クライオ電子線トモグラフィー
電子は物質と強力に相互作用するため、TEMにおいては分解能は試料の厚さによる制限を受ける。また、試料を傾けるにつれて試料の断面は大きくなるため、電子線が遮断されて画像が暗くなったり、完全に真っ黒になったりしてしまう。cryo-ETで高分子レベルの分解能(およそ4 nm)を達成するためには500 nmよりも薄い試料である必要がある。こうした理由により、cryo-ETの研究の多くは精製された高分子複合体やウイルス、または細菌や古細菌などの小さな細胞に焦点を当ててきた。
一方、大きな細胞や組織であっても、凍結切片の作製や集束イオンビームによるミリング(FIB-milling)によって試料を薄くすることで、cryo-ETに供することができる。凍結切片は、凍結した細胞や組織のブロックをクライオミクロトームを用いて薄層試料へと加工することで作製される。FIB-millingでは、急速凍結した試料に集束イオンビーム(一般的にはガリウム)を照射することで試料の上部と下部を正確に削って除去し、cryo-ETでのイメージングに適した薄いラメラを残す加工が行われる。
また、電子と物質との強力な相互作用は分解能に異方性をもたらす。イメージングの過程で試料を傾けるにつれて、高い傾斜角では電子線は相対的により大きな断面と相互作用するようになる。