Evaluasi Kestabilan Xanthomonas oryzae phages Hasil Isolasi dari Lahan Sawah Kelurahan Pulutan Kecamatan Sidorejo Salatiga pada Berbagai Kondisi pH
(The Stability Evaluation of Xanthomonas oryzae phages Isolated from Paddy Field Pulutan Village Sidorejo Sub-District Salatiga City at Various pH Conditions)
Eko Wahyu Widiyatmoko, Andree Wijaya Setiawan  , Yoga Aji Handoko Faculty of Agriculture and Business, Universitas Kristen Satya Wacana, Salatiga, Indonesia
 Corresponding author email: fpb.andre@uksw.edu
Article history: submitted: April 3, 2022; accepted: June 13, 2022; available online: June 29, 2022
Abstract. Xanthomonas  oryzae  (Xo)  is  a  bacterial  leaf  blight  (BLB)  pathogen  that  significantly  reduces  paddy productivity. Farmers overcome Xo with synthetic bactericides and planting resistant varieties of paddy in the paddyfield, but not completely successful. Based on this problem, it is necessary to find a solution to control Xo by  discovering  the  natural  enemies  such  as  a  virus  that  infected  bacteria  named  ‘phages’.  This  study  was  to obtain Xanthomonas oryzae phages particle and stability test of Xo phages to pH. The method for obtaining Xo phages  begins  with  soil  sampling,  isolation,  purification,  and  propagation.  The  pH  stability  test  aims  to determine how much the Xo phages titer is responding to an acid and base stress. Treatment of pH 3 on samples P1,  P2,  and  P3  low  Xo  phages  resistance  was  shown  to  be  8.10 13 PFU/mL;  10.10 13 PFU/mL;  and  4.10 13 PFU/mL.  Treatment  of  pH  7  samples  P1  and  P2  showed  stable  Xo  phages  resistance  at  78.10 13 PFU/mL  and 26.10 13 , while P3 Xo phages stable at pH 9 showed 38.10 13 PFU/mL. Treatment pH 11 samples P1, P2, and P3 decreased gradually, showing 58.10 13 PFU/mL; 12.10 13 PFU/mL; and 36.10 13 PFU/mL. Lysate P1 and lysate P3 are quite resistant to alkaline pH, compared to P2 lysate samples. The application of ameliorants and fertilizers containing magnesium in paddy fields will be alkaline, so that P1 and P3 lysates are thought to have potential as synergistic biocontrols in conditions above pH 7.
Keywords: biocontrol; phages; phage stability; Xanthomonas oryzae; Xanthomonas oryzae phages
Abstrak. Xanthomonas  oryzae ( Xo )  merupakan  patogen  penyakit  hawar  daun  bakteri  (HDB)  yang  dapat mengurangi  produktivitas  padi  secara  nyata.  Petani  menanggulangi Xo dengan  bakterisida  sintetik  dan penanaman  padi  varietas  tahan  di  lapangan,  namun  belum  sepenuhnya  berhasil.  Berdasarkan  latar  belakang tersebut perlu adanya solusi untuk mengendalikan Xo dengan mencari musuh alami yaitu virus yang menginfeksi bakteri.Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan partikel Xanthomonas oryzae phages dan menguji stabilitas Xo phages terhadap pH. Metode untuk mendapatkan Xo phages dimulai dengan pengambilan sampel tanah, isolasi, purifikasi, dan propagasi. Pengujian stabilitas pH bertujuan untuk mengetahui seberapa banyak titer Xo phages dalam  merespon  suatu  cekaman  asam  dan  basa.  Perlakuan  pH  3  pada  sampel  P1,  P2,  dan  P3  ketahanan Xo phages rendah  ditunjukkan  8.10 13 PFU/mL;  10.10 13 PFU/mL;  dan  4.10 13 PFU/mL.  Perlakuan  pH  7  sampel  P1 dan  P2  ketahanan Xo  phages stabil  ditunjukkan  78.10 13 PFU/mL  dan  26.10 13, sedangkan  P3 Xo  phages stabil pada  pH  9  ditunjukkan  38.10 13 PFU/mL.  Perlakuan  pH  11  sampel  P1,  P2,  dan  P3  turun  bertahap  ditunjukkan 58.10 13 PFU/mL; 12.10 13 PFU/mL; dan 36.10 13 PFU/mL. Lysate P1 dan lysate P3 cukup tahan terhadap pH basa, dibandingkan dengan sampel lysate P2. Pemberian amelioran dan pupuk yang mengandung unsur magnesium di lahan  padi  akan  bersifat  basa,  sehingga lysate P1  dan  P3  diduga  memiliki  potensi  sebagai  biokontrol  yang sinergis pada kondisi diatas pH 7.
Kata  kunci: biokontrol ;  phages;  stabilitas  phages;    Xanthomonas  oryzae;  Xanthomonas  oryzae  phages

## PENDAHULUAN
Padi  ( Oryza  sativa L.)  merupakan tanaman serealia yang mengandung karbohidrat  cukup  tinggi.  Menurut  (Ishaq dkk.,  2017)  padi  merupakan  sumber  bahan pangan utama hampir dari setengah penduduk  di  dunia.  Kebutuhan  padi  di Indonesia  akan  selalu  meningkat,  namun produktivitas  padi  cenderung menurun.  Sari
(2014),  menegaskan  bahwa  menurunnya produktivitas  padi  seiring  meningkatnya jumlah penduduk dalam memenuhi kebutuhan  padi  dalam  negeri.  Faktor  yang mempengaruhi  menurunnya  produktivitas padi disebabkan patogen penyakit (Kharisma dkk., 2013).
Patogen  penyakit  yang  menginfeksi tanaman  padi  belum  sepenuhnya  tuntas
Agro Bali : Agricultural Journal                                                                                  e-ISSN 2655-853X Vol. 5 No. 2: 289-297, July 2022 https://doi.org/10.37637/ab.v5i2.952
diatasi,  termasuk  hawar  daun  bakteri (HDB). Xanthomonas  oryzae merupakan hawar  daun  bakteri  yang  dapat  mengurangi produktivitas  padi  secara  nyata.  Infeksi Xo dapat  ditularkan  melalui  benih  (Swings et al .,  1990).  Tanaman  yang  terinfeksi,  sisa gulma  dan  air  irigasi  dapat  menjadi  sumber penyebaran Xo (Ranjani et al ., 2018). (Sudir &  Sutaryo,  2011)  menyatakan  akibat  dari kerusakan  daun,  kemampuan  fotosintesis pada  tanaman  padi  terganggu,  sehingga gabah  tidak  terisi  penuh  bahkan  hampa. Penularan  pada  fase  vegetatif  menyebabkan tanaman  puso,  sedangkan  serangan  pada fase generatif menyebabkan pengisian gabah menjadi  kurang  sempurna  dan  kehilangan hasil mencapai 50% (Shen & Ronald, 2002). Selama ini petani menanggulangi Xo dengan aplikasi  bakterisida  sintetik  dan  penanaman padi  varietas  tahan  di  lapangan  untuk meningkatkan  bobot  hasil  (Ji et  al .,  2018), namun belum sepenuhnya berhasil. (Nugraha dkk.,
2014) menyatakan bakterisida  berbahan  aktif Chlorobromo isocyanuric acid (CBIA) dengan konsentrasi 1,0 g I -1 dan 1,5 g I -1 dalam 8 minggu setelah tanam dapat menekan HDB, tanpa menimbulkan gejala fitotoksisitas pada padi. Penggunaan  bakterisida  sintetik  selama  ini belum  tuntas  dan  meninggalkan  residu dalam  tanah.  (Serdani et  al .,  2018), menjelaskan  aplikasi  bakteri  endofit  dari jaringan akar tanaman padi mampu menekan  HDB  dengan  persentase  sifat antagonisnya 37,50% lebih potensial, namun penggunaan  bakteri  endofit  perlu  diuji karakter  dan  potensinya  yang  diisolasi  dari tanaman padi sehat.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  perlu adanya solusi atau terobosan untuk mengendalikan  patogen  penyakit  HDB, dengan  mencari  musuh  alami  yaitu  virus yang  menginfeksi  bakteri. Xo  phages telah dipertimbangkan  sebagai  biokontrol  untuk menginfeksi Xo dengan  tipe Host  Xo di lapangan  (Lee et  al .,  2007).  Batasan  dari penelitian ini dimulai dari isolasi, purifikasi, propagasi  dan  pengujian  stabilitas Xo phages terhadap pH. Pengujian stabilitas Xo
phages terhadap  pH  dilakukan  untuk mengetahui  seberapa  tahan Xo  phages menerima  cekaman  basa.  Cekaman  basa dapat  dijumpai  pada  lahan  salinitas  dan pemberian  pupuk  magnesium  yang  bersifat alkalis, sehingga dengan harapan Xo phages menjadi  biokontrol  yang  sinergis  dan  dapat diaplikasikan  pada  kondisi  lahan  salinitas tinggi.

## METODE
Penelitian  ini  telah  dilakukan  dari Agustus  2020  hingga  Desember  2021  di laboratorium mikrobiologi pertanian, Fakultas  Pertanian  dan  Bisnis,  Universitas Kristen Satya Wacana.Metode percobaan ini bersifat eksploratif deskriptif karena menemukan  suatu  data  yang  diprediksi terdapat phages di  sekitar (rhizosfer) perakaran  tanaman  padi.  Bahan  yang digunakan  untuk  penelitian  adalah  sampel tanah  sawah, Xanthomonas  oryzae dari Indonesian  Culture  Collection (InaCC, Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia) dengan  kode  isolat    B16, nutrient  agar (NA), nutrient  broth  (NB) cair (Hi-media) , nutrient  broth (NB) soft  agar  (Hi-media), buffer , microbiology agar (difco laboratories) , syringe  (jet  bofil) dan pH indicator  strips  (MQuant) .  Alat  yang digunakan  untuk  penelitian  adalah  kulkas (toshiba) ,  spektrofotometer (shimadzu  UV- Vis  1280) ,  entkas, hot  plate  (thermolyne) , autoclave  (hirayama) ,  sentrifuse (centrifuge PLC  series) , shaker  (fine  PCR),  micropipet (transferpette), microtube (biologix), erlenmeyer  (pyrex), cawan  petri (herma) , botol  falcon (iwaki) ,  tabung  reaksi (pyrex) , beaker  glass  (pyrex) ,  bunsen, waterbath , timbangan  analitik (mettle  rpm  600) dan inkubator (memmert) . Berikut skema tahapan dan prosedur penelitian.
Sampel Tanah dan Prekultur Xo Pengambilan sampel tanah dilakukan di lahan  sawah  Kelurahan  Pulutan  Kecamatan Sidorejo  Salatiga,  pada  pukul  05:00-06:00 pagi.Sampel tanah dalam kondisi padat tidak berlumpur,  namun  tergenang  air.  Kondisi cuaca cerah dan memasuki musim hujan.Sampel  tidak  dipaparkan  cahaya
Agro Bali : Agricultural Journal                                                                                  e-ISSN 2655-853X Vol. 5 No. 2: 289-297, July 2022 https://doi.org/10.37637/ab.v5i2.952
matahari  langsung,  agar  DNA  dan  struktur protein Xo  phages tidak  rusak  oleh  sinar UV.  Tanah  diambil  lima  titik  ditarik  garis lurus pada pola belt transect (Fachrul, 2007) sepanjang 100 meter pada satu  petak sawah sebanyak  25  g/sampel  uji,  kemudian dicampur dan dimasukkan ke dalam kantong plastik hitam.
Sampel  tanah  dibawa  ke  laboratorium kemudian  ditimbang  25  g,  ditambahkan pelarut  sm buffer 50  mL  dalam  tabung erlenmeyer 200 mL. Tanah digojlok dengan kecepatan 20 rpm selama 2 jam agar agregat tanah  dan Xo  phages homogen,  kemudian didiamkan sejenak.
Setelah  itu  diambil  10  mL  sampel  air dan dimasukkan ke dalam tabung sentrifuse. Setelah  itu  sampel  disentrifuse  selama  20 menit dengan kecepatan 6.000 rpm.
Diulangi tiga kali sentrifuse untuk
mendapatkan lysate yang  jernih.  Setelah  itu lysate disaring  dengan  membran  filter  (0,2 µm)  supaya  partikel Xo dapat  ditahan  dan didapatkan Xo  phages (Hardanti et  al ., 2018). Sampel dimasukkan ke dalam tabung steril  dan  disimpan  dalam refrigerator dengan suhu 4 o C.
Prekultur Xo dilakukan dengan menggoreskan  jarum  ose  pada  isolat Xo yang  dicampurkan  dalam  media  25  mL  NB cair.  Media Xo diinkubasi  selama  dua  jam pada  37 o C,  kemudian  media Xo diukur dengan  panjang  gelombang  600  nm  pada spektrofotometer dan dapat diketahui tingkat kekeruhannya  ( optical  density ).  Media Xo diharapkan dapat mencapai tingkat kekeruhan  diantara  0,30  hingga  0,45  OD, sehingga  media Xo dapat  digunakan  untuk plating pada pengujian plaque .
Gambar 1 . Skema isolasi dan uji stabilitas Xo phages terhadap pH
Isolasi Xo phages Lysate yang  diprediksi  terdapat Xo phages dilakukan  isolasi  dengan  metode double  layer  agar (Adams,  1959)  yaitu media NA 6 mL dituang dalam cawan petri, setelah  media  padat  dituang  media  NB soft agar 5  mL  di  lapisan  kedua.  Setelah memadat, lysate diteteskan  sebanyak  50  µL menggunakan micropipet . Sampel diamati 1 x  15  jam  hingga  terbentuk  zona  bening ( plaque ). Modifikasi penelitian dari Chae et al .,  (2014),  digunakan  sampel  air  irigasi sawah  ditambahkan  dengan  beberapa  tetes kloroform  (ca.  2%  (v/v))  dan  disentrifuse pada suhu ruang 10.000 xg selama 10 menit. Purifikasi Xo phages Purifikasi  dilakukan  dengan  teknik lapisan  atas  ( overlay ),  setelah  lapisan  dasar
dituang  (Oliveira et  al .,  2009).  Purifikasi dilakukan dengan mencungkil plaque menggunakan  ujung  lubang blue  tip yang dipotong. Plaque dimasukkan dalam microtube ditambahkan  100  µL  media  NB cair,  kemudian microtube dibolak-balik supaya homogen. Setelah itu media NB cair diteteskan  sebanyak  50  µL  dengan yellow tip di  atas  permukaan  media  NA  dan  NB soft agar yang sudah padat. Petri diletakkan pada  suhu  ruang  di  dalam  entkas  dengan kondisi  steril, kemudian.diamati 1 x 15 jam hingga terbentuk plaque .
Propagasi Xo phages Plaque dengan  ukuran  sama  diambil menggunakan  ujung  lubang bluetip yang dipotong.  Cuplikan plaque dimasukkan  ke dalam erlenmeyer berisi 25 µL NB cair yang
propagasi Tahap 2. Stabilitas pH purifikasi Tahap 1. Isolasi Xo phages Isolasi
sampel tanah
sudah  dicampur  2  µL  kultur Xo kemudian digojlok  2  x  24  jam  supaya  homogen, setelah  itu Xo  phages dapat  dipanen. Kemudian Xo  phages disentrifuse  dan disaring  dengan  membran  filter  0,22 µm( syringe ),  kemudian  dimasukkan  ke dalam  tabung  falcon. Xo  phages dapat dihitung dengan mengetahui jumlah titernya. Hatfull (2020), menjelaskan perhitungan Xo  phages  titer dituangkan dalam rumus.
Xo phages (PFU/mL) x 10
3 µL/ 1 mL x ( dilution factor ) ……..(1)
Diketahui (PFU/mL)   jumlah dalam satuan titer Xo phages , Σ plaque = jumlah plaque yang lisis dari Xo phages , 50 µL = banyaknya lysate yang diuji.
Pengujian Stabilitas  pH Xo phages Pengujian stabilitas Xo phages terhadap pH dilakukan dengan mengambil lysate 250 µL  sebanyak  lima lysate dalam microtube . Lysate berjumah  dua  ditambahkan  HCl  0,1 M  ke  dalam microtube hingga lysate menunjukkan  pH  3  dan  pH  5. Lysate berjumlah  dua  ditambahkan  NaOH  0,1  M hingga lysate menunjukkan  pH    9  dan  pH 11.  Penetapan  pH  7  tidak  ditambahkan kedua  larutan.  Kelima  perlakukan  pH dilakukan  pengecekan  dengan pH  indicator strips .  Setelah  itu  dihomogenkan  dan
didiamkan  selama  satu  jam.  Selanjutnya sampel  dilakukan plating dengan  seri pengenceran  10 1 hingga  10 12 . Plating diamati  1  x  15  jam  hingga  muncul plaque . Pengujian  stabilitas Xo  phages terhadap  pH dilakukan  dua  hingga  tiga  kali  supaya konsisten  munculnya Xo  phages .  Sampel diamati pada 12 petri, kemudian diharapkan plaque dapat  konsisten  muncul  diatas  pH  7 pada petri 10 hingga petri 12.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Lysate yang  diambil  dari  tanah  sawah sebanyak  3  sampel. Lysate ditandai  dengan pengkodingan  P1,  P2,  dan  P3.  Ketiga sampel  tersebut  dilakukan plating ,  dan konsisten munculnya plaque . Lysate selanjutnya  dilakukan  pengujian  isolasi, purifikasi,  dan  stabilitas  terhadap  pH sebagai berikut.

## Isolasi Xo phages
Proses  isolasi  merupakan  tahap  awal keberhasilan untuk  mendapatkan Xo phage s yang ditunjukkan zona bening (plaque) . Plaque menunjukkan indikator bahwa  agen  virus  dapat  melisiskan Xo . Pengujian  tahap  isolas  ipositif Xo  phages sebagai berikut.
Gambar 2 . Isolasi Xo phages (P1) sampel Pulutan 1 (P2) sampel Pulutan 2 (P3) sampel Pulutan 3 (a) indikator Xo lisis oleh Xo phages (b) zona pertumbuhan Xo
Gambar  P1,  P2,  dan  P3  positif Xo  phages , ditandai  munculnya  zona  bening  ( plaque ) pada media agar (Guttman & Kutter, 2002). Xo terinfeksi,  sehingga  sel  bakteri  lisis  dan diikuti  replikasi  sebagai  hasil  infeksi  dari satu sel bakteri per satu virus. Selama siklus lisis (litik) tidak terjadi penggabungan DNA
dengan  kromosom  inang  (Orlova,  2012). Ukuran Xo  phages berbeda-beda  karena rendahnya  laju  absorbsi  dan  visibilitas semakin  menurun,  sehingga plaque yang dihasilkan  kecil  dan  sebaliknya  (Gallet et al ., 2011). a b P3 P2 P1
Purifikasi Xo phages
Teknik  purifikasi  dilakukan  dengan pengambilan satu plaque yang mewakili Xo phages dari  spesies  dan  bentuk  yang  sama. Menurut  (Haq et  al .,  2012),  tujuan dilakukannya
purifikasi
adalah
meminimalisir  terjadinya  kontaminasi,  dan
dilakukan plating kembali untuk memastikan Xo  phages murni  dengan mengatur  komposisi  media  pertumbuhan. Berikut pengujian purifikasi Xo phages yang dilakukan  dengan  metode  tuang  sebagai berikut.

## Gambar 3 . Purifikasi Xo phages
Berdasarkan  penelitian  uji  purifikasi,  ketiga  sampel  menunjukkan single  plaque dan sudah  murni.  Menurut  Adams  (1959), plaque yang  terbentuk  kemudian  dimurnikan  dengan teknik single plaque dari isolasi menggunakan rumus standar Plaque Form Units (PFU/mL) . Dilihat  dari  gambar  di  atas,ukuran plaque berbeda-beda  dengan  sampel  yang  lain.  Ukuran single  plaque berbeda-beda  karena  dipengaruhi  morfologi phage  virion dan  lamanya  waktu produksi phages dalam fase intraseluler sebelum sel lisis (Bayat et al ., 2021).
Tabel 1. Perhitungan jumlah titer Xo phages (PFU/mL) sampel (10 8 ) DF jumlah plaque plaque titer (PFU/mL)
P1 2
4.10 9 P2 4
8.10 9 P3 3 6.10 9
Keterangan: P1 (Pulutan 1), P2 (Puluan 2), P3 (Pulutan 3), DF ( dilution factor )
P1 P2
P3
Propagasi Xo phages Propagasi
bertujuan untuk
meningkatkan  jumlah  titer Xo  phages . Propagasi  dikatakan  berhasil  apabila lysate yang  diuji  muncul plaque lebih  banyak hingga  seluruh  permukaan  media  terlihat banyak plaque .  Pengujian  hasil  propagasi dibuat dilution  factor pada  10 8 dari  hasil propagasi disajikan pada Tabel 1.
Dilihat dari tabel di atas P1, P2, dan P3 menunjukkan positif plaque (Ranjani, 2018). Plaque muncul  dalam  bentuk single plaque ,  sehingga  titer Xo  phages dengan mudah  dapat  dihitung.  Efektivitas plaque terdapat  pada  ketiga  sampel  DF  10 8 . (Madigan et al ., 2012) menjelaskan kemunculan plaque dapat  dipengaruhi  oleh sistem  pertahanan  bakteri  yang  diinfeksi
oleh phages. Sampel  P1  dihasilkan plaque titer sebanyak  4.10 9 PFU/mL, P2 dihasilkan plaque titer sebanyak 8.10 9 PFU/mL, dan P3 dihasilkan plaque  titer sebanyak  6.10 9

## PFU/mL.

## Uji Stabilitas pH
Pengujian stabilitas Xo phages terhadap pH  bertujuan  untuk  mengetahui  seberapa efektivitasnya partikel Xo phages menerima suatu  cekaman  asam  dan  basa.  Sampel  P1, P2,  dan  P3  dilakukan  pengujian  seri pengenceran  dan  dilakukan plating kembali pada perlakuan pH. Pengujian dilakukan dua hingga tiga kali supaya konsistensi munculnya Xo  phages .  Pengujian  stabilitas Xo  phages terhadap  pH    ketiga  sampel disajikan  dalam  bentuk  grafik  sebagai berikut.
Gambar 4. Pengujian stabilitas pH Xo phages PFU/mL (a) uji pH sampel P1 (b) uji pH sampel P2 (c) uji pH sampel P3
Gambar 4 menunjukkan pengujian stabilitas pH 3 hingga pH 11 pada sampel P1, P2,dan P3.  Stabilitas  pH  3  ditunjukkan  titer Xo phages rendah.  Sampel  P1  dan  P2 Xo phages optimum  pada  pH  7  dan  pH  9, hingga  pH  11 Xo  phages titernya  menurun
perlahan.  Perlakuan  pH  3  pada  sampel  P1, P2,  dan  P3  titer Xo  phages rendah ditunjukkan 8.10 -13 PFU/ml;10.10 13 PFU/ml; dan  4.10 13 PFU/ml.  Perlakuan  pH  7  sampai P1  dan  P2  pH  titer Xo  phages stabil ditunjukkan
78.10 13 PFU/mL dan pH (b) pH (a ) pH (c)
26.10 13 .Sedangkan P3 titer Xo phages stabil pada  pH  9  ditunjukkan  38.10 13 PFU/mL. Perlakuan pH 11 sampel P1, P2, dan P3 titer Xo  phages turun  bertahap  ditunjukkan 58.10 13 PFU/mL;  12.10 13 PFU/mL;  dan 36.10 13 PFU/mL. Xo phages pada sampel P1 mengalami  perbanyakan  namun  minimum pada pH 3 , Xo phages optimum pada pH 7, hingga  pada  pH  11 Xo  phages mengalami penurunan efektivitas namun lambat. Sampel  P2,  dari  pH  3  hingga  pH  7, efektivitas Xo  phages menuju  optimum, namun  perlahan  naik  efektivitasnya,  hingga menuju  pH  11  penurunan  efektivitas Xo phages menurun  cukup  cepat.  Sampel  P3, dari  pH  3  hingga  pH  7, Xo  phages efektivitasnya menurun. Xo phages optimum pada pH 9, hingga pada pH 11, Xo phages mengalami  penurunan  efektivitas namun  lambat.  Pengaruh  munculnya Xo phages dalam kestabilan pH basa diprediksi terdapat  enzim  endolisin  yang  berperan dalam  pelisisan  bakteri Xo .  Penelitian  ini sejalan  dengan  Haq et  al .,  (2012),  bahwa beberapa phages dapat  melisiskan  sel  inang bakteri dengan menghasilkan enzim endolisin  pada  kondisi  diatas  pH  7.  Selain itu plaque akan    muncul  pada  kondisi  pH optimum karena pengaruh titer phages yang cukup kuat pada kondisi pertahanan Xo yang lemah (Madigan et al ., 2012).
Uji  stabilitas Xo  phages terhadap  pH bertujuan untuk mengetahui seberapa efektivitasnya partikel Xo phages beradaptasi  pada  cekaman  asam  dan  basa. Efektivitas  partikel Xo  phages dalam evaluasi  kestabilan Xo  phages terhadap  pH cukup  berbeda-beda. Xo  phages optimum pada  pH  7  hingga  pH  10  yang  ditunjukkan dari  ketiga  sampel  yang  telah  diuji.  Hasil perlakukan  stabilitas  terhadap  pH  pernah dilakukan  oleh  Jurczak-Kurek et  al .,  (2016) bahwa  80  dari  83  sampel lysate optimum pada  pH  10,  sementara  banyaknya  titer phages cukup  tinggi  pada  pH  12  berjumlah 48  sampel  dari  83  sampel lysate yang diinfeksikan pada Escherichia coli . Menurut penelitian Czajkowski et al ., 2014) sembilan sampel lysate yang  diinfeksikan Dickeya
solani spp.  optimum  pada  pH  7,  dan pertumbuhannya tinggi pada pH 9.
Kondisi lingkungan pengambilan sampel tanah berpengaruh terhadap kestabilan  pH Xo  phages terhadap  pH . Lysate P1 dan P3 efektivitasnya cukup tahan terhadap  pH  basa,  dibandingkan  dengan sampel lysate P2. Xo  phages mampu bertahan  tanpa  kehilangan  efektivitasnya terhadap  sifat  kimia  tanah  yang  bersifat basa.  Hasil  penelitian  oleh  Banjarnahor et al ., (2019) menjelaskan pemberian amelioran terhadap sifat kimia tanah gambut pada  lahan  padi  dapat  meningkatkan  pH tanah,  seperti  air  laut  dan  terak  baja. Ketahanan Xo  phages terhadap  basa  dapat dikaitkan  dengan  pemberian  pupuk  yang mengandung  unsur  magnesium.  Menurut Hardjowigeno (2002) magnesium merupakan  komponen  zat  klorofil,  yang memainkan  suatu  peranan  dalam  beberapa reaksi  enzim.  Pemberian  amelioran  dan pupuk  yang  mengandung  unsur  magnesium di  lahan  padi  akan  bersifat  basa,  sehingga lysate P1  dan  P3  diharapkan  memiliki potensi  sebagai  biokontrol  yang  sinergis pada kondisi diatas pH 7.

## SIMPULAN
Berdasarkan tujuan dan hasil penelitian, Xo phages telah berhasil diisolasi, dipurifikasi, dan dipropagasi dengan mendapatkan  partikel Xo  phages yang dinyatakan  dengan  kode  P1  (Pulutan  1), kode  P2  (Pulutan  2),  dan  kode  P3  (Pulutan 3).  Pengujian  stabilitas Xo  phages terhadap pH  dapat  diketahui  sifat  karakteristik fungsionalnya. Ketiga sampel dapat diketahui  bahwa  P1  dan  P3  konsisten muncul Xo  phages terhadap  pH  9,  namun efektivitasnya  cenderung  menurun  pada  pH 3.  Sebaliknya  P2, Xo  phages konsisten muncul  pada  pH  3,  namun  efektivitas Xo phages cenderung  menurun  pada  pH  9. Lysate P1  dan  P3  cukup  tahan  terhadap  pH basa, dibandingkan dengan sampel lysate P2 yang efektivitasnya minimum pada pH basa.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Pihak  Universitas
Kristen Satya
Wacana yang telah memberikan dana penelitian melalui program hibah dana penelitian internal.

## DAFTAR PUSTAKA
Adams, M. H. (1959). Bacteriofag . Interscience Publishers, Inc.
Banjarnahor, B. J., Sarifuddin., & Lubis, K. S. (2019). Pengaruh Pemberian Beberapa  Amelioran  Terhadap  Sifat Kimia  Tanah  Gambut  Dataran  Tinggi Toba  dan  Pengaruhnya  Terhadap Pertumbuhan  dan  Produksi  Tanaman Padi  (Oryza  Sativa  L.) . 6 (1),  146–152. https://doi.org/10.51747/agrotechbiz.v6 i1.443
Bayat,  F., Didar, T. F., & Hosseinidoust, Z. (2021).  Emerging  investigator  series: bacteriophages  as  nano  engineering tools  for  quality  monitoring  and pathogen  detection  in  water  and wastewater. Environmental  Science:
Nano , 8 (2), 367–389. https://doi.org/10.1039/d0en00962h
Chae, J. C., Hung, N. B., Yu, S. M., Lee, H. K.,  &  Lee,  Y.  H.  (2014).  Diversity  of bacteriophages  infecting Xanthomonas oryzae pv. oryzae in  paddy  fields  and its  potential  to  control  bacterial  leaf blight  of rice. Journal of Microbiology and  Biotechnology , 24 (6),  740–747. https://doi.org/10.4014/jmb.1402.0201 3
Czajkowski, R., Ozymko, Z., & Lojkowska, E. (2014).
Isolation and characterization of novel soilborne lytic bacteriophages  infecting  Dickeya  spp. biovar 3 ('D. solani’). Plant Pathology , 63 (4), 758–772. https://doi.org/10.1111/ppa.12157 Fachrul,  M.  F.  (2007). Metode  Sampling Bioekologi . Bumi Aksara. Gallet,  R.,  Kannoly,  S.,  &  W.  I.  (2011). Effects  of  bacteriophage  traits  on plaque  formation. BMC  Microbiology , 11 (181),
1–16. https://doi.org/10.1186/1471-2180-11- 181 Guttman,  B.  S.,  &  Kutter,  E.  M.  (2002). Bacteriophage Genetics. Modern
Microbial  Genetics (Second  Edi). https://doi.org/10.1002/047122197X.ch
4
Haq, I. U., Chaudhry, W. N., Akhtar, M. N., Andleeb,  S.,  &  Qadri,  I.  (2012). Bacteriophages  and  their  implications on  future  biotechnology:  A  review.
Virology
Journal , 9 , 1–8. https://doi.org/10.1186/1743-422X-9-9
Hardanti,  S.,  Wardani,  A.  K.,  &  R.  W.  D.
(2018). Isolasi dan karakterisasi bakteriofag  spesifik  Salmonella  typhi dari kulit ayam. Journal of Infection in Developing Countries , 19 (2), 107–116. https://doi.org/10.21776/ub.jtp.2018.01 9.02.5
Hardjowigeno,  S.  (2002). Ilmu  Tanah . Mediyatama Sarana Perkasa. Jakarta. Hatfull,  G.  (2020). Procedure  for  the isolation  and  purification  of  a  phage . Phagehunting program.
https://phagesdb.org
Ishaq, M., Rumiati, A. T., & Permatasari, E.
O. (2017). Analisis Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Produksi Padi di Provinsi  Jawa  Timur  Menggunakan Regresi  Semiparametrik  Spline. Jurnal Sains  dan  Seni  ITS , 6 (1),  420–425. https://doi.org/10.12962/j23373520.v6i 1.22451
Ji,  Z.,  Wang,  C.,  &  Zhao,  K.  (2018).  Rice routes  of  countering Xanthomonas oryzae . International Journal of Molecular  Sciences , 19 (10),  1–14. https://doi.org/10.3390/ijms19103008 Jurczak-Kurek,  A.,  Gasior,  T.,  Nejman- Faleńczyk, B., Bloch, S., Dydecka, A., Topka,  G.,  Necel,  A.,  Jakubowska- Deredas,  M.,  Narajczyk,  M.,  Richert, M.,  Mieszkowska,  A.,  Wróbel,  B., Wȩgrzyn,  G.,  &  Wȩgrzyn,  A.  (2016). Biodiversity of bacteriophages: Morphological and biological
properties  of  a  large  group  of  phages isolated  from  urban  sewage. Scientific
Reports , 6 , 1–17.
https://doi.org/10.1038/srep34338
Kharisma,  S.  D.,  Cholil,  A.,  &  Aini,  L.  Q. (2013).  Ketahanan  Beberapa  Genotipe
Padi Hibrida (Oryza Sativa L.) Terhadap  Pyricularia  oryzae  Cav. Penyebab  Penyakit  Blas  Daun  Padi. Jurnal HPT , 1 (2), 19–27.
Lee, C. N., Hu, R. M., Chow, T. Y., Lin, J. W.,  Chen,  H.  Y.,  Tseng,  Y.  H.,  & Weng,  S.  F.  (2007).  Comparison  of genomes  of  three Xanthomonas  oryzae
bacteriophages. BMC  Genomics , 8 ,  1– 11.  https://doi.org/10.1186/1471-2164- 8-442
Madigan, M. T., John, M. M., Bender, K. S.,
Buckley, D. H., & Stahl, D. A. (2012). BrockBiology  of  Microorganism.  13th ed. Pearson .
Nugraha,  D.  B.  A.  R.,  Aeny,  T.  N.,  & Maryono, T.  (2014). Pengaruh aplikasi bakterisida  berbahan  aktif  asam  kloro bromo isosianurik 50% terhadap intensitas  penyakit  hawar  daun  bakteri dan  produksi  pada  tanaman  padi. Jurnal Agrotek Tropika , 2 (1), 139–143. https://doi.org/10.23960/jat.v2i1.1945 Oliveira,  A.,  Sillankorva,  S.,  Quinta  R., Henriques,  A.,  Serono,  R.,  Azeredo,  J. (2009).  Isolation  dan  characterization of  bacteriophages  for  avian  pathogen Escherichia  coli strains. J.  Appl Microbiol ,
106 , 1919–1927.
https://doi.org/10.1111/j.1365-
2672.2009.04145.x Orlova,  E.  V.  (2012) .  Bacteriophages  and their Structural Organisation
acteriophages  and  their  Structural
Organisation . https://doi.org/10.5772/34642
Ranjani,
P., Gowthami, Y.,
Gnanamanickam,  S.  S.,  &  Palani,  P. (2018). Bacteriophages: A new weapon for  the  control  of  bacterial  blight disease in rice caused by Xanthomonas oryzae . Microbiology and
Biotechnology Letters , 46 (4), 346–359. https://doi.org/10.4014/mbl.1807.0700
9
Sari,  R.  K.  (2014).  Analisis  impor  beras  di
Indonesia. Economics  Development Analysis Journal , 3 (2), 320–325.
Serdani,  A. D., Aini,  L. Q., & Abadi,  A.  L.
(2018).  Isolasi  dan  identifikasi  bakteri endofit  dari  tanaman  padi  ( Oryza sativa )  sebagai  pengendali  penyakit hawar daun bakteri akibat Xanthomonas oryzae pv. oryzae . Jurnal
Viabel Pertanian , 12 (1), 18–26.
https://doi.org/10.35457/viabel.v12i1.4
22
Shen,  Y.,  &  Ronald,  P.  (2002).  Molecular determinants  of  disease  and  resistance in  interaction  of Xanthomonas  oryzae pv. oryzae and  rice. Journal  Microbe and Infection , 4 (1), 1361–1367. https://doi.org/10.1016/s1286- 4579(02)00004-7
Sudir,  S.,  &  S.  B.  (2011).  Reaksi  padi hibrida  terhadap  penyakit  hawar  daun bakteri  dan  hubungannya  dengan  hasil gabah. Jurnal  Penelitian  Pertanian Tanaman , 30(2) , 88 -(2), 88–94. Swings,  J.,  Mooter,  V.  D.,  Vauterin,  L., Hoste,  B.,  Gillis,  M.,  Mew,  T.  W.,  & Kerters,  K.  (1990).  Reclassification  of the  causal  agents  of  bacterial  blight (Xanthomonas  campestris  pv.  oryzae) and bacterial leaf streak (Xanthomonas campestris  pv.  oryzicola)  of  rice  as pathovars  of Xanthomonas  oryzae (ex Ishiyama  1922)  sp.  nov.,  nom.  rev. International  Journal  of  Systematic Bacteriology,
40 (3), 301–311. https://doi.org/10.1099/00207713-40-3- 309