yakdoli/chandra-27b-ocr-v1 huggingface dataset:
<div data-bbox="165 100 243 113" data-label="Page-Header">제15127호</div>
<div data-bbox="434 100 454 113" data-label="Page-Header">단</div>
<div data-bbox="541 100 561 113" data-label="Page-Header">도</div>
<div data-bbox="683 100 832 113" data-label="Page-Header">2002. 6. 18. (화요일)</div>
<div data-bbox="124 120 874 878" data-label="Table">
<table border="1">
<tr>
<td data-bbox="124 500 320 878">
<p>다당과 디프테리아 무독성변이체 (CRM<sub>167</sub>)의 결합체를 함유하는 백색의 균질한 액상제제이다.</p>
<p>2. 일반제조기준</p>
<p>제제규칙 2. 생산관리항에 따른다.</p>
<p>3. 제조기준</p>
<p>3.1 세로</p>
<p>3.1.1 제조용 균주</p>
<p>3.1.1.1 폐렴구균 원정형 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F의 각각의 균주를 사용한다.</p>
<p>3.1.1.2 코리네박테리움 니프테리아 C7균주 (β 197) 또는 이와 동등 이상의 CRM<sub>167</sub> 단백질 생산 능력을 가진 균주를 사용한다.</p>
<p>3.1.2 배지</p>
<p>백신 제조에 사용되는 배지는 제제가 충분한 항원성을 보유하는 경우에는 어떠한 액체배지라도 사용할 수 있으나, 인체에 고노의 과민성을 일으키는 물질을 포함하여서는 안된다.</p>
</td>
<td data-bbox="124 120 320 500">
<p>3.2.1.2 분화화</p>
<p>배양액에 테우시클라이트를 0.12% w/v가 되도록 첨가 하여</p>
<p>10℃ 이하에서 30 분 이상 방치한다.</p>
<p>3.2.1.3 원액의 정제</p>
<p>각 혈청형별로 테우시클라이트가 첨가된 배양액을 원심분리하여 균체잔사 등을 제거한다. 이 상층액을 여과한 뒤 초여과법으로 여과농축한후 양이온 세척제인 Hexadecyltrimethylammonium Bromide(HB)를 첨가하여 용이온화한 다당을 친전자적 분리한다. 이 다당을 초여과, 침전 제용해, 0.25 M 염화나트륨 용액에 의한 침전, 2차 초여과, 2차 초여과 농축, 탄소 여과, 3차 초여과 농축, Hydroxyapatite(HAP) 이온교환수지를 통한 분리, 최종 초여과 농축 및 멸균여과의 과정을 통해 정제한다. 이 정제된 최종 생성물을 원액으로 한다.</p>
<p>3.2.2 디프테리아 무독성변이체 (CRM<sub>167</sub>)</p>
<p>3.2.2.1 유전자 변이 및 배양액</p>
<p>무독성인 용균성 파아지 β 197를 사용하는 디프테리아 독소정신에 관여하는 유전자부위에 변이를 일으킨 코리네박테리움 니프테리아 C7균주 (β 197)를 얻고, 이를 배양한 후 귀경 또는 적당한 배양법으로 검사하여 다른 균으로 오염되지 않은 것을 배양액으로 한다.</p>
<p>3.2.2.2 추출 및 정제</p>
<p>배양액을 여과한 후 황산암모늄으로 침전시키고 추출한 다음, 2-(Diethylamino)ethyl ether(DIzAE)-세파로스 칼럼을 이용하여 정제한 것을 디프테리아 무독성 변이</p>
</td>
</tr>
</table>
</div>
<div data-bbox="490 882 506 894" data-label="Page-Footer">88</div>
<div data-bbox="165 102 243 117" data-label="Page-Header"><p>제15127호</p></div>
<div data-bbox="435 102 456 117" data-label="Page-Header"><p>관</p></div>
<div data-bbox="541 102 562 117" data-label="Page-Header"><p>보</p></div>
<div data-bbox="678 102 830 117" data-label="Page-Header"><p>2002. 6. 18. (화요일)</p></div>
<div data-bbox="120 120 875 880" data-label="Table">
<table border="1">
<tr>
<td colspan="2">체 (CRM<sub>1hr</sub>) 원액으로 하고, 이를 결합체 제조에 사용한다</td>
<td>원질액</td>
<td>단백질량 (w/w%)</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">3.3 원액의 시험</td>
<td>4</td>
<td>3.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">3.3.1 정제 다당</td>
<td>6B</td>
<td>2.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">3.3.1.1 건조 중량</td>
<td>9V</td>
<td>2.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">각 현정 원액 10 ml를 취해 60±2℃ 감압 오븐(20~25 psi)에서 16~18 시간 건조시킨 때 다음의 현정형의 원액에 함유된 다당은 아래 농도가 있어야 한다.</td>
<td>14</td>
<td>5.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">현정형</td>
<td>18C</td>
<td>3.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">다당 농도 (mg/ml)</td>
<td>19F</td>
<td>3.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">4</td>
<td>23F</td>
<td>2.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">6B</td>
<td colspan="2">3.3.1.4 해산 함량시험</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">9V</td>
<td colspan="2">대한약진 일반시험법종의 『휴양도 측정법』에 따라서</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">14</td>
<td colspan="2">원액 50µg/ml 용액에 대한 E<sup>1%</sup> (260nm) : 200을 이용</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">18C</td>
<td colspan="2">하여 260nm 및 1cm 350 nm에서 측정할 때 각 현정형</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">19F</td>
<td colspan="2">의 원액에 함유된 핵산은 아래 함량 이하이어야 한다.</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">23F</td>
<td>현산함량 (w/w%)</td>
<td></td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">3.3.1.2 원정학적 동정시험</td>
<td>4</td>
<td>2.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">각 현정형의 원액에 대해 각각 단일형 특이성을 나타내는 항정형을 이용하여 현정형 14는 켈라산법으로, 이외의 다른 현정형은 역반액 전기 영동법으로 시험할 때 각 특이성을 나타내는 항원정과 반역질진미를 형성한다.</td>
<td>6B</td>
<td>1.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">3.3.1.3 단백질 함량시험</td>
<td>9V</td>
<td>1.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">단백질 정량법(2)에 따라 시험할 때 각 현정형의 원액에 함유된 단백질은 아래 함량이어야 한다.</td>
<td>14</td>
<td>2.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">3.3.1.4 분자량 측정시험</td>
<td>18C</td>
<td>2.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">가 현정 원액 10 mg을 취해 물 10 ml로 희석하여 검</td>
<td>19F</td>
<td>2.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">액으로 한다. 이동상은 초산나트륨 40 g에 물 900 ml</td>
<td>23F</td>
<td>2.0</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">를 넣어 녹이고 Disodium Ethylene Diamine Tetra</td>
<td colspan="2">3.3.1.5 분자량 측정시험</td>
</tr>
<tr>
<td colspan="2">Acetic Acid(EDTA) 372.2 mg와 아지트 나트륨 10</td>
<td colspan="2">가 현정 원액 10 mg을 취해 물 10 ml로 희석하여 검</td>
</tr>
</table>
</div>
<div data-bbox="490 880 510 900" data-label="Page-Footer"><p>9</p></div>
<div data-bbox="166 100 244 113" data-label="Page-Header"><p>제15127호</p></div>
<div data-bbox="434 100 454 113" data-label="Page-Header"><p>단</p></div>
<div data-bbox="541 100 561 113" data-label="Page-Header"><p>보</p></div>
<div data-bbox="683 100 831 113" data-label="Page-Header"><p>2002. 6. 18. (화요일)</p></div>
<div data-bbox="125 120 875 880" data-label="Table">
<table border="1">
<tr>
<td data-bbox="125 120 395 495">
<p>mg을 기해 녹인 후 빙초산으로 pH를 6.7로 맞춘 다음 물로 1000 mL로 만든다. 다중 레이저 광분산 탐지기 (MALLS; Multi-Angle Laser Light Scattering)와 굴 선 눈금 탐지기(RI detector;Refractive Index detector)를 지니는 고속액체크로마토그래프 (HPLC;High performance Liquid chromatograph) 시스템을 컷고 이 통상을 0.5 mL/min 속도로 1 시간 이상 환입을 통과시키 시스맨을 안정시킨 후 650 nm에서 검액을 50 μg씩 주입하여 농도를 측정할 때 각 형태의 분자량을 아 래 이상이어야 한다.</p>
</td>
<td data-bbox="125 505 395 880">
<p>3.3.2.2 해산 함량시험</p>
<p>동일 균주로부터 생산된 DNA 표준액을 사용하여 형상 광도법에 따라 검액중의 DNA 양 (μg)을 측정한 다음 3.3.2.1항에서 측정한 CRM 단백질 함량과의 중량대중량 백분율로서 DNA 함량을 나타낼 때 1.0 w/w % 이하이어야 한다.</p>
<p>DNA 함량 % (w/w) = <math>\frac{\text{검액중의 DNA 양 } (\mu\text{g}) \times 1\text{W}}{\text{검액중의 CRM 양 } (\mu\text{g})}</math></p>
<p>3.3.2.3 순도시험</p>
<p>분자량을 알고 있는 켈러와 단백질혼합표준품을 Phosphate Buffered Saline(PBS)로 녹여 고속액체크로마토그래프 주입용량 중의 단백질 양이 200 μg이 되도록 표준액을 만든다. 검체는 PBS로 희석하여 주입용량 중의 단백질 양이 50μg이 되도록 검액을 만든다.</p>
<p>켈러와 고속액체크로마토그래프(High Performance Liquid Chromatograph;HPLC) 시스템을 컷고 pH 7.0 PBS를 1 mL/min 속도로 30 분 이상 질량을 통과시켜 시스템을 보관한 후, 280 nm에서 켈러와 표준액 및 검액의 흡광도를 측정한다. 표준액의 측정치를 각각의 분자량에 대해 점을 정하여 정량선을 만들고 검액의 측정치를 비교하여 검체의 분자량을 구한 다음, 분자량이 60,000의 것과 정량선상의 적분치를 비교할 때 그 백분율을 검체의 순도로 한다.</p>
<p>위와 같이 시험할 때 순도는 90% 이상이어야 한다.</p>
<p>3.3.2.4 무균시험</p>
<p>무균시험법에 따르면, 이에 적합하여야 한다.</p>
</td>
</tr>
<tr>
<td data-bbox="405 120 625 495">
<p>3.3.1.6 무균시험</p>
<p>무균시험법에 따르면, 이에 적합하여야 한다.</p>
<p>3.3.1.7 열도특신시험</p>
<p>대원약진 일반시험법 열도특신 시험법에 따라 시험할 때 각 원액의 1μg당 1 EU이어야하다 한다.</p>
<p>3.3.2 디프테리아 무독성 변이체 (CRM<sub>167</sub>) 원액</p>
<p>3.3.2.1 단백질 함량시험</p>
<p>단백질 정량법 (2)에 따라 시험할 때, 함량은 검체 1 mL당 3.0 mg이상 이어야 한다.</p>
</td>
<td data-bbox="405 505 625 880">
<table border="1">
<tr>
<th>원정원</th>
<th>분자량</th>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>200,000</td>
</tr>
<tr>
<td>6B</td>
<td>600,000</td>
</tr>
<tr>
<td>9V</td>
<td>500,000</td>
</tr>
<tr>
<td>14</td>
<td>400,000</td>
</tr>
<tr>
<td>18C</td>
<td>500,000</td>
</tr>
<tr>
<td>19F</td>
<td>400,000</td>
</tr>
<tr>
<td>23F</td>
<td>500,000</td>
</tr>
</table>
</td>
</tr>
</table>
</div>
<div data-bbox="486 881 509 894" data-label="Page-Footer"><p>10</p></div>
<div data-bbox="165 102 243 117" data-label="Page-Header">제15127호</div>
<div data-bbox="434 102 456 117" data-label="Page-Header">관</div>
<div data-bbox="541 102 563 117" data-label="Page-Header">보</div>
<div data-bbox="678 102 830 117" data-label="Page-Header">2002. 6. 18. (화요일)</div>
<div data-bbox="125 120 874 879" data-label="Table">
<table border="1">
<tr>
<td data-bbox="125 500 335 879">
<p>3.3.25 동정시험</p>
<p>트기의 니프테리아투소이드 항혈청을 디프테리아투소이드로 코팅된 라텍스와 섞을 때 일어나는 응집반응이 CRM<sub>100</sub> 단백질 존재시에 억제되는 원리를 이용하여 라텍스 응집억제 시험법 (Latex Agglutination Inhibition Method)에 따라 시험할 때 검액은 약간의 응집을 일으키거나 응집은 일으키지 않아야 하며, 음성대조액은 종종 등의 응집 또는 강한 응집을 나타내어야 한다.</p>
</td>
<td data-bbox="125 120 335 500">
<p>현정점</p>
<p>4</p>
<p>6B</p>
<p>9V</p>
<p>14</p>
<p>18C</p>
<p>19F</p>
<p>23F</p>
<p>50% Kd 값</p>
<p>0.15 ~ 0.40</p>
<p>0.25</p>
<p>0.30</p>
<p>0.30</p>
<p>0.40 ~ 0.65</p>
<p>0.40</p>
<p>0.40</p>
</td>
</tr>
<tr>
<td data-bbox="335 500 450 879">
<p>3.3.26 엔도톡신시험</p>
<p>대한약진 일반시험법중 엔도톡신시험법에 따라 시험할 때, 단백질 1μg당 1 EU 이하이어야 한다.</p>
</td>
<td data-bbox="335 120 450 500">
<p>3.3.2 Do 측정시험</p>
<p>검체에 대하여 3.7.3 항에 따라 당류 함량을 측정하고, 또 검체에 대한 알데히드 분석은 아래 시험법과 같이 현정형 4에 대하여는 Bicinchoninic acid(HCA)법, 현정형 6B, 9V, 14, 23F에 대하여는 파르-손산법 그리고 현정형 18C 및 19F에 대하여는 AIMT(4-Amino-5-Hydrazino-3-Mercapto-</p>
</td>
</tr>
<tr>
<td data-bbox="450 500 630 879">
<p>3.4 정제 혈청 다당 원액의 활성화</p>
<p>정제 혈청다당 원액에 중질 나트륨을 넣어 산화시킨 후 조여과로 농축하고 멸균여과한다. 농축된 다당중 현정형 4, 9V, 14에 니프테리아 무독성 변이체 (CRM<sub>100</sub>) 원액을 혼합하고 다른 현정형 6B, 19F와 23F에는 자당을 혼합한 후 각각 동결건조한다. 나머지 현정형 18C는 혼합과정없이 동결건조시킨다.</p>
</td>
<td data-bbox="450 120 630 500">
<p>1,2,4-Trizic)법 등으로 알데히드를 정량한 다음 얻어진 각 당류 함량과 알데히드 함량으로 다음 식에 따라 Do (산화정도) 값을 구한다.</p>
<p>Do = 당류 분 농도/mL<br/>알데히드 분 농도/mL</p>
</td>
</tr>
<tr>
<td data-bbox="630 500 874 879">
<p>3.5 활성화된 정제다당 원액의 시험</p>
<p>3.5.1 분자량 분포시험</p>
<p>세파로스 CL-4B (현정형 4, 6B, 9V, 14, 19F, 23F)와 세파로스 CL-6B (현정형 18C) 칼럼으로 생리식염액을 이동상으로 하여 검체를 입자크기별로 분화하고, 분획들 각각에 대해 3.7.3 항에 따라 당류 함량을 측정한 후 건량산을 작성하여 50% Kd값을 구할 때 각 현정형 원액의 50% Kd 값은 아래 범위에 들어가야 하이어야 한다.</p>
</td>
<td data-bbox="630 120 874 500">
<p>이 때 각 현정형의 Do 값은 아래 범위에 들어야 한다.</p>
<p>현정형</p>
<p>4</p>
<p>6B</p>
<p>9V</p>
<p>14</p>
<p>Do 값</p>
<p>1.0 ~ 4.5</p>
<p>7.0 ~ 13.0</p>
<p>4.0 ~ 9.0</p>
<p>6.0 ~ 13.0</p>
</td>
</tr>
</table>
</div>
<div data-bbox="485 881 509 895" data-label="Page-Footer">11</div>
<div data-bbox="165 102 242 116" data-label="Page-Header"><p>제15127호</p></div>
<div data-bbox="435 102 455 116" data-label="Page-Header"><p>관</p></div>
<div data-bbox="541 102 562 116" data-label="Page-Header"><p>보</p></div>
<div data-bbox="678 102 830 116" data-label="Page-Header"><p>2002. 6. 18. (화요일)</p></div>
<div data-bbox="128 125 450 405" data-label="Text">
<p>검역, 표준액 및 공시액의 시험관에 물이나 적당한 한 용액 200 μL로 희석한다. 필렛드 100 mg을 1N 수산화나트륨 10 mL에 용해시켜 만든 1.0% 필렛드 300 μL를 모든 관들에 첨가하고 30분간 300rpm으로 오버할 레이저에서 진탕한다. 붕소수소화나트륨 100 mg을 1N 수산화나트륨 50mL에 용해시켜 만든 0.2% 붕소수소화나트륨 500 μL를 모든 관들에 첨가하여 첫 섞은 후 한 시간 이내에 모든 관들의 흡광도를 측정한다. 탈이온수를 사용하여 540 nm 에서 흡광도 값을 0으로 한다.</p>
<p>두 번 반복한 공시액, 표준품, 검체의 평균 흡광도를 계산하여 표준품, 검체 평균값에서 평균 공시액값을 뺀다. 공시액의 정확한 흡광도 Y에 대한 표준품의 nmol을 X로 한 1차 작선으로 1차 방정식을 만든다. 공시액용 보정 검체 흡광도를 관에 대한 알데히드 nmol로 바꾸기 위해 1 차 방정식을 사용하고 아래의 방정식에 대입하여 알데히드 농도 nmol/mL를 계산한다.</p>
</div>
<div data-bbox="455 125 650 405" data-label="Equation-Block">
<math display="block">\text{알데히드 농도 nmol/mL} = \frac{\text{시험관 당 nmol} \times \text{희석배수}}{\text{검체체적량 (\mu L)}}</math>
</div>
<div data-bbox="660 125 720 405" data-label="Section-Header">
<p>3.6 활성화된 정제다당과 디프테리아 무독성변이체 (CRM<sub>107</sub>)의 결합체</p>
</div>
<div data-bbox="725 125 875 405" data-label="Text">
<p>3.6.1 수상 (Aqueous) 결합 과정 (현정형 4, 9V, 14, 18C)</p>
<p>동결건조한 활성화된 현정 4, 9V, 14와 디프테리아 무독성 변이체 혼합물을 녹인 후 0.1M 인잔나트륨 완충액을 넣어 완전히 용해할 때까지 계량한다. 활성화된 현정 18C는 1M 이염기 인산나트륨으로 만든 디프테리아 무독성변이체 용액을 넣어 용해할 때까지 계량한다. 이들 현정형 용액 혼합 후 시안불소수소체적량을 구한다.</p>
</div>
<div data-bbox="128 510 450 790" data-label="Text">
<p>SDS (Sodium Dodecyl Sulfate 또는 Sodium Lauryl Sulfate) 10.0 g 을 물 100 mL로 용해시켜 희석한 SDS 용액 30 μL와 혼합한 액 500 μL를 첨가하여 섞는다. 시험관들을 적어도 40 분은 넘기지 않도록 하여 20 분간 상온에 둔다. 690 nm에서 용액의 흡광도를 측정한다. 두 번 반복한 공시액, 표준품, 검체의 평균 흡광도를 계산하여 표준품, 검체 평균값에서 평균 공시액값을 뺀다. 표준품의 nmol을 X로, 흡광도를 Y로 한 1차 작선으로 1차 방정식을 만든다. 검체 흡광도를 관에 대한 환원값을 nmol로 바꾸기 위해 1 차 방정식을 사용하고 아래의 방정식에 대입하여 농도를 계산한다.</p>
</div>
<div data-bbox="455 510 650 790" data-label="Equation-Block">
<math display="block">\text{1mL 당 환원값 nmol} = \frac{\text{시험관 당 환원값 nmol} \times \text{희석배수}}{\text{검체체적량 (\mu L)}}</math>
</div>
<div data-bbox="660 510 720 790" data-label="Section-Header">
<p>3.5.2.3 AHMT 법</p>
</div>
<div data-bbox="725 510 875 790" data-label="Text">
<p>글리세알데히드 92.0 mg을 탈이온수 100 mL에 용해시켜 만든 10 mM 글리세알데히드용액 1.00 mL를 탈이온수 50 mL에 희석하여 만든 0.20 mM 글리세알데히드 표준품 10 μL, 40 μL, 80 μL를 각각 분취하여 각각 4개의 시험관에 넣어 표준액으로 하고 따로 공시액을 준비한다. 검체 200 μL당 알데히드 양이 2 ~ 16 nmol 이 되도록 각각 4개의 시험관에 첨하여 검액으로 한다. 이 때 검체체적량은 3.7.3 항에 따라 얻어진 당류 합량 (mg/μL)에 현정 18C는 60%, 현정형 19C는 50을 각각 나누어 검체체적량을 구한다.</p>
</div>
<div data-bbox="485 880 515 895" data-label="Page-Footer"><p>13</p></div>
<div data-bbox="168 103 245 117" data-label="Page-Header"><p>제15127호</p></div>
<div data-bbox="433 103 454 117" data-label="Page-Header"><p>단</p></div>
<div data-bbox="539 103 561 117" data-label="Page-Header"><p>보</p></div>
<div data-bbox="681 103 833 117" data-label="Page-Header"><p>2002. 6. 18. (화요일)</p></div>
<div data-bbox="121 121 878 881" data-label="Table">
<table border="1">
<tr>
<td data-bbox="121 500 325 881">
<p>화나트륨용액을 첨가하여 현정형 4, 9V는 37±2℃에서 44±52시간, 현정형 14 및 18C는 23±2℃에서 12~24시간 후 37±2℃에서 72~96시간 동안 배양하고 봉수수산화나트륨용액으로 23±2℃에서 3~6시간 배양하여 결합과정을 중지시킨다. 예비 여과후 초여과로 농축시키고, 현정형 4는 0.45 μm 여과기로 제거하려고 HAP 칼럼을 통해 정제하고 초여과로 농축한 후 나머지 현정형등과 멸균하여 하여 결합체를 만든다.</p>
</td>
<td data-bbox="121 121 325 500">
<p>각 현정형별 함량값은 아래 이상이어야 한다.</p>
<table border="1" data-bbox="160 250 325 380">
<tr>
<th>최소형</th>
<th>당류함량(%)</th>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>40%</td>
</tr>
<tr>
<td>6B</td>
<td>35%</td>
</tr>
<tr>
<td>9V</td>
<td>40%</td>
</tr>
<tr>
<td>14</td>
<td>50%</td>
</tr>
<tr>
<td>18C</td>
<td>40%</td>
</tr>
<tr>
<td>19F</td>
<td>30%</td>
</tr>
<tr>
<td>23F</td>
<td>35%</td>
</tr>
</table>
</td>
</tr>
<tr>
<td data-bbox="325 500 645 881">
<p>3.6.2 Dimethylsulfoxide(DMSO, 디메틸술폰산) 결합과정 (현정형 6B, 19F, 23F)</p>
<p>동결건조:한 활성화된 현정형 6B, 19F, 23F와 디프로테리아 무독성 번이체를 녹인후 디메틸술폰산을 넣어 용해시키고 Sodium Cyanoborohydride용액을 넣어 23±2℃에서 40~56 시간동안 배양하여 결합시키고 Sodium borohydride용액으로 23±2℃에서 3~6 시간 배양하여 결합 과정을 중지시킨다. 생리식염액으로 퇴식한 후 예비여과하고 초여과 농축한다. 0.45 μm 여과기로 여과한 후 현정형 23F는 DEAE 칼럼을 통해 정제한다. 모든 현정형을 세 2차 초여과 농축한 후 멸균하여 하여 결합체를 만든다.</p>
</td>
<td data-bbox="325 121 645 500">
<p>3.7.2 당류와 단백질 함량비 측정시험</p>
<p>3.7.3 항에 따라 측정한 당류 함량과 단백질 정량법 (2)에 따라 측정한 단백질 함량과의 비율(당류/단백질)은 각 현정형별로 아래와 같아야 한다.</p>
<table border="1" data-bbox="510 230 645 380">
<tr>
<th>현정형</th>
<th>당류/단백질 함량비</th>
</tr>
<tr>
<td>4</td>
<td>0.7 - 2.2</td>
</tr>
<tr>
<td>6B</td>
<td>0.4 - 1.0</td>
</tr>
<tr>
<td>9V</td>
<td>0.7 - 2.6</td>
</tr>
<tr>
<td>14</td>
<td>1.0 - 2.7</td>
</tr>
<tr>
<td>18C</td>
<td>0.5 - 1.8</td>
</tr>
<tr>
<td>19F</td>
<td>0.4 - 1.2</td>
</tr>
<tr>
<td>23F</td>
<td>0.3 - 1.2</td>
</tr>
</table>
</td>
</tr>
<tr>
<td data-bbox="645 500 878 881">
<p>3.7 정제 현정 다량과 디프로테리아 무독성 번이체(CRM<sub>107</sub>) 결합을 위한 시험</p>
<p>3.7.1 분자량 분포 시험</p>
<p>검체는 필요하면 단백질이 약 250mg/mL 항유리노독 생리식염액으로 퇴식한 다유 세파모스 CL-4B 칼럼을 이용하여 입자크기별로 분획하고, 분획물 각각에 대해 3.7.2 항에 따라 당류함량과 단백질함량을 측정한 후 검량선을 작성하여 0.3Kd 이하의 서의 당류의 함량 (%)을 구한다.</p>
</td>
<td data-bbox="645 121 878 500">
<p>3.7.3 당류 함량시험</p>
<p>아래와 같이 각 당류를 취하여 멸균수 50 mL에 넣어 녹여 50 mM 당류를 만들어 이온 용액을 아래와 같이 각각 취하여 멸균수 100 mL에 녹여 1 mM 당류표준액으로 한다.</p>
</td>
</tr>
</table>
</div>
<div data-bbox="485 883 508 896" data-label="Page-Footer"><p>14</p></div>
<div data-bbox="166 102 243 116" data-label="Page-Header">제15127호</div>
<div data-bbox="432 102 454 116" data-label="Page-Header">간</div>
<div data-bbox="537 102 560 116" data-label="Page-Header">보</div>
<div data-bbox="680 102 831 116" data-label="Page-Header">2002. 6. 18. (화요일)</div>
<div data-bbox="125 507 260 775" data-label="Text">
<p>로 하여 녹인 후 pH 6.8로 맞추고 물을 넣어 2000 mL 로 한다.)을 넣어 검액으로 하여 표준액과 검액 각 50 μL로 210mm에서 정량할 때 혈청형 6B, 19F, 23F의 총 당류함량에 대한 산류 DMSO 함량은 2% 이하 이어야 한다.</p>
</div>
<div data-bbox="269 507 347 833" data-label="Text">
<p>3.7.8 인도록신 시험<br/>대락약진 일반시험법 인도록신시험법에 따라 시험할 때, 양류 1/6당 1.5EU 이하이어야 한다.</p>
</div>
<div data-bbox="362 507 411 833" data-label="Text">
<p>3.7.9 무균시험<br/>무균시험법에 따르며 이에 적합하여야 한다.</p>
</div>
<div data-bbox="427 507 561 870" data-label="Text">
<p>3.8 최종원액<br/>0.85% 염화나트륨액으로 총 용량의 80%가 되도록 결합제 원액을 희석하고 멸균과한 후 다시 0.85% 염화나트륨액으로 총용량의 95%가 되도록한다. 여기에 인산암무미듬 용액을 넣어 100%로 하고 이를 최종원액으로 한다.</p>
</div>
<div data-bbox="576 507 653 870" data-label="Text">
<p>3.9 종량원액의 시험<br/>3.91 종량류 항생시험<br/>이 시험에 사용하는 물은 중류수 또는 탈이온수를 사용한다. 표준물은 적합관정을 받은 각 혈청별 다량 원액을 사용한다.</p>
</div>
<div data-bbox="660 507 860 814" data-label="Text">
<p>각 혈청별 다량 원액시험중 건조중량 시험결과를 이용하여 표준액 조제에 필요한 각 혈청별 원액을 구한다. 즉 혈청 4, 9V, 14, 18C, 19F, 23F는 0.88을 이들 결과로 나누고, 혈청 6B 는 1.76을 건조중량 결과지로 나눈다. 각각의 결과에 따라 표준 원액을 취해 물을 넣어 10 mL로 하고 이를 표준원액으로 한다. (0.704 mg/mL)</p>
</div>
<div data-bbox="125 233 209 430" data-label="Text">
<p>각 표준원액 적당량을 취해 생리식염액으로 희석하여 각 시험 관내 다량 농도가 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60 μg/mL 가 되도록 0.5 mL씩 만들고 이를 표준액으로 한다.</p>
</div>
<div data-bbox="216 122 493 430" data-label="Text">
<p>비질량 (상등액)용 검액은 검체 1.5 mL를 10,000 rpm에서 10분간 원심분리한 뒤 상등에 1.4 mL를 시험관에 취한다. 총(비스판)용 검액은 검액조제과정없이 검체를 직접 사용한다. 또 안트론 0.5 g (±0.1 g)을 유리갈매기를 통해 250 mL 플라스크에 넣고 확산을 동일한 겔매기를 사용하여 가하여 250 mL로 만든 후 조심스럽게 녹을 때까지 흔쾌하여 안트론시액을 만든다. 이 용액은 임구를 암무미듬 호일로 완전히 마아 암소에서 냉장보관하며 조제후 1주일이내에 사용한다. 검체 농도가 분석범위내에 들도록 희석할 필요가 있으면 생리식염액을 사용하여 희석한다.</p>
</div>
<div data-bbox="499 122 690 430" data-label="Text">
<p>2개의 시험관에는 비스펜 검액과 상등의 검액 500 μL씩을 넣고 다른 2개의 시험관에는 생리식염액 (공시험액) 500 μL을 넣는다. 각 농도별 표준액은 500 μL씩을 각각 2 개의 시험관에 넣는다. 각각의 시험관에 안트론 시액 1 mL씩 넣고 흔쾌한 후 매개를 느슨히 닫고 95~100℃의 수욕에서 15 분간 방치한 다음 냉수에서 10 분이상 냉각시키고 진탕하여 시험관 벽의 응축물을 녹여낸다.</p>
</div>
<div data-bbox="696 122 836 430" data-label="Text">
<p>블로 분광도계의 영점을 맞춘 뒤 파장 625 nm에서 흡광도를 측정한다. 표준액에서 얻은 측정치로 검량선을 작성한 다음 검액의 측정치를 비교하고 검액의 희석도를 곱하여 검액중의 당류양을 구한 뒤 검액 용량으로 나누어 mL당 당류양 (μg)을 구한다.</p>
</div>
<div data-bbox="843 145 866 430" data-label="Text">
<p>이렇게 시험할 때 종량류함량은 25~50 μg/mL 이어야 한다.</p>
</div>
<div data-bbox="484 881 508 895" data-label="Page-Footer">18</div>
<div data-bbox="166 100 244 113" data-label="Page-Header">제15127호</div>
<div data-bbox="434 100 454 113" data-label="Page-Header">단</div>
<div data-bbox="540 100 561 113" data-label="Page-Header">보</div>
<div data-bbox="682 100 831 113" data-label="Page-Header">2002. 6. 18. (화요일)</div>
<div data-bbox="124 508 203 794" data-label="Text">
<p>세 방향 벨브를 위치 1에 놓는다. 진공이 작동되는 동안 slot간의 오염을 방지하기 위해 대각선 크로스 패턴으로 나사를 단단히 조인다.</p>
</div>
<div data-bbox="212 715 230 794" data-label="Section-Header">
<h3>3.9.26 시험 절차</h3>
</div>
<div data-bbox="239 507 374 794" data-label="Text">
<p>유동 벨브를 위치 2 (단원 상태) 에 맞추고 TBS 200 μl씩 모든 공간에 주입한 후 유동 벨브를 위치 3 (원단 상태) 으로 돌리고 진공을 사용하여 완충액을 제거한다. 완충액이 제거되자마자 곧 유동 벨브를 위치 2로 원장복귀한다.</p>
</div>
<div data-bbox="383 507 431 794" data-label="Text">
<p>검액, 양성 및 음성 비교액들을 각각 200 μl씩 적절한 위치에 주입한다.</p>
</div>
<div data-bbox="440 507 751 794" data-label="Text">
<p>유동 벨브를 위치 3으로 돌리고 검액 및 비교액들은 NC 벨브레인을 통해 여과시키고 여과가 완료되면 진공을 가동시키면서 각 검액용 공간을 TBS 200 μl씩으로 세척하고 세척액을 제거한다. 다시 한번 이동 공간을 동일한 방법으로 세척하고 공간에 세척액이 완전히 제거되면 유동 벨브를 위치 2로 원위지시킨다. 유동 벨브를 원위지 시기자마자 즉시 항체용액을 200 μl씩 주입한 후 30 분간 30 분간 실온에서 배양하고 유동 벨브를 위치 3으로 돌려 모든 항체용액을 공간에서 제거한 후 즉시 각 공간을 200 μl의 TTBS로 세척한다. 다시 한번 동일한 방법으로 세척한다.</p>
</div>
<div data-bbox="760 507 867 794" data-label="Text">
<p>진공을 가동시킨 다음 나사를 풀고 검체 주입을 꺼낸 후 NC를 폴리프로필렌 또는 폴리스트레 용기에 옮긴 다음 진공을 중지시킨다. 시험당일 BSA 1.5g을 TBS 50 mL에 녹여 BSA가 완전히 용해할 때까지 저림의 흔</p>
</div>
<div data-bbox="124 120 240 393" data-label="Text">
<p>화시켜 만든 3% 블라징 용액 약 50 mL에 NC를 완전히 담그고 회전 진탕기에서 30 분간 시간 동안 조용히 혼합시킨다. 만약 마개로 막아 2~8°C에서 보관한다면 NC는 3% 블라징 용액 내에서 방채 방치할 수 있다.</p>
</div>
<div data-bbox="249 120 637 393" data-label="Text">
<p>블라징 용액을 제거하고 세발리 TTBS 용액에 5~15 분간 담근 다음 실온에서 조용히 혼합하면서 5~10 분간 TTBS 용액으로 펌프레인을 세척한다. 충분한 양의 결합체 용액을 가해 NC를 완전히 담그고 조용히 혼합하면서 실온에서 30~60 분간 배양한다. 결합체 용액은 구원산 약 11.5 g과 염화나트륨 약 87.7g을 물 900mL 녹여 10 N 수산화나트륨으로 pH를 5.5~0.1로 맞추고 물을 넣어 1,000 mL로 만든 용액 300 mL를 물 600 mL와 혼합하고 이 용액 900 mL에 트윈 20 450 μl를 혼합하여 Tween/Citrate Buffered Saline(이하 TCBS) 용액을 만든다. 이 TCBS 용액 50mL에 BSA 0.5g을 녹여 혼합한다. 사용직전에 이 용액 25mL에 단백질 A/G·HRP(Horseradish Peroxidase) 5.0μl를 넣어 결합체 용액으로 사용한다.</p>
</div>
<div data-bbox="645 120 867 393" data-label="Text">
<p>결합체 용액을 제거한 뒤 NC를 충분한 TTBS에 넣어 적어도 5분간 실온에서 조용히 혼합하고 다시 TTBS 용 제거한 뒤 실온에서 조용히 혼합하면서 적어도 5~10분간 TBS 용액으로 2회 세척하고 TBS 용액을 버린다. 사용 직전에 4CN 페옥시다아제 기질 (용액 A) 및 페옥시다아제 기질 (용액 B) 를 실온으로 냉각시킨 후 각각 10mL씩 혼합하여 만든 4CN 페옥시다아제 전게 용액을 펌프레인에 넣고 조용히 혼합하면서 자주색</p>
</div>
<div data-bbox="485 881 509 894" data-label="Page-Footer">20</div>
<div data-bbox="164 102 243 116" data-label="Page-Header">제15127호</div>
<div data-bbox="434 102 456 116" data-label="Page-Header">단</div>
<div data-bbox="540 102 562 116" data-label="Page-Header">도</div>
<div data-bbox="678 102 830 116" data-label="Page-Header">2002. 6. 18. (화요일)</div>
<div data-bbox="120 120 874 879" data-label="Table">
<table border="1">
<tr>
<td data-bbox="120 500 325 879">
        마가 생길 때까지 방지한다. 보통 이 때는 15분만에 나타난다. NC 배경이 원칙으로 없어지도록 지나치게 전개시키지 않는다. NC를 물론 세척하여 모든 기질용 액을 제거한 뒤 종이라일 또는 여과지 사이에 놓고 암소에서 방치하여 건조시킨다. (이 때 창기간 보존하기 위해 관 보호상자에 끼워서 보관할 수 있다. 영구기록을 위해 사진을 찍도록 한다.)
      </td>
<td data-bbox="120 120 325 500">
        3.9.6 엔도독신 시험<br/>
        대한약진 일반시험법중 엔도독신시험법에 따르면, 이 때 전체 1mL 당 50EDU 이하이어야 한다.<br/>
        4. 분병과 용기<br/>
        제제규칙 3. 분병과 용기 항에 따른다.<br/>
        5. 각 점<br/>
        5.1 농정시험
      </td>
</tr>
<tr>
<td data-bbox="325 500 535 879">
        3.9.27 관 정<br/>
        시험은 다음 조건을 만족할 때 적합으로 한다.<br/>
        - 검액의 띠는 자주색을 나타내야 한다.<br/>
        - 양성 비교액은 모든 항체에 대해 자주색의 띠가 나타나야 한다.<br/>
        - 음성 비교액 및 항체 없는 비교액은 검출시험에 대해 자주색 띠가 없어야 하고 NC 배경색과 비슷하거나 띠색이어야 한다.
      </td>
<td data-bbox="325 120 535 500">
        3.9.2 항에 따르면, 이에 적합하여야 한다.<br/>
        5.2 무균시험<br/>
        무균시험법에 따르면, 이에 적합하여야 한다.<br/>
        5.3 엔도독신 시험법<br/>
        대한약진 일반시험법 중 엔도독신시험법에 따라 시험할 때 전체 1mL 당 50 EDU 이하이어야 한다.<br/>
        5.4 이상독신부정시험<br/>
        이상독신부정시험(1) 및 (2)에 따르면, 이에 적합하여야 한다.
      </td>
</tr>
<tr>
<td data-bbox="535 500 874 879">
        3.9.3 용단백질 함량시험<br/>
        단백질 정량법 (2)에 따라 시험할 때 전체 1 mL당 20~50 μg이어야 한다.<br/>
        3.9.4 무균시험<br/>
        무균시험법에 따르면, 이에 적합하여야 한다.<br/>
        3.9.5 알루미늄 함량시험<br/>
        알루미늄 표준액 (1,000 ppm) 1.0 mL에 0.1 N 염산을 넣어 100 mL로 한 후 표준액으로 하고 이 약 2.0 mL에 물 10 mL를 넣고 다시 0.1 N 염산을 넣어 50 mL로 하여 검액으로 한 다음, 0.1 N 염산을 용시험액으로 하여 원자발광광도법에 따라 시험할 때, 함량은 전체 1 mL당 0.15~0.35 mg 이어야 한다.
      </td>
<td data-bbox="535 120 874 500">
        6. 기 독<br/>
        제제규칙 5. 기 독 항에 따른다.<br/>
        7. 시공품<br/>
        제제규칙 7. 시공품 항에 따른다.<br/>
        8. 용기 및 포장의 표시<br/>
        제제규칙 7. 용기 및 포장의 표시 항에 규정된 사항에 따라 기재한다.<br/>
        9. 운 송<br/>
        제제규칙 8. 운송 항에 따른다.<br/>
        10. 저장과 유효기간<br/>
        필봉용기, 동결을 피하여 냉장보관(2~8℃)한다.<br/>
        유효기간은 24개월로 한다.
      </td>
</tr>
</table>
</div>
<div data-bbox="484 881 509 895" data-label="Page-Footer">21</div>