Majalah Farmasi, Sains, dan Kesehatan ISSN 2442-9791
Potensi Antibakteri Isolat Jamur Endofit dari Daun Kelor ( Moringa oleifera Lam.)
Sukriani Kursia * , Rahmad Aksa, Maria Magdalena Nolo
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, Jl. Perintis Kemerdekaan KM. 13,7 Daya, Makassar 90241

## Abstrak
Kelor ( Moringa oleifera Lam.) mengandung metabolit sekunder dan berkhasiat sebagai antibakteri. Metabolit sekunder tanaman kelor dapat diperoleh dari fungi endofit yang berasosiasi dalam jaringan tanaman. Tujuan penelitian ini ialah menentukan potensi antibakteri isolat fungi endofit daun kelor. Isolasi fungi endofit daun kelor diperoleh sebanyak 3 isolat yaitu isolat M2NG, M2NB, dan M2NW. Penelitian ini meliputi uji antagonis, fermentasi, ekstraksi dan uji aktivitas menggunakan metode difusi agar. Hasil uji antagonis menunjukkan isolat M2NG paling aktif menghambat pertumbuhan bakteri E. coli , S. aureus , P. aureginosa , dan S. typhi . Ekstrak etil asetat fermentat isolat hijau konsentrasi 4% memiliki aktivitas menghambat bakteri uji dengan diameter zona hambat tertinggi  yaitu 17,94 mm untuk bakteri E. coli dan 16,85 mm untuk bakteri S. aureus . Identifikasi metabolit  sekunder ekstrak etil asetat    mengandung    flavonoid,  alkaloid  dan  polifenol.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat  fungi  endofit  daun  kelor memiliki aktivitas antibakteri spektrum luas.
Kata kunci: Moringa oleifera , isolat, fungi endofit, antibakteri

## 1. Pendahuluan
Tanaman kelor ( Moringa oleifera Lam.) merupakan  tanaman  obat  yang  dapat  mengobati gangguan  jantung,  antioksidan,  antibakteri,  antijamur, antikolesterol,  dan  antiinflamasi  [1].  Daun  Kelor ( Moringa  oleifera Lam.)  dapat  digunakan  sebagai antimikroba,  antibakteri,  penyakit  infeksi,  mencegah ulkus,  peradangan,  nyeri,  meningkatkan  kekebalan tubuh, mempercepat proses penyembuhan luka [2].
Ekstrak  etanol  daun  kelor  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus, S. typhi, P. aureginosa, dan E. coli . Ekstrak daun kelor konsentrasi 80% memilki diameter  zona  hambat  tertinggi  yaitu  21,50  mm  pada bakteri S. aureus dan 24,00 mm pada bakteri E. coli . Hal ini  diduga  ekstrak  daun  kelor  mengandung  metabolit sekunder  seperti  flavonoid,  alkaloid  dan  fenol  [3,4]. Pengambilan  senyawa  bioaktif  secara  langsung  dari daun  kelor  membutuhkan  biomassa  yang  banyak. Pengambilan  senyawa  bioaktif  dapat  diefisienkan dengan menggunakan fungi endofit.
Fungi  endofit  merupakan  mikroorganisme  yang mempunyai habitat hidup di dalam organ tanaman dalam kurun  waktu  tertentu,  dapat  berkolonisasi  di  dalam jaringan  tanaman  tanpa  merugikan  tanaman  inangnya. Kemampuan  mikroba  endofit  memproduksi  metabolit
* Email : sukriani.winie@yahoo.com
sekunder  sesuai  dengan  tanaman  inangnya  merupakan peluang  yang  sangat  besar  dan  dapat  diandalkan  untuk memproduksi  senyawa  dari  mikroba  endofit  yang diisolasi  dari  tanaman  inangnya  [5].  Oleh  karena  itu, isolasi  fungi  endofit  dari  daun  kelor  ( Moringa  oleifera Lam.)  perlu  dilakukan  untuk  menghasilkan  senyawa metabolit  sekunder  yang  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1 Isolasi dan Pemurnian Jamur Endofit
Sampel daun kelor ( Moringa oleifera Lam.) dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel  dan  dipotong  ±  1cm.  Sterilisasi  permukaan dilakukan  dengan  cara  direndam  dalam  etanol  70% selama  30  detik  kemudian  direndam  dalam  larutan natrium  hipoklorit  (NaOCl)  5,25%  selama  30  detik. Sampel daun dibilas dengan air suling steril sebanyak 3 kali kemudian dikeringkan. Potongan sampel yang telah kering ditanam pada media PDAC dan diinkubasi pada suhu  kamar  (25 o C)  selama  7  hari.  Pemurnian  fungi endofit dilakukan dengan pemindahan koloni ke cawan petri  lain  yang  berisi  medium  PDAC,  kemudian
diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  3-5  hari.  Jamur endofit  yang  telah  diinkubasi  kemudian  diidentifikasi berdasarkan  ciri-ciri  makroskopik  secara  langsung langsung dengan melihat bentuk dan warna koloni jamur endofit.

## 2.2 Pengujian Antagonis Jamur Endofit
Isolat jamur endofit murni yang telah ditumbuhkan pada  medium  PDAC  kemudian  diambil  1  potong  dan diletakkan  pada  permukaan  media  NA  yang  telah diinokulasikan  dengan  bakteri  uji  seperti E.  coli,  S. aureus , S. typhi, dan P. aureginosa. Cawan berisi jamur endofit dan bakteri uji diinkubasi selama 1x24 jam pada suhu  37 0 C.  Jamur  endofit  yang  positif  dapat menghambat  bakteri  uji  akan  digunakan  untuk  uji selanjutnya.

## 2.3 Fermentasi Jamur Endofit
Isolat  yang  menunjukkan  zona  hambat  tertinggi pada uji antagonis selanjutnya difermentasi menggunakan  metode  goyang.  Fermentasi  dilakukan dengan  cara  menggambil  1  ose    isolat    yang  telah dimurnikan  lalu  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer  250 ml  yang  mengandung  100  ml  medium  cair  PDY  lalu dilakukan  fermentasi  dengan  menggunakan orbital shaker pada kecepatan 130 rpm, selama 14 hari.

## 2.4 Ekstraksi Senyawa Metabolit
Setelah  proses  fermentasi  selama  14  hari,  miselia dipisahkan  dari  cairan  fermentasi  menggunakan  kertas saring.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  ekstraksi cair-cair menggunakan corong pisah dengan pelarut etil asetat. Cairan fermentasi diekstrak dengan perbandingan 1:1.  Lapisan  etil  asetat  yang  berada  diatas  dikeluarkan dan  lapisan  bawah  ditambahkan  lagi  pelarut  etil  asetat dengan perbandingan 1:1. Proses ini dilakukan sebanyak 3 kali. Ekstrak yang diperoleh disimpan untuk digunakan pada uji selanjutnya.

## 2.5 Pengujian Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode difusi agar dengan medium MHA ( Muller Hinton Agar ). Kertas cakram  kosong ditetesi ekstrak  sebanyak 20 µL dengan konsentrasi 1%, 2%, 4%, lalu dibiarkan sampai semua pelarut menguap sempurna. Kertas cakram yang mengandung  ekstrak,  kontrol  (+),  dan  kontrol  (-) diletakkan  pada  permukaan  media  yang  telah diinokulasikan dengan bakteri uji. Untuk kontrol positif digunakan tetrasiklin 30 µg dan kontrol negatif DMSO 10%. Selanjutnya diinkubasi selama 1x24 jam pada suhu 37 o C,  lalu  diamati  zona  hambat.  Zona  hambat  yang terbentuk  diukur  diameternya  menggunakan  jangka sorong.

## 2.6 Pengujian Metabolit Sekunder

## Alkaloid
Ekstrak  etil  asetat  diambil  secukupnya,  lalu ditempatkan  pada  plat  tetes  dan  masing-masing ditambahkan pereaksi Dragendorff, Wagner dan Mayer. Endapan  yang  terbentuk  menunjukkan  bahwa  ekstrak tersebut mengandung alkaloid. Hasil positif Dragendorff memberikan endapan jingga, pereaksi Wagner memberikan  endapan  coklat,  dan  pereaksi  Mayer memberikan endapan putih.

## Flavonoid
Ekstrak  etil  asetat  diambil  secukupnya,  lalu ditempatkan  pada  plat  tetes  dilarutkan  dengan  metanol dan  ditambahkan  beberapa  tetes  HCl  pekat  dan  serbuk Mg.  Hasil  positif  menunjukkan  terbentuknya  warna merah jingga.

## Polifenol
Ekstrak  etil  asetat  diambil  lalu  ditempatkan  pada plat  tetes,  kemudian  ditambahkan  pereaksi  FeCl 3 1%. Hasil  positif  menunjukkan  terbentuknya  warna  hijau kehitaman

## 3. Hasil dan Pembahasan
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui potensi antibakteri isolat jamur endofit daun kelor ( M. oleifera Lam.). Hasil isolasi fungi endofit daun kelor diperoleh 3 isolat  yaitu  M2NG,  M2NB,  dan  M2NW.  Satu  jaringan hidup  suatu  tumbuhan  dapat  menjadi  inang  tempat tumbuh  lebih  dari  satu  jenis  jamur  endofit  [6]. Kandungan  jenis  endofit  yang  berbeda  ini  merupakan mekanisme adaptasi dari endofit terhadap mikroekologi dan kondisi fisiologis yang spesifik dari masing-masing tumbuhan inang.
Tahap awal dilakukan setelah diperoleh isolat yaitu uji  antagonis.  Pengujian  antagonis  bertujuan  untuk mengetahui  aktivitas  langsung  terhadap  bakteri  uji  dan menyeleksi  isolat  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri yang  nantinya  akan  dilanjutkan  ke  tahap  fermentasi. Isolat fungi endofit dilakukan uji antagonis dengan cara meletakkan potongan isolat pada cawan petri yang telah mengandung  bakteri  uji.  Hasil  pengujian  antagonis memberikan  gambaran  bahwa  isolat  yang  paling  aktif dalam menghambat 4 bakteri uji yaitu isolat M2NG.
Selanjutnya  dilakukan  proses  fermentasi  terhadap isolat  M2NG.  Fermentasi  adalah  proses  penguraian produk  metabolit  sekunder  oleh  mikroorganisme. Fermentasi  yang  digunakan  yaitu  sistem batch. Sistem batch yaitu  sistem  yang  paling  sederhana  dan  sering digunakan  di  laboratorium  untuk  mendapatkan  produk sel  atau  metabolitnya.  Fermentasi  sistem batch adalah sistem  tertutup,  artinya  semua  nutrisi  yang  dibutuhkan mikroba  selama  proses  pertumbuhan  dan  pembentukan
produk  berada  didalam  1  fermentor.  Jadi  tidak  ada penambahan  bahan  atau  pengambilan  hasil  selama proses fermentasi. Keuntungan sistem ini adalah mudah, sederhana,  dan  kecil  kemungkinan  adanya  kontaminasi [7].
Tabel  1. Karakteristik  morfologi  koloni  fungi  endofit  daun kelor ( M. oleifera Lam.) Isolat Gambar Ciri Makroskopik M2NG Warna koloni hijau, bentuk koloni tidak beraturan, menyebar, permukaan koloni halus seperti tepung, warna sebalik koloni hijau muda M2NB Warna koloni hitam dengan putih sekeliling, bentuk koloni bulat, sebaran memusat, permukaan koloni kasar, warna sebalik koloni hitam. M2NW Warna koloni putih, bentuk koloni bulat, sebaran memusat, permukaan koloni kasar dan menggunung, warna sebalik koloni putih Proses  fermentasi  selama  14  hari,  untuk memperoleh metabolit sekunder. Pembentukan metabolit sekunder terjadi pada fase stasioner yaitu fase ketika  laju  pembelahan  sel  dan  laju  kematian  mikroba mencapai  kesetimbangan,  dimulai  saat  zat  gizi  dalam medium  pertumbuhan  mikroorganisme  telah  habis  [8]. Keterbatasan zat gizi dalam medium dapat menyebabkan terakumulasi  enzim  metabolit  sekunder  dan  gen-gen metabolit  sekunder,  diduga  meningkatkan  produksi metabolit  sekunder.  Fermentat  diekstraksi  dengan pelarut  etil  asetat    menghasilkan  ekstrak  etil  asetat sebanyak 300 mg.
Aktivitas  antimikroba  ditentukan  dengan  area jernih yang mengindikasikan adanya hambatan terhadap pertumbuhan  mikroorganisme  pada  permukaan  media agar  [9].  Uji  aktivitas  antibakteri  ektrak  etil  asetat terhadap bakteri S. aureus, E. coli, P. aureginosa, dan S. typhi, digunakan ekstrak dengan 3 konsentrasi yaitu 1%, 2%,  dan  4%  serta  kontrol  (-)  dan  kontrol  (+)  yaitu Tetrasiklin. Hasil pengujian potensi antibakteri menunjukkan bahwa isolate M2NG paling aktif terhadap bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 4 % (Tabel 3)
Tabel 2. Hasil uji antagonis isolat fungi endofit Bakteri Isolat Fungi Tetrasiklin M2NG M2NB M2NW S. aureus ++ ++ + ++ E. coli ++ + + ++ P. aureginosa ++ ++ ++ ++ S. typhi ++ + + ++
Ket: Diameter zona hambat : ++(>20 mm),+ (<20 mm), - (0)
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan  pada  uji aktivitas  antibakteri,  ekstrak  etil  asetat  fungi  endofit bersifat  antimikroba  spektrum  luas  karena  mampu menghambat  bakteri  Gram  positif  yaitu S.  aureus dan bakteri  Gram  negatif  yaitu E.  coli,  S.  typhi,  P. aureginosa. Salah satu faktor yang dapat mempengaruhi penghambatan  mikroorganisme  adalah  konsentrasi  zat aktif.  Semakin  besar  konsentrasi  zat  yang  diberikan maka  semakin  banyak  sel-sel  mikroorganisme  yang mati.  Sesuai  dengan  hal  tersebut,  dari  hasil  penelitian diperoleh  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak maka  semakin  besar  diameter  zona  hambat  yang terbentuk.
Adanya  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etil  asetat fungi  endofit  dikarenakan  ekstrak  memiliki  kandungan metabolit sekunder yang berpotensi sebagai antibakteri. Penentuan  golongan  senyawa  metabolit  sekunder menunjukkan  hasil  isolat  fungi  endofit  hijau  dari  daun kelor  mengandung  alkaloid,  flavonoid,  dan  polifenol (Tabel 4.) Penelitian sebelumnya mempelihatkan bahwa ekstrak  daun  kelor  mengandung  metabolit  sekunder alkaloid,  flavonoid  dan  polifenol  [10].  Alkaloid  dapat mengganggu komponen penyusun dinding sel (peptidoglikan)  pada  sel  bakteri,  sehingga  lapisan dinding  sel  bakteri  tidak  terbentuk  secara  utuh  dan menyebabkan kematian sel bakteri [11].

## Tabel 3. Aktivitas antibakteri ekstrak etilasetat terhadap bakteri uji
Bakteri Uji Diameter Zona Hambat (mm) 1% 2% 3% K+ K- Eschericia coli 10.44 ± 0.31 14.78 ± 0.79 17.94 ± 0.63 22.53 ± 0.21 6 Staphylococcus aureus 9.14 ± 0.22 13.25 ± 0.18 16.88 ± 0.11 24.74 ± 0.22 6 Pseudomonas  aureginosa 9.27 ± 0.19 12.14 ± 0.27 14.05 ± 0.6 20.22 ± 0.16 6 Salmonella  typhi 9.52 ± 0.17 12.28 ± 0.05 14.38 ± 0.24 17.45 ± 0.2 6
Flavonoid  sebagai  antibakteri  bekerja  membentuk senyawa  kompleks  dengan  protein  ekstraseluler sehingga  dapat  merusak  membran  sel  bakteri  diikuti keluarnya  senyawa  intraseluler.  Senyawa  polifenol bekerja menghambat enzim reverse trasnkripsi dan DNA topoisomerase sehingga sel bakteri tidak terbentuk.

## 4. Kesimpulan
Isolat  jamur  endofit  dari  ekstrak  daun  kelor ( Moringa oleifera Lam. yang paling berpotensi sebagai antibakteri spektrum luas yaitu isolat M2NG.

## Daftar Pustaka
1. Gaikwad  SB,  Mohan  GK,  Reddy  KJ.  Moringa  oleifera Leaves: Immunomodulation In Wistar Albino Rats. Int J Pharm Pharm Sci, 2011, Vol 3, Suppl 5; 426-430
2. Anwar F, Latif S, Ashraf M, Gilani AH. Moringa oleifera: a  food  plant  with  multiple  medicinal  uses. Phytother Res , 2007, 21(1); 17-25.
3. Dima  LLR,  Lolo  WA,  Fatimawali.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Daun  Kelor  ( Moringa  oleifera L.) Terhadap  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus : PHARMACON , 2016, Vol 5(2)
4. Vinoth  B,  Manivasagaperumal  R,  Balamurugan  S. Phytochemical  analysis  and  antibacterial  activity  of Moringa oleifera Lam. Int. J. Res. Biol. Sci , 2012, 2 ; 98- 102.
5. Zeng PY, Wu JG, Liao LM, Chen TQ, Wu JZ Wong KH. In vitro antioxidant activities of endophytic fungi isolated from the liverwort Scapania verrucosa . Genet. Mol. Res. , 2011, 10 (4) ;3169-3179.
6. Noverita,  Fitria  D,  Sinaga  E.  Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Jamur  Endofit  dari  Daun  dan  Rimpang Zingiber  ottensii Val. Jurnal  Farmasi  Indonesia ,  2009,
4(4) ;171 -176
7. Djide  NM,  Sartini.  Dasar-dasar  Mikrobiologi  Farmasi. Makassar: Lembaga Penerbitan Unhas, 2008.
8. Kumala  S.  2014,  Mikroba  Endofit,  ISFI  Penerbitan: Jakarta Barat.
9. Alimuddin,  A.  2006,  Mikrobiologi  Dasar  II,  Jilid  II, Badan Penerbit Universitas Negeri Makassar, Makassar
10. Abalaka   ME,  Daniyan  SY,  Oyeleke SB,  Adeyemo  SO. Antibacterial  Evaluation  of  Moringa  Oleifera  Leaf Extracts  on  Selected  Bacterial  Pathogens. J  of Microbiology Res. ,2011, 1(1) ; 1-4.
11. Fadlila WN, Yuliawati KM, Livia S. Identifikasi Senyawa Aktif  Antibakteri  dengan  Metode  Bioautografi  terhadap Ekstrak Etanol tangkai Daun Talas ( Colocasia esculenta (L.)  Schott),  Prosiding  Farmasi  Spesia:  Seminar Penelitian  Sivitas  Akademika  Unisba  (Kesehatan  dan Farmasi), ISSN 2460-6472
12. Nopiana. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol 70% Daun Kelor (Moringa oleifera Lam.) Terhadap Tekanan Darah Tikus  Putih  Betina  Anemia.  Jakarta:  Universitas Indonesia, 2013.
Tabel 4. Hasil uji kandungan metabolit sekunder ekstrak etilasetat daun kelor
Uji Golongan Senyawa Hasil Uji [12] Hasil Penelitian Keterangan Alkaloid (Dragendorff) Endapan jingga Endapan jingga + Alkaloid (Wagner) Endapan coklat Endapan coklat + Alkaloid (Mayer) Endapan putih Endapan putih + Flavonoid Merah jingga Merah jingga + Polifenol Hijau kehitaman Hijau kehitaman +