アルティメット・スパイダーマン
声 - 田尻浩章 / 英:オージー・バンクス
ピーター・パーカーの級友の一人で、ヒーローチームの一人。
両親の研究していた薬を投与した為に強靭な肉体を得た。性格は自信家ではあるものの、心はとても広い。
ヘリキャリア墜落により住む場所を失っていた間(第26話から第35話まで)他の3人と共にパーカー家に居候していた。
「ゾディアックとケイジ博士」では、紆余曲折有って両親と再会を果たすことができた。
スーパーバイジングプロデューサー - マン・オブ・アクション、ダナ・ブートン、コート・レーン
クリエイティブコンサルタント - ポール・ディニ、クリス・フォンダカーロ
監督 - アレックス・ソト(14話 - )
キャラクターデザイン - ゲリー・ギャラング、ウォルター・ゲイトス、ジョン・キーン、デイヴ・コプチェーク
背景&プロップデザインスーパーバイザー / ビジュアルエフェクト - ドン・キャメロン
音楽 - ケヴィン・マンセイ
音声監督 / キャスティングディレクター - コレット・サンダーマン
コンサルティングプロデューサー - ブライアン・マイケル・ベンディス
エグゼクティブ・プロデューサー - アラン・ファイン、ダン・バックレイ、ジョー・ケサダ、ジェフ・ローブ
共同エグゼクティブ・プロデューサー - スタン・リー、エリック・ラドムスキ
アニメーション制作 - フィルム・ローマン
アニメーション制作協力 - 同友アニメーション、デジタルeメイション、ムア・アニメーション
製作 - マーベル
声 - 森田了介 / 英:クリストファー・ダニエル・バーンズ
西洋の中世を思わせる異次元のスパイダーマン。蜘蛛の紋章が入った赤い甲冑を身にまとった騎士であり、スパイダーマンと同様に壁に張り付く力がある。同様のデザインのアーマーを着用した特殊能力はない馬「スパイダー・ホース」を所有し、甲冑はグリーンゴブリンのマシンの針が刺さらないほど防御力が高く、篭手にはウェブシューターや刀・弓矢が収納されている。
声 - / 英:ポール・シェアー(クエンティン)、メアリー・ケイト・ワイルズ(フランシス)
声 - / 英:ドワイト・シュルツ
第3シリーズ第62話、第63話、第64話、第65話(第61話、第62話、第63話、第64話)「異次元のスパイダーマン PART1-4」で登場する、異次元世界のスパイダーマンたち。異次元世界のスパイダーマンのDNA採取をもくろむグリーン・ゴブリンを追うピーターとそれぞれの世界で共闘。最終的にはDNAを元にパワーアップしたスパイダーゴブリンと戦うためにピーターの世界で全員が集合した。第4シリーズ第96話、第97話、第98話、第99話(第94話、第95話、第96話、第97話)「異次元のスパイダーマン、再び PART1-4」でも一部の者が登場。このほか「スカーレット・スパイダー」と新たなる「異次元世界のスパイダーマン」たちについても、便宜上この節に記載する。
声 - / 英:ディードリック・ベイダー
ドクター・オクトパスによってスパイダーマンの生体サンプルから作られた存在で、ドクター曰く純粋な敵。本来はノーマンが作ろうとしていたスパイダーマンのパワーを持つ軍隊に使う予定だったが逃げ出し、フラッシュやノヴァ、パワーマン、アイアンフィスト、スパイダーマンに取り付いた。最終的に倒されたが、まだ一片が残っており、その力を目の当たりにしていたハリーによって持ち帰られた。 カーネイジ 声 - / 英:ディー・ブラッドリー・ベイカー DNAを改変された寄生生物を人間に取りつかせたことによって誕生した存在。 第2シーズン(シーズン2)の第34話「カーネイジ」にて登場した個体は、グリーンゴブリンによってハリーから抽出され、DNAをいじられた寄生生物を強制的にピーターへ寄生させられた存在であるため、ピーターとしての意思は持たず、理性が欠けており、コミュニケーションも叫び声をあげるだけである。S.H.I.E.L.D.
ベン・グリム / ザ・シング(英語版) 声 - / 英:デイヴ・ボート
声 - 甲斐田裕子 / 英:タラ・ストロング
ピーターパーカーの幼馴染で、ジャーナリスト志望。
第4シーズン(シーズン4)では、カーネイジに寄生されてカーネイジ・クイーンになり、スパイダーマンたちに助けられた。ただし、カーネイジ・クイーンから解放された後も身体にシンビオートが残っており、コナーズ博士の助力を得てカーネイジを制御し、スパイダーウーマンになった。
スパイダーマン・ノワールの世界にも同じ人物がいるが、第4シーズン(シーズン4)で死亡したことが明かされた。
声 - / 英:エリック・バウザ
機械を操ることに長けたミュータント。離れた場所にいる他者とのコミュニケーションは顔アイコンを通じて行われている。キャプテン・アメリカとウルヴァリンとスパイダーマンの3人を相手にS.H.I.E.L.D.から無断で拝借したライフ・モデル・デコイ(英語版)を駆使したゲームで翻弄させた。