pISSN: 2442-9791; eISSN: 2715-4181
Skrining  Fitokimia  dan  Uji  Toksisitas  Ekstrak  dan  Fraksi  Kulit  Batang Kumbou  (Artocarpus  elastica  Reinw.  ex  Bl)  dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethaly Test (BSLT)
(Phytochemistry  Screening  and  Toxicity  Test  of  Extract  and  Fraction  From Kumbou  (Artocarpus  elastica  Reinw.  ex  Bl)  Merr  using  Brine  Shrimp  Lethaly Test )
Yamin Yamin 1 , Henny Kasmawati 1 , Lisa Talita Linggi Allo 1
1 Program Studi Farmasi, Universitas Halu Oleo, Kendari, 93232

## E-mail: yamin_taeri75@ymail.com

## Abstract
Kumbou plant (Artocarpus elasticus Reinw ex BI) used as traditionally medicine for treatment dysentery, inflammation and infection with metabolic content flavonoids, fenolic,  lipids  and  sterol.  The  goals  in  study  to  look  potential  for  Kumbou  bark toxicity using Brine Shrimp Lethaly Test (BSLT) method. The results showed that both methanol extract and ethyl acetat fraction and water fraction had a toxicity of A.  salina with  LC 50 values  349.829  µg/mL,  456.223  µg/mL  dan  449.895  µg/mL recpectively.
Keywords : Kumbou bark (Artocaprus elastic Reinw Ex BI), Brime Shrimp Lethaly Test, LC 50 , toxicity

## Abstrak
Tumbuhan Kumbou ( Artocarpus elastica Reinw. ex Bl) secara tradisonal digunakan sebagai obat disentri, peradangan dan infeksi dengan kandungan metabloit seperti fenolik, flavonoid, lipid dan sterol. Penelitian ini  bertujuan melihat potensi toksisitas kulit batang Kumbou dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethaly Test (BSLT ). Hasilnya menunjukkan  bahwa  baik  ekstrak  methanol  maupun  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  memiliki  aktivitas  tokisisitas terdahap larva A.salina leach dengan nilai LC 50 berturut-turut 349.829 µg/ml, 456.223 µg/ml dan 449.895 µg/m l.
Kata kunci: Batang Kumbou ( Artocarpus elastica Reinw. Ex BI ) Merr), Brine Shrimp Lethaly Test, LC 50 , tokisisitas

## 1. Pendahuluan
Tumbuhan Kumbou ( Artocarpus elastic Reinw.  Ex  BI)  merupakan  jenis  tumbuhan  family Moraceae genus Artocarpus. Secara tradisional bagian buah, akar, daun dan kuncup dapat  digunakan dalam pengobatan  penyakit  demam,  sirosis  hati,  hipertensi dan diabetes [1].  Selain itu, genus ini juga kaya akan metabolit  sekunder  seperti,  flavonoid,  khalkon, xanton,  triterpen,  β-sitosterol  dan  arylbenzofuran. Metabolit-tanaman  ini  diketahui  memiliki  aktivitas sebagi sitotoksik, antoproliferasi, antiplatelet, antimikroba, antioksidan, antimalaria, dan antiiflamasi  [1,  2].  Masyarakat  Jawa  menggunakan
getah A. elastic Reinw. Ex untuk pengobatan penyakit disentri  dan  antiinflamasi,  kulit  digunakan  untuk kontrasepsi wanita serta daun muda untuk pengobatan tuberculosis  [3].  Selain  itu  pada  kulit  batang  A. lanceifolius  menunjukkan  bahwa  tumbuhan  ini bersifat  toksik  dan  memiliki  potensi  sebagai antioksidan [4].
Tanaman  mengandung  senyawa  bioaktif, namun  pada  dosis  yang  tinggi,  semua  senyawa bioaktif dapat berpotensi menjadi racun. Oleh karena itu,  kekuatan  suatu  senyawa  bioaktif  dalam menyebabkan toksik terhadap suatu organisme, dapat menjadi dasar untuk melakukan skrining pada ekstrak maupun fraksi suatu tanaman yang memiliki aktivitas
Article Info:
Received: 10 March 2020
Accepted: 25 March 2020 DOI:
10.33772/pharmauho.v6i1. 11398
biologi.  Larva  udang Artemia  salina L,  merupakan salah  satu  organisme  yang  dapat  dijadikan  sebagai bahan uji kekuatan toksik untuk senyawa bioaktif yang berasal dari ekstrak maupun fraksi tanaman. Pengujian kekuatan  toksik  senyawa  bioaktif  terhadap  larva udang  ini  dapat  menggunakan  metode Brine  Shrimp Lethaly Test (BSLT) [5].
Penggunaan  metode  ini  disebabkan  karena metode ini sangat mudah dan murah, serta mendukung proses awal penentuan efek suatu senyawa. Selain itu, metode  ini  memiliki  korelasi  dengan  adanya  daya sitotoksik  berpotensi  sebagai  anti  kanker,  anti  tumor atau  sitotoksik  skrining  produk  alami  [6,  7]. Berdasarkan hal tersebut, maka tujuan dari penelitian ini adalah menentukan nilai toksisitas dari ekstrak dan fraksi kulit batang Kumbou ( Artocarpus elastic Reinw. Ex BI).

## 2. Metode

## 2.1 Sampel Tumbuhan
Kulit  batang  Kumbou  ( Artocarpus  elastic
Reinw.  Ex  BI)  diperoleh  dari  Kelurahan  Laende, Kecamatan  Katobu,  Kabupaten  Muna,  Sulawesi Tenggara.  Dideterminasi  di  Laboratorium  Biologi Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan  Universitas Halu Oleo.
Gambar 1 . Skema ekstraksi kulit batang kumbou

## 2.2 Ekstraksi
Sebanyak 600 gram serbuk kulit batang kumbou dimaserasi  dengan  menggunakan  pelarut  methanol selama  3  x  24  jam.  Pelarut  diganti  setiap  24  jam,
kemudian  diuapkan  menggunakan  rotary  evaporator dengan suhu 45 o C sehingga diperoleh ekstrak kental. Selanjutnya  100  gram  ekstrak  kulit  batang  Kumbou dilarutkan  dengan  aquades,  setelah  itu    dipartisi menggunakan  pelarut  n-heksan  dan  etil  asetat.  Hasil partisi  kemudian  diuapkan  dengan  menggunakna rotary evaporator , sehingga diperoleh sampel ekstrak metanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi sisa air. Sebagai mana terlihat pada Gambar 1

## 2.3 Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia mengetahui golongan metabolit yang  terkandung pada fraksi kulit Kumbou, yakni:  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  tannin,  terpenoi dan saponin a. Uji Flavonoid Ekstrakdan fraksi kulit batang Kumbou dimasukan kedalam tabung reaksi sebanyak 1 mL, dimasukan 0,1 gram serbuk magnesium dan ditambahkan HCl 2  mL  pekat.  Terbentuk  larutan  berwarna  merah menunjukan adanya flavonoid
b. Uji Alkaloid Ekstrak    dan  fraksi  batang  Kumbou  dimasukan kedalam  tabung  reaksi  1  mL,  lalu  ditambahkan pereaksi  dragendrof    2-3  tetes  Terbentuknya endapan  cokelat  menunjukkan  adanya  senyawa alkaloid
c. Uji Terpenoid
Ekstrak  dan  fraksi  kulit  batang  Kumbou dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  sebanyak  1 mL, dan ditambahkan 0,5 mL asam asetat anhidrat dan  asam  sulfat  pekat  sebanyak  2  mL. Terbentuknya warna merah atau ungu menunjukkan adanya senyawa terpenoid. d. Uji  Saponin
Ekstrak  dan  fraksi  air  kulit  batang  Kumbou dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  1 mL, ditambahkan dengan 2 mL air panas kemudian didinginkan,  dikocok  kuat  selama  10  detik. Terbentuk buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit e. Uji Tanin
Ekstrak    dan  fraksi    kulit  batang Kumbou dimasukkan dalam tabung reaksi  sebanyak 1 mL, ditambahkan dengan 1 mL larutan Fe (III) klorida 1%. Terbentuk warna biru tua, biru kehitaman atau hitam  kehijuan  menunjukkan  adanya  senyawa tannin
2.4 Uji Toksisitas Metode  Brine Shrimp Lethaly Test ( BSLT )
Pengujian tokisitas dilakukan berdasarkan metode  (Sumihe  et  al.,  2013)  dengan  sedikit modifikasi  Sebanyak  10  larva  udang  dimasukan kedalam  vial  uji,  kemudian  ditambahkan    larutan
sampel  hingga  volumenya  mencapai  5.  Setiap konsentrasi  dilakukan  3  kali  pengulangan.  Sebagai kontrol  pelarut  dilakukan  dengan  2,5  mL  larutan blanko  kemudian  ditambahkan  air  laut  2,5  mL. Pengujiannya dilakukan dengan menggunakan konsentrasi dengan  variasi konsentrasi yaitu 10 ppm, 100  ppm,  125  ppm  ,  250  ppm,  500  ppm,  750  ppm, 1000 ppm , 2000 ppm.

## 2.5 Analisis Data
Analisis  probit  antara  konsentrasi  sampel    dan jumlah  kematian  larva  diuji  menggunakan  Minitab ver.18 sehingga menunjukkan nilai LC 50 dari masing- masing sampel tersebut. Suatu zat dinyatakan bersifat
toksik  jika  LC50  <1000  µg/mL  untuk  ekstrak    dan <30 µg/mL untuk senyawa murni [5].

## 3. Hasil dan Pembahasan
Skring  fitokimia ekstrak dan fraksi  kulit  batang Kumbou  ( Artocarpus  elastic  Reinw.  Ex  BI ) menujukkan bahwa ekstrak metanol, fraksi etil asetat dan fraksi air, semuanya positif mengandung alkaloid, flavonoid,  tannin,  saponin  dan  terpenoid,  sementara pada  spesies  yang A.  lanceifolius ROXB,  menurut penelitian  sebelumnya,    fraksi  etil  asetat  negatif terpenoid,  dan  pada  methanol  positif  semua  [4]. Dimana  perbandingan  keduanya  dapat  dilihat    pada tabel 1.
Tabel 1 . Hasil skrining fitokimia ekstrak metanol dan fraksi etil asetat dan fraksi air kulit batang Kumbou Senyawa Fitokimia Sampel Ekstral Metanol Fraksi etil asetat Fraksi air A. elastic A lanceifolius ( Hasmindar et.al., 2019 ) A. elastic A lanceifolius (Hasmindar ,et.al., 2019 ) Alkaloid + + + + + Flavonoid + + + + + Tanin + + + + + Saponin + + + Terpenoid + + + - +
Tabel 2. Nilai probit mortalitas ekstrak dan fraksi kulit batang Kumbou terhadap larva Artemia salina Sampel Konsentrasi (ppm) % Mortalitas LC 50 (ppm) Ekstrak metanol 10 ppm
0% LC 50 = 349,829 ppm 100 ppm 13,33% 125 ppm 30% 250 ppm 53,33% 500 ppm 63,33% 750ppm 90% 1000 ppm 100% 2000 ppm 100% Fraksi air 10 ppm
0% LC 50 = 456,223 ppm 100 ppm 7% 125 ppm 26,66% 250 ppm 36,66% 500 ppm 60% 750ppm 77% 1000 ppm 93,33% 2000 ppm 100% Fraksi etil asetat 10 ppm
7% LC 50 = 449,895 ppm 100 ppm 20% 125 ppm 26,66% 250 ppm 36,66% 500 ppm 53,33% 750ppm 77% 1000 ppm 90% 2000 ppm 100%
Metode  BSLT  merupakan  metode  pengujian toksisitas  yang  sangat  mudah  dan  murah,  serta mendukung  proses  awal  penentuan  efek  suatu senyawa yang berpotensi sebagai anti kanker, maupun anti tumor atau sitotoksik skrining dari produk alami. Suatu senyawa dikatakan kurang toksik jika memiliki nilai  LC 50 kurang  dari  1000  µg/L  dan  akan  sangat toksik  jika penguran nilai  LC 50 kurang dari 30 µg/L. Pada  penelitian  ini,  digunakna  larva  udang Artemia salina yang telah berumur 48 jam karena pada umur ini organ A. salina sudang terbentuk sempurna [8, 9]. Hasil pengujian toksisitas akut ekstrak dan fraksi kulit batang  Kumbou  dengan  menggunakan A.  salina dengan  konsentrasi  sampel  10  ppm,  100  ppm,  125 ppm, 250 ppm,  500 ppm, 750 ppm, 1000 ppm, 2000 ppm terlihat pada tabel 2.
Data  yang  tersaji  pada  gambar  2  menunjukkan bahwa  baik  ekstrak    maupun  fraksi  dari  kulit  batang Kumbou ( A. elastic Reinw BI) bersifat toksik dengan nilai  LC50  dari  ekstrak  methanol  (ME),  fraksi  etil asetat  (FE)  dan  fraksi  air  (FA)  secara  berturut-turut sebesar 349,829 µg/mL, 456,223 µg/mL dan 449,895 µg/mL, namun hal ini kurang toksik jika dibandingkan dengan A. lenceifolius sebagai mana yang dilaporkan oleh [4], dimana LC50 dari etil asetat sebesar 0,3615 µg/mL dan metanol sebesar 0,2069 µg/mL.
Gambar 2 . Nilai LC 50 ekstrak methanol (EM), Fraksi etil asetat (FE) Fraksi air (FA)
Semakin  kecil  nilai  LC 50 dari  suatu  sampel, menunjukkan bahwa sampel tersebut semakin bersifat toksik.  Gambar  2  menunjukkan  bahwa  ekstrak methanol memiliki nilai LC 50 lebih rendah dibandingkan  dengan  fraksi  air  maupun  fraksi  etil asetat  dengan  nilai  berturut-turut  349,829  µg/mL, 456,223  µg/mL  dan  449,895  µg/ml.  Data  tersebut menunjukan bahwa crude ekstrak metanol kulit batang Kumbou  ( A  elastic Reinw.  Ex  BI)  lebih  toksik  dari pada  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air.  Hal  ini  sejalan dengan penelitian pada sampel Polygala sabulosa. Hal ini  dikarenakan    masih  banyaknya  kandungan senyawa metabolit sekunder dalam ekstrak methanol, sehingga  memberikan  efek  sinergi  senyawa  yang terdapat  dalam  crude  ekstrak  tersebut  [12].  Suatu sampel  dalam  bentuk  ekstrak  dapat  dikatakan  toksik
jika  nilai  LC 50 kurang  dari  1000  µg/mL  (<1000 µg/mL)  [6].  Data  tersebut  menunjukkan  bahwa senyawa-senyawa  yang  paling  bersifat  toksik  dalam kulit  batang  Kumbou  terdapat  dalam  ekstrak methanol.

## 4. Kesimpulan
Ekstrak methanol, fraksi etil asetat dan fraksi air kulit  batang  Kumbou  (Artocaprus  elastic)  bersifat toksik  pada  larva  udang  A.  salina,  dengan  ekstrak methanol memiliki daya toksik yang lebih kuat dengan nilai LC 50 349,829 µg/mL. Sehingga ekstrak methanol dapat diisolasi lebih lanjut untuk mengetahui senyawa yang  paling  bersifat  toksik  dan  kemungkinan  dapat dikembangkan menjadi obat anti kanker.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  kepada  Fakultas  Farmasi Universitas  Halu  Oleo  atas  dukungan  dan  bantuan dalam pelaksanaan penelitian ini.

## Daftar Pustaka
1. Ramli, F., Rahmani, M., Kassim, N. K., Hashim, N.  M.,  Sukari,  M.  A.,  Akim,  A.  M.,  &  Go,  R. (2013).  New  diprenylated  dihyrochalcones  from leaves  of  Artocarpus  elasticus. Phytochemistry Letters , 6 (4), 582–585.
2. Jamil, S., Taher, M., Sirat, H. M., & Othman, N. A.  (2012).  Flavonoids  and  triterpenes  from  the leaves of artocarpus fulvicortex. Natural Product Communications , 7 (12), 1587–1588.
3. Musthapa,  I.,  Juliawaty,  L.  D.,  Syah,  Y.  M., Hakim,  E.  H.,  Latip,  J.,  &  Ghisalberti,  E.  L. (2009).  An  oxepinoflavone  from  Artocarpus elasticus  with  cytotoxic  activity  against  P-388 cells. Archives  of  Pharmacal  Research , 32 (2), 191–194.
4. Hamsidar  H,  Nunuk  H.  Soekamto  ,  Yana  M. Syah,  F.  (2019).  Determination  Of  Secondary Metabolites, Toxicity And Antioxidant Activities Of  Bark  Extracts  Of  Artocarpus  lanceifolius ROXB.
5. Megawati,  Ahmad  Darmawan,  I.  dwiatmi dewijanti.  (2012). BIOACTIVITY  Brine  Shrimp Lethality  Test  Extract  And  Fractination  From Kalanchoe Pinnata Lam Pers . 147–151.
6. Widiyarti,  G.,  Supiani,  S.,  &  Tiara,  Y.  (2018). Antioxidant  Activity  and  Toxicity  of  Puspa (Schima wallichii) Leaves Extract from Indonesia. Journal of Tropical Life Science , 8 (2), 151–157.
0 200 400 600 EM FE FA 349,829 456,223 449,895 N il a i LC 5 0 (µg /m L)
7. Mappasomba,  M.,  Wirasmanto,  B.,  Malaka,  M. H.,  Wahyuni,  &  Sahidin.  (2019).  Penapisan Fitokimia  dan  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak Metanol  Beberapa  Tanaman  Obat  Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach. Pharmauho : Jurnal Farmasi, Sains, Dan Kesehatan , 5 (2), 30–
34.
8. Muawanah,  Ahmad,  A.,  &  Natsir,  H.  (2016). Antioxidant Activity And Toxicity Polysaccharide Extract From Red Algae Eucheuma cottonii AND Eucheuma spinosum . 17 (02), 15–23.
9. Sondakh,  R.  M.,  Posangi,  J.,  &  Wowor,  P.  M. (2017).  Uji  Toksisitas  Akut  Ekstrak  Spons  Laut (Callyspongia  aerizusa)  terhadap  Larva  Artemia salina  Leach  dengan  Metode  Brine  Shrimp
Lethality Test. Jurnal E-Biomedik , 5 (2), 0–3.
10. Muaja, A. D., Koleangan, H. S. J., & Runtuwene, M.  R.  J.  (2013).  Uji  Toksisitas  dengan  Metode BSLT dan Analisis Kandungan Fitokimia Ekstrak Daun  Soyogik  (Saurauia  bracteosa  DC)  dengan Metode Soxhletasi. Jurnal MIPA , 2 (2), 115.
11. Sumihe,  G.,  Liwas,  D., &  Sekunder,  M.  (2013). Phytochemical  Analysis  and  Determining  Lc50 Value of Liwas Leave Methanol Extract . 1–4. 12. Pimentel Montanher, A. B., Pizzolatti, M. G., & Costa Brighente, I. M. (2002). An application of the brine shrimp bioassay for general screening of Brazilian  medicinal  plants. Acta  Farmaceutica Bonaerense , 21 (3), 175–178.
© 2020 by the authors; This article is an open access article distributed under the terms  and  conditions  of  the  Creative  Commons  Attribution  License ( http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ )