化学ライゲーション
化学ライゲーションには様々な技術がある。無保護ペプチドの化学選択的反応のための最も実用的かつ頑強な方法はネイティブケミカルライゲーションである。ネイティブケミカルライゲーションは、タンパク質の全合成への古典的な有機合成化学的アプローチの制限を克服し、タンパク質分子の簡単な全合成あるいは半合成を可能としている。元々の化学ライゲーション法はライゲーション部位での非天然型結合の形成を含んでいた。その後、ネイティブケミカルライゲーションが開発された。ネイティブケミカルライゲーションでは、無保護ペプチド-チオエステルがCys-ペプチドと反応し、ライゲーション部位に自然なアミド結合(ペプチド結合)を持つライゲーション生成物を与える。この方法では、最初のチオエステルで繋がれたライゲーション中間体が転位してアミド結合を形成する。
ネイティブケミカルライゲーションでは、ライゲーション部位にシステイン残基が存在する必要がある。補助基を除去するために用いられる手法によって、場合によってはネイティブケミカルライゲーションの適用範囲を広げることが可能となる。例えば、ライゲーションの後に脱硫化を行うことでシステインをアラニンに変換できる。