lempeng  SS  dimasukkan  kedalam  erlenmeyer yang  berisi  kultur  isolat  bakteri,  kemudian  diinkubasi dalam incubated  benchtof (Thermo  Fisher,  USA) dengan  kecepatan  150  rpm  (suhu  ruang,  24  jam  dan 48  jam).  Setelah  waktu  inkubasi  lempeng  SS  diulas ( swab )  secara  aseptis  dan  merata.  Hasil  ulas  dima-
sukkan  kedalam  larutan  pengencer  NaCl  0,85% (Merck,  Germany)  untuk  menghitung  jumlah  koloni dengan  metode pour  plate menggunakan  media de mann  rogosa  sharpe  agar (MRS  agar)  (Merck,  Ger- many).  Pengenceran  dilakukan  sampai  8  siklus  log dan  kemudian  diinkubasi.  Perhitungan  jumlah  mikro- ba  dalam  media  cair  ( plank tonic ),  diambil  1  mL cairan  kultur  dan  diencerkan  sampai  8  siklus  log, ke- mudian  di plating secara pour  plate .  Selanjutnya  di- inkubasi  pada  suhu  37°C  dalam  inkubator  (Raypa, Spain)  selama  24  dan 48  jam.
Uji koagregasi isolat BAL  (Kos et al., 2003) Kultur  bakteri  diperbanyak  dengan  menumbuh- kan  pada  media de  mann  rogosa  sharpe  broth (MRS cair).  Kemudian  diinkubasi  (37°C,  24  jam)  menggu- nakan  inkubator  (Raypa,  Spain).  Pemanenan  kultur dilakukan  dengan  mensentrifugasi  media  MRS  cair pada  10.000  g  selama  10  menit  menggunakan Multifuge  X3R  (Thermoscientific,  USA).  Selanjutnya dicuci  dengan  larutan  penyangga  fosfat  (NaCl  8  g/L (Merck,  Germany),  KH 2 PO 4 0,34  g/l  (Merck,  Germa- ny),  K 2 HPO 4 1,21  g/L  (Merck,  Germany)  sebanyak  2 kali.  Kultur  disuspensikan  kembali  dalam  larutan penyangga  yang  sama.  Kemudian  kultur  yang  akan dipasangkan  dicampur.  Setelah  pencampuran,  kul- tur  campuran  dimasukkan  kedalam  kuvet  dan  dilihat penurunan optical  density (OD)  sampai  0,6±0,02 menggunakan  spektofometer  UV-Vis  (Shimadzu, USA)  dengan  panjang  gelombang  600  nm.  Penga- matan  dilakukan  selama  4  jam  pada  suhu  ruang. Sebagai  kontrol  adalah  kultur  bakteri  tunggal  yang tidak  dipasangkan.  Nilai  koagregasi  dihitung  dengan persamaan:
i ( ) ( ) x x
dimana,  OD.1=  OD  galur  bakteri  1;  OD.2=  OD  galur bakteri  2;  OD.1.2=  OD  campuran  galur  bakteri  1  dan 2.

## Analisis  data
Variabel  bebas  dalam  penelitian  adalah  jenis isolat  dan  waktu  inkubasi.  Data  ketahanan  isolat terhadap  asam  lambung  dan  garam  empedu,  uji hidrofobisitas  dan  uji  penempelan  diolah  dengan SPSS  22  dan  dianalisis  keragamannya  (uji analysis of  varian (ANOVA)).  Jika  variabel  bebas  memberi- kan  perbedaan  pengaruh  yang  signifikan  ( P <0,05) maka  dilanjutkan  dengan  uji  pembedaan duncan multiple  range  test (DMRT).  Analisis  deskripsi  dila- kukan untuk  data uji koagregasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ketahanan  isolat  BAL  terhadap  kondisi  asam dan konsentrasi  garam
Kriteria  penting  dalam  seleksi  kandidat  probiotik adalah  ketahanan  bakteri  terhadap  kondisi  saluran pencernaan.  Lambung  memiliki  tingkat  keasaman yang  tinggi,  sedangkan  pada  saluran  usus  halus terdapat  cairan  dengan  konsentrasi  garam  yang tinggi.  Kondisi  tersebut  dapat  memengaruhi  viabili- tas  sel  bakteri.  Keasaman  tinggi  dapat  merusak membran  sel  dan  komponen  intraselular.  Kondisi  ini akan  menyebabkan  kematian  pada  bakteri  yang tidak  tahan  asam  (Hartini et  al., 2019).    Usus  halus dan  usus  besar  mempunyai  konsentrasi  garam empedu  yang  tinggi.  Garam  empedu  dapat  menem- bus  membran  sitoplasma  yang  menyebabkan  rusak - nya  membran  sel  (Yu et  al., 2015).  Mikroba  probiotik yang  hidup  di    lambung  harus  toleran  terhadap  pH  3 (Sanhueza et  al., 2015)  atau  setidaknya  pH  4,  yang merupakan  pH  lapisan  lendir  lambung  (García et  al., 2017)  dan  pada  konsentrasi  garam  empedu  minimal 0,3%  (Shivram  dan  Vishwanath,  2012).    Lebih  dari  2 liter  cairan  lambung  dan  1  liter  empedu  disekresikan tubuh  dalam  saluran  pencernaan  manusia  setiap harinya.
Hasil  uji  ketahanan  bakteri  kandidat  probiotik terhadap  kondisi  asam  tersaji  pada  Tabel  2.  Seluruh isolat  memiliki  viabilitas  yang  tinggi  (>8  log  CFU/mL) sebelum  diinkubasi.  Hasil  penelitian  menunjukkan lebih  dari  95%  populasi  bakteri  mampu  bertahan pada  kondisi  asam  kecuali  isolat  LIPI12-2-LAB033 dan  LIPI13-2-LAB077.  Populasi  bakteri  LIPI12-2- LAB033  dan  LIPI13-2-LAB077  mengalami  penurun- an  viabilitas  setelah  diinkubasi  yang  tajam  (5  siklus log).  Asupan  produk  pangan  dapat  memberikan manfaat  sebagai  probiotik  jika  populasi  bakteri  pro- biotik  mencapai  6-7  log  CFU/g  produk (Lähteinen et al., 2010).  Sehingga  kedua  isolat  tersebut  dapat dikatakan  tidak  memiliki  karakteristik  sebagai  pro- biotik.  Lima  isolat  BAL  yang  lolos  uji  ketahanan media  asam  dilanjutkan  dengan  uji  ketahanan garam  empedu.  Ketahanan  terhadap  asam  juga berperan  saat  bakteri  probiotik  berada  dalam
makanan.  Proses  fermentasi  menghasilkan  asam- asam  organik  yang  dalam  jumlah  banyak  akan menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Kondisi  asam pada  makanan  dan  dalam  saluran  pencernaan  men- jadi  tantangan  bakteri  probiotik  untuk  bertahan hidup.
Bakteri  dalam  pertumbuhannya  memerlukan  pH optimum  6,5-7,5  (Maunatin  dan  Khanifa,  2012). Ketahanan  hidup  pada  pH  rendah  berhubungan dengan  kemampuan  bakteri  dalam  mempertahan- kan  kondisi  internal  sel  dengan  lingkungan  luar. Ketahanan  asam  dapat  meningkat  dengan  adanya pelindung  alami  dalam  produk  yang  dikonsumsi seperti  protein  dan  lemak.
Kemampuan  untuk  dapat  bertahan  hidup  pada kondisi  garam  empedu  konsentrasi  tinggi  merupa- kan  syarat  suatu  isolat  bakteri  mampu  membentuk koloni  dan  melakukan  aktivitas  metabolisme  pada inangnya.  Tabel  3  merupakan  hasil  uji  ketahanan garam  empedu  pada  isolat  bakteri  yang  memiliki persentase  tinggi  pada  uji  ketahanan  terhadap  kon- disi  asam.  Persentase  bakteri  yang  bertahan  pada uji  ketahanan  garam  empedu  ini  masih  tinggi. Namun  terjadi  penurunan  viabilitas  sel  selama  inku- basi  (4-12%)  selama  24  jam.  Menurunnya  viabilitas sel  disebabkan  berkurangnya  makanan  dan  mulai masuknya  konsentrasi garam  ke dalam  sel bakteri.
Garam  empedu  merupakan  senyawa  amphi- patik,  yang  memiliki  sisi  polar  (hidrofilik)  dan  sisi non polar  (hidrofobik).  Karakteristik  ini  menyebabkan garam  empedu  dapat  mengemulsifikasi  lemak. Membran  sel  bakteri  tersusun  dari  lipid  dan  asam lemak,  dengan  karakteristik  garam  empedu  ini  mem- bran  sel  akan  rusak.  Konsentrasi  garam  empedu pada  usus  hasus  dan  usus  besar  cukup  tinggi  untuk menghambat  pertumbuhan  dan  membunuh  bakteri yang  ada  di  saluran  pencernaan.  Konsentrasi  0,3% adalah  konsentrasi  rata-rata  garam  empedu  di  salur- an  usus  (Oluwajoba et  al., 2013).  Menurut  Argyri et al .  (2013)  ketahanan  hidup  pada  konsentrasi  garam empedu  tinggi  berkaitan  dengan  dengan  produksi enzim bile  salt  hidrolase (BSH).  Enzim  ini  mampu menghidrolisis  garam  empedu  dan  menurunkan  efek racunnya.
Tabel  2.   Hasil uji ketahanan  hidup  pada  kondisi asam
No. Nomor Seri Isolat Jumlah Bakteri (log CFU/mL) setelah Inkubasi (Jam) Ketahanan Hidup (%) 0 4 8 24 1 LIPI12-2-LAB004 9,20±0,16 deB 9,26±0,10 deA 9,26±0,13 deA 9,24±0,09 deA 100,00 2 LIPI12-2-LAB030 9,30±0,09 eB 9,30±0,03 eA 9,49±0,27 eA 9,22±0,15 eA 99,14 3 LIPI12-2-LAB031 9,24±0,06 deB 9,34±0,08 deA 9,27±0,10 deA 9,23±0,04 deA 99,89 4 LIPI13-2-LAB087 9,13±0,03 cdB 9,15±0,04 cdA 9,03±0,02 cdA 8,79±0,03 cdA 96,28 5 LIPI13-2-LAB011 8,86±0,07 cB 8,85±0,06 cA 8,88±0,16 cA 8,78±0,02 cA 99,10 6 LIPI12-2-LAB033 8,92±0,02 bB 4,27±0,97 bA 4,02±0,49 bA 4,42±0,42 bA 49,55 7 LIPI13-2-LAB077 8,67±0,16 aB 3,78±0,16 aA 3,18±0,08 aA 2,84±0,08 aA 32,76
Keterangan: Data rata-rata diperoleh dari dari 2 kali ulangan perlakuan dengan 2 kali ulangan analisis. Superscript yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata ( P <0,05). Huruf kapital dibaca horizontal (baris) dan huruf kecil dibaca vertikal (kolom)

## Tabel  3.   Hasil uji ketahanan  hidup  terhadap  garam  empedu
No. Nomor Seri Isolat Jumlah Bakteri (log CFU/mL) setelah Inkubasi (jam) Ketahanan Hidup (%) 0 4 8 24 1 LIPI12-2-LAB004 9,14±0,25 cB 8,85±0,01 cB 8,64±0,11 cB 8,10±0,02 cA 88,62 2 LIPI12-2-LAB030 8,50±0,37 bcB 9,31±0,86 bcB 8,35 ±0,04 bcB 7,68±0,16 bcA 90,35 3 LIPI12-2-LAB031 8,21±0,40 abB 8,40±0,35 abB 8,63±0,52 abB 7,60±0,57 abA 92,57 4 LIPI13-2-LAB087 8,08±0,06 aB 8,40±0,08 aB 8,63±0,13 aB 7,60±0,02 aA 94,06 5 LIPI13-2-LAB011 8,53±0,16 bcB 8,67±0,10 bcB 8,58±0,28 bcB 8,19±0,19 bcA 96,01
Keterangan: Data rata-rata diperoleh dari dari 2 kali ulangan perlakuan dengan 2 kali ulangan analisis. Super script yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata ( P <0,05). Huruf kapital dibaca horizontal (baris) dan huruf kecil dibaca vertikal (kolom)
Aktivitas  BSH  mampu  meningkatkan  kelang- sungan  hidup  bakteri  di  usus  dan  memberikan  ka- rakteristik  menguntungkan  dari  bakteri  probiotik. Komponen  dalam  makanan  juga  dapat  melindungi dan  meningkatkan  ketahanan  bakteri  dalam  kondisi garam  empedu.
Spesies  bakteri  yang  lolos  uji  ketahanan  hidup pada  kondisi  keasaman  dan  garam  empedu  tinggi adalah L.  plantarum dan Ln.  mesenteroides .  Hasil penelitian  menunjukkan  adanya  perbedaan  ketahan- an  pada  kondisi  asam  dan  garam  empedu  antar spesies  dan  antar  asal  isolat  bakteri  pada  spesies yang  sama  ( P <0,05).  Hal  ini  sama  dengan  pendapat Guo et  al .  (2009)  yang  menyatakan  perbedaan  daya tahan  disebabkan  oleh  adanya  perbedaan  spesies dan  galur  spesifik.  Sedangkan  Guo et  al .  (2015) dalam  penelitiannya  menambahkan  faktor  kondisi lingkungan  asal  bakteri  juga  berpengaruh  terhadap daya  tahan  tersebut.  Pendapat  berbeda  disampai- kan  Ramasamy et  al .  (2012)  yang  menduga  tidak ada  hubungan  antara  ketahanan  bakteri  terhadap asam  dengan  sumber  asal  bakteri.  Penelitian  karak- teristik  probiotik  ketahanan  asam  terhadap L.  planta- rum juga  dilakukan  oleh  Maunatin  dan  Khanifa (2012)  dan  Argyri et  al .  (2013)  yang  menghasilkan viabilitas  bakteri  terhadap  asam  lebih  dari  7  log CFU/mL.  Shakibaie et  al .  (2017)  melaporkan  lebih dari  50% L.  plantarum dapat  bertahan  hidup  pada keasaman  tinggi  (pH  2  selama  3  jam).  Yu et  al.
(2015)  melaporkan  ketahanan  hidup  15  galur L. plantarum pada  kondisi  asam  tinggi  sebesar  67,28- 96,13%,  dan  5  galur  diantaranya  mampu  bertahan pada  konsentrasi  garam  empedu  0,3%.  Penelitian Valente et  al .  (2019)  juga  menyebutkan L.  plantarum yang  diisolasi  dari  keju  mempunyai  karakteristik sebagai  probiotik  secara in  vitro karena  mampu  ber- tahan  terhadap  media  asam  dan  garam  empedu. Pada  uji  ketahanan  asam Ln.  mesenteroides oleh Argyri et  al .  (2013)  memberikan  hasil  yang  berbeda, dari  17  galur  yang  diujikan  hanya  1  galur  yang  me- miliki  viabilitas  1-3  log  CFU/mL,  sedangkan  16  lain- nya dibawah  1 log CFU/mL.
Waktu  inkubasi  berpengaruh  terhadap  daya tahan  isolat  pada  kondisi  asam  dan  garam  empedu ( P <0,05).  Pada  awal  inkubasi,  sebagian  isolat  masih mampu  bertahan  pada  kondisi  yang  diujikan.  Namun setelah  24  jam,  terjadi  penurunan  signifikan  dari
pertumbuhan  isolat  baik  pada  kondisi  asam  maupun garam  empedu.  Akumulasi  produksi  asam  organik, persaingan  untuk  mendapatkan  sumber  energi  dan rusaknya  membran  sel  menjadi  penyebab  menurun- nya viabilitas  isolat selama  inkubasi.

## Hidrofobisitas  isolat  BAL
Komponen  penyusun  dinding  sel  seperti  fosfoli- pid  dan  lipopolisakarida  berperan  dalam  interaksi hidrofobik  sel  bakteri.  Tabel  4  menunjukkan  nilai hidrofobisitas  isolat  dalam  heksadekana  yang  tinggi (>99%).  Nilai  hidrofobisitas  yang  tinggi  menunjukkan adanya  molekul  hidrofob  pada  permukaan  sel  bak - teri  yang  diuji.  Bakteri  dengan  hidrofobisitas  tinggi akan  mampu  tinggal  dipermukaan  usus,  berkem- bang  biak  dan  dapat  masuk  kedalam  jaringan  (Far- diaz  dan  Radiati,  2012).  Nilai  hidrofobisitas  isolat pada  penelitian  ini  lebih  tinggi  dibandingkan  peneliti- an  Ding et  al .  (2017).  Penelitian  Ding et  al .  (2017) menguji  beberapa  galur L.  plantarum dan  nilai  hidro- fobisitas  tertinggi  hanya  60,97%.  Menurut  Panjaitan et  al .  (2018)  hidrofobisitas  mikroba  dipengaruhi  oleh galur  bakteri,  media  pertumbuhan,  umur  bakteri  dan struktur  permukaan  bakteri.  Keragaman  faktor  ter- sebut  menyebabkan  setiap  spesies  dan  galur  meng- ekspresikan nilai hidrofobisitas yang berbeda (Fardiaz  dan  Radiati,  2012).  Namun,  hasil  penelitian ini  tidak  sependapat  dengan  hasil  yang  disampaikan oleh  Panjaitan et  al. (2018)  dan  Fardiaz  dan  Radiati (2012).  Pada  penelitian  ini,  galur  dan  spesies  isolat tidak  berpengaruh  terhadap  nilai  hidrofobisitas  ( P > 0,05).
Tabel  4.   Hasil uji hidrofobisitas
No. Nomor Seri Isolat Hidrofobisitas (%) 1 LIPI12-2-LAB004 99,64±0,00 a 2 LIPI12-2-LAB030 99,69±0,01 a 3 LIPI12-2-LAB031 99,60±0,08 a 4 LIPI13-2-LAB087 99,85±0,05 a 5 LIPI13-2-LAB011 99,54±0,25 a
Keterangan: Superscript yang  berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata ( P <0,05)

## Penempelan isolat BAL pada lempeng tipis
Kriteria  penting  lain  dalam  seleksi in  vitro bak- teri  kandidat  probiotik  adalah  kemampuannya  untuk menempel  di  mukosa.  Penempelan  menunjukkan
adanya  interaksi  hidrofobik  yang  melibatkan  mem- bran  sel  bakteri  dan  dinding  permukaan  sel  inang (Fardiaz  dan  Radiati,  2012).  Penempelan  dapat  di- dukung  adanya  penunjang  adhesi  seperti  lektin.  Sa- lah  satu  yang  mendukung  penempelan  adalah  pro- duksi  eksopolisakarida  (EPS)  oleh  bakteri  (García- Ruiz et al., 2014).
Tabel  5.  menunjukkan  hasil  uji  penempelan  se- cara  ulas  dan plank tonic .  Penurunan  jumlah  mikroba terjadi  selama  inkubasi.  Isolat  LIPI12-2-LAB004  me- miliki  kemampuan  penempelan  terbesar  diantara lainnya.  Kemampuan  menempel  yang  baik  akan  me- miliki  kemampuan  pembentukan  biofim  yang  baik pula.  Setelah  inkubasi  48  jam,  5  isolat  bakteri  me- ngalami  penurunan  4-6  log  (ulas)  dan  5-6  log  ( plank - tonic ).  Hasil  ini  disebabkan  karena  adanya  gerakan saat  inkubasi  dan  menurunnya  konsentrasi  nutrisi selama  inkubasi.
Kemampuan  menempel  dipengaruhi  oleh  asal bakteri.  Penelitian  Todoriki et  al .  (2001)  melaporkan Lactobacillus yang  diisolasi  dari  saluran  pencernaan mempunyai  kemampuan  menempel  yang  lebih  baik dibandingkan Lactobacillus dari  makanan  hasil  fer- mentasi.  Fenomena  ini  terjadi  pada  hasil  penelitian ini.  Setelah  pengujian  selama  48  jam,  hanya  bakteri L.  plantarum LIPI12-2-LAB004  (acar,  Yogyakarta) yang  masih  melekat  di  lempeng  tipis  walaupun nilainya  tidak  begitu  besar. L.  plantarum lainnya tidak  teridentifikasi  jumlahnya  (<1).  Kemampuan untuk  menempel  berlawanan  dengan  mekanisme peristaltis,  sehingga  jika  bakteri  yang  tidak  memiliki kemampuan  ini  akan  keluar  dari  saluran  pencer- naan.  Bakteri  tidak  akan  membentuk  koloni  dan
hilang kemampuannya dalam melawan invasi bakteri  patogen  dalam  saluran  pencernaan.  Jenis dan  asal  isolat  memengaruhi  populasi  isolat  dengan metode  ulas  ( P <0,05).  Keragaman  asal  bakteri memberikan  karakteristik  membran  sel  yang  berbe- da  dari  setiap  isolat,  sehingga  kemampuan  dalam menempel  juga  berbeda.  Pada  inkubasi  48  jam  de- ngan  metode plank tonic ,  jenis  dan  asal  isolat  mem- berikan  pengaruh  yang  signifikan  pada  populasi  iso- lat  ( P <0,05).  Isolat L.  plantarum yang  berasal  dari acar  (Yogyakarta)  memiliki  kemampuan  menempel yang  lebih  baik dibandingkan  isolat lainnya.

## Koagregasi antar isolat BAL
Uji  koagregasi  dilakukan  untuk  menentukan  ke- mampuan  interaksi  antar  isolat  bakteri  untuk  saling menempel  dalam  saluran  pencernaan  dan  tidak  mu- dah  tercuci  oleh  pergerakan  usus.  Pembentukan  ko- loni  sangat  penting  sebagai  probiotik  untuk  mencip- takan  pertahanan  kuat  dari  inang  terhadap  masuk - nya patogen  dari  luar  (Peres et al., 2014).
Hasil  penelitian  (Tabel  6)  menunjukkan  adanya koagregasi  antar  isolat:  LIPI12-2-LAB004,  LIPI12-2- LAB031,  LIPI13-2-LAB087,  dan  LIPI13-2-LAB011 dengan persentase yang berbeda-beda (2,92- 7,37%).  Isolat  LIPI12-2-LAB030  tidak  memberikan nilai  koagregasi  saat  dipasangkan.  Uji  koagregasi spesies  yang  sama  namun  berbeda  galur  mengha- silkan  nilai  yang  berbeda  pula.  Menurut  Bao et  al. (2010)  nilai  koagregasi  dipengaruhi  oleh  spesifik  ga- lur  (morfologi),  waktu  inkubasi  dan  adanya  inhibitor. Semakin  lama  waktu  inkubasi  koagregasi  semakin tinggi.
Tabel  5.   Hasil uji penempelan  pada  lempeng  tipis
No. Nomor Seri Isolat Jumlah Mikroba (log CFU/mL) 24 Jam 48 Jam Ulas Planktonik Ulas Planktonik 1 LIPI12-2-LAB004 6,99±0,01 b 9,23±0,08 a 2,46±0,04 b 3,56±0,06 d 2 LIPI12-2-LAB030 6,93±0,03 a 9,44±0,01 a < 1 a 2,37±0,01 a 3 LIPI12-2-LAB031 6,62±0,23 b 9,22±0,14 a < 1 a 2,18±0,08 b 4 LIPI13-2-LAB087 7,23±0,08 b 9,34±0,00 a < 1 a 2,61±0,06 c 5 LIPI13-2-LAB011 6,62±0,08 a 9,30±0,08 a < 1 a 2,40±0,08 b
Keterangan: Data rata-rata diperoleh dari dari 2 kali ulangan perlakuan dengan 2 kali ulangan analisis. Super script yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata ( P <0,05).
Tabel  6.  Hasil uji koagregasi Pasangan Isolat Persentase Koagregasi (%) LIPI12-2-LAB004 dan LIPI12-2-LAB031 4,27±1,5 LIPI12-2-LAB004 dan LIPI12-2-LAB030 - LIPI12-2-LAB004 dan LIPI13-2-LAB087 7,37±2,8 LIPI12-2-LAB004 dan LIPI13-2-LAB011 5,83±3,1 LIPI12-2-LAB031 dan LIPI12-2-LAB030 - LIPI12-2-LAB031 dan LIPI13-2-LAB087 6,10±3,0 LIPI12-2-LAB031 dan LIPI13-2-LAB011 3,85±1,9 LIPI12-2-LAB030 dan LIPI13-2-LAB087 - LIPI12-2-LAB030 dan LIPI13-2-LAB011 - LIPI13-2-LAB087 dan LIPI13-2-LAB011 2,92±0,6
Keterangan: Data rata-rata diperoleh dari dari 2 kali ulangan perlakuan dengan 2 kali ulangan analisis

## KESIMPULAN
BAL  yang  diuji  dan  diseleksi  sebagai  kandidat probiotik  memiliki  perbedaan  pada  ketahanan  ter- hadap  kondisi  asam  dan  garam  empedu,  uji  hidrofo- bisitas,  uji  penempelan,  dan  uji  koagregasi.  Spesies dan  asal  isolat  memberikan  pengaruh  signifikan  pa- da  ketahanan  hidup  terhadap  kondisi  asam  dan  ga- ram  empedu  serta  viabilitas  saat  uji  penempelan. Semakin  lama  waktu  inkubasi,  terjadi  penurunan  po- pulasi  isolat  pada  uji  ketahanan  kondisi  asam, garam  empedu  dan  penempelan  (ulas  dan plank - tonic ).  Isolat  BAL  yang  memiliki karakteristik sebagai probiotik  secara in  vitro adalah L.  plantarum LIPI12- 2-LAB004, L.  plantarum LIPI12-2-LAB031, L.  planta- rum LIPI13-2-LAB087  dan L.  plantarum LIPI13-2- LAB011.

## UCAPAN  TERIMA KASIH
Kegiatan  penelitian  ini  merupakan  bagian  dari program  TP  Tasikmalaya  dan  Biovillage  pada  DIPA Pusat Penelitian  Bioteknologi-LIPI.

## DAFTAR PUSTAKA
Argyri  AA,  Zoumpopoulou  G,  Karatzas  KAG,  Tsa- kalidou  E,  Nychas  GJE,  Panagou  EZ,  Tassou CC.  2013.  Selection  of  potential  probiotic  lactic acid  bacteria  from  fermented  olives  by in  vitro tests.  Food  Microbiol  33:  282-291.  DOI:  10.10 16/j.fm.2012.10.005.
Bao  Y,  Zhang,  Yanchao,  Zhang,  Yong,  Liu  Y,  Wang S,  Dong  X,  Wang  Y,  Zhang  H.  2010.  Screening of  potential  probiotic  properties  of Lactobacillus fermentum isolated  from  traditional  dairy  pro- ducts.  Food  Control  21:  695-701.  DOI:  10.1016/ j.foodcont.2009.10.010.
Canzi  E,  Guglielmetti  S,  Mora  D,  Tamagnini  I,  Parini C.  2005.  Conditions  affecting  cell  surface  pro- perties  of  human  intestinal  bifidobacteria.  Anto- nie  van  Leeuwenhoek,  Int  J  Gen  Mol  Microbiol 88: 207-219.  DOI:  10.1007/s10482-005-6501-3.
Dewanti  R,  Wong  ACL.  1995.  Influence  of  culture conditions  on  biofilm  formation  by Escherichia coli O157:H7.  Int  J  Food  Microbiol  26:  147-164. DOI:  10.1016/0168-1605(94)00103-D.
Ding  W,  Shi  C,  Chen  M,  Zhou  J,  Long  R,  Guo  X. 2017.  Screening  for  lactic  acid  bacteria  in  tradi- tional  fermented  Tibetan  yak  milk  and  eva- luating  their  probiotic  and  cholesterol-lowering potentials  in  rats  fed  a  high-cholesterol  diet.  J Funct  Foods  32:  324-332.  DOI: 10.1016/j.jff. 2017.03.021.
Fardiaz  D,  Radiati  LE.  2012.  Pengaruh  whey  kefir susu  kambing  terhadap  hidrofobisitas  bakteri E. coli 0157:H7, S.  typhi dan  khamir C.  albicans .  J Ilmu  Teknol  Hasil Ternak  7: 12-18.
Fijan  S.  2014.  Microorganisms  with  claimed  probiotic properties:  An  overview  of  recent  literature.  Int  J Environ  Res  Public  Health  11:  4745-4767.  DOI: 10.3390/ijerph110504745.
García-Ruiz  A,  González  de  Llano  D,  Esteban-Fer- nández  A,  Requena  T,  Bartolomé  B,  Moreno- Arribas  MV.  2014.  Assessment  of  probiotic  pro- perties  in  lactic  acid  bacteria  isolated  from wine. Food  Microbiol  44:  220-225.  DOI:  10.1016/j.fm. 2014.06.015.
García  A,  Navarro  K,  Sanhueza  E,  Pineda  S,  Pas- tene  E,  Quezada  M,  Henríquez  K,  Karlyshev  A, Villena  J,  González  C.  2017.  Characterization of Lactobacillus  fermentum UCO-979C,  a  pro- biotic  strain  with  a  potent  anti- Helicobacter pylori activity.  Electron  J  Biotechnol  25:  75-83. DOI:  10.1016/j.ejbt.2016.11.008.
Guo  C,  Zhang  S,  Yuan  Y,  Yue  T.  2015.  Comparison of  lactobacilli  isolated  from  Chinese  suan-tsai and  koumiss  for  their  probiotic  and  functional properties.  J  Funct  Foods  12:  294-302.  DOI: 10.1016/j.jff.2014.11.0  29.
Guo  Z,  Wang  J,  Yan  L,  Chen  W,  Liu XM, Zhang, HP. 2009. In  vitro comparison  of  probiotic  properties of Lactobacillus  casei Zhang,  a  potential  new probiotic,  with  selected  probiotic  strains.  LWT- Food  Sci  Technol  42:  1640-1646.  DOI:  10.10 16/j.lwt.2009.05.025.
Hartini  P,  Purwanto  H,  Juliyarsi  IY,  Purwati  E.  2019. Probiotic  potential  of  lactic  acid  bacteria Lacto- bacillus  fermentum Nbrc  15885  isolation  from tempoyak  in  Padang  Pariaman  district,  West Sumatera  (Indonesia)  to  acid  conditions,  bile salts  and  antimicrobial  activity.  Int  Res  J  Pharm 10: 70-73.  DOI:  10.7897/2230-8407.100381.
Ismail  YS,  Yulvizar  C.  2017.  Isolasi,  karakterisasi dan  uji  aktivitas  antimikroba  bakteri  asam  laktat dari  fermentasi  biji  kakao  ( Theobroma  cacao L.) Bioleuser  1: 45 –53.
Kaur  M,  Singh  H,  Jangra  M,  Kaur  L,  Jaswal  P, Dureja  C,  Nandanwar  H,  Chaudhuri  SR,  Raje M,  Mishra  S,  Pinnaka  AK.  2017.  Lactic  acid bacteria  isolated  from  yak  milk  show  probiotic potential.  Appl  Microbiol  Biotechnol  101:  7635- 7652.  DOI:  10.1007/s00253-017-8473-4.
Kizerwetter- Świd  M, Bi    M  2016. Assessment of potentially  probiotic  properties  of  Lactobacillus strains  isolated  from  chickens.  Polish  J  Vet  Sci 19: 15-20.  DOI:  10.1515/pjvs-2016-0003.
Kos  B, Šuš  vić J, Vu  vić S, Šimp     M, Frece J, M   šić  S.  2003.  Adhesion  and  aggregation ability  of  probiotic  strain Lactobacillus  acidophi- lus M92.  J  Appl  Microbiol  94:  981-987.  DOI: 10.1046/j.1365-2672. 2003.01915.x.
Kumar  BV,  Vijayendra  SVN,  Reddy  OVS.  2015. Trends  in  dairy  and  non-dairy  probiotic  products -  a  review.  J  Food  Sci  Technol  52:  6112-6124. DOI:  10.1007/s13197-015-1795-2.
Lähteinen  T,  Malinen  E,  Koort  JMK,  Mertaniemi- Hannus  U,  Hankimo  T,  Karikoski  N,  Pakkanen S,  Laine  H,  Sillanpää  H,  Söderholm  H,  Palva  A. 2010.  Probiotic  properties  of Lactobacillus iso- lates  originating  from  porcine  intestine  and feces.  Anaerobe  16:  293-300.  DOI:  10.1016/j. anaerobe.2009.08.002.
Maunatin  A,  Khanifa,  2012.  Uji  potensi  probiotik  Lac- tobacillus  plantarium  secara in  vitro .  Alchemy-J Chem  2: 26-34.  DOI:  10.18860/al.v0i0.2298.
Nuraida  L.  2015.  A  review:  Health  promoting  lactic acid  bacteria  in  traditional  Indonesian  fer- mented  foods.  Food  Sci  Hum  Wellness  4:  47- 55. DOI:  10.1016/j.fshw.2015.06.001.
Oluwajoba  SO,  Akinyosoye  FA,  Oyetayo  VO.  2013. In  vitro screening  and  selection  of  probiotic lactic  acid  bacteria  isolated  from  spontaneously fermenting  kunu-zaki.  Adv  Microbiol  3:  309-316. DOI:  10.4236/aim.2013.34044.
Panjaitan  R,  Nuraida  L,  Dewanti-Hariyadi  R.  2018. Seleksi  isolat  bakteri  asam  laktat  asal  tempe dan  tape  sebagai  kandidat  probiotik.  J  Teknol Industri  Pangan  29:  175-184.  DOI:  10.6066/jtip. 2018.29.2.175.
Peres  CM,  Alves  M,  Hernandez-Mendoza  A,  Moreira L,  Silva  S,  Bronze  MR,  Vilas-Boas  L,  Peres  C, Malcata  FX.  2014.  Novel  isolates  of  lactobacilli from  fermented  Portuguese  olive  as  potential probiotics.  LWT-Food  Sci  Technol  59:  234-246. DOI:  10.1016/j.lwt.2014.03.003.
Pundir  RK,  Rana  S,  Kashyap  N,  Kaur  A.  2013.  Pro- biotic  potential  of  lactic  acid  bacteria  isolated from  food  samples:  An in  vitro study.  J  Appl Pharm  Sci  3:  85-93.  DOI:  10.7324/JAPS.2013.3 0317.
Ramasamy  K,  Rahman  NZA,  Chin  SC,  Alitheen  NJ,
Abdullah  N,  Wan  HY.  2012.  Probiotic  potential of  lactic  acid  bacteria  from  fermented  Malaysian food  or  milk  products.  Int  J  Food  Sci  Technol 47:  2175-2183.  DOI:  10.1111/j.1365-2621.20 12.03085.x.
Sanhueza  E,  Paredes-Osses  E,  González  CL, García  A.  2015.  Effect  of  pH  in  the  survival  of Lactobacillus  salivarius strain  UCO_979C  wild type  and  the  pH  acid  acclimated  variant.  Elec- tron  J  Biotechnol  18:  343-346.  DOI:  10.1016/j. ejbt.2015.06.005.
Shakibaie M, Mohammadi-Khorsand T, Adeli- sardou,  M.  2017.  Probiotic  and  antioxidant  pro- perties  of  selenium-enriched Lactobacillus  bre- vis LSe  isolated  from  an  Iranian  traditional  dairy product.  J  Trace  Elem  Med  Biol  40:  1-9.  DOI: 10.1016/j.jtemb.2016.11.013.
Shivram  PL,  Vishwanath  PP.  2012.  Assessment  of probiotic  potential  of  Lactobacillus  sp.  isolated from  cheese  and  preparation  of  probiotic  ice- cream. Int  J Res  Ayurveda  Pharm  3: 532-536.
Todoriki  K,  Mukai  T,  Sato  S,  Toba  T.  2001.  Inhibition of  adhesion  of  food-borne  pathogens  to  Caco-2 cells  by Lactobacillus strains.  J  Appl  Microbiol 91:  154-159.  DOI:  10.1046/j.1365-2672.2001. 01371.x.
Valente  GL,  Acurcio  L,  Freitas  LV,  Ricoli  J,  Silva  A, Souza  M,  Penna  CFA.  2019.  Short  communica- tion: In  vitro and in  vivo probiotic  potential  of Lactobacillus  plantarum B7  and Lactobacillus rhamnosus D1  isolated  from  Minas  artisanal cheese.  J  Dairy  Sci  102:  5957-5961.  DOI:  10. 3168/jds.2018-15938.
Yang  M,  Jiang  R,  Liu  M,  Chen  S,  He  L,  Ao  X, Zou L, Liu  S,  Zhou  K.  2017.  Study  of  the  probiotic properties  of  lactic  acid  bacteria  isolated  from Chinese  traditional  fermented  pickles.  J  Food Process  Preserv  41:  1-7.  DOI:  10.1111/jfpp. 12954.
Yu  HJ,  Chen  YF,  Yang  HJ,  Yang  J,  Xue  JG,  Li  CK, Kwok  LY,  Zhang  HP,  Sun  TS.  2015.  Screening for Lactobacillus  plantarum with  potential  inhibi- tory  activity  against  enteric  pathogens.  Annals Microbiol  65:  1257-1265.  DOI:  10.1007/s13213- 014-0963-3.