## Jurnal Analis Laboratorium Medik, 30/11 (2016), 1-7

## AKTIVITAS BAKTERI FILOSFER DAUN REUNDEU (Staurogyne longata) SEBAGAI PENGHASIL SENYAWA ANTIMIKROBA POTENSIAL
Debie Rizqoh 1 , Nita Ratna Sari 2 , Rina Nurlia Wati 3 , Fery Santosa 4 , Rianita Hasanah 5 1 Program Studi DIII Analis Kesehatan, Fakultas Farmasi dan Ilmu Kesehatan, Universitas Sari Mutiara Indonesia
*Email: debie.rizqoh@gmail.com

## Abstrak
Di  alam  banyak ditemukan mikroba patogen  yang dapat menimbulkan  penyakit pada manusia, contohnya seperti enteropatogenikEscherichia coli (EPEC),Staphylococcus  aureus, Candida  tropicalis,  dan Candida  albicans. Mikroba tersebutdapatditanggulangi  dengan  menggunakan senyawa  antimikroba yang  dapat menghambat  pertumbuhan  mikroba tersebut.  Reundeu  (Staurogyne longata)  merupakan salah satu tanaman yang daunnya dikonsumsi sebagai lalapan. Permukaan daun Reundeu merupakan  habitat mikroflora  tertentu seperti bakteri  filosfer.  Penelitian  ini  ditujukan untuk mengetahui  kemampuan bakteri  filosfer  daun  reundeu untuk  menghasilkan senyawa antimikroba. Metode penelitian antara lain mengisolasi bakteri dari sampel daun utuh  dengan  metode  cawan  sebar  (spread  plate  method).  Setelah  mendapatkan  isolat murni,  dilakukan  uji  Gram  dan  uji  antimikroba untuk  mengetahui  senyawa  antibakteri yang  dihasilkannya.  Penelitian  ini  juga  menguji  aktivitas  patogen  dengan  menggunakan media agar darah. Setelah itu konsentrasi penghambatan ditentukan dengan metode MIC (minimum  inhibitory  concentration). Bakteri  diidentifikasi  dengan  analisis  sekuensing dari  amplikon  gen  pengkode  16s  rRNA,,  analisis  bioinformatik  dan  pembuatan  pohon filogenetik.Hasilpenelitian  menunjukkan  dapat diidentifikasi 25  isolat  bakteri  filosfer reundeu penghasil senyawa  antimikrobayang  dapat  menghambat empat  bakteri  patogen dengan  spektrum  berbeda-beda.  Terdapat  lima  isolat  yang  mempunyai  spektrum  paling baik  yaitu  FR3,  FR5,  FR11, FR17  dan  FR40.  Kelima  isolat  tersebut  mempunyai konsentrasi  penghambatan  yang  berbeda-beda.  Identifikasi  secara  genetik  menunjukkan bahwa  kelima  isolat  tersebut    berkerabat  dekat  dengan  spesies Klebsiella  pneumoniae, Bacillus subtilis, Pseudomonas stutzeri, dan Bacillus sp.
Kata kunci : antimikroba, bakteri filosfer, reundeu.

## 1. PENDAHULUAN
Di  alam  ini,  banyak ditemukan mikroba yang  bersifat  patogen.  Mikroba  patogen  ini berbahaya  karena  dapat  menyebabkan  berbagai macam  penyakit  (Pelczar  &  Chan  2005). Mikroba  yang  bersifat  patogen  antara  lain enteropatogenik Escherichia coli (EPEC) (Kaufmann et al. 2006), Staphylococcus aureus (Salle 1961), Candida tropicalis (Minagi et al. 1985),  dan Candida  albicans (Jang  2006). Sampai  saat  ini  pemberian  antimikroba  dapat membunuh  atau  menghambat  pertumbuhan mikroba  patogen  tersebut.  Antimikroba dapat diproduksi  oleh  organisme  tertentu yang  dapat meningkatkan pertahanan diri organisme tersebut (Madigan et al. 2000).
Substansi  antimikrobadalam  hal  ini antibiotik merupakan bahan  alam  atau  sintetik yang dapatmembunuh atau menghambat pertumbuhan  mikroba  dalam  hal  ini  bakteri. Antibiotik  secara  ilmiah  diproduksi  oleh organisme  tertentu dan  bermanfaat  untuk meningkatkan  kemampuan  organisme  tersebut mempertahankan  diri dari  serangan  organisme lain. Selain itu,antibiotik juga dapat berasal dari hasil metabolisme sekunder dari interaksi antara dua organisme  berbeda (Madigan et  al. 2000). Antibakteri  merupakan  salah  satu  fenomena antagonisme yang menyebabkan penghambatan pertumbuhan  bahkan  kematian  suatu  mikroba oleh  mikroba  lain  yang  terjadi  secara  langsung maupun tidak langsung (Kasim et al. 2005).
Reundeu (S.
longata)
selain
dimanfaatkan  sebagai  lalapan  juga  dapat dimanfaatkan  sebagai tanaman  obat  (Hariana 2006). Reundeu digunakan dalam penelitian ini karena  sering  digunakan  sebagai  lalapan. Lalapan  sangat  baik  untuk  kesehatan  karena kandungan  gizi  dan  vitamin  tidak  berkurang serta  tidak  rusak  oleh  proses  memasak.  Selain itu,  berbagai  jenis  mikroflora  terdapat  pada sayuran  mentah  tersebut,meskipun  telah dicuci sebelum dikonsumsi, bakteri epifit masih dapat ditemukan (Hamilton-Miller & Shah 2001).
Bakteri  epifit  yang  menghuni  di  sekitar permukaan  daun  disebut  bakteri  filosfer (Lindow  &  Brandl  2003).  Pada  kelembapan tinggi seperti daerah beriklim tropis dan sedang, berbagai  mikroflora  daun  banyak  ditemukan (Madigan et  al. 1997). Komunitas  mikroba
filosfer sangat kompleks. Hal tersebut dibuktikan  oleh Menurut  Yang et  al. (2000), dengan menggunakan metode kultur dependentdan independent.Kekomplekan tersebut  tidak  dapat  dibuktikan  dengan metode kultur konvensional. Populasi bakteri epifit baik dari segi jenis maupun ukuran sangat bervariasi walaupun untuk tumbuhan dalam satu spesies.(Lindow & Brandl 2003).
Berdasarkanpenelitian  yang dilakukan sebelumnya,  diketahui  bahwa  daun  reundeu mengandung  berbagai  macam  bakteri  filosfer yang menghasilkan antibakteri.Laporan tersebut juga  menyebutkan  bahwa  bakteri  filosfer reundeu aktif menghambat bakteri Gram positif seperti E. coli dan  bakteri  gram  negatif  seperti B. subtilis dan S. aureus (Rizqoh et al. 2009).
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui  pengaruh  bakteri  filosfer  reundeu terhadap  berbagai  mikroba  patogen  dan melakukan karakterisasi beberapa isolat bakteri filosfer berdasarkan sekuen DNA penyandi 16S  rRNA.  Isolat  yang  digunakan  untuk penelitian ini  merupakan  isolat  yang  sama dengan  penelitian  studi  lapangan  yang  telah dilakukan  sebelumnya(Rizqoh et  al. 2009). Mikroba patogen yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu    enteropatogenikE.  coli (EPEC), S.  aureus, C.  tropicalis, dan C. albicans. Mikroba patogen  tersebut  merupakan mikroba  yang  sering  menginfeksi  makhluk hidup, termasuk manusia.

## 2. METODE

## Peremajaan isolat bakteri filosfer reundeu
Peremajaan  dilakukan  terhadap  61 isolat  bakteri  filosfer  yang  sebelumnya  telah diisolasi.  Media  yang  digunakan pada  isolasi bakteri  filosfer  adalah  Media  agar  King’s  B. Komposisi  dari  media  King’s  B  adalah  pepton (20  g/L),  Agar  (15  g/L),  K 2 HPO 4 (1,5  g/L), Mg 2 SO 4 (1,5  g/L) , gliserol  (15  ml/L),  dan akuades (1L).

## Peremajaan mikrob target
Mikrob  yang  akan  digunakan  pada  uji antagonis  harus  ditumbuhkan  pada  media Nutrient  Broth (NB)  untuk  bakteri E.  coli enteropatogen (EPEC) dan S. aures dan Potato Dextrose  Agar (PDA)  untuk  cendawan C.
tropicalis, dan C.  albicans.  Inkubasi  dilakukan selama 24 jam pada suhu 37  C.

## Uji Antimikroba
Uji  antimikroba isolat  filosfer  terhadap pertumbuhan  mikrob  target  dilakukan  dengan menggunakan teknik media agar dua lapis yang terdiri  dari  media  semi  padat  dan  media  padat. Bakteri  target yang  telah  diukur kekeruhannya dengan spektrofotometri (OD = 0,3, konsentrasi 10 6 - 10 7 sel/ml) dalam medium kaldu dicampur ke  dalam  media  semi  padat,  lalu  dituangkan  di atas  media  padat  yang  telah  dibekukan sebelumnya  pada  cawan.  Setelah  beku,  isolat bakteri  filosfer  digoreskan  di  atasnya.Uji antagonis  untuk E.  coli enteropatogen  (EPEC) dan S.  aures menggunakan  media  NA, sedangkan  untuk C.  albicans dan C.  tropicalis menggunakan  media  PDA.  Biakan  diinkubasi selama  24  jam  pada  suhu  ruang.  Pengamatan antimikroba dilakukan  setelah  biakan  uji antagonis telah diinkubasi selama 24 jam.Isolat bakteri dikatakan positif menghasilkan antimikrob apabila isolat tersebut menghasilkan zona  bening  pada  uji  antagonis.  Isolat  bakteri filosfer  yang  positif  menghasilkan  antimikroba kemudian diinokulasi ke dalam media NB. dan diinkubasi di suhu ruang selama 24 jam.

## Uji MIC
Mikrob  target  diremajakan  kembali untuk digunakan dalam uji Minimum Inhibitory Concentration (MIC).  Mikrob  target  ini  juga dibiakkan  dalam  media  NB  dan  diinkubasi selama 24 jam pada suhu  ruang.
Isolat bakteri filosfer penghasil antimikroba yang  telah  diinkubasi  kemudian disentrifugasi  dengan  kecepatan  10000  rpm selama 30 menit. Supernatan (diduga mengandung senyawa antimikroba) yang diambil  hasil  sentrifugasi  dimasukkan  kedalam 5  tabung  reaksi  dengan  konsentrasi  yang berbeda-beda  masing-masing  6,25%,  12,5%, 25%,  50%,  dan  100%. Selain  itu,  dibuat  juga kontrol positif dengan menambahkan antibiotik standar yang dapat menghambat mikroba target dan  kontrol  negatif  dengan  tidak  tidak menambahkan  antibiotik  maupun  supernatan bakteri  filosfer. Setelah  itu,  masing-masing tabung  diisi  dengan  1  ml  bakteri  target.Biakan
uji  MIC  tersebut  lalu  diinkubasi  selama  24 jam.Kemudian  diamati  kekeruhan  masing- masing  biakan  di  dalam  tabung  reaksi.MIC ditentukan berdasarkan kekeruhan biakan.

## Uji Patogenisitas
Permukaan media agar darah digoreskan  isolat  bakteri  filosfer.Setelah  itu diinkubasi selama 24 jam, lalu diamati ada atau tidaknya  zona  bening.Isolat  yang  disekitarnya terdapat zona bening berarti bersifat patogen.

## Isolasi Genom (Metode CTAB)
Sebanyak  1.5  ml  kultur  bakteri filosfer disentrifugasi  10000  rpm  selama  10  menit. Pelet  diresuspensi  menggunakan  bufer TAE  1x dan  disentrifugasi  kembali.Sebanyak  5  µl lisozim ditambahkan kedalam suspensi, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama 30 menit. SDS (Sodium Duodecyl Sulfate) 10% sebanyak 500 µl ditambahkan kedalam campuran,  inkubasi  dilakukan  selama  60  menit pada  suhu  37 0 C.  Sebanyak  100  µl  CTAB (Cetyltrimethylammonium  Bromide) 10%  dan 80  µl  NaCl  5M  ditambahkan  lalu  diinkubasi selama  20  menit  pada  suhu  65 0 C.  Pemisahan DNA  dari  molekul  organik  lainnya  dilakukan dengan penambahan
650 µl PCl (phenol:chloroform:isoamyl alcohol = 25:24:1), kemudian  campuran  disentrifugasi  12000  rpm selama  10  menit,  lapisan  atas  pada  tabung mikro  dipindahkan  ke  tabung  mikro  yang  baru lalu ditambahkan 650 µl larutan PCI. Campuran disentrifugasi 12000 rpm selama 10 menit.Lapisan  atas  dipindahkan  ke  tabung mikro  baru  dan  ditambah  etanol  absolut sebanyak  2x  volume  larutan  suspensi  DNA. Inkubasi  dilakukan  12  jam  pada  suhu -20 0 C untuk mengendapkan DNA. Suspensi disentrifugasi 12000 rpm selama 10 menit.Pelet DNA dibilas dengan etanol 70%.Pelet dibiarkan kering  udara.  Setelah  kering,  pelet  DNA diresuspensi  dengan  20  µl  ddH 2 O  steril. Visualisasi hasil isolasi DNA genom dilakukan dengan  metode  elektroforesis  pada  gel  agarosa 0,8%, 100 V selama 30 menit.
Amplifikasi Gen Pengkode 16s-rRNA dengan  Teknik  Polymerase  Chain  Reaction (PCR)
Reaksi  PCR  untuk  mengamplifikasi  16s- rDNA  dilakukan  dengan  mencampurkan  12.5 bufer PCR GC II, 4 µl dNTPs (2.5 mM/dNTP), 1 µl primer 63 f (CAGGCCTAACACATGCAAGTC) (5 nm), 1 µl primer 1387 r
(GGGCGGWGTGTACAAGGC)  (5  nm),  4  µl DNA  cetakan,  dan  0.25  µl  (5  unit/µl)  enzim
Taq  DNA  polymerase  (TAKARA)  dan  2.25  µl ddH2O  hingga  volume  reaksi  PCR  menjadi  25 µl.  Reaksi  PCR  dilakukan  sebanyak  30  siklus dengan masing-masing tahap yaitu: 1. Predenaturasi  (94 0 C,  5  menit);  2.  Denaturasi (94 0 C, 1 menit); 3. Annealing (55 0 C, 1 menit);
4.  Polimerisasi  (72 0 C,  1  menit).  Post  PCR dilakukan  pada  suhu  72 0 C  selama  2  menit. Visualisasi  amplikon  16s-rDNA  dilakukan melalui  elektroforesis pada  gel  agarosa  0,8%, 100 V selama 30 menit.
Hasil  amplifikasi  gen  PCR  ini  kemudian disekuen untuk  mengetahui  susunan  basa  pada DNA  bakteri.  Susunan  basa  DNA  tersebut  lalu dianalisis  bioinformatik  untuk  mengidentifikasi jenis bakteri filosfer reundeu. Setelah diketahui spesies  bakteri  filosfer  reundeu,  selanjutnya dianalisis  kekerabatannya  dengan membuat pohon filogenetik.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji antimikroba telah dilakukan terhadap 4 macam mikroba target yaitu  Enteropatogenik EPEC, S.  aureus,  C.  albicans, dan C. tropicalis.Adanya senyawa antimikroba ditunjukkan  dengan  terbentuknya zona  bening (Gambar 1(a) dan (b).Selain uji antimikroba, uji patogenisitas  juga  telah  dilaksanakan  untuk mengetahui  adanya  potensi  patogenisitas  pada bakteri filosfer reundeu. Apabila bakteri positif patogen, maka akan terbentuk zona bening pada media agar darah (Gambar 1 (c)).
Berdasarkan hasil penelitian ini, didapatkan  sebanyak  25  isolat  dari  61  isolat yang kemungkinan menghasilkan  senyawa bioaktif terhadap keempat mikroba
patogen.Lima isolat bakteri filosfer yang positif menghasilkan senyawa bioaktif terhadap EPEC, 10  isolat  bakteri  filosfer  menghambat S. aureus, 14  isolat  penghasil  anti-C.  albicansdan satu isolat yang menghambat C. tropicalis.
Setelah dilakukan uji antimikroba,
beberapa  isolat  potensial  diuji  lanjut  untuk mengetahui konsentrasi minimum penghambatannya.Uji MIC (Minimum
Concentration  Inhibitor)  merupakan  uji  yang dilaksanakan terhadap suatu sediaan antimikroba  atau  desinfektan  untuk  diketahui konsentrasi  terendah  dari  antimikroba tersebut dalam menghambat pertumbuhan mikroorganisme.  Isolat  yang  diuji  MIC  ada lima  buah  yaitu  isolat  FR3,  FR5,  FR11,  FR17 dan  FR40.  Setelah  dihitung  nilai  MIC,  isolat diencerkan  lalu  ditumbuhkan  ke  cawan  dengan metode  sebar  untuk  mengetahui  aktivitas penghambatannya.Apabila  pada  cawan  masih tumbuh bakteri target, maka aktivitasnya hanya sebatas  penghambatan  mikroba (bakteriostatik/ fungistatik).Namun  apabila  pada  cawan  tidak tumbuh  bakteri  target,  aktivitas  antimikroba tersebut  telah  dapat  mematikan  mikroba (bakterisida/ fungisida) (Madigan et al. 2000).Hasil MIC secara keseluruhan dijelaskan pada Tabel 2 dan 3.
Salah  satu  cara  untuk  mengetahui petunjuk  evolusi  organisme  prokariot  adalah dengan menggunakan  genotyping 16S  rRNA karena  gen  ini  merupakan  gen lestari dari generasi  ke  generasi.  Untuk  mempermudah mendapatkan  gen tersebut,  kami  melakukan perbanyakan  DNA dengan metode  PCR (Polymerase Chain Reaction)menggunakan primer  spesifik  pengkode  16s  rRNA  (Marchesi et al. 1998).Visualisasi hasil PCR menunjukkan bahwa  setiap  isolat  gen  pengkode  16S  rRNA berhasil  diamplifikasi dengan  ukuran  1300  pb (Gambar 2).
Setelah  melakukan  PCR,  kemudian dilakukan sequencing untuk  mengetahui  urutan basa  penyusun  gen  16S  rRNA  tersebut.  Urutan basa  penyusun  gen  pengkode  16S  rRNA  yang telah  diketahui  digunakan  untuk  menentukan spesies  bakteri  berdasarkan  data  pada  bank gen.Dari  pencocokan  dengan  data  pada  bank gen, diketahui kelima isolat yang diujikan, yaitu FR3,  FR5,  FR11,  FR17  dan  FR40 adalah Klebsiella  pneumoniae strain  V2,  Klebsiella pneumonia strain  V2,  Bacillus  subtilis strain PEBS2501,  Pseudomonas stutzeri isolat  GR21, dan Bacillus sp. BACI-TOLU1. Masing-masing memiliki  E  value  0.0  dan Max  Identity 100%
yang  menunjukkan  bahwa  urutan  basa  tersebut sudah  pernah  teridentifikasi  dan  urutan  basa yang  ada  sama  dengan  nama  organisme  yang telah memiliki data gen pengkode 16S rRNA.
Gambar  1  (a)  dan  (b)  Hasil  uji  antimikroba yang  positif  ditunjukkan  dengan pembentukan  zona  bening  di  sekitar isolat  filosfer  reundeu.  (c)  Hasil  uji patogenisitas juga ditunjukkan dengan pembentukan zona bening. Tabel 2. Hasil MIC terhadap bakteri patogen Bakteri patogen Isolat MIC Bakterisida/ Bakteriostatik EPEC FR3 100% Bakteriostatik FR5 100% Bakteriostatik FR11 100% Bakteriostatik FR17 100% Bakteriostatik S. aureus FR17 6,25% Bakteriostatik Tabel 3. Hasil MIC terhadap cendawan patogen Cendawan patogen Isolat MIC Fungisida/ Fungistatik C. albicans FR3 6,25% Fungisida FR5 6,25% Fungistatik FR11 6,25% Fungistatik FR40 50% Fungistatik
Setelah  diketahui  spesies  dari  isolat filosfer  reundeu,  selanjutnya  dilakukan  analisis filogenetik.Analisis  filogenetik  ini  dilakukan untuk  mengetahui  kekerabatan  antar  bakteri filosfer  reundeu  maupun  kekerabatan  antara
bakteri  filosfer  reundeu  dengan  bakteri  yang telah  diidentifikasi  dari  penelitian  sebelumnya dari Gene Bank (NCBI).Gambar 3 menunjukkan hubungan  kekerabatan  kelima isolat  bakteri  filosfer  reundeu  berdasarkan analisis DNA bakteri tersebut dengan menggunakan  analisis  bioinformatik  standar (Claverie & Notredame 2007).
Gambar  2. Hasil  visualisasi  amplifikasi  gen pengkode  16s  rRNA  ribosom  dengan teknik  PCR  menunjukkan  pita  yang dihasilkan DNA isolat filosfer reundeu  umumnya  memiliki  ukuran sekitar  1300  bp  (basa  pair/pasang basa).

## 4. KESIMPULAN
Dari hasil penelitian ini dapat disimpulkan  bahwa  beberapa  baktei  filosfer reundeu diduga  dapat  memiliki  kemampuan menghasilkan senyawa antimikrob dan menghambat  empat  mikroba  patogen  yaitu Escherichia  coli,  Staphylococcous  aureus, Candida  tropicalis, dan Candida  albicans. Konsentrasi minimal penghambatan bagi bakteri patogen E. coli adalah 100% dari empat isolat  dan  bagi S.  aureus sebesar6,35% . C. albicans terhambat  pada  konsentrasi  minimal 6,25%  dari  keempat  isolat  bakteri  filosfer. Bakteri  filosfer  reundeu  yang  menghasilkan substrat  yang  kemungkinan  memiliki  aktivitas antimikroba termasuk dalam strainKlebsiella pneumoniae,  Bacillus  subtilis,  Pseudomonas stutzeri, dan Bacillus sp.
a . b . b .
Gambar  3. Pohon  filogenetik  menunjukkan  posisi  kekerabatan  bakteri  filosfer  reundeu  pada  tiga kelompok  besar  yaitu  FR3  dan  FR5  berkerabat  sangat  dekat  dengan  beberapa  spesies pada  genus Klebsiella ,  FR  17  berada  dalam  kekerabatan  genus Pseudomonas serta FR11dan FR40 yang termasuk dalam keluarga genus Bacillus.
Hasil  penelitian  ini  belum  bisa  diaplikasikan ke masyarakat.Masih perlu dilakukan penelitian  lebih  lanjut.  Meskipun  dari  hasil penelitian  ini  membuktikan  bahwa  pada  daun reundeu mengandung bakteri filosfer penghasil senyawa  antimikroba, tetapi  masyarakat  harus tetap  waspada  dalam  mengkonsumsi  lalapan karena kemungkinan dapat ditemukan bakteri patogen.

## 5. REFERENSI
Claverie JM, Notredame C. 2007.
Bioinformatic for Dummies. 2nd Ed. Canada: Wiley Publishing, Inc.
Geornaras  I,    Holy  Av.  2001.  Antimicrobial susceptibilities of isolates of
Staphylococcus aureus, Listeria species and Salmonella  serotypes  associated  with poultry  processing. Int  J  Food  Microbiol 70: 29 – 35.
Hamilton-Miller  JMT,  Shah  S.  2001.  Identity and antibiotic susceptibility of
enterobacterial flora of salad vegetables. Int J Antimic Agents 18: 81 – 83.
Hariana  A.  2006.  Tumbuhan  Obat  dan Khasiatnya. Jakarta: Niaga Swadaya. Jang  WS  et  al.  2006.  Antifungal  activity of synthetic  peptide  derived  from  halocidin, antimicrobial  peptide  from  the  tunicate,
Halocynthia aurantium. Fed Europ Biochem Societ 580: 1490-1496. Kasim  E,  Yulinery  R,  Hardiningsih  R,  Triana
E,  Napitupulu  RNR.  2005.  Daya  anti Staphylococcus aureus dari fermentasi daun beberapa jenis tumbuhan obat. Biol Indones
3: 397-404.
Kaufmann  M et  al. 2006.  Escherichia  coli O157 and non-O157 Shiga Toxin – Producing Escherichia  coli
in  Fecal Samples  of  Finished  Pigs  at  Slaughter  in Switzerland.J Food Protec 69: 260-266. Lindow  SE,  Brandl  M.T.  2003.  Microbiology of the Phyllosphere.Apl Environl
Microbiol. 69 (4):1875-1883.
Madigan  MT,  Martinko  J.M.,  Parker  J.  2000.
Brock  Biology  of  Microorganism.Eight
Edition. Prentice Hall International, Inc. Marchesi JR et al. 1998.Design and evaluation of useful bacterium-specific PCR primers that amplify genes coding for bacterial 16S rRNA. App Env Microbiol 64: 795-799. Minagi S, Miyake Y, Inagaki K, Tsuru H, Suginaka H. 1985. Hydrophobic interaction in Candida albicans and Candida tropicalis adherence to various denture base resin
materials. Infection and Immunity 47: 11- 14.
Noer  IS,  Hendra  EC.  2008.  Antimikrobial Arien (Hypnea cervicornis) asal Gili Kondo terhadap    Bacillus  subtilis,  Staphylococcus aureus & Escherichia coli. Biotika 5: 28-34. Pelczar  M  J,  Chan  ECS.  2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: UI Press.
Rizqoh D, Wati RN, Santosa F, Sari NR. 2009.
Bakteri  filosfer  daun  reundeu  (Staurogyne longata) penghasil senyawa antibakteri asal Wana Wisata Cangkuang. [laporan]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.
Tünger  Ö,  Özbakkaloğlu  B,  Aksoy  H.  2001. Trends in antimicrobial resistant staphylococci in an university hospital over a  6-year  period.  Int  J  Antimic  Agents 18: 93 – 96.
Yang  CH,  Crowley  DE,  Borneman  J,  Keen NT. 2001.
Microbial phyllosphere population are more complex than previously realized. Proc Natl Acad Sci  98: 3889-3894