プロイセン公国
1544年、アルブレヒトはケーニヒスベルクのアルベルトゥス大学を創設、大学はプロイセンにおけるルター派牧師と神学者を育てる教育機関となった。アルベルトゥス大学は1560年にポーランド王ジグムント2世アウグストより特権(英語版)を与えられたため、クラクフ大学と同じ自治権を与えられ、ポーランド・リトアニア共和国内の主要大学の1つになった。プロイセンの教会では現地言語が使われたため、アルブレヒトはスタニスロヴァス・ラポリオニス(英語版)やアブラオマス・クルヴィエティス(英語版)など各地から追放されたルター派牧師を大学の教授に任命することができ、結果的にはアルベルトゥス大学をリトアニア語とリトアニア文学の中心地にした。
ドイツ騎士団国の住民の間でプロテスタントが広まるにつれて、ローマ・カトリック教会のドイツ騎士団による統治への不満が生じ、ホーエンツォレルン家の分家出身であるドイツ騎士団総長アルブレヒト・フォン・ブランデンブルク=アンスバッハには不満を押さえつけるだけの軍事力がなかった。
ポーランド王国との戦争(英語版)に敗北した上、ポメサニア司教(英語版)兼ザムラント司教(英語版)ゲオルク・フォン・ポーレンツ(英語版)が1523年にルター派に改宗、自身の部下である指揮官にもプロテスタントを支持する者が続出した。さらに、宗教改革を推進したマルティン・ルターが1522年にヴィッテンベルクで、1524年にニュルンベルクでアルブレヒトの説得を試み、時代錯誤のドイツ騎士団は宗教改革を生き残れないとして、ドイツ騎士団国を世俗化して自ら統治する公国に改革するよう説いた。そうした中、アルブレヒトは急進的な解決策を模索するようになった。