シアノ(ヒドロキシイミノ)酢酸エチル
さらに最近では、アシル化試薬として、保護基の9-フルオレニルメチルオキシカルボニル基(Fmoc基)を移動させるためのFmoc-oxymaや、ジメチルモルフォリン-ウロニウム塩として可溶性であるカップリング試薬COMU(ドイツ語版)など、シアノ(ヒドロキシイミノ)酢酸エチル(Oxyma)の様々な誘導体が開発されている。COMUは、oxymaと同様に、標準的な添加剤であるHOBtよりもラセミ化の抑制とアシル化効率に優れており、ベンゾトリアゾールのような爆発リスクを伴わずにHOAtと同等の効果を発揮する。
添加剤としシアノ(ヒドロキシイミノ)酢酸エチルの水溶性誘導体を、カップリング試薬としてDICを用いると、弱塩基性水溶液中でも、モデル物質Z-L-Phg-OHとL-H-Pro-NH2を用いて、95%の収率と>99%のジアステレオマー過剰率で保護アミノ酸をオリゴペプチドに連結することができる。
アミノ酸のカップリングでは、頻繁に発生する二次反応は大半が抑制される。副反応には、対称酸無水物の形成、ラセミ化とエピメリ化とオキサゾリノンへの環化、あるいは特にジペプチドでは、2,5-ジケトピペラジンへの環化がある。
調製方法が単純なこと、80 °C以下の温度における安定性、そして特に高収率と得られたペプチドの低いラセミ化のため、シアノ(ヒドロキシイミノ)酢酸エチルは、現在、ペプチド合成の添加剤として広く使用されるようになった。
シアノ(ヒドロキシイミノ)酢酸エチルは、固相ペプチド合成における自動化メリフィールド合成のような溶液中での従来のペプチド連結において、カルボジイミド(例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド〈DCC〉、ジイソプロピルカルボジイミド〈DIC〉、または水溶性の1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(英語版)〈EDCI〉)のようなカップリング試薬とともに、カップリング添加剤として使用することができる。
例えば、ジペプチドZ-L-Phg-L-Val-OMeの段階的な液相合成は、Nが保護されたZ-L-α-フェニルグリシン(ベンジルオキシカルボニル基〈Z基〉を有する)とカップリング試薬DICと添加剤シアノ(ヒドロキシイミノ)酢酸エチルを有するL-バリンメチルエステルを使用して、ラセミのDL-ジペプチドを含まない光学的に純粋なL,L型生成物を81 - 84%の収率で得ることができる。