大阪府道801号大阪吹田自転車道線
北区の、国道25号・大江橋南詰交差点(大阪市役所北側)付近をスタート。
中之島公園を通り天神橋を渡り南天満公園付近で旧淀川(大川)右岸を走る。川崎橋を渡って旧淀川(大川)左岸を走り、桜之宮公園、毛馬桜ノ宮公園を経て毛馬(毛馬閘門、毛馬排水機場)へ。
ここから淀川左岸の淀川河川敷公園・堤防を走り鳥飼大橋へ。
ここから中央環状線沿いを北上して万博記念公園に至る。
都島区大東町三丁目 (JRおおさか東線淀川橋梁〈通称:赤川鉄橋〉)付近で、なにわ自転車道(大阪府道803号旭西淀川自転車道線)と合流。
守口市大日町四丁目(中央環状線 鳥飼大橋南詰)付近で、北河内サイクルライン(大阪府道804号北河内自転車道線)と合流。また、大阪市都島区の川崎橋付近にある京阪京阪本線をくぐる地下道のガードをくぐると、自転車・歩道者専用橋である大坂橋を経由して大阪城公園へ行くことが出来る(ただし、このガードは坂が急で自転車ではやや危険である。地元住民の自転車は頻繁にガードを通っているが、大阪市では自転車利用は200mほど京橋駅寄りにあるガードへ迂回するように求めている)。