## UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK ETANOL DAUN   KEMBANG

## SEPATU ( Hibiscus rosa-sinensis L) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Escherichia coli
Christy Priskila Kairupan 1) , Fatimawali 1) dan Widya A. Lolo 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
The prevalence of diarhea in Indonesia is considered high and one cause is Escherichia coli . The  aim  of  this  research  was  to  determine  anti-bacterial  inhibition,  effective  concentration, and the effect of increasing concentration of ethanol extract of Hibiscus rosa-sinensis to the growth of E. coli . Extract of H. rosa-sinensis was obtained by masseration using 95% ethanol as  solvent.  Bacterial  growth  inhibition  employed  Kirby-Bauer  Method  using  agar  diffusion through  wells.  Measurement  of  bacterial  inhibition  was  analysed  using  one  way  anova  and continued with  Least Significantly Difference. Anova showed inhibition by 5%, 10%, 20%, 40%, 80% of extracts. Effective concentrations occured on 20% and 40%. The increasing of extract concentration showed correlation with the increasing of inhibition zone diameters.
Key words : Hibiscus rosa-sinensis leaf, ethanol extract, inhibition, E. coli

## ABSTRAK
Diare merupakan salah satu penyakit yang paling banyak diderita oleh masyarakat Indonesia dan    salah  satu  penyebab  penyakit  diare  adalah  bakteri Escherichia  coli .  Penelitian  ini bertujuan  untuk  menentukan  daya  hambat  antibakteri,  konsentrasi  efektif  dan  pengaruh peningkatan  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa-sinensis L.) terhadap pertumbuhan bakteri E . coli. Ektraksi dilakukan dengan cara meserasi menggunakan pelarut etanol 95%. Pengujian daya hambat pertumbuhan bakteri menggunakan metode difusi agar (difusi Kirby dan Bauer) dengan cara sumuran. Hasil uji daya hambat bakteri dianalisis dengan metode One way anova (analisis varians satu arah), dan dilanjutkan dengan uji BNT (Beda    Nyata  Terkecil).  Data  Anova  menunjukkan  bahwa  konsentrasi    ekstrak  5%,  10%, 20%, 40%, 80% menunjukkan aktivitas yang menghambat pertumbuhan bakteri. Konsentrasi efektif    terdapat  pada  konsentrasi  20%  dan  40%.  Peningkatan  konsentrasi  ekstrak  daun kembang sepatu menunjukkan semakin besar diameter zona hambat pertumbuhan bakteri.
Kata kunci : Daun kembang sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L ) , ekstrak etanol, daya hambat, E.coli

## PENDAHULUAN
Obat  tradisional  telah  dikenal  luas pemakaiannya  di  Indonesia,  baik  untuk pemeliharaan  kesehatan  maupun  untuk pengobatan  penyakit-penyakit  tertentu. Definisi Obat Tradisional menurut UU No 23  tahun  1992  adalah  bagian  atau  ramuan bahan  berupa  bahan  tumbuhan,  bahan hewan, bahan mineral, atau campuran dari bahan  tersebut  yang  dugunakan  secara turun-temurun oleh masyarakat. Salah satu tumbuhan  yang  digunakan  sebagai  obat tradisional  adalah    kembang  sepatu (Zulkifli, 2004).
Daun  kembang  sepatu  bermanfaat bagi masyarakat terutama dalam pengobatan  penyakit  yang  disebabkan bakteri  seperti  diare,    karena  terkandung senyawa antibakteri yaitu flavonoid, saponin,  dan  polifenol,  senyawa  tersebut dapat menghambat berkembangnya bakteri dalam tubuh (Suriana & Shobarani). Salah satu  bakteri  yang  dapat  menyebabkan penyakit  diare  adalah Escherichia  coli . Bakteri  tersebut  akan  merugikan  jika bertambah  atau  meningkatnya  jumlah bakteri tersebut sehingga dapat mengganggu metabolisme tubuh,  terutama dalam  saluran  pencernaan  (Adyanastri, 2012)
Diare  ialah  penurunan  konsentrasi dari  tinja  (menjadi  lunak  atau  cair)  dalam waktu  24  jam.  Gambaran  secara  klinis diare  adalah  dengan  frekuensi  tiga  kali atau  lebih  dan  menyebabkan  badan  lesu dan  lemas,  tidak  nafsu  makan,  dan seringkali  juga  didahului  dengan  muntah (Adyanastri, 2012). Hasil penelitian (Loehoeri,  1980)  didapatkan  pertumbuhan kuman pada 88% responden adalah E. coli .
Secara  klinis  penyebab  diare  dapat dikelompokkan  dalam  5  golongan  yaitu infeksi  (bakteri,  virus,  dan  parasit), Malabsorpsi, alergi, keracunan, dan imunisasi/defisiensi.  Salah  satu  bakteri yang  menjadi  pemicu  diare  adalah  bakteri Escherichia. coli (Sinthamurniwati, 2006).

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat yang dugunakan adalah Erlenmeyer,  gelas  ukur,  gelas  kimia, tabung  reaksi,  pipet  tetes,  penangas  air, blander ,  ayakan  mesh  65,  kaca  arloji, timbangan  analitik,  labu  ekstraksi,  batang pengaduk, stirer , waterbath cawan  petri, rotary  evaporator ,  jarum  (ose),  pinset, inkubator, laminar  air  flow ,  termometer, pencadang,  autoklaf,  mikropipet,  mistar berskala.  Bahan  penelitian  Ekstrak  etanol daun  kembang  sepatu  ( Hibiscus  rosa- sinensis  L ),  bakteri  uji Escherichia  coli ATCC  25923 , akuades  steril,  etanol  95%, tablet  Ciprofloxacin  500  mg, Nutrient Agar (NA),  H 2 SO 4 0,36  N,  BaCl 2 .2H 2 O 1,175%,  kertas  saring  no.  1,  kertas  label dan alumunium  foil,  Carboxy  Methyl
Cellulose (CMC).

## Persiapan sampel
Daun kembang sepatu yang telah dikumpulkan  ditimbang  lalu  dibersihkan dari pengotor, selanjutnya dicuci di bawah air mengalir sampai bersih, ditiriskan, lalu dikeringkan dengan cara diangin-anginkan di  tempat  terbuka,  kemudian  dilanjutkan dengan pengeringan di dalam oven dengan suhu  maksimal  40 O C  sampai  kering. Sampel yang  telah  kering  diserbukkan dengan  menggunakan blender sampai halus,  serbuk  yang  dihasilkan  diayak dengan  menggunakan  ayakan  mesh  65 hingga  diperoleh  serbuk  yang  halus. Hasilnya  dimasukkan  ke  dalam  gelas tertutup.

## Pembuatan Ekstrak
Daun  kembang  sepatu  di  ekstrak  dengan cara  maserasi.  Serbuk  simplisia  daun kembang  sepatu  sebanyak  100  gram dimasukkan ke dalam erlenmeyer, kemudian  direndam  dengan  etanol  95% sebanyak 750 ml, ditutup dengan menggunakan alumunium    foil dan dibiarkan  selama  5  hari  sambil  sesekali diaduk.  Setelah  5  hari,  sampel  yang direndam  tersebut  disaring  dengan  kertas saring menghasilkan filtrat 1 dan ampas 1. Ampas  yang  ada  kemudian  direndam
kembali  dengan etanol 95% sebanyak 250 ml,  ditutup  dengan alumunium  foil dan dibiarkan  selama  2  hari  sambil  sesekali diaduk.  Setelah  2  hari  sampel  tersebut disaring  dengan  menggunakan  kertas saring menghasilkan filtrat 2 dan ampas 2. Filtrat 1 dan 2 dicampur menjadi satu, lalu dievaporasi menggunakan rotary evaporator dengan  pemanasan  34-40 O C, sehingga  diperoleh  filtrat  kental  daun kembang  sepatu.  Filtrat  ditimbang  dan disimpan  dalam  wadah  gelas  tertutup sebelum digunakan untuk pengujian.

## Pembuatan Larutan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  dibuat  dari  CMC 1%  dengan  cara  :  1  gram  serbuk  CMC ditambah  dengan  air  aquades  sampai mencapai 100 ml.

## Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Kontrol  positif  dibuat  dari  sediaan tablet ciprofloxacin 500 mg, yang merupakan  obat  antibakteri.  Ciprofloxacin digerus,  lalu  ditimbang  dan  disetarakan. Kemudian  serbuk  ciprofoxacin  dilarutkan dalam  larutan  CMC  untuk  memperoleh larutan  50  µg/50  µl  dengan  cara  50  µg ciprofloxacin  dilarutkan  dalam  50  µl CMC.

## Pembuatan larutan Uji
Pembuatan larutan uji ekstrak daun kembang  sepatu  diambil  dari  beberapa konsentrasi 5%, 10%, 20%, 40% 80%

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri pada sumur-sumur  yang  terbentuk  pada  media pengujian dilakukan dengan cara :
1. Larutan  uji    ekstrak  etanol  daun kembang  sepatu  dengan  konsentrasi (5%,  10%,  20%,  40%,  dan  80%) diteteskan  pada  sumur  yang  berbeda dengan menggunakan mikropipet sebanyak 50 µl.
2. Larutan  CMC  1%  sebagai  kontrol negatif  diteteskan  pada  sumur  yang berbeda dengan menggunakan mikropipet sebanyak 50 µl.
3. Larutan  Ciproloxacin  50  µg/50  µl sebagai  kontrol  positif  diteteskan  pada sumur yang berbeda sdengan menggunakan  miropipet  sebanyak  50 µl.
Cawan  petri  yang  sudah  di  beri larutan sampel diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 O C selama 24 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini menggunakan metode maserasi  untuk  mengekstraksi  ampas  dari daun  kembang  sepatu.  Sampel  yang digunakan adalah hasil dari daun kembang sepatu  yang  sudah  dikeringkan  dan  di serbukkan  kemudian  direndam/dimaserasi selama  5  hari  dengan  etanol  95%,  lalu dimaserasi  selama  2  hari  setelah  itu  di evaporasi dan dikentalkan dengan waterbath . Setelah ekstrak kembang sepatu  sudah  kental,  dilakukan  pengujian daya hambat bakteri.
Hasil  uji  daya  hambat  bakteri ekstrak  etanol  daun  kembang  sepatu ( Hibiscus rosa sinensis-L) terhadap bakteri Escherichia coli diperoleh melalui pengamatan  yang dilakukan dengan 3 kali pengulangan.  Kepekaan  bakteri  terhadap antibiotik  atau  bahan  antibakteri  dapat diamati  dengan  terbentuknya  zona  hambat (daerah  bening  di  sekeliling  sumur).
Tabel 1. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Kembang Sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L) terhadap Bakteri Escherichia coli
Ulangan Diameter Zona Hambat (mm) 5% 10% 20% 40% 80% Kontrol (+) Kontrol (-) 1. 2. 3. 9,00 9,50 10,50 11,00 11,50 12,20 13,50 12,75 14.50 14,75 14,00 18,00 16,00 17,25 20,00 33,50 30,00 31,50 0,00 0,00 0,00 Rata-rata 9,67 11,57  13,58  15,58  17,75  31,67 0,00
Berdasarkan  Tabel  2,  konsentrasi ekstrak  5%  dan  10%    tidak  terdapat perbedaan pengaruh
perlakuan, dibandingkan  dengan  konsentarsi  ekstrak 5%  dan  20%.  Pada  konsentrasi  ekstrak 10%  dan    20%  tidak  terdapat  perbedaan pengaruh  perlakuan,  dibandingkan  dengan konsentrasi  ekstrak  10%  dan  40%.  Pada konsentrasi  ekstrak  20%  dan  40%  tidak terdapat  perbedaan    pengaruh  perlakuan
dibandingkan  dengan  konsentrasi  ekstrak 20%  dan  80%.  Dan  pada  konsentrasi ekstrak  40%  dan  80%  tidak  terdapat perbedaan  pengaruh  perlakuan.  Efek  daya hambat  bakteri  dari  konsentrasi  ekstrak 5%,  20%,  maupun  80%  menunjukkan perbedaan  perlakuan  terhadap  konsentrasi ekstrak  yang  lain,  dan  konsentrasi  ekstrak 20%,  40%  adalah  konsentrasi  efektif  dan 80 % adalah konsentrasi yang signifikan
Gambar  1.  Kurva  Hubungan  Konsetrasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Kembang  Sepatu  terhadap Diameter Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli
Aktivitas ekstrak etanol daun kembang sepatu ( Hibiscus rosa-sinensis L) dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Gram  negatif Escherichia  coli lebih  peka, dikarenakan  dinding  sel  bakteri  Gram
negatif  terdiri  atas  satu  atau  lebih  lapisan peptidoglikan  yang  tipis  dan  membran dibagian luar lapisan peptidoglikan. Semua dinding sel bakteri mengandung makromolekul yang disebut peptidoglikan.
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 5 10 20 40 80 Rata-rata diameter Rata-rata diameter Konsentrasi (%) Diameter zona hambat
Komponen ini diperlukan untuk mempertahankan keutuhan sel

## PENUTUP Kesimpulan
1. Ekstrak  etanol  daun  kembang  sepatu ( Hibiscus  rosa-sinensis L)  memiliki daya hambat bakteri terhadap pertumbuhan Escherichia coli .
2. Berdasarkan  data  statistik  konsentrasi ekstrak    20%,  40%    merupakan konsentrasi yang efektif untuk menghambat bakteri Echerichia coli Peningkatan konsentrasi ekstrak daun  kembang  sepatu    menunjukkan semakin besar daya hambat yang pertumbuhan bakteri E.coli.

## DAFTAR PUSTAKA
Adyanastri. F. 2012. Etologi dan
Gambaran  Klinis  Diare  Akut  di RSUP  dr.  Kariadi  Semarang. Karya Tulis Ilmiah. Universitas Diponegoro, Semarang.
Dewi,  F.  K.2010.  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Etanol  Buah  Mengkudu ( Morinda  citrifolia  L) Terhadap
Bkteri  Pembusuk  Daging  Segar.
[Skripsi]. FMIPA. Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Hermawan.  A,  2007.  Pengaruh  Ekstrak Dun  Sirih ( Piple  Betle L)  Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphilococcus aureus dan Escherichia  coli dengan Metode Difusi Disk. Fakultas
Kedokteran Hewan. Universitas
Airlangga. Surabaya. Hastari. R. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri
Ekstrak Pelepah dan Batang Tanaman Pisang Ambon( Musa paradisiaca var. Sapientum)
terhadap Pertumbuhan Bakteri Stapylococcus aureus. FKU UNDIP.
[Karya Tulus Ilmiah]. Semarang.
Jalaludin. 2012. Analisa bakteri Escherichia  coli di  Kolam  Renang Waterboom  ELEE  LHEUHE.  Kota Banda  Ace.  [Karya  Tulis  Ilmiah].
Akademi  Analisis  Kesehatan.  Banda Aceh.
Jawetz, et al. 1995. Mikrobiologi
Kedokteran.  Edisi  20.  University  of California, Snfrancisco. Jawetz, et al. 2005. Mikrobiologi
Kedokteran.  Salamba  Medika.  Edisi
1. Jakarta.
Jawetz, et al. 2007. Mikrobiologi
Kedokteran.  Salamba  Medika.  Edisi 23. Jakarta.
Kusuma,  S,  A,  F.  2010. Escherichia  coli. Makalah  Ilmiah. Fakultas  Farmasi UNPAD. Jatinangor.
Loehoeri S, Nariswanto H. 1980, Mikrobiologi Penyebab Gastroenteritis  Akut  Pada  Orang Dewasa  yang  di  Rawat  d  Bangsal
Penyakit  Dalam  RSUP  dr  Sardjito Yogyakarta: Acta Medica Indonesia. 30. Meliawati,  R.  2009. Escherichia  coli dalam  Kehidupan  Manusia.  Staf Peneliti bioteknologi- LIPI.
Parwata  I.M.O.A  dan  Dewi.  P.F.S.  2008.
Isolasi  dan  Uji  aktivitas  Antibakteri Minyak Atsiri dari Rimpang
Lengkuas  ( Alpinia  galangal L).
Jurnal Kimia . 2(2): 100-104
Pelsczar,  M.  J.  Dan  Chan,  E.  C.  S.  1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI Press. Jogjakarta.
Radji,  M.  2001.  Mikrobiologi,  Buku Kedokteran. ECG. Jakarta
Rahayuningsih, I. 2011. Evektivitas Penurunan Suhu Tubuh
Menggunakan  Kompres  Air  Hangat Daun  Kembang  Sepatu  Pada  Anak dengan  Demam  di  Ruang  Cempaka RSUD dr. R Geoteng Teroenadibrata Kabupaten Purbalingga Jawa Tengah [Skripsi]. Purbalingga Jawa Tengah.
Robinson,  T.  1995.  Kandungan  Organik Tumbuhan  Tinggi.  Edisi  6.  ITB Press. Bandung.
Sarida.  M, et  al. 2010. Pengaruh  Ekstrak Buah  Mengkudu  ( Morinda  citrifolia L ) dalam Menghambat  Pertumbuhan
Bakteri Vibrio  harveyi Secara In Vitro.
Fakultas Pertanian. Universitas Lampung. Lampung.
Samsumaharto, R.A dan Sari, Y. N. 2011. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  n- heksan,  Etil  asetat  dan  Etanol  70% Daun  Rosella  ( Hibiscus  Safrida  L ) Terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  25923. Jurnal  Penelitian . Fakultas  Farmasi  Universitas  Setia Budi, Surakarta.
Setiabudy,  R.  2007.  Antimikroba:  dalam Farmakologi  dan  Terapi.  Edisi  5 (Cetak  ulang  perbaikkan  2008).
Balai penerbit FKUI, Jakarta
Situmorang,  M.H.  Ekstrak  Tanin  Daun Akway  ( Drimys  piperita. Hook.  f) sebagai  Antibakteri.  [Skripsi].  UNP. Manokwari.
Suriana  N  dan  Sobarani I.  2011. Ensiklopedia Tanaman Obat.
Malang, Jawa Timur.
Suryanto  E.  2012.  Fitokimia  Antioksidan.
Surabaya.
Sinthamurniawati.  2006.  Faktor-Faktor Risiko  Kejadian  Diare  Akut  Pada Balita. [Tesis]. UNDIP. Semarang.
Smith –Keary P.F. 1988. Genetic Elaments In Escherichia  coli ,  Macmillan Molecular biology series, London.
Sukamto  dan  Supardi.  1999.  Mikrobiologi Pengolahan  dan  Keamanan  Pangan. Jakarta.
Sundaryono, A. 2011. Teratogenitas Senyawa  Flavonoid  Dalam  Ekstrak Metanol Daun Benalu ( Dendrophthoe  pentadra  (L)  Miq) pada Mus  musculus .  JPMIPA.  FKIP
UNDIP. Semarang.
Wahid,  D.  2011.  Bunga-bunga  Sekitar
Kaya Obat Untuk Kesehatan. Banguntapan. Jogjakarta.
World  Health  Organization.  1977.  WHO
Expert  Committe  on  Biological Standarization  (Technical  Report Series,  no.  610).  World  Health Organization, Geneva.
Zulkifli.  2004.  Pengobatan  Tradisional Sebagai Pengobatan Alternatif harus dilestarikan.  [Karya  Tulis  Ilmiah]. FKM USU. Medan.