## VERIFIKASI METODE PENENTUAN ASETOSAL DALAM OBAT SAKIT KEPALA DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI UV
Kuntari 1 , T. Aprianto2, R. Hadiyati Noor 3 , Baruji 4
DIII Analis Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Islam Indonesia
Yogyakarta, Indonesia
e-mail: 1 chemist.tari@gmail.com, 162310401@uii.ac.id

## Abstrak
Asetosal merupakan suatu obat yang berfungsi sebagai analgesik, antipiretik dan anti- inflamasi yang sering digunakan oleh masyarakat luas. Penggunaan asetosal dalam dosis  tinggi  dapat  menyebabkan  indikasi  dan  efek  negatif  bagi  tubuh  sehingga pengawasan  mutu  yang  menyangkut  kandungan  asetosal  pada produk  obat  sangat penting.  Metode  penetapan  kadar  asetosal  yang  dikembangkan  harus  memenuhi parameter validitas suatu metode analisis dan terverifikasi. Metode penetapan kadar asetosal  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode  spektrofotometri  UV. Metode spektrofotometri UV merupakan metode yang memiliki tingkat kesulitan yang rendah, cepat,  selektif, sensitif  dan murah. Berdasarkan hasil uji parameter  validasi, nilai LoD  (Limit  of  Detection) , LoQ  (Limit  of  Quantification) ,  presisi,  akurasi  dan estimasi  ketidakpastian  pengukuran  termasuk  dalam  kategori  baik,  dengan  nilai secara berurutan adalah 0,9967; 0,0664 mg/L; 2,2131 mg/L, 3,7856 %; 93,88% dan ± 0,3163g/mL.
Kata kunci: asetosal, spektrofotometri, UV, verifikasi

## Abstract
Acetosal is a drug that works as an analgesic, antipyretic and anti-inflammatory that is often used by the public. The use of acetocal in high doses can cause indication and negative  effects  to  the  body  so  that  the  quality  control  concerning  the  content  of acetosal on medicinal products is important. Determination methods of acetosal which developed  must  appropriateto  the  validity  parameters  of  a  analysis  method  and verified.  Determination  method  of  acetosal  which  used  in  this  research  is  UV spectrophotometric method. UV-spectrophotometric method is a method that has a low level of difficulty, rapid, selective, sensitive and inexpensive. Based on the test results of  the  validation  parameter,value  of  LoD  (Limit  of  Detection),  LoQ  (Limit  of Quantification), precision, accuracy and uncertainty estimation are included in the good category,  the  value  is  0.9967;  0.0664  mg/L;  2.2131  mg/L,  3.7856%;  93.88%  and  ± 0.3163 g/mL, respectively.
Keywords: acetosal, spectrophotometry, UV, verification

## PENDAHULUAN
Asetosal  atau  asam  asetil  salisilat merupakan  jenis  obat  turunan  salisilat. Nama sistematis IUPAC ( International Union of  Pure  and  Applied  Chemistry )  asetosal
adalah  asam  2-asetilbenzoat  asam  asetat. Struktur kimia senyawa asetosal ditunjukkan pada Gambar 1.     Asetosal memiliki  rumus molekul  C 9 H 8 O 4 dengan  berat  molekul 180,16 g/mol, kelarutan dalam air 3 mg/mL
(20 o C)  titik  leleh  135 o C  merupakan  kristal dengan  pemerian  serbuk  berwarna  putih, tidak memiliki bau yang kuat.
Asetosal  yang  sering  dikenal  sebagai aspirin  digunakan  oleh  masyarakat  luas sebagai  analgesik  atau  penahan  rasa  sakit atau  nyeri  minor,  antipiterik  (penurun demam)  dan  anti-inflamasi  (peradangan). Penggunaan  aspirin  dalam  dosis  yang terlalu tinggi dapat menyebabkan beberapa indikasi  dan  dampak  negatif  seperti  iritasi lambung, perdarahan, perforasi atau kebocoran  lambung  serta  menghambat aktivitas trombosit. Penentuan kadar asetosal dalam sediaan obat menjadi sangat penting  untuk  uji  kualitas  produk  sebelum dan  selama  proses  produksi  maupun setelah menjadi produk akhir.
Gambar 1. Struktur molekul asetosal
Pengawasan  mutu  yang  menyangkut kandungan asetosal pada produk obat harus ditingkatkan dengan mengembangkan metode  penetapan  kadar  yang  dapat memenuhi parameter validitas suatu metode analisis.  Di  samping  hal  tersebut  penting mengembangkan  metode  yang  memiliki tingkat  kesulitan  yang  rendah,  cepat,  dan membutuhkan biaya yang lebih sedikit.
Beragam  metode  analisis  kuantitatif telah banyak dikembangkan untuk penetapan kadar asetosal dan metabolitnya dalam  sediaan  obat.    Penentuan  asetosal dalam sampel obat dengan metode spektrofotometri  dan  kromatografi  (Bharate dan  Bharate,  2012);spektrofotometri  UV (Mishra  dan  Archana,  2006),  (Gujarathi, 2010) dan (Murtaza dkk., 2011);kromatografi cair  (Martos  dkk.,  2001);  spektrofluorometri (Martos dkk., 2001); kromatografi cair kinerja tinggi (Cemal dkk, 2008) dan spektrofotometri raman (Szostak & Mazurek, 2002).  Metode  spektrofotometri  UV  dinilai
sebagai  metode  yang  memiliki  tingkat kesulitan rendah, cepat, selektif, sensitif dan murah. Oleh karena itu dalam penelitian ini dilakukan  verifikasi  metode  penentuan asetosal  dalam sediaan  obat,  dalam hal  ini obat sakit kepala dengan metode spektrofotometri UV.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah memperoleh validitas metode analisis untuk penentuan kadar asetosal dalam obat sakit kepala  secara  spektrofotometri  uv  dengan parameter  uji  meliputi  linearitas,  presisi, akurasi, LoD , LoQ dan  nilai  ketidakpastian pengukuran.  Hasil  yang  diharapkan  adalah tersedianya  data  evaluasi  kinerja  metode spektrofotometri UV dalam penentuan kadar asetosal dalam obat sakit kepala, menjamin linearitas, akurasi, presisi, LoD dan LoQ dari hasil  prosedur  analisis  dan  mengurangi resiko penyimpangan.

## METODE Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini meliputi neraca analitik merek OHAUS,  pipet  volume  1  dan  10  mL;  labu ukur  10,  50,  100  dan  250  mL;  gelas  arloji, spatula, pipet tetes, gelas beker 100 dan 250 mL, pengaduk gelas, pengaduk magnet dan spektrofotometer  UV-Vis double  beam HITACHI  UH5300.  Sementara  bahan  yang digunakan  meliputi  aspirin  murni  (99,91%), HCl  pekat  (37%),  metanol  p.a.  produksi Merck,  akuades  dari  Laboratorium  Kimia Terapan,  kertas  whatmann  42,  kertas  seka dan tisu.

## Pembuatan  larutan  induk  asetosal  100 µg/mL
Sebanyak  10  mg  asetosal  ditimbang dengan teliti kemudian ditambahkan larutan HCl  0,1  N  :  metanol  (1:1)  sebanyak  50 mL dalam  gelas  beker.  Asetosal  dan  pelarut kemudian diaduk dengan pengaduk magnet hingga  larut  sempurna.  Larutan  yang dihasilkan  setelah  itu  dimasukkan  dalam labu ukur 100 mL dan ditambah HCl 0,1 N : metanol  (1:1)  sampai  tanda  batas.  Larutan digojog hingga homogen, sehingga
diperoleh  larutan  induk  asetosal  dengan konsentrasi 100 mg/L.

## Pembuatan larutan standar asetosal
Larutan standar asetosal dibuat dengan variasi konsentrasi 0, 2, 4, 6, 8 dan 10 mg/L yaitu dengan memipet larutan induk asetosal  100  mg/L  secara  berurutan sebanyak  0,2;  0,4;  0,6;  0,8  dan  1  mL. Masing-masing  larutan  induk  asetosal  hasil pemipetan dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur 10  mL  dan  ditera  sampai  tanda  batas dengan  menggunakan  pelarut  HCl  0,1  N  : metanol  (1:1).  Bagian  atas  labu  diseka, kemudian  dilakukan  penggojogan  sampaii homogen.

## Preparasi sampel
Sejumlah  50  mg  sampel  obat  sakit kepala  dimasukkan  dalam  gelas  beker ukuran  100  mL.  Selanjutnya  ditambah pelarut  HCl  0,1  N:  metanol  (1:1)  sebanyak 50 mL dan diaduk menggunakan pengaduk magnet  hingga  larut  sempurna.  Larutan dimasukkan  dalam  labu  ukur  50  mL  dan ditera  dengan  pelarut  HCl  0,1  N  :  metanol (1:1)  sampai  batas.  Bagian  atas  labu  ukur diseka,  kemudian  dilakukan  penggojogan hingga homogen. Tahap selanjutnya adalah penyaringan dengan kertas saring whatman 42. Filtrat yang diperoleh diambil sebanyak 1 mL dan dimasukkan dalam labu ukur 10 mL. Kemudian,  ke  dalam  labu  ukur  tersebut ditambah  pelarut  HCl  0,1  N  :  metanol  (1:1) sampai tanda batas. Ujung labu ukur diseka, dilanjutkan  dengan  penggojogkan  hingga homogen.

## Verifikasi metode analisis
Tahap  verifikasi  metode  meliputi penentuan  panjang  gelombang  optimum, linearitas, LoD , LoQ ,  presisi  dan  akurasi. Penentuan  panjang  gelombang  optimum dilakukan  dengan  mengukur  absorbansi larutan  standar  dengan  konsentrasi  6  mg/L pada  panjang  gelombang  200-400  nm dengan interval pengukuran 2 nm. Penentuan  linieritas  dilakukan  dengan melakukan  pengukuran  absorbansi  deret
kurva  standar  pada  panjang  gelombang optimum asetosal yang diperoleh. Kemudian dibuat  kurva  kalibrasi  dengan  sumbu  x adalah  variasi  konsentrasi  larutan  standar yaitu 0, 2, 4, 6, 8 dan 10 mg/L serta sumbu y adalah  respon  absorbansi  sampel  pada variasi konsentrasi. Pembuatan kurva kalibrasi dilakukan duplo. Penentuan presisi dilakukan  dengan  mengukur  absorbansi sampel  pada  panjang  gelombang  optimum sebanyak  lima  kali  pengulangan.  Larutan sampel  yang  akan  diukur  absorbansinya diencerkan terlebih dahulu. Faktor pengenceran  sebesar  lima  puluh  kali. Penentuan akurasi dilakukan dengan mengukur  absorbansi  standar  asetosal  6 mg/L  pada  panjang  gelombang  optimum dengan enam kali pengulangan. Penentuan konsentrasi  (x)  untuk  setiap  pengukuran diperoleh  dengan  cara  menghitung  nilai  x yang  diperoleh  pada  persamaan  regresi linear kurva standar yang diperoleh, di mana y adalah nilai absorbansi larutan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Penentuan Panjang Gelombang Optimum
Asetosal
Penentuan panjang gelombang optimum sangat berpengaruh dalam analisis kuantitafif  menggunakan  spektrofotometer karena  perubahan  konsentrasi  yang  kecil dapat menyebabkan perubahan absorbansi yang  besar.  Hasil  pengukuran  absorbansi larutan  standar  asetosal  6  mg/L  disajikan pada  Gambar  2.  Berdasarkan  Gambar  2 panjang  gelombang  optimum  asetosal sebesar  237  nm.  Hasil  penelitian  ini  tidak berbeda  jauh  dengan  hasil  yang  diperoleh (Gujarathi,  2010)  yang  menyatakan  bahwa panjang  gelombang  maksimum  asetosal 232,98 nm.
Selain puncak optimum untuk asetosal ternyata muncul puncak dari dianion salisilat yaitu  pada  panjang  gelombang  304  nm. Hasil tersebut memberikan informasi bahwa terjadinya hidrolisis asetosal menjadi dianion salisilat.  Hidrolisis  tersebut  dapat  terjadi karena  standar  asetosal  yang  digunakan, mengalami hidrolisis parsial akibat kelembaban  yang  berlangsung  selama proses penyimpanan.
Gambar 2. Penentuan panjang gelombang optimum asetosal
Adanya serapan pada panjang gelombang  tersebut  akan  memberikan pengaruh  pada  absorbansi  sampel  yang diukur.  Absorbansi  sampel  pada  panjang gelombang 237 nm akan berkurang, dengan kata  lain  hasil  kadar  asetosal  terukur  akan lebih kecil dari nilai yang sebenarnya. Hal ini dapat  diminimalkan  penyimpanan  standar asetosal  dalam  kondisi  tertutup  bebas  dari pengaruh kelembaban sekitar.

## Penentuan Linieritas
Linearitas suatu metode terjadi ketika adanya  hubungan  berbanding  lurus  antara konsentrasi  analit  dengan  respon  metode selama  dalam  jangkauan  kerja.  Linearitas menunjukkan  ketelitian  metode  analisis ketika harga R 2 lebih besar dari 0,997 (Chan dkk., 2004).
Penentuan linearitas dalam penelitian dilakukan dengan membuat variasi konsentrasi  larutan standar dari 2-10 mg/L. Berdasarkan hasil penelitian harga R 2 yang diperoleh  yaitu  sebesar  0,9967.  Hasil tersebut  mengindikasikan  bahwa  metode memiliki  tingkat  linearitas  yang  baik  pada jangkauan kerja atau range konsentrasi 2-10 mg/L.Data penentuan linearitas ditampilkan pada  Tabel  1.  Berdasarkan  Tabel  1  dibuat kurva  kalibrasi  yang  ditunjukkan  pada Gambar  3.  Persamaan  regresi  linear  yang diperoleh  tahap  ini  yang  digunakan  untuk penentuan  kadar  asetosal  tahap-tahap berikutnya.  Harga  slope  yang  diperoleh berdasarkan persamaan regresi linear yang diperoleh yaitu sebesar 0,0599 dan intersep sebesar 0,0116.
Tabel 1. Data pengukuran larutan standar asetosal dengan spektrofotometer UV
Konsentrasi (mg/L) Absorbansi Replikat 1 Absorbansi Replikat 2 Absorbansi Rata-rata Standar Deviasi (STD) 0 2 4 6 8 10 0,0000 0,1373 0,2769 0,3699 0,5021 0,5741 0,0000 0,1238 0,2612 0,3693 0,5044 0,6169 0,0000 0,1306 0,2691 0,3696 0,5032 0,5956 0,0000 0,0095 0,0111 0,0005 0,0016 0,0303
Nilai slope (gradien)  yang  diperoleh dari perhitungan mencerminkan sensitivitas dari metode. Semakin sensitif suatu metode analisis  maka  nilai  koefisien  relasi  semakin mendekati satu karena sensitivitas
menunjukkan rasio antara perubahan respon  alat  ukur  terhadap  perubahan konsentrasi analit yang diukur yang ditentukan oleh kemiringan atau slope grafik kalibrasi.

## Gambar 3. Kurva kalibrasi larutan standar asetosal

## Penentuan LoD dan LoQ
Limit  deteksi  adalah  jumlah  terkecil analit  dalam  contoh  yang  dapat  dideteksi yang  masih  memberikan  respon  signifikan dibandingkan  dengan  blanko  dan  berada pada  kondisi  yang  disepakati,  sedangkan limit kuantitasi adalah konsentrasi terendah analit  dalam  sampel  yang  dapat  ditentukan dengan  presisi  dan  akurasi  yang  dapat
diterima  dibawah  kondisi  yang  disepakati (Kantasubrata,  2008) . Penentuan  nilai LoD dan LoQ pada suatu metode analisis dapat dilakukan  menggunakan  dua  cara  yaitu penentuan  blanko  dan  kurva  kalibrasi. Penentuan blanko diterapkan ketika analisis blanko  memberikan  hasil  standar  deviasi tidak nol. LoD dinyatakan sebagai konsentrasi analit  yang sesuai dengan nilai
blanko sampel ditambah tiga standar deviasi dan LoQ adalah  konsentrasi  analit  yang sesuai dengan nilai blanko sampel ditambah sepuluh  standar  deviasi  seperti  yang ditunjukkan dalam persamaan (1) dan (2).
𝐿𝑜𝐷 = 𝑥 + 3𝑆𝑏 (1) 𝐿𝑜𝑄 = 𝑥 + 10𝑆𝑏 (2)
x adalah konsentrasi rata-rata blanko dan Sb adalah standar deviasi dari blanko. Sementara penentuan LoD dan LoQ secara kurva  kalibrasi  linear  diasumsikan  bahwa respon  instrumen  (y)  berhubungan  secara linier  dengan  konsentrasi  standar  (x)  untuk rentang  yang  terbatas  konsentrasi.  Hal  ini dapat  dinyatakan  dalam  model  persamaan
y=bx+a. Model ini digunakan untuk menghitung  sensitivitas  (b)  dan LoD dan LoQ (6). Oleh karena itu LoD dan LoQ dapat dinyatakan pada persamaan (3) dan (4).
LoD = S a b (3)
LoQ = 10S a b (4)
Sa  adalah  standar  deviasi  dan  b  adalah slope.
Perhitungan LoD dan LoQ pada penelitian  ini  didasarkan  pada  kurva  linear karena hasil standar deviasi analisis blanko bernilai nol. Data perhitungan LoD dan LoQ ditampilkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Data pengukuran LoD dan LoQ dengan penentuan kurva linear
x y y i y-y i (y-y i ) 2 0 2 4 6 8 10 0,0000 0,1306 0,2691 0,3696 0,5032 0,5956 0,0000 0,1314 0,2512 0,371 0,4908 0,6106 0,0000 -8,06 x10 -4 1,79 x 10 -2 -1,40 x 10 -3
1,24 x 10 -2
-1,50 x 10 -2 0,0000 6,50 x 10 -7
3,19 x 10 -4 1,95 x 10 -6
1,54 x 10 -4 2,26 x 10 -4
Langkah selanjutnya  yaitu menentukan nilai  S(y/x).  Nilai  S(y/x)  dicari  dengan menggunakan persamaan (5):
S = √ Σ(y−y i ) 2 n−2 (5)
Nilai LoD dan LoQ dicari dengan persamaan (3)  dan  (4).  Sehingga  diperoleh  nilai  S(y/x) sebesar  0,013257,  nilai LoD sebesar 0,663939  mg/L dan LoQ = 2,213131 mg/L.

## Penentuan Presisi
Presisi adalah ukuran yang
menunjukkan  kedekatan  antara  nilai  hasil pengukuran  dari  sampel  yang  homogen pada kondisi normal atau sampel yang sama diuji secara berurutan dengan menggunakan alat yang sama.
Pada  tahap  ini  penentuan  presisi dilakukan  dengan  mengukur  absorbansi sampel  pada  panjang  gelombang  optimum sebanyak  tujuh  kali  pengulangan.  Data penentuan presisi dapat dilihat pada Tabel 3. Persen  RSD  bernilai  lebih  dari  2%,  hal  ini menunjukkan  bahwa  metode  uji  tersebut memiliki  presisi  yang  tidak  baik.  Presisi dapat  ditentukan  berdasarkan  CV  Horwitz. Persen  CV  Horwitz  dapat  dihitung  dengan persamaan (6), sedangkan CV pengukuran bernilai  sama  dengan  %  RSD  atau  dapat dituliskan seperti pada persamaan (7).
% CV= 2 1-0,5logC (6)
% CV pengukuran = SD X x 100 %                   (7)
Tabel 3. Data penentuan presisi penentuan asetosal menggunakan spektrofotometri UV
Absorbansi Replikat 1 Absorbansi Replikat 2 Konsentrasi Replikat 1 (mg/L) Konsentrasi Replikat 2 (mg/L) 0,2831 0,2829 0,2829 0,3029 0,3028 0,2969 0,2959 0,2968 0,3162 0,3161 4,5326 4,5292 4,5292 4,8631 4,8614 4,7630 4,7462 4,7613 5,0851 5,0835 Rata-rata SD % RSD % CV 4,6631 0,1818 3,8990 12,6903 4,8878 0,1795 3,6722 12,6008
Presisi berdasarkan CV Horwitz masih dapat diterima  karena  %  RSD  nilainya  lebih  kecil dibandingkan dengan nilai % CV Penentuan Akurasi
Akurasi adalah ukuran yang menunjukkan derajat kedekatan hasil analis dengan kadar analit yang sebenarnya. Pada penelitian  ini,  penentuan  akurasi  dilakukan dengan melakukan  pengukuran  absorbansi larutan  standar  dengan  konsentrasi  6  mg/L sebanyak  lima  kali  pengulangan.  Data
pengukuran  akurasi  metode  penentuan asetosal  dengan  metode  spektrofotometri UV dapat dilihat pada Tabel 4.
Persen trueness yang diperoleh sebesar 93,88%  menunjukkan bahwa metode  analisis  yang  digunakan  memiliki akurasi yang baik. Hal tersebut berdasarkan nilai  akurasi  pada  rentang  kesalahan  yang diijinkan  pada  setiap  konsentrasi  analit dalam  matriks  0,001% <  A  ≤  0,1  %  yaitu sebesar 90-107 % (Harmita, 2004).
Tabel 4. Data pengukuran akurasi penentuan asetosal dengan metode spektrofotometri UV
n- Absorbansi Konsentrasi terukur (mg/L) Konsentrasi rata-rata (mg/L) % Trueness 1 2 3 4 5 6 0,155 0,155 0,155 0,155 0,155 0,155 5,6327 5,6327 5,6327 5,6327 5,6327 5,6327 5,6327 93,88

## Penentuan Ketidakpastian Pengukuran
Ketidakpastian atau uncertainty pengukuran  tidak  sama  dengan  kesalahan atau (error) .  Ketidakpastian  pengukuran dapat diminimalkan karena sudah diketahui sebelum dilakukan suatu pengukuran dengan  metode  analisis  tertentu.  Hasil pengukuran  tidak  berarti  tanpa  adanya perkiraan uncertainty .  Pengukuran  yang menghasilkan data reliable dan comparable sangat penting dalam pengambilan keputusan terkait spesifikasi produk.
Asetosal  merupakan  produk  obat yang  penggunaannya  sangat  luas,  bahkan asetosal  menjadi  pilihan  pertama  untuk mengatasi  rasa  sakit.  Ketepatan  dosis penggunaan  tidak  bisa  diabaikan,  kadar
asetosal harus diketahui secara tepat. Oleh karena  itu,  penting  dilakukan  perhitungan ketidakpastian pengukuran pada penentuan kadar  asetosal  dalam  sediaan  obat  seperti dalam  obat  sakit  kepala  menggunakan metode  spektrofotometri  UV  sehingga pernyataan hasil akhir pengukuran dinyatakan lengkap.
Penetapan  kadar  asetotal  dengan menggunakan  metode  spektrofotometri  UV yang  telah  dilakukan  memiliki  beberapa sumber ketidakpastian antara lain: sampling, spesifikasi  instrumen,  kemurnian  reagen dan zat standar, kesalahan acak ( repeatability , reproducibility ), personel, preparasi  contoh  uji,  kurva  kalibrasi  dan homogenitas  contoh.  Beberapa  sumber
ketidakpastian  tersebut  dirangkum  dalam diagram tulang ikan pada Gambar 3.
Data  sumber-sumber  ketidakpastian dan  konversi  ketidakpastian  baku  dari sumber-sumber  tersebut  disajikan  secara detail pada Tabel 5. Berdasarkan data nilai ketidakpastian baku yang diperoleh, selanjutnya dihitung ketidakpastian gabungan. Ketidakpastian gabungan diperoleh
dengan menggabungkan komponenketidakpastian baku dari masing- masing sumber.
Gambar 3. Diagram tulang ikan
Berdasarkan  Tabel  5  dapat  dihitung ketidakpastian kombinasi (µ c ). Ketidakpastian  kombinasi  dapat  dihitung dengan menggunakan persamaan (8).
μ C = kadar asetosal x √Σ ( μ x x ) 2 (8)
Ketidakpastian  kombinasi  yang  diperoleh yaitu sebesar 0,158175 mg/L.
Tahap  selanjutnya  setelah  diperoleh µc  dilakukan  perhitungan  ketidakpastian diperluas. Ketidakpastian diperluas merupakan hasil perkalian antara ketidakpastian  gabungan  (µg)  dan  faktor pencakupan  (k),  k  bernilai  2  atau  tingkat kepercayaan  95%.  Akhirnya  diperoleh  nilai ketidakpastian  diperluas  sebesar  0,316349 g/mL,  sehingga  dapat  dituliskan  hasil konsentrasi  asetosal  dalam  larutan  sampel yang  diukur  adalah  4,7755  ±  0,316349  ) g/mL. Sehingga keseluruhan hasil verifikasi metode analisis penetapan asetosal dengan menggunakan  spektrofotometri  UV  dapat dituliskan seperti pada Tabel 6. Berdasarkan data  Tabel  6  metode  spektrofotometri  UV yang digunakan untuk menentukan asetosal dalam tablet obat terverifikasi dengan baik.
Tabel 5. Konversi ketidakpastian pengukuran kadar
Sumber Ketidakpastian Nilai x Nilai μ x Nilai (μ x /x) Neraca Kemurnian standar
Kalibrasi alat volumetri Pipet ukur 1 mL Pipet ukur 5 mL Labu ukur 10 mL Labu ukur 50 mL Labu ukur 100 mL Labu ukur 250 mL Faktor Muai (Temperatur) Pipet ukur 1 mL
Pipet ukur 5 mL
Labu ukur 10 mL Labu ukur 50 mL Labu ukur 100 mL Labu ukur 250 mL Pengulangan pengukuran 0,025 g 99,91% 1 mL 5 mL 10 mL 50 mL 100 mL 250 mL 1 mL 5 mL 10 mL 50 mL 100 mL 250 mL 4,7755 mg/L 2,46 x 10 -5 g 5,20 x 10 -3 %
7,51 x 10 -4 mL
1,15 x 10 -3 mL
2,31 x 10 -2 mL
3,46 x 10 -2 mL
5,77 x 10 -2 mL 8,66 x 10 -2 mL
1,09 x 10 -2 mL 5,46 x 10 -2 mL
1,09 x 10 -1 mL
5,46 x 10 -1 mL
1,0900 mL 2,7280 mL 9,27 x 10 -2 mg/L 9,84 x 10 -4 5,20 x 10 -5 7,51 x 10 -4
2,30 x 10 -4
2,31 x 10 -3
6,92 x 10 -4 5,77 x 10 -4
3,46 x 10 -4 1,09 x 10 -2
1,09 x 10 -2
1,09 x 10 -2
1,09 x 10 -2
1,09 x 10 -2
1,09 x 10 -2
1,94 x 10 -2
Tabel 6. Data perbandingan antara kriteria penerimaan dan hasil validasi metode analisis
Parameter validasi  Nilai  yang diukur Nilai Kriteria Penerimaan Linearitas LoD LoQ Presisi Akurasi
R 2
LoD LoQ % RSD % CV Horwitz µG % Trueness 0,9967 0,0664 mg/L 2,2131 mg/L 3,7856 % 12,6456 % ± 0,3163g/mL (6,6 %) 93, 88% √ √ √ √ √

## SIMPULAN
Kesimpulan  yang  diperoleh  dalam penelitian  ini  adalah  nilai  parameter  uji validasi  yang  meliputi  linearitas,  LoD,  LoQ, presisi, akurasi dan estimasi  ketidakpastian pengukuran termasuk dalam kategori diterima,  dengan  nilai  secara  berurutan adalah  0,9967;  0,0664  mg/L;  2,2131  mg/L, 3,7856%; 93,88% dan ±0,3163g/mL.

## SARAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh dalam penelitian, disarankan dalam penentuan asetosal
menggunakan
spektrofotometri  UVdilakukan  pegulangan pengukuran secara tepat, karena pengulangan  pengukuran  ternyata  memiliki konstribusi  terbesar  dalam  penyumbang ketidakpastian pengukuran.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  penulis  tujukan kepada
Direktorat Penelitian
dan
Pengabdian  Masyarakat  Universitas  Islam Indonesia (DPPM UII) yang telah mendanai penelitian ini. Nomor surat kontrak penelitian 266a/ KaPro/ DIII. AK/60/XII/2016.

## DAFTAR PUSTAKA
Bharate,  S.  S.,  dan  Bharate,  S.  B.  2012. Spectrophotometric
and Chromatographic  Determination  of Acetylsalicylic  Acid  and  Caffeine  in Pure  and  in  Tablet  Dosage  Form. Journal of Advanced Scientific
Research . 3(1), 73-81.
Cemal, A., Ahmet, S., Ahmet, A., dan Yalcin,
O. H. G. 2008. Rapid and Simultaneous Determination of
Acetylsalicylic  Acid,  Parcetamol,  and Their  Degradation  and  Toxic  Impurity Products  by  HPLC  in  Pharmaceutical Dosage  Forms. Turkish  Journal  of Medical Sciences .38(2), 167-173.
Chan, C. C., Lee, Y. C., dan Zhang, X. 2004. Analytical  Method  Validation  and Instrumental Performance Verification .
Canada: Willey Intercine A. John Willy and Sons. Inc., Publication.
Gujarathi,  S.  C.  2010.  Simultaneous
Determination of Aspirin and
Ticlopidine in Combined Tablet Dosage from by First Order Derivative Spectroscopy,  Area  Under  Curve (AUC) and Ratio Derivative Spectrophotometric Methods. International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Research .3(1), 115-119. Harmita. 2004. PetunjukPelaksanaan Validasi  Metode  dan  Perhitungannya.
Majalah  Ilmu  Kefarmasian ,  1(3),  117- 135.
Kantasubrata,  J.  2008. Validasi  Metode .
Bandung: Pusat Penelitian LIPI.
Martos,  N.  R.,  Diaz,  M.  A.,  &  Navalon,  A.
2001. Spectrofluorimetric Determination  of  Acetylsalicylic  Acid and Codeine Mixtures in Pharmaceuticals. Anlytical  Letters . 34(4), 579-595.
Martos,  N.  R.,  Gomez,  A.  F.,  Diaz,  M.  .,  & Vallvey,  C.  L.    2001.  Application  of Liquid Chromatography to the Simultaneous Determination of Acetylsalicylic Acid, Caffeine, Codeine, Paracetamol, Pyridoxine and Thiamine in Pharmaceutical
Preparations. Journal of AOAC International .84(3), 676-683.
Mishra, P., & Archana, D. 2006. Simultanious Determination of Clopidogrel and Aspirin in Pharmaceutical Dosage Forms. Indian Journal of Pharmaceutical Sciences .68(3), 365-368.
Murtaza,  G.,  Khan,  S.  A.,  Shabbir,  A., Mahmood, A., Hasan, M. H., Farzana, K., … Hussain, I. 2011. Development of  a  UV-Spectrophotometric  Method for The Simultaneous Determination of Aspirin  and  Paracetamol  in  Tablets, Scientific  Research  Essays .6(2),  417- 421.
Szostak, R., & Mazurek, S. 2002. Quantitative Determination of Acetylsalicylic Acid and Acetaminophen  in  Tablets  by  FT-
Raman Spectroscopy. Analyst . 127(1), 144-148.