## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETIL ASETAT BIJI TERATAI (Nymphaea pubescens Willd) AKIBAT PEMANASAN

## The Effect of Heating  Temperature  on Antibacterial Activity of Water Lily
(Nymphaea pubescens Willd) Seed Ethyl Acetate Extract

## Yuspihana Fitrial
Fakultas Perikanan Universitas Lambung Mangkurat, Banjarmasin 70123
Korespondensi: Jl. A. Yani Km. 36  Banjarbaru, Kalimantan Selatan 70714 email: yuspis@yahoo.com

## Abstract
The purposes of this study were to evaluate  the in uence of heating temperature, 100 ˚C and 121 ˚C (the autoclave temperature) on antibacterial activity and stability of water lily seed ethyl acetate extract. Research was initiated with water lily seed extract using multistage maceration extraction method based on solvent polarity level. Extraction  stages  beginning  with  a  solvent  hexane  (non  polar),  then  with  ethyl  acetate  (semi-polar)  so  that  the obtained ethyl acetate extract. In ethyl acetate extracts were subjected to heating at 100 ˚C and 121 ˚C. Each extract that has been treated, tested for antibacterial activity with tested bacteria E . coli and S. Typhimurium by using agar well diffusion method.  Observations  on  the stability of fractions contained  in the ethyl acetate extract from  the treatment given, performed by using TLC (Thin Layer Chromatographi) with a mobile phase of hexane and ethyl acetate (7:3). The activities of each fraction were tested quantitatively by agar well diffusion method. Based on the results of these studies showed that heating affect  the antibacterial activity of ethyl acetate extracts. The higher the temperature, decreased antibacterial activity, however at a temperature of 121 ˚ C,  ethyl acetate extracts still have antibacterial activity. The process of heating effect on the stability of the ethyl acetate extract fractions. The fractions  that too act as an antibacterial were 5 and 6 that relatively more polar than the fraction of 7,8,9,10 and 11. The both fractions was not  stable against heating temperature of 100 ˚C and 121 ˚C.
Key words: antibacterial, ethyl acetate extract, fraction, temperature

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  pengaruh  pemanasan  suhu  100  ˚C  dan  suhu  autoklaf  121  ˚C terhadap aktivitas antibakteri dan kestabilan dari ekstrak etil asetat biji teratai. Tahapan ekstraksi diawali dengan menggunakan pelarut heksana (tidak polar), selanjutnya dengan etil asetat (semi polar). Ekstrak etil asetat diberi perlakuan  pemanasan  pada  suhu  100  ˚C,  121  ˚C  dengan  autoklaf.  Ekstrak  yang  telah  diberi  perlakuan,  diuji aktivitas antibakteri dengan bakteri uji Escherichia coli dan S. typhimurium dengan menggunakan metode difusi agar. Kestabilan fraksi-fraksi yang terdapat pada ekstrak etil asetat akibat perlakuan yang diberikan diuji dengan TLC ( Thin Layer Chromatographi ) dengan fase gerak heksana dan etil asetat (7:3). Proses pemanasan berpengaruh terhadap aktivitas antibakteri. Semakin tinggi suhu maka aktivitas antibakteri semakin menurun, meskipun pada suhu 121˚C masih memiliki aktivitas antibakteri. Proses pemanasan berpengaruh terhadap kestabilan fraksi ekstrak etil asetat biji teratai. Fraksi dari ekstrak etil asetat yang berperan sebagai antibakteri diantaranya adalah fraksi 5 dan 6 yang relatif lebih polar dibandingkan fraksi 7,8,9,10 dan 11 dan kedua fraksi ini relatif tidak stabil terhadap pemanasan suhu 100˚C dan 121˚C.
Kata kunci : antibakteri, ekstrak etil asetat, fraksi, suhu

## PENDAHULUAN
Teratai  merupakan  tanaman  air  yang  banyak tumbuh secara alami di perairan rawa dan sungai yang tidak begitu dalam dan berair tenang.  Bagian tanaman teratai yang dapat dimanfaatkan sebagai bahan  makanan  adalah  bunga,  biji,  batang  dan umbinya,  Penduduk, di daerah Hulu Sungai Utara
lebih banyak memanfaatkan bijinya.
Biji  buah  teratai  oleh  penduduk  setempat dijadikan tepung untuk membuat kue atau dijadikan sebagai  sumber  karbohidrat  pengganti  beras  saat paceklik.  Berdasarkan  hasil  penelitian  Khairina dan Fitrial (2002) diperoleh hasil bahwa dari setiap rumpun  teratai  rata-rata  terdapat  5,3  buah  teratai
tua  yang  menghasilkan  63,10  gram  biji  teratai kering.  Biji  teratai  kering  inilah  yang  kemudian dikupas  kulitnya  dan  dijual  di  pasar.    Luas  rawa di Kalimantan Selatan sangat memungkinkan biji teratai  dijual  di  pasar  tradisional  dengan  harga yang hampir sama dengan beras.
Biji  teratai  merupakan  sumber  karbohidrat (88,36%  bk),  kadar  proteinnya  relatif  tinggi (10,39%  bk)  dan  asam  amino  esensial  yang lengkap,  kadar  lemaknya  rendah  (0,58%  bk) dengan  asam  lemak  utamanya  adalah  linoleat dan stearat, selain itu  kadar seratnya yang cukup tinggi  (7,98%  bk)  merupakan  sumber  serat  yang baik  (Fitrial et  al .  2008).  Biji  teratai  diketahui memiliki  khasiat  meningkatkan  fungsi  hati  dan limfa, memperbaiki stamina, membuat awet muda dan menyembuhkan diare dan disentri.
Biji  teratai  memiliki  aktivitas  antidiare secara in  vitro (Fitrial et  al .  2008).  Komponen  tokimia  yang  terdapat  pada  biji  teratai  adalah alkaloid,   avonoid,  steroid,  glikosida,  saponin, tanin  dan  triterpenoid.  Ekstrak  etil  asetat, merupakan  ekstrak  yang  paling  tinggi  aktivitas antibakterinya  dibandingkan  ekstrak  heksana dan  etanol,  mengandung  alkaloid,  glikosida, tanin,   avonoid,  saponin  dan  triterpenoid, (Fitrial et al . 2008). Ekstrak etil asetat biji teratai tersebut  tidak  menghambat  pertumbuhan  bakteri menguntungkan  yaitu Lactobacillus sp.  dan Bi dobacterium bi dum .
Bahan  pangan  yang  mengandung  komponen  tokimia  dan  memiliki  aktivitas  antimikroba dikonsumsi  dalam  kondisi  sudah  dimasak, tetapi  kondisi proses pengolahan mempengaruhi aktivitas  antimikroba  dari  beberapa  senyawa aktif.  Beberapa  hasil  penelitian  menunjukkan bahwa terjadi perubahan aktivitas setelah melalui proses  pengolahan.  Menurut  Yuan et  al. (2009) kecuali  pengukusan,  metode  pemasakan  seperti mikrowave, perebusan, penggorengan dan penggorengan  yang  disertai  dengan  perebusan berpengaruh  terhadap  komponen  aktif  yang terdapat  pada  brokoli  (kloro l,  protein  terlarut, gula terlarut, vitamin C dan glukosinolat). Bumbu gulai yang merupakan campuran beberapa bahan yang  diketahui  memiliki  aktivitas  antimikroba
yaitu  bawang  merah,  bawang  putih,  lengkuas, jahe,  kunyit,  cabe  merah,  ketumbar,  serai,  adas, jinten,  cengkeh,  kayumanis,  kapulaga,  aktivitas antimikrobanya  mengalami  penurunan  terhadap total  mikroba, B.  cereus setelah  diberi  perlakuan pendidihan dan otoklaf  dan semakin tinggi suhu serta  lamanya  waktu  pemanasan  dibandingkan bumbu  segarnya  (Rahayu  dan  Raharjanti  2000). tetapi  terhadap S.  aureus aktivitasnya  justru meningkat.
Beberapa  bahan  aktif  dari  beberapa  ekstrak tumbuhan  yang  terbukti  memiliki  aktivitas antimikroba tidak mengalami penurunan aktivitas akibat  proses  pemanasan  yaitu  ekstrak  etil asetat  kecombrang  terhadap  pemanasan  suhu 80  dan  100  °C  dan  121  °C  (terhadap Bacillus cereus,  Listeria  monocytogenes,  Staphylococcus aureus,  Salmonella  typhimurium,  Pseudomonas aeroginosa,  Escherichia  coli dan Aeromonas hydrophila )  (Naufalin et  al. 2006),  ekstrak kloroform  (yang  mengandung  tanin,  saponin, alkaloid,   avonoid  dan  sesquiterpen)  dari tumbuhan  polygonaceae  yang  dipanaskan  pada suhu 4, 30, 60 dan 100 ˚C (Salama dan Marraiki 2010), ekstrak aseton dan etanol Tamarindus indica yang  mengandung  tanin,  saponin,  sesquiterpene, alkaloid,  dan  phlobatamin  yang  dipanaskan  pada suhu 4 o C,  30 o C,  60 o C dan  100 o C (terhadap S. aureus , Bacillus  subtilis,  Salmonella  paratyphi, dan Salmonella typhi) (Doughari 2006), demikian pula  pada  ekstrak  air  dari  daging  buah T.  indica terhadap S. typhimurium (Jadhav et al 2010) .
Beberapa  hal  yang  dapat  mempengaruhi aktivitas  antimikroba  selama  proses  pengolahan bahan  pangan  adalah  adanya  udara,  suhu, komposisi pangan, waktu pengolahan (Chipurura dan  Muchuweti  2010).  Tujuan  penelitian  adalah menentukan  pengaruh  pemanasan terhadap kestabilan fraksi etil asetat biji  teratai  yang telah diketahui memiliki aktivitas antibakteri.

## MATERIAL DAN METODE

## Bahan dan Alat
Biji  teratai  dari  jenis Nymphae  pubescens Willd  diperoleh  dari  daerah  Hulu  Sungai  Utara, Kalimantan Selatan.  Bahan kimia yang digunakan untuk  ekstraksi  biji  teratai  dan  fraksinasi  ekstrak
adalah heksana dan etil asetat. Fraksinasi ekstrak menggunakan  KLT  (Kromatogra   Lapis  Tipis) kaca (Kieselgel 60 F254 0.2 mm, Merck).
Mikroba  uji  adalah E.  coli (FNCC-091) dan S.  typhimurium (FNCC-050)  koleksi  dari Laboratorium Mikrobiologi PAU UGM. Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan Nutrient Broth dan Nutrient Agar.

## Metode Penelitian

## Ekstraksi Komponen Antibakteri Biji Teratai
Ekstraksi komponen antibakteri secara maserasi menggunakan metode ekstraksi bertingkat  berdasarkan  tingkat  kepolaran  pelarut yaitu  heksana  (tidak  polar),  etil  asetat  (semi polar).  Pertama-tama  biji  teratai  dalam  bentuk tepung dimaserasi pada suhu ruang selama 24 jam dengan  heksana,  dengan  perbandingan  tepung biji  teratai  dengan  pelarut  1  :  4  (b/v).    Ekstraksi dengan  pelarut  yang  sama  diulang  lagi  dengan perbandingan  bahan  dan    pelarut  sama  dengan yang  pertama.  Filtrat  diambil  sebagai  ekstrak heksana dan endapan dimaserasi dengan etil asetat selama 24 jam. Filtrat diambil sebagai ekstrak etil asetat, sedangkan endapan dimaserasi lagi dengan etanol  selama  24  jam  dan   ltratnya  diambil sebagai  ekstrak etanol.   Pelarut  diuapkan dengan rotavapor pada suhu 40 °C, sisa pelarut diuapkan dengan  gas  nitrogen.  Ekstrak  yang  diperoleh digunakan  sebagai  sampel  untuk  analisis  dan pengujian antibakteri.

## Analisis Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Biji Teratai
Perlakuan  yang  diberikan  pada  ekstrak  etil asetat  yaitu  ekstrak  etil  asetat  dipanaskan  di dalam penangas air pada suhu 100 ˚C dan ekstrak dipanaskan di dalam autoklaf suhu 121 ˚C selama 15 menit.  Selanjutnya dilakukan analisis aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  etil  asetat  biji  teratai tersebut  dengan  menggunakan  metode  difusi agar  atau  sumur  (Gariga et al .  1983)  terhadap bakteri E.  coli dan S.  typhimurium. Metode  ini didasarkan pada kemampuan senyawa anti bakteri di  dalam  ekstrak  yang  diuji  untuk  menghasilkan zona  penghambatan  terhadap  bakteri  uji,  berupa diameter zona hambat (d, mm).

## Fraksinasi Ekstrak Etil Asetat Biji Teratai
Fraksinasi ekstrak etil asetat setelah mengalami pemanasan dilakukan untuk mengetahui kestabilan  masing-masing  fraksi  dari  ekstrak etil  asetat  dibandingkan  dengan  kontrol  (  tanpa dipanaskan).  Fraksinasi  menggunakan  KLT (Kromatogra   Lapis  Tipis)  kaca  (Kieselgel  60 F254  0,2  mm,  Merck).  Yang  digunakan  sebagai fase  gerak  adalah  heksana  dan  etil  asetat  dengan perbandingan  7:3.  Komponen-komponen  yang terpisah  dilihat  dengan  menggunakan  sinar  ultra violet (254 dan 360 nm).

## Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  Ekstrak Etil Asetat
Pengujian secara kuantitatif terhadap aktivitas masing-masing fraksi dilakukan dengan mengerok spot-spot  fraksi  pada  KLT,  kemudian  dimaserasi dengan  pelarut  etil  asetat  dan  diambil   ltratnya dengan  cara  sentrifugasi.  Filtrat  diuapkan pelarutnya  dengan  N 2 dan  diperoleh  fraksi-fraksi ekstrak  etil  asetat  biji    teratai.    Fraksi-fraksi tersebut  diuji  aktivitas  antibakterinya  dengan menggunakan difusi agar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Dan  Fraksi Ekstrak Etil Asetat Biji Teratai
Fraksinasi ekstrak etil asetat biji teratai dengan menggunakan  eluen  heksana  :  etil  asetat  (7:3) diperoleh  11  fraksi.  Masing-masing  fraksi  yang terpisah  tersebut  diuji  aktivitas  antibakterinya dengan  menggunakan  bakteri  uji E.coli dan S . typhimurium. Pengujian  aktivitas  fraksi ekstrak  etil  asetat  biji  teratai    dilakukan  dengan membandingkan  antara  ekstrak  dengan  fraksi ekstrak  dengan  konsentrasi  yang  sama  dalam hal ini adalah 2% (b/v). Hasil pengujian  dengan menggunakan difusi agar disajikan pada Tabel 1.
Semua fraksi mempunyai aktivitas antibakteri, namun  pada  fraksi  1  tidak  terlihat  adanya penghambatan terhadap S. typhimurium . Fraksi 10 dan 11 terlihat  memiliki aktivitas penghambatan yang  paling  besar  terhadap E.  coli .  Berdasarkan pengembang  (eluen)  yang  digunakan  yaitu heksana dan etil asetat (7:3) menunjukkan semakin besar nomor fraksi maka fraksi  tersebut  semakin
tidak  polar  (penomoran  fraksi  dimulai  dari  awal laju eluen pada KLT),  hal ini menunjukkan bahwa fraksi yang lebih tidak polar pada ekstrak etil asetat biji teratai memiliki aktivitas penghambatan yang lebih  besar  terhadap E.coli ,  sebaliknya  terhadap S.  typhimurium ,  fraksi  yang  lebih  rendah  (yang lebih  polar)  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang lebih  besar. Aktivitas  masing-masing  fraksi  dari ekstrak  etil  asetat  biji  terhadap S.  typhimurium terlihat  lebih  rendah  dibandingkan  terhadap E. coli , hanya fraksi 2,3 dan 6 mempunyai aktivitas yang lebih besar terhadap S. typhimurium .
Pengaruh  Pemanasan  terhadap  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Biji Teratai
Pengaruh  pemanasan  pada  suhu  100  ˚C  dan 121  ˚C  terhadap  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etil asetat  yaitu  terhadap  pertumbuhan E.coli dan S. typhimurium menggunakan metode difusi agar disajikan pada Tabel 2.
Pemanasan  ekstrak  etil  asetat  pada  suhu 100  ˚C  dan  121  ˚C  berpengaruh  terhadap aktivitas  antibakteri  yaitu  terhadap E.coli dan S.  typhimurium. Penurunan  aktivitas  antibakteri terjadi  terutama  pada  suhu  121  ˚C  atau  suhu pada  penggunaan  otoklaf  dengan  suhu  tinggi
dan  tekanan  tinggi,  meskipun  demikian  ekstrak tersebut  masih  memiliki  aktivitas  antibakteri, yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etil  asetat  biji teratai  relatif  stabil  terhadap  pemanasan.  Hasil penelitian  Naufalin et  al (2006)  menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  suhu  pemanasan  (80  ˚C, 100 ˚C dan 121 ˚C), aktivitas ekstrak etanol bunga kecombrang  semakin  menurun  terhadap  bakteri uji E.coli , S. typhimurium dan Bacillus cereus.

## Pengaruh  Pemanasan  terhadap  Kestabilan Fraksi Ekstrak Etil Asetat Biji Teratai
Pengujian  pengaruh  pemanasan  terhadap kestabilan  masing-masing    fraksi  ekstrak  etil asetat biji teratai disajikan pada Gambar 1. Ekstrak etil asetat tanpa dipanaskan menunjukkan ada 11 fraksi  yang  terdapat  pada  ekstrak.  Berdasarkan hasil penelitian sebelumnya dengan menggunakan metode  bioautogra   diketahui  bahwa  semua fraksi  etil  asetat  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap  bakteri  uji  (Fitrial et  al .  2008).  Fraksi 5  dan  6  tidak  muncul,  tetapi  terlihat  ada  satu fraksi  diantara  fraksi  5  dan  6  setelah  mengalami pemanasan pada suhu 100 ˚C,. yang menunjukkan fraksi 5 dan atau 6 tidak stabil terhadap suhu 100 ˚C  dan  membentuk  senyawa  lain.  Berdasarkan Tabel  2  terlihat  terjadi  penurunan  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  etil  asetat  biji  teratai yang  dipanaskan  pada  suhu  100  ˚C.  Penurunan aktivitas  tersebut  diduga  akibat  hilangnya  fraksi 5  dan  6  yang  mempunyai  aktivitas  antibakteri dan  terbentuknya  satu  senyawa  lain  yang  tidak memiliki  aktivitas  antibakteri.  Pacheco-Palencia et  al. (2009)  mempelajari  pengaruh  pemanasan terhadap  kestabilan  komponen  polifenol  pada buah  acai, Euterpa  oleracea Mart  dan Euterpa precatoria Mart.  yang  diketahui  mempunyai aktivitas  antioksidan.  Polifenol  jenis  antosianin tidak  stabil  terhadap  panas,  sebaliknya  polifenol non-antosianin  yaitu  asam  fenolik  dan   avonoid lebih  stabil  terhadap  panas.  Perubahan  stabilitas polifenol  mengakibatkan  menurunnya  akitivitas
Tabel  1  Diameter  penghambatan  (mm)  dari  ekstrak etil asetat biji teratai (2%) dan fraksi-fraksinya (2%) terhadap E.coli dan S. Typhimurium
Ekstrak biji teratai Diameter penghambatan (mm) E.coli S. typhimurium Ekstrak etil asetat 14,98 14,00 Fraksi 1 5,13 Tidak ada Fraksi 2 2,15 7,78 Fraksi 3 6,85 6,22 Fraksi 4 5,70 2,98 Fraksi 5 4,48 4,93 Fraksi 6 7,95 8,15 Fraksi 7 7,33 2,00 Fraksi 8 7,18 3,98 Fraksi 9 7,38 3,20 Fraksi 10 10,60 3,30 Fraksi 11 11,65 2,35
Tabel 2  Pengaruh pemanasan terhadap aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat biji teratai Bakteri uji Nilai Diameter Sumur (mm) Kontrol Suhu 100˚C Suhu 121˚C E.coli 23,42±0,67 18,38±0,11 14,20±0,18 S. Typhimurium 22,78±0,78 21,37±0,25 12,62±0,25
antioksidan dari buah Euterpa oleracea Mart dan Euterpa precatoria .
Berdasarkan  fase  gerak  yang  digunakan yaitu  campuran  heksana  dan  etil  asetat  (7:3), menunjukkan bahwa fraksi 5 dan 6 bersifat relatif lebih  polar dibandingkan fraksi 6,7,8,9,10 dan 11. Fraksi 1,2, 3,4,7,8,9,10 dan 11 terlihat relatif stabil terhadap pemanasan suhu 100 ˚C.
Fraksi  5  dan  6  tidak  ada  pada  perlakuan pemanasan suhu 121 ˚C, tetapi muncul fraksi lain diantara fraksi 6 dan 7 yang sifatnya relatif lebih tidak polar dibandingkan fraksi 5 dan 6. Fraksi 7, posisinya juga mengalami perubahan sedikit lebih ke  bawah,  antara  fraksi  6  dan  7  dibandingkan dengan  kontrol.  Fraksi  1,2,3,4,8,9,10,  dan  11 terlihat  tidak  terpengaruh  terhadap  pemanasan suhu  121  ˚C.  Hilangnya  fraksi  5  dan  6  tersebut diduga  menyebabkan  menurunnya  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  etil  asetat  biji  teratai. Fraksi-fraksi  yang  lain  terlihat  relatif  stabil terhadap  pemanasan  suhu  121  ˚C.    Fraksi  5  dan 6  memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  jika  kedua fraksi  tersebut  hilang  atau  berubah  menjadi senyawa  lain  akibat  pemanasan,  mengakibatkan aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etil  asetat  biji teratai  menjadi  berkurang.  Hasil  penelitian Ijeh et  al (2010)  menunjukkan  bahwa  biji  buah Treculia  africana yang  direbus  dan  dikeringkan mengalami penurunan komponen alkaloid, fenol,
tanin,  falvonoid,  oksalat  dan  saponin.  Proses pemanggangan  juga  menurunkan  senyawa- senyawa tersebut, kecuali alkaloid.

## KESIMPULAN
Proses  pemanasan  berpengaruh  terhadap aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat biji teratai, semakin  tinggi  suhu  maka  aktivitas  antibakteri semakin  menurun,  meskipun  demikian  pada suhu  121  ˚C  ekstrak  etil  asetat  biji  teratai  masih memiliki aktivitas antibakteri.  Proses pemanasan berpengaruh  terhadap  kestabilan  fraksi  ekstrak etil asetat biji teratai. Fraksi dari ekstrak etil asetat yang  berperan  sebagai  antibakteri  diantaranya adalah  fraksi  5  dan  6  yang  relatif  lebih  polar dibandingkan  fraksi  7,8,9,10  dan  11  dan  kedua fraksi  ini  relatif  tidak  stabil  terhadap  pemanasan suhu 100 ˚C dan 121 ˚C.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  dibiaya  oleh    DIPA  PNBP Unlam, oleh karena itu ucapan terima kasih kami sampaikan  kepada  Rektor  Universitas  Lambung Mangkurat  melalui  Lembaga  Penelitian  Unlam, atas  bantuan  dana  yang  telah  diberikan  untuk penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Chipurura B, Muchuweti M. 2010.  Effect of irradiation and  high  pressure  processing  technologies  on  the bioactive  compounds  and  antioxidant  capacities of  vegetables. Asian  Journal  of  Clinical  Nutrition 2(4):190-199
Doughari  JH.  2006.  Antimicrobial  Activity  of Tamarindus  indica Linn. Tropical Journal  of
Pharmaceutical Research 5 (2): 597-603
Fitrial  Y,  Astawan  M,  Soekarto  ST,  Wiryawan  KG,
Wresdiyati T  dan  Khairina  R.  2008.    Potensi    biji teratai  sebagai  antidiare. Jurnal  Teknologi  & Industri Pangan 19(2): 158-164
Gariga  M,  Hugas  M,  Aymerich  T,  Monfort  JM.
1983.  Bacteriogenic  activity  of  lactobacilli  from fermented sausage. Appllied Bacteriol . 75:142-148
Houghton PJ, Raman A.  1998. Laboratory Handbook for The Fractionation of Natural Extracts. London: Chapman & Hall.
Ijeh  II,  Ejike  CE,  Nkwonta  OM,  Njoku  BC.  2010.
Effect  of  traditional  processing  techniques  on  the nutritional  and  phytochemical  composition  of african  bread-fruit  ( Treculia  africana )  seeds. J. Appl. Sci. Environ. Manage 14 (4):169-173 Jadhav  DY,  Sahoo AK,  Ghosh  JS,  Ranveer  RC,  Mali
Gambar 1 Pengaruh pemanasan terhadap fraksi ekstrak etil asetat biji teratai
AM.  2010.  Phytochemical  detection  and in  vitro evaluation  of  Tamarind  fruit  pulp  for  potential antimicrobial  activity. International  Journal  of Tropical Medicene 5(3): 68-72 Khairina, R., Fitrial, Y. 2002. Produksi dan Kandungan Gizi  Biji  Teratai  ( Nymphae  pubescens Wild) Tanaman Air yang  terdapat di Hulu Sungai Utara. Jurnal Ilmiah Fakultas Pertanian , UNLAM.  77-88
Naufalin  R,  Jenie  BSL,  Kusnandar  F,  Sudarwanto M,  Rukmini  HS.  2006.  Pengaruh  pH,  NaCl  dan pemanasan  terhadap  stabilitas  antibakteri  bunga kecombrang  dan  aplikasinya  pada  daging  sapi giling. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan 17(3): 197-203
Pacheco-Palencia  LA,  Duncan  CE,  Talcott  ST.  2009.
Phytochemical composition and thermal stability of
two commercial açai species, Euterpe oleracea and Euterpe precatoria . Food Chemistry 115(4): 1199- 1205. es
Rahayu  WP,  Raharjanti  DS.  2000.  Kajian  Pengaruh Pemanasan Terhadap Aktivitas Antimikroba Bumbu Gulai. Buletin  Teknologi.  dan  Industri  Pangan 11(1): 24-29
Salama    HMH,    Marraiki  N.    2010.    Antimicrobial activity and phytochemical analyses of Polygonum aviculare L.(Polygonaceae),  naturaly  growing  in Egypt. Saudi  Journal  of  Biological  Sciences 17:
57–63
Yuan  G,  Sun  B, Yuan  J,  Wang  Q.    2009.    Effects  of different  cooking  methods  on  health-promoting compounds  of  broccoli .  Journal  Zhejiang  Univ Science B 10(8):580-588