ドットブロット
一般的なドットブロットの手順は、1~2マイクロリットルのサンプルをニトロセルロースまたはPVDFのメンブレンにスポットし(染み込ませる)、風乾させる。サンプルは、組織培養上清、血清、細胞抽出液、またはその他の標本の形をとることができる。
非特異的な結合を防ぐために、メンブレンをブロッキングバッファー内でインキュベート(恒温放置)する。次に一次抗体とインキュベートし、続いて検出抗体または検出分子(一般的にはHRPまたはアルカリホスファターゼ)に結合した一次抗体とインキュベートする。抗体が結合した後、メンブレンを化学発光基質とともにインキュベートして画像形成する。