Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X

## RELAKSASI ILEUM YANG DIINDUKSI SEROTONIN

## RELAXES THE SEROTONIN INDUCED CONTRACTION OF ILEUM
Rulia Meilina 1* , Evi Depiana Gultom 2 , Rahma Dewi 3
1,3 Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Ubudiyah Indonesia
2 Fakultas Farmasi Institut Kesehatan Deli Husada
*Koresponding Penulis: 1 rulia.meilina@uui.ac.id , 2 evidepiana1@gmail.com , 3 Rahmadewy09@gamil.com

## Abstrak
salah  satu  penyebab  terjadi  IBS  karena  terjadi  ketidakseimbangan  fungsi  serotonin.  Serotonin. Banyak  ditemukan  di  saluran  gastrointestinal.   Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek relaksi  fraksi  daun  belimbing  wuluh  pada  otot  polos  ileum  yang  diinduksi  serotonin  pada reseptor   5HT 3 .  Efek  relaksasi  Fraksi  n-Heksan  daun  belimbing  wuluh  (FnHDBW),  fraksi  etil asetat daun belimbing wuluh (FEADBW)  dan  Fraksi sisa (FSDBW) dikontraksikan dengan se ri konsentrasi  serotonin   (10 -8 M  sampai  3x10 -4 M)  dilakukan  secara  in  vitro  menggunakan  organ ileum  tikus  yang  diisolasi  dalam  larutan  tirode.  FEADBW  memiliki  nilai  persen  relaksasi  dan nilai  AUC  yang  paling  tinggi  dibandingakn  dengan   FnHDBW  dan   FSDBW  yaitu  sebesar 80,01±1,57%  dan  309,8278  ±  3,2527.  Kesimpulan  penelitian  ini,  FnHDBW,  FEADBW  dan FSDBW memiliki efek reaksasi yang diinduksi oleh serotonis (5HT).
Kata Kunci: serotonin, 5HT 3 , daun belimbing wuluh

## Abstract
One of the causes of IBS is an imbalance in serotonin function. Serotonin. Many are found in the gastrointestinal  tract.  The  study  was  aimed  to  investigate  the  relaxation  effect  of  Averrhoa bilimbi  fractions      serotonin  (5HT)  -induced  contraction  of  the  Serotonin-3  (5HT 3 )  receptor. Relaxation  effect  of  n-hexane  fraction  of  Averrhoa  bilimbi  leaves  (FnHDBW),  ethyl  acetate fraction of Averrhoa bilimbi leaves (FEADBW) and aqueous fraction (FSDBW) were contracted with serotonin concentration series (10-8 M to 3x10-4 M) carried out in vitro using an organ. rat ileum isolated in a tirode solution. FEADBW has the highest percentage relaxation value and AUC value compared to FnHDBW and FSDBW, namely 80.01 ± 1.57% and 309.8278  ± 3.2527. The conclusion  of  this  study,  FnHDBW,  FEADBW  and  FSDBW  have  serotonic-induced relaxation effects (5HT).
keywords: serotonin, 5HT 3, Averrhoa bilimbi

## PENDAHULUAN
Belimbung  wuluh  dengan  nama  spesies Averrhoa  bilimbi L.  merupakan  tanaman  yang banyak dijumpai di daerah Indonesia. Tanaman belimbing wuluh dikenal sebagai tanaman obat.
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
Bagian  yang  digunakan  diantaranya  bagian  bunga,  buah,  dan  daun.  Daun  belimbing  wuluh mengandung  metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  glikosida,  saponin,  Steroid/  triterpenoid  dan tanin  (Dalimarta,  2008).  Daun  belimbing  wuluh  memiliki  banyak  khasiat  pengobatan  seperti pengobatan  antiinflamasi  (Meilina,  Vamila,  &  Suanda,  2020).  Selain  itu  daun  belimbing wuluh juga memiliki efek relaksasi otot polos ileum marmut terisolasi yang diinduksi asetilkolin (Sari, 2015).  Pada  penelitian  (meilina,  Suwarso,  &  Dalimunthe,  2018)  bahwa  ekstrak  etanol  daun belimbing   wuluh   memiliki   efek   relaksasi   terhadap   ileum   tikus.   Hasil   penelitian   juga menunjukkan  bahwa  daun  belimbing  wuluh  berkhasiat  sebagai  antibakteri,  Anti  diabetes, antihipertensi  dan  berkhasiat  untuk  mengobati  penyakit  yang  disebbakn  oleh  gangguan  pada saluran gastrointestinal seperti Irritable Bowel Syndrome (IBS) (Zakaria,  Zaitun, Henie, Jais, & Zainuddin, 2007).
Irritable  Bowel  Syndrome (IBS)  merupakan  gangguan  sistem    gastrointestinal  bersifat kronis   yang  ditandai  oleh  nyeri  atau  sensasi  tidak  nyaman  pada  abdomen,  kembung  dan perubahan kebiasaan buang air besar. IBS kumpulan dari gangguan yang melibatkan diare (IBS- D),  sembelit  (IBS-C),  atau  gejala  bergantian  (Camelleri,  2009).  Diare  merupakan  kondisi ketidakseimbangan  absorpsi  dan  sekresi  air  dan  elektrolit.  Salah  satu  manifestasi patofisiologis diare  meningkatnya  motilitas  usus  akibat  kontraksi  otot  polos  usus  (Spruil  &  Wade,  2008). Tingginya morbiditas dan mortalitas diare menjadi perhatian utama pemerintah untuk melakukan penanganannya (Organization, 2012)
Beberapa  penelitian  menunjukkan  salah  satu  penyebab  terjadi  IBS  karena  terjadi ketidakseimbangan  fungsi  serotonin   (Vahedi,  Ansari,  Mir,  &  Jatzri,  2010).  Serotonin  atau  5- Hidroksitriptamin  (5-HT)  merupakan  neurotransmiter.  Serotonin  ditemukan  di  Gastrointestinal dan SSP. Sekitar 95% serotonin pada tubuh manusia ditemukan di dalam usus dan 5% ditemukan di  otak    (Sikander,  Rana,  &  Prasad,  2009). Sumber serotonin berasal  dari  triptofan  terdapat  di dalam makanan. Serotonin terlibat dalam beberapa penyakit seperti depresi kecemasan, migrain, sembelit, diare, mual dan muntah (Pytliak, Vargova, Mechirova, & Felsoci, 2011).
Serotonin  merupakan  satu  dari  neurotransmitter  yang  terlibat  dalam  peningkatan  motilitas  usus melalui  kontraksi  dan  relaksasi  otot  polos  usus  (Ikawati,  2006).  Serotonin  dapat  menimbulkan sejumlah  tindakan  pada  sel  dan  jaringan  di  dalam  usus,  termasuk  sekresi  epitel,  aktivasi  otot polos,  stimulasi  saraf  ekstrinsik  dan  intrinsik  dan  aktivasi  neuron  kolinergik  sehingga  terjadi kontraksi otot polos (Costedio, Hyman, & Mawe, 2007). Pelepasan serotonin yang sangat tinggi dapat menyebabkan diare (Bertrand & Bertrand, 2009) hal ini sesuai pada penelitian (Dunlop, et al., 2005) yang menyimpulkan 5-HT meningkat pada diare dan menurun pada sembelit.

## METODE PENELITIAN

## Bahan Penelitian
daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L). Bahan-bahan kimia yang digunakan adalah etanol 96%, n -heksanetil asetat, aquadest, larutan tirode, gas karbogen mengandung 95% oksigen dan 5% karbondioksida (PT. Tri Gas), 5-hidroksitriptamin/serotonin (Shanghai Yuanye), dimetil sulfoksida / DMSO (Merck).

## Pembuatan Fraksi dari ekstrak etanol daun belimbing wuluh
Sebanyak 20 g ekstrak etanol daun belimbing wuluh (EEDBW) dilarutkan dalam etanol 96% sampai  larut  kemudian  ditambahkan  40  ml  air  suling  dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah,  lalu
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
ditambahkan  100  ml n -heksan,  dikocok  dan  didiamkan  sampai  terdapat  2  lapisan  yang terpisah (±  30  menit).  Lapisan  n-heksan  (lapisan  atas)  diambil  dengan  cara  dialirkan  dan  fraksinasi dilakukan  sampai  lapisan  n-heksan  memberikan  hasil  negatif  dengan  pereaksi  LB.  Lapisan  n- heksan  yang  dikumpulkan  dipekatkan  dengan rotary  evaporator sehingga  diperoleh  Fraksi  n- heksan   daun   belimbing  wuluh   (FnHDBW).   Kemudian   pada  residu   ditambahkan   100   ml etilasetat,  dikocok  dan  didiamkan  sampai terdapat 2  lapisan  yang terpisah  (±  30 menit), lapisan etilasetat (lapisan atas) diambil dengan cara dialirkan dan fraksinasi dilakukan sampai memberikan hasil negatif dengan pereaksi FeCl 3 . Lapisan etilasetat yang diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator sehingga   diperoleh   fraksi   etil   asetat   daun   belimbing   wuluh (FEADBW). Lapisan  air  (sisa)  diambil  dan  dipekatkan  dengan rotary  evaporator sehingga didapat fraksi sisa (Bassett, Denny, Jeffrey, & Mendham, 1994).

## Preparasi organ
Tikus jantan ditimbang dan dikorbankan dengan cara dislokasi leher. Dilakukan pembedahan pada  bagian  abdomen.  Kulit  bagian  abdomen  dipotong  dan  diambil  bagian  ileum  kemudian direndam  dengan  larutan  tirode.  Usus  dibersihkan  dari  lapisan mesenteric yang  melindunginya, kemudian   dipotong   segmen   usus   bagian   bawah   yang   mendekati caecum sepanjang 2-3 cm, selanjutnya kedua ujung potongan usus diikat dengan benang pada arah yang berlawanan.  Benang  bagian  bawah  ileum  diikatkan  pada  batang  penahan  jaringan  dan  benang bagian  atas  ileum  dihubungkan  ke  transduser.  ileum  dimasukkan  ke  dalam organ  bath yang berisi  larutan  tirode,  dengan  suhu  larutan dipertahankan  37°C  sambil  diaerasi  dengan  karbogen secara   terus   menerus.   Jaringan   yang   telah   terisolasi   diinkubasi   selama   30   menit   dengan pergantian  larutan  tirode  setiap  10  menit.  Dibiarkan  beberapa  saat  sampai  kondisi  ritmik  yang optimal (Vogel, Bernward, Jurgen, Gunter, & Wolfgang, 2002).

## Pengujian  efek  relaksasi  fraksi  dari  daun  belimbing  wuluh  pada  otot  polos  ileum  yang dikontraksikan dengan serotonin
Ileum  tikus  dikondisikan  dengan  larutan  tirode  dalam organ  bath yang  terhubung  pada transduser  isometrik.  Ileum  dikontraksikan  dengan  larutan  serotonin  EC 80 sehingga  diperoleh konsentrasi submaksimum yang stabil kemudian diberikan konsentrasi bertingkat dari fraksi dari daun belimbing wuluh  (0.5–4 mg/mL) (Pang, Xu, Zhang, Zheng, & Qu, 2002).

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini  adalah  data  kontraksi  atau  relaksasi  otot  polos ileum  tikus  pada  LabChart.  Selanjutnya,  dibuat  grafik  hubungan  antara  konsentrasi  terhadap  % respon. Nilai EC 80 (konsentrasi agonis yang dapat menghasilkan respon sebesar 80% dari respon maksimum) agonis reseptor, dihitung berdasarkan grafik hubungan konsentrasi terhadap % respon. Selanjutnya, data disajikan dalam bentuk tabel dan nilai rata-rata ± SEM  (Standar Error mean). Data  %  relaksasi  dianalisis  secara  statistik  dengan  menggunakan  uji  ANOVA  dan  dilanjutkan dengan post hoc test Tukey HSD.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Pengujian  Efek  Relaksasi  Fraksi  Daun  belimbing  wuluh  Pada  Otot  Polos  Ileum Tikus yang dikontraksikan dengan Serotonin
Pengujian  kontraksi  otot  polos  ileum  tikus  terisolasi  dengan  penambahan  konsentrasi bertingkat  serotonin      (10 -8 M  sampai  3x10 -4 M)  dilakukan  untuk  mendapatkan effective concentration (EC 80 ) serotonin yang selanjutnya  akan digunakan untuk pengujian efek relaksasi fraksi daun belimbing wuluh.  Hasil pengujian kosentrasi serotonin diperoleh data hasil penguian yang dilakukan oleh  (meilina, Suwarso, & Dalimunthe, 2018) yaitu sebesar 1,158 x10 -6 M.
Pengujian  efek relaksasi   fraksi n -heksan,  fraksi etil asetat  dan fraksi  sisa  daun  belimbing wuluh terhadap otot polos ileum tikus terisolasi dilakukan dengan cara mengontraksikan otot polos ileum tikus dengan serotonin 1,158x 10 -6 M  lalu dilanjutkan dengan pemberian masing- masing seri  konsentrasi  ekstrak  dan  fraksi  daun belimbing wuluh  0,5- 4  mg/mL.  Efek  relaksasi ekstrak dan fraksi diamati melalui pengamatan terhadap perubahan % efek relaksasi ekstrak dan fraksi pada organ ileum (Gambar 1)
100 % 90
80 R 70 e 60 l 50 a 40 k 30 s 20 a 10 s 0 i 1            2            3            4            5            6            7            8 Konsentrasi (mg/ml) FnHDPT FEADPT FADPT
Gambar 1. Grafik % relaksasi setelah pemberian seri konsentrasi fraksi daun belimbing wuluh pada otot polos ileum tikus terisolasi yang dikontraksikan dengan serotonin 1,158x 10 -6 M (rerata ± SEM, n = 3).
Pemberian  seri  konsentrasi ekstrak  dan  fraksi  daun  belimbing wuluh  menghasilkan efek relaksasi terhadap kontraksi otot polos ileum tikus yang diinduksi oleh serotonin 1,158x 10 -6 M. Hasil uji ANOVA % relaksasi FnHDBW, FEADBW, dan FSDBW pada konsentrasi 0,5 - 4 mg/ml, dengan  n  =  3,  diperoleh  nilai  signifikansi  0,00  yang artinya  terdapat  perbedaan  yang bermakna antara  masing-masing  data  ekstrak  dan  fraksi.  Efek  relaksasi  maksimum  ditunjukkan  oleh FEADBW konsentrasi 2,5 mg/ml (100±0,00 %). Pada konsentrasi 4 mg/ml  FnHDBW dan FADBW menunjukkan efek relaksasi masing-masing sebesar 80,01±1,57% dan 73,20±2,15%. Efek  relaksasi  ekstrak  dan  fraksi  juga  diuji  dengan  membandingkan  nilai  total  AUC  dari EEDBW, FnDBW, FEADBW dan FSDBW pada konsentrasi 0,5 sampai 4 mg/ml (Gambar 2).
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
350.0000 300.0000 250.0000 200.0000 150.0000 309.8278 100.0000 193.6985 50.0000 0.0000 169.8057 FnHDBW FEADBW FADBW
Gambar 2. Grafik AUC % relaksasi total seri konsentrasi ekstrak dan fraksi daun belimbing wuluh (0,5 - 4 mg/ml) pada otot polos organ ileum tikus terisolasi yang dikontraksikan dengan serotonin  1,158x 10 -6 M. (rerata AUC ± SEM, n = 3)
Nilai  AUC  diuji  secara  statistik  dengan  ANOVA  dan  dilanjutkan  dengan post  hoc  test Tukey  HSD,  diperoleh  nilai  AUC  tertinggi  pada  FEADBW  sebesar  309,8278  ±  3,2527  yang berbeda  signifikan  dengan  EEDBW,  FnHDBW  dan  FSDBW.  Nilai  AUC  diuji  secara  statistik dengan ANOVA dan dilanjutkan dengan post hoc test Tukey HSD, diperoleh nilai AUC tertinggi pada FEADBW sebesar 309,8278 ± 3,2527 yang berbeda signifikan dengan EEDBW, FnHDBW dan  FSDBW.  Dari  hasil  data  relaksasi  dan  nilai  AUC  ,  menunjukkan  bahwa  FEADB  dapat dikatakan  memiliki  efek  relaksasi  yang  paling  tinggi  terhadap  kontraksi  otot  polos  ileum  tikus yang diinduksi serotonin dibandingkan dengan FnHDBW dan FADBW.
Tumbuhan  tradisional  yang  kaya  flavonoid  dan  gugus  fenol  dapat  digunakan  sebaga vasorelaksasi  (Torres, et al., 2011).  Flavonoid diketahui dapat menimbulkan efek relaksasi pada otot polos  (Carron, et al.). Beberapa senyawa dilaporkan memiliki efek relaksasi otot polos pada reseptor    muskarinik,    seperti    falvonoid    (Harahap,    Yuliasmi,    Husori,    &    Ernawaty,    2015). Flavonoid  memiliki  penghambatan  kontraksi  pada  otot  polos  kandung  kemih  (Villetti,  et  al., 2010).  Flavonoid memiliki aktivitas antagonis pada reseptor M 3 (Patil, Ahale, & Surana, 2011). Steroid  saponin  dapat  menghambat  asma  bronkial  melalui  penghambatan  pelepasan  mediator seperti prostaglandin, histamin, serotonin dan bradikinin   (Speroni, et al., 2005). Tanin berperan dalam  menurunkan  tekanan  darah  dan  relaksasi  pada  otot  jantung  yang  terisolasi  (Khan  dan gilani,  2008).  Berdasarkan  data  hasil  penelitian  (meilina,  Suwarso,  &  Dalimunthe,  2018)  daun belimbing wuluh mengandung metabolit sekunder  golongan flavonoid, tanin,  glikosida, saponin dan  steroid/triterpenoid.   Relaksasi  otot  polos  diketahui  terjadi  setelah uptake Ca 2+ intraseluler menuju  retikulum  sarkoplasma  dan  melalui  pengeluaran  Ca 2+ ke  ekstraseluler  (efluks)  yang menyebabkan  kadar  Ca 2+ intraseluler  menurun  drastis  sehingga  menghambat  pembentukkan kompleks  kalsium-kalmodulin  yang  diperlukan  untuk  kontraksi.  Kemungkinan  daun  belimbing wuluh bekerja mempengaruhi proses uptake Ca 2+ intraseluler menuju calcium store di retikulum
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
sarkoplasma dan mempengaruhi proses efluks Ca 2+ . Seperti yang diketahui kontraksi otot polos ditentukan  oleh  konsentrasi  Ca 2+ dalam  sitosol.  Peningkatan  konsentrasi  Ca 2+ dalam  sitosol
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
dicapai  melalui  pelepasan  Ca 2+ dari  retikulum  sarkoplasma  dan  melalui  influks  Ca 2+ (Bazzazi, Kargacin,  &  Kargacin,  2003).  Peningkatan  kadar  kalsium  membentuk  kompleks  kalsium- kalmodulin  yang  akan  mengaktifkan myosin  light  chain  kinase (MLCK).  Hasil  aktivasi  MLCK akan membentuk ikatan silang anatara aktin dan  miosin yang menyebabkan kontraksi otot polos (Harahap, et al., 2017).

## DAFTAR PUSTAKA
Bassett,  J.,  Denny,  R.  C.,  Jeffrey,  G.  H.,  &  Mendham,  J.  (1994). Buku  Ajar  Vogel:  Kimia Analisis Kuantita tif Anorganik. (Vol. 4). Jakarta: EGC.
Bazzazi, H., Kargacin, M. E., & Kargacin, G. J. (2003). Ca2+ Regulation in the Near-Membrane Microenvironment in Smooth Muscle Cells. 85, 1754-1765.
Bertrand, P. P., & Bertrand, R. L. (2009). Serotonin Release and Uptake in The Gastrointestinal Tract. .
Camelleri, M. (2009). Serotonin In The Gastrointestinal Tract. . 16(1): 53–59.
Carron,  R.,  Sanz,  E.,  Puebla,  P.,  Martin,  M.  L.,  Roman,  L.  S.,  &  Guerrero,  M.  F.  (n.d.).
Mechanisms  of  Relaxation  Induced  by  Flavonoid  Ayanin  in  Isolated  Aorta  Rings  from Wistar Rats. 41(1): 1-7.
Costedio,  M.  M.,  Hyman,  N.,  &  Mawe,  G.  M.  (2007).  Serotonin  And  Its  Role  In  Colonic Function And In Gastrointestinal Disorders. Vol. 50, No. 3.
Dalimarta, S. (2008). Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid 5. Jakarta: Pustaka Bunda .
Dunlop,  S.  P.,  Coleman,  N.  S.,  Blakshaw,  P.  W.,  Perkin,  A.  C.,  Singht,  G.,  &  Marsden,  C.  A.
(2005).  Abnormalities    Of    5-Hydroxytryptamine    Metabolism    In    Irritable    Bowel Syndrome. Clin Gastroenterol Hepato, 3:349–357. [PubMed: 15822040].
Harahap, U., Husori, D. I., Mariane, Yuliasmi, S., Patilaya, P., & Laila, L. (2017). Inhibitory Effect of  Ethanolic  Extract  of  Curanga  Fel-Terrae  (Pugun  Tano)  Leaves  on  Acetylcholine Muscarinic-3 Receptors Induced on Isolated Guinea Pig Tracheal. Vol 10, (Issue 1).
Harahap,  U.,  Yuliasmi,  S.,  Husori,  D.  I.,  &  Ernawaty.  (2015). Sistem  Saraf  Perifer  dan Kontribusi  Bahan  Alam  Untuk  Memahami  Fungsi  dan  Mekanismenya. Medan:  USU Press.
Ikawati,  Z.  (2006). Pengantar  Farmakologi  Molekuler. Yogyakarta:  Gajah  mada  University Press.
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
meilina, r., Suwarso, E., & Dalimunthe, A. (2018). RELAXATION EFFECT OF  ETHANOLIC EXTRACT  OF  AVERRHOA  BILIMBI  L.  LEAVES  ON  ILEUM. Asian  journah  of pharmaceutical and clinical research , 135-137.
Meilina,  R.,  Vamila,  p.  M.,  &  Suanda,  J.  (2020).  Anti-inflammatory effect  of  ethanolic  extract gel  of  Averrhoa  bilimbi  L.  leaves. AIP  conference  Proceeding.  2291,  Issue  1. AIP conference Proceeding.
Organization,  W.  G.  (2012). Acute  Diarrhea  In  Adults  And  Children:  A  Global  Perspective. World Gastroenterology Organisation Global Guidelines.
Pang, J. J., Xu, X.  B.,  Zhang, X. Y., Zheng, T.  Z., & Qu, S. Y. (2002). Inhibition of β-estradiol on Trachea Smooth Muscle Contraction in vitro and in vivo (Vols. 23 (3), 273-277). Acta Pharmacol. Sin.
Patil,    D.    S.,    Ahale,    S.    V.,    &    Surana,    S.    J.    (2011).    Evaluation    of    antiasthmatic    and antianaphylactic activity of Balanites aegyptiaca (Delile), (Balanitaceae). 4(1):52-5.
Pytliak,  M.,  Vargova,  V.,  Mechirova,  V.,  &  Felsoci,  M.  (2011).  Serotonin  Receptors  –  From Molecular Biology to Clinical Applications. 60: 15-25.
Sari, P. D. (2015). Efek Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh  (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Kontraksi  Otot  Polos  Ileum  Marmut  Jantan  (Cavia  porcellus)  Terisolasi. Medan: Universitas Sumatera Utara.
Sikander, A., Rana, I. S., & Prasad, K. K. (2009). Role of Serotonin in Gastrointestinal Motility and Irritable Bowel Syndrome.
Speroni,  E.,  Cervellati,  R.,  Innocenti,  G.,  Costa,  S.,  Guerra,  M.  C.,  &  Dall,  A.  (2005).  Anti - inflammatory,  anti-nociceptive  and  antioxidant  activities  of  Balanites  aegyptiaca  (L.) Delile. 98(1-2):117-25.
Spruil,  W.  J.,  &  Wade,  W.  E.  (2008). Diarrhea,  Constipation,  And  Irritable  Bowel  Syndrome. Dalam: Dipiro, J.T. (Vol. Edisi VII. ). New York: Pharmacotherapy A Pathophysiologic Approach.
Torres,  P.  M.,  Figueroa,  M.,  Hernandez,  A.,  Ibarra,  B.  M.,  Navarrete,  V.  G.,  &  Estrada,  S.  S. (2011). Vasorelaxant effect of flavonoids through calmodulin inhibitor: ex vivo, in  vitro, and in silico approaches. 19: 542-546.
Vahedi, H., Ansari, R., Mir, N. M., & Jatzri, E. (2010). ). Irritable Bowel Syndrome: A Review Article.
Villetti, G., Pastore,  F.,  Bergamaschi, M., Bassani,  F.,  Bolzoni, P. T., & Battipaglia,  L. (2010). Bronchodilator             activity            of             (3R)-3-[[[(3-             fluorophenyl)[(3,4,5-
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 7 No. 1 April 2021 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
trifluorophenyl)methyl]amino] carbonyl]oxy]-
1-[2-oxo-2-(2-thienyl)ethyl] -1-
azoniabicyclo[2.2.2]octane  bromide  (CHF5407),  a  potent,  long-acting,  and  selective muscarinic M3 receptor antagonist. 335 (3) .
Vogel,  H.  G.,  Bernward,  A.  S.,  Jurgen,  S.,  Gunter,  M.,  &  Wolfgang,  F.  V.  (2002). Drug Discovery  and  Evaluation:  Pharmacological  Assays. Germany:  SpingerVerlag  Berlin Heidelberg.
Zakaria,  Z.  A.,  Zaitun,  H.,  Henie,  E.  K.,  Jais,  M.  A.,  &  Zainuddin,  E.  (2007).  In  Vitro Antibakterial Activity of Averrhoa bilimbi Leaves and Fruits Extrats. . 2(3) .