Penapisan Fitokimia dan Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Etanol Daun Jeruk Nipis ( Citrus Aurantifolia )
(Antimicrobial Activity and Phytochemical Screening of Citrus aurantifolia Leaves Ethanolic Extract
SAFIRA NAFISA*, GREESTY FINOTORY SWANDINY, ERLINDHA GANGGA,

## YULIANITA ARIEFIYANTY ZAENUDIN
Fakultas Farmasi Universitas Pancasila, Jakarta Selatan, 12640, Indonesia
Diterima 2021, Disetujui 2021
Vol. 19, No. 2 JURNAL ILMU KEFARMASIAN  INDONESIA, Oktober 2021,  hlm. 287-291 ISSN 1693-1831, E-ISSN 2614-6495
Abstract: Citrus aurantifolia S. is a traditional medicinal plant that is widely used for various diseases including infections. This study aims to test the in vitro antimicrobial activity of 70% and 96% ethanolic extract of Citrus aurantifolia leaves to microbes that cause infection in humans, including Staphylococcus aureus, Salmonella typhi, Escherichia coli , and Candida albicans . Phytochemical screening was carried out to predict secondary metabolites that play a role in the antimicrobial activity of Citrus aurantifolia leaves. The antimicrobial activity was determined using agar diﬀ usion method with disc paper and well diﬀ usion method. Phytochemical screening showed  that simplicia powder, 70% ethanol extract, and 96% ethanol extract from Citrus aurantifolia leaves contained ﬂ avonoids, coumarin, saponins, tannins, steroids / triterpenoids, and essential oils. This study showed that 70% and 96% ethanol extract of Citrus aurantifolia leaves can inhibit the growth of Staphylococcus aureus, Salmonella typhi, and Escherichia coli bacteria. It can be concluded that the ethanol extract of Citrus aurantifolia leaves is potential to be developed as an antibacterial product.
Keywords: Citrus aurantifolia , ethanolic extract, antimicrobial activity.
Abstrak: Jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia S.)  merupakan  salah  satu  tanaman  obat  tradisional  yang digunakan secara luas untuk berbagai penyakit termasuk infeksi. Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas ekstrak etanol 70% dan 96% daun Citrus aurantifolia terhadap mikroba penyebab infeksi pada manusia, antara lain Staphylococcus aureus , Salmonella typhi, Escherichia coli , dan Candida albicans secara in vitro. Penapisan ﬁ tokimia dilakukan untuk memprediksi metabolit sekunder yang berperan dalam aktivitas antimikroba daun Citrus aurantifolia . Aktivitas antimikroba ditentukan menggunakan metode difusi agar dengan kertas cakram dan metode difusi sumuran. Penapisan ﬁ tokimia menunjukkan bahwa baik serbuk simplisia, ekstrak etanol 70%, dan ekstrak etanol 96% dari daun Citrus aurantifolia mengandung metabolit sekunder ﬂ avonoid, kumarin, saponin, tanin, steroid/triterpenoid, dan minyak atsiri. Ekstrak etanol 70% dan 96% daun Citrus aurantifolia dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, Salmonella typhi , dan Escherichia coli . Dengan demikian dapat disimpulkan ekstrak etanol daun Citrus aurantifolia berpotensi dikembangkan sebagai produk antibakteri.
Kata kunci: Citrus aurantifolia , ekstrak etanol, aktivitas antimikroba.
288  NAFISA ET AL.
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
Daun Citrus  aurantifolia dibersihkan,  dirajang, dan  dikeringkan  dengan  oven  pada  suhu  40-50  °C selama 48-72 jam. Daun kering kemudian dihaluskan menggunakan grinder dan dilewatkan ayakan no 4 dan 18. Serbuk simplisia kemudian diekstraksi dengan cara ekstraksi dingin yaitu maserasi kinetik menggunakan pelarut etanol 70% dan 96%. Ekstrak yang didapat disaring,  dikumpulkan,  lalu  dikentalkan  dengan rotary vacuum evaporator pada suhu 45˚C sehingga diperoleh ekstrak kental.
Penapisan  Fitokimia. Uji  pendahuluan  dan konﬁ rmasi senyawa metabolit sekunder pada ekstrak etanol  70%  dan  96%  daun Citrus  aurantifolia meliputi  identiﬁ kasi  ﬂ avonoid,  kumarin,  alkaloid, saponin,  tanin,  kuinon,  steroid  /  triterpenoid,  dan minyak  atsiri (12,13) .  Flavonoid  dideteksi  dengan  uji reduksi (Mg-HCl / amilalkohol), kumarin dengan uji ﬂ uoresensi, alkaloid dengan uji Dragendorﬀ  dan uji Mayer, saponin dengan uji busa, tanin dengan gelatin dan besi (III) klorida, kuinon dengan pereaksi NaOH, steroid/triterpenoid dengan uji Liebermann-Burchard, serta minyak atsiri dengan uji bau.
Pembiakkan  Kultur  Bakteri. Pembuatan suspensi  bakteri  dilakukan  dengan  mengambil sejumlah  bakteri  dari  biakan  persediaan  dengan jarum ose kemudian ditanam dalam tabung berisi 5 mL kaldu pepton steril untuk Staphylococcus aureus, Salmonella  typhi, dan Eschericia  coli ,  serta Potato Dextrose  Broth (PDB)  untuk Candida  albicans. Biakan bakteri kemudian diinkubasi pada suhu 37⁰C selama 18-24 jam sedangkan fungi pada suhu 20-25⁰C selama  3-5  hari.  Kekeruhan  yang  terbentuk  diukur dengan  Spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 580 nm untuk bakteri dan 530 nm untuk fungi,  kemudian  diatur  hingga  inokula  mempunyai transmittan 25% terhadap blanko (10  CFU/mL) (14) . Aktivitas Antibakteri . Aktivitas  antibakteri ekstrak etanol 70% dan 96% daun Citrus aurantifolia dievaluasi terhadap bakteri patogen Gram positif dan negatif. Aktivitas antibakteri ditentukan menggunakan metode difusi agar dengan kertas cakram dan metode difusi  sumuran  menggunakan  media  nutrient  agar. Pada metode difusi agar, cakram steril (diameter 6 mm) diresapi ekstrak dengan konsentrasi 100%, 50%, 25%, dan 12,5%, kemudian ditempatkan pada permukaan media nutrient agar yang mengandung mikroba uji. Pada metode difusi sumuran, dibuat lubang (sumur) pada media nutrient agar yang mengandung mikroba uji  dengan  diameter  6  mm,  kemudian  dimasukkan ekstrak  dengan  konsentrasi  100%,  50%,  25%,  dan 12,5% pada sumur tersebut. Kloramfenikol (30 µg/ mL)  digunakan  sebagai  kontrol  positif,  sedangkan DMSO  20%  digunakan  sebagai  kontrol  negatif. Cawan  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37  ±  2  ⁰C

## PENDAHULUAN
JERUK  nipis  ( Citrus  aurantifolia S.)  merupakan tanaman  yang  dimanfaatkan  baik  untuk  bumbu masakan maupun sebagai obat tradisional (1) . Banyak penelitian telah menunjukkan bahwa berbagai bagian tanaman Citrus  aurantifolia (daun,  batang,  akar, kulit  kayu)  dapat  digunakan  sebagai  antipiretik, antiradang,  antibakteri,  antijamur,  antidiabetik, antioksidan,  antihipertensi,  antilipidemik,  atau penyakit kardiovaskular (2–8) . Jeruk nipis juga digunakan dalam industri makanan, obat-obatan, dan kosmetik karena  khasiat  dan  aromanya.  Obat-obatan  herbal, termasuk yang berasal dari daun Citrus aurantifolia, telah digunakan secara luas karena efek sampingnya yang  rendah.  Obat  herbal  dan  tradisional  relatif murah,  mengandung  senyawa  aktif  biologis  yang tinggi,  dan  dapat  mencegah  resistensi  bakteri (9) . Penggunaan  tradisional  dan  farmakologis  tanaman Citrus  aurantifolia L.  dikaitkan  dengan  adanya kandungan metabolit sekunder (10,11) .
Prevalensi  infeksi  pada  manusia  merupakan masalah utama dan telah meningkat secara signiﬁ kan di  seluruh  dunia.  Infeksi  sering  terjadi  di  daerah tropis seperti Indonesia karena keadaan udara yang kotor  serta  temperatur  yang  hangat  dan  lembab sehingga mikroba dapat tumbuh subur. Bagi negara berkembang timbulnya strain mikroba yang resisten terhadap antibiotik pada penyakit infeksi merupakan masalah  penting.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk menguji  aktivitas  ekstrak  etanol  70%  dan  96% daun Citrus aurantifolia secara tradisional terhadap mikroba penyebab infeksi pada manusia, antara lain Staphylococcus aureus, Salmonella typhi, Escherichia coli, dan Candida albicans secara in vitro. Penapisan ﬁ tokimia  dilakukan  untuk  memprediksi  metabolit sekunder yang berperan dalam aktivitas antimikroba daun Citrus aurantifolia.

## BAHAN DAN METODE
BAHAN. Daun  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia S.) Etanol 70% dan 96%, Candida albicans ATCC 10231, Escherichia  coli ATCC  25922, Salmonella  typhi ATCC 14028, Staphylococcus aureus ATCC 12228, Media Nutrient Agar (NA),  Media Nutrient  Broth (NB), Potato Dextrose Broth (PDB), P otato Dextrose Agar ( PDA), paper disk, dimetilsulfoksida (DMSO), kloramfenikol, dan nistatin.
METODE.  Pembuatan  Ekstrak. Daun Citrus aurantifolia yang  digunakan  dideterminasi  oleh Departemen  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan Alam,  Universitas  Indonesia.
Vol 19, 2021 Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia 289
selama 24 jam. Hasil berupa Diameter Daerah Hambat (DDH) dimana daerah bening di sekitar kertas cakram atau sumur menunjukkan adanya zona hambat yang dibentuk mikroba uji (6,15) .
Aktivitas Antifungi. Aktivitas antifungi ekstrak etanol  70%  dan  96%  daun Citrus  aurantifolia ditentukan  menggunakan  metode  difusi  agar dengan  kertas  cakram  dan  metode  difusi  sumuran menggunakan media potassium dextrose agar (PDA). Pada  metode  difusi  agar,  cakram  steril  (diameter 6  mm)  diresapi  ekstrak  dengan  konsentrasi  100%, 50%, 25%, dan 12,5%, kemudian ditempatkan pada permukaan media PDA yang mengandung mikroba uji.  Pada  metode  difusi  sumuran,  dibuat  lubang (sumur) pada media PDA yang mengandung mikroba uji  dengan  diameter  6  mm,  kemudian  dimasukkan ekstrak  dengan  konsentrasi  100%,  50%,  25%,  dan 12,5%  pada  sumur  tersebut.  Nistatin  (50  µg/mL) digunakan sebagai kontrol positif, sedangkan DMSO 20%  digunakan  sebagai  kontrol  negatif.  Cawan kemudian diinkubasi pada suhu 20-25 ⁰C selama 3-5 hari. Hasil berupa Diameter Daerah Hambat (DDH) dimana daerah bening di sekitar kertas cakram atau sumur  menunjukkan  adanya  zona  hambat  yang dibentuk mikroba uji (6) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemeriksaan  Organoleptik. Kandungan ﬁ tokimia seperti alkaloid, ﬂ avonoid, tanin, saponin, minyak  atsiri  dan  beberapa  senyawa  aromatik merupakan metabolit sekunder pada tumbuhan yang bertanggung jawab dan berfungsi sebagai mekanisme pertahanan  terhadap  banyak  mikroorganisme  dan serangga.  Bagian  tumbuhan  yang  mengandung metabolit  tersebut  merupakan  kandidat  potensial untuk pengembangan agen antimikroba dari produk herbal. Hasil penapisan ﬁ tokimia menunjukkan bahwa
baik  dalam  serbuk  simplisia  maupun  ekstrak,  daun Citrus  aurantifolia memiliki  kandungan  golongan senyawa  metabolit  sekunder  yang  sama.  Hasil  ini menunjukkan bahwa proses ekstraksi yang dilakukan efektif  sehingga  senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung dalam serbuk tersari sempurna. Penapisan fitokimia  menunjukkan  bahwa  serbuk  simplisia, ekstrak  etanol  70%,  dan  ekstrak  etanol  96%  dari daun Citrus  aurantifolia mengandung  metabolit sekunder ﬂ avonoid, kumarin, saponin, tanin, steroid / triterpenoid, dan minyak atsiri (Tabel 1).
Sifat lipoﬁ lik dari minyak atsiri berperan penting dalam aktivitasnya sebagai antimikroba dengan cara berinteraksi  dan  mengubah  permeabilitas  membran sel mikroorganisme sehingga menyebabkan kematian. Pada  penelitian  lain  diketahui  bahwa  daun Citrus aurantifolia mengandung  d-limonene  sebagai konstituen kimia utama yang berkontribusi pada aroma dan  aksinya  sebagai  antibakteri (10,16) . Tanin  bekerja dengan mengikat protein kaya prolin dan mengganggu sintesis  protein (17) .  Flavonoid  yang  merupakan  zat fenolik  terhidroksilasi  diketahui  disintesis  oleh tanaman sebagai respon terhadap infeksi mikroba (18) . Kumarin juga dikenal mampu melawan bakteri Gram positif dan umum diproduksi dalam wortel sebagai respons  terhadap  infeksi  jamur (17) .  Saponin  dapat menyebabkan kebocoran protein dan enzim tertentu dari sel. Saponin dapat menjadi antibakteri karena zat aktif permukaannya mirip detergen, sehingga saponin akan  menurunkan  tegangan  permukaan  dinding  sel bakteri  dan  merusak  permeabialitas  membran (19) . Beberapa  penelitian  menunjukkan  steroid  memiliki sifat  antibakteri  dengan  menyebabkan  kebocoran liposom (20) .
Aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak  daun Citrus aurantifolia diuji  pada  empat  mikroba  patogen diantaranya Salmonella typhi yang dapat menginfeksi intestinal  dan  darah  serta  menyebabkan  demam tifoid; Staphylococcus  aureus yang  menyebabkan endocarditis dan septiceimia; Escherichia coli yang menyebabkan penyakit gastroenteritis dan diare; serta Candida albicans yang menyebabkan infeksi genital atau oral (17) . Dari 4 mikroba uji, 3 spesies menunjukkan aktivitas  antimikroba  dengan  membentuk  zona inhibisi baik pada metode difusi agar dengan cakram maupun pada difusi sumuran (Tabel 2).
Zona  hambat  yang  diperoleh  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  70%  dan  96%  daun Citrus aurantifolia memiliki aktivitas antibakteri secara in vitro terhadap bakteri Gram positif ( Staphylococcus aureus ) dan bakteri Gram negatif ( Salmonella typhi dan Escherichia coli ), namun tidak dapat menghambat pertumbuhan khamir Candida albicans . Hal ini sejalan dengan  penelitian  lain  yang  menunjukkan  ekstrak
fitokimia Serbuk Ekstrak 96% Ekstrak 70% Alkaloid Flavonoid Saponin Tanin : Kuinon Steroid
Triterpenoid Minyak atsiri Kumarin
Tabel  1.  Hasil  Penapisan  Fitokimia  Daun Citrus aurantifolia.
Keterangan: (+) mengandung golongan senyawa (-) tidak mengandung golongan senyawa
Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia
290 NAFISA ET AL.
aurantifolia. Di  antara  tiga  spesies  bakteri,  ekstrak etanol 96% menunjukkan aktivitas yang lebih tinggi pada Escherichia coli . Sebagian besar ekstrak etanol 96% memiliki nilai zona inhibisi yang sedikit lebih tinggi  dibandingkan  ekstrak  etanol  70% (23) .  Hal  ini menunjukkan  bahwa  kemungkinan  senyawa  yang berperan sebagai antibakteri lebih banyak terekstraksi menggunakan  etanol  96%  yang  memiliki  polaritas lebih  rendah  dibandingkan  etanol  70%.  Dengan demikian  dapat  dikatakan  daun Citrus  aurantifolia memiliki sifat antibakteri pada sebagian besar mikroba uji.

## SIMPULAN
Penapisan ﬁ tokimia menunjukkan bahwa baik serbuk simplisia,  ekstrak  etanol  70%,  dan  ekstrak  etanol 96%  dari  daun Citrus  aurantifolia mengandung metabolit  sekunder  flavonoid,  kumarin,  saponin, tanin, steroid/triterpenoid, dan minyak atsiri. Ekstrak etanol 70% dan 96% daun Citrus aurantifolia dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus, Salmonella typhi, dan Eschericia coli namun tidak  dapat  menghambat  pertumbuhan Candida albicans.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih pada Universitas Pancasila yang telah mendanai penelitian ini.
daun Citrus aurantifolia memiliki aktivitas antibakteri yang baik pada Staphylococcus aureus , Salmonella typhi, dan Escherichia  coli (6,21) .  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa zona hambat pada kontrol negatif DMSO 20% yang merupakan pelarut fraksi uji tidak terbentuk.  Hal  ini  menggambarkan  bahwa  DMSO 20%  tidak  mempengaruhi  hasil  pengujian  aktivitas antibakteri terhadap sampel uji.
Menurut  David  dan  Stout,  kriteria  kekuataan antibakteri  dapat  digolongkan  menjadi  beberapa golongan  yaitu  antibakteri  yang  tergolong  lemah (zona hambat <5 mm), sedang (zona hambat antara 5-10  mm),  kuat  (zona  hambat  antara  10-20  mm), dan tergolong sangat kuat (zona hambat >20mm) (22) . Hasil uji aktivitas antimikroba Staphylococcus aureus, Salmonella typhi, dan Escherichia coli menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  70%  dan  96%  daun Citrus aurantifolia dengan konsentrasi 100% menggunakan metode  sumuran  seluruhnya  menghasilkan  zona inhibisi  lebih dari 20 mm sehingga dapat dikatakan ekstrak merupakan antibakteri yang sangat kuat. Pada metode difusi cakram, zona inhibisi yang terbentuk cenderung memiliki nilai yang lebih rendah. Selain ekstrak  96%  pada  bakteri Escherichia  coli yang tergolong  pada  kategori  kuat,  seluruh  zona hambat yang terbentuk oleh ekstrak konsentrasi 100% dengan metode  cakram memberikan  inhibisi  pada  kategori sedang.
Setiap  strain bakteri  memiliki  derajat  kepekaan yang  berbeda  terhadap  ekstrak  daun Citrus
Mikroba uji Ekstrak etanol Metode difusi Diameter daerah hambat (mm) 100% 50% 25% 12,5% K(+) Staphylococcus aureus 70% Cakram 8,48 ± 0,23 0 0 0 35,72 ± 0,15 Sumuran  24,40 ± 0,88 18,81 ± 0,62  14,85 ± 0,31 7,42 ± 0,34 39,52 ± 0,23 96% Cakram 9,52 ± 0,21 7,18 ± 0,11 0 0 35,44 ± 0,42 Sumuran  25,41 ± 0,22 17,87 ± 0,76  11,11 ± 0,21 0 37,73 ± 0,71 Salmonella typhi 70% Cakram 8,93 ± 0,47 7,41 ± 0,11 0 0 25,71 ± 0,20 Sumuran  26,61 ± 0,64 23,72 ± 0,62  16,55 ± 0,15 0 35,15 ± 0,29 96% Cakram 8,85 ± 0,42 7,32 ± 0,17 0 0 25,33 ± 0,24 Sumuran  20,45 ± 0,19 18,32 ± 0,14  13,36 ± 0,31 0 35,44 ± 0,30 Escherichia coli 70% Cakram 9,85 ± 0,66 0 0 0 30,63 ± 0,02 Sumuran  22,38 ± 0,12 19,68 ± 0,45  17,93 ± 0,57 0 35,90 ± 2,86 96% Cakram  11,03 ± 0,67 8,01 ± 0,40 0 0 30,96 ± 0,42 Sumuran  26,93 ± 0,29 22,37 ± 1,70  18,91 ± 0,72 14,85 ± 1,42 35,83 ± 3,45 Candida albicans 70% Cakram 0 0 0 0 19,31 ± 1,71 Sumuran 0 0 0 0 30,07 ± 1,17 96% Cakram 0 0 0 0 19,58 ± 0,24 Sumuran 0 0 0 0 30,11 ± 1,61
Tabel 2. Hasil diameter daerah hambat pada uji aktivitas antimikroba ekstrak daun Citrus aurantifolia.
Vol 19, 2021

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Şeker Karatoprak G, Yücel Aşık Ç, Çakır A, Köngül Şafak  E.  In  vitro  pharmacological  screening  of antioxidant, cytotoxic and enzyme inhibitory activities of Citrus aurantifolia Linn. Dried fruit extract. Int J Environ Health Res. 2020;
2.  Balogun SO, Da Silva IF, Colodel EM, De Oliveira RG, Ascêncio SD, De Oliveira Martins DT. Toxicological evaluation  of  hydroethanolic  extract  of  Helicteres sacarolha  A.  St.-  Hil.  et  al.  J  Ethnopharmacol. 2014;157:285–91.
3.  Ibrahim  FA,  Usman  LA, Akolade  JO,  Idowu  OA, Abdulazeez AT, Amuzat AO. Antidiabetic Potentials of Citrus aurantifolia Leaf Essential Oil. Drug Res (Stuttg). 2019;69(4):201–6.
4.  Josephine  OEO,  Ngozi  CG.  Comparative eﬀ ects of peel  extract  from  Nigerian  grown  citrus  on  body weight, liver weight and serum lipids in rats fed a high- fat diet. African J Biochem Res. 2015;9(9):110–6.
5.  Loizzo  MR,  Tundis  R,  Bonesi  M,  Menichini  F, De  Luca  D,  Colica  C,  et  al.  Evaluation  of Citrus aurantifolia peel and leaves extracts for their chemical composition,  antioxidant  and  anti-cholinesterase activities. J Sci Food Agric. 2012;92(15):2960–7.
6.  Pathan  R  khan,  Gali  PR,  Pathan  P,  Gowtham  T, Pasupuleti S. In vitro Antimicrobial Activity of Citrus aurantifolia and its Phytochemical screening. Asian Paciﬁ c J Trop Dis. 2012;2(SUPPL.1).
7.  Roko  OG,  Dougnon  V,  Hounkpatin A,  Klotoé  JR, Baba-Moussa  L. Anti-inﬂ ammatory, Analgesic  and Antipyretic Properties of Ethanolic Extracts of Three Plants of Beninese’s Pharmacopoeia: Euphorbia hirta, Citrus aurantifolia and Heterotis rotundifolia. Asian J Biol. 2020;1–8.
8.  Sunday Enejoh O, Oladejo Ogunyemi I, Smart Bala M, Sotonye Oruene I, Musa Suleiman M, Folorunsho Ambali  S.  Ethnomedical  Importance  of Citrus Aurantifolia (Christm)  Swingle.  Pharma  Innov  J. 2015;4(8):1–6.
9.  Ali  S, Bansal  S, Mishra  RP. Fumaria indica (L),  a famous medicinal herb of tribal regions of Jabalpur, Madhya  Pradesh:  Broad  spectrum  antibacterial  and phytochemical  profilng  against  some  pathogenic microorganisms. Pharmacogn J. 2020;12(3):619–23. 10.  Al-Aamri  MS, Al-Abousi  NM, Al-Jabri  SS, Alam T,  Khan  SA.  Chemical  composition  and  in-vitro antioxidant and antimicrobial activity of the essential oil of Citrus aurantifolia L. leaves grown in Eastern Oman. J Taibah Univ Med Sci. 2018;13(2):108–12.
11.  Sandoval-Montemayor  NE,  García A,  Elizondo- Treviño E, Garza-González E, Alvarez L, Del Rayo Camacho-Corona M. Chemical composition of hexane extract of Citrus aurantifolia and anti-Mycobacterium tuberculosis  activity  of  some  of  its  constituents. Molecules. 2012;17(9):11173–84.
12.  Farida Y, Azela  W,  Lestari  ME,  Pratami  DK.  The quality  parameters,  total  ﬂ avonoids  determination and  antioxidant  activity  compound  of  andaliman fruit  andaliman  fruit  ( Zanthoxylum  acanthopodium dc.) extract. Int J Appl Pharm. 2021;13(special issue 2):34–40.
13.  Farnsworth  NR.  Biological  and  phytochemical screening of plants. J Pharm Sci. 1966;55(3):225–76. 14.  Salni  S,  Marisa  H,  Mukti  R.  Isolasi  Senyawa Antibakteri  Dari  Daun  Jengkol  ( Pithecolobium lobatum Benth)  dan  Penentuan  Nilai  KHM-nya.  J Penelit Sains. 2011;14(1):168193.
15.  Sinaga  NI,  Hanaﬁ   M, Yantih  N.  Identiﬁ cation  of chemical compounds and antibacterial activity of 96% ethanol  extract  from moringa  oleifera lam.  Leaves against  mrsa  (methicillin  resistant  staphylococcus aureus).  Int  J Appl  Pharm.  2021;13(Special  Issue 2):111–4.
16.  Raut  JS,  Karuppayil  SM. A  status  review  on  the medicinal  properties  of  essential  oils.  Vol.  62, Industrial Crops and Products. 2014. p. 250–64.
17.  Mohamed  Sham  Shihabudeen  H,  Hansi  Priscilla D,  Thirumurugan  K. Antimicrobial  activity  and phytochemical  analysis  of  selected  Indian  folk medicinal plants. Int J Pharma Sci Res. 2010;1(10):430– 4.
18.  Xie Y, Yang W, Tang F, Chen X, Ren L. Antibacterial Activities  of  Flavonoids:  Structure-Activity Relationship  and  Mechanism.  Curr  Med  Chem. 2014;22(1):132–49.
19.  Khan MI, Ahhmed A, Shin JH,  Baek JS,  Kim MY, Kim  JD.  Green Tea  Seed  Isolated  Saponins  Exerts Antibacterial  Effects  against  Various  Strains  of Gram  Positive  and  Gram  Negative  Bacteria,  a Comprehensive Study in Vitro and in Vivo. Evidence- based Complement Altern Med. 2018;2018.
20.  Epand  RF,  Savage  PB,  Epand  RM.  Bacterial  lipid composition and the antimicrobial eﬃ cacy of cationic steroid  compounds  (Ceragenins).  Biochim  Biophys Acta - Biomembr. 2007;1768(10):2500–9.
21.  Akinnibosun  F,  Edionwe  O.  Evaluation  of  the Phytochemical  and Antimicrobial  potential  of  the Leaf Extracts of Bryophyllum pinnatum L.and Citrus aurantifolia Sw. and their Synergy. J Appl Sci Environ Manag. 2016;19(4):611.
22.  David, Stout. Disc Plate Method of Microbiological Antibiotic Essay. J Microbiol. 1971;22(4).
23.  Wendakoon  C,  Calderon  P,  Gagnon  D.  Evaluation of Selected Medicinal  Plants Extracted in Diﬀ erent Ethanol  Concentrations  for Antibacterial Activity against  Human  Pathogens.  J  Med  Act  Plants. 2012;1(2):60–8.