Pengujian Antioksidan Ekstrak  Daun Sambung Rambat ………….…………….…. (Inawati)

## PENGUJIAN ANTIOKSIDAN EKSTRAK  DAUN SAMBUNG RAMBAT
( Mikania cordata ) DENGAN METODE DPPH

## Inawati
Sekolah Tingi Teknologi Industri dan Farmasi (STTIF) Bogor

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui  kandungan  antioksidan  tanaman sambung rambat ( Mikania cordata )  terutama pada bagian daunnya. Dengan mengekstraksi daun sambung rambat secara maserasi yang menggunakan tiga jenis pelarut yaitu, etanol 70 persen, etil  asetat dan heksan untuk  mengetahui  kandungan saponin , alkaloid , flavonoid , steroid dan triterpenoid dari ekstrak kental melalui evaporasi. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan  dengan  metoda  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrihidrazil).  Secara  keseluruhan  ekstrak kental  tersebut  mengandung  senyawa alkaloid , flavonoid , steroid dan saponin .  Hasilnya, ekstrak kental dengan pelarut etanol 70 persen menunjukkan aktivitas  antioksidan berskala kuat dengan nilai IC 50 sebesar 68,88 ppm, dimana potensi antioksidan kali lebih kecil dari vitamin  C  yang  memiliki  IC 50 sebesar  2,2284  ppm.  Sedangkan  dari  hasil  ekstrak etil  asetat dan heksan tidak memperlihatkan adanya aktivitas antioksidan. Penelitian lebih lanjut perlu dilakukan  dengan  cara    fraksinasi  agar  senyawa  yang  diperoleh  lebih  murni  sehingga antioksidan dari tanaman sambung rambat lebih spesifik.
Kata kunci :  Antioksidan, DPPH, Mikania cordata

## PENDAHULUAN
Di  alam  ini  banyak  terdapat tanaman yang memiliki potensi antioksidan,  salah  satunya  adalah  tanaman sambung  rambat  ( Mikania  cordata )  yang tumbuh secara liar disemak-semak belukar. Tanaman  ini  tersebar  luas  di  Asia  dan Pasifik,  Australia  Selatan,  Amerika  Utara dan  Tengah,  yang  tumbuhannya  melilit  di pohon  -  pohon  atau  menjalar  di  atas permukaan  tanah. Mikania  cordata adalah tanaman yang memiliki nilai ekonomi yang tinggi  karena  khasiatnya  bermanfaat  bagi kehidupan manusia (Sankaran, 2010).
Mikania cordata
diketahui mengandung senyawa seskuiterpen , dilakton , diterpen ,  dan flavonoid yang sangat  berguna  untuk  pengobatan  penyakit (Aguinaldo,  2003).  Secara  tradisional Mikania  cordata digunakan  sebagai  obat luka, sakit perut, dan gatal-gatal. Sedangkan  dalam  pengobatan  modern dapat  digunakan  sebagai    antikanker (Bishayee dan Chatterejee, 1994), analgesik  (Ysrael,1990),  dan  antiinflamasi
(Bhattacharya,  1987).  Menurut  penelitian yang  telah  dilakukan, Mikania  cordata memiliki kandungan kimia yang berkhasiat seperti monoterpen , seskuiterpen ,  minyak atsiri , flavonoid , dan senyawa hidrokarbon lainnya (Tonzibo et al , 2009).
Bentuk  rangka  bunga Mikania cordata berada  di  bawah  ketiak  daun,  dan ada  juga  berada  diantara    tangkai  atau batang  daun.  Bunganya  memilki  warna putih keungu-unguan dengan ukuran panjang  4  -5  mm  dan  bermahkota  5 lobed (belahan),  serta  dikelilingi  oleh  bunga- bunga kecil bersinar ( kapiler pappus ) yang muncul secara bersamaan di pangkal bunga dan    panjangnya  3  mm  berwarna  putih pada  awalnya  kemudian  berubah  menjadi coklat  kemerahan-merahan.  Tanaman  ini juga  memiliki  buah  yang  muncul  setelah berbunga.  Buahnya  berbentuk  bulat  telur terbalik  yang  berwarna  hijau  dengan ukuran  1  –  3  mm.  Tanaman  ini  dapat tumbuh secara vegetatif dari bagian batang yang  agak  membengkok  dan  pada  bagian
segmen  yang  sangat  kecil  pada  batang. (Sankaran, 2010) .
Mikania cordata memiliki
kandungan
senyawa
non-volatil
seskuiterpen , dilakton , germakranolid , diterpen , dan flavonoid (Aguinaldo, 1995,2003).    Selain  itu  juga  terdapat kandungan  minyak atsiri diantaranya D- germakren (21,6 persen) dan beta kariophyllene (11,8 persen) sebagai komponen utama minyak Mikania cordata ).  Minyak Mikania  cordata yang berasal  dari  Abidjan  (Selatan  Pantai Gading  didominasi  oleh  kandungan alfa pinene (20  persen)  dan D  –  germakren (19,8 persen) dan disertai pula dengan beta pinene (8,7  persen)  dan alfa  thujene (7,1 persen)  (Bedi,  2003).  Selain  itu, mikania cordata juga memiliki kandungan monoterpen dan hidrokarbon  sabinene (19 persen), beta phellandren (14,8 persen) dan limonen (15,7  persen)  yang  diteliti  dari sampel  yang  berasal  dari  Abengourou (Pantai  Gading).  Dilaporkan  juga  terdapat senyawa  oksigen  pada  tanaman Mikania cordata yang  berasal  dari  Sikensi  (Pantai gading)  yaitu  senyawa viridiflorol (39,6 persen). Sedangkan sampel Mikania cordata yang  berasal  dari    San  Pedro (Mexico) kaya akan fitol (20,6 persen), alfa terpineol (17,8  persen), elemol (13,3 persen)  dan geraniol (13,1  persen).  Begitu juga  sampel  dari  Bonoua  menunjukkan adanya  kombinasi  senyawa  oksigen  dan hidrokarbon  seperti alfa  copain (14,7 persen), gama  eudesmol (11,9  persen)  dan elemene (9  persen).  Sampel  dari  Alepe (Pantai  Gading)  kaya  akan alfa  pinene (11,1 persen), D-germakrene (10,5 persen), P-simen (9  persen), elemol (8,8  persen), beta  phellandrene (8,7  persen)  dan beta pinene (8  persen).  Dalam  studi  ini, komposisi  minyak Mikania  cordata dapat berbeda  akibat  adanya  faktor  eksogen seperti  tanah  atau  pun  iklim  tempat tanaman  tersebut  tumbuh  (Tonzibo et  al , 2009).
Tanaman  ini  dapat  memberikan khasiat  sebagai  antibakteri  (Rabin,    2000), antikanker (Bishayee dan Chatterjee,
1994),  dan  anti-inflamasi  (Battacharya,
1987).  Selain  itu  juga  telah  diteliti  oleh Ahmed  (1990)  bahwa Mikania  cordata dapat  mengobati  masalah  pada  lambung. Mikania  cordata diketahui  menjadi  obat penawar  racun  gigitan  kalajengking  di Assam (New Delhi, India) tepatnya seperti digunakan  oleh  suku  Kabi.  Daun Mikania cordata mampu  mengobati  sakit  perut  dan gatal-gatal  seperti  yang  digunakan  oleh masyarakat  Malaysia.  Di  Afrika  daunnya dapat  digunakan  sebagai  sup.  Seperti  yang dilaporkan  dari  Mizoram,  India  bahwa Mikania  cordata dapat  digunakan  sebagai pupuk  hijau  untuk  meningkatkan  hasil padi.  Namun  tanaman  ini  tidak  dapat digunakan sebagai bahan campuran kompos  karena  kadar  airnya  yang  tinggi (Sankaran, 2010)

## BAHAN DAN METODE
Bahan  yang  dipergunakan  dalam percobaan  ini  adalah  sambung  rambat ( Mikania cordata) yang didapat dari daerah Atang  Senjaya,  Bogor  -  Jawa  Barat  dan dideterminasi  di  Pusat  Penelitian  Biologi  - LIPI, Bogor. Bahan  kimia yang digunakan diantaranya etanol 70 persen teknis, heksan teknis,  etil  asetat  teknis,  metanol  p.a, vitamin C, DPPH 1mM.
Antioksidan  adalah  suatu  senyawa yang memperlambat proses oksidasi.  Lipid dan senyawa  yang larut dalam lipid  adalah merupakan komponen yang mudah teroksidasi  dan  terdapat  pada  hampir semua  bahan  pangan.  Senyawa  -  senyawa tersebut  diantaranya  adalah  lemak  yang dapat dimakan ( edible fat ), minyak makan, mono- , di- dan tri-gliserida ( emulsifier ), sterol ,  vitamin  yang  larut  dalam  lemak, fosfolipid ,  komponen flavor dan aroma , karotenoid dan  lain  -  lain.  Antioksidan yang ideal harus memiliki beberapa kriteria agar dapat digunakan pada beberapa sistem pangan.  Diantara  kriteria  tersebut  adalah  :
Pengujian Antioksidan Ekstrak  Daun Sambung Rambat ………….…………….…. (Inawati)
aman, tidak mempengaruhi warna, bau dan rasa, efektif pada konsentrasi rendah, tahan setelah  diproses,  stabil  pada  produk  akhir, larut  dalam  lemak  dan  tersedia  dengan harga murah. Menurut Kochlar dan Rossel (1990),  secara  luas  antioksidan  dapat dibagi menjadi 5 kelompok yaitu :
 Antioksidan  primer  (sebagian  besar  adalah senyawa  fenolik)  yaitu  kelompok  senyawa yang  menghentikan  pembentukan  radikal bebas  pada  oksidasi  lipid  seperti tokoferol , Butylated Hydroxytoluene (BHT), Butylated Hydroxyanisole (BHA), Tertier-Butyl Hydroquinone (TBHQ) dan sebagainya.
 Penangkap  oksigen  ( oxygen  scavenger ) seperti  vitamin  C, askorbil  palmitat dan asam eritrobat .
 Antioksidan  sekunder  yaitu  kelompok senyawa  yang  berfungsi  mendekomposisi hidroperoksida  lipid  menjadi  produk  akhir yang  stabil;    contoh  antioksidan  ini  adalah diluril tiopropionat dan asam tiodipropionat .
 Antioksidan enzimat seperti glukose oksidase , superoksida  dismutase , katalase , glutathione  peroksidase .  Antioksidan  ini berfungsi  melarutkan  oksigen  atau  pemisah spesies oksidatif dari sistem pangan.
 Pengkelat ( chelating agent
atau sequestrants )  seperti  asam  sitrat,  asam amino, etylendiaminetetra-acetic acid (EDTA),  mengkelat  ion  logam  yang  dapat mengkatalisis oksidasi lipid.
Menurut  Patt  dan  Hudson  (1990) senyawa  -  senyawa  alami  yang  umumnya mempunyai  efek  antioksidan  adalah fenol dan polifenol ,  serta  yang  paling  umum adalah flavonoid ( flavonol , isoflavon , flavon , katekin ,  dan flavonon ),  turunan asam  sinamat , kumarin , tokoferol ,  dan
asam organik polifungsi. Golongan
senyawa fenolik adalah  komponen  bioaktif yang  terdapat  secara  luas  pada  tanaman. Istilah fenolik atau polifenol dapat didefinisikan  secara  kimia  sebagai  suatu senyawa  yang  yang  memiliki  cincin aromatik  mengandung  satu  atau  lebih subsitusi  OH  termasuk  turunan  fungsional ( ester , metal  eter , glikosida ).  Antioksidan alami terutama berfungsi sebagai
antioksidan  primer  yaitu  sebagai  akseptor radikal bebas dan pemecah rantai. Senyawa -  senyawa fenolik volatil seperti eugenol , isoeugenol , timol dan sebagainya memiliki aktivitas  antioksidan  yang  cukup  tinggi namun  memiliki  bau  yang  terlalu  kuat sehingga  kegunaannya  terbatas  sebagai bahan  tambahan  pangan.  Sementara  itu beberapa  jenis  antioksidan  alami  yang  lain juga memiliki beberapa kelemahan.
Vitamin C memiliki peranan penting  dalam  penagkapan  radikal  bebas yang  juga  termasuk  dalam  antioksidan alami. Vitamin C merupakan vitamin yang larut dalam air dan merupakan antioksidan yang paling penting dalam cairan ekstraseluler  karena  sifat  kelarutannya tersebut. Vitamin ini efisien dalam menghambat pembentukan radikal superoksida  (O 2 .),  hidrogen  peroksida (H 2 O 2 ), radikal hidroksil dan peroksil (•OH dan  ROO•)  dan  oksigen  single.  Oleh karena  itu  dapat  menghambat  radikal  - radikal peroksida maka vitamin C mempunyai peranan penting dalam menjaga  integritas  membran  sel.  Selain manfaat  yang  didapat  dari  vitamin  C  ada pula  efek  negatif  yang  ditimbulkannya. Larutan  vitamin  C  akan  cepat  teroksidasi dengan  katalis  logam,  terutama  Cu. Oksidasi vitamin C yang diinduksi oleh Cu dapat  menghasilkan  hidrogen  peroksida (H 2 O 2 )  dan  radikal  hidroksil  (•OH)  yang bisa menyebabkan inaktivasi banyak protein.
Metode analisis kandungan antioksidan      suatu  zat,  dapat  dilakukan dengan beberapa cara diantaranya :
 Metode Ruch (Ruch, 1989)
Antioksidan akan memusnahkan hidrogen  peroksida.  Serapan  diukur pada panjang gelombang 230 nm.
 Metode Iodometri Antioksidan  akan  menurunkan  jumlah hidroperoksida  yang  akan  mengoksidasi I - menjadi  I 2 .  I - dan  I 2 akan  membentuk kompleks  I 3 yang  berwarna  kuning.
Pengujian Antioksidan Ekstrak  Daun Sambung Rambat ………….…………….…. (Inawati)
Serapan diukur pada panjang gelombang 360 nm.
 Metode DPPH (Yen, 1995). Senyawa  antioksidan  akan  bereaksi dengan  radikal  DPPH  melalui  donasi atom hidrogen dan menyebabkan perubahan warna kuning. Serapan diukur  pada  panjang  gelombang  515 nm.
 Metode Oyaizu (Yen, 1995) Antioksidan akan mereduksi K 3 Fe(CN) 6 yang dalam suasana asam akan membentuk  kompleks  Fe 4 (Fe(CN) 6 ) 3 yang  berwarna  biru.  Serapan  diukur pada panjang gelombang 700 nm.
 Metode Tiosianat (Yen, 1996) Antioksidan  menurunkan jumlah hidro- peroksida  yang  akan  mengoksidasi FeCl 2 menjadi FeCl 3 yang akan membentuk  kompleks  berwarna  merah dengan  asam  tiosianat.  Serapan  diukur pada panjang gelombang 500 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah  direaksikan  dengan  DPPH dan diinkubasi dalam waterbath selama 30 menit  dapat  terlihat  ekstrak  etanol  70 persen pada konsentrasi 100 ppm memberikan  perubahan  warna  yang  cukup signifikan dari warna ungu  menjadi warna kuning.  Hal  ini  menandakan  adanya aktivitas antioksidan pada sampel etanol 70 persen  dengan  konsentrasi  100  ppm. Sedangkan  pada  ekstrak etil  asetat dan heksan tidak memberikan perubahan warna yang  menandakan  pada  ekstrak  tersebut tidak memiliki aktivitas antioksidan. Selain dapat dilihat  dari perubahan  warna (kualitatif), aktivitas antioksidan juga dapat dilihat  dari  nilai  persentase  hambatan (kuantitatif).
Suatu sampel dikatakan
memberikan  aktifitas  antioksidan  jika konsentrasi  sampel  yang  diuji  mampu menghambat  50  persen  radikal  DPPH  atau yang disebut dengan IC 50 . Untuk mengetahui  persentase  hambatan  tersebut harus  diketahui  absorbansi  dari  sampel
yang  diuji.  Dibawah  ini  adalah  data absorbansi  dan  persen  hambatan  yang didapat dari sampel Mikania cordata .
Dari  data  di  atas  dapat  terlihat perbedaan  IC 50 sampel  dengan  standar vitamin  C  yang  sangat  berbanding  jauh. Pada  ekstrak etanol 70  persen  nilai  IC 50 yaitu  68,88  ppm;  ekstrak etil  asetat memiliki  nilai  IC 50 yaitu  201,45  ppm    dan ekstrak heksan nilai IC 50 yaitu 333,77 ppm dan  nilai  IC 50 untuk  vitamin  C  sangat rendah  dibandingkan  dengan  sampel  yaitu 2,2284  ppm.  Ini  menandakan  bahwa ekstrak sambung rambat memiliki efektivitas  ± kali  vitamin  C.  Semakin rendah  nilai  IC 50 berarti  semakin  tinggi persentase  hambatan  antioksidan  terhadap radikal  bebas.  Suatu  senyawa  dikatakan sangat  kuat  aktivitas  antioksidannya  bila konsentrasi  kurang  dari  50  ppm,  kuat  bila konsentrasi antara 50-100 ppm, sedang jika konsentrasi  100-150  ppm,  dan  dikatakan lemah  jika  konsentrasi  151-200  ppm (Zuhra, et  al .,  2008).  Dari  penelitian  yang dilakukan  terhadap    daun Mikania  cordata sampel  etanol  70  persen  memberikan aktivitas  antioksidan  kuat,  sedangkan ekstrak  etil  asetat  dan  heksan  tidak memberikan aktivitas antioksidan.
Dengan  menggunakan  persamaan regresi  linear  yang  menyatakan  hubungan konsentrasi ekstrak sambung rambat sebagai  sumbu  x  dengan  persen  hambatan sebagai sumbu y, maka diperoleh persaman regresinya  y=  bx+a.  Dibawah  ini  adalah kurva  regresi  linear  dari  masing-masing sampel.
Gambar 1. Kurva regresi linear daun sambung rambat ekstrak etil asetat y = 0,1311x + 23,613 R² = 0,9425 0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % H am bat an Konsentrasi sampel (ppm)
Tabel 1. Data hasil pengujian sampel Mikania cordata terhadap radikal DPPH.
Sampel (Daun) Konsentrasi sampel (ppm) Absorbansi sampel rata-rata* Hambatan antioksidan (%) IC 50 Ekstrak Etanol 70% 5 1,9975 20,68 Y=19,00+0,450x a = 19,00 b = 0,450 IC 50 = 68,88 10 1,9250 23,56 25 1,7185 31,76 50 1,5050 40,24 100 0,899 64,30 Ekstrak Etil asetat 5 1,9560 22,33 Y=16,443+0,1311x a= 23,61 b= 0,131 IC 50 =201,45 10 1,8695 25,76 25 1,8180 27,81 50 1,7385 30,97 100 1,6090 36,11 Ekstrak Heksan 5 2,0700 17,80 Y=17,29+0,098x a= 17,29 b= 0,098 IC 50 =333,77 10 2,0385 19,06 25 2,0195 19,81 50 1,9970 20,70 100 1,8180 27,81 Vitamin C 3 1,1890 52,78 Y=34,22+7,081x a= 34,22 b= 7,081 IC 50 = 2,2284 6 0,4510 82,09 9 0,1190 95,27 Blanko 2,5185
*Absorbansi rata-rata didapat dengan dua kali pengukuran.
Gambar 1. Kurva regresi linear daun sambung rambat ekstrak etil asetat
Gambar  2.  Kurva  regresi  linear  daun  sambung rambat ekstrak heksan.
Gambar  3.  Kurva  regresi  linear  daun  sambung rambat ekstrak etanol 70 persen.
Gambar 4. Kurva regresi linear standar vitamin C . y = 0,1311x + 23,613 R² = 0,9425 0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % H am bat an Konsentrasi sampel (ppm) y = 0,0985x + 17,293 R² = 0,9456 0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % H am bat an Konsentrasi sampel (ppm) y = 7,0817x + 34,223 R² = 0,9542 0 20 40 60 80 100 0 2 4 6 8 10 % H am bat an Konsentrasi vitamin C (ppm) y = 0,4502x + 19,002 R² = 0,9965 0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % H am bat an Konsentrasi sampel (ppm)
Pengujian Antioksidan Ekstrak  Daun Sambung Rambat ………….…………….…. (Inawati)
Dari  kurva  sampel  dan  standar  di atas  dapat  terlihat  pebedaan  yang  cukup mencolok  yaitu  untuk ekstrak  etil asetat dan heksan memiliki  persentase  hambatan yang    berada  dibawah  50  persen, sedangkan standar berada diatas 50 persen. Hal  tersebut  membuktikan  bahwa etil asetat dan  heksan  tidak  memiliki  aktivitas antioksidan  sama  sekali.  Sedangkan  untuk ekstrak etanol 70  persen  pada  konsentrasi
100  ppm  memiliki  persentase  hambatan lebih  dari  50  persen,  itu  menandakan ekstrak etanol 70 persen memiliki aktivitas antioksidan  namun  dalam  skala  sedang. Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak etanol 70 persen  memperlihatkan  adanya alkaloid dan flavonoid .

## KESIMPULAN
Penelitian  ini  dapat  disimpulkan bahwa , pengujian  skrining  fitokimia    pada bagian daun Mikania cordata menunjukkan terdapat  kandungan  senyawa alkaloid , flavonoid , saponin dan steroid . Dimana dari ekstrak etanol 70 persen  memberikan aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 68,88  ppm  yang  menunjukkan  kuatnya aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak etanol 70  persen.  Sedangkan  ekstrak heksan dan etil  asetat tidak  memperlihatkan  adanya aktivitas  antioksidan. Hal  ini dapat  dilihat dari hasil analisis GC/MS sampel etanol 70 persen  diperoleh  paling  sedikit  terdapat sembilan peak ,  namun  yang  lain  tidak memperlihatkan kemiripan dengan senyawa  antioksidan. Perlu  juga  dilakukan penelitian lebih lanjut dengan cara fraksinasi  agar  senyawa  yang  diperoleh lebih  murni  sehingga  dapat  diidentifikasi senyawa antioksidan dari tanaman sambung rambat yang lebih spesifik.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed  M.  1990. Further  dilactones  from Mikania  cordata,  Pharmazie, 45: 697.
Aguinaldo A. M., W. G. Padolina, F. Abe, and T. Yamauchi, 2003. Flavonoids from Mikania cordata , Biochemical Systematic  and  Ecology .31:  665- 668.
Bishayee  A.  and  M.  Chatterjee,  1994.
Anticarcinogenic biological response of Mikania cordata reflections
in hepatic biotransformation  systems . Cancer Lett, 81: 193-200.
Ysrael  M.  C.  and  K.  D.  Croft,  1990.
Inhibition of leukotriene and platenet  activating  factor  synthesis in  leucocytes  by  the  sesquiterpene lactone  scandenolide. Planta  Med., 60: 268-270.
Bhattacharya  S.,  S.  Pal  and  A.  K.  Nag Chaudhuri, 1987. Preliminary studies  on  the anti-inflammatory and  analgesic  activities  of Mikania cordata  (Burm  f;)  B.  L.  Robinson root extract . Med.  Sciences  Res.,
15: 507-508.
Tonzibo, Z.F., Brou, Florence, A.,Koffi, A. Muriel  and  J.C.  Chalchat,  2009. Geographic Variation in the Leaves
Oils Composition of Mikania cordata  (Burm.f.)  B.L.  Robinson from Cote  d’Ivoire .  European Journal of Scientific Research, Cote d’Ivoire.
Rabin  K.  P.,  A.  Jabbar  and  M.  A.  Rashid, 2000. Antiulcer  activity  of  Mikania cordata. Fitoterapia, 71: 701-703.
Pratt.  D.  E,  dan  B.J.F.  Hudson.  1990.
Natural  Antioksidant  Not  Exploited Commercialy .  Didalam  :  Hudson B.J.F.  (ed).  Food  Antioksidant. Hlm.  171  –  192.  Elsevier  Applied Science, New York.
Sankaran,  K.V.  2010. Mikania  micrantha Mile    a  –  minute  weed .  APFISN.
Kerala  Forest Research  Institude, Peechi. Kerala, India.