ジェイムズ・ダグラス (第4代モートン伯)
しかし結局信仰の違いから徐々に女王に批判的になり、1566年には王配ダーンリー卿ヘンリー・ステュワートと結託して女王の寵臣デイヴィッド・リッツィオ(英語版)の殺害に積極的に関与した。
女王とボスウェル伯ジェームズ・ヘップバーンが結婚するとそれに反対し、反乱貴族の一人として翌1567年のカーベリーヒルの戦い(英語版)や1568年のラングサイドの戦い(英語版)に参戦し、女王軍を撃破した。これにより女王はイングランドへ亡命した(後にイングランドで処刑される)。
1571年に第18代マー伯ジョン・アースキンが幼王ジェームズ6世の摂政に就任した頃から実権を握るようになり、その翌年にマー伯が死去すると代わって摂政に就任した。
摂政としては中央集権化と秩序回復に尽力した。イングランド軍の助力も得て、依然エディンバラ城に立てこもっていたメアリー派を排除した。
宗教政策では監督制(Episcopacy)復活をはじめとするプロテスタント推進政策をとったが、ジョン・ノックスらが主張する長老派による聖職者任命制の導入の提案は却下し、「教会の長は国王」との立場を堅持して司教任命権を国王に温存させた。