https://ejo urnal. unsrat.ac.id/v3/index.p hp/ p harmacon

## PHARMACON
ISSN (print): 2302 - 2493 ISSN (online): 2721 - 4923

## Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Alga Halimeda opuntia dari Perairan
Desa Poopoh Kabupaten Minahasa Terhadap Pertumbuhan Bakteri

## Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus
Tikonuwu Bryan 1* , Wewengkang Defny 1 , Rumondor Erladys 1
1 Program Studi Sarjana Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi. *Corresponding author email: tikonuwubryan@gmail.com

## I N F O R M A S I A R T I K E L A B S T R A C T
Diterima pada 11 Juli 2023
Disetujui pada 27 Mei 2024 Dipublikasikan pada 28 Mei 2024
Hal. 507 - 514
Halimeda opuntia is a genus of seaweed from the Chlorophyta division that contains bioactive compounds  that  can  be  utilized  in  various  fields,  especially  in  medicine.  This  study  was conducted  with  the  aim  of  determining  the  antibacterial  activity  of Halimeda  opuntia algae extracts  obtained  from  coastal  waters  of  Poopoh  Village,  Tombariri  District,  Minahasa Regency against Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus bacteria. Samples were extracted by maceration method using 95% ethanol solvent. Antibacterial activity testing was conducted  using  the Kirby  and  Bauer  Disc  Diffusion method.  The  results  showed  that  the average diameter of the inhibition zone against Pseudomonas aeruginosa test bacteria was 6.83 mm and for Staphylococcus aureus test bacteria was 8.58 mm, the inhibition zone that arose against these two bacteria was included in the medium inhibition category. Through this study, it can be concluded that ethanol extract has antibacterial activity against test bacteria, especially on Staphylococcus aureus bacteria.
Keywords: Algae, Halimeda opuntia, antibacterial activity, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus

## A B S T R A K
DOI: 10.35799/pha.13.2024.49364
Halimeda  opuntia adalah  salah  satu  genus  rumput  laut  dari  divisi Chlorophyta yang mengandung senyawa bioaktif sehingga dapat dimanfaatkan dalam berbagai bidang khususnya pada pengobatan. Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  alga Halimeda  opuntia yang  diperoleh  dari  perairan  pantai  Desa Poopoh  Kecamatan  Tombariri  Kabupaten  Minahasa  terhadap  bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus  aureus. Sampel  diekstrak  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  etanol  95%.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan menggunakan  metode Disc  Diffusion Kirby  and  Bauer .  Hasil  penelitian  menunjukkan diameter rata-rata zona hambat terhadap bakteri uji Pseudomonas aeruginosa yaitu 6,83 mm dan untuk bakteri uji Staphylococcus aureus yaitu 8,58 mm, zona hambat yang timbul terhadap kedua bakteri ini termasuk dalam kategori daya hambat sedang. Melalui penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri uji terutama pada bakteri Staphylococcus aureus . Kata Kunci: Alga, Halimeda opuntia , aktivitas antibakteri, Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  merupakan  penyakit  yang  menjadi  masalah  kesehatan  di  seluruh  dunia, termasuk  di  Indonesia.  Ini  adalah  penyebab  utama  meningkatnya  morbiditas  dan mortalitas   (Purnomo  dkk,  2012).  Penanganan  untuk  mengatasi  penyakit  infeksi  yaitu  dengan menggunakan antibiotik. Penggunaan antibiotik yang tidak sesuai dengan aturan dapat menyebabkan bakteri  menjadi  resisten.  Resistensi  antibiotik  bakteri  adalah  ketidakmampuan  antibiotik  untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Hal  ini  mempunyai  dampak  terbesar  bagi  kesehatan  manusia. Setidaknya 2 juta orang terinfeksi bakteri resisten antibiotik dan 23.000 orang meninggal setiap tahun sebagai akibat langsung dari infeksi tersebut . (Frieden, 2013)
Antibakteri  adalah  senyawa  yang  diproduksi  oleh  mikroorganisme  dalam  konsentrasi  kecil yang  mampu  menghambat  bahkan  membunuh  proses  kehidupan  mikroorganisme.  Antibakteri termasuk ke dalam antimikroba yang digunakan untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Suatu zat aktif dikatakan memiliki aktivitas sebagai antibakteri apabila dalam konsentrasi yang rendah mampu memberi  daya  hambat  terhadap  bakteri  (Pratiwi,  2014).  Antibiotik  berspektrum  luas  ( Broad Spectrum )  mampu  menghambat  bahkan  membunuh  bakteri  dari  golongan  Gram-positif  maupun Gram-negatif. Antibiotik jenis ini diharapkan dapat mematikan sebagian besar bakteri termasuk virus tertentu.  Antibiotik  yang  termasuk  dalam  spektrum  luas  ini  yaitu  tetrasiklin  dan  derivatnya, kloramfenikol, ampisillin, dan sefalosporin. Antibiotik yang berspektrum sempit ( narrow spectrum ), hanya  mampu  menghambat  segolongan  bakteri  saja,  misalnya  hanya  mampu  menghambat  atau membunuh  bakteri  Gram-positif  saja  atau  bisa  juga  hanya  membunuh  bakteri  Gram-negatif  saja. Antibiotik golongan ini hanya aktif terhadap beberapa jenis bakteri. Antibiotik yang termasuk dalam spektrum sempit yaitu penisilin, streptomisin, neomisin, basitrasina dan pilimisin B (Dewi, 2013).
Halimeda merupakan salah satu genus alga dalam divisi Chlorophyta yang berpotensi sebagai antibakteri  dan  antioksidan  alami. Halimeda  opuntia adalah  spesies  alga  berkapur  dan diklasifikasikan dalam ordo Bryopsidales . Alga ini banyak dijumpai di terumbu karang yang kondisi pantainya tenang dan agak terlindung. Alga H. opuntia berperan penting dalam produksi primer dan pembentukan  sedimen  karbonat  di  perairan  koral  tropis  (Agus et  al .,  2020).  Nufus et  al (2017) menyatakan  bahwa H.  opuntia memiliki  beberapa  komponen  aktif  antara  lain  alkaloid,  flavonoid, steroid dan triterpenoid. Sebagian besar senyawa aktif pada alga H. opuntia merupakan senyawa aktif dengan aktivitas  antibakteri.  Selain  itu, H.  Opuntia juga memiliki sifat  antioksidan, antijamur dan antimikroba.
Bakteri Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri yang dapat menyebabkan infeksi pada luka dan luka bakar dengan nanah hijau kebiruan karena pigmen prosianin, juga dapat menyebabkan meningitis bila masuk lewat punksi lumbal (Mayasari, 2015). P. aeruginosa termasuk bakteri Gram- negatif, berbentuk batang, menghasilkan enzim oksidase dan katalase, mampu memproduksi pigmen serta termasuk  -hemolysis (Carroll et al. 2017). Bakteri ini tergolong patogen opportunistic  yang merupakan bakteri yang secara alami bukan berada di habitat suatu lingkungan tetapi masuk akibat tercemarnya lingkungan dengan limbah manusia.
Bakteri  Staphylococcus  aureus  menginfeksi  jaringan  atau  organ  dan  dapat  menyebabkan penyakit  yang  ditandai  dengan  peradangan,  nekrosis,  dan  pembentukan  abses.  S.  aureus  sering menyebabkan  penyakit  sporadis (Inayatullah,  2012).  S.  aureus  merupakan  bakteri  Gram-positif berbentuk bulat berdiameter 0,7-1,2 µm yang tersusun dalam kelompok-kelompok yang tidak teratur seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk spora, dan tidak bergerak (Kristiani, 2018).
Bakteri ini merupakan patogen penting yang berkaitan dengan virulensi toksin, invasif, dan ketahanan terhadap antibiotik (Rahmi et al, 2015).

## METODOLOGI PENELITIAN Pelaksanaan Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  November  2022  sampai  dengan  bulan  Mei  2023  di Laboratorium  Farmakognosi  &  Fitokimia,  Laboratorium  lanjutan  Program  Studi  Farmasi  Fakultas Matematika  &  Ilmu  Pengetahuan  Alam  dan  Laboratorium  Hama  &  Penyakit  pada  Tumbuhan Fakultas Pertanian.

## Alat dan Bahan Alat
Dalam penelitian ini, alat yang digunakan yaitu scuba diving (peralatan selam), kamera, cool box , zipper  lock  bag ,  sarung  tangan,  talenan,    gunting,  pisau,  botol  air  kemasan  600  ml,  spidol permanen,  kertas  label,  jas  lab,  masker, handscoon ,  gelas  ukur  ( pyrex ),  gelas  kimia  ( pyrex ), erlenmeyer ,    corong  gelas,  wadah  kaca,  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi,  cawan  petri, microtube , spatula, mikropipet,  jangka sorong, pinset, batang pengaduk, magnetic stirrer , timbangan analitik, lampu  bunsen,  lemari  pendingin,  oven, incubator  incucell (N-Biotek), rotary  evaporator (EYELA OSB-2100 ), laminary air flow dan autoklaf (autoklaf KT-30s).

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  alga Halimeda  opuntia ,  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa ,  etanol,  metanol,  aquades,  natrium  klorida, pepton, beef extract , nutrient agar, kertas cakram ( blank paper disc ), kertas cakram kloramfenikol ( cloramphenicol paper disc ), alumunium foil , kertas saring, kertas pH, kapas, tisu.

## Pengambilan Sampel
Sampel  alga H.  opuntia diambil  di  perairan  pantai  Desa  Poopoh  Kecamatan  Tombariri Kabupaten Minahasa dengan menggunakan alat bantu selam scuba diving hingga kedalaman 5 meter di bawah permukaan air. Sampel yang telah diambil, dimasukkan ke dalam plastik zipper lock bag dan diletakkan dalam cool box yang sudah diberikan es batu serta tidak terkena paparan sinar matahari secara langsung. Sampel kemudian dibawa ke Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi. Sampel difoto, diberi label serta diberikan nomor untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi Sampel
Sampel  alga H.  opuntia diekstrak  menggunakan  metode  maserasi  etanol  95%.  Kemudian sampel disortasi basah, dibagi menjadi potongan kecil dan diletakkan dalam wadah (botol ukuran 600 mL).  Sampel  direndam  menggunakan  pelarut  etanol  hingga  terendam  seluruhnya.  Proses  ini dilakukan selama 24 jam, setelah itu disaring menggunakan kertas saring hingga terbentuk filtrat 1 dan  debris  1.  Debris  1  diremaserasi  selama  24  jam  dengan  pelarut  etanol  sampai  seluruh  sampel terendam,  kemudian  dilakukan  penyaringan  menggunakan  kertas  saring  sampai  terbentuk  filtrat  2 dan debris 2. Debris 2 diremaserasi selama 24 jam dengan etanol hingga seluruh sampel terendam, kemudian  dilakukan  penyaringan  hingga  terbentuk  filtrat  3  dan  debris  3.  Filtrat  1,  2  dan  3  yang
diperoleh  dari  proses  maserasi  dicampur  menjadi  satu  kemudian  disaring  kembali. Setelah  proses penyaringan selesai, filtrat dibawa ke Laborataorium Hama dan Penyakit pada Tumbuhan Fakultas Pertanian  untuk    dievaporasi  dengan  menggunakan  alat rotary  evaporator (EYELA OSB-2100 )  pada suhu  40°C  hingga  diperoleh  ekstrak  kasar  kemudian  ditimbang  menggunakan  timbangan  analitik. Ekstrak kasar alga H. opuntia dibawa kembali  ke  Laboratorium  Farmakognosi &  Fitokimia untuk disimpan.

## Sterilisasi Alat
Semua alat yang digunakan dalam penelitian ini disterilisasi. Pinset disterilisasi dengan cara dibakar  langsung  diatas  api.  Media  dan  peralatan  gelas  dilakukan  sterilisasi  dengan  menggunakan autoklaf pada suhu 121 o C dengan tekanan 1 atm selama 15 menit (Putri et al ., 2020).

## Pembuatan Media Cair
Media  cair  dibuat  dengan  mencampurkan  0,3  g  ekstrak  daging  ( beef  extract ),  100  mL aquadest,  0,5  g  pepton  dan  0,3  g  natrium  klorida  dengan  menggunakan magnetic  stirrer sampai homogen  kemudian  disterilkan  pada  suhu  121°C  dengan  tekanan  1  atm  selama  15  menit menggunakan autoklaf. Setelah itu pH media cair diukur dengan menggunakan kertas pH. Masukkan media cair sebanyak 1 mL ke dalam tabung reaksi kemudian ditutup menggunakan alumunium foil . Media cair siap digunakan sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri Uji
Media cair yang telah dibuat sebelumnya, diberikan masing-masing 100 µL bakteri yang telah dikultur yaitu P. aeruginosa dan S. aureus ke dalam tabung reaksi yang berbeda. Tiap tabung reaksi ditutup  menggunakan alumunium  foil dan  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  1  x  24  jam  (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
Dalam proses pengujian antibakteri, chloramphenicol paper disc digunakan sebagai kontrol positif dan blank paper  disc yang telah ditotolkan metanol  100 µL100 µL  sebagai  kontrol negatif (Josua et al ., 2021)

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara melarutkan 2 mg ekstrak kasar alga H. opuntia menggunakan 400 µL metanol sampai menghasilkan konsentrasi larutan uji dengan besar 250 µg/50 µL. (Josua et al ., 2021).

## Pembuatan Media Agar
Media agar dibuat dengan mencampurkan 0,3 g ekstrak daging ( beef extract ), 0,5 g pepton, 0,3  g  natrium  klorida,  1,5  g  nutrien  agar  dan  100  mL  aquades  hingga  homogen  menggunakan magnetic stirrer kemudian disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 1 atm selama 15 menit. Media agar siap digunakan dalam pengujian aktivitas antibakteri (Ortez, 2005)

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri,  metode  yang  digunakan  yaitu  metode  difusi  ( disc diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Kertas  cakram  ( paper  disc )  yang  digunakan  berukuran  6  mm  dengan
daya serap 50 μL tiap cakram. Sampel dengan konsentrasi 250 μg/50 μL ditotolkan pada masing- masing cakram dengan menggunakan mikropipet. Bakteri yang telah dikultur ( P. aeruginosa dan S. aureus ) dipipet kemudian diinokulasi pada media agar yang telah steril di suhu sekitar 40 o C. Media agar yang telah diinokulasi dituangkan ke dalam cawan petri dan diamkan hingga media mengeras. Kertas cakram yang telah ditotolkan sampel uji alga H. opuntia diletakkan menggunakan pinset ke dalam cawan petri dan diinkubasi selama 1 x 24 jam (Josua et al ., 2021).

## Pengamatan dan Pengukuran Diameter Zona Hambat
Daerah yang timbul disekitar cakram menunjukkan kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau sampel  uji  yang  dinyatakan  dengan  diameter  zona  hambat.  Pengukuran  diameter  zona  hambat dilakukan menggunakan mistar berskala. Diameter ≤ 5 mm memiliki kekuatan daya hambat lemah, 6-10 mm daya hambat sedang, 11-20 mm daya hambat kuat dan ≥21 mm daya hambat sangat kuat (Davis dan Stout, 1971)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Metode  difusi  digunakan  untuk  menentukan  sensitivitas  mikroba  uji  terhadap  agen antimikroba. Disc diffusion test dilakukan dengan mengukur diameter zona hambat yang merupakan petunjuk adanya respon penghambatan pertumbuhan bakteri oleh suatu senyawa antibakteri dalam ekstrak.  Metode  ini  dilakukan  dengan  menggunakan  kertas  cakram.  Letakkan  kertas  cakram  yang telah ditotolkan sampel, kertas cakram kloramfenikol dan kontrol negatif kedalam media agar yang telah diinokulasi dengan bakteri. Area jernih pada permukaan media agar mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan  mikroorganisme oleh agen antimikroba. Kelebihan metode difusi  ini  yaitu mudah  dilakukan  karena  tidak  menggunakan  alat  khusus  dan  mencakup  fleksibilitas  mikroba terhadap antimikroba pada konsentrasi yang telah ditentukan (Katrin et al ., 2015).
Bakteri yang digunakan yaitu S. aureus yang mewakili bakteri gram positif dan P. aeruginosa mewakili  bakteri  gram  negatif.  Kedua  bakteri  ini  digunakan  untuk  mengetahui  kemampuan antibakteri dari ekstrak etanol alga H. Opuntia . Ada atau tidaknya aktivitas antibakteri dari ekstrak H. opuntia ditandai dengan adanya zona bening yang muncul di sekeliling kertas cakram yang telah diberikan larutan uji ektrak. Kertas cakram yang digunakan memiliki diameter 6 mm. Masing-masing kertas  cakram  memiliki  daya  serap  sebesar  50µL.  Konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan  yaitu  250 µL/50  µL.  Kertas  cakram  yang  digunakan  adalah  8  buah  yang  terdiri  dari  3  kertas  cakram  untuk pengujian pada bakteri S. aureus untuk 3 kali pengulangan, 3 kertas cakram untuk pengujian pada bakteri P. aeruginosa untuk 3 kali pengulangan dan 2 kertas cakram sebagai cadangan ketika terjadi kesalahan. Pengujian diamati setelah 1 x 24 jam diinkubasi dengan suhu 37 o C. Dalam pengujian ini dilakukan  pengulangan  selama  3  kali  bertujuan  untuk  mendapatkan  hasil  yang  lebih  akurat.  Hasil pengukuran rata-rata diameter daya antibakteri dari ekstrak etanol ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Pengukuran Rata-Rata Diameter Daya Antibakteri dari Ekstrak Alga Halimeda opuntia
Pengujian ini menggunakan kontrol positif dan kontrol negatif sebagai pembanding. Kontrol positif  yang  digunakan  yaitu  kloramfenikol  karena  merupakan  antibiotik broad-spectrum yang berkhasiat bakteriostatik terhadap Gram-positif dan bakteri Gram-negatif (Katzung, 2018). Kontrol positif  digunakan  untuk  membandingkan  daerah  hambat  yang  terbentuk  antara  kontrol  dengan ekstrak sampel yang digunakan. Dari hasil yang diperoleh, kloramfenikol yang merupakan kontrol positif menunjukkan diameter zona hambat rata-rata sebesar 22 mm.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metanol.  Utomo  (2018) menyebutkan  bahwa  zat  yang  digunakan  sebagai  kontrol  negatif  adalah  pelarut  yang  digunakan sebagai pengencer dari senyawa yang akan diuji. Dalam penelitian ini pelarut yang digunakan untuk mengencerkan  sampel  adalah  metanol.  Sehingga  kontrol  negatif  yang  digunakan  adalah  metanol. Tujuannya  yaitu  sebagai  pembanding  bahwa    pelarut  yang  digunakan  sebagai  pengencer  tidak mempengaruhi hasil uji antibakteri dari senyawa yang akan diuji. Hasil zona bening kontrol negatif terhadap P. aeruginosa dan S. aureus adalah 0 mm. Hal ini menunjukkan bahwa penggunaan pelarut metanol tidak mempengaruhi hasil uji antibakteri dari ekstrak alga H. opuntia. Pengujian aktivitas antibakteri  dari  sampel  alga  H.  opuntia  menggunakan  pedoman  penggolongan  kekuatan  daya antibakteri menurut Davis and Stout (1971) yang ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2 . Kategori Kekuatan Daya Antibakteri Berdasarkan Davis dan Stout
Daya Hambat Antibakteri Kategori Daya Hambat Antibakteri ≥ 21 mm Sangat kuat 11-20 mm Kuat 6-10 mm Sedang ≤ 5 mm Lemah
Pada media uji bakteri P. aeruginosa menunjukkkan bahwa diameter rata-rata zona bening yang terbentuk berada pada rentang 6,83 mm dimana berdasarkan pada penggolongan kekuatan daya hambat menurut Davis and Stout termasuk dalam kategori sedang. Untuk media uji bakteri S. aureus, diameter rata-rata zona bening yang terbentuk ada pada rentang 8,58 mm yang menurut Davis  dan Stout juga termasuk dalam kategori sedang. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol dari alga H. opuntia memiliki senyawa aktif yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri P. aeruginosa dan S. aureus. Adanya zona hambat yang terbentuk di kedua media uji bakteri menandakan bahwa senyawa aktif dari ekstrak etanol alga H.opuntia memiliki spektrum kerja yang luas untuk bakteri gram negatif dan bakteri gram positif. P. aeruginosa merupakan bakteri Gram-negatif.
Utomo  (2018)  menjelaskan  bahwa,  lapisan  dinding  sel P.  aeruginosa lebih  kompleks  jika dibandingkan dengan S. aureus . Bakteri Gram-positif ( S. aureus ) dinding selnya hanya tersusun oleh
Ulangan Bakteri Kontrol Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus + - I II III 6,75 6,75 7,00 9,25 9,50 7,00 22 - ∑ 20,50 25,75 x̄ 6,83 8,58
peptidoglikan  dan  membran  plasma  tunggal.  Sedangkan  bakteri  Gram-negatif  ( P.  aeruginosa ) tersusun oleh membran plasma luar, membran plasma dalam, serta peptidoglikan. Membran plasma luar  di  bagian  dinding  sel  bisa  menghalangi  masuknya  zat  antibiotik  dan  juga  sebagai  sistem pertahanan inang. Hal inilah yang menyebabkan adanya perbedaan kekuatan daya antibakteri yang ditandai dengan diameter rata-rata pada bakteri P. aeruginosa dan S. aureus .

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil yang diperoleh dari penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol dari sampel alga Halimeda opuntia yang diambil dari perairan Poopoh Kabupaten Minahasa memiliki aktivitas  antibakteri  terhadap  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas  aeruginosa (6,83  mm)  dan Staphylococcus aureus (8,58 mm) yang digolongkan dalam kategori sedang.

## SARAN
Berdasarkan hasil yang telah diperoleh melalui penelitian aktivitas antibakteri ekstrak alga H. opuntia , disarankan untuk penelitian berikutnya dilanjutkan ke tahap fraksinasi agar dapat diketahui lebih lanjut tentang potensi dari alga H. opuntia sebagai antibakteri melalui masing-masing fraksi. Selain  itu,  pengambilan  ekstrak H.  opuntia untuk  penelitian  selanjutnya  disarankan  untuk  dapat diambil di lokasi yang berbeda karena kandungan dari bahan alam yang berada di suatu lokasi berbeda dengan lokasi yang lain bisa saja berbeda tergantung dengan kondisi sekitarnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Agus,  Y.  Nur,  I.  A.  H.  Aninditya,  A.  S.  Nindya,  H.  W.  Adenia,  C.  A.  Nadia,  F.  Muamar,  M. Muhammad, N. F. Nurjanah. dan Asadatun, A. 2020. Karakterisasi Komponen Kimia dan Screening  Fitokimia Halimeda  macroloba dari  Perairan  Jakarta.  Prosiding  Seminar Nasional Hasil Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan Tahun 2020. Hlm 57-66
Carroll KC, Morse SA, Mietzner T, Miller S. 2017. Jawetz, Melnick and Adelberg’s Mikrobiologi Kedokteran. Edisi 27. Penerbit Buku Kedokteran, Jakarta
Davis, W. W., T.R. Stout. 1971. Disc plate method of microbiological assay. Journal of microbiology 22: 659-665.
Dewi,  A.K.  2013.  Isolasi,  Identifikasi  dan  Uji  Sensitivitas  Staphylococcus  auerus  terhadap Amoxicillin  dari  Sampel  Susu  Kambing  Peranakan  Ettawa  (PE)  Penderita  Mastitis  Di Wilayah Girimulyo, Kulonprogo, Yogjakarta Journal of Sain Veterinary , 138-150
Frieden, T., 2013. The Threat of Antibiotic Resistance, dalam: Antibiotic Resistance Threats in The United States. US Departement of Health and Human Services, United States.
Inayatullah, S. (2012) Efek Ekstrak Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aereus [skripsi]. Universitas Islam Negeri Jakarta.
Josua,  E.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan  Suoth,  E.  2021.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi Spons Liosina paradoxa dari Perairan Pulau Mantehage. Pharmacon 10(3) : 933-939.
Katrin,  D.,  N.  Idiawati,  dan  B.  Sitorus.  2015.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dari  Ekstrak  Daun  Malek (Litsea graciae Vidal) Terhadap Bakteri Stapylococcus aureus dan Escherichia coli. JKK 4(1).
Katzung B G. 2018. Basic Clinical Pharmacology. 14th Ed. Mc Graw Education. North America. Kristiani, F. B, T. U. Soleha, dan A. J. Wulan. 2018. Perbedaan Daya Hambat Ekstrak Bawang Daun (Allium  fistulosum  L.)  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri  Methiciilin  Resistant Staphylococcus aureus Secara In Vitro. Manjority . 7(1) : 42-49
Mayasari  E,  2015.  Pseudomonas  aeruginosa;  Karakteristik,  Infeksi  dan  Penanganan.  e-USU Repsoitory, Medan.
Nufus,  C.,  Nurjanah.,  dan  Abdullah,  A.  2017.  Karakteristik  Rumput  Laut  Hijau  Dari  Perairan Kepulauan  Seribu  Dan  Sekotong  Nusa  Tenggara  Barat  Sebagai  Antioksidan. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan . 20 (3) : 627-628
Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion testing in manual of antimicrobial susceptibility testing. Marie B. Coyle (Coord. Ed). American society for Microbiology. America.
Purnomo B. 2012. Dasar-Dasar Urologi. Ed. 3. Sagung Seto, Jakarta.
Pratiwi. 2014. Skrining Uji Efek Antimitosis Ekstrak Daun Botto-Botto (Chromolaena odorata L.) Menggunakan  Sel  Telur  Bulubabi  (Tripneustus  gratilla  L.)  [skripsi].  Fakultas  Ilmu Kesehatan UIN Alauddin, Makasar
Putri, R. A., Simbala, H. E., dan Mpila, D. A. 2020. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Salmonella typhi. Pharmacon. 9(4) : 525-532.
Rahmi, A.H. et al . 2015. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Beluntas ( Pluchea Indica (L.) Less. ) Terhadap  Propionibacterium  Acnes  Penyebab.  Jerawat  [skripsi].  Fakultas  Sains  dan Teknologi, UIN Sunan Gunung Djati, Bandung.
Utomo, S. B. dkk. 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa C-4- Metoksifenilkaliks Resorsinarena Termodifikasi Hexadecyltrimethylammonium-Bromide Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus Dan Escherichia Coli. Jurnal Kimia dan Pendidikan Kimia 3 (3): 201-209.