走る男女子部
『走る男』・『走る男II』・『走る男F』と続く、『走る男』シリーズの第4弾である。
これまでは森脇健児が自ら走り、日本縦断(走る男)・47都道府県制覇 (II)・市民マラソン直前企画や電車じゃんけんなどの企画もの (F) を行っていたが、今作では森脇がキャプテンとなって「走る男女子部」を率いて、女子部のランナー8人(後に10人に増員)の中から、1区あたり原則3人の女子部ランナーと森脇が東海道走破に挑む。女子部のランナーはいずれも森脇が所属する松竹芸能所属の女性タレントで、時々入れ替えが行われる。
走行距離は1区間(1回分の放送)あたり10キロメートル前後とさほど長くない。そのため、サブタイトルにある「東海道五十三次」の53ある宿場町や周辺地域の観光名所などを訪ねる旅番組やグルメ番組の要素も兼ねている。番組ホームページでも「走る旅番組」と称している。ただし、ジョギングの要素が少なくなったわけではなく、毎回森脇が女子部メンバーに対し「特訓コーナー」(後述)と称した訓練を課すのがお約束の1つでもある。
原則は西田・外田がレギュラー出演していて、その他の1名は1回のロケで4区間(原則)を担当している。レギュラー出演していた外田が第26区で途中降板したため、27区 - 39区はナレーションのみで出演する。番組開始の記者会見当時は8人とされていたが、外田のピンチヒッターとして急遽梅小鉢が出演することになり、合計10人となった。
西田美歩(全区間参加、『走る男F』の「走る女たち」にも出演経験あり) 唯一フル参戦しているメンバー。歴史に詳しく、番組オープニングで薀蓄を語ることが多い。
外田ありさ(26区途中 - 39区を除く全区間参加、『走る男F』の「走る女たち」にも出演経験あり) 当初は西田同様にフル参戦の予定であったが、第26区で足の負傷があり途中降板。東海道五十三次の旅をリタイアし、一時期はリハビリに専念していた。第40区から復帰した。
本輝咲(1区 - 4区、23区 - 26区、40区 - 43区、52区 - 54区)
近藤綾香(5区 - 8区、36区 - 39区、54区)
こしきさやか(9区 - 13区、36区 - 39区、54区)
高橋沙織(14区 - 17区、31区 - 34区、48区 - 51区、54区、『走る男F』の「走る女たち」にも出演経験あり)特訓コーナーで西田・外田に何度も挑戦したが勝てたのは西田に手押し車と8km走の2回。
高島麻利央(18区 - 22区、44区 - 48区、54区)
藤井日菜子(27区 - 30区) 女子部の最年長メンバー。当時30代だったのは藤井と梅小鉢の2人のあわせて3人だけで、他は全員20代以下である。8km走と最終回は不参加。
梅小鉢(35区) 高田紗千子 小森麻由 8km走と最終回は不参加。
カナガワニ(51区)(制作局の1つである、テレビ神奈川マスコットキャラクター) - 特訓コーナー(横浜マリンタワーの階段ダッシュ)で登場
薬師寺保栄