アルティメット・スパイダーマン
声 - 阪口候一 / 英:トム・ケニー(シーズン1)→ディー・ブラッドリー・ベイカー(第2シーズン(シーズン2))
S.H.I.E.L.D.の教授で、ピーターとは科学仲間であり、オクトパスとは顔見知りだった。初登場時は右腕があったが、グリーンゴブリンの襲撃により右腕を失った。襲撃直後にドクター・オクトパスのラボで発見したトカゲのDNAを打ち、リザードになった。リザードになったときのコナーズの意思はうっすらとしか残っておらず、凶暴な性格をしている。
シニスター・シックスの中で唯一逮捕されず、その後はS.H.I.E.L.D.の仕事に復帰した。
ブラッド・スパイダーのいる世界では吸血鬼たちの親玉となっていた。
声 - / 英:ロビン・アトキン・ダウンズ
声 - 野沢聡 / 英 - ジェフ・ベネット
地球人をはるかに上回る科学力を持つ不老不死の集団エルダーズ・オブ・ユニバース(Elders of the Universe)の一人。名前の通り、コレクションに執着を持つ。自ら集めた地球のヒーローを使い、兄・グランドマスター側のヴィランとの対決ゲームに臨んだ。ゲームにおいてはいつも兄に負かされていたが、駒として召喚したスパイダーマンに励まされた。
本作では第75話「真のチャンピオン決定戦パート1」が初登場だが、世界観が共通している『ハルク: スマッシュ・ヒーローズ』の第4話「コレクター」でスパイダーマンと対決したため、面識がある。
声 - 木下紗華 / 英:ローラ・ベイリー
アベンジャーズのメンバーの一人である女性。
第75話、第76話、第77話、第78話「真のチャンピオン決定戦」では3回戦に登場。アブソービングマンを倒し、スパイダーマン以外で唯一倒されなかったヒーローとなった。
声 - 立岡耕造 / 英:ローガン・ミラー
ピーター・パーカーの級友の一人で、ヒーローチームの一人。飛行能力とエネルギー照射能力を持つ。
お調子者で他のメンバー(主にピーター)と衝突することが多いものの、スパイダーマンをリーダーとして認めている。彫刻や料理など何をやらせても才能を発揮し、パーカー家に居候している間メイと意気投合していた。かつては地球外でヒーローチーム「ガーディアンズ・オブ・ギャラクシー」と共に活躍していた時期がある。
第65話「クローク・アンド・ダガー」において覚醒し、原作寄りのコスチュームにチェンジした。
声 - 川原慶久 / 英:エイドリアン・パスダー
スターク・インダストリーズの社長。
第5話「アイアン・スパイダー誕生」にて初登場し、スパイダーマンのためにアイアン・スパイダーというパワードスーツを作成した。
第22話「ドクター・オクトパスの逆襲」では、ドクター・オクトパスのハッキングに遭い、自社のデータを盗まれるという被害に遭った。
第75話、第76話、第77話、第78話「真のチャンピオン決定戦」では1回戦に登場。クレイブンの罠にかかってモルテンマンに電気系統を焼かれ敗北。
シニスター・シックスは、ノーマン・オズボーンの下の研究者からさらに身を落としたドクター・オクトパスによって結成された、スパイダーマンを憎む悪党を集めた集団(例外的に、リザードは意識がないので、ドクターによる強制参加)。固定されたメンバーではなく、ドクター・オクトパスを中心とした6人でその都度構成される。
初めは息が合っているように見えたが、コナーズ教授としての記憶がうっすら残るリザードと、気の荒いクレイブンが衝突し、それを止める為にエレクトロが撃った電撃がライノに当たってライノが怒り、オクトパスとビートルもろとも飛ばされてチームワークが悪くなり始めた。そのままピーターの罠にライノがはまってラボが水浸しになりエレクトロがショート。自由の女神でチームと合流したピーター達に敗北。リザードは下水を通ってピーターに言葉を残して逃げたが、残りのメンバーはS.H.I.E.L.D.に捕らえられた。 その後、ドクター・オクトパスは「新シニスター・シックスパート1」でシニスター・シックスより強力な集団として、シニスター・セブンを結成した。
声 - / 英:ジョン・ディマジオ
レッキング・クルーのリーダー格。魔法の力の宿ったバールが武器。
へスパイダーマンを捕らえに行けとゴブリンに命じられ(だが取り付かれている本人がスパイダーマンだということは、うっすら気がつきかけたものの、グリーンゴブリンにはわかっていない)、実際にアイアンフィストたちを襲いに行ったが、偶然居合わせたハリーによってシンビオートをはがされ、代わりにハリーがヴェノムになった。 第4シーズン(シーズン4)第93話、第94話、第95話(第91話、第92話、第93話)「カーネイジの脅威」で登場した個体は、モービウスがオクトパスへの仕返しとして、DNAを改変したシンビオートに取りつかせた結果、ドクター・オクトパスから独立する形で誕生した。エージェントベノムとスパイダーマンを苦戦させた末、肉体をわざと飛散させて、ラボの外にいた人々や駆け付けたS.H.I.E.L.D.関係者に寄生するで増殖した。アンチヴェノムの捨て身の攻撃で一時は収まったと思われたが、実際はメリージェーンに取りついていた。