監察医・室生亜季子
川相万里江(フランス料理店「ジュテーム」の出資者) - 春風ひとみ 島倉洋一(フランス料理店「ジュテーム」チーフシェフ) - 渋谷哲平 上原光一(フランス料理店「ジュテーム」シェフ) - 井上倫宏 大田弘子(島倉の元恋人) - 樋口しげり 高村由美(生徒) - たくみまり 大田ハル(弘子の母) - 葦原邦子 外山(大学病院教授) - 岡野耕作 万家仙太郎(ヨロズヤ金融 社長) - 井上昭文
演 - 浜木綿子
内科医。夫を不慮の事故で亡くし、川越の町で3代続く室生医院の院長となる。埼玉県川越市本町三丁目に在住。1935年(昭和10年)10月31日生まれ。東京都目黒区出身。もともと内科の開業医であるが、夫の登山中の転落死に疑問を抱き、埼玉中央医科大学の生沢教授のもとで学び監察医も兼務することになる。
夫(室生涼一)は法医学者(監察医)で植物学にも関心があり植物画も得意としていた。第9作では小学校の学校医も兼任している設定であった。また、最終作にあたる第37作の冒頭で、心療内科と神経科も認定されたことが報告される。作中のナレーションも担当しており,冒頭に「私、室生亜季子、川越で3代続く街医者です。そしてこの街の監察医でもあるんです。」という言い回しから始まる台詞が恒例となっている。
林京子(埼玉中央医科大学 小児外科医) - 山口果林 成沢夏子(丹下製作所 従業員) - 石倭裕子 吉田光枝(木原医院 看護婦) - 片桐夕子 坂井克子 - 青木かよ 木原明(木原医院 院長) - 藤田宗久 丹下(丹下製作所 社長) - 三角八郎 桜井(医師) - 長谷川哲夫
演 - 岡崎宏(第29作)、赤間浩一(第31作)
刑事。
演 - 長岡尚彦(第26作)
刑事。
演 - 森みつえ(第23作 - 第37作)
助手。
事実上のシリーズ最終作となる「最後の解剖」の放送は「火曜ドラマゴールド」としての最終回であったが、それ以上に「火曜サスペンス劇場」、「DRAMA COMPLEX -ドラマ・コンプレックス-」および「火曜ドラマゴールド」と25年半もの間続いてきた、日本テレビの火曜日21時 - 22時台の2時間ドラマとしての最終回の意味合いが強く、火サスのシリーズでは『警視庁鑑識班』からは中山淳彦役の西村和彦も出演し、『警部補 佃次郎』から佃次郎役の西郷輝彦と『女検事・霞夕子』から4代目霞夕子役の真矢みきの2人については、其々が出演しているドラマの役名・役柄のまま、特別出演扱いとして本作に登場した。この回は、火曜ドラマゴールドの半年間の放送の中で最高視聴率を記録した。
尚、サブタイトルに「最後の」との表記があったが、主演の浜自身は「室生亜季子を演じる機会があれば続けたい。」と語っていたが、7年後の2014年の旭日小綬章受章後のインタビューでは、このドラマについて浜は「好きな役ではなかった。」、「自分には白衣が似合わない。」、「医学の専門用語が難しく台本が来るたびにぞっとした。」と吐露している。
演 - 西郷輝彦(第37作)
警視庁原宿中央警察署の警部補。
島崎和子(カメラマン) - 池上季実子 水谷まりこ(光太の母・浦和中央病院 元看護婦) - 神保美喜 平野丈夫(和子の助手) - 丹波義隆 畑中幸代(元看護婦) - 久野真紀子 水谷光太(10歳の少年) - 三浦春馬 吉永英一(英語塾職員・元商社マン) - 篠塚勝 富田安代(通報者) - 臼間香世 谷(幸代のマンション管理人) - 武川修三 東医院の医師 - 児玉謙次 塩瀬陽子(浦和中央病院 婦長) - 仙北谷和子 中西みつ子(英語塾経営者) - 芝村洋子 熱帯魚店の店主 - 安藤整治