制限点
サイトカインTGF-βなどの抗増殖因子はR点の通過を阻害し、G1期での停止を引き起こす。TGF-βシグナルはSmadを活性化し、SmadはE2F4(英語版)/5(英語版)と複合体を形成してMycの発現を抑制するとともに、Miz1と結合してCKIのp15の発現を活性化してサイクリンD/CDK複合体の形成と活性を阻害する。TGF-βによって細胞周期が停止した細胞では、p27とp21も蓄積している。
R点にはE2Fによるヒステリティックな双安定スイッチが存在していることが示されている。E2Fは自身の活性化を促進するとともに自身の阻害因子であるpRbの阻害も促進し、双安定系の確立に重要な2つのフィードバックループを形成する。この研究ではE2Fプロモーターの制御下に置かれた不安定化GFPを利用してE2F活性の読み出しが行われ、血清飢餓細胞をさまざまな血清濃度で刺激することでGFPの読み出しが一細胞レベルで記録された。その結果、解析されたさまざまな血清濃度においてGFPレポーターはオンかオフかのいずれかの状態であり、完全に活性化されているか不活性化されているかのいずれかであることが示された。さらに、このE2F系の履歴依存性を分析した実験では、E2F系ががヒステリティックな双安定スイッチとして動作していることが確認された。