## PENGEMBANGAN METODE ISOLASI DAN IDENTIFIKASI MITRAGYNINE DALAM DAUN KRATOM ( Mitragyna speciosa )
Livia Elsa *1 , Mochammad Yuwono 2 , Amirrudin Prawita 3
Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga; Kampus B. Jalan Airlangga Nomor 4-6 Surabaya 60286, telp 031-5041536/Faksimili 031-5029856 Jurusan S2 Ilmu Forensik, Sekolah Pascasarjana UNAIR, Surabaya Email: *1 lie_elsa@yahoo.com

## Abstrak
Kratom  (Mitragina  speciosa)  merupakan  tanaman  herbal  asal  Indonesia.  Daun  kratom memiliki banyak manfaat sebagai obat herbal seperti obat demam, diare, dan penghilang nyeri. Efek sedatif dan stimulan pada sistem syaraf pusat merupakan efek samping daun Kratom. Harga yang murah dan kemudahan dalam memperoleh daun Kratom menjadi penyebabkan utama daun Kratom  banyak  disalahgunakan  sebagai  penganti  narkotika  terlarang  lainnya.  Daun  kratom masuk  kedalam  new  psychoactive  substances  (NPS)  atau  narkotika  jenis  baru  karena  memiliki efek ketergantungan dan bertindak seperti opioid lainnya seperti heroin dan ganja.
Daun kratom dapat diperoleh dengan mudah dengan pembelian secara online. Umumnya daun  Kratom  dijual  dalam  bentuk  olahan  yang  sulit  untuk  dikenali  bentuknya,  seperti  sampel dalam  penelitian  ini  berupa  bubuk  dan  serbuk  daun  kratom.  Pengujian  yang  dilakukan  untuk identifikasi  daun  Kratom  dapat  dilakukan  dengan  cara  botani  dan  cara  kimia.  Metode  botani dicari karakteristik spesifik daun kratom dengan uji mikroskopik, dan secara kimia yang menjadi salah satu senyawa penciri daun kratom adalah mitragynine. Pengembangan metode identifikasi mitragynine dilakukan dengan metode GC-MS, KLT, dan KLT-densitometri. Pengembang metode Isolasi mitagynine juga dilakukan karena sulitnya memperoleh standar baku dipasaran. Metode isolasi  yang  sederhana  dan  cepat  dilakukan  dengan  metode  KLT-Preparatif  yang  mana  hasil isolasinya menunjukkan puncak tunggal pada hasil uji GC-MS.
Kata kunci: Identifikasi, Isolasi, Kratom, Mitragyna speciosa , mitagynine

## Abstract
Kratom  (Mitragyna  speciosa)  is  one  of  the  herbal  plants  from  Indonesia.  Kratom  have many benefits of herbal medications such as drug fever, diarrhea, and pain relievers. Sedatives and  a  stimulant  effect  on the  central  nervous  system are  side effects of  Kratom leaf.  Prices  are cheap  and  easily  obtained  Kratom  leaves  become  a  major  of  cause  of  Kratom  leaves  much abused as a substitute for other illicit drugs. Kratom leaves into the new psychoactive substances (NPS)  because  it  has  the  effect  addicted  and  act  like  another  opioid,  such  as  heroin  and marijuana.
Kratom leaves can be obtained easily with an online purchase. Kratom leaf is generally sold in processed form which is difficult to recognize the shape. Tests were conducted to identify
Kratom leaves can be done by botanical and chemical method. Methods botanical sought specific characteristics  with  microscopic  test,  and  chemically  which  becomes  one  of  the  compounds identifier  are  mitragynine.  The  development  of  identification  methods  mitragynine  conducted using  GC-MS,  TLC,  and  TLC-densitometry.  Development  isolation  methods  mitagynine  also made because the difficulty in acquiring the standard in the market. Isolation methods are simple and quick to do with the method of preparative-TLC which isolation results a single peak on GC- MS.
Keywords— identification, isolation, Kratom, Mitragyna speciosa, mitagynine

## 1. PENDAHULUAN
Kratom  ( Mitragyna  speciosa )  merupakan salah  satu  tanaman  herbal  yang  berasal  dari Asia  tenggara  salah  satunya  dari  Indonesia, Malaysia, dan Thailand (Hassan Z et al . 2013). Di  Indonesia,  Kratom  merupakan  tanaman khas  dari  daerah  Putusibau,  Kalimantan  Barat (Novindriana  D.  2013).  Bagian  yang  banyak dimanfaatkan dari tanaman ini adalah daunnya.  Masyarakat  sekitar  mengenal  daun kratom dengan sebutan daun purik. Umumnya Kratom  dikonsumsi  dengan  cara  dikunyah, dirokok,  dan  diseduh  seperti  teh  (Sanagi  MM et al . 2013).
Daun  kratom  memiliki  beberapa  khasiat sebagai  obat  herbal,  diantaranya  sebagai  tapal pada  luka,  obat  demam,  meringankan  nyeri otot, mengurangi nafsu makan, dan mengobati diare (Jansen KLR & Prast CJ. 1988, Hassan Z et  al .  2013).  Selain  itu,  efek  antinociceptive dan  antidepresan  dari  kratom  telah  dilaporkan oleh Cheaha et al . (2015). Efek antinociceptive  ini  dimanfaatkan  masyarakat Malaysia  untuk  pemulihan  pasca  melahirkan dengan mengkonsumsinya dalam bentuk jus.
Obat  herbal  selama  ini  dianggap  sebagai obat  yang  aman  dikonsumsi  oleh  masyarakat luas  dibandingkan  dengan  obat  kimia.  Akan tetapi, harus diperhatikan kandungan senyawa- senyawa  yang  dapat  menimbulkan  efek samping  yang  berbahaya  baik  dalam  jangka panjang  atau  pendek.  Efek  fisiologis  dari konsumsi  kratom  tergantung  dosisnya.  Efek stimulan  (pada  dosis  rendah)  dan  efek  sedatif (pada  dosis  tinggi)  telah  dilaporkan  oleh Ridayani  Y.  (2013).  Berdasarkan  hasil penelitiannya,  ekstrak  etanolik  daun  kratom memiliki potensi efek sedatif yang lebih besar
dari  diazepam,  yaitu  27.29mg/20g  BB.  Efek depresan  dan  stimulan  pada  sistem  syaraf pusat  juga  ditimbulkan  dari  efek  samping kratom.  Efek  ini  dimediasi  melalui  reseptor monoaminergik dan opioid (Warner ML et al . 2016).  Menurut  Parthasarathy  S et  al .  (2013) pada  dosis  rendah,  kratom  memberikan  efek merangsang  dan  euforia  namun  pada  dosis yang  lebih  tinggi,  bertindak  seperti  opium yang  mampu  menekan  rasa  sakit  dan digunakan untuk mengurangi sindrom penarikan  opioid.  Kratom  sering  menjadi pilihan  karena  dianggap  lebih  ekonomis dibandingkan  dengan  opioid  lain  seperti heroin (Carpenter JM et al . 2016).
Produk  olahan  daun  Kratom  dapat  dibeli dengan  mudah  melalui  internet.  Ketersediaan melalui  Internet  dan  di  toko-toko  ritel mengungkapkan bahwa meningkatnya kesadaran akan potensi kratom untuk digunakan  bersenang-senang.  Banyak  bentuk yang  tersedia  dalam  pembelian  secara  online, seperti  daun  kering,  daun bubuk,  ekstrak  cair, pewarna kue, dan bentuk-bentuk lainnya. Cara mengonsumsi  daun  kratom  yang  paling populer  adalah  dikonsumsi  sebagai  teh, meskipun  cara  lain  seperti  mengunyah  daun (cara  tradisional),  dirokok  seperti  ganja,  atau dibuat  menjadi  ekstrak  juga  dilakukan  (Scott TM et al . 2014). Kemudahan ketersediaan dan harga yang murah telah menarik banyak orang terutama  kalangan  anak  muda  untuk  mencari kratom  sebagai  alternatif  narkotika  terlarang lainnya,  seperti  heroin  atau  ganja.  Tren  ini telah  berkembang  dan  sekarang  menjadi perhatian serius di negeri ini.
Di Malaysia, dengan tujuan untuk mengekang
penyalahgunaan kratom, pemerintah Malaysia memberlakukan
peraturan larangan untuk menjual dan memiliki  kratom  efektif  sejak  Agustus  2003 dibawah  pasal  30(5)  UU  tentang  racun  1952 dimana  seseorang  jika  terbukti  bersalah,  bisa didenda  sampai  RM  10.000  atau  dipenjara hingga  4  tahun,  atau  keduanya  (Parthasarathy S et al . 2013). Selain di Malaysia, Kratom juga ilegal  di  negara-negara  lain  seperti  Thailand, Myanmar,  Australia  serta  negara  Uni  Eropa dan  menjadikan  Kratom  sebagai  obat  yang dikendalikan,  sedangkan  di  Amerika  Serikat, Inggris,  dan  Jerman  belum  ada  pengendalian Kratom  secara  khusus  sampai  menunggu bukti-bukti  ilmiah  lainnya  (Singh  D et  al . 2014).  Di  Indonesia  sendiri  Kratom  masih legal diperjualbelikan baik di sekitar Indonesia atau  ekspor.  Berdasarkan  UU  No  35  tahun 2009  tentang  Narkotika,  disebutkan  bahwa Narkotika  adalah  zat  atau  obat  yang  berasal dari tanaman atau bukan tanaman baik sintesis maupun semi sintesis, yang dapat menyebabkan  penurunan  atau  perubahan kesadaran, hilangnya rasa, mengurangi sampai menghilangkan rasa nyeri, dan dapat menimbulkan ketergantungan,
sehingga tanaman ini dapat dikategorikan sebagai salah satu jenis narkotika baru atau new psychoactive substances (NPS). Berita yang dikutip dari
www.pontianakpost.com (5 mei 2016), menyebutkan  bahwa  Kratom  belum  termasuk kedalam jenis narkotika, meskipun sebelumnya Badan Narkotika Nasional (BNN) menemukan 41 jenis narkoba baru berdasarkan  hasil  penelitian  di  Balai  Uji Narkoba, dan 18 diantaranya belum tercantumkan dalam peraturan menteri kesehatan  (Permenkes)  nomor  13  tahun  2014 termasuk  Kratom,  sehingga  di  Indonesia belum  bisa  ada  tindakan  hukum  terkait penyalahgunaan Kratom sampai adanya Undang-undang  yang  telah  diresmikan.  Lain halnya  dengan  Permenkes,  Badan  Pengawas Obat  dan  Makanan  (BPOM)  memiliki  aturan mengenai  Kratom.  Berdasarkan  Peraturan Kepala  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan
Republik Indonesia
Nomor:
HK.00.05.41.1384  tentang  kriteria  dan  tata laksana  pendaftaran  obat  tradisional,  obat herbal terstandar dan fitofarmaka, pada bagian
bahan  yang  dilarang  dalam  obat  tradisional, obat  herbal  terstandar  dan  fitofarmaka disebutkan  bahwa  salah  satu  yang  dilarang adalah  daun Kratom  (BPOM  2005).  Sehingga jika  obat  herbal  yang  mengandung  daun Kratom  tidak  dapat  terdaftar  di  BPOM. Beberapa  istilah  yang  biasa  digunakan  untuk Kratom  dalam  komposisi  obat  herbal  adalah Krypton, K2, atau rempah-rempah (Singh D et al . 2014).
Sejak daun Kratom dijual dalam beberapa bentuk olahan, sulit untuk menentukan adanya materi  tersebut  jika  hanya  mengandalkan pengamatan  secara  visual,  terutama  ketika sudah  berada  dalam  bentuk  paket  minuman, kapsul,  daun  kering  bubuk  atau  serbuk.  Oleh karena itu, dengan melihat pada efek samping yang  banyak  disalahgunakan,  maka  metode analisis  yang  cepat  dan  handal  diperlukan untuk  mendeteksi  keberadaan  daun  kratom, terutama  yang  dapat  berguna  dalam  bidang forensik.  Metode  analisis  yang  komprehensif sangat  dibutuhkan  sehingga  tidak  terjadi  hasil positif palsu terutama hasil ini akan digunakan dalam  bidang  yang  berhubungan  dengan hukum.
Sampel  yang  diperoleh  dalam  penelitian ini  adalah  dari  pembelian  secara  online  dan sudah  dalam  bentuk  serbuk  dan  bubuk, sehingga sangat sulit dilihat secara kasat mata bahwa  sampel  tersebut  benar-benar  berasal dari  daun  Kratom.  Salah  satu  pengujian  yang dapat  dilakukan  adalah  uji mikroskopik  untuk melihat  unsur-unsur  anatomi  yang  khas dibawah  mikroskop.  Kowalczuk  AP et  al (2013)  telah  melakukan  uji  mikroskopik  pada daun kratom yang menunjukkan adanya unsur anatomi  yang  khas  seperti  epidermis,  bentuk kristal  kalsium  oksalat,  stomata,  batang  daun, dan  rambut  penutup  (trikoma).  Selain  uji mikroskopik  secara  botani,  uji  secara  kimia juga  sangat  diperlukan,  dimana  salah  satu kandungan  senyawa  utama  dari  daun  kratom adalah  golongan  alkaloid,  yaitu  mitragynine (Warner ML et al . 2016, Parthasarathy S et al .
2013,  Hassan  Z et  al .  2013,  dan  Tanguay  P. 2011).  Menurut  Lesiak  AD et  al .  2014, Mitragynine belum ditemukan dalam tanaman lain selain Kratom, diperkuat dengan hasil dari penelitian Sanagi MM et al . (2013) bahwa dari
JBP Vol. 18, No. 3, December 2016— Livia Elsa
beberapa  spesies  dengan  genus  Mitragyna, hanya  spesies Mitragyna  speciosa yang mengandung  senyawa  Mitragynine.  Dengan demikian, mitragynine dapat digunakan sebagai  senyawa  penciri  untuk  identifikasi daun Kratom.
Mitragynine  adalah  golongan  alkaloid aktif  utama  dalam  daun  Kratom.  Mitragynine (9-metoksi  corynantheidine)  memiliki  rumus molekul  C 23 H 30 N 2 O 4 dengan  berat  molekul (BM=  398  g/mol).  Mitragynine  berbentuk padatan pada suhu ruang dengan kelarutan ~5 mg/ml  dalam  Etanol  dan  ~10  mg/ml  dalam Metanol. Kandungan mitragynine menyumbang  12%  (b/b)  dari  total  kandungan alkaloid dalam Kratom asal Malaysia dan 66%
(b/b)  dari  Kratom  asal  Thailand  berdasarkan bobot (Parthasarathy S et al . 2013). Mitragynine  secara  umum  berfungsi  sebagai Analgesik, antitussive, antidiarrheal, adrenergic, antimalaria (Hassan Z et al . 2013), dan  antinociceptive  (Horie et  al .  2005). Menurut  Matsumoto et  al .  (2004),  kandungan ekstrak  alkaloid  dari  daun  Kratom  yang  salah satunya adalah senyawa mitragynine memiliki efek  yang  lebih  kuat  dari  morfin  apabila diberikan secara oral.
Metode  identifikasi  mitragynine  dapat dilakukan dari cara yang paling sederhana dan umum seperti metode KLT (Kowalczuk AP et al .  2013,  dan  Beng  GT et  al .  2011).  Metode identifikasi  dengan  KLT  dianggap  metode yang  paling  sederhana  dan  umum  karena  alat ini  hampir  dimiliki  oleh  setiap  laboratorium. Pada  metode  KLT,  adanya  fase  gerak  yang selektif  untuk  suatu  senyawa  menjadikan metode  yang  murah  dan  akurat.  Fase  gerak yang  selektif  untuk  mitragynine  dilaporkan oleh LU S et al . (2009) dengan fase gerak etil asetat:metanol (4:1 v/v) dan Kowalczuk AP et al .  (2013)  dengan  fase  gerak n -heksana:etil asetat:amoniak  (30:15:1  v/v/v).  Aplikasi  fase gerak  pada  KLT  dalam  penelitian  ini dilakukan untuk mendapatkan fase gerak yang mampu memisahkan mitragynine dengan baik. Metode  pengujian  yang  dilakukan  untuk memperkuat  adanya  senyawa  mitragynine adalah  penampak  noda  KLT  seperti  yang dilakukan  Beng  GT et  al .  (2011)  dengan penampak noda dragendroff. Pengujian
dengan  penampak  noda  tidak  selektif  untuk mitragynine  saja,  melainkan  selektif  untuk senyawa  golongan  alkaloid,  sehingga  metode penampak  noda  ini  digunakan  sebagai penunjang  keberadaan  senyawa  mitragynine yang  termasuk  golongan  alkaloid  dengan menimbulkan perubahan warna positif alkaloid adalah orange.
Metode-metode  Instrumental  yang  lebih canggih  dan  modern  umumnya  digunakan untuk  meyakinkan  hasil-hasil  dari  metode konvensional  seperti  KLT.  Instrumen  KLT spektrodensitomentri digunakan untuk mendapatkan  spektrum  dari  noda-noda  KLT dan  spektrum  yang  khas  pada  panjang gelombangan  maximal  tertentu  untuk  setiap noda.  Instrumen  lain  yang  banyak  digunakan terutama  dibidang  forensik  adalah  GC-MS, khususnya dalam identifikasi senyawa mitragynine  (Daniel  JA  2015,  Scott  TM et  al 2014,  dan  Chan  KB et  al .  2009).  Instrumen GC-MS  dianggap  sebagai  metode  yang canggih,  cepat,  dan  akurat  dengan  bantuan adanya library senyawa-senyawa sehingga alat mampu mendeteksi senyawa-senyawa berdasarkan  pada  pola  pembelahan  spektrum massa.  Hasil  analisis  dengan  instrumen modern  dianggap  lebih  akurat  dibandingkan konvensial, namun instrumen yang  mahal dan tidak  semua  laboratorium  memiliki  alat-alat tersebut,  sehingga  dalam  penelitian  ini,  uji yang  komprehensif  dari  metode  yang  paling sederhana  yaitu  KLT,  penampak  noda,  KLT- spektrodensitometri,  sampai  dengan  GC-MS dilakukan  untuk  mendapatkan  metode  yang selektif  dan  hasil  yang  meyakinkan  agar terhindar dari positif palsu.
Standar  baku  umumnya  digunakan  dalam analisis,  karena  standar  mitragynine  sulit didapatkan dipasaran, khususnya di Indonesia, sehingga  diperlukan  suatu  metode  isolasi mitragynine  dari  daun  kratom  yang  sederhana dan  murah.  Metode  isolasi  sudah  banyak dilakukan peneliti-peneliti sebelumnya, seperti penelitian Lu S et al . (2009) melakukan isolasi dengan  metode  ekstraksi  asam-basa  dan pemisahan  dengan  kromatografi  kolom,  dan Beng GT et al . (2011) dengan proses ekstraksi yang  membutuhkan  waktu  >16  jam  dan pelarut  yang  banyak  menggunakan  metode
pemisahan dengan kromatografi kolom, sehingga  dilakukan  pengembangan  metode untuk mendapatkan metode isolasi Mitragynine  yang  lebih  sederhana.  Dalam penelitian ini, isolasi dilakukan dengan metode pemisahan  menggunakan  KLT  preparatif (KLTP).  Metode  KLTP  memiliki  beberapa kelebihan  dibandingkan  kromatografi  kolom, yaitu sampel yang kecil,  pelarut yang sedikit, dan  waktu  yang  cepat  (Jozwiak  GW et al .2007). Selanjutnya instrumen yang digunakan  untuk  verifikasi  mitragynine  hasil isolasi adalah GC-MS dan KLT- spektrodensitometri.
2. Tinjauan Pustaka
Tanaman  kratom  (Gambar  1)  masuk kedalam  spesies Mitragyna  speciosa Korth, Famili  Rubiaceae  dan  Genus  Mitragyna. Kratom  merupakan  salah  satu  tanaman  tropis yang  banyak  tumbuh  di  daerah  semenanjung Thailand,  Myanmar,  Malaysia,  Philipina, termasuk Indonesia seperti di daerah Kalimantan  dan  Sumatra.  Sebutan  daun Kratom  berbeda-beda  setiap  daerah,  di Indonesia Kratom dikenal dengan istilah daun Purik,  di  Malaysia  dengan  sebutan  Biak-biak, dan  di  thailand  dengan  sebutan  Ithang  (Raffa RB 2014).
Pohon  Kratom  dapat  tumbuh  hingga ketinggian  normal  4–9  m  dan  lebar  5  m. Tanaman  tertentu  bahkan  bisa  mencapai ketinggian hingga 15–30 m. Batang tegak dan bercabang.  Daun  berwarna  hijau  gelap mengkilap  (Gambar  2.1)  tumbuh  dengan panjang  lebih  dari  18  cm  dan  lebar  10  cm dengan  bentuk  oval  dan  ujung  meruncing. Bunga-bunga  kuning  tua  tumbuh  dalam bentuk  gugus  bola  melekat  pada  bagian  atas daun  pada  batang  panjang.  Daun  gugur berlimpah pada musim kemarau dan pertumbuhan  baru  dihasilkan  selama  musim hujan.  Pohon  ini  tumbuh  terbaik  pada  lahan basah  atau  lembab,  tanah  yang  subur,  dengan media paparan sinar matahari penuh di daerah yang  terlindung  dari  angin  kencang.  Bagian tanaman yang paling banyak digunakan untuk dikonsumsi adalah bagian daun (Hassan et al . 2013).
Kratom ( Mitragyna speciosa ) telah banyak  digunakan  secara  tradisional  di  Asia Tenggara  untuk  obat  herbal.  Akhir-akhir  ini, penggunaan  Kratom  telah menyebar  ke  Eropa dan  Amerika  Serikat,  di  mana  potensi penyalahgunaan dan bahaya kesehatan semakin darurat (Singh et al . 2014).
Daun  Kratom  umumnya  dikonsumsi dengan beberapa cara, seperti dikunyah, dibuat seperti  rokok,  atau  dibuat  menjadi  ekstrak. Dalam bentuk bubuk dapat dikonsumsi dengan cara  diseduh  dengan  air  panas  dan  diminum sebagai  teh.  Jeruk  lemon  sering  ditambahkan untuk  memudahkan  ekstraksi  alkaloid  pada daun kratom. Gula atau madu dapat ditambahkan  untuk  menutupi  rasa  pahit  dari minuman itu. Cara lainnya adalah daun kering kemudian  direbus  sampai  berbentuk  seperti sirup.  Garam  biasanya  ditambahkan  untuk mencegah sembelit (Tanguay P. 2011).
Gambar 1 Tanaman Kratom, (a) daun kratom, (b)  pohon  tumbuh  liar,  (c)  dan  (d) budidaya  pohon  kratom  (Hassan et al . 2013).
Daun  kratom  yang  dikonsumsi  dengan cara  ditelan  atau  dirokok  dapat  bertindak sebagai pengganti opium dan bersifat memabukkan. Daun tanaman Kratom  menjadi semakin  banyak  tersedia  di  kalangan  global dengan  penjualannya  melalui  sistem  online. Kratom  menjadi  alternatif  yang  dicari  banyak orang  untuk  alternatif  obat  penghilang  rasa sakit,  antidepresan,  dan  digunakan  dalam penarikan opioid (Raffa RB. 2014).
Di Thailand selatan, dalam beberapa tahun terakhir  dibuat  es  yang  disebut  koktail  yang
JBP Vol. 18, No. 3, December 2016— Livia Elsa
menjadi  populer  di  kalangan  anak  muda karena  diduga  meniru  efek  alkohol.  Koktail terbuat  dari  daun  kratom,  minuman  ringan yang  mengandung  kafein,  dan  codeine  atau difenidramin  yang  merupakan  senyawa  yang terkandung  dalam  sirup  obat  batuk  sebagai tiga  bahan  dasar  yang  memberikan  efek antidepresan.  Konsumsi  koktail  ini  dapat berakibat  fatal  karena  tindakan  multidrug (Tanguay P. 2011).
Efek  fisiologis  dari  konsumsi  kratom tergantung pada dosisnya. Efek stimulan (pada dosis  rendah)  dan  efek  sedatif  (pada  dosis tinggi)  telah  dilaporkan  oleh  Ridayani  Y. (2013).  Berdasarkan  hasil  penelitiannya, ekstrak etanolik daun kratom memiliki potensi efek  sedatif  yang  lebih  besar  dari  diazepam. Menurut  Parthasarathy  S et  al .  (2013)  pada konsentrasi  rendah,  kratom  memberikan  efek merangsang dan euforia namun pada konsentrasi yang lebih tinggi, bertindak seperti opium  yang  mampu  menekan  rasa  sakit  dan digunakan untuk mengurangi sindrom penarikan  opioid.  Kratom  sering  menjadi pilihan  karena  dianggap  lebih  ekonomis dibandingkan  dengan  opioid  lain  seperti heroin (Carpenter JM et al . 2016). Berdasarkan informasi dari warga yang tinggal di  daerah  Kalimantan  dimana  tempat  tumbuh kratom  terbanyak  di  Indonesia,  daun  Kratom tumbuh  liar  dan  tidak  perlu  membeli  untuk mendapatkannya.
Penelitian yang dilakukan oleh Singh et al . (2014)  adalah  mengukur  ketergantungan sistematis Kratom, serta gejala yang ditimbulkan.  Dari  293  pengguna  Kratom  di tiga  negara  bagian  Semenanjung  utara Malaysia,  lebih  dari  setengah  dari  pengguna (>6 bulan penggunaan) mengalami ketergantungan berat, sedangkan 45% menunjukkan  ketergantungan  ringan.  Gejala yang  dialami  secara  fisik  adalah  kesulitan tidur,  mata  dan  hidung  berair,  demam,  nafsu makan  menurun,  dan  diare.  Sedangan  gejala secara  psikologis  adalah  timbulnya  rasa kegelisahan, ketegangan, kemarahan, kesedihan, dan kegugupan (Singh et al . 2014).
Di  Thailand  selatan  dan  utara  Malaysia, penggunaan  Kratom  tidak  dianggap  sebagai 'penggunaan narkoba', hal itu dianggap bagian
dari  cara  hidup  yang  tertanam  erat  dalam tradisi  dan  adat  istiadat  setempat  (Tanguay  P 2011).    Semakin  canggihnya  teknologi memudahkan  segala  akses  termasuk  cara memperoleh  Kratom.  Dengan  adanya  internet jual  beli  Kratom  menjadi  lebih  mudah keseluruh dunia, Rata-rata Negara berkembangan  yang  cenderung  menggunakan kratom  sebagai  zat  atau  obat  yang  tidak dikendalikan  terutama  sebagai  obat  yang menggantikan  morfin,  karena  penggunaan kratom  tidak  dipantau  oleh  sebagian  besar penyalahgunaan narkoba nasional termasuk di Amerika  Serikat  belum  mengatur  penggunaan Kratom (Lu S et al . 2009).
Kratom  pada  tahun  1943  di  Thailand hanya menjadi tanaman
yang diawasi/dikontrol penggunaannya, namun sejak 1979 pemerintah Thailand membuat UU Narkotika  sehingga  menjadi  ilegal  untuk membeli, menjual, mengimpor, atau memilikinya.  Hukuman  diterapkan  juga  bagi yang  menanam  pohon  secara  ilegal,  namun, masyarakat  pribumi  berhasilan  mengolah dalam  beragam  bentuk  sehingga  sulit  untuk menentukan keberadaan Kratom. Di Malaysia, penggunaan  kratom  legal  sampai  tahun  2003. Setelah  itu  dibuat  aturan  penjualan  atau penggunaan  daun  kratom  menjadi  suatu pelanggaran  dengan  hukuman  dan  /  atau hukuman  penjara  (Vicknasingam et  al .  2010). Di  Indonesia  sendiri,  Kratom  secara  hukum masih legal dibudidayakan dan diekspor dalam skala  besar  ke  Asia,  Amerika  Utara,  dan Eropa.
Sebagian besar daun kratom diekspor dari Indonesia  dan  Asia  Tenggara  ke  Amerika Utara  dan  Eropa  untuk  pengolahan  dan redistribusi.  Ketersediaan  luas  kratom  di Internet  menunjukkan  bahwa  permintaan  juga semakin  luas  dan  mudah.  Sebagian  besar pemerintah  belum  mengembangkan  sistem untuk  memantau  penggunaan  kratom  secara lebih  luas.  Di  Thailand,  meskipun  kratom sudah  menjadi  barang  yang  ilegal  dimata hukum,  namun  dibutuhkan  campur  tangan aparat  penegak  hukum  untuk  mengontrol penggunaannya, kepemilikan, produksi, distribusi dan perdagangan. Meskipun preferensi pribadi dan profesional, atas tingkat
tekanan  dari  pemerintah  memaksa  polisi  dan tokoh  masyarakat  untuk  bertindak.  Namun, banyak  aparat  penegak  hukum,  termasuk kantor-kantor nasional dan regional telah jelas menyatakan  bahwa  penegakan  hukum  dan kebijakan kratom bukan prioritas pada saat ini, karena  dengan  adanya  hukum  mengenai kratom menyebabkan perpecahan antara pihak penegak  hukum  dan  masyarakat  di  seluruh Thailand  selatan.  Dalam  ungkapan  seorang petugas  penegak  hukum  senior:  "Dengan kratom  menjadi  ilegal,  kita  harus  campur tangan.  Itu  berarti  memberikan  denda  orang dan  menebang  pohon  di  komunitas  mereka. Sebagian  besar  dari  kita  tidak  benar-benar ingin  melakukan  ini  mengingat  bahwa  ada kejahatan  narkoba  yang  lebih  penting.  Jadi kita  menghabiskan  waktu  berharga  berurusan dengan kratom dan, sebagai imbalannya, kami kehilangan  muka  dengan  masyarakat  karena kita  menyerbu  ruang  mereka,  mengambil pohon  dan  uang  mereka  dari  keluarga  mereka (Tanguay, 2011).
Di tengah upaya pelarangan dan pengurangan  dalam  pasokan  daun  kratom  di Thailand  selatan,  telah  muncul  pasar  gelap yang  terus  berkembang  untuk  distribusi kratom.  Negara  yang  menjadi  sumber  ekspor terbesar  salah  satunya  adalah  Indonesia.  Di Indonesia,  kratom  masih  legal  secara  hukum, meskipun  sudah  ada  wacana  dari  Badan Narkotika  Nasional  (BNN)  untuk  memasukan kratom  dalam  jenis  narkotika  baru  namun masih  belum  ada  kejelasan.  Di  indonesia sendiri,  Kratom  banyak  dibudidayakan  untuk di  ekspor  dalam  jumlah  besar,  dan  cara  yang paling  banyak  dilakukan  adalah  melalui apotek  internet,  untuk  pengguna  di  seluruh dunia (Tanguay, 2011).
2.1 Uji mikroskopik
Daun  Kratom  yang  pada  zaman  modern ini  lebih  banyak  dijual  dalam  bentuk olahannya  dibandingkan  dalam  bentuk  daun segar,  baik  berupa  serbuk  seperti  teh,  bubuk seperti  kopi,  dibuat  kapsul,  atau  dicampurkan dengan  obat  herbal  sehingga  sulit  dikenali bentuk  asalnya.  Salah  satu  uji  yang  dapat dilakukan  adalah  dengan  menguji  dibawah mikroskop untuk mendapatkan pola-pola yang khas pada tumbuhan tersebut, yaitu dengan uji
mikroskopik  seperti  yang  dilakukan  oleh Kowalczuk AP et al (2013).
Pengujian secara mikroskopik yang dilakukan  oleh  Kowalczuk  AP et  al (2013) adalah dengan menggunakan bahan dasar daun segar  Kratom.  Tujuan  dari  penelitiannya adalah untuk membantu memberikan pengetahuan  dari  karakteristik  bagian-bagian dari  daun  Kratom  untuk  aplikasi  pada  bahan yang  sudah  bubuk.  Penelitian  ini  menjadi penting  karena  bahan  tanaman  bubuk  lebih sulit  untuk  dianalisis  dengan  bagian  yang sudah  terpotong-potong  dan  sudah  tidak dikenali  lagi  bagian-bagiannya.  Penelitian secara  anatomi  adalah  salah  satu  cara  yang cepat  untuk  menemukan  material  yang  diuji berasal  dari  sebuah  spesies  yang  berbeda  dan juga  langkah  pertama  untuk  membuktikan konfirmasi suatu tanaman.
Analisis  mikroskopik  dari  potongan- potongan  daun  segar  menunjukkan  tipe struktur  daun,  seperti  parenkim  palisade, parenkim  spons,  dan  fragmen  dari  epidermis dengan  stomata  dan  trikoma  yang  dilakukan oleh Kowalczuk AP et al . (2013).
Analisis  secara  mikroskopik  sendiri  tidak benar-benar  berarti  menjadi  sebuah  metode yang berdiri sendiri untuk identifikasi Kratom, kelemahan uji ini adalah adanya pola anatomi yang  sama  untuk  beberapa  spesies  dengan genus  yang  sama,  sehingga  diperlukan identifikasi  dengan  cara  lain,  yaitu  secara kimia.  Salah  satu  kandungan  senyawa  utama dalam  daun  kratom  adalah  senyawa  golongan alkaloid  terutama  senyawa  mitragynine,  yang mana  telah  dilaporkan  oleh  Sanagi  MM et  al . (2013)  bahwa  Mitragynine  belum  ditemukan dalam  tanaman  lain  selain Kratom,  yakni  dari beberapa  spesies  dengan  genus  Mitragyna, hanya  spesies Mitragyna  speciosa yang mengandung  senyawa  Mitragynine.  Dengan demikian, mitragynine dapat digunakan sebagai  senyawa  penciri  untuk  identifikasi daun Kratom
2.2 Mitragynine
Mitragynine  (Gambar  2)  merupakan alkaloid  aktif  utama  Kratom.  Pertama  kali diisolasi  pada  tahun  1921.  Kandungan mitragynine menyumbang 12% (b/b) dari total kandungan  alkaloid  dalam  Kratom  asal
JBP Vol. 18, No. 3, December 2016— Livia Elsa
Malaysia  dan  66%  (b/b)  dari  Kratom  asal Thailand  berdasarkan  bobot  (Parthasarathy  S et al . 2013). Mitragynine secara kimia dikenal dengan  nama  9-metoksi  corynantheidine memiliki  rumus  molekul  C 23 H 30 N 2 O 4 dengan bobot  molekul  398.50  g/mol.  Mitragynine tidak  larut  dalam  air  namun  larut  dalam pelarut  organik  seperti  aseton,  asam  asetat, alkohol,  kloroform,  dan  dietil  eter.  Bentuk fisik  mitragynine  berwarna  putih,  kristal amorp dengan titik leleh 102–106 o C dan titik didih ~ 235 o C (EMCDDA).
Gambar 2  Struktur Mitragynine.
Mitragynine  merupakan  senyawa  yang dianggap  sebagai  pemberi  efek-efek  yang menyerupai  opoid  lainnya  seperti  heroin  dan morfin.  Senyawa  Mitragynine  khas  terdapat hanya  pada  spesies Mitragyna  speciosa yaitu pada kratom, sehingga Mitragynine digunakan sebagai  perciri  kimia  dalam  penelitian  yang melibatkan daun kratom.
Isolasi  Mitragynine  dilakukan  karena sulitnya  mendapatkan  Standar  baku  dipasaran dan  harga  yang  mahal,  sehingga  solusi  untuk mendapatkan  standar  mitragynine  adalah dengan  cara  isolasi  dari  daun  Kratom.  Isolasi mitragynine  telah  dilakukan  oleh  peneliti- penelti  sebelumnya  seperti  yang  dilakukan oleh  Lu  S et  al .  (2009),  dan  Beng  GT et  al . (2011). Peneliti sebelumnya melakukan isolasi dengan  proses  yang  cukup  panjang.  Rata-rata proses  pemisahan  mitragynine  dari  ekstrak daun  dilakukan  dengan  metode  kromatografi kolom  dan  dengan  proses  ekstraksi  yang rumit.  Pengembangan  metode  yang  dilakukan dalam penelitian ini adalah untuk mendapatkan  metode  yang  lebih  singkat  dan
cepat dengan hasil pemisahan yang baik, yaitu mendapatkan  mitragynine  dengan  kemurnian yang  tinggi.  Proses  pemisahan  dilakukan dengan  metode  KLTP  dari  ekstrak  kasar kratom  yang  kemudian  dikarakterisasi  dengan GC-MS  untuk  melihat  kemurnian  dari  jumlah puncak yang dihasilkan.
Identifikasi  Mitragynine  dalam  daun Kratom  harus  dilakukan  secara  komprehensif agar  terhindar  dari  positif  palsu  seperti  yang dilakukan  oleh  Kowalczuk  AP et  al .  (2013) mulai  dari  metode  yang  konvensional  seperti KLT  sampai  dengan  metode  instrumental HPLC.  Dalam  penelitian  ini  pengembangan metode identifikasi Mitragynine dengan menggunakan  beberapa  kondisi  hasil  dari penelitian  Kowalczuk  AP et  al .  (2013)  dan Chan  KB et  al .  (2009),  yaitu  dengan  metode
KLT, KLT-spektrodensitometri, dan GC-MS.

## 3. METODE PENELITIAN

## 3.1 Uji Mikroskopik
Sampel daun kratom bubuk dilakukan Uji mikroskopis dilakukan di Laboratorium Farmakognosis dan Fitokimia dengan menggunakan  mirkroskop  trinokuler  olympus BX41TF dengan pembesaran 400x.
3.2 Uji GC-MS Preparasi  sampel dilakukan  dengan merujuk  pada  metode  Chan  KB et  al .  (2010). Ditimbang sekitar 2 gram daun kratom bubuk, kemudian  diekstrasi  dengan  25  ml  campuran metanol:kloroform (4:1), diultrasonikasi selama  10  menit,  kemudian  disaring  dengan menggunakan kertas saring, diuapkan, kemudian dibaca profilnya dengan GC-MS.
Kondisi  Instrumen  GC-MS ,  Instrumen GC Agilent y980 series, detektor MSD agilent 597i  dilengkapi  autosampler,  kolom  kapiler HP5  (5%  difenil  95%metil  siloksan)  30  m  x 0.32  mm  x  0.25  m.  Diinjekkan  1µl  sampel dengan pengaturan suhu terprogram pada suhu awal 200 o C ditahan selama 2 menit, kemudian suhu  ditingkatkan  10 o C/menit  sampai  suhu 285 o C ditahan selama 20 menit. Suhu injeksi dan detektor diatur 280 o C.
3.3 Uji KLT.
JBP Vol. 18, No. 3, December 2016— Livia Elsa
Disiapkan  plat  KLT  F 254 1x10  cm sebanyak  2  buah  lalu  sampel  yang  sudah diekstraksi ditotolkan pada plat  KLT.  Pencarian  kondisi  optimum  fase gerak  dilakukan  dengan  merujuk  pada penelitian  yang  dilakukan  oleh  Lu    S et  al . (2009)  dengan  menggunakan  fase  gerak  etil asetat:metanol  (4:1  v/v)  dan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Kowalczuk  AP et  al .  (2013) dengan menggunakan fase gerak n - heksana:etil asetat:amoniak 25%(30:15:1 v/v/v). Masing-masing fase gerak di jenuhkan dalam  chamber,  setelah  jenuh  plat  KLT  siap untuk  dieluasi,  selanjutnya  hasil  eluasi dipantau  nodanya  dibawah  lampu  uv  254  nm dan dipantau nodanya.
3.4 Isolasi mitragynine
Ekstrak  metanol:kloroform  (4:1)  sampel daun  kratom  bubuk  kemudian  dilakukan pemisahan  dengan  metode  KLTP.  Sekitar  0.5 ml  sampel  ditotolkan  pada  plat  KLTP  10x20 cm  lalu  dielusi  dengan  fase  gerak n - heksana:etil  asetat:amoniak  25%  (30:15:1 v/v/v).  Hasil  eluasi  dipantau  dengan  lampu UV  254nm.  Masing-masing  noda  yang  tidak berwarna  dan  berpendar  pada  sinar  UV  254 nm  dikerok  dan  dilarukan  dengan  5  ml metanol  p.a,  divorteks  sekitar  2  menit  dan disentrifugasi selama 5 menit pada 20000 rpm sebanyak  2  kali  ulangan.  Filtrat  metanol kemudian  diuapkan.  Setiap  noda  yang dihasilkan  dari  pemisahan  dianalisis  dengan GC-MS untuk mendapatkan noda mitragynine. 3.5  Identifikasi  Kandungan  Mitragynine dalam Sampel.
Ditimbang masing-masing sekitar 1 gram daun  kratom  bubuk  dan  serbuk,  bubuk  kopi merk  x,  jamu  merk  x,  dan  campuran  kratom bubuk  dengan  jamu  merk  x  (4:1),  kemudian diekstrasi  dengan  10  ml  metanol:kloroform (4:1v/v),  divortex  selama  5  menit,  kemudian disaring  dengan  menggunakan  kertas  saring, diuapkan.
3.6 Identifikasi mitragynine dengan metode KLT dan KLT-densitometri.
Disiapkan  plat KLT  F 254 6x10  cm.  kelima ekstrak sampel yang dibuat kemudian dilarutkan  dalam  5  ml  metanol  p.a,  ditotolkan pada  plat  klt  sebanyak  5x  totolan,  jarak  antar sampel  ~1  cm.  Mitragynine  hasil  isolasi
ditotolkan  pada  plat  KLT  yang  sama. Selanjutnya plat KLT dieluasi dengan menggunakan fase gerak n -heksana:etil asetat:amoniak  25%  (30:15:1  v/v/v)  dan dipantau nodanya dibawah sinar UV 254 nm .

## 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 4.1 Uji mikroskopik
Kowalczuk  AP et  al .  (2013)  melakukan analisis  mikroskopis  dari  daun  segar  kratom yang  dikeringkan  dan  dihaluskan.  Hal  ini  dia lakukan  dengan  tujuan  untuk  memberikan informasi  bagian  dari  pola-pola  daun  kratom secara  mikroskopis  yang  dapat  digunakan untuk  dibandingkan  dengan  sampel-sampel yang  sudah  berupa  olahan  yang  sulit  untuk dikenali,  seperti  sampel  yang  diperoleh  pada penelitian ini. Sehingga hasil analisis mikroskopik yang dilakukakan oleh Kowalczuk  AP et  al .  (2013)  dapat  dijadikan pembanding dalam penelitian ini.
Gambar  3    Hasil  uji  mikroskopik,  (a)  bagian epidermis,  (b)  kristal  kalsium oksalat, (c) trikoma/batang penutup,  (d)  batang  daun,  dan  (e) stomata pada epidemis atas .
Pada  tulang  daun  yang  teramati adanya  serangkaian  kristal  kalsium  oksalat yang  berjejer  dengan  bentuk  druse  pada Gambar  3b.  Rambut  penutut  (trikoma) berbentuk non grandular yang terdiri dari satu sel (Gambar 3c). Bentuk batang daun (Gambar 3d) yang teramati adalah bentuk spiral bentuk stomata parasitik (Gambar 3e) yang umumnya dimiliki oleh famili Rubiaceae termasuk famili Kratom.
Berdasarkan hasil dari pengamatan mikroskopik  bagian  dari  anatomi  daun  yang
teramati dibawah mikroskop, terdapat kemiripan  hampir  disemua  bagian  dengan hasil  penelitian  Kowalczuk  AP et  al .  (2013), sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  sampel  yang digunakan  merupakan  sampel  yang  berasal dari  daun  Kratom.  Namun,  analisis  dengan pencirian berdasarkan mikroskopik saja kurang  mampu  memberikan  informasi  untuk memastikan  bahwa  sampel  yang  diperoleh benar-benar  berasal  dari  daun  Kratom,  karena pola  yang  sama  muncul  pada  genus  yang sama, sehingga beberapa spesies dengan genus yang  sama,  yaitu  Mitragyna  kemungkinan besar memberikan pola yang sama jika dilihat secara  mikroskopis.  Oleh  karena  itu,  analisis kimia diperlukan untuk memberikan informasi yang lebih banyak.

## 4.2 Uji GC-MS
Analisis  kimia  dengan  senyawa  penciri mitragyninie  dilakukan  dengan  tujuan  untuk meyakinkan  bahwa  sampel  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  berasal  dari  daun Kratom. Pola kromatogram gas yang ditunjukkan  pada  Gambar  4  menunjukkan terdapat  pola  yang  khas  dari  kandungan senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam daun Kratom.
Gambar 4 Hasil analisis GC-MS sampel bubuk Kratom, (a) Kromatogram gas dan (b) spektrum massa pada menit ke 18.30.

## 4.3 Uji KLT
Pola  KLT  daun  kratom  pada  fase  gerak dengan  eluen n -heksana:etil  asetat:  amoniak 25%  (30:15:1v/v/v)  (Gambar  5) dari penelitian ini  yang  muncul  dibawah  sinar  UV  254  nm pada R f ~0.5  merupakan  noda  mitragynine apabila  merujuk  pada  penelitian  Kowalczuk AP et al .(2013), yang mana disebutkan bahwa
noda pada R f ~0.49 adalah noda untuk standar mitragynine.
Gambar  5    Noda  KLT  pada  fase  gerak n - heksana:  etil  asetat:  amoniak 25% (30:15:1 v/v/v).

## 4.4 Isolasi mitragynine
Isolasi  mitragynine  dilakukan  karena sulitnya  mendapatkan  standar  dipasaran. Metode  KLTP  dipilih  dalam  penelitian  ini karena  memiliki  beberapa  kelebihan,  yaitu peralatan  yang  lebih  sederhana,  preparasinya mudah,  hemat  pelarut  fase  gerak,  dan umumnya  hampir  semua  laboratorium  dapat melaksanakannya  secara  cepat.  Gambar  6 menunjukkan  hasil  pemisahan  dengan  KLTP yang mana pada R f ~0.5 dikerok dan dilakukan analisis lebih lanjut dengan GC-MS.
Gambar 6 Hasil KLTP ekstrak kratom.
Hasil  analisis  GC-MS  hasil  isolasi mitragynine yang ditunjukkan pada Gambar 7 menunjukkan bahwa hasil isolasi
mitragynine
Rf ~0.5
menunjukkan puncak tunggal secara kromatogram  gas  yang  ditunjukkan  pola spektrum massanya yang menunjukkan senyawa mitragynine.
Gambar  7  Hasil  uji  isolasi  mitragynine  (a)
Kromatogram  gas  dan  (b)  spekrum
Massa.
4.5 Identifikasi mitragynine
Hasil identifikasi sampel dilakukan
dengan  5  variasi.  Pelarut  yang  digunakan adalah  pelarut  metanol:kloroform  karena merupakan  pelarut  yang  optimum  dalam mengekstraksi  mitragynine.    Dua  variasi sampel daun Kratom diperoleh dari pembelian secara online, serta digunakan kopi bubuk dan jamu  merk  “x”  untuk  menentukan  selektifitas dari  metode  yang  digunakan.  Pencampuran jamu  merk  “x”  dengan  daun  kratom  bubuk dengan  porsi  4:1  b/b  dilakukan  juga  dengan tujuan untuk simulasi suatu sampel jamu yang didalamnya  mengandung  campuran  daun kratom mampu juga terdeteksi dengan metode ini.
Berdasarkan  hasil  KLT  (Gambar  8) mitrgagynine  hasil  isolasi  ikut  dipantau  juga nodanya,  berdasarkan  hasil  yang  diperoleh, kopi  dan  jamu  merk  “x”  tidak  menunjukkan adanya  noda  pada R f ~0.5  milik  mitragynine, dan dibuktikan juga dengan KLT-densitometri bahwa  tidak  ada  puncak  yang  muncul  pada daerah  mitragynine.  Sampel  daun  kratom bubuk  dan  serbuk  juga  campuran  jamu  merk ‘x’  dengan  daun  kratom  bubuk  menunjukkan adanya  noda  pada R f mitragynine.  Pola spektrum  yang  mirip  ditunjukkan  pada Gambar  9  dengan  (λ)max  di  sekitar  221  nm. Sehingga
berdasarkan  hasil  yang  ditunjukkan,  selain metode  cepat,  sederhana,  dan  murah  juga menunjukkan  selektivitas  dalam  mendeteksi mitragynine.
Gambar 8  Hasil KLT uji identifikasi sampel, (a) daun Kratom bubuk, (b) daun Kratom  serbuk,  (c)  bubuk  kopi, (d) jamu, (e) isolat mitragynine.
Gambar 9  Pola spektrum KLT-densitometri pada R f ~0.5.

## 5. KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  dari  penelitian  ini  dapat disimpukan bahwa identifikasi daun Kratom yang sudah  dalam  bentuk  olahan  dapat  digunakan metode  uji  secara  botani  yaitu  dengan  uji mikroskopik  dan  secara  kimia  dengan  senyawa penciri mitragynine dengan menggunakan metode KLT,  KLT-densitometri,  dan  GC-MS.  Metode isolasi  yang  dikembangkan  dalam  penelitian ini memberikan metode yang lebih mudah dan sederhana  dengan  metode  KLTP  yang

## a     b      c     d     e     f
menunjukkan puncak tunggal pada kromatografi  gas  yang  diperkuat  dengan  pola spektrum  massa  mitragynine.  Metode ini juga merupakan  metode  yang  selektif  dengan menjukkan  hasil  positif  pada  senyawa  yang mengandung  mitragynine  dan  hasil  negatif pada  senyawa  yang  tidak  mengandung mitragynine.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan  Pengawasan  Obat  dan  Makanan [BPOM].  2005.  Peraturan  Kepala Badan Pengawasan Obat dan
Makanan  Republik  Indonesia  Nomor. HK.00.05.41.1384.
Carpenter  JM,  Criddle  CA,  Craig  HK,  Ali  Z, Zhang  Z,  Khan  IA,  Sufka  KJ.  2016. Comparative  effects  of  Mitragyna speciosa  extract,  mitragynine,  and opioid agonists on thermal nociception in rats. J Fitote . 109:87-90.
Chan  KB,  Pakiam  C,  Rahim  RA.  2009. Psychoactive plant abuse: the identification of mitragynine in ketum and  ketum  preparations. Bulletin  on Narcotics LVII . (1/2):249-256.
Cheaha  D,  Keawpradub  N,  Sawangjaroen  K, Phukpattaranont,  kumarnsit  E.  2015.
Effects  of  an  alkaloid-rich  extract from mitragyna  speciosa leaves  and fluoxetine  on  sleep  profiles,  EEG spectral frequency and ethanol withrawal  symptoms  in  rats. J Phymed . 22:1000-1008.
European  Monitoring  Centre  for  Drugs  and
Drug  Addiction  [EMCDDA].  Kratom
( Mitragyna speciosa ). Diakses:
http://www.emcdda.europa.eu/publica tions  /drug-profiles/kratom/de (Juli
2016). Gandjar  IG  &  Rohman  A.  2007. Kimia Farmasi Analisis . Pustaka pelajar:Yogyakarta.
Hassan Z, Muzaemi M, Navaratnam V, Yusoff NHM,  Suhaimi  FW,  Vadivelu  R,
Vicnasingam  BK,  Amato  D,  Horsten SV, Ismail NIW, Jayabalan N, Hazim AI,  Mansor  SM,  Muller  CP.  2013. From  Kratom  to  mitragynine  and  its
derivatives: Physiological and behavioural  effects  related  to  use, abuse,  and  addiction. J  Neubiorev . 32(2):138-151.
Jansen KLR & Prast CJ. 1988. Ethnopharmacology of kratom and the mitragyna alkaloids. J Ethnopharmacology . 2:115-119. Karasek FW & Clement RE. 2012. Basic Gas Chromatography-Mass  Spectrometry: Principles and Techniques . Elsevier:New York.
Kowalczuk AP, Łozak A, Zjawiony JK. 2013. Comprehensive methodology for identification  of  Kratom  in  police laboratories. J Forsciint . 1-20.
Lesiak  AD,  Cody  RB,  Dane  AJ,  Musah  R. 2014.  Rapid  detection  by  direct analysis in real time-mass spectrometry (DART-MS) of psychoactive  plant  drugs  of  abuse: The  case  of Mitragyna  speciosa aka “Kratom”. J Forsciint . 242:210-218.
Lu S, Tran BN, Nelsen JL, Aldous KM. 2009. Quantitative  analysis  of  mitragynine in  human  urine  by  high  performance liquid  chromatography-tandem  mass spectrometry. J Chromb . 877(24):2499-2505.
Matsumoto  K,  Horie  S,  Ishikawa  H, Takayama  H,  Aimi  N,  Ponglux  D, Watanabe  K.  2004.  Antinociceptive effect  of  7-hydroxymitragynine  in mice:  discovery  of  an  orally  active opioid  analgesic  from  the  Thai medicinal  herb  Mitragynaspeciosa. Life Sciences 74, 2143–2155 Parthasarathy S, ramanathan S, murugaiyah V, Hamdan  MR,  Said  MIM,  Lai  CS, Mansor  SM.  2013.  A  simple  HPLC- DAD  method  for  the  detection  and quantification of psychotropic mitragynine  in mitragyna  speciosa (ketum)  and  its  product  for  the application in forensic investigation. J Forsciint . 226:183-187.
Raffa RB. 2014. Kratom and Other
Mitragynine:  The  Chemistry  and Pharmacology of Opioids from a Non-
Opium  Source .  CRC  Press:Taylor  & Francis Group. Ridayani Y.2013. Uji efek sedatif fraksi etanol daun  kratom  ( Mitragyna  speciosa . Korth)  pada  mencit  jantan  galur BALB/c.  [Skripsi].  Farmasi  Fakultas
Kedokteran:Universitas  Tanjungpura
Pontianak (ID). Singh D, Muller CP, Vicknasingam BK.2014.
Kratom ( Mitragyna speciosa ) dependence,withdraw alsymptoms and craving in regular users. J Drugalcdep . 139(1):132-137. Tanguay  P.  2011.  Kratom  in  Thailand. Legislative  Reform  of  Drug  Policies 13:1–16. Vicknasingam  B,  Narayanan  S,  Beng  GT, Mansor  SM.  2010.  The  informal  use of  ketum  ( Mitragyna  speciosa )  for opioid  withdrawal  in  the  northern states  of  peninsular  Malaysia  and implications  for  drug  substitution therapy. International Journal of Drug Policy . 21:283–288.
Warner  ML,  Kaufman  NC,  Grundmann  O. 2016. The
pharmacology
& toxicology of kratom. from traditional herb  to  drug  of  abuse. International Journal of Legal Medicine .
130(1):127-138.