Jurnal Pharmascience, Vol. 06 , No.01, Februari 2019, hal: 57- 63 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience
Research Article

## Potensi Antioksidan Vitex pinnata Linn Secara In Vivo
*Fatmaria , Angeline Novia Toemon, Trilianty Lestarisa, Dian Mutiasari, Dian Tri Yeni
Fakultas Kedokteran Universitas Palangka Raya,Jl.Hendrik Timang,
Palangka Raya, Indonesia Email : fatmaria@med.upr.ac.id

## ABSTRAK
Stres  oksidatif  merupakan  suatu  kondisi  ketidakseimbangan  antara  produksi radikal  bebas  dengan  antioksidan  dimana  kadar  radikal  bebas  lebih  tinggi dibandingkan  antioksidan.  Di  dalam  tubuh,  radikal  bebas  bersifat  toksik  dan  dapat menimbulkan  kerusakan  sel.  Senyawa  yang memiliki  aktivitas  antioksidan diperlukan untuk menangkal radikal bebas. Kulit batang laban (Vitex pinnata  Linn) mengandung flavonoid  dan  berpotensi  sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk membuktikan  potensi  antioksidan  kulit  batang  laban  dalam  menurunkan  kadar malondialdehida  (MDA)  dan  meningkatkan  aktivitas  superoksida  dismutase  (SOD). Metode penelitian  sebagai  berikut tikus wistar dibagi  menjadi 5 kelompok antara lain kelompok  normal,  kelompok  negatif  (DMBA  20mg/kg  BB),  kelompok  uji  I  (DMBA 20mg/kg BB dan ekstrak kulit batang laban 150mg/kg BB), kelompok uji II (DMBA 20 mg/kg  BB  dan  ekstrak  kulit  batang  laban  300mg/kg  BB),  kelompok  uji  III  (DMBA 20mg/kg  BB  dan  ekstrak  kulit  batang  laban  600mg/kg  BB).  Pengukuran  kadar  MDA serum  dan  aktivitas  SOD  dilakukan  setelah  30  hari  pemberian  perlakuan.  Hasil  yang diperoleh  ekstrak  kulit  batang  laban dosis  150mg/kg  BB,  300mg/kg  BB  dan  600mg/kg BB secara signifikan dapat menurunkan kadar MDA sebesar 13,30%, 21,26%, 29,53%. Ekstrak kulit batang laban dosis 150mg/kg BB, 300mg/kg BB dan 600mg/kg BB secara signifikan  dapat  meningkatkan  aktivitas  SOD  sebesar  64%,  72,31%,  77,50%.  Hal  ini menunjukkan ekstrak kulit batang laban memiliki aktivitas sebagai antioksidan karena mengandung  senyawa  flavonoid  yang  dapat  mendonorkan  atom  hidrogen  ke  radikal bebas yang bersifat reaktif karena memiliki  satu elektron tidak berpasangan sehingga mengurangi  pembentukan  radikal  bebas  seperti  MDA  dan  meningkatkan  aktivitas SOD.
Kata  kunci:  Vitex  pinnata,  superoksida  dismutase,  malondialdehida,  antioksidan, DMBA

## ABSTRACT
Oxidative  stress  is  a  condition  of  an  imbalance  between  the  production  of  free radicals  and  demand  of  antioxidant.  Free  radicals  are  toxic  and  can  cause  cell  damage. Antioxidant are compounds that can scavenging free radicals. Vitex pinnata Linn contain
flavonoid  compounds  as  antioxidant.  The  objective  of  research  is  proved  antioxidant activity of Vitex pinnata Linn in decrease malondialdehyde (MDA) and increase activity of superoxide  dismutase  (SOD).  The  method  as  follows:  Wistar  rats  were  divided  into  5 groups  including  normal  group,  negative  group  (DMBA  dose  of  20mg/kg  body  weight), group  I  test  (DMBA  dose  of  20mg/kg  body  weight  and  extract  Vitex  pinnata  dose  of 150mg/kg  body  weight),  group  II  test  (DMBA  dose  of  20mg/kg  body  weight  and  extract Vitex pinnata dose of 300mg/kg body weight), group III test (DMBA dose of 20mg/kg body weight  and  extract  Vitex  pinnata  dose  of  600mg/kg  body  weight).  The  results  obtained extract  Vitex  pinnata  dose  of  150mg/kg  body  weight,  300mg/kg  body  weight,  600mg/kg body weight significantly decreased MDA levels by 13,30%, 21,26%, 29,53%. Extract Vitex pinnata  dose  of  150mg/kg  body  weight,  300mg/kg  body  weight,  600mg/kg  body  weight significantly  increased  SOD  activity  by  64%,  72,31%,  77,50%.  This  shows  that  extract Vitex  pinnata  has  an  antioxidant  activity  because  contain  flavonoid  compounds  that  can donate hydrogen atoms to free radicals which have one unpaired electron thus decreasing the production of MDA and increasing SOD activity.
Keywords: Vitex pinnata, superoxide dismutase, malondialdehyde, antioxidant, DMBA

## I. PENDAHULUAN
Stres oksidatif merupakan suatu kondisi ketidakseimbangan antara produksi radikal bebas dengan antioksidan dimana  kadar  radikal  bebas  lebih  tinggi dibandingkan  antioksidan.  Radikal  bebas adalah  suatu  senyawa  atau  molekul  bebas yang  mengandung  satu  elektron  tidak berpasangan  dan  bersifat  reaktif  (Lankin, 2003). Salah satu kerusakan yang diakibatkan  oleh  kondisi  stres  oksidatif adalah peroksidasi lipid yang menghasilkan  peroksida  lipid    salah satunya senyawa aldehid. Senyawa aldehid yang dihasilkan diantaranya malondialdehida (MDA) (Halliwell, et al., 2007).
Senyawa  yang  dapat  menghambat dampak  negatif  dari  radikal  bebas  dalam tubuh dinamakan antioksidan. Antioksidan
ada  yang  berasal  dari  dalam  tubuh (endogen)  dan  dari  luar  tubuh  (eksogen) (Li  Yunbo,  2011).  Pengendalian  radikal bebas  dalam  tubuh  dapat  dibantu  dengan mengkonsumsi makanan yang dapat meningkatkan produksi antioksidan endogen (Park, et al ., 2002; Lewis, 2008). Lewis (2008) melaporkan bahwa pemberian  senyawa  flavonoid  pada  tikus Sprague  Dawley  dapat  meningkatkan aktivitas superoksida dismutase (SOD).
Laban ( Vitex pinnata Linn) merupakan  salah  satu  tanaman  yang memiliki senyawa flavonoid. Hasil skrining fitokimia kulit batang laban ( Vitex pinnata Linn)  mengandung  senyawa flavonoid,  alkaloid,  steroid,  tannin,  dan saponin  (Yeni,  2018).  Senyawa  flavonoid termasuk dalam senyawa golongan fenolik dimana flavonoid berperan sebagai
antioksidan  dengan  cara  mendonasikan atom hidrogennya atau melalui kemampuan  mengkelat  logam,  berada dalam  bentuk  glukosida  (mengandung rantai samping glukosa) atau dalam bentuk bebas yang disebut aglikon (Cuppet, et al.,
1954).
Ekstrak  metanol  kulit  batang  laban ( Vitex  pinnata Linn)  secara  in  vitro  telah diuji  aktivitas  antioksidannya.  Aktivitas antioksidan  ekstrak  metanol  kulit  batang laban  ( Vitex  pinnata Linn)  diketahui sangat kuat dengan nilai IC 50 sebesar 19,83 µg/ml (Hermansah, et al., 2015).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  potensi  antioksidan  ekstrak etanol  kulit  batang  laban  ( Vitex  pinnata Linn)  secara  in  vivo  dengan  mengukur kadar  MDA  dan  SOD  darah  tikus  wistar yang diinduksi 7,12-dimetilbenz- (α)antrasena (DMBA).

## II. METODE

## A. Alat dan Bahan
Rotary vacum evaporator , kulit batang laban  ( Vitex  pinnata Linn)  yang  telah  di determinasi  oleh  Laboratorium  Ekologi dan Biosistematik Jurusan Biologi Fakultas  MIPA  Universitas  Diponegoro Semarang, etanol 96%, tikus wistar betina,
7,12-dimetilbenz-(α)antrasena (DMBA),
CMC Na, aquades.

## B. Metode
1. Kelompok perlakuan
a) Kelompok P1 :  kelompok  tikus yang  hanya  diberikan  pakan  dan aquades  secara ad  libitum (kontrol normal).
b) Kelompok P2 :  kelompok  tikus yang  diinduksi  DMBA  20  mg/kg  BB (kontrol negatif).
c) Kelompok P3 :  kelompok  tikus yang  diinduksi  DMBA  20  mg/kg  BB +  ekstrak  etanol  kulit  batang  laban dengan dosis 150 mg ekstrak/kg BB.
d) Kelompok P4 :  kelompok  tikus yang  diinduksi  DMBA  20  mg/kg  + ekstrak  etanol  kulit  batang  laban dengan dosis 300 mg ekstrak/kg BB.
e) Kelompok P5 :  kelompok  tikus yang  diinduksi  DMBA  20  mg/kg  BB +  ekstrak  etanol  kulit  batang  laban dengan dosis 600 mg ekstrak/kg BB.

## 2. Induksi  Stres  Oksidatif  dengan DMBA
Tikus  diberi  DMBA  yang  telah dilarutkan  dalam  minyak  jagung  secara subkutan, seminggu dua kali dengan dosis 20  mg/kg  BB  yang  diberikan  selama  5 minggu.

## 3. Uji Aktivitas Antioksidan
Tikus  yang    telah  mengalami  stres oksidatif  ditandai  dengan  munculnya nodul  payudara  diberikan  ekstrak  etanol
kulit  batang  laban  selama  30  hari.  Pada hari  ke-31  tikus  di  euthanasia  lalu  diukur kadar  MDA  serum  dan  aktivitas  SOD plasma.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang  Laban  dalam  menurunkan kadar MDA serum
*berbeda signifikan dengan kelompok kontrol negatif    p<0,05
Gambar  1. Rata-rata  kadar  MDA  serum setelah perlakuan
Dari gambar 1 di atas didapatkan hasil rata-rata  kadar  MDA  serum  kelompok kontrol negatif cenderung tinggi dibandingkan kelompok normal.
Berdasarkan analisa statistik menggunakan ANAVA diperoleh hasil berbeda signifikan  (P<0,05).  Hal  ini  menunjukkan bahwa  tikus  mengalami  stres  oksidatif dengan  terjadinya  peningkatan  kadar MDA. 7,12-dimetilbenz-(α) antrasena (DMBA) adalah senyawa karsinogen yang menghasilkan  berbagai  macam  metabolit reaktif yang mengarah pada stres oksidatif.
DMBA termasuk dalam senyawa hidrokarbon  aromatik  polisiklik  yang menghasilkan  produk  aktif  utama  yaitu epoksida  yang  akan  membentuk  produk tambahan dengan molekul sel (DNA, RNA dan protein). Metabolit reaktif ini merupakan  kelompok  elektrofil  yang sangat reaktif yang membentuk komponen kimia  yang  berikatan  dengan  DNA,  RNA dan  protein  (Kumar, et  al., 2013).  Hal  ini sejalan dengan penelitian Rosandra (2017) yang  menunjukkan  adanya  peningkatan kadar  MDA  serum  pada  tikus  yang mendapatkan  injeksi  subkutan  DMBA  10 mg/kg BB setiap dua hari sekali  sebanyak 10x induksi (Rosandra, et al., 2017). Hasil penelitian pembuatan hewan model kanker mammae yang dilakukan Ranasmita dengan pemberian induksi DMBA sebanyak  11  kali  secara  oral  dengan  dosis 20  mg/kg  BB  tikus  sebanyak  2  kali seminggu menunjukkan terbentuknya nodul  pertama  kali  setelah  24  hari  dari induksi  terakhir  dan  terus  berkembang sampai hari ke 89 setelah induksi berakhir (Ranasasmita, 2008).
Dari  gambar  1  di  atas  didapatkan hasil rata-rata kadar MDA serum kelompok perlakuan mengalami kecenderungan  penurunan.  Berdasarkan analisa statistik dengan ANAVA diperoleh hasil  berbeda  signifikan  (P<0,05)  dengan kelompok kontrol negatif. Hal ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit
0 100 200 300 400 normal negatif EKL dosis I EKL dosis II EKL dosis III *233,75 332,25 *293,25  *274 *256,5 mean kadar MDA kelompok perlakuan
batang  laban  ( Vitex  pinnata Linn)  dosis 150  mg/kg  BB,  300  mg/kg  BB  dan  600 mg/kg BB dapat  menurunkan kadar MDA serum. Ekstrak kulit batang laban mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid, steroid,  tannin,  dan  saponin  (Yeni,  2018). Senyawa  flavonoid  dapat  mendonorkan atom  hidrogen  ke  radikal  bebas  yang bersifat  reaktif  karena  memiliki  satu elektron tidak berpasangan sehingga mengurangi  pembentukan  radikal  bebas seperti MDA (Cuppet, et al., 1954). Hal ini sesuai  dengan  penelitian  Sielma et  al (2016)  yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol  brokoli  mengandung  flavonoid dapat menurunkan kadar MDA hepar tikus yang diinduksi DMBA.
B. Aktivitas Ekstrak Etanol Kulit
Batang  Laban  dalam  meningkatkan aktivitas SOD plasma
*berbeda signifikan dengan kelompok kontrol negatif    p<0,05
Gambar  2.  Rata-rata  Aktivitas  SOD plasma setelah perlakuan
Dari gambar 2 di atas didapatkan hasil rata-rata  aktivitas  SOD  plasma  kelompok
kontrol negatif cenderung rendah dibandingkan kelompok normal. Berdasarkan analisa statistik menggunakan ANAVA diperoleh hasil berbeda signifikan  (P<0,05).  Hal  ini  menunjukkan bahwa  tikus  mengalami  stres  oksidatif dengan  terjadinya  penurunan  aktivitas SOD.
Dari gambar 2 di atas didapatkan hasil rata-rata  aktivitas  SOD  plasma  kelompok perlakuan mengalami kecenderungan peningkatan.  Berdasarkan  analisa  statistik dengan  ANAVA  diperoleh  hasil  berbeda signifikan  (P<0,05)  dengan  kelompok kontrol  negatif.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  kulit  batang  laban ( Vitex pinnata Linn) dosis 150 mg/kg BB,
300  mg/kg  BB  dan  600  mg/kg  BB  dapat meningkatkan aktivitas SOD serum. Ekstrak  kulit  batang  laban  mengandung senyawa  flavonoid,  alkaloid,  steroid, tannin, dan saponin (Yeni, 2018).
Flavonoid  secara  tidak  langsung  dapat meningkatkan  ekspresi  gen  antioksidan endogen  melalui  beberapa  mekanisme. Salah  satunya  melalui  aktivasi nuclear factor  erythroid  2  related  factor  2 (Nrf2) sehingga  terjadi  peningkatan  gen  yang berperan dalam sintesis  enzim antioksidan endogen  seperti  superoksida  dismutase (SOD)  (Kusuma,  2015).  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  Lewis  (2008)  bahwa pemberian  senyawa  flavonoid  pada  tikus
0 0,005 0,01 0,015 0,02 normal negatif EKL
dosis I EKL dosis II EKL dosis III *0,0153 0,0018 *0,005 *0,0065 *0,008 mean akitivitas SOD kelompok perlakuan
Sprague  Dawley  dapat  meningkatkan aktivitas superoksida dismutase (SOD).

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  kulit  batang  laban ( Vitex pinnata Linn) dosis 150 mg/kg BB,
300  mg/kg  BB  dan  600  mg/kg  BB  dapat menurunkan  kadar  MDA  serum  dan meningkatkan  aktivitas  SOD  plasma  pada tikus  yang  mengalami  stres  oksidatif.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kulit batang laban ( Vitex pinnata Linn) berpotensi sebagai antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Cuppett.,  S.,  M.,  Schrepf  and  Hall.  1954. Natural Antioxidant-are
They
Reality. Foreidoon Shahidi : Natural Antioxidants, Chemistry, Health Effect  and  Applications ,  AOCS
press, Champaign, Illinois : 12-24.
Halliwell.,  B.,  Gutteridge.,  J.,  M.,  C., 2007. Cellular Responses to Oxidative Stress : Adaptation,
Damage,  Repair,  Senescence  and Death. In  Free  Radicals  in  Biology and  Medicine .  4 th ed.  London  :
Oxford. University Press: 79-186.
Hermansah.,  A.,  Harlia.,  and  Zahara.,  T., A.,  2015.  Skrining  fitokimia  dan  uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  kulit batang laban ( Vitex pubescens Vahl). JKK ., No.2, Vol.4, p.67-71.
Kumar,  V.,  Abbas,  A.,K.,  and  Aster,  J.,C. 2013. Buku  Ajar  Patologi  Robbins . Ed.9 th ,  Singapura  :  Elsevier  Inc,  p. 329-337.
Kusuma.,  A.,  S.,  W.,  2015.  The  Effect  of Ethanol  Extract  of  Soursop  Leaves ( Annona  muricata L.)  to  Decreased Levels  of  Malondialdehyde. Jurnal Majority . No.3, Vo.4, p. 14-18.
Lankin.,  Z.,D.,  2003.  The  Enzymatic
Systems  in  The  Regulation  of  Free Radical  Lipid  Peroxidation.  In  : Tomasi  Aldo,  Ozben  Tomris,  and
Skulachev. V.P (Eds). Free Radicals, Nitrit Oxide, and Inflammation : Molecular,
Biochemical,  and  Clinical  Aspects , Ed. 1 st , Amsterdam : IOS Press, p. 8-
23.
Lewis.,  J.,  B.,  2008.  Effects  of  Bran  from Sorghun Grains  containing Different Classes  and  Levels  of  Bioactive compounds in Colon Carcinogenesis ( Tesis ). Texas : A&M University. Li  Yunbo.,  2011. Antioxidants  in  Biology and Medicine : Essentials, Advances, and  Clinical  Applications .  Ed  1 st ,
Virginia : Nova Sciences Publishers. Park.,  S.,Y.,  2002.,  Effect  of  Rutin  and Tannic Acid Supplements on Cholesterol  Metabolism  in  Rats. Nutrition Research . 22: 283-295. Ranasasmita., R., 2008. Aktivitas Antikanker  Ekstrak  Etanol  Daun Aglaia  elliptica  Blume  Pada  Tikus Betina Yang Dinduksi 7,12-
Dimetilbenz(α)antrasena.  [ Skripsi ]. Bogor:  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Institut Pertanian Bogor, p. 2-9.
Rosandra,  Ega.,  A.,  S,  2017.  Pengaruh Induksi  DMBA  terhadap  Kadar MDA ( Malondialdehyde ) pada Serum dan Ekspresi IL-1β ( Interleukin-1  beta )  pada  Hepar Tikus  ( Rattus  norvegicus )  Model Kanker  Mammae  ( Tesis ).  Malang  :
Fakultas Kedokteran Hewan
Universitas Brawijaya.
Sielma.,  D.,F.,  Sakinah.,  E.,N.,  Nurdian., Y.,  2016.  Efek  Hepatoprotektif Ekstrak  Etanol  Brokoli  (Brassica oleracea  L.  Var.italica)  terhadap Kadar  Malondialdehid  Hepar  Tikus Wistar  yang  Diinduksi  DMBA. E- jurnal  Pustaka  Kesehatan ,  No.3, Vol.4, p.449-453.
Yeni.,  D.,T.,  2018.  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang  Laban  ( Vitex  Pinnata Linn ) Sebagai  Antikanker  Pada  Tikus
Putih  Betina Wistar Yang  Diinduksi
7,12-Dimetilbenz(α) Antrasena
( Skripsi ).  Palangkaraya  :  Fakultas Kedokteran
Universitas
Palangkaraya