ISSN: 0215-7950 Volume 18, Nomor 3, Mei 2022 Halaman 115–124 DOI: 10.14692/jfi.18.3. 115–124
Potensi Bakteri Filosfer pada Daun Kubis untuk Mengendalikan Penyakit Busuk Lunak oleh Pectobacterium carotovorum pada Sawi Putih
The Potentials of Cabbage Phyllospheric Bacteria as Biocontrol Agents of Soft Rot Disease Caused by Pectobacterium carotovorum on Chinese Cabbage
Af’idzatuttama, Abdjad Asih Nawangsih * , Kikin Hamzah Mutaqin Institut Pertanian Bogor, Bogor 16680

## ABSTRAK
Busuk lunak yang disebabkan oleh Pectobacterium carotovorum (Syn. Erwinia carotovora subsp. carotovora ) merupakan salah satu penyakit penting pada tanaman sawi putih. Bakteri ini menghasilkan enzim pektinase yang dapat menguraikan pektin pada dinding sel tanaman bagian lamela tengah. Salah satu alternatif pengendalian penyakit busuk lunak ialah menggunakan agens biokontrol dari filosfer. Penelitian  ini  bertujuan  menyeleksi  dan  menguji  bakteri  filosfer  dari  daun  kubis  yang  berpotensi menghambat penyakit busuk lunak P. carotovorum pada sawi  putih.  Bakteri  filosfer  diisolasi  dari wilayah  Cianjur,  Tegal,  dan  Bogor.  Bakteri  filosfer diuji keamanan hayati berdasarkan pada  reaksi hipersensitivitas dan kemampuan lisis pada agar-agar darah, serta diuji kemampuan penghambatannya terhadap P. carotovorum berdasarkan pada uji antagonis secara in vitro dan uji penghambatan penyakit secara in vivo .  Bakteri  filosfer dikarakterisasi berdasarkan  pada  morfologi koloni dan sifat Gram. Dua galur  bakteri  filosfer  paling berpotensi  mengendalikan  penyakit  busuk lunak pada  sawi putih diidentifikasi sebagai Chryseobacterium sp.
Kata kunci:  agens biokontrol, Brassica rapa subsp. pekinensis , Chryseobacterium sp., Erwinia carotovora subsp. carotovora , pengendalian hama terpadu

## ABSTRACT
Soft rot disease caused by Pectobacterium carotovorum (Syn. Erwinia carotovora subsp. carotovora ) is one of the important diseases on chinese cabbage. The bacteria produce pectinase enzyme which decompose pectin on the central lamella of plant cell wall. The infected chinese cabbage become rotted, watery, and slimy. One of the alternatives controls to overcome the disease is the application of biocontrol agent isolated from the phyllosphere of chinese cabbage. This study aimes to evaluate and to select the potential phyllospheric bacteria from cabbage as biocontrol agents of soft rot disease caused by P. carotovorum on Chinese cabbage. The phyllosphere bacteria were isolated from Cianjur, Tegal, and Bogor Districts. Phyllosphere bacteria were tested for their safety by the hypersensitive reaction and hemolysis type on blood agar. They were tested for their inhibition capability to the growth of P. carotovorum in vitro and to control the soft rot disease in vivo. Two isolates with potential control activity to the soft rot disease in chinese cabbage are TG11 and TG20. Based on the sequence of the 16S rRNA gene, isolates TG11 and TG 12 were identified as Chryseobacterium sp.
Keywords: biocontrol agents, Brassica rapa subsp. pekinensis , Chryseobacterium sp., Erwinia carotovora subsp. carotovora , integrated pest management
*Alamat penulis korespondensi: Departemen Proteksi Tanaman, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Jalan Kamper, Kampus IPB Dramaga, Bogor 16680. Tel: (+62251) 8629364, Surel: asnawangsih@yahoo.com.

## PENDAHULUAN
Sawi putih ( Brassica rapa subsp. pekinensis ) merupakan sayuran yang sangat penting di negara Cina, Korea, Taiwan, dan Jepang, serta dikenal dengan nama: napa , napa cabbage , petsai, wongbok , atau chihli (Fahey 2016). Sawi putih sangat mudah terinfeksi oleh bakteri penyebab penyakit busuk lunak, Pectobacterium carotovorum (Portier et al . 2019). Bakteri ini dapat berkembang biak pada suhu 5.22–37.00  ℃,  sedangkan  pada  suhu  50  ℃ bakteri akan mati. Bakteri dapat bertahan hidup pada sisa-sisa tanaman dalam tanah, kisaran inangnya luas, dan memiliki variasi genetik yang tinggi (Alvarado et al . 2011). Pectobacterium carotovorum antara lain menghasilkan enzim pektinase yang termasuk dalam kelompok plant cell-wall-degrading enzymes dan  berfungsi menguraikan pektin pada dinding sel tumbuhan sehingga sel-sel akan lepas satu sama lain (Lee et al . 2013).
Usaha pengendalian penyakit yang sudah dilakukan ialah antara lain: aplikasi agens biokontrol (Raoul des Essarts et al . 2015; Kang et al . 2016; Gerayeli et al . 2017; Cui et al . 2019), penggunaan kalsium nitrat (Da Silva et al . 2016), dan pestisida botani (Barbin et al . 2018;  Benitez dan Benitez 2018). Mandang et al . (2016) melaporkan bahwa pemberian perlakuan kombinasi antara plant growth- promoting rhizobacteria (PGPR) yang belum diidentifikasi  dan Pseudomonas  fluorescens memberikan  penekanan  yang  signifikan terhadap penyakit busuk lunak di lapangan, yaitu sebesar 27.95%. Pengendalian penyakit secara biologi pada tanaman sawi putih belum banyak dilakukan, khususnya pemanfaatan bakteri  filosfer  untuk  mengendalikan P. carotovorum tersebut.
Turner et al . (2013) menyatakan bahwa sebanyak 10 7 mikroorganisme dapat mengolonisasi per cm 2 permukaan daun. Mikroorganisme  filosfer,  terutama  bakteri dan cendawan, bermanfaat dalam memacu pertumbuhan tanaman dan meningkatkan toleransi terhadap stres lingkungan (Stone et al . 2018). Pengaruh positif lain ialah memproduksi
hormon pertumbuhan dan menghasilkan senyawa volatil yang memberikan perlindungan terhadap berbagai patogen daun tanaman (Penuelas dan Terradas 2014). Penelitian ini bertujuan menyeleksi galur- galur bakteri filosfer dari tanaman kubis yang berpotensi menghambat penyakit busuk lunak P. carotovorum pada sawi putih.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan dengan mengisolasi bakteri penyebab penyakit busuk lunak  pada  kubis  dan  bakteri  filosfer  pada daun kubis sehat menggunakan medium agar-agar nutrien (AN). Bakteri penyebab busuk lunak dikarakterisasi dan yang diduga sebagai  penyebab  penyakit  diidentifikasi secara  molekul.  Bakteri  filosfer  diisolasi dengan metode penempelan dan pengenceran, selanjutnya semua bakteri yang diperoleh diuji keamanan hayatinya. Galur bakteri filosfer terpilih diuji antagonisme nya terhadap bakteri penyebab busuk lunak secara in vitro pada medium AN.  Uji ini disusun dalam rancangan acak lengkap dengan tiga ulangan. Galur  bakteri  filosfer  yang  menghasilkan zona hambatan diuji lanjut terhadap bakteri penyebab busuk lunak secara in vivo pada daun sawi putih yang disusun dalam rancangan acak lengkap dengan empat ulangan. Data dianalisis  menggunakan  Microsoft  Office Excel 2010, SAS versi 9.0. Perlakuan yang berpengaruh nyata dianalisis dengan uji Tukey pada taraf nyata 5%.
Bakteri Penyebab Busuk Lunak pada Kubis Bakteri diisolasi dari tanaman kubis yang bergejala busuk lunak menggunakan metode Schaad et al. (2001). Sebanyak 36 isolat yang sudah murni (selanjutnya disebut galur bakteri penyebab busuk lunak kubis). Galur bakteri ini dikarakterisasi  berdasarkan reaksi Gram menggunakan KOH 3%, kemampuan membusukkan kentang, serta reaksi hipersensitivitas (Schaad et al. 2001). Sebanyak 10 galur yang diduga patogen penyebab busuk lunak pada sawi putih terpilih
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Af’idzatuttama et al. diuji karakter molekulnya dengan teknik PCR menggunakan sepasang primer spesifik untuk P. carotovorum , yaitu: (Ec001) F (5’ - CGG TTA CGA TCA GCG TCT CG - 3’) dan R (5’- GAT GTG CCG ATG CCG ATA C - 3’) dengan produk PCR berukuran 312 pb (Mohammed dan Selman 2013).  Bakteri yang diidentifikasi sebagai P. carotovorum disimpan sebagai koleksi biakan dan satu galur digunakan dalam uji  lanjut  untuk  memperoleh  bakteri  filosfer yang dapat menghambat pertumbuhannya.
Bakteri Filosfer Bakteri  filosfer  diisolasi  dari  daun  kubis sehat yang diambil dari wilayah pertanaman kubis di Kabupaten Cianjur (Desa Ciherang/ Segunung, Kecamatan Pacet), Tegal (Desa Tuwel, Kecamatan Bojong), dan Bogor (Desa Cipayung, Kecamatan Megamendung). Bakteri  filosfer  diisolasi  menggunakan  dua metode, yaitu penempelan dan pengenceran. Metode penempelan dilakukan dengan cara daun kubis sehat ditempelkan pada medium AN (Schaad et al. 2001) dan diinkubasikan selama 48 jam. Metode pengenceran dilakukan dengan cara merendam daun kubis sehat dalam akuades steril selama 10 menit, kemudian 10 mL suspensi diencerkan berseri sampai dengan 10 -5 dan sebanyak 0.1 mL dari masing-masing pengenceran disebarkan pada medium AN, dan diinkubasikan selama 48 jam. Masing-masing  koloni  bakteri  filosfer yang tumbuh dimurnikan dan disimpan sebagai koleksi biakan untuk uji lanjut.
Uji Keamanan Hayati Galur Bakteri Filosfer Sebanyak  166  galur  bakteri  filosfer  diuji sifat keamanan hayatinya berdasarkan sifat hemolisis pada agar-agar darah (Bernal et al. 2015) dan reaksi hipersensitivitas pada daun tembakau (Schaad et al. 2001). Bakteri filosfer yang memiliki tipe gamma (γ) atau yang tidak menyebabkan lisis pada sel darah (Sharma dan Gupta 2014) dan tidak menunjukkan reaksi hipersensitif pada daun tembakau selanjutnya digunakan sebagai kandidat agens biokontrol untuk diuji kemampuan antagonismenya terhadap bakteri penyebab busuk lunak kubis.

## Uji Antagonisme Bakteri Filosfer terhadap
P. carotovorum in vitro
Sebanyak  57  galur  bakteri  filosfer  diuji aktivitas antagonismenya menggunakan metode plate  diffusion (Putra dan Giyanto 2014)  dengan  modifikasi menggunakan medium AN dan kerapatan bakteri penyebab  busuk  lunak  serta  bakteri  filosfer masing-masing 10 7 –10 8 cfu mL -1 . Bakteri filosfer  dan  patogen  ditumbuhkan  secara terpisah pada 1.5 mL medium nutrien cair (3 g ekstrak daging, 5 g pepton, 1000 mL akuades) (Schaad et al. 2001) sambil digoyang  pada kecepatan 100 rpm selama 24 jam. Sebanyak 10 µL suspensi masing- masing  bakteri  filosfer  dengan  kerapatan 10 7 –10 8 cfu mL -1 diteteskan pada kertas saring steril berbentuk bulat berdiameter 5 mm dan diletakkan pada medium AN yang telah diinokulasi dengan 100 µL bakteri patogen (10 7 –10 8 cfu  mL -1 ) dan disebar merata menggunakan glass beads . Zona bening (zona hambatan pertumbuhan) yang terbentuk mengindikasikan adanya reaksi antagonisme antara isolat bakteri filosfer dan bakteri patogen. Pengamatan dan pengukuran zona bening dilakukan setelah 48 jam masa inkubasi. Lebar zona hambatan (LZH) yang terbentuk dihitung menggunakan rumus berikut:
LZH = D 1 – D 2 , dengan
D 1 ,  diameter zona bening (mm); dan D 2 , diameter koloni bakteri filosfer (mm). Galur-galur  bakteri  filosfer  yang menghasilkan zona hambatan kemudian dikarakterisasi berdasarkan morfologi koloni (Zarpelon et al . 2016).  Galur bakteri ini digunakan untuk uji in vivo .
Uji Antagonisme Bakteri Filosfer terhadap P. carotovorum in Vivo Uji ini menggunakan enam galur bakteri filosfer  dengan  zona  hambatan  paling  lebar (TG11, TG12, TG16, TG20, S33, dan BG7) dan daun sawi putih sebagai inang uji mengikuti metode Lee et al. (2021) dengan modifikasi  pada  jenis  agens  biokontrol  dan patogen serta cara aplikasinya dicampur
antara agens biokontrol dan patogen. Agens biokontrol yang digunakan ialah bakteri filosfer  dengan  k erapatan 10 8 –10 9 cfu mL -1 , sedangkan kerapatan P. carotovorum ialah 10 7 – 10 8 cfu mL -1 . Suspensi bakteri filosfer dan P. carotovorum dicampur dengan perbandingan (1:1). Inokulasi dilakukan dengan membuat goresan melintang secara steril sepanjang 1 cm pada daun sawi putih. Selanjutnya, sebanyak 10 µL suspensi campuran bakteri filosfer  dan P. carotovorum diteteskan pada daun sawi putih yang telah digores tadi. Daun sawi putih yang telah diinokulasi disimpan di dalam nampan dan dibungkus dengan kantong plastik transparan serta diinkubasikan dalam suhu ruang.  Lebar dan panjang pembusukan diukur pada 24, 48, dan 72 jam setelah inokulasi (JSI).  Penghambatan relatif (PR) lebar atau panjang gejala busuk lunak (L/Pgb) dihitung dengan rumus berikut:
PR (L/P) = L/Pgb kontrol – L/Pgb perlakuan
L/Pgb kontrol × 100%
Uji ini disusun dalam rancangan acak lengkap dengan delapan perlakuan, yakni 6  galur  bakteri  filosfer,  1  galur  bakteri P. carotovorum sebagai kontrol positif, dan 1 perlakuan antibiotik streptomisin sebagai kontrol. Pengujian diulang sebanyak empat kali dengan setiap ulangannnya  terdiri atas enam unit daun sawi putih.
Pengolahan data menggunakan Microsoft Office  Excel  2010.  Uji  perlakuan  terhadap respons yang diamati dilakukan dengan analisis ragam SAS versi 9.0. Perlakuan yang berpengaruh nyata dianalisis dengan uji Tukey pada taraf nyata 5%.

## Identifikasi  Bakteri  Filosfer  Potensial
secara Molekul Dua galur bakteri filosfer paling potensial sebagai agens hayati dari uji in vivo , galur TG11 dan TG20, diidentifikasi secara molekul menggunakan teknik PCR. Galur bakteri filosfer  diekstraksi  DNA-nya.  Fragmen DNA  diamplifikasi  menggunakan  mesin PCR (GeneAmp PCR system 9700) dengan sepasang primer universal 16S rRNA, yaitu:
27F (5’ - AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG - 3’) dan 1492R (5’ - ACC TTG TTA GGA CTT – 3’) sesuai metode Frank et al . (2008). Sebanyak 40 µL produk PCR dikirimkan ke Laboratorium First Base Asia, Malaysia melalui PT. Genetika Science untuk disikuen nukleotidanya. Hasil perunutan nukleotida diolah menggunakan aplikasi Bioedit versi 7.2.6.1. Sikuen DNA dibandingkan dengan nukleotida lain pada Genbank database, menggunakan program BLAST.

## HASIL
Bakteri Patogen Pectobacterium carotovorum Karakterisasi terhadap 10 galur bakteri penyebab busuk lunak pada kubis menunjukkan bahwa galur PCC05 dan PCC10 memiliki karakter sesuai dengan bakteri P. carotovorum (Tabel 1). Visualisasi hasil PCR menunjukkan bahwa produk  yang  teramplifikasi  dengan  primer Ec001 berukuran 312 pb (Gambar 1). Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan Mohammed dan Selman (2013), yang melakukan uji konfirmasi terhadap 10 galur P. carotovorum menggunakan primer Ec001. Galur Bakteri Filosfer Bakteri  filosfer  yang  berhasil  diisolasi dengan metode penempelan dan pengenceran ialah sebanyak 166 galur yang terdiri atas 136
500 pb 312 pb M 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5
Gambar  1   Amplifikasi  DNA  dengan  primer spesifik  Ec001  untuk Pectobacterium carotovorum . M, Penanda 100 pb; 1, PCC17; 2, PCC16; 3, PCC 12; 4, PCC10; 5, PCC08; 6, PCC06; 7, PCC05; 8, PCC04; 9, PCC03; dan 10, PCC02.
Jurnal Fitopatologi Indonesia
galur dari Cianjur (S1–S136), 20 galur dari Tegal (TG1–TG20), dan 10 galur dari Bogor (BG1–BG10). Masing-masing galur tersebut berbeda warna dan/atau bentuk, tepian, serta elevasi koloninya. Sebanyak 57 galur bakteri filosfer  tersebut  aman  untuk  digunakan sebagian kandidat agens biokontrol, yaitu memiliki sifat hipersensitivitas negatif dan  sifat  hemolisisnya  ialah  γ  atau  tidak menyebabkan hemolisis.
Aktivitas Antagonisme Bakteri Filosfer terhadap P. carotovorum Dari  57  galur  bakteri  filosfer  yang  telah diuji,  didapatkan  enam  galur  bakteri  filosfer yang bersifat antagonis terhadap bakteri P. carotovorum . Semakin lebar zona bening yang terbentuk menandakan semakin besar penghambatan yang terjadi. Galur yang berpotensi sebagai agens hayati ialah galur BG7, S33, TG11, TG12, TG16, dan TG20. Agens hayati TG12 memiliki daya hambat yang berbeda dengan empat galur lainnya, namun antagonismenya sama dengan galur TG11 (Tabel 2).
Kemampuan Bakteri Filosfer Menghambat Penyakit Busuk Lunak Sawi Putih Pengaruh  galur  bakteri  filosfer  terhadap perkembangan panjang dan lebar gejala busuk lunak pada sawi putih yang diamati  pada 24, 48, dan 72 jam setelah inokulasi disajikan dalam Tabel 3 dan Gambar 2. Lebar dan panjang gejala busuk pada daun sawi putih yang
diberi galur bakteri filosfer dan kontrol positif tidak berbeda nyata. Akan tetapi berdasarkan penghitungan tingkat penghambatan relatif terlihat bahwa galur TG20 menghasilkan penghambatan relatif paling tinggi terhadap lebar gejala busuk pada 24, 48, dan 72 JSI, berturut-turut 42.1%, 22.4%, dan 24.3%, sedangkan penghambatan relatif terhadap panjang gejala busuk paling tinggi dihasilkan oleh galur TG11 pada 48 dan 72 JSI, berturut- turut 45.1% dan 33.9%. Penghambatan relatif terhadap panjang gejala busuk paling tinggi dihasilkan oleh galur TG20 pada 24 JSI, yaitu sebesar 51.7%, tetapi mengalami penurunan pada 48 dan 72 JSI (Tabel 4). Penghambatan yang dihasilkan oleh galur bakteri  filosfer  masih  rendah  dibandingkan dengan streptomisin yang mencapai 100% pada 72 JSI. Galur TG20 memiliki tingkat
Tabel 1  Karakterisasi bakteri penyebab penyakit busuk lunak dari kubis sakit
Galur Pembusukan kentang Reaksi hipersentivitas Sifat Gram (KOH 3%) Amplifikasi primer spesifik PCC17 - + negatif Na PCC16 + - negatif Na PCC12 - - negatif Na PCC10 ++ + negatif A PCC08 - + negatif Na PCC06 ++ + negatif Na PCC05 ++ + negatif A PCC04 ++ + negatif Na PCC03 + - negatif A PCC02 + - negatif Na Keterangan: Na (tidak teramplifikasi); A (teramplifikasi) Tabel 2  Lebar zona hambatan yang dihasilkan oleh galur bakteri filosfer terhadap Pectobacterium carotovorum dengan metode plate diffusion Galur Zona hambatan (mm) TG12 9.2 a TG11 6.3 ab S33 4.6 b BG7 4.6 b TG20 3.4 bc TG16 3.2 bc Kontrol (air steril) 0.0 c Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata berdasarkan uji Tukey pada α 5%
a g f e d c b
Gambar 2  Perkembangan gejala busuk lunak Pectobacterium carotovorum pada daun sawi putih setelah 24, 48, dan 72 JSI.  a, pembanding streptomisin; b, kontrol positif bakteri P. carotovorum ; c, isolat TG20; d, isolat TG12; e, isolat TG11; f, isolat BG7; dan g, isolat S33.
Tabel 3  Perkembangan lebar dan panjang gejala busuk lunak Pectobacterium carotovorum pada sawi putih
Galur Lebar gejala busuk (cm) pada jam setelah inokulasi Panjang gejala busuk (cm) pada jam setelah inokulasi 24 48 72 24 48 72 TG12 0.90 ab 1.69 ab 2.79 b 0.55 bc 3.46 b 8.05 b TG11 1.04 ab 1.44 ab 2.40 b 0.49 bc 1.90 ab 5.32 ab S33 1.20 ab 2.05 ab 3.13 b 1.03 d 2.86 b 6.85 b BG7 0.94 ab 1.54 ab 2.48 b 0.48 bc 2.45 ab 4.22 ab TG20 0.70 ab 1.25 ab 1.84 ab 0.28 ab 1.78 ab 4.39 ab TG16 1.22 ab 1.87 ab 3.45 b 0.74 cd 2.65ab 5.59 ab Streptomisin 0.00 a 0.00 a 0.00 a 0.00 a 0.00 a 0.00 a Kontrol + (patogen tanpa biokontrol) 1.21 ab 1.61 ab 2.43 b 0.58 bc 2.25 ab 4.64 ab
Angka yang diikuti oleh huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata berdasarkan uji Tukey pada α 5%
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Tabel 4  Penghambatan relatif bakteri rizosfer terhadap perkembangan gejala penyakit busuk lunak ( Pectobacterium carotovorum ) pada daun sawi putih Galur Penghambatan lebar gejala busuk (%) pada jam setelah inokulasi Penghambatan panjang gejala busuk (%) pada jam setelah inokulasi 24 48 72 24 48 72 TG12 26.2 9.6 19.1 25.7 00.0 00.0 TG11 00.0 14.8 14.0 10.9 45.1 33.9 S33 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0 BG7 9.6 00.0 00.0 2.0 00.0 20.7 TG20 42.1 22.4 24.3 51.7 20.9 5.4 TG16 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0 Streptomisin 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 Kontrol + 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0 00.0 Keterangan: kontrol +, bakteri P. carotovorum
Tabel 5  Hasil analisis homologi urutan nukleotida gen 16S rRNA isolat bakteri filosfer TG11 dan TG20 dengan data pada Genebank database Galur Spesies homolog Quent query (%) Kemiripan (%) No aksesi TG11 Chryseobacterium sp. E1771 99 91 KY270506.1 Chryseobacterium sp. E1671 99 91 KY270505.1 Chryseobacterium sp. E1571 99 91 KY270504.1 Chryseobacterium sp. E1571 99 91 KY117480.1 Chryseobacterium sp. TFB 16S 99 91 HQ895718.1 TG20 Chryseobacterium sp. CH4 99 86 GU353111.1 Chryseobacterium sp. CP4D3-03 99 86 MK534064.1 Chryseobacterium sp. CP4D3-02 99 86 MK534063.1 Chryseobacterium sp. G972 99 86 LT161886.1 Chryseobacterium indologenes FDAARGOS 510 99 86 CP033828.1
penghambatan  relatif  paling tinggi di antara galur-galur bakteri rizosfer terhadap perkembangan gejala busuk lunak hingga 72 JSI (Tabel 4).

## Karakteristik dan Identitas Bakteri Filosfer
Potensial Berdasarkan tingkat penghambatan relatif maka galur TG11 dan TG20 merupakan galur yang potensial sebagai agens pengendali penyakit busuk lunak. Galur TG11 memiliki koloni berwarna kuning bening, bentuk bulat, tepi rata, dan elevasi timbul. Koloni galur TG20 berwarna kuning keputihan, bentuk menyebar tidak beraturan, tepi koloni bergelombang, dan elevasi datar. Penyejajaran urutan basa nukleotida hasil sikuensing gen 16S rRNA dengan data pada GeneBank menunjukkan
bahwa galur TG11 dan TG20 memiliki tingkat kemiripan berturut-turut sebesar 86% dan 91% dengan bakteri Chryseobacterium sp. (Tabel 5).

## PEMBAHASAN
Bakteri  filosfer  kubis  adalah  kelompok bakteri yang potensial menjadi agens pengendali penyakit busuk lunak pada tanaman sawi  putih.  Bakteri  filosfer  yang  digunakan dalam penelitian ini antara lain memiliki mekanisme antibiosis dalam menghambat P. carotovorum. Antibiotik yang dihasilkan oleh bakteri berperan sebagai metabolit sekunder dan menghambat pertumbuhan atau aktivitas metabolisme mikroorganisme lain pada konsentrasi rendah (Prihatiningsih et al . 2015).
Sebanyak  enam  galur  bakteri  filosfer menunjukkan aktivitas penghambatan dengan mekanisme antibiosis secara in vitro , tetapi hanya galur TG11 dan TG20 yang dapat menghambat perkembangan panjang dan lebar gejala busuk lunak secara in vivo hingga 72 JSI, sedangkan dua galur lain—TG12 dan BG7— hanya mampu menghambat perkembangan lebar atau panjang gejala saja. Kemampuan penghambatannya menurun sejalan dengan pertambahan waktu. Hal itu kemungkinan disebabkan  oleh  bakteri  filosfer  yang  hanya bekerja di permukaan daun sawi putih, jika bakteri P. carotovorum sudah masuk ke dalam jaringan tanaman maka bakteri filosfer sudah tidak mampu menekan perkembangan patogen. Guna mengatasi keterbatasan tersebut, dapat dicoba untuk dilakukan kombinasi perlakuan di  antara  galur-galur  bakteri  filosfer  tersebut atau kombinasi dengan bakteri lain yang bersifat endofit.
Hasil  identifikasi  secara  molekuler menunjukkan bahwa galur TG11 dan TG20 menunjukkan kemiripan dengan Chryseobacterium sp..  Genus Chryseobacterium dapat ditemukan pada berbagai lingkungan, antara lain rizosfer (Montero-Calasanz et al . 2014) dan air tawar (Zhang et al . 2020). Saat ini dilaporkan bahwa genus Chryseobacterium memiliki galur yang berasosiasi dengan tanaman sebagai pemacu pertumbuhan (Montero-Calasanz et al . 2014;
Sang et al. 2018; Yoo et al . 2020). Bakteri ini juga mampu menghasilkan senyawa metabolit sekunder microbiol biological control agents , seperti enzim 2,4-diacetylphloroglucinol, yang berfungsi sebagai antimikroorganisme terhadap suatu patogen microbe-associated moleculer pattern (Pieterse et al . 2014). Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa dua galur bakteri filosfer  kubis  memiliki  potensi  menghambat perkembangan penyakit busuk lunak pada sawi putih. Penghambatan relatif terhadap lebar dan panjang gejala busuk paling tinggi pada 24 JSI berturut-turut mencapai 42.1% dan 51.7% sedangkan pada 72 JSI berturut- turut mencapai 24.3% dan 33.9%.

## DAFTAR PUSTAKA
Alvarado ICM, Michereff SJ, Mariano RLR, Souza EB, Quezado-Duval AM, Resende LV, Cardoso E, Mizubuti ESG. 2011. Characterization and variability of soft rot- causing bacteria in chinese cabbage in north eastern Brazil. Journal  of  Plant Pathology. 93(1):173–181.
Barbin KB, Secretaria LB, Bayogan ERV, Lacap  AT,  Ekman  JH.  2018.    Efficacy of guava and mangosteen extracts in reducing soft rot ( Pectobacterium carotovorum ) in harvested Chinese cabbage. Acta Horticulturae. 1205:619– 624. DOI: https://doi.org/10.17660/ ActaHortic.2018.1205.46.
Benitez M, Benitez JKM.  2018. Potential postharvest botanical extract on bacterial soft rot of cabbage ( Brassica oleracea var. capitata L.). Acta Horticulturae. 1213:619– 624 . DOI: https://doi.org/10.17660/ ActaHortic.2018.1213.94.
Bernal GM, Cordova AI, Saucedo PE,
Gonzalez CM, Medina MR, Suastegui JM. 2015. Isolation in vitro  selection of actinomycetes strains as potential probiotics for aquaculture. Veterinary World. 8(2):170–176. DOI: https://doi. org/10.14202/vetworld.2015.170-176.
Cui W, He P, Munir S, He P, He Y, Li X, Yang L, Wang B, Wu Y, He P.  2019. Biocontrol of soft rot of Chinese cabbage using an endophytic bacterial strain. Frontiers in Microbiology  10:1–12. DOI: https://doi. org/10.3389/fmicb.2019.01471.
Da Silva Felix KC, da Silva CL, de Oliveira WJ, de Lima Ramos Mariano R, de Souza EB. 2016. Calcium-mediated reduction of soft rot disease in Chinese cabbage. European Journal of Plant Pathology 147(1):73–84. DOI:  https://doi.org/10.1007/s10658-016- 0980-0.
Fahey JW. 2016. Brassica: Characteristics and properties . Encyclopedia of Food and Health. 469–477.  DOI:  https://doi.org/10.1016/
B 9 7 8 - 0 - 1 2 - 3 8 4 9 4 7 - 2 . 0 0 0 8 3 - 0 . Frank JA, Reich CI, Sharma S, Weisbaun JS, Wilson BA, Olsen GJ. 2008. Critical
Jurnal Fitopatologi Indonesia
Af’idzatuttama et al. evaluation of two primers commonly used  for  amplification  of  bacterial  16S rRNA genes. Applied  Environmental Microbiology. 74(8):2461–2470. DOI: https://doi.org/10.1128/AEM.02272-07.
Gerayeli N, Baghaee-Ravari S, Tarighi S. 2017.
Evaluation of the antagonistic potential of Bacillus strains against Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum and their role in the induction of resistance to potato soft rot infection. European Journal of Plant Pathology. 150(4):1049–1063. DOI: https://doi.org/10.1007/s10658-017-1344-
0.
Kang JE, Han JW, Jeon BJ, Kim BS. 2016.
Efficacies  of  quorum  sensing  inhibitors, piericidin A and glucopiericidin A, produced by Streptomyces xanthocidicus KPP01532 for the control of potato soft rot caused by Erwinia carotovora subsp. atroseptica . Microbiological   Research.
184:32–41. DOI: https://doi.org/10.1016/j. micres.2015.12.005.
Lee  DH, Lim  JA,  Lee  J, Roh  E, Jung  K, Choi M, Oh C, Ryu S, Yun J, Heu S. 2013. Characterization of genes required for the pathogenicity of Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum Pcc21 in Chinese cabbage. Microbiology. 159(7):1487–1496. DOI: https://doi. org/10.1099/mic.0.067280-0.
Lee S, Vu NT, Oh EJ, Rahimi-Midani A, Thi TN, Song YR, Hwang IS, Choi TJ, Oh CS. 2021. Biocontrol of soft rot caused by Pectobacterium odoriferum with bacteriophage phipccp-1 in kimchi cabbage. Microorganisms. 9(4):779. DOI: https:// doi.org/10.3390/microorganisms9040779.
Mandang R, Assa B, Sualang DS. 2016. Efektivitas plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) dan Pseudomonas fluorescens dalam menghambat penyakit busuk lunak pada tanaman kubis bunga ( Brassica oleracea var. botrytis L). Cocos. 7(7):1–9.  DOI:  https://doi.org/10.35791/ cocos.v7i7.13930.
Mohammed MJ, Selman ED. 2013. Detection of local Erwinia isolated causing in potato by using DNA amplification by polymerase
chain reaction technique (PCR). Al- Nahrain  Journal of Science. 16(3):224– 229. DOI: https://doi.org/10.22401/ JNUS.16.3.31.
Montero-Calasanz MC, Goker M, Rohde M, Sproer C, Schumann P, Busse HJ, Schmid M, Klenk HP, Tindall BJ, Camacho M.
2014. Chryseobacterium oleae sp. nov., an  efficient  plant  growth  promoting bacterium in the rooting induction of olive tree  ( Olea europaea L.)  cuttings and emended descriptions of the genus Chryseobacterium , C. daecheongense , C. gambrini , C. gleum , C. joostei , C. jejuense, C. luteum,  C. shigense, C. taiwanense, C. ureilyticum and C. vrystaatense .  Systematic and Applied Microbiology. 37:342–350. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.syapm.2014.04.004.
Penuelas J, Terradas J.  2014. The foliar microbiome. Trends in  Plant Science. 19(5):278–280. DOI: https://doi. org/10.1016/j.tplants.2013.12.007.
Pieterse CM, Zamioudis C, Berendsen RL, Weller DM, van Wees SCM, Bakker PAHM. 2014. Induced systemic resistance by beneficial microbes. Annu al Review of Phytopathology.  52:347–375.
DOI: https://doi.org/10.1146/annurev- phyto-082712-102340.
Portier P, Pedron J, Taghouti G, Fisher-Le Saux M, Caullireau E, Bertrand C, Laurent A, Chawki K, Oulgazi S, Moumni M, Andrivon D, Dutrieux C, Faure D, Helias V, Barny MA.  2019. Elevation of Pectobacterium carotovorum subsp. odoriferum to species level as Pectobacterium odoriferum sp. nov., proposal of Pectobacterium brasiliense sp. nov. and Pectobacterium actinidiae sp. nov., emended description of Pectobacterium  carotovorum and description of Pectobacterium versatile sp. nov., isolated from streams and symptoms on diverse plants. International Journal of Systematic Evolutionary Microbiology. 69:3207–3216. DOI: https://doi. org/10.1099/ijsem.0.003611.
Prihatiningsih N, Arwiyanto T, Hadisutrisno
B, Widada J. 2015. Mekanisme antibiosis
Bacillus subtilis B315 untuk pengendaian penyakit layu bakteri kentang. Jurnal Hama dan Penyakit Tumbuhan Tropika 15(1):64– 71. DOI: https://doi.org/10.23960/j. hptt.11564-71.
Putra C, Giyanto. 2014. Kompatibilitas
Bacillus spp. dan aktinomiset sebagai agens hayati Xanthomonas oryzae pv. oryzae dan pemacu pertumbuhan padi. Jurnal Fitopatologi Indonesia. 10(5):160– 169. DOI: https://doi.org/10.14692/ jfi.10.5.160 . Raoul des Essarts Y, Cigna J, Quêtu-Laurent A, Caron A, Munier E, Beury-Cirou A, Helias V, Faure D. 2015. Biocontrol of the potato blackleg and soft rot diseases caused by Dickeya dianthicola . Applied Environmental Microbiology. 82(1):268– 278. DOI: https://doi.org/10.1128/ AEM.02525-15.
Sang MK, Jeong JJ, Kim J, Kim KD. 2018. Growth promotion and root colonisation in pepper plants by phosphate-solubilising Chryseobacterium sp. strain ISE14 that suppresses Phytophthora blight. Annals of Applied Biology.  172(2):208–223.  DOI: https://doi.org/10.1111/aab.12413. Schaad NW, Jones JB, Chun W. 2001. Laboratory Guide for Identification of Plant Pathogenic Bacteria . Ed ke-3. Minnesota (US): The American Phytopathological Society.
Sharma R, Gupta A. 2014. Differentiation of oral Streptococcal species by haemolysis in blood agar medium in vitro.  International
Journal of Engineering and advanced Technology (IJEAT). 3(4):143–144. https://www.ijeat.org/ portfolio-item/ d2934043414/ [diunduh 22 Juni 2022]. Stone BWG, Weingarten EA, Jackson CR. 2018. The role of the phyllosphere microbiome in plant health and function. Annual Plant Reviews Online. 1(2):1–24. DOI: https:// doi.org/10.1002/9781119312994.apr0614.
Turner TR, James EK, Poole PS.  2013.  The plant microbiome. Genome Biology 14(6):209. DOI: https://doi.org/10.1186/ gb-2013-14-6-209.
Yoo SJ, Weon HY, Song J, Sang MK. 2020. Effects of Chryseobacterium soldanellicola T16E-39 and Bacillus siamensis T20E-257 on biocontrol against phytophthora blight and bacterial wilt and growth promotion in tomato plants. Intenational Journal of Agriculture & Biology. 23:534‒540 . DOI: 10.17957/ IJAB/15.1320. Zarpelon  TG, Guimarães LMdaS, Alfenas- Zerbini  P,  Lopes  ES,  Mafia  RG, Alfenas AC. 2016. Rhizobacterial characterization for quality control of eucalyptus biogrowth promoter products. Brazilian Journal of Microbiology. 47(4):973–979. DOI: https://doi.org/10.1016/j.bjm.2016.07.013.
Zhang J, Gao C, Yu XM, Lun HY, Du ZJ. 2020. Chryseobacterium lacus sp. nov. isolated from the surface water of two lakes with light-induced carotenoid production. Frontiers in Microbiology 11:251. DOI: https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.00251.