## Potensi Metabolit Kapang Endofit Mangrove Rhizophora apiculata sebagai Anti- Staphylococcus epidermidis

## Maria Fransiska Limbong, Wilis Ari Setyati*, Sri Sedjati, Mada Triandala Sibero
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof Jacub Rais, Tembalang, Semarang, Indonesia 50275
Email : wilisarisetyati@yahoo.co.id
Abstract

## Potential of Mangrove Endophytic Mold Metabolites of Rhizophora apiculata as Anti-Staphylococcus  epidermidis
Mangrove association molds are known to produce secondary metabolite compounds that have antibacterial activity. The purpose  of  this  study  was  to  obtain anti-Staphylococcus  epidermidis  metabolites produced  by  the  endophytic  mold of mangrove Rhizophora apiculate. The screening process is carried out in exploratory descriptive research.  The stages of this research are sampling, mold isolation and purification, and macroscopic characterization. Initial screening of antibacterial activity is carried out by the agar plug method. Isolates that produce antibacterial metabolites are molecularly identified. The isolate was then cultured with Potato Dextrose Agar (PDA) media. The producing antibacterial metabolites were extracted using  two  solvents  of  different  polarities  (ethyl  acetate  and  methanol)  by  stratified  maceration  method.  Antibacterial metabolites are then tested to determine the concentration of extracts required to inhibit (Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and kill bacterial growth (Minimum Bactericidal Concentration / MBC). The results of this study showed that there is one species  of  mangrove  endophytic  mold Rhizophora  apiculata that  can  produce  antibacterial  metabolites  against S. epidermidis , namely Diaporthe sennae .  These antibacterial metabolites are present in ethyl acetate extract. The resulting bioactivity based on the ability to inhibit bacterial growth can be seen from the MIC value of 2.5 mg / mL and the ability to kill bacteria with an MBC value of 5 mg / mL. The mold metabolite Diaporthe sennae could potentially be developed as an anti- Staphylococcus epidermidis
Keywords : Antibacterial, Staphylococcus epidermidis, Diaporthe sennae, ethyl acetate extract

## Abstrak
Kapang asosiasi mangrove diketahui menghasilkan senyawa metabolit sekunder yang memiliki aktivitas antibakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk mendapatkan metabolit anti- Staphylococcus epidermidis yang dihasilkan oleh kapang endofit mangrove Rhizophora  apiculate. Proses  skrining  dilakukan  secara  diskriptif  eksploratif.    Tahapan  penelitian  ini  adalah pengambilan sampel, isolasi dan purifikasi kapang, serta karakterisasi makroskopis. Skrining awal aktivitas antibakteri dilakukan dengan  metode agar  plug .  Isolat  yang  menghasilkan  metabolit  antibakteri  diidentifikasi  secara  molekuler.  Isolat  tersebut selanjutnya  dikultur  dengan  media Potato  Dextrose  Agar (PDA).  Metabolit  antibakteri  yang  dihasilkan  diekstraksi menggunakan dua pelarut yang berbeda polaritas (etil asetat dan metanol) dengan metode maserasi bertingkat. Metabolit antibakteri kemudian diuji untuk menentukan konsentrasi ekstrak  yang diperlukan untuk menghambat (Minimum Inhibitory Concentration /MIC) dan membunuh pertumbuhan bakteri (Minimum Bactericidal Concentration /MBC). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa terdapat satu spesies kapang endofit mangrove Rhizophora apiculata yang yang dapat menghasilkan metabolit antibakteri  melawan S. epidermidis , yaitu Diaporthe sennae .  Metabolit antibakteri tersebut terdapat dalam ekstrak etil asetat. Bioaktivitas yang dihasilkan berdasarkan kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri terlihat dari nilai MIC sebesar 2,5 mg/mL dan kemampuan membunuh bakteri dengan nilai MBC sebesar 5 mg/mL.  Metabolit kapang Diaporthe sennae berpotensi dikembangkan sebagai anti- Staphylococcus epidermidis
Kata kunci : Antibakteri, Staphylococcus epidermidis , Diaporthe sennae, ekstrak etil asetat

## PENDAHULUAN
Penyakit  kulit  merupakan  penyakit  non-fatal  yang  dapat  mempengaruhi  30-7-%  individu secara  global  tanpa  memandang  kelompok  umur  (Liu et  al., 2020).  Penyakit  kulit  pada  manusia dapat disebabkan oleh infeksi mikroba seperti bakteri Staphylococcus sp., Streptococcus sp., dan jamur seperti Candida sp. dan Malassezia (Hay, 2020). Bakteri Staphylococcus epidermidis dalam beberapa  kasus  dapat  menjadi  patogen  oportunistik  yang  menyebabkan  infeksi  pada  kulit terhadap  manusia  yang  sedang  dalam  kondisi  kekebalan  tubuh  yang  lemah.  Cau et  al .  (2021) melaporkan bahwa Staphylococcus epidermidis merupakan salah satu penyebab infeksi penyakit
kulit  dermatitis  atopik.  Bakteri Staphylococcus  epidermidis tergolong  patogen multi-drug  resistant (MDR). Strain Staphylococcus epidermidis memiliki kemampuan resistensi terhadap beberapa jenis golongan  antibiotik,  seperti  aminoglikosida,  tetrasiklin,  fluorokuinolon,  sefalosporin,  penisilin,  dan makrolida  (Chabi  &  Momtaz,  2019).  Situasi  ini  menyebabkan  penggunaan  obat  antibiotik  dalam penyembuhan infeksi S. epidermidis menjadi tidak efektif.
Alternatif yang dapat dilakukan dalam mengatasi kasus infeksi kulit akibat bakteri MDR adalah dengan  menemukan  obat  antibiotik  baru.  Sumber  antibiotik  baru  dapat  ditemukan  dari  sumber daya alam, salah satunya dengan memanfaatkan bahan hayati laut. Mangrove memiliki metabolit sekunder  yang  memiliki  banyak  potensi,  salah  satunya  adalah  sebagai  antimikroba.  Penelitian terdahulu menemukan bahwa mangrove Rhizophora apiculata menghasilkan metabolit sekunder yaitu tanin, flavonoid, steroid, saponin, dan terpenoid yang berpotensi efektif dalam menghambat dan membunuh pertumbuhan jamur dan bakteri dari spesies Staphylococcus aureus, Aeromonas hydrophila , dan Pseudomonas aeruginosa (Syawal et al ., 2020). Penelitian lain menemukan ekstrak etil asetat dari daun R. apiculata mampu menghambat pertumbuhan patogen E. coli yang lebih efektif dibandingkan dengan penggunaan antibiotik seperti amoxcillin (Sormin et al., 2021). Seiring dengan berjalannya waktu, pemanfaatan tumbuhan mangrove sebagai alternatif obat antibiotik alami  untuk  melawan  bakteri  penyebab  infeksi  penyakit  kulit  menjadi  tidak  efektif  karena bertentangan  dengan  prinsip  konservasi.  Hal  ini  mendorong  penelitian  baru  untuk  menemukan kapang endofit mangrove sebagai sumber antibiotik untuk menghindari eksploitasi berlebihan dan menjaga  kelimpahan  tumbuhan  mangrove.  Kapang  endofit  mangrove  menghasilkan  senyawa metabolit sekunder yang serupa dengan metabolit sekunder inangnya (Shara et al., 2023). Penelitian terdahulu menemukan bahwa kapang endofit mangrove memiliki kemampuan aktivitas antibakteri terhadap  patogen Staphylococcus  aureus,  S.  epidermidis, dan Bacillus  sibtilus (Handayani et  al., 2020). Penelitian lain menemukan bahwa kapang endofit mangrove Ceriops tagal memiliki potensi sebagai antibakteri terhadap bakteri S. epidermidis dengan hasil MIC senilai 250 µg/mL (Putra et al., 2023). Saat ini, belum banyak referensi yang mempublikasikan kapang endofit mangrove sebagai penghasil  antibakteri.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  dilakukan  untuk  mencari  dan  mendapatkan metabolit yang dihasilkan oleh kapang endofit mangrove Rhizophora apiculata sebagai antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis. Selanjutnya, spesies kapang yang menghasilkan metabolit antibakteri diidentifikasi secara molekuler.

## MATERI DAN METODE
Sampel kapang diisolasi dari mangrove Rhizophora apiculata yang diambil dari Pantai Legon Lele,  Taman  Nasional  Karimunjawa,  Jepara.  Bakteri S.  epidermidis yang  menjadi  patogen  uji merupakan  koleksi  dari  Laboratorium Natural  Product, Laboratorium  Terpadu,  Universitas Diponegoro,  Semarang.  Sampel R.  apiculata diambil  dari  Pantai  Legon  Lele,  Taman  Nasional Karimunjawa,  Jepara dengan  titik  koordinat  (S  5°51’48,95”  ;  E  110°26’47,64”). Bagian  tumbuhan mangrove yang diambil adalah daun dan tangkai. Sampel mangrove dimasukkan ke plastik ziplock dan disimpan di dalam cool box (Mamangkey et al., 2021). Peta lokasi pengambilan sampel dapat dilihat pada Gambar 1.
Bagian  daun  dan  tangkai  mangrove  dilakukan  sterilisasi  permukaan  dengan  dibilas menggunakan larutan akuades steril selama 1 menit, lalu direndam larutan alkohol 70% selama 30 detik,  kemudian  dibilas  dengan  akuades  steril  selama  1  menit.  Daun  dan  tangkai  selanjutnya disterilkan  dengan  larutan  NaOCl  5%  selama  30  detik,  kemudian  dibilas  untuk  terakhir  dengan akuadest  selama  3  menit.  Daun  dan  tangkai  yang  sudah  steril  dikeringkan  dengan  tisu  steril, kemudian  dipotong  dengan  ukuran  1x1  cm.  Bagian  daun  dan  tangkai  mangrove  yang  sudah terpotong ditanamkan pada dua jenis media agar, yaitu media Potato Dextrose Agar (PDA) dan Malt Extract Agar (MEA) dan diinkubasi pada suhu ruangan 27°C. Cawan petri dengan media PDA disiapkan sebagai media kontrol lingkungan untuk menumbuhan kapang. Kapang yang tumbuh pada  media  kontrol  lingkungan  bertujuan  sebagai  pembeda  antara  kapang  kontaminan lingkungan dengan kapang endofit sampel mangrove. Pertumbuhan kapang pada media PDA dan MEA diamati secara berkala setiap hari selama 5-7 hari. Kapang yang tumbuh pada media isolasi
dan  memiliki  karakteristik  yang  berbeda  dengan  kapang  yang  tumbuh  pada  media  kontrol lingkungan dapat dilakukan purifikasi (Apurillo et al ., 2019).
Identifikasi makroskopis kapang dilakukan melalui pengamatan morfologi kapang dari koloni murni  dengan  mengamati  warna  koloni,  bentuk  dan  tekstur  koloni,  keberadaan exudates dan sclerotia pada koloni kapang. Warna koloni kapang yang diamati yaitu warna pada miselia kapang dan warna reverse yaitu bagian bawah kapang pada media agar (Sibero et al ., 2021).
Isolat murni kapang yang diuji skrining dikultur terlebih dahulu dalam media PDA selama 7 hari pada suhu ruangan 27°C. Suspensi patogen uji S. epidermidis disiapkan pada media MHB dengan standar  larutan  McFarland  0,5.  Suspensi  patogen  di- swab pada  media  MHA  secara  merata menggunakan cotton swab steril. Isolat kapang murni yang sudah dikultur selama 7 hari dipotong menggunakan cork-borer steril dengan ukuran 1x1 cm 2 , kemudian diinokulasikan pada media MHA yang sudah di- swab dengan patogen uji. Media tersebut diinkubasi selama 24 jam dengan suhu ruangan  37°C.  Hasil  skrining  diamati  setelah  diinkubasi  selama  24  jam  dengan  memperhatikan keberadaan zona bening di sekitar area agar plug sebagai pertanda adanya aktivitas antibakteri pada isolat kapang dalam melawan patogen S. epidermidis (Sibero et al ., 2017).
Ekstraksi DNA isolat kapang dilakukan menggunakan metode Chelex. Amplifikasi DNA kapang dilakukan  dengan  metode polymerase  chain  reaction (PCR).  PCR  DNA  menggunakan  primer Internal Transcribed Spacer (ITS) sebagai barcoding DNA kapang, dengan ITS 1 (5'-TCC GTA GGT GAA CCT GCG G-3') sebagai primer forward dan ITS 4 (5'-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3') sebagai primer reverse . Campuran PCR yang digunakan dalam amplifikasi DNA yaitu DNA template 1 µL, ITS 1 sebagai primer forward 1 µL, ITS 4 sebagai primer reverse 1 µL, ddH2O 9,5 µL, dan GoTaq Green Master  Mix  12,5  µL.  Kondisi  PCR  diatur  sebagai  berikut: preheat pada  suhu  95°C  selama  3  menit, denaturasi pada suhu 95°C selama 1 menit, annealing pada suhu 55°C selama 1 menit, extention pada suhu 72°C selama 1 menit, extention akhir pada suhu 72°C selama 7 menit, dan holding pada suhu 16°C. Tahapan denaturasi, annealing , dan extention diatur dalam 34 siklus sebelum tahapan extention akhir  (Sibero et  al., 2017).  Hasil  PCR  DNA  divisualisasikan  melalui  tahapan  elektroforesis dengan  buffer  yang  digunakan  yaitu  larutan Tris  Borate  Ethylenediamintetraacetate (TBE).  Hasil elektroforesis PCR DNA kemudian dilanjutkan proses sekuensing DNA yang dilakukan di PT. Genetika Science, Jakarta.
Ekstraksi isolat dilakukan dengan metode maserasi secara bertingkat menggunakan pelarut dengan tingkat kepoloran yang berbeda. Pelarut yang digunakan yaitu etil asetat dan metanol. Isolat  kapang  yang  sudah  dikultivasi  selama  7  hari  dalam  media  PDA  dimaserasi  menggunakan pelarut  etil  asetat,  lalu  disaring  menggunakan  kertas Whatman untuk  menghasilkan  maseratnya. Residu dari hasil maserasi pertama dilanjutkan proses maserasi berikutnya dengan pelarut metanol. Masing-masing  maserat  diuapkan  dengan  suhu  40°C  menggunakan rotary  evaporator dengan tujuan mendapatkan ekstrak kasar dari masing-masing pelarut tersebut. Ekstrak kasar disimpan di dalam  wadah  botol  vial  dan  disimpan  dalam freezer pada  suhu  -15  sampai  -20°.  Ekstrak  kasar disimpan dan digunakan untuk uji-uji lanjutan (Listyorini et al., 2021).
Uji Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC)  dilakukan  bertujuan  untuk  mengetahui  nilai konsentrasi  terendah ekstrak kapang  dalam menghambat pertumbuhan  patogen.  Nilai MIC dari ekstrak kapang potensial ditentukan dengan metode mikrodilusi pada microplate 96- well . Larutan dimethyl sulfoxide (DMSO) diperlukan sebagai kontrol negatif dan untuk melarutkan ekstrak kapang dan kloramfenikol sebagai kontrol positif. Sumur di baris 1 pada kolom A hingga D diisi dengan 80 µL media  MHB  dan  20  µL  larutan  uji  masing-masing  kontrol  negatif,  ekstrak  etil  asetat,  dan  ekstrak metanol. Seri konsentrasi dibuat mulai yang terbesar 5; 2,5; 1,25; 0,625; 0,313; 0,156; 0,078; 0,039; 0,020; 0,010  mg/mL.  Setiap well pada microplate ditambahkan  media  basal  (MHB)  sebanyak  100  µL. Patogen uji S. epidermidis yang sudah diinkubasi 24 jam sebelumnya diinokulasi pada media MHB, kemudian  kepadatannya  disesuaikan  dengan  standar  larutan  McFarland  0,5.  Suspensi  patogen tersebut ditambahkan 100 µL ke dalam setiap sumur microplate. Microplate diinkubasi dalam kurun waktu 24 jam pada suhu ruangan 37°C untuk waktu pertumbuhan patogen pada microplate. Tahap terakhir  adalah penambahan  resazurin  sebanyak  20  µL  sebagai  indikator  pertumbuhan  patogen yang dilihat dari perubahan warna resazurin dari biru menjadi merah muda pada sumur microplate. Nilai MIC adalah nilai konsentrasi dari sumur microplate terakir yang tidak terjadi perubahan warna resazurin yaitu tetap berwarna biru. Hal ini mengartikan bahwa pada konsentrasi tersebut konsentrasi terendah yang dapat menghambat pertumbuhan patogen uji. Perubahan warna resazurin menjadi merah  muda  pada  sumur microplate menunjukkan  masih  adanya  pertumbuhan  patogen  pada konsentrasi tersebut (Sibero et al., 2020).
Uji Minimum  Bactericidal  Concentration (MBC)  dilakukan  bertujuan  untuk  mengetahui  nilai konsentrasi  terendah  ekstrak  kapang  untuk  membunuh  bakteri  uji.  Pengujian  MBC  dilanjutkan dengan  mengambil  10  µL  dari  sumur  yang  menunjukkan  tidak  adanya  pertumbuhan  patogen, kemudian ditumbuhkan  pada media MHA dan  diinkubasi  dalam kurun  waktu  24 jam pada suhu ruangan 37°C. Hasil uji MBC kemudian diamati dengan tidak adanya bakteri yang tumbuh di media MHA (Belmehdi et al ., 2021).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel mangrove yang diambil dari lokasi sampling dilakukan pengamatan morfologi untuk mengidentifikasi  spesies  dari  mangrove  tersebut.  Hasil  pengamatan  morfologi  daun  mangrove didapatkan karakteristik berupa daun berwarna hijau tua dan pangkal daun berwarna kemerahan. Bentuk daunnya yaitu elip dan ujungnya meruncing, memiliki ukuran panjang 14 cm dan lebar 5 cm, serta tangkai pohonnya berwarna coklat tua. Sampel mangrove ditemukan pada wilayah pesisir pantai  dengan  kondisi  substrat  pasir  berlumpur.  Hasil  pengamatan  morfologi  sampel  mangrove kemudian diidentifikasi jenis mangrove tersebut dengan mengacu pada (Noor et al ., 2006) dalam buku panduan pengenalan mangrove, sehingga dapat diketahui bahwa spesies sampel mangrove yang diambil merupakan mangrove jenis Rhizophora apiculata .
Kapang  endofit  merupakan  kapang  yang  hidup  di  dalam  jaringan  inangnya  tanpa menyebabkan penyakit pada inangnya (Rana et al., 2019). Kapang endofit mangrove Rhizophora apiculata berhasil diisolasi pada media Potato dextrose agar (PDA). Hasil isolasi kapang dari sampel mangrove  dilakukan  pengamatan,  penampakan  morfologis  berbeda  dipisahkan  di  media  baru sampai  diperoleh  isolat  murni  dalam  proses  purifikasi.  Hasil  purifikasi  kapang  didapatkan  isolat dengan penamaan kode MG.05.T.15 dapat dilihat pada Gambar 2a.
Tampak Depan Tampak Belakang Karakterisasi Morfologi - Tampilan : Verrucose - Tekstur : Cottony - Warna Miselium : Putih - Warna Reverse : Putih - Exudates : Tidak ada -
Sclerotia : Tidak ada
(a)
(b)
Gambar 2 .  Hasil  Skrining  Metabolit  Antibakteri:  (a)  Karakteristik  Makroskopis  Kapang  MG.05.T.15 , (b)Skrining Aktivitas Antibakteri Kapang MG.05.T.15 terhadap Patogen S. epidermidis
Hasil  skirining  menunjukkan  isolat  kapang  asosiasi  mangrove R.  apiculata dengan  kode MG.05.T.15  yang  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap  patogen  uji  dapat  dilihat  pada Gambar 2b. Hal ini dibuktikan melalui zona bening yang terbentuk  pada agar plug isolat tersebut. Hal  ini  diperkuat  oleh  Taufiq  &  Darah  (2019)  bahwa  metabolit  sekunder  dari  jamur  endofit disekresikan  secara  ekstraseluler  pada  media  uji  sehingga  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  uji.  Skrining  aktivitas  antibakteri  pada  isolat  kapang  ini  dilakukan  dengan  menumbuhkan isolat  kapang  terlebih  dahulu  pada  tiga  media  yang  berbeda,  yaitu  PDA,  MEA,  dan  CDA.  Hasil skrining dari isolat kapang MG.05.T.15 hanya didapatkan zona bening dari hasil kultur menggunakan media PDA yang berpotensi menghasilkan antibakteri terhadap S. epidermidis . Hasil skrining yang tidak aktif ditunjukkan oleh isolat kapang yang dikultur pada media MEA dan CDA.  Hai ini diduga karena  pada  kedua  media  tersebut  isolat  kapang  MG.05.T.15  tidak  mensekresikan  senyawa metabolit sekunder yang terkhusus untuk antibakteri terhadap S. epidermidis .
Identifikasi molekuler dilakukan terhadap isolat potensial MG.05.T.15 untuk menentukan spesies dari  isolat  tersebut.  Identifikasi  molekuler  isolat  kapang  MG.05.T.15  dilakukan  dengan  tahapan ekstraksi  DNA,  amplifikasi  DNA,  elektroforesis,  hingga  sekuensing  DNA.  Metode  chelex  digunakan sebagai  metode  dalam  tahapan  ekstraksi  DNA.  Metode  buffer  chelex  diketahui  tidak menggunakan  pelarut  organik  dan  tidak  melakukan  transfer  sampel  antara  beberapa  tabung, sehingga dapat meminimalkan hilangnya DNA selama proses ekstraksi (Yarimizu et al., 2021).  Hasil sekuensing  DNA  didapatkan  bahwa  isolat  MG.05.T.15  memiliki  kemiripan  sekuen  dengan  spesies Diaporthe  sennae dengan  nilai percent  identify (homologi)  sebesar  96,52%  yang  merupakan persentase  tertinggi  dibandingkan  spesies  dari  genus Diaporthe lainnya  (Tabel  1).  Penelitian sebelumnya oleh Yang et al. (2017) berhasil mengisolasi kapang Diaporthe sennae dari tumbuhan Senna bicapsularis. Penelitian oleh Handayani et al . (2020) melaporkan kapang Diaporthe amygdali yang  diisolasi  dari  kulit  pohon  mangrove Sonneratia  griffithii Kurz  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap S. epidermidis . Pohon filogenetik dibuat berdasarkan homologi dari hasil BLAST sekuensing DNA . Isolat MG.05.T.15 memiliki kesamaan dengan Diaporthe sennae dengan nilai boostrap sebesar
99  yang  mengartikan  hubungan  kekerabatan  yang  lebih  dekat  dengan  spesies D.  sennae dibandingkan dengan spesies Diaporthe lainnya. Konstruksi pohon filogenetik dari isolat MG.05.T.15 dapat dilihat pada Gambar 3.
Konsentrasi  tertinggi  yang  digunakan  untuk  uji minimum  inhibitory  concentration (MIC) ekstrak kasar isolat potensial adalah sebesar 5 mg/mL. Hasil uji MIC didapatkan bahwa esktrak etil asetat  memiliki  konsentrasi  minimum  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen S. epidermidis secara efektif pada konsentrasi 2,5 mg/mL. Ekstrak metanol tidak menunjukkan adanya aktivitas antibakteri terhadap patogen uji pada semua seri konsentrasi yang diuji coba, dibuktikan dari adanya perubahan warna resazurin pada esktrak metanol dari warna biru menjadi warna pink. Berdasarkan hasil uji MIC, selanjutnya dilakukan uji MBC terhadap ekstrak etil asetat. Hasil uji MBC dari  ekstrak  etil  asetat  kapang  MG.05.T.15  menghasilkan  kemampuan  bakteriasidal  terhadap S. epidermidis pada konsentrasi ekstrak sebesar 5 mg/mL. Hasil uji MIC dan MBC dapat dilihat pada Tabel 2.
Gambar 3. Pohon Filogenetik Isolat Kapang MG.05.T.15
Tabel 1. Hasil identifikasi spesies isolat melalui DNA
No Kode Isolat Closets Similarity* Percent Identify Query Cover Accession 1 MG.05.T.15 Diaporthe sennae 96.52% 92% NR_152499.1
Tabel 2. Hasil MIC dan MBC ekstrak  kapang MG.05.T.15 terhadap patogen S. Epidermidis Kode Isolat Jenis Ekstrak Nilai Konsentrasi (mg/mL) MIC* MBC MG.05.T.15 Etil asetat 2,5 5 Metanol > 5 -
Keterangan:
- MIC= Minimum Inhibitory Concentration ; MBC= Minimum Bactericidal Concentration
- *Seri konsentrasi MIC=5; 2,5; 1,25; 0,625; 0,313; 0,156; 0,078; 0,039; 0,020; 0,010 mg/mL
Hasil skrining antibakteri dari kapang endofit mangrove Rhizophora apiculata didapatkan satu isolat  potensial  dengan  kode  MG.05.T.15  yang  mampu  melawan  patogen Staphylococcus epidermidis. Isolat  MG.05.T.15  dimaserasi  pertama  kali  dengan  menggunakan  pelarut  etil  asetat, kemudian  residunya  dimaserasi  lagi  menggunakan  pelarut  metanol.  Metabolit  yang  positif mengandung  senyawa  antibakteri  hanya  berasal  dari  ekstrak  etil  asetat  saja,  sementara  ekstrak etanolnya negatif. Hal ini diduga berkaitan dengan polaritas senyawa antibakteri yang tergolong non-polar  sampai  semi-polar,  sehingga  terekstrak  oleh  etil  asetat  yang  mirip  polaritasnya.  Hal  ini diperkuat oleh Hamzah et al . (2021), bahwa pelarut etil asetat memiliki rentang polaritas yang luas yang mampu mengikat baik senyawa non-polar maupun semi-polar.

## KESIMPULAN
Kapang  endofit Rhizophora  apiculata yang  dapat  menghasilkan  metabolit  antibakteri melawan S.  epidermidis yaitu Diaporthe  sennae .  Ekstrak  etil  asetat  dari  hasil  kultur D.  sennae menggunakan media PDA memiliki bioaktivitas   menghambat pertumbuhan bakteri dengan nilai MIC sebesar 2,5 mg/mL, sedangkan kemampuan membunuh bakteri dengan nilai MBC sebesar 5 mg/mL.  Metabolit  kapang D.  sennae berpotensi  dikembangkan  sebagai  anti- Staphylococcus epidermidis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis menyampaikan terima kasih atas bantuan sumber dana dari Direktorat Riset, Teknologi, dan Pengabdian Kepada Masyarakat, Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi sesuai dengan skema Penelitian Dasar Kompetitif Nasional nomor 345-05/UN7.6.1/PP/2022.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah, B.A. & Saadullah, A.M. (2018). Effect Types of Culture Media on Isolation of Fungi from Indoor Swimming Pools. International Conference on Pure and Applied Sciences , 1(1), 23-27. Apurillo,  C.C.S.,  Cai,  L.  &  dela  Cruz,  T.E.E.  (2019).  Diversity  and  Bioactivities  of  Mangrove  Fungal Endophytes from Leyte and Samar, Philippines. Philippine Science Letters , 12, 33-48.
Belmehdi, O., Bouyahya, A., Jeko, J., Cziaky, Z., Zengin, G., Sotko, G., El baaboua, A., Senhaji, N.S. & Abrini, J. (2021). Chemical Analysis, Antibacterial, and Antioxidant Activities of Flavonoid-Rich Extracts from Four Moroccan Propolis. Journal of Food Processing and Preservation , 45(10), 1-19. doi: 10.1111/jfpp.15816.
Cau, L., Williams, M.R., Butcher, A.M., Nakatsuji, T., Kavanaugh, J.S., Cheng, J.Y., Shafiq, F., Higbee, K., Hata, T.R., Horswill, A.R. & Gallo, R.L. (2021). Staphylococcus epidermidis Protease EcpA Can Be a Deleterious Component of the Skin Microbiome in Atopic Dermatitis. Journal of Allergy and Clinical Immunology , 147(3), 955-966.
Chabi,  R.  &  Momtaz,  H.  (2019).  Virulence  Factors  and  Antibiotic  Resistance  Properties  of  the Staphylococcus  epidermidis Strains  Isolated  from  Hospital  Infections  in  Ahvaz,  Iran. Tropical Medicine and Health , 47(1), 1-9. doi: 10.1186/s41182-019-0180-7.
Ellena, V., Bucchieri, D., Arcalis, E., Sauer, M. & Steiger, M.G. (2021). Sclerotia Formed by Citric Acis Producing Strains of Aspergillus niger : Induction and Morphological Analysis. Fungal Biology , 125, 485-494. doi: 10.1016/j.funbio.2021.01.008.
Hamzah, N.A., Fatiah, R. & Jamsari, J. (2021). Fractionation of Secondary Metabolites from Serratia plymutchia UBCF_13  Based  on  Polarity  Properties. IOP  Conference  Series:  Earth  and Environmental Science , 741, 1-5. doi: 10.1088/1755-1315/741/1/012005.
Handayani, D., Wahyuningsih,  T., Rustini, Artasasta, M.A., Putra, A.E. & Proksch, P. (2020). Bioactive Compound from The Mangrove Plant Endophytic Fungus Diaporthe amygdali SgKB4. Rasayan Journal Chemistry , 13(1), 327-332. doi: 10.31788/RJC.2020.1315589.
Hay, R.J. (2020). Skin Disease in the Tropics and the Lessons that can be Learned from Leprosy and Other Neglected Diseases. Acta dermato-venereologica , 100(9), 235-241.
Listyorini,  K.I.,  Kusumaningrum,  H.D.  &  Lioe,  H.N.  (2021).  Antifungal  Activity  and  Major  Bioactive Compounds  of  Water  Extract  of Pangium  edule Seed  against Aspergillus  flavus.  International Journal of Food Science ., 2021. doi: 10.1155/2021/3028067.
Liu, Y., Jain, A., Eng, C., Way, D.H., Lee, K., Bui, P., Kanada, K., Marinho, G.D.O., Gallegos, J., Gabriela,
S., Gupta, V., Singh, N., Natarajan, V., Wellenhof, R.H., Corrado, G.S., Peng, L.H., Webster, D.R., Ai, D., Huang, S.J., Liu, Y., Dunn, R.C. & Coz, D. (2020). A Deep Learning System for Differential Diagnosis of Skin Diseases. Nature Medicine , 26(6), 900-908. doi:  10.1038/s41591-020-0842-3. Mamangkey,  J.,  Suryanto,  D.,  Munir,  E.,  Mustopa,  A.Z.,  Sibero,  M.T.,  Mendes,  L.W.,  Hartanto,  A.,
Taniwan, S., Ek-Ramos, M.J., Harahap, A., Verma, A., Trihatmoko, E., Putranto, W.S., Pardosi, L. & Rudia, L.O.A.P. (2021). Isolation and Enzyme Bioprospection of Bacteria Associated to Bruguirea cylindrica, A Mangrove Plant of North Sumatra, Indonesia. Biotechnology Reports , 30 : 1-12. Noor, Y.R., Khazali, M. & Suryadiputra, I.N.N. (2006). Panduan Pengenalan Mangrove di Indonesia , PHKA/WI-IP, Bogor.
Permadi, M.A., Mukhlis, Samosir, B.S., Siregar, D.Y. & Wayni, M. (2020). Physiology Characterization of Entomopathogenic  Fungi Beauveria  bassiana and Metharhizium  anisopliae on  Different Carbohydrate Sources. Journal of Physics: Conference Series , 1477(7) : 1-6.
Putra,  I.P.Y.A.,  Utami,  K.S.,  Hardini,  J.,  Wirasuta,  I.M.A.G.,  Ujam,  N.T.  &  Ariantari,  N.P.  (2023).
Fermentation,  Bioactivity  and  Molecular  Identification  of  Endophytic  Fungi  Isolated  from Mangrove Ceriops tagal. Biodiversitas, 24(5), 3091-3098. doi: 10.13057/biodiv/d240565.
Sartika, R.D., Rahma, A., Amelano, S. & Handayani. D. (2021). Antibacterial Activity of Ethyl Acetate Extracts from Mangrove Plants Rhizophora apiculata and Sonneratia alba – Associated Fungi.
Advances in Health Sciences Research , 40. 336-342.
Sedjati, S., Ambariyanto, A., Trianto, A., Supriyantini, E., Ridlo, A., Bahry, M.S., Wismayanti, G., Radjasa, O.K. & McCauley, E. (2020). Antibacterial Activities of the Extracts of Sponge-Associated Fungus Trichoderma  longibrachiatum Against  Pathogenic  Bacteria. Squalen  Bulletin  of  Marine  and Fisheries Postharvest and Biotechnology , 15(2), 81-90.
Shara,  M.,  Basyuni,  M.  &  Hasanuddin.  (2023).  Potential  of  Phylloplane  Fungi  from  Mangrove  Plant ( Rhizophora apiculata Blume) as Biological Control Agents against Fusarium oxyspoorum f. sp. cubense in Banana Plant ( Musa acuminata L.). Forests , 14(2), 1-16.
Sibero, M.T., Sabdaningsih, A., Cristianawati, O., Nuryadi, H., Radjasa, O.K., Sabdono, A. & Trianto, A. (2017).  Isolation,  Identification  And  Screening  Antibacterial  Activity  from  Marine  Sponge- Associated  Fungi  Against  Multidrug-Resistant  (MDR) Escherichia  coli.  IOP  Conference  Series: Earth and Environmenta Science , 55(1), 1-13. doi: 10.1088/1755-1315/55/1/012028. Sibero, M.T., Siswanto, A.P., Pribadi, R., Sabdono, A., Radjasa, O.K., Trianto, A., Frederick, E.H., Wijaya, A.P.,  Haryanti,  D.,  Triningsih,  D.W.,  Hayuningrat,  S.J.  &  Igarashi.  Y.  (2020).  The  Effect  of  Drying Treatment  to  Metabolite  Profile  and  Cytotoxic  Potential  of Rhizophora  apiculata Leaves.
Biodiversitas , 21(5), 2180-2187.
Sibero, M.T., Pribadi,  R., Larasati,  S.J.H., Calabon,  M.S.,  Sabdono,  A.,  Subagiyo,  S. &  Frederick, E.H. (2021).  Diversity  of  Sponge-Associated  Fungi  from  A  Mangrove  Forest  in  Kemujan  Island, Karimunjawa National Park, Indonesia. Biodiversitas , 22(12), 5695 – 5705.
Sibero,  M.T.,  Sahara,  R.,  Syafiqoh,  N.  &  Tarman,  K.  (2017).  Antibacterial  Activity  of  Red  Pigment Isolated from Coastal Endophytic Fungi Against Multi-Drug Resistant Bacteria. Biotropia , 24(2), 161-172. doi: 10.11598/btb.2017.24.2.725.
Sibero, M.T., Zhou, T., Igarashi, Y., Radjasa, O.K., Sabdono, A., Trianto, A., Bachtiarini, T.U. & Bahry, M.S. (2020). Chromanone-Type Compounds from Marine Sponge-Derived Daldinia eschscholtzii KJMT FP 4.1. Journal of Applied Pharmaceutical Science , 10(1), 1-7.
Smith,  H.,  Doyle,  S.  &  Murphy,  R.  (2023).  Target  Directed  Identification  of  Natural  Bioactive Compounds from Filamentous Fungi. Food Chemistry , 405, 1-8.
Sormin,  R.B.D.,  Nendissa,  D.M.,  Mailoa,  M.N.,  Rieuwpassa,  F.,  &  Wenno,  M.R.  (2021).  Antibacterial Activity  of Rhizophora  apiculata Extract  Originated  from  Inner  Ambon  Bay  Against  Selected Pathogen Bacteria. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 797(1), 1-8. Syawal, H., Hakim, L. & Effendi, I. (2020). Phytochemical Analysis of Rhizophora apiculata Leaf Extract and  Its  Inhibitory  Action  Against Staphylococcus  aureus,  Aeromonas  hydrophila, and
Pseudomonas aeruginosa. Aquaculture, Aquarium, Conservation and Legislation , 13(4), 2242- 2249.
Taufiq,  M.M.J.  &  Darah,  I.  (2019).  Antibacterial  Activity  of  an  Endophytic  Fungus Lasiodiplodia pseudotheobromae IBRL OS-64 Residing in Leaves of a Medicinal Herb, Ocimum sanctum Linn. Journal of Applied Biology & Biotechnology , 7(2), 35-41.
Xu,  T.C.,  Lu,  Y.H.,  Wang,  J.F.,  Song,  Z.Q..  Hou,  Y.G.,  Liu,  S.S.,  Liu,  C.S.,  &  Wu,  S.H.  (2021).  Bioactive Secondary Metabolites of the Genus Diaporthe and Anamorph Phomopsis from Terrestrial and Marine Habitats and Endophytes: 2010-2019. Microorganisms , 9(217), 1-49. Yang, Q., Fan, X.L., Du, Z. & Tian, C.M. (2017). Diaporthe Species Occurring on Senna bicapsularis in Southern China, with Descriptions of Two New Species. Phytotaxa , 302(2), 145-155.
Yarimizu, K., Sildever, S., Hamamoto, Y., Tazawa, S., Oikawa, H., Yamaguchi, H., Basti, L., Mardones, J.I.,  Mella,  J.P.  &  Nagai,  S.  (2021).  Development  of  An  Absolute  Quantification  Method  for Ribosomal RNA Gene Copy Numbers per Eukaryotic Single Cell by Digital PCR. Harmful Algae , 103,1-13. doi: 10.1016/j.hal.2021.102008.