ぷよぷよ7
全員集合(りんご、アルル、アミティの3人の連鎖ボイス)
スケルトンTとドラコケンタウロスは『みんなでぷよぷよ』以来の復活、「カーバンクル」は選択可能なキャラクターとしては『ぷよぷよフィーバー』以来の復活となった。またプレイヤーキャラクターとしては使用できないが、ハーピーとウィッチも漫才デモにて姿のみ登場する。その他、『フィーバー2』のボスであった「あやしいクルーク」がクルークのでか変身時の姿として一時的に登場する。
「あんどうりんご」を除く前作『ぷよぷよ!』に登場していなかったキャラクター(スケルトンT、ドラコケンタウロス、エコロ、ささきまぐろ、りすくませんぱい、カーバンクル、ダークアルル)は、「ストーリー」の特定ステージをクリアするなどの条件を満たすと解禁できる隠しキャラクターとなっている。また、新キャラクターの組ぷよパターンやキャラクタータイプ、CPU操作時の思考ルーチンなどは、本作には登場しない前作までのキャラクターの流用となっている。
あんどうりんご - ユウちゃん&レイくん
ささきまぐろ - どんぐりガエル
りすくませんぱい - おにおん
スケルトンT - おしゃれコウベ
ドラコケンタウロス - リデル
エコロ - アコール先生
この他、カーバンクルは『ぷよぷよフィーバー』時と同じ組ぷよパターン、ダークアルルはアルルの組ぷよと同じく2個組のみだが「連鎖倍率タイプ」が異なる設定となっている。
次作『ぷよぷよ!! Puyopuyo 20th anniversary』では元になったキャラクターが復活した事に伴い、組ぷよなどを流用していたキャラクター達は次作に登場しないスケルトンTを除き、本作とは異なる新規のものに変更された。