さんま・中居の今夜も眠れない
そのことをほぼ毎年、進行のフジテレビアナウンサーが発言していた。2017年・2018年はそのメイン2人ともに独身のままコーナーが休止となり、2019年の改題・放送再開後は中居が出演していない。
中居(一部の年を除く)や総合司会がナース姿の白人・黒人男性に「ナカイ、早く寝ろ!」などと文句を言われながら担がれ、中居が住んでいるという設定の古いアパートの一室を思わせるセット内に運ばれた後、進行アナウンサーと軽いフリートークの途中でさんまが扉から登場(2008年・2010年・2012年は中居もここから登場していた。なお、2005年のさんま・紳助や2009年の中居など稀にカメラのある方角から登場することもあった)してそこからさらなるフリートークを進めていく。改題して放送再開した2019年は、岡村が板付きの状態で部屋にスタンバイしており、直前の『さんまのお笑い向上委員会』に出演していたさんまと今田を待っていた。『FNS27時間テレビ』自体が4年ぶりの開催となった2023年も同様に岡村が板付きの状態でスタンバイし、さんま及び直前の『チームDEファイト』に出演していた今田と総合司会のダイアン・千鳥・かまいたち(2023年は千鳥・かまいたちが裏番組千鳥かまいたちアワーに出演していたため、23時台後半に開始、終了後23:55に合流)を待っていた。
衣装演出があり、さんまが毎年のようにネタにしていた。中居に関しては、2000年は総合司会の中居がそのアパートに住んでいるという設定だったためパジャマ姿。2001年 - 2003年は普通の衣装。2004年以降はその年の27時間テレビTシャツを着ており(そのうち、2005年・2007年・2009年 - 2010年は再び普通の衣装)、2003年以降は毎年帽子または三角巾を被っているか、白いタオルを巻くようになったため髪型を見せなくなっている。
コーナー最後に中居が「ボクのラブメイト1位の方を」と大竹しのぶに電話を繋ぎ、長女、長男、大竹の順に電話でトークした。
すべてフジテレビアナウンサー。同じスタジオにいるが、テレビ越しに会話をする。スタジオにあるテレビは、2011年の地デジ完全移行後の現在も、ブラウン管テレビが使われている。
小島奈津子(現・フリーアナウンサー。2000年、2001年) 2000年第1回目の冒頭の中居への振りは何も異常なくスムーズに佐藤里佳が担当していたが、急な体調不良により途中から出演が不可能となり、フジテレビ社内に居てスケジュールが空いていた小島が急遽担当することになった。小島はそのまま翌年も続投することになった。詳細は後述のハプニングを参照。
西山喜久恵(2002年 - 2004年、2009年 - 2014年、2016年、2019年、2023年) フリーアナウンサーになったため降板した同期の小島に代わり、1998年から『FNS27時間テレビ』の進行役を担当していた西山が2002年より担当した。2009年は当時第一子出産・育児休暇中の佐々木に代わって再登板し、以後も2015年を除き担当。
佐々木恭子(2005年 - 2008年、2015年) 2006年に当時の1人目の夫だった池田裕行(元TBSアナウンサー)と離婚しさんまに「ご祝儀返せ!」と見事にネタにされ、謝罪する。2015年は西山が「大久保佳代子マラソン中継」担当となったため7年ぶりに再登板した。