高速液体クロマトグラフィー
機械的に高い圧力をかけることによって移動相溶媒を高流速でカラムに通し、これにより分析物が固定相に留まる時間を短くして分離能・検出感度を高くすることを特徴とする。
現在では分析物の注入から検出・定量までを一体化して自動的に行えるようにした装置を用いて、再現性の高い分析が比較的簡便に行える。分析化学や生化学で頻繁に用いられ、俗に「液クロ」(液体クロマトグラフィーの略)といえばこれを指すことが多い。
高速液体クロマトグラフィーにおいては各物質は比較的鋭いピークとして検出され、分離(他の物質のピークと明確に分けられる)および検出(鋭いピークにより高い感度が得られる)の能力が従来の液体クロマトグラフィーより良くなる。
移動相としては、カラムや装置に悪影響を与えない範囲で各種の溶媒が使用される。水や塩類の水溶液、アルコール類、アセトニトリル、ジクロロメタン、トリフルオロ酢酸などが用いられる。相溶性のある(互いに混じり合う)溶媒を混合して使用する場合が多い。
溶媒の組成に勾配を付けて(すなわち組成を連続的に変えて)溶出を行うことも多い。たとえば後述の逆相クロマトグラフィーにおいて水/メタノール勾配を使う場合、まずメタノールの少ない条件で極性の高い物質が溶出し、その後メタノールの割合を増加させてゆくに従ってより極性の低い物質が順次溶出する。これをグラジェント分析と呼ぶ。これに対し、一定組成の溶媒で分析物を溶出させる分析法をアイソクラテック分析と呼ぶ。
測定時間は測定物質および測定パラメータによって大きく変動するが、一般的には数分から数十分/回程度である。
大部分のメーカーがレオダインのマニュアルインジェクターを装置に内蔵しており、サンプルをシリンジで計量し、これを切り替えて流路に注入している。メーカーによりサンプルのハンドリング方法に工夫がされており、使用する目的に応じて選択できる。大量(数十から1000以上)のサンプルの連続分析ができるように、サンプルはウェルプレートや複数本のバイアルに入れて装置内にセットするようになっている。サンプルを保冷・保温する機能がついているものもある。
物質にエネルギーを与える(励起)ことにより発光する(蛍光)性質を利用した検出器。一般に選択性が高く高感度で、物質に特異的な検出が可能。蛍光する性質を持たない物質については、その物質を標識することにより検出が可能になる。
シグマ アルドリッチ: Ascentis
大阪ソーダ: CAPCELL PAK
島津製作所: Shimpack
昭和電工: Shodex
信和化工: Ultron ES-OVM(光学異性体分離用), HF-ODS(モノリスキャピラリーカラム)
住化分析センター: SUMICHIRAL(光学異性体分離用)
ダイオネクス: Acclaim
ダイセル: CHIRALCEL, CHIRALPAK(光学異性体分離用)
東京化成工業: Kaseisorb LC
東ソー: TSK-GEL
ナカライテスク: COSMOSIL
野村化学: Develosil
Phenomenex: Gemini, Jupiter, Luna, Onyx(モノリスカラム)
メルク: Chromolith(モノリスカラム), ZIC-HILIC
ワイエムシィ: YMC-Pack
和光純薬工業: Wakopak