## Pertumbuhan Anggrek Hitam pada Simulasi Cekaman Kekeringan Menggunakan
Polietilen Glikol secara In Vitro

## Black Orchid Growth in Simulated Drought Stress Using Polyethylene Glycol in Vitro

## Mahmud Mustaqim, Asnawati dan Agustina Listiawati
Program Studi Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Tanjungpura, Jl. Prof. Dr. Hadari Nawawi, Pontianak, Indonesia email : asnawati@faperta.untan.ac.id

## Abstract
The black orchid plant has a beauty at the flowers with the characteristic black labellum. In its  natural  habitat,  black  orchid  plants  require  high  humidity  for  optimal  growth.  The purpose of this study was to examine the growth response of black orchids to drought stress using  polyethylene  glycol  in  vitro.  This  research  was  conducted  at  the  Biotechnology Laboratory,  Faculty  of  Agriculture,  Tanjungpura  University  from  October  2022  to  January 2023. The design used in this study was Completely Randomized Design  which consisted of one factor, namely polyethylene glycol concentration. The polyethylene glycol concentrations tested were 0%, 5%, 10%, 15%, 20% and 25% (mg/l). The variables observed were the time of  shoot  emergence,  root  emergence  time,  number  of  shoots,  increase  in  the  number  of leaves, number of roots, and leaf color morphology. The results showed that the addition of polyethylene  glycol  at  the  level  of  0-25%  in  in  vitro  culture  media  as  a  drought  stress simulation had no significant effect on the variables of shoot emergence time, root emergence time, number  of  shoots, increase in  number of  leaves, and number of  roots. Meanwhile, for the morphological variable of leaf color, the treatment with a concentration of 25% showed early symptoms of drought.

## Keywords : Black orchid, Drought stress, In vitro, Polyethylene glycol

## Abstrak
Tanaman anggrek hitam memiliki keindahan pada bunganya dengan ciri khas labellum yang berwarna hitam. Pada habitat aslinya tanaman anggrek hitam memerlukan kelembaban yang tinggi  untuk  pertumbuhan  yang  optimal.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  respons pertumbuhan  anggrek  hitam  pada  cekaman  kekeringan  dengan  menggunakan  polietilena glikol  secara  in  vitro.    Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium  Bioteknologi,  Fakultas Pertanian, Universitas Tanjungpura pada bulan Oktober 2023 sampai Januari 2023. Penelitian dilakukan menggunakan  Rancangan Acak Lengkap satu faktor, yaitu konsentrasi polietilena glikol.  Konsentrasi  polietilena  glikol  yang  diujikan  adalah  0%,  5%,  10%,  15%,  20%,  dan 25%  (mg/l).    Variabel  yang  diamati  yaitu  waktu  muncul  tunas,  waktu  muncul  akar,  jumlah tunas,  pertambahan  jumlah  daun,  dan  jumlah  akar  serta  morfologi  warna  daun.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  penambahan  polietilena  glikol  pada  taraf  0-25%  (mg/ml) pada  media  kultur  in  vitro  untuk  simulasi  cekaman  kekeringan  tidak  berpengaruh  nyata terhadap  variabel  waktu  muncul  tunas,  waktu  muncul  akar,  jumlah  tunas,  pertambahan jumlah  daun,  dan  jumlah  akar.  Pengamatan  visual  pada    morfologi  warna  daun,  perlakuan
konsentrasi  25%  menunjukkan  gejala  awal  kekeringan  yaitu  menurunya  kadar  kehijauan daun dan mulai menggulungnya pinggiran daun.
Kata kunci : Anggrek hitam, Cekaman kekeringan, In vitro, Polietilena glikol
PENDAHULUAN Hutan tropis di Indonesia merupakan  salah  satu  yang  terbesar  dan memiliki  kekayaan  alam  yang  luar  biasa, salah  satunya  adalah  tanaman  anggrek. Tanaman  anggrek  memiliki  lebih  dari 43.000  spesies  dimana  diperkirakan  5000 jenis  diantaranya  berasal  dari  Indonesia. Tanaman  anggrek  adalah  jenis  tanaman hias  yang  memiliki  nilai  keindahan  yang tinggi dikarenakan bunganya yang menarik.  Tanaman  anggrek  di  Indonesia memiliki  spesies  yang  sangat  beragam, salah  satunya  anggrek  hitam.  Anggrek hitam ( Coelogyne pandurata Lind.) merupakan  salah  satu  jenis  anggrek  asli Kalimantan.
Anggrek  hitam  memiliki  ciri  khas bagian  labelum  bunga  yang  berwarna hitam.  Anggrek  ini  mekar  pada  periode Mei-Juni. Anggrek hitam memiliki penyebaran  mulai  dari  Kalimantan  dan Sumatra. Anggrek hitam tumbuh menumpang pada pohon-pohon dan pangkal  pohon  dengan  naungan  kondisi cahaya  sedang  (Maimunah  dan  Syahbudin 2020).
Salah  satu  kendala  yang  sering dialami  pada  tanaman  anggrek  adalah cekaman  kekeringan.  Siregar et  al. (2005) menyatakan bahwa kondisi suhu lingkungan yang cocok untuk pertumbuhan anggrek hitam yaitu sekitar 26 – 31 ⁰ C dan intensitas  cahaya  sekitar  50  %  serta kelembaban nisbi antara 60 – 85%.
Kebutuhan  akan  kondisi  dengan kelembaban  yang  tinggi  tersebut  membuat
anggrek hitam tidak tahan terhadap kondisi kering.  Musim  yang  berubah  –  ubah  di alam, menyebabkan tanaman harus beradaptasi  dengan  kondisi  lingkungan yang  ada  sampai  batas  toleransi  tanaman.
Gejala  kekeringan  akan  dapat  terlihat  jika 60% air di  perakaran telah  terpakai  (Fukai
& Cooper M,1995)
Alternatif  yang  dapat  dilakukan untuk mengatasi cekaman kekeringan pada tanaman  adalah  menggunakan    varietas tahan kekeringan. Varietas tahan kekeringan bisa didapatkan dengan menseleksi  individu  yang  bersifat  toleran dari  suatu  populasi.  Seleksi  awal  toleransi kekeringan dapat dilakukan dengan mensimulasikan keadaan cekaman
kekeringan pada tanaman dengan menggunakan PEG. Setiap tanaman memiliki  tingkat  toleransi  yang  berbeda- beda  dalam  kondisi  cekaman  kekeringan. Penggunaan PEG sebagai agen pensimulasi cekaman kekeringan memiliki keunggulan,  dimana  berapa  penentuan kadar  cekaman  yang  diberikan  dapat terukur  dengan  baik.  Selain  itu  cekaman kekeringan menggunakan PEG juga memiliki banyak keunggulan dibandingkan senyawa  lain,  salah  satunya  tidak  beracun bagi tanaman (Paletri et al., 2019).
Tanaman anggrek hitam memerlukan kondisi  kelembaban  yang  cukup  tinggi untuk pertumbuhan yang optimal (Maimunah  &  Syahbudin  2020).  Hal  ini membuat  tanaman  anggrek  hitam  rentan untuk  kondisi  kekeringan.  Penggunaan PEG  untuk  mensimulasikan  cekaman
kekeringan  tergantung  dari  konsentrasi larutan yang diberikan. Konsentrasi larutan PEG  yang  dipakai  berpengaruh  terhadap tingginya cekaman yang diberikan
terhadap tanaman. Semakin tinggi konsentrasi  maka  semakin  kuat  cekaman yang  diberikan.  Konsentrasi  PEG  tertentu dapat memberikan pengaruh negatif terhadap  persentase  tanaman  yang  dapat bertahan  hidup  (Nurcahyani  &  Sabatini, 2022).
Penelitian  ini  merupakan  penelitian awal  mengenai  cekaman  kekeringan  pada tanaman  anggrek  hitam.  Sebelumnya belum pernah dilakukan penelitian mengenai cekaman kekeringan pada anggrek hitam, sehingga penelitian merupakan  penelitian  terbaru  mengenai cekaman kekeringan pada tanaman anggrek  hitam.  Penelitian  Nurcahyani et al .  (2020)  pada  tunas  anggrek  bulan ( Phalaenopsis  amabilis L.)  menunjukkan semakin  tinggi  penambahan  konsentrasi PEG  semakin  rendah  kadar  klorofil  pada tanaman. Selanjutnya, hasil penelitian Putri et  al .  (2022)  pada  tanaman  anggrek denrobium  menggunakan  media  dasar Vacin  dan  Went  menyatakan  bahwa semakin tinggi konsentrasi PEG 6000 yang diberikan mengakibatkan klorofil a, b, dan total pada tanaman semakin menurun.
Tujuan penelitian ini adalah mengetahui  respons  pertumbuhan  anggrek hitam  yang    diberi  simulasi  cekaman kekeringan  menggunakan  PEG  secara  in vitro.

## METODOLOGI

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang dipakai dalam pelaksanaan  penelitian  ini  adalah  botol kultur,  timbangan  analitik,  gelas  ukur,
beker  glass,  pipet  tetes,  pipet  mikro,  hot plate, magnetic strirer, pH meter, autoclave,  Laminar  Air  Flow  Cabinet (LAFC),  hand  sprayer,  pinset,  petridish, dan bunsen.
Bahan yang dipakai dalam pelaksanaan  penelitian  ini  adalah  tunas in vitro  Coelogyne  pandurata Lind,    stok media  Murashige  dan  Skoog  (MS), aquades,  alkohol  96%  dan  70%,  spiritus, larutan  HCl,  larutan  KOH,  agar-agar,  dan larutan PEG 6000.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  dalam kurun  waktu  12  minggu  mulai  dari  12 Oktober  2022  sampai  dengan  4  Januari 2023 di Laboratorium Bioteknologi Fakultas
Pertanian, Universitas Tanjungpura.  Penelitian  ini  menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  satu faktor  yaitu  konsentrasi  PEG  (mg/l)  yang terdiri dari 6 taraf. 4 ulangan dengan setiap ulangan  terdiri  dari  4  tanaman.  Adapun taraf konsentrasi PEG (A) yang digunakan adalah a 1 = 0% konsentrasi  PEG;  a 2 = 5% konsentrasi  PEG;  a 3 =  10%  konsentrasi PEG; a 4 = 15% konsentrasi PEG; a 5 = 20% konsentrasi  PEG;  dan  a 6 =  25%.  Media kultur  in  vitro  yang  digunakan  adalah media dasar Murashige dan Skoog (MS).
Pembuatan  media  MS  dilakukan dengan memipet larutan stok A (NH 4 NO 3 ), B (KNO 3 ), C (CaCl 2 .2H 2 O), D (MgSO 4 .7H 2 O),  E  (FeSO 4 .7H2O  dan  Na EDTA.2H2O), F (MnSO4.H2O,
ZnSO 4 .H2O,  H 3 O 3 ,  KI,  Na 2 MoO 4 .2H 2 O, CoCl 2 .6H 2 O, dan CuSO 4 .5H 2 O), dan myo- inositol  sesuai  label  yang  tertera  pada larutan  stok  dan  dimasukkan  ke  dalam beaker  glass.  Selanjutnya  ditambahkan
stok  NAA  sebanyak  0,05  ppm  dan  stok BAP  sebanyak  0,25  ppm  menggunakan pipet  mikro.  Kemudian  ditambahkan  gula sebanyak 30 g/l dan PEG sesuai konsentrasi.  Untuk  konsentrasi  0%  tidak ditambahkan  PEG.  Untuk  konsentrasi  5% ditambahkan 50 mg PEG, konsentrasi 10% ditambahkan  100  mg  PEG,  konsentrasi 15%  ditambahkan  150  mg  PEG,  untuk konsentrasi  20%  ditambahkan  200  mg PEG, dan untuk konsentrasi 25% ditambahkan  250  mg  PEG.  Selanjutnya ditambahkan  aquades  hingga  mencapai  1 liter  dan  diaduk  hingga  merata  di  atas  hot plate  menggunakan  magnetic  stirrer  dan diukur pHnya pada 5.8.
Penanaman  eksplan  tunas  in  vitro anggrek  hitam  dilakukan  di  dalam LAFC dan masing-masing  tunas memiliki daun 6 helai.  Tunas  dipisah  satu  persatu  dari rumpunnya menggunakan pinset, kemudian  dimasukkan  ke  botol  media sesuai  masing-masing  perlakuan.    dan ditutup  dengan  plastik  dan  diikat  dengan karet gelang.
Pertumbuhan  anggrek  yang  diamati adalah waktu muncul tunas, waktu muncul akar,  jumlah  tunas,  pertambahan  jumlah daun,  dan  jumlah  akar  serta  morfologi warna daun.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil pengamatan  dianalisis  dengan  Analysis  of Variance  (ANOVA).  Jika  hasil  ANOVA berbeda  nyata  maka  akan  dilanjutkan dengan  uji  Duncan’s  Multiple  Range  Test (DMRT) dengan taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  analisis  keragaman  pada  data tanaman  yang  telah  diamati  menunjukkan
bahwa pemberian PEG dengan konsentrasi 0-25%  berpengaruh  tidak  nyata  pada variabel  waktu  muncul  tunas,  waktu muncul  akar,  jumlah  tunas,  pertambahan jumlah daun, dan jumlah akar yang diamati pada umur tunas 12 minggu setelah tanam (MST).
Menurut  Mexal  (1970)  penambahan konsentrasi PEG 5%, 10%, 15%, 20%, dan 25%  (g/l)  berturut-turut  setara  dengan tekanan  osmotik  0,3  bar;  1,9  bar;  4,1  bar; 6,7  bar;  dan  9,9  bar,  sedangkan  tekanan osmotik  pada  kapasitas  lapang  adalah  3 bar.  Tekanan  osmotik  yang  tinggi  dapat mengakibatkan  air  tidak  dapat  terserap oleh tanaman.
Menurut  Yustiningsih  &  Ledheng (2021)  PEG  dapat  menciptakan  kondisi serupa cekaman kekeringan dengan menurunkan  potensial  osmotik.  Secara umum,  cekaman  kekeringan  merupakan kondisi  dimana  tanaman  kekurangan  air akibat dari keterbatasan air dari lingkungan atau media tanam. Molekul air yang terikat akan  sulit  untuk  diserap  oleh  tanaman, sehingga  dapat  menghambat  pertumbuhan tanaman  karena  air  memiliki  fungsi  yang krusial  bagi  tanaman  dalam  melakukan metabolismenya.
Metabolisme  adalah  reaksi  kimia yang  melibatkan  enzim  yang  terjadi  di dalam  sel  tanaman.  Metabolisme  terbagi menjadi  proses  penyusunan  (anabolisme) dan  proses  penguraian  (katabolisme). Proses metabolisme bertujuan untuk memperoleh  dan  menyimpan  energi; menyusun  dan  mengurai  bahan  makanan; membentuk dan merombak sel; memasukkan  dan  mengeluarkan  zat-zat dimana semua itu  dilakukan untuk melakukan aktivitas kehidupan (Fauziah et
al .,  2023).  Proses  metabolisme  yang terhambat juga tentunya akan menurunkan pertumbuhan tanaman.
Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa tekanan osmotik pada cekaman kekeringan dengan  PEG  dengan  taraf  0-25%  (mg/l) berpengaruh tidak nyata pada pertumbuhan tunas  anggrek  hitam  secara  in  vitro  pada umur  12  MST.  Hal  ini  menunjukkan tanaman  anggrek  hitam  memiliki  toleransi terhadap cekaman kekeringan hingga (PEG 25%  mg/l).  Cekaman  PEG  dengan konsentrasi  sampai  dengan  25%  (mg/l) memang  relatif  sangat  kecil  sehingga justru  dapat  menstimulasi  pertumbuhan daun, akar, maupun tunas.
Menurut Budianto (1984)
pertumbuhan  tanaman  dipengaruhi  oleh faktor  dalam  dan  faktor  luar.  Faktor  dari dalam  adalah  sifat  genetik  yang  dimiliki tanaman  dan  hormon  yang  merangsang pertumbuhan.  Faktor    luar  adalah  faktor lingkungan  yang  memiliki  berbagai  unsur seperti tanah, air, suhu, cuaca, kelembaban, dan lain sebagainya.
Meskipun pada penelitian ini tanaman anggrek hitam diberikan cekaman kekeringan (faktor lingkungan yang merugikan),  tunas  anggrek  hitam  tidak menunjukkan  gejala  yang  serius  diduga karena cekaman kekeringan yang diberikan relatif  sangat  rendah  karena  persentase PEG  dibuat  dalam  satuan  mg/l,  sehingga belum  terjadi  hambatan  bearti  bagi tanaman  dalam  menyerap  air  pada  media tumbuh tanaman.
Cekaman  tertinggi  yang  diberikan pada penelitian ini adalah konsentrasi PEG 25%  (mg/l)  artinya  pada  level  tersebut pertumbuhan  tunas  anggrek  hitam  masih dapat  tumbuh  secara  normal.  Konsentrasi
ini  sebaiknya  ditingkatkan  agar  sesuai dengan  kondisi  alami  cekaman  yang  biasa terjadi di alam, sehingga dapat mengetahui secara lebih lanjut batas cekaman kekeringan yang dapat  diterima oleh tunas anggrek hitam.
Belum  adanya  respon  negatif  yang berarti  pada  tunas  anggrek  sampai  dengan 12  MST  juga  mungkin  dapat  disebabkan karena  tanaman  anggrek  masih  memiliki cadangan  air  yang  cukup  pada  batang maupun daunnya sehingga masih mencukupi  kebutuhnnya.  Hal  ini  sesuai dengan  penyataan  (Jessar et  al. ,  2021), bahwa  tanaman  anggrek  termasuk  dalam jenis tanaman sukulen, yaitu tanaman yang memiliki  kadar  air  yang  tinggi  di  dalam organnya.  Bagian  batang  atau  daging tanaman  sukulen  memiliki  kemampuan untuk  menyimpan  cadangan  air  yang cukup banyak
Selain itu, pengujian cekaman kekeringan  yang  dilakukan  secara  in  vitro dimana  tanaman  tumbuh  pada  media  yang hampir  100%  cairan,  sehingga  cekaman kekeringan yang dihasilkan dari konsentrasi  PEG  yang  rendah  hanya mampu  mengikat  molekul  air  dalam jumlah  yang  sedikit,  sehiingga  masih banyak  molekul  air  yang  dapat  diserap oleh tanaman,
Pada    kultur  in  vitro  suhu  ruangan yang  digunakan  merupakan  suhu  yang rendah yaitu pada kisaran 16 ℃ . Suhu yang rendah  dapat  mengurangi  transpirasi  pada tanaman  sehingga  cadangan  air  yang terdapat  di  dalam  sel  tanaman  dapat terjaga.  Menurut  Rini et  al. (2020) tanaman  memiliki  mekanisme  adaptasi terhadap cekaman kekeringan yang dinamakan dehydration  avoidance atau
mekanisme  menghindari  kekeringan  yaitu adaptasi tanaman untuk menjaga ketersediaan  air  yang  sudah  diperoleh salah  satunya  dengan  cara  mengurangi penguapan melalui permukaan daun.
Penelitian  ini  selain  menggunakan media  MS  sebagai  media  dasar  juga menggunakan  tambahan  zat  pengatur tumbuh  jenis  auksin  yaitu  NAA.  Menurut Pamungkas  &  Puspitasari  (2019),  hormon
auksin bisa meningkatkan tekanan osmotik sel,  sintesis  protein,  serta  meningkatkan permeabilitas sel. Hal ini dapat meningkatkan  kemampuan  tanaman  untuk bisa  menyerap  air  yang  terdapat  pada media  meskipun  dalam  kondisi  tercekam. Meningkatnya  sintesis  protein  juga  dapat memberikan  energi  bagi  tanaman  untuk melakukan  pertumbuhannya  dengan  baik nyata.
Gambar 1.  Nilai Rerata Waktu Muncul Tunas (MST) Anggrek Hitam pada Beberapa Konsentrasi PEG
Gambar 2. Nilai Rerata Waktu Muncul Akar (MST) Anggrek Hitam pada Beberapa Konsentrasi PEG
7,88 6,94 7,88 7,69 7,63 7,75 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 tanpa PEG 5 10 15 20 25 Min gg u Set ela h Ta na m Konsentrasi PEG (%) 6,13 6,50 6,88 6,44 6,63 7,00 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 tanpa PEG 5 10 15 20 25 Min gg u Set ela h Ta na m Konsentrasi PEG (%) 1,25 2,06 1,19 1,94 1,56 0,81 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 tanpa PEG 5 10 15 20 25 Tu na s Konsentrasi PEG (%)
Gambar 3. Nilai Rerata Jumlah Tunas Anggrek Hitam pada Beberapa Konsentrasi PEG
Gambar 4.   Nilai Rerata Pertambahan Jumlah Daun (helai) Anggrek Hitam pada Beberapa Konsentrasi PEG
Gambar 5. Nilai Rerata Jumlah Akar (helai) Anggrek Hitam   pada Beberapa Konsentrasi PEG
Gambar  1  menunjukkan  nilai  rerata waktu  muncul  tunas  berkisar  antara  6,94- 7,88  MST  Gambar  2  memperlihatkan angka  rata-rata  waktu  muncul  akar  berada pada 6,13-7 MST. Gambar 3 menampilkan angka  rata-rata  jumlah  tunas  anggrek berada  antara  0,81-2,06  tunas.  Gambar  4 memperlihatkan nilai rata-rata pertambahan  jumlah  daun  berkisar  antara
4,00-6,44 helai daun. Gambar 5 menunjukkan  bahwa  nilai  rerata  jumlah akar  terletak  pada  angka  1,69-2,38  helai akar.
Gambar diagram batang untuk setiap variabel  pengamatan  menunjukkan  grafik pertumbuhan anggrek hitam pada beberapa level  konsentrasi  PEG  yang  diberikan cenderung  landai  dan  hampir  setara  untuk
setiap  perlakuan  pada  setiap  variabel pengamatan.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa tanaman  anggrek  hitam  cenderung  tidak peka  terhadap  cekaman  kekeringan  yang diberikan dan dapat hidup setelah 12 MST.
Perlakuan  cekaman  kekeringan  yang diberikan berpengaruh tidak nyata sehingga  pertumbuhan  tunas  yang  tidak terhambat.  Cekaman  kekeringan  pada dasarnya  akan  menghambat  pertumbuhan tanaman  jika  tekanan  osmotik  yang diberikan lebih besar dibandingkan dengan tekanan  osmotik  di  dalam  sel.  Menurut Handa et  al. (1938)  dalam  Suryowinoto (1990) penyesuaian tekanan osmotik dalam sel  tanaman berhubungan dengan toleransi cekaman  kekeringan.  Tekanan  osmotik akan  mempengaruhi  pergerakan  massa  air
4,44 6,44 4,50 5,31 5,25 4,00 0,0 3,0 6,0 9,0 12,0 15,0 18,0 tanpa PEG 5 10 15 20 25 H ela i Konsentrasi PEG (%) 1,94 1,94 2,13 2,38 2,19 1,69 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 tanpa PEG 5 10 15 20 25 H ela i Konsentrasi PEG (%)
dimana  air  akan  berpindah  dari  tempat bertekanan  osmotik  rendah  ke  tempat bertekanan osmotik tinggi. Tekanan osmotik adalah tekanan yang terjadi akibat adanya  zat-zat  terlarut  dalam  suatu  cairan. Tekanan  osmotik  adalah  tekanan  yang mengakibatkan  terjadinya  proses  osmosis karena adanya perbedaan tekanan di dalam dan  di  luar  sel  tumbuhan.  Semakin  jauh perbedaan tekanan osmotik antara di dalam sel dan di luar sel maka akan meningkatkan terjadinya proses osmosis. Hasil penelitian
menunjukkan cekaman  kekeringan  belum  menghambat
pertumbuhan  tunas  anggrek  hitam,  artinya tanaman  tetap  dapat  menyerap  air  dari media  tanam  atau  tanaman  mendapatkan cadangan air dalam sel. Hal ini menunjukkan bahwa tekanan osmotik yang ada  dalam  sel  tunas  anggrek  hitam  lebih tinggi  daripada  tekanan  osmotik  pada media  sehingga  tanaman  tetap  dapat menyerap  air  tanpa  hambatan  yang  berati bagi  tanaman.  Pengamatan  pada  variabel morfologi  warna  daun  tanaman  dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1 .  Pengamatan  Warna  Daun  menggunakan The  Royal  Horticultural  Society Colour Chart Perlakuan Gambar Perlakuan Gambar Tanpa PEG Green group 154 (B) 15% PEG Yellow-green group 144 (A) 5% PEG Green group 143 (A) 20% PEG Greeen group 143 (A) 10% PEG Green group 143 (A) 25% PEG Yellow-green group 137 (C)
Tabel  1  menunjukkan  perbandingan warna  daun  anggrek  hitam  pada  colour chart  .  Perlakuan  konsentrasi  PEG  5%, 10%,  dan  20%  terletak  pada  grup  warna yang  sama  yaitu  green  group  nomor  143 (A).  Anggrek  hitam  tanpa  perlakuan  dan konsentrasi  15%  PEG  pada  grup  warna yang berbeda namun warna daunnya masih tetap  hijau.  Perbedaan  yang  paling mencolok  terlihat  pada  perlakuan  25% PEG  yang  terletak  pada  yellow-green group  nomor  137  (C)  menunjukkan  warna daun  yang  kuning  dan  lebih  pucat dibandingkan daun tanaman pada perlakuan lainnya.
Pengamatan warna daun mulai menunjukkan  adanya  gejala  cekaman kekeringan  pada  perlakuan  PEG  dengan konsentrasi 25%. Berdasarkan pengamatan menggunakan  colour  chart  untuk  warna daun  pada  Tabel  3  perlakuan  25%  PEG, warna  daun  menunjukkan  terindeks  pada yellow-green  group  nomor  137  gradasi  c menunjukkan  kondisi  warna  daun  yang jauh  lebih  kuning  dibandingkan  dengan perlakuan  lainnya.  Daun  tanaman  pada perlakuan lainnya tampak lebih hijau yang rata-rata  terindeks  pada  green  group, kecuali  pada  perlakuan  15%  yang  juga termasuk  pada  yellow-green  group  namun memiliki warna yang lebih hijau.
Cekaman kekeringan dapat menyebabkan  tanaman  menjadi  kuning karena pada saat kekurangan air kandungan  klorofil  pada  daun  juga  ikut berkurang. Klorofil merupakan zat menyebabkan  warna  hijau  pada  tanaman sehingga menurunnya kadar klorofil membuat tanaman menjadi kuning. Hal ini sesuai dengan yang disampaikan
Nurcahyani et  al .  (2020)  bahwa  semakin
tinggi pemberian PEG maka akan menurunkan kandungan klorofil tanaman.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian mengenai  respons  pertumbuhan  anggrek hitam  pada  simulasi  cekaman  kekeringan menggunakan  PEG  secara  in  vitro  dapat disimpulkan bahwa pemberian PEG konsentrasi  0-25%  (mg/l)  selama  12  MST belum  mengganggu  pertumbuhan  anggrek hitam.

## DAFTAR PUSTAKA
Budianto,  S.  1984.  Pengaruh  Tekanan Kekeringan  terhadap  Pertumbuhan dan  Produksi  Beberapa  Varietas Kedelai  pada  Grumusol  Lombok Tengah. Buletin  Agronomi .  14(3)  : 17-30.
Fauziah, P. N., Yuniastuti, A., Achmad, A. F., Mulyati, B., Laheng, S., Wiradnyani,  N.  K.,  &  Nugrahani,  R. A. G. (2023). BIOKIMIA . Makassar : TOHAR MEDIA.
Fukai S, Cooper M. 1995. Development of Drought  Resistant  Cultivars  using Physio-Morphological  Traits  in Rice. Field Crops Res . 40:67–86.
Jessar,  H.  F.,  Wibowo,  A.  T.,  &
Rachmawati,  E.  2021.  Klasifikasi Genus Tanaman Sukulen Menggunakan  Convolutional  Neural Network. eProceedings of Engineering , Bandung 8(2). Maimunah,  S.  dan  Syahbudin,  A.  2020. Anggrek Hutan Kerangas Kalimantan  Tengah .  Palangka  Raya: FPK Universias Muhamadiah
Palangka Raya.
Mexal,  J.,  Fisher,  J.  T.,  Osteryoung,  J.,  & Reid, C. P. 1975. Oxygen availability in  polyethylene  glycol  solutions  and its implications in plant-water relations. Plant  Physiology ,  55(1),
20-24.
Nurcahyani, E., Amini, N. A., Zulkifli, Z.,
&  Mahfut,  M.  2020.  Analisis
Kandungan Klorofil terhadap Pertumbuhan Eksplan Tunas Anggrek Bulan [ Phalaenopsis amabilis (L.)  Bl.]  Hasil  Seleksi dengan  Poly  Ethylene  Glycol  (PEG) 6000  Secara  In  Vitro. Biosaintifika: Journal  of  Biology  &  Biology Education , 20(x), xx-xx.
Nurcahyani,  E.,  &  Sabatini,  A.  P.  2022. Respon  Tunas  Anggrek Cattleya sp.
Hasil  Seleksi  in  Vitro  terhadap
Cekaman Kekeringan dengan Polietilenglikol (PEG) 6000.
Indonesian Journal of Biotechnology and Biodiversity, 6(2), 61-67.
Paletri, T. S., Nurcahyani, E., Yulianty, Y.,
& Agustrina, R. 2019. Stomata index of Cattleya sp.  Lindl.,  tunas  in drought-stress conditions. Jurnal Ilmiah  Biologi  Eksperimen  dan Keanekaragaman  Hayati (J-BEKH),
6(1), 15-19.
Pamungkas,  S.  S.  T.,  &  Puspitasari,  R. 2019.  Pemanfaatan  Bawang  Merah ( Allium cepa L.) sebagai Zat
Pengatur  Tumbuh  Alami  terhadap Pertumbuhan  Bud  Chip  Tebu  pada Berbagai  Tingkat  Waktu  Rendaman.
Biofarm:  Jurnal  Ilmiah  Pertanian , 14(2).
Putri,
F. Y., Nurcahyani, E.,
Wahyuningsih,  S.,  &  Yulianty,  Y. 2022.  Pengaruh  Polyethylene  Glycol
(PEG) 6000 terhadap Karakter
Ekspresi  Spesifik  Tunas  Anggrek Dendrobium sp.  secara  in  Vitro. Analit: Analytical and Environmental Chemistry , 7(02),
122-131. Rini,  D.  S.,  Budiarjo,  B.,  Gunawan,  I., Agung,  R.  H.,  &  Munazar,  R.  2020. Mekanisme Respon Tanaman terhadap Cekaman Kekeringan. Berita  Biologi:  Jurnal  Ilmu-ilmu Hayati , 19(3B), 373-384. Siregar, C., Listiawati, A., dan
Purwaningsih. 2005. Anggrek Spesies Kalimantan Barat. Pontianak: Lembaga Penelitian dan Pengembangan Pariwisata Kalimantan Barat. Suryowinoto, M. 1990. Pemuliaan Tanaman Secara in Vitro . Yogyakarta: Kanisius.
Yustiningsih, M., Poto, A., & Ledheng, L. 2021.  Seleksi  Cekaman  Kekeringan secara  in  Vitro  Tunas  Jagung  Putih ( Zea  mays L.)  Menggunakan  PEG.
BIO-EDU:
Jurnal Pendidikan Biologi, 6(2), 142-147..