yakdoli/chandra-27b-ocr-v1 huggingface dataset:
제16200호                        관               보              2006. 2.24. (금요일)

     이고 1리터로 맞춘다.                                    Rainbow trout):5.0±1.0cm
    (2) Magnesium sulphate 용액                    1.3.2 어류의 순화
    MgSO4·7H2O 4.93g을 탈이온수에 녹이                    시험에 사용하는 어류는 시험 전에 12일 이
    고 1리터로 맞춘다.                                   상 실험실의 환경에서 순화시켜야 하며, 시
    (3) Sodium bicarbonate 용액                     험개시 7일 전에는 아래의 조건에서 독성시
     NaHCO3 2.59g을 탈이온수에 녹이고 1                    험에 사용할 희석수와 같은 수질의 물에서
     리터에 맞춘다.                                     순화시켜야 한다.
    (4) Potassium chloride 용액                     (1) 조명:하루 12~16시간 조명
     KCl 0.23g을 탈이온수에 녹이고 1리터                     (2) 온도:사용 어종의 적정 생육온도
     에 맞춘다.                                       (3) 용존산소:포화산소농도의 80% 이상
 모든 시약은 특급시약을 사용하며 증류수 또                          (4) 먹이:시험개시 24시간 전까지 주 3회
 는 탈이온수의 전도도는 10μScm-1 이하여야                          또는 1일 1회
 한다. (1)~(4)까지의 용액을 25㎖씩 취하여                      (5) 시험어류:사용어류는 순화를 시작한지
 섞고, 탈이온수로 1L에 맞춘다. 조제 후 통기                          48시간 후부터 치사어를 관찰하여 다음의
 하여 산소를 포화되게 한 후 보관한다.                               기준에 따라 처리한다.
1.3 시험 어류                                            ① 7일 안에 치사율이 10% 이상이면 사용
 독성시험에 사용하는 어류는 담수에 서식하는                              군 전부를 폐기한다.
 온수어종 중에서 쉽게 구할 수 있으며, 그 외                           ② 치사율이 5~10% 이면 다시 7일간 더
 에 경제적, 생태적 요인을 고려하여 결정한다.                            사육한 후 판정한다.
 시험어종은 다음에 추천된 종 가운데 1종 또는                           ③ 치사율이 5% 이하이면 시험에 사용한
 그 이상을 선정하여 시험에 사용한다. 사용 어                            다.
 류는 건강상태가 양호하며 외견상 기형이 없                        2. 시험방법
 는 것을 사용한다.                                      2.1 원리
 1.3.1 사용어종 및 크기                                  어류를 일정 조건하에서 시험물질에 처리한
  (1) 잉 어 (Cyprinus carpio, common                후, 96시간 동안 관찰하여 처리한 어류의
    carp):3.0±1.0cm                               50%가 치사하는 농도(96h-LC50)를 구하는
  (2) 송사리(Oryzias latipes, ricefish):2.0          것이다. 96시간동안 먹이는 주지 않는다. 이
    ±1.0cm                                        때 시험물질의 적절한 농도범위를 알기 위하
  (3) 구피(Poecilia reticulata, guppy):2.0          여 예비시험을 실시하고, 그 결과에 기초하
    ±1.0cm                                        여 본시험을 실시한다.
  (4) 제브라피시(Danio rerio, zebrafish):             2.2 한계시험
    2.0±1.0cm                                     2.2.1 한계시험은 100㎎/L의 농도에서 실시
  (5) 북미산 잉어과(Pimephales promelas,                   하는데 이때 대조군을 두도록 한다.
    Fathead Minnow):2.0±1.0cm                     2.2.2 96시간 동안 관찰한다.
  (6) 블 루 길 (Lepomis macrochirus,                 2.2.3 대조군과 처리군 각 10마리를 원칙으
    Bluegill):2.0±1.0cm                              로 처리하되 최소 7마리 이상을 사용한다.
  (7) 무지개송어(Oncorhynchus mykiss,                  2.2.4 100㎎/L에서 96시간 동안 치사어가

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  한 마리도 관찰되지 않을 경우 시험물질의                      의 손실이 없는 조건으로 제공할 수 있다.
  LC50은 100㎎/L 이상으로 한다. 단, 한 마                특히 시험물질이 휘발성인 경우 밀폐된 용
  리 이상이라도 치사어가 관찰될 경우 본시                      기를 사용하며 통기에 주의를 한다.
  험을 실시한다.                                 2.4.4 시험은 pH를 조절하지 않고 수행하되
2.3 본시험                                       만일 시험물질의 농축용액을 가한 후 희석
 2.3.1 본시험에서는 적어도 5개 이상의 농도                   수의 pH가 현저히 변화할 시 반복 시험한
  (대조군 제외)를 대수등 간격으로 정하는                      다. 이때 농축용액의 pH를 농축용액을 가
  데 공비는 2를 초과하지 않도록 한다. 본                     하기 전의 희석수의 pH와 같도록 HCl이
  시험에서의 농도가 무영향농도와 100%                       나 NaOH를 사용하여 조절한다.
  영향농도 사이에서 설정될 수 있도록 예비                   2.4.5 광주기는 12~16시간(명):8~12시
  시험을 수행할 수 있다. 이때 예비시험은                      간(암)으로 한다.
  시험자가 시험물질의 농도와 방법을 적절                    2.4.6 시험기간 동안 먹이는 공급하지 않는
  하게 판단하여 수행한다.                               다.
 2.3.2 만일 시험물질 조제 시 유기용매나 분                2.4.7 시험어종의 적정온도에서 ±2℃ 로 온
  산제를 사용하는 경우는 이들 물질이 포함                      도를 유지한다.
  된 대조군(최고농도로 들어간 농도 기준)                   2.4.8 치사의 판정은 공시어를 건드려도 움
  을 추가로 두어야 한다.                               직이지 않거나 아가미 호흡이 중단된 경우
 2.3.3 한 농도당 7마리 이상을 처리한다.                    사망으로 판정한다.
 2.3.4 독성시험기간 동안 24시간마다 대조                 2.4.9 시험 종료 후 대조군의 개체는 무게와
  군, 최저농도, 최고농도에서 수온, pH, 용                   길이를 측정한다.
  존산소를 측정한다.                              2.5 시험상의 유의사항
 2.3.5 96시간 동안 매일 관찰하여 치사어와                2.5.1 대조군에서 공시어 사망률은 시험 종
  독성증상을 기록하고, 치사어는 기록 후                       료 시 10%를 넘지 않아야 한다.
  곧 제거한다.                                  2.5.2 시험기간 중 시험물질농도는 원칙적
2.4 시험환경                                      으로 설정농도의 80% 이상으로 유지되도
 2.4.1 공시어 무게와 시험수의 비율은 최대                    록 한다.
  투입량이 1.0g/L를 넘지 않도록 한다.                  2.5.3 시험실시 기관은 시험의 신뢰성을 확
 2.4.2 시 험 용 액 은   농 축 용 액 (stock             인하기 위해서 정기적으로 대조물질을 가
  solution) 희석을 통하여 조제한다. 수용                  지고 시험을 실시하도록 한다.
  해도가 낮은 농축용액의 경우 초주파 분쇄             Ⅲ. 시험결과 및 보고
  나 다른 적절한 물리적 방법에 의하여 조                 1. 결과의 처리
  제한다. 필요시 시험용액을 용해하기 위하                  본시험이 종료되면 적당한 통계적 방법을 사
  여 어류에 독성이 낮은 유기용매, 유화제,                 용하여, 급성독성값 (LC50)과 95%에서의 신
  분산제가 사용가능하나 그 농도는 100㎎                  뢰구간을 구하며, 보고서에는 통계적 방법을
  /L 를 초과하지 않도록 한다.                       명시하여야 한다.
 2.4.3 용존산소농도가 포화농도의 60% 이               2. 시험결과의 보고
  하가 되지 않도록 한다. 통기는 시험물질                  시험결과를 보고할 때는 아래의 내용이 포함

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   되어야 한다.                               생장단계에 따른 독성영향을 평가하기 위해
   2.1 시험기관의 명칭 및 소재지                    어류의 생장 초기단계에 미치는 화학물질의
   2.2 시험책임자 및 담당자 성명, 소속                영향을 측정하는데 목적이 있다.
   2.3 시험물질                             2. 정의
    (1) 화학물질의 명칭(CAS 번호, 일반명, 상          2.1 최 소 영 향 관 찰 농 도 (LOEC, lowest
        품명 명기)                            observed effect concentration)
    (2) 입수처, 입수일                          시험기간 중 대조군과 비교하여 시험물질이
    (3) 순도 또는 불순물                         유의한 정도(p<0.05)의 영향을 나타내는 것
   2.4 시험종                                으로 관찰되는 농도 중 가장 낮은 시험물질
    (1) 학명                                의 농도를 나타낸다.
    (2) 입수처                              2.2 무영향관찰농도(NOEC, no observed
    (3) 순화방법, 순화기간의 관찰결과, 사육방             effect concentration)
        법(먹이 종류, 먹이량, 먹이공급 빈도 등)
                                          시험 기간 중 영향을 나타내지 않는 시험물
    (4) 길이, 무게
                                          질의 농도로서 LOEC의 바로 아래 값을 나
   2.5 시험조건
                                          타낸다.
    (1) 시험과정(노출방법, 사용 마리수, 반복
                                         2.3 유수식 시험(Flow-through test)
        수, 시험용액량 등)
                                          시험 기간 중 시험용액을 연속적으로 흘려주
    (2) 희석수의 수질특성
                                          면서 새로 교환하는 시험을 말한다.
    (3) 시험기간 동안의 수질측정치
                                         2.4 반지수식 시험(Semistatic test)
    (4) 시험농도 및 농축시험물질 조제방법
                                          시험 기간 중 일정기간마다 시험용액을 새로
    (5) 시험용액에서 시험물질의 상태 및 측정
                                          교환하는 시험을 말한다.
        치
                                         2.5 단위
   2.6 시험결과
                                          농도는 중량/용량(㎎/L)로 표시한다.
    (1) 무영향관찰농도와 100% 영향이 나타난
                                    II. 시험
        가장 낮은 농도
                                        1. 시험의 준비
    (2) 각 노출농도별 누적치사 개체수 및 누적
                                         1.1 시험에 대한 정보
        치사율
    (3) LC50 값과 95% 신뢰구간                  시험물질에 대한 어류 급성독성값은 생육초

    (4) LC50 값을 구하는 통계적 과정                기독성시험을 위한 유용한 정보가 될 수 있

    (5) 농도-반응 그림표                         다. 특히 급성독성값이 본 시험에서와 동일

    (6) 대조군에서의 치사율                        어종인 경우는 시험물질의 농도설정에 도움

    (7) 시험과정에서 나타난 독성증상                   이 된다. 이밖에 물질의 구조식, 순도, 물에

    (8) 시험과정에서 시험 결과에 영향을 줄 수             대한 용해도, 안정성, pKa, Pow 등도 시험
        있는 요인의 발생                         에 유용한 정보이다.
제2장 제6항 어류 초기생장단계독성시험                    1.2 장치 및 기구
I. 개요                                     1.2.1 시험용 수조:화학적으로 불활성인
 1. 목적                                        재질로 만들어진 용기를 사용하는데 일반
   이 시험방법은 화학물질에 대한 수서생물의                     적으로 유리로 된 것을 사용한다.

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 1.2.2 온도제어 장치:시험에서의 설정 온                          12℃ (부화 후)
  도 범위에서 온도 편차를 ±2℃이내로 유                          (8) 연어류(Oncorhynchus tschawytscha,
  지 한다.                                             chinook salmon) : 담수, 10℃ (수정
 1.2.3 pH측정기                                       란), 12℃ (부화 후)
 1.2.4 용존산소 측정기                                   (9) 연 어 류 (Salmo salar, atlantic
 1.2.5 기타 일반적인 실험실의 장치 및 기구                        salmon):담수, 10℃
1.3 희석수                                           (10) 송 어 류 (Salmo trutta, brown
 1.3.1 양질의 천연수나 탈염소 처리한 수도                         trout):담수 10℃
  수를 사용할 수 있다.                                    (11) 송어류(Salvelinus fontinalis,
 1.3.2 희석수의 수질은 다음의 기준을 넘지                         brook trout):담수, 10℃
  않은 것을 사용한다.                                     (12) 송어류(Salvelinus namaycush,
  총 유기탄소(total organic carbon) 2㎎                  lake trout):담수, 12-18℃
  /L 이하, 비이온성 암모니아(unionized                      (13) 블루길(Lepomis macrochirus,
  ammonia) 1㎍/L 이하, 잔류염소 10㎍/L                     bluegill):담수, 21-25℃
  이하                                              (14) 얼룩메기(Ictalurus punctatus,
1.4 시험 어류                                          channel catfish):담수, 26℃
 독성시험에 사용하는 어류는 담수 및 염수에                          (15) 대서양 실버사이드(Menidia menidia,
 서식하는 어종 중에서 쉽게 구할 수 있고 경                          atlantic silverside):염수 22-25℃
 제적, 생태적 요인을 고려하여 결정한다. 시                         (16) 조수 실버사이드(Menidia peninsulae,
 험어종은 다음에 추천된 종중에서 선택한다.                           tidewater silverside):염수 22-25℃
 1.4.1 사용어종 및 시험(사육)온도                         1.4.2 수정란 채취
  (1) 송사리(Oryzias latipes, ricefish):             시험어류로부터 채란한 수정란은 비이커
    담수, 24±1℃ (수정란), 23±1℃ (부화                    나 유리 페트리디쉬에 옮기고, 미수정란을
    후)                                            제거한 후 수조로 옮겨 시험에 사용한다.
  (2) 무지개송어(Oncorhynchus mykiss,             2. 시험방법
    rainbow trout):담수, 10±2℃ (수정              2.1 원리
    란), 12±2℃ (부화 후)                           어류의 초기단계(수정란 단계)에서 일정농
  (3) 미 노 우 (Pimephales promelas,              도의 시험물질에 노출시킨후, 일정시간 동안
    fathead minnow):담수, 25±2℃                  의 치사영향, 발생장애, 기형 등을 관찰하고
  (4) 제 브 라 피 쉬 (Danio rerio, zebra            대조군과 비교하여 시험물질에 대한 최소영
    fish):담수, 25±2℃                            향관찰농도, 무영향관찰농도 등을 평가한다.
  (5) 미노우(Cyprinodon varieqatus,              2.2 시험
    sheepshead minnow):염수, 25±2℃               2.2.1 적어도 5개 이상의 농도(대조군 제외)
  (6) 잉어(Cyprinus carpio, common                  를 대수등 간격으로 정하는데 공비는 3.2
    carp):담수, 21-25℃                              를 초과하지 않도록 한다. 필요한 경우 예
  (7) 연어류(Oncorhynchus kisutch,                   비시험 단계를 거쳐 농도범위를 보다 좁게
    coho salmon):담수, 10℃ (수정란),                   설정하여 시험할 수 있다. 농도범위는 급

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  성독성시험 등의 자료를 토대로 처리군의                한 개체의 경우 호흡이 정지하거나 외부
  최고 농도가 LC50 값을 넘지 않도록 한다.            자극에 대해 전혀 반응이 없는 것을 사망
2.2.2 만일 시험물질 조제시 유기용매나 분              개체로 판정한다.
  산제를 사용하는 경우는 원래의 대조군 외           2.3 시험환경
  에 이들 물질이 포함된 유기용매 대조군             2.3.1 수정란의 무게와 시험수의 비율은
  (최고농도로 들어간 농도 기준)을 추가로               0.5g/L를 넘지 않도록 한다. 용존산소농
  두어야 하며 유기용매 농도는 0.1㎖/L 이             도는 포화농도의 60% 이하가 되지 않도
  하가 되도록 한다.                           록 유지한다.
2.2.3 한 농도 당 처리한 수정란의 수는 통          2.3.2 시험물질을 처리한 후, 시험용액의
  계적으로 유의성을 나타낼 수 있도록 충분               pH가 현저하게 변화할 시 시험목적에 따
  해야 하며, 처리군 당 수정란의 수는 동일              라 시험물질 용액의 pH를 염산 또는 수산
  하게 한다. 처리군당 수정란의 수는 최소               화나트륨으로 조절할 수도 있다. 이때 대
  한 60개 이상으로 하며, 동일 농도에서 2             조군에도 동일한 량을 첨가하여야 하며,
  개 이상의 반복수를 두도록 한다.                   pH를 조정할 때 시험물질의 농도가 변화
2.2.4 시험의 방법은 유수식 또는 일정시간              한다거나 화학반응이 일어나서는 안된다.
  에 용액을 갈아주는 반지수식 방법을 사용            2.3.3 광주기는 12-16시간(명):8-12시간
  한다.                                  (암) 으로 한다.
2.2.5 시험의 시작은 수정된 직 후부터 실시          2.3.4 시험기간 동안 필요한 경우 먹이는 공
  한다. 수정란의 배반구가 분할되기 직전                급하되 시험어종의 발육단계에서 가장 적
  또는 바로 직후의 것들을 시험용액에 노출               절한 먹이(예: 송사리의 경우 알테미아)와
  시킨다.                                 횟수로 공급한다.
2.2.6 독성시험 기간은 수정란이 부화하고            2.3.5 시험온도는 시험어종의 적정 온도를
  대조군의 치어가 먹이를 공급하지 않아도                유지하도록 한다.
  생존할 수 있는 정도의 기간을 최소 기간           2.4. 조사항목
  으로 한다. 따라서 시험기간은 시험어종에            2.4.1. 수정란 발생단계
  따라 다를 수 있다. 노출 기간을 연장할 경             시험 시작 시 노출시킨 수정란의 배(embryo)
  우 먹이를 공급한다.                          발생단계를 가능한 한 정확하게 파악하도
2.2.7 시험기간 동안 용존산소와 수온은 매              록 한다.
  일 측정하며, 경도와 pH는 시험시작과 종           2.4.2. 부화와 생존율
  료 시 측정한다. 수온은 대조군의 한 수조              24시간 마다 생존개체와 부화여부를 관찰
  에서 연속적으로 측정하는 것이 필요하다.               하여 정확히 기록하도록 한다. 사망한 수
  한편 수정란 및 부화어의 상태는 매일 관               정란 및 치어는 즉시 제거함으로써 다른
  찰하고 기록하며, 만일 치사 개체가 발견               개체에 영향을 주지 않도록 한다. 각 단계
  되면 즉시 제거한다.                          별 사망 기준은 다음과 같다.
2.2.8 수정란의 경우 알의 색깔이 불투명해              -수정란:탁해지고, 색깔의 변화가 있는
  지거나 배아 단계에서 심장박동이 정지하                 것
  였을 경우 사망한 것으로 간주한다. 부화               -배:배 안에서 심장박동과 같은 움직임

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    이 없는 것                     Ⅲ. 시험결과 및 보고
  -치어:호흡 및 심장박동이 없거나 자극            1. 결과의 처리
    에 대해 반응이 없는 것                   시험이 종료되면 적절한 통계적 방법을 사용
 2.4.3. 비정상적 외형                     하여 결과를 산출하도록 하며, 보고서에는 통
  외부 형태가 기형적인 개체를 기록하며 사            계적 방법을 명시하여야 한다.
  망한 경우에만 수조에서 제거한다.               2. 시험결과의 보고
 2.4.4. 비정상적 행동                     시험결과를 보고할 때는 아래의 내용이 포함
  시험기간 동안 비정상적 행동을 보이는 개            되어야 한다.
  체는 기록한다.                          2.1 시험기관의 명칭 및 소재지
 2.4.5. 무게                          2.2 시험책임자 및 담당자 성명, 소속
  시험이 종료되면 모든 생존개체는 무게를             2.3 시험물질
  측정하는데 개체별로 측정하는 것이 바람              (1) 화학물질의 명칭(CAS 번호, 일반명, 상
  직하나 무게 측정이 어려운 경우는 군별                 품명)
  (시험용기별)로 측정할 수 있다. 무게는             (2) 입수처, 입수일
  건 중량으로 표시한다.                       (3) 순도 또는 불순물
 2.4.6. 길이                          2.4 시험종
  시험이 종료되면 각각의 생존 개체에 대해             (1) 학명
  전길이(머리부터 꼬리지느러미까지)를 측              (2) 입수처
  정하는데, 만일 꼬리지느러미의 부식 또는             (3) 먹이 종류, 공급량, 공급 빈도 등
  손상에 따른 이상이 발생할 경우 표준길이             (4) 시험어류의 무게, 길이
  (머리부터 꼬리지느러미를 제외한 몸체               (5) 시험시작시의 수정란 발달단계, 수집 및
  길이)를 측정한다.                            수정란 취급방법
2.5 시험상의 유의사항                       2.5 시험조건
 2.5.1 시험기간 중 시험물질 농도는 주기적           (1) 시험과정(노출방법, 투여수정란 수, 반
  으로 측정하여야 하는데 적어도 주 1회의                복수, 시험용액의 양 등)
  분석치가 있어야 하고, 시험기간 동안 시             (2) 희석수의 수질특성
  험농도가 설정농도의 ±20% 이내로 유지             (3) 시험기간 동안의 수질측정치
  되도록 한다(측정시의 수치가 설정 수치              (4) 시험농도 및 시험물질 조제방법
  와 다를 경우 시험농도는 측정 수치를 적             (5) 시험용액의 상태(pH, 온도, 용존산소,
  용한다).                                 경도 등)
 2.5.2 시험 기간 중 대조군의 부화율은 최소          (6) 먹이 종류, 공급량, 공급방법 및 횟수
  66% 이상이 되도록 하고, 부화 개체의 경          2.6 시험결과
  우 시험 종료시까지 생존율이 가능한 한              (1) 시험과정에서 나타난 증상 및 관찰 사
  70%를 넘도록 한다.                          항:기형상태, 유영상태, 최초 부화시작
 2.5.3 유기용매 대조군에서의 영향이 대조               시기, 부화종료 시기
  군과 비교하여 유의한 차이가 있어서는 안             (2) 대조군에서의 부화율 및 부화개체의 생
  된다.                                   존율

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    (3) 각 노출 농도별 누적치사 개체수 및 누                          국제적으로 조화된 화학물질의 분류 시스템
     적치사율                                        II. 시험
    (4) 각 노출 농도별 부화율 및 부화 후 치어                       1. 시험의 준비
     의 생존율                                            1.1 시험동물
    (5) 시험종료 후 생존개체의 체중 및 체장                           연령이 8~12 주령 된 시험용 랫드(다른 설
    (6) 데이터의 통계분석 처리방법                                 치류도 가능)를 사용하며 개체 간 체중 차이
    (7) 농도-반응 자료 및 그래프                                 는 평균체중의 ±20%를 넘지 않도록 한다.
    (8) 관찰무영향농도(NOEC)와 최소영향관                           시험은 한쪽 성을 사용하는데 암컷을 사용하
     찰농도(LOEC)                                         는 것을 원칙으로 하며, 수컷을 사용할 경우
    (9) 시험과정에서 시험결과에 영향을 줄 수                           타당한 사유를 제시한다. 암컷은 과거에 새
     있는 요인의 발생 여부                                      끼를 낳은 적이 없고 현재 임신중이지 않은
제4장 제14항 급성경구독성시험(고정용량법)                               것을 사용한다. 시험에 사용할 개체는 시험
I. 개 요                                                 시작 전 최소 5일이상 실험실에서 순화시킨
 1. 목 적                                                건강한 동물 중에서 무작위로 선정한다.
  이 시험은 시험동물의 보호를 위해 치사량 이                            1.2 사육조건
  상의 화학물질 사용을 가급적 피하고, 치사량                             사육실은 온도가 22℃±3℃ , 습도가 30~
  이하의 용량에서 경구 투여하여 독성증상을                               70%가 유지되도록 한다. 사육은 암·수를
  관찰하는데 목적을 둔다.                                        구별하여 실시하며 각 개체의 상태 관찰이
 2. 정의                                                 용이하도록 밀도가 높지 않도록 한다. 조명
  2.1 급성경구독성                                           은 명/암이 12/12시간이 되도록 조절하며,
    시험물질을 24시간 이내에 1회 또는 수회                            시료와 물을 적절히 공급한다.
    경구투여한 후 단시간 내에 나타나는 악영향                           1.3 시험물질
    (adverse effects)                                  시험물질은 적당한 용매에 용해 또는 현탁시
  2.2 투여량(Dose)                                        킨다. 시험물질은 수용성액이 우선적으로 권
    투여하는 시험물질의 양. 일반적으로 단위는                            장되나, 비수용성인 물질의 경우 오일(예,
    시험동물의 체중 당 시험물질의 무게(예, ㎎                           corn oil) 또는 기타 다른 용매를 사용한다.
    /㎏)로 표시한다.                                         이때 사용하는 용매는 사전에 독성 여부와
  2.3 빈사 상태(Moribund state)                            특성이 잘 알려진 것을 사용한다.
    시험물질의 독성에 의하여 시험동물이 죽어                           2. 시험방법
    가는 상태 또는 생존할 가망이 없는 상태                            2.1 원리
  2.4 지연사망(Delayed death)                              예비시험에서 한쪽 성(암컷을 원칙으로 함)
    시험물질 투여 후 48시간 이내에 사망 또는                           에 대해 여러 시험용량의 독성효과를 조사하
    빈사상태에 도달하지는 않으나 그 후 14일                            고 그 결과로부터 최소 치사량 및 용량-반
    간의 관찰기간 동안 사망하는 경우                                 응 관계를 확보한다. 본시험에서는 한쪽 성
  2.5 GHS (Globally Harmonized Classification          (암컷을 원칙으로 함)의 동물을 사용하여 고
    System for Chemical Substances and                 정용량(5, 50, 300, 2,000㎎/㎏)에 대해 단
    Mixtures)                                          계적으로 시험한다. 시작 용량은 예비시험

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제16200호                   관             보            2006. 2.24. (금요일)

 결과에 근거하여 선정하는데 사망과 같은 심                    중단하고 본시험을 2,000㎎/㎏에서 실시
 각한 독성을 유발하지 않으나 그 외의 독성                    한다.
 증상이 관찰될 수 있을 것으로 예측되는 용                    만일, 최소 고정용량인 5㎎/㎏에서 처음
 량으로 한다. 시작 용량의 경과에 따라 다음                   투여한 1 마리의 동물이 사망하면 시험을
 용량을 결정한 후 단계적으로 투여한다.                      중단하고 GHS 카테고리 1로 분류한다.
2.2 시험물질의 투여                                이때 이를 확실히 검증하려면 보완적인 시
 2.2.1 경구 투여하는 시험물질의 양은 시험                  험도 실시하는데 이는 시험자가 선택적으
  동물의 크기에 따라 다르나, 일반적으로                     로 실시한다. 보완시험의 경우 두 번째 동
  최대 1㎖/100g을 넘지 않도록 한다. 다만                 물에 5㎎/㎏을 투여하며, 이때 동물이 사
  수용액의 경우는 2㎖/100g까지 허용한                    망하면 GHS 카테고리 1 분류를 확정한
  다.                                        다. 만약 생존할 경우 추가로 1마리씩 시
 2.2.2 투여는 1회 투여를 원칙으로 하되 불                 간 간격을 두고 총 3마리를 5㎎/㎏ 용량으
  가능할 경우 소량씩 나누어 실시한다. 이                    로 투여한다. 이때 2마리 이상 사망할 경
  때 투여 간격은 24시간이 넘지 않도록 한                   우 GHS 카테고리 1로 분류하며, 1마리 이
  다.                                        하 사망시 카테고리 2로 분류한다(그림 1
 2.2.3 시험물질 투여 전날 저녁부터 먹이 공                 참조).
  급을 중단하고 체중을 측정한다. 경구투여                 2.3.5 동물복지를 위하여 5,000㎎/㎏ 고정
  후 3~4 시간 후(마우스의 경우는 1~2시                  용량시험은 권장되고 있지 않으나 필요하
  간 후)부터 먹이를 공급하되 소량씩 여러                    다고 판단될 때는 특별히 5,000㎎/㎏ 고
  번 물과 사료를 적절히 제공한다.                        정용량 시험을 수행할 수 있는데 이때에는
2.3 예비시험                                    적정 사유를 언급하여야 한다.
 2.3.1 시험물질 투여 후 적어도 14일 동안             2.4 본시험
  관찰한다.                                  2.4.1 각 시험용량에 대해 한쪽 성(암컷을
 2.3.2 예비시험의 시작 용량은 독성 증상을                  원칙으로 함) 5마리를 시험동물로 사용한
  관찰할 수 있을 것으로 예측되는 용량으로                    다. 이때 예비시험에 사용된 동물 1마리를
  써 고정용량(5, 50, 300, 2,000㎎/㎏) 가            5마리에 포함시켜 결과를 산출하도록 한
  운데 하나를 선택하여 한 마리씩 투여하                     다.
  고, 이때 나타난 결과를 통해 다른 농도에                2.4.2 예비시험의 결과를 토대로 설정한 용
  서 예비시험을 실시하거나 본 시험의 농도                    량을 시험동물에 투여하며 이때 나타난 독
  를 설정한다. 예비시험의 농도 선정은 시                    성반응에 따라 카테고리를 분류한다.
  험물질 또는 시험물질과 관련이 있는 물질                 2.4.3 관찰기간은 보통 14일 정도 실시하는
  의 독성자료를 바탕으로 한다.                          데 관찰기간은 고정적이지는 않으며 독성
 2.3.3 시작 용량을 선정하기 위해서 해당 물                 반응, 속도, 회복기간 등에 따라 변경될 수
  질 또는 유사 물질의 독성정보가 없는 경                    있다.
  우 처음에 300㎎/㎏ 용량으로 시작한다.                2.4.4 관찰은 투여 후 30분 이내에 적어도
 2.3.4 만일 2,000㎎/㎏ 이상의 농도에서 실               한번 관찰하고, 24시간 마다 주기적으로
  험동물이 사망하지 않는 경우 예비시험을                     관찰을 실시한다. 특히 투여 후 처음 4시

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제16200호                  관            보             2006. 2.24. (금요일)

     간은 특별한 주의를 기울여 관찰하도록 한              시험용량, 시험동물 수, 독성증상을 보이는 시
     다.                                  험동물 수, 시험기간 중 치사동물 수, 독성발
    2.4.5 관찰기간 동안 시험물질의 용량별 투            현 및 시간, 용량-독성반응 관계, 부검결과 등
     여 주기는 독성증상에 따라 시험자가 선택              기록한다.
     할 수 있으나 보통 3~4일 주기의 투여를            2. 시험결과의 보고
     권장 한다.                              시험보고서는 다음의 항목을 포함한다.
    2.4.6 한계시험은 시험물질이 무독성일 가             2.1 시험기관의 명칭 및 소재지
     능성이 있을 때 수행될 수 있다.                  2.2 시험책임자 및 담당자 성명
     2,000㎎/㎏(특별한 경우 5,000㎎/㎏)으          2.3 시험동물
     로 시작되는 예비시험을 거친 후 동일 용               종, 시험동물의 수, 연령, 공급원, 사육조건,
     량으로 추가 4마리에 대해서 본 시험의 절              각 개체의 사육 조건
     차에 따라 수행한다(그림 2 참조).                2.4 시험물질
    2.4.7 독성 증상이 나타나기 시작한 시간과             물질명과 CAS 번호, 물리적 특성 및 순도,
     소멸되기 시작한 시간은 매우 중요하므로
                                          시험과 관련된 물리화학적 특성, 시험물질의
     모든 관찰은 체계적으로 기록되어야 하며,
                                          안정성
     개체별로 기록이 되도록 해야 한다.
                                         2.5 시험용매명 및 선정사유
    2.4.8 관찰은 피부 및 털, 눈 및 점막, 호흡
                                         2.6 시험조건
     계, 순환계, 자율 및 중추신경계, 행동 유
                                          시험기간, 투여용량 수준 및 횟수, 먹이공급
     형을 포함한다. 특히 경련, 설사, 유연, 혼
                                          시기
     수상태 등의 증상은 유의하여 관찰한다.
                                         2.7 시험결과
    2.4.9 체중은 시험물질 투여 직전과 종료 후
                                          (1) 성별
     부검 직전 측정하며, 시험기간 중에는 주
                                          (2) 용량별 독성반응 결과
     1회 측정을 원칙으로 하는데 이때 체중 변
                                          (3) 사용동물 수, 체중변화, 사망 및 도살동
     화를 계산하여 반드시 기록하도록 한다.
                                             물수, 독성증상을 보이는 동물수, 피부 및
     시험 중 사망 및 빈사동물을 포함하여 모
                                             털, 눈 및 점막, 소화계, 호흡계, 순환계,
     든 시험동물은 부검 후 소견을 기록한다.
                                             중추신경계, 행동유형, 독성증상 정도
  2.5 시험상의 유의사항
                                          (4) 용량별 독성반응 결과
    2.5.1 부식성이나 자극성이 큰 물질의 경우
                                             사용 동물수, 체중변화, 사망 및 도살 동물
     시험동물에 고통을 주므로 되도록 시험을
     피하도록 한다.                                수, 독성증상을 보이는 동물수, 피부, 털,

    2.5.2 예비시험에서 가능한 5마리 이상의 시               눈, 점막, 소화계, 호흡계, 순환계, 중추신

     험동물은 사용하지 않도록 한다.                       경계에 나타나는 독성증상(행동유형, 경

    2.5.3 시험동물이 참기 힘들 정도로 고통스                련, 설사, 유연, 혼수상태 등)

     러워 할 경우 안락사시키며 시험 중 사망               (5) 독성증상을 보이는 시간 및 회복 시간

     한 동물로 처리한다.                          (6) 도살기준 및 근거

III. 시험결과 및 보고                            (7) 부검 결과
 1. 결과의 처리                                (8) 결과의 해석

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