カエル卵抽出液
カエルの未受精卵をEGTA(ethylene glycol tetraacetic acid: Caのキレータ)を含む緩衝液とともに遠心管に詰め、余分な緩衝液を取り除いた後に遠心破砕すると(10,000g 程度)、卵黄、可溶性分画、脂質の3層に分離される(図1)。中央の可溶性分画を取り出したものをM期抽出液と呼ぶ。この抽出液ではM期促進因子(MPF [M-phase promoting factor]、サイクリンB-Cdk1とほぼ同義)が高い活性を維持している。ここに精子核クロマチン(精子を界面活性剤で処理し、原形質膜を透過させたもの)を加え、1時間ほどインキュベーションするとM期染色体が作られる。その際、クロマチンの周辺には、まず、微小管が形成され、やがて、2つの極をもった紡錘体へと変化する。
カエル卵抽出液の最初の報告は、1983年、増井禎夫によるヒョウガエル(Rana pipiens)の未受精卵を用いたものである。その後、アフリカツメガエル(Xenopus laevis)を用いた同様の実験が報告され、細胞周期研究の一翼を担う実験系へと発展した。現在では、卵抽出液と言えば、殆どの場合X. laevisの卵から調製されるが、ニホンヒキガエル(Bufo japonicus) やネッタイツメガエル(X. tropicalis)の卵を用いた同様の無細胞系も報告されている。
↑ Lohka MJ, Masui Y (1983). “Formation in vitro of sperm pronuclei and mitotic chromosomes induced by amphibian ooplasmic components”. Science 220: 719-721. PMID 6601299.
1 2 Lohka MJ, Maller JL. (1985). “Induction of nuclear envelope breakdown, chromosome condensation, and spindle formation in cell-free extracts”. J. Cell Biol. 101: 518-523. PMID 3926780.
↑ Ohsumi K, Katagiri C (1991). “Characterization of the ooplasmic factor inducing decondensation of and protamine removal from toad sperm nuclei: involvement of nucleoplasmin”. Dev. Biol. 148: 295-305. PMID 1936566.
↑ Iwao, Y; Katagiri, C (1984). “In vitro induction of sperm nucleus decondensation by cytosol from mature toad eggs”.