Xác định loại vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm g ram

Bài viết được tham vấn chuyên môn cùng Thạc sĩ, Bác sĩ Trần Thị Vượng - Bác sĩ Xét nghiệm vi sinh - Khoa Xét nghiệm - Bệnh viện Đa khoa Quốc tế Vinmec Hải Phòng. Thực tế có nhiều cách để xác định loại vi khuẩn, trong đó nhuộm g ram là phương pháp được sáng chế năm 1884 và vẫn có giá trị cho đến ngày nay để phân loại vi khuẩn nhanh thành 2 nhóm lớn với đặc tính riêng biệt. 1. Phương pháp nhuộm g ram là gì? Nhuộm g ram là phương pháp dựa trên đặc tính lý hóa của thành tế bào mà phân loại vi khuẩn thành 2 loại là vi khuẩn g ram âm và vi khuẩn g ram dương. Nhuộm g ram có thể được thực hiện trên cả dịch cơ thể hoặc trên mẫu sinh thiết bị nghi ngờ nhiễm khuẩn. Nhuộm g ram là phương pháp xác định loại vi khuẩn nhanh hơn nuôi cấy có ý nghĩa giúp phân biệt sớm các bệnh do nhiễm khuẩn để xác định hướng điều trị cũng như tiên lượng bệnh. Các thuốc thử cần sử dụng cho phương pháp này gồm có: Dung dịch tím Gen ti an Dung dịch Lu go l Tẩy cồn A c e to ne Dung dịch đỏ F u ch sin 2. Các thuốc thử cần sử dụng cho phương pháp này gồm có: Dung dịch tím Gen ti an Dung dịch Lu go l Tẩy cồn A c e to ne Dung dịch đỏ F u ch sin 2. Quy trình nhuộm g ram Quy trình nhuộm g ram sẽ gồm các bước sau: Dàn đều bệnh phẩm hoặc vi khuẩn lên lam kính sạch; Cố định mẫu bệnh phẩm bằng cách hơ trên ngọn lửa đèn cồn và để nguội; Các bước nhuộm: Đầu tiên phủ dung dịch tím Gen ti an và để khoảng 30 giây sau đó rửa dưới vòi nước chảy nhẹ. Bước này sẽ giúp nhuộm tất cả vi khuẩn thành màu tím Tiếp theo phủ dung dịch Lu go l để cố định màu, cũng để khoảng 30 giây rồi rửa dưới vòi nước. Dung dịch sẽ giúp gắn màu tím vào vi khuẩn đậm hay nhạt tùy thuộc vào loại của nó Tẩy màu bằng cồn a c e to ne để khoảng 30 giây và rửa nước. Đây là bước rất quan trọng để phân biệt loại vi khuẩn đã được dung dịch Lu go l gắn chắc màu tím vào và loại màu tím bị tẩy trôi Cuối cùng phủ dung dịch đỏ F u ch sin để khoảng 30 giây rồi rửa dưới vòi nước sẽ làm các vi khuẩn đã được tẩy hết màu tím bắt lại màu đỏ, những vi khuẩn đã bị nhuộm tím sẽ không bị ảnh hưởng. Đầu tiên phủ dung dịch tím Gen ti an và để khoảng 30 giây sau đó rửa dưới vòi nước chảy nhẹ. Đầu tiên phủ dung dịch tím Gen ti an và để khoảng 30 giây sau đó rửa dưới vòi nước chảy nhẹ. Bước này sẽ giúp nhuộm tất cả vi khuẩn thành màu tím Tiếp theo phủ dung dịch Lu go l để cố định màu, cũng để khoảng 30 giây rồi rửa dưới vòi nước. Dung dịch sẽ giúp gắn màu tím vào vi khuẩn đậm hay nhạt tùy thuộc vào loại của nó Tẩy màu bằng cồn a c e to ne để khoảng 30 giây và rửa nước. Đây là bước rất quan trọng để phân biệt loại vi khuẩn đã được dung dịch Lu go l gắn chắc màu tím vào và loại màu tím bị tẩy trôi Cuối cùng phủ dung dịch đỏ F u ch sin để khoảng 30 giây rồi rửa dưới vòi nước sẽ làm các vi khuẩn đã được tẩy hết màu tím bắt lại màu đỏ, những vi khuẩn đã bị nhuộm tím sẽ không bị ảnh hưởng. Để khô tự nhiên Soi dưới vật kính dầu 3. Cơ chế bắt màu g ram của 2 loại vi khuẩn và kết quả thu được Vi khuẩn có đặc điểm là lớp p e p ti do g ly can dày ở thành tế bào giúp giữ các phức hợp tím tinh thể nên sau khi nhuộm g ram sẽ bắt màu tím sẫm Gen ti an và không bị tẩy màu sau dùng cồn tẩy 950. Những vi khuẩn này sẽ được phân loại là vi khuẩn g ram dương như: tụ cầu, phế cầu, liên cầu,... Những vi khuẩn này sẽ được phân loại là vi khuẩn g ram dương như: tụ cầu, phế cầu, liên cầu,... Vi khuẩn có lớp p e p ti do g ly can mỏng hơn và có thêm lớp màng li p o p o ly sa c cha ri de bên ngoài không thể giữ lại phức hợp tím tinh thể - i o d và sẽ bị khử màu. Sau đó khi dùng dung dịch F u ch sin phủ lên thì những vi khuẩn này sẽ bắt màu đỏ hoặc hồng. Các vi khuẩn này sẽ được phân loại là vi khuẩn g ram âm. Như vậy có thể thấy bước tẩy màu rất quan trọng và cần phải có kỹ năng nhất định vì khả năng bắt màu của G ram dương không phải là tuyệt đối. 4. Các lưu ý về nguyên nhân gây sai lệch kết quả Vi khuẩn g ram dương giả do các yếu tố sau: Tiêu bản được cố định khi chưa khô hoặc quá dày Màu của cặn thuốc nhuộm gây sai lệch kết quả Lu go l chưa được đổ hết để cố định màu Cổn tẩy chưa đủ thời gian để phân biệt chính xác Dung dịch F u ch sin quá đậm hoặc nhuộm quá lâu Vi khuẩn g ram âm giả do các nguyên nhân như không thay Lu go l hoặc tẩy cồn quá lâu và không tráng kỹ. Để đặt lịch khám tại viện, Quý khách vui lòng bấm số HO T LI NE hoặc đặt lịch trực tiếp TẠI ĐÂY. Tải và đặt lịch khám tự động trê nứng dụng My Vin me c để quản lý, theo dõi lịch và đặt hẹn mọi lúc mọi nơi ngay trên ứng dụng.