RFLP
RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism、制限酵素断片長多型)とは、制限酵素によって切断された DNA 断片の長さが、同一種内の個体間で異なる(多型を示す)ことを指し、また転じてそれを検出する手法も意味する。一塩基多型によってこの違いが現れることもある。遺伝病を持つ人と持たない人でこれが異なる場合があり、診断や遺伝病の原因遺伝子の同定に利用される。得られた断片長は、電気泳動によって既知の断片長のDNA(サイズマーカー)と比較して求める。
ゲノムプロジェクトの進行に伴ってPCRに用いるプライマーの設計が容易になったため、現在ではPCRでDNAを増幅し、その反応生成物を制限酵素で切断する手法であるPCR-RFLPが一般的となった。PCR-RFLP以前はヒトを対象とした場合、
生きた細胞の採取
細胞の培養(数日)
比較的高品質なDNAの抽出
DNAの切断
電気泳動
ブロッティング
放射性同位元素等でラベルしたプローブのハイブリダイズ
X線フィルムへの感光・現像
といった手順を踏んだ。一方、PCR-RFLPでは、
比較的粗雑なDNAの採取
PCR(2時間程度)
DNAの切断
電気泳動
紫外線によるDNAの可視化
と、半日程度で可能となった。