CSI:マイアミ
演 - ウィリアム・アレン・ヤング、日本語吹替 - 佐々木誠二
フロリダ州の主席判事。第3シーズンの第10話から第5シーズンにかけて複数回登場。売春婦が殺された事件の容疑者としてホレイショに追及され証拠も挙がっていたが、主任判事を起訴するには最低3年掛かる事からその後も判事を続け、ホレイショに対して様々な嫌がらせを行う。
演 - ブライアン・ポス
CSIラボ、マルチメディア分析担当の研究員。
テレビ愛知 シーズン2 - 2008年9月28日から2009年3月22日 シーズン3 - 2009年3月29日から2009年9月6日 シーズン4 - 2009年9月13日から2010年3月21日 シーズン5 - 2010年10月4日から2010年12月1日 シーズン6 - 2012年3月12日から2012年3月27日
テレビ大阪 シーズン3 - 2009年12月9日から2010年6月23日 シーズン4 - 2010年6月30日から2010年12月22日 シーズン5 - 2010年10月4日から2010年12月1日 シーズン6 - 2014年2月12日から2014年7月2日 シーズン7 - 2014年7月9日から2014年12月24日 シーズン8 - 2015年1月7日から2015年6月17日 シーズン9 - 2015年6月24日から2015年11月18日 シーズン10 - 2015年11月25日から2016年4月6日
テレビせとうち シーズン3 - 2009年10月9日から2010年3月26日 シーズン4 - 2010年4月2日から2010年9月24日 シーズン5 - 2010年10月4日から2010年12月1日 シーズン6 - 2012年12月21日から2013年5月24日 再放送 2020年8月7日から2020年12月25日 シーズン7 - 2013年5月31日から2013年11月15日 再放送 2021年1月8日から2021年6月25日 シーズン8 - 2015年8月21日から2016年1月29日 再放送 2021年7月2日から2021年12月3日 シーズン9 - 2016年2月5日から2016年7月8日 再放送 2021年12月10日から2022年5月13日 シーズン10 - 2016年7月15日から2016年11月25日 再放送 2022年5月20日から2022年9月23日
メーガン役のキム・デラニーの降板について、ホレイショ役のデヴィッド・カルーソは「彼女とはドラマ作りに必要なケミストリー(人間関係)を感じられなかったためである」(要するにカルーソを含む他のキャストやスタッフとウマが合わなかった)と述べている。カルーソは出演俳優の中では最も大物であり、キャスティングにも彼の意向がある程度は反映されると言われている。また、カルーソが過去に出演した人気TVドラマ『NYPDブルー』での、主演クラスであった自身の途中降板による紆余曲折の経験をしており、現場でのこういった人間関係には非常に厳しい態度を取ったとも言われている。このデラニーの降板は突然のものだったため、脚本的にはかなり不自然な形での退場となってしまった。
スピードル役のロリー・コクレーンについては、第2シーズン頃から撮影による拘束時間の長さと、役柄によるイメージの固定(いわゆるタイプキャスト)を嫌っており、再登場の可能性の無い形での降板を自ら望んだため、第3シーズン第1話「永遠の旅立ち」での殉職という形で退場となった。だが、皮肉にも第6シーズンにて再登場を果たす。
演 - キム・デラニー、日本語吹替 - 宮寺智子
マイアミCSIチーム元主任。DNA分析の専門家。ホレイショの前のチーフだったが、刑事だった夫が殉職し、その心の傷を癒すために半年間休職。第1シーズン第1話「マイアミ上空 17秒間の惨劇」の飛行機事件からCSIに復帰したが、そのブランクのため、後任のチーフであるホレイショとはしばしば衝突していた。夫の死からは立ち直ったかに見えたが、第1シーズン第11話「吸血の森」でやはり夫の死を忘れられないとして辞表を提出、CSIを去った。
ジェフ・コーウィン : ディスカバリー・チャンネル系の専門チャンネル、アニマル・プラネットの人気番組『ジェフ・コーウィンの好奇心』のホスト役として知られる。第2シーズン第4話「餌食」にて、デルコの旧知の動物研究者として実名で登場した。
イグジビット : ウェストサイド系人気ラッパー。第2シーズン第22話「弾丸の狙い」にて、現実と同じく人気ラッパーの"10-LARGE"という役名で登場した。
エリック・ロバーツ : ジュリア・ロバーツの実兄。第3シーズン第23話「殺人鬼養成講座」にて死刑囚として登場。最後の食事に「ピーナッツバターのサンドウィッチ」を頼むが、実はピーナッツアレルギーで自殺する。
ショーン・コムズ : 「パフ・ダディ」および「P・ディディ」などの別名で知られるラッパー・音楽プロデューサー・実業家。第7シーズン第15話「テールランプの瞳」及び第16話「暗殺指令」にて、第15話における容疑者の弁護士として登場。第16話では一転して妻を目の前で殺される不幸に遭い、自らのプライドと葛藤しながら、最後はホレイショに協力するという、ストーリー上重要な役柄を演じた。
演 - ワンダ・デ=ヘスース
マイアミデイド警察殺人課刑事。ラテン系の血を引く女性刑事。第1シーズンのみ登場。
CSI3作品をまたぐクロスオーバーである「CSI:トリロジー(英語版)」が放送された。事件はマイアミ(第8シーズン第7話)→ニューヨーク(第6シーズン第7話)→ラスベガス(第10シーズン第7話)の順に舞台を移し、アメリカでは同じ週に放送された。なお、マイアミ編とニューヨーク編の登場人物は他のシリーズには出演せず、ラスベガス編の主人公(当時)であるレイモンド・ラングストンが3作全てに出演しているのみである。
CSIシリーズを含むジェリー・ブラッカイマー作品のクロスオーバーについては、クロスオーバー作品#ドラマ・コメディ作品も参照のこと。なお、他のCSI2作と違い、本作のみCSIシリーズ以外の作品とのクロスオーバーは行われなかった。