ワーニャ伯父さん
ワーニャと亡きヴェーラの母。セレブリャコーヴァを崇拝している。
昼時の客間。ワーニャとエレーナとソーニャが話をしている。ワーニャはまたしてもエレーナにつれなくされ、部屋を出て行く。ソーニャはエレーナにアーストロフへの思いを打ち明け、エレーナは自分が彼の気持ちを聞いて上げると約束する。
ソーニャに呼び出されてアーストロフがやって来ると、エレーナはソーニャの気持ちを伝え、彼にその気があるかを尋ねる。アーストロフはソーニャを女性として愛してはいないと否定するが、エレーナが自分の気持ちのことも察しているはずだと感づいている彼は、エレーナを「ずるい」と詰る。アーストロフに求められるままキスをしているところにバラの花束を持ったワーニャが現れ、エレーナはアーストロフを突き放す。
教授の号令で客間に一同が集められる。ソーニャはエレーナから自分の恋が実らなかったことを知らされる。教授はこの領地を売り払い、代金を有価証券に振り替えて、余った金額でフィンランドに別荘を買うことを提案する。ワーニャはこの提案を長い間汗水垂らして働いて経営に従事してきた自分とソーニャを蔑ろにするものと受け止めて激昂し、それまで自分の労働を一度たりとも労うことさえしなかった教授を激しく詰る。母のマリヤに教授の言うことを聞くようなだめられるが、ワーニャは却って怒りを募らせて部屋を出ていく。
教授はソーニャとエレーナに懇願されてワーニャと和解するべく彼の後を追う。部屋に残ったマリーナはソーニャを優しく慰めるが、二人の耳にピストルの銃声が聞こえてくる。恐怖におののきながら客間に逃げ込んできた教授を追ってワーニャはさらにピストルを撃つが、弾は反れて当たらない。絶望したワーニャはピストルを床に投げ捨てて椅子にへたり込む。ソーニャはマリーナに抱きついてふるえている。
前作の『かもめ』では『森の主』同様トレープレフが自殺を遂げて幕が降りたことも踏まえ、本作の日本語訳者の一人である浦雅春は、本作を(希望のある未来や、希望の断絶による未来の喪失を結末とする)「青春文学」に対比される「中年文学」(「永遠の現在」を描く)と評している。
チェーホフを師として慕った作家、劇作家のマクシム・ゴーリキーはこの劇を見て「女のように泣いた」と告白している。
なお、『かもめ』において作家、トリゴーリンに作者自身の作家生活の内情が投影されていたのと同じように、本作の医師、アーストロフの人物造型にもチェーホフ自身の人格が反映されていると言われている。このアーストロフは開発による森林の減少を憂え行く末を案じる人物として描かれており、チェーホフが19世紀末の時点で生態系の破壊という問題に深い関心を寄せていた証左として注目に値する。日本で1990年頃、「森のおじさん」の名で上演された舞台作品は永野裕紀乃が翻案脚本演出した本作品である。