バットマン アーカム・ナイト
声:/英:マーク・ロルストン
本名「スレイド・ウィルソン」。「死の一撃」の異名をとる凄腕の傭兵にして暗殺者。「バットマン アーカム・ビギンズ」でバットマンに敗北しており、そのことを恨んでいる。
スケアクロウに雇われており、アーカム・ナイトが姿を消した後、彼に代わりドローン部隊を指揮してバットマンを倒そうとする。全ての輸送車、望楼、爆弾、チェックポイントを破壊すると、バットマンと戦車による直接対決となる。戦車を破壊されると刀を携えて自ら挑み掛かるも一撃で倒され、投獄された。
声:大隈健太 / 英:ガーリック・ハゴン
マッカラム大学の校長。日常治療の際にジョーカーの血液を輸血されたが、他の患者と異なりジョーカー化が進んでいない。バットマンは彼の免疫がジョーカー化を解く鍵だと考え、研究を続けていた。しかし、実際はヘンリーもジョーカーの持つ狡猾さを受け継いでおり、ジョーカー化していない様に見えたのは演技。ハーレーと以前から共謀しており、彼女をPANESSA映画スタジオに侵入させた。
自分以外の感染者全員を殺し、バットマンにも銃を向けるがバットマンもジョーカーの血液に感染していることに気付くと、強いものが生き残るのが進化であるという考えに基づき、バットマンを唯一のジョーカーにすべく自分で頭を銃で撃ち抜いて死亡した。
声:高口公介 / 英:ジョン・ノーブル
本名「ジョナサン・クレイン」。「恐怖の支配者」を自称する。前々作「アーカム・アサイラム」にてキラークロックに襲われて顔に酷い怪我を負ったため、顔を自分のマスクと同じカカシの様な風貌に整形している。今作の黒幕であり、軍隊やドローン戦車でゴッサムを占拠する。自分を傷つけたバットマンとバットマンを生み出したゴッサムを憎んでおり、他のヴィラン達と手を組んで復讐を開始した。エースケミカルの化学工場爆破を目論んだ他、恐怖ガスを雲状に噴射して広範囲を包み込む装置「クラウド・バースト」を開発。ゴッサムだけでなくアメリカ東海岸全体にガスを散布しようと企む。
自分以外の誰かが傷つくことを恐れるバットマンやゴードンの恐怖心を利用し、人質作戦で彼らを追い詰める。最後には因縁の地であるアーカム・アサイラムにおいてロビンとゴードンの命を盾にし、カメラの前でバットマンのマスクを剥ぎ取ってその正体がブルースであることを暴き立てる。
しかしトドメを刺そうとバットマンに恐怖ガスを注入して彼をジョーカー化させてしまい、それに動揺して再度注入した恐怖ガスがジョーカーの恐怖を呼び覚ました事で、バットマンがジョーカーの意思を封じ込めることに成功。皮肉にも宿敵を助けてしまい、バットマンに逆に恐怖ガスを注入されて発狂、逃げ出そうとしたところをゴードンに殴り倒されて逮捕された。
DLC「スケアクロウのナイトメアミッション」では、彼の恐怖ガスの影響を受け、異常な世界に放り込まれた状態で打倒する特殊ミッションを受注する事ができる。
過去作でもお馴染みのブーメラン。敵の動きを止める、手の届かない場所にあるスイッチを起動する、オブジェクトを破壊するなど、利用方法は多彩。
声:稲葉実 / 英:マーティン・ジャーヴィス
ウェイン家の執事。父トーマスの代から長年ウェイン家に仕えている。前作と同様、通信を介してバットマンをサポートする。ナイトフォール作戦以降の彼の消息はバットマン同様不明である。
声:藤真秀 / 英:ケヴィン・コンロイ
本名「ブルース・ウェイン」。本作の主人公。本作から新しいバットモービルを乗りこなす。市民からはジョーカーを殺したと思われており、その存在を疑問視する声も上がっている。ジョーカーの血液が自分に輸血されてしまったことで、自身がジョーカー化する危険にさらされている。ジョーカーの幻覚を見るようになり、至るところに現れてバットマンに話かけてくる。スケアクロウの幻覚剤を受けるたびに、ジョーカーの幻覚を見る頻度が上がっている。
本作ラストにおいてスケアクロウにカメラの前でマスクを剥ぎ取られ、「バットマンの正体がブルース・ウェインである」事を世界中に知れ渡ってしまう。全てのヴィランを投獄し、ある程度の安全が確保された事で、前々から練っていた「ナイトフォール作戦」を実行に移す。それは「バットマンとしての引退」と「ブルース・ウェインの死」を世界中に公開するものであり、報道陣に囲まれているウェイン邸へ帰還して中に入ると同時にウェイン邸が爆発炎上。それ以降、ブルース・ウェイン、およびバットマンの姿を見た者はだれ一人としていない。
声:/英:ローレン・レスター(ラングストーム博士)
本名「カーク・ラングストローム」。生物学者。自身の聴覚障害の治療のため、吸血コウモリの遺伝子と自身の遺伝子を組み合わせる実験を行っていたが、自身の体を使った人体実験に失敗してコウモリの化け物「マンバット」と化してしまう。妻のフランシーヌを殺害し、ゴッサム中を飛び回っており、本人の意思に関係無く暴走する危険性がある。バットマンが作ったワクチンを2度打たれたことで大人しくなり、ゴッサム市警に連行される。市警についたころには、人間の体に戻っていた。投獄後は妻を手にかけてしまった事を嘆き続けている。
本名「ジュリアン・デイ」。自分の名前に「デイ(day)」が入っていることから、記念日や祝日など日付にまつわる犯罪を行う犯罪者。スケアクロウに声をかけられなかったらしくミッションには登場しないが、ゲーム中に彼の隠れ家があり、発見すると読めるコレクションではハロウィンに計画していた犯罪をスケアクロウに先を越されて未遂に終わった事を恨む言葉を確認出来る。また、バットマンが「ナイトフォール作戦」を決行するエンディングムービーにおいて、ウェイン邸の前に詰めかける野次馬や報道陣に紛れる彼の後ろ姿が一瞬映り込む(頭部を一周する形でアルファベットの刺青を入れたスキンヘッドの男)。
声:/英:フィリップ・プロクター
スタッグ・エンタープライズのCEO。自社の飛行船でスケアクロウの兵士たちから暴行を受けていた。バットマンに一度は救われたが、彼がジョーカーの幻影に苦しんでいる隙に再び兵士たちに捕まってしまう。
裏でスケアクロウに協力し、恐怖ガス噴射装置「クラウド・バースト」に使用する新型の恐怖ガスと電池の開発を行っていた。最後にはバットマンに情報を吐いてしまった事で自分が恐怖ガスを吸わされ、発狂しかけたところをバットマンに昏倒させられて投獄された。
声:藤村歩 / 英:グレイ・デリスル
本名「セリーナ・カイル」。ゴッサムを拠点に活動する女盗賊。今作ではリドラーに囚われ、爆弾付きの首輪をつけられている。リドラーのゲームに付き合う形でバットマンと協力し、その時のみ操作キャラクターとして使用可能。数々の謎解きを突破した後は、自ら姿を現したリドラーをバットマンとの共闘で打倒し、「ナイトフォール作戦」を決行すべく別れを告げて立ち去るバットマンを見送った。
DLC「キャットウーマンの復讐」では操作キャラクターとして使用可能。リドラーの隠れ家を破壊し復讐を果たす。
人の声を合成で作り出す装置。セキュリティの音声認証を突破する際に使用するほか、敵の司令官を装ってその配下の敵グループに偽の指示を出すこともできる。