Source: https://www.gesetze-im-internet.de/bioabfv/__14.html
Legislation: bioabfv

Title: Anhang 2 Anforderungen an die hygienisierende Behandlung von Bioabfällen zur Gewährleistung der seuchen- und phytohygienischen Unbedenklichkeit

Description:
Verordnung über die Verwertung von Bioabfällen auf Böden (BioAbfV)
Anhang 2 Anforderungen an die hygienisierende Behandlung von Bioabfällen zur Gewährleistung der seuchen- und phytohygienischen Unbedenklichkeit

Paragraph: 14

Full Text:
Verordnung über die Verwertung von Bioabfällen auf Böden (BioAbfV)
Anhang 2 Anforderungen an die hygienisierende Behandlung von Bioabfällen zur Gewährleistung der seuchen- und phytohygienischen Unbedenklichkeit

**Inhaltsverzeichnis**

*    *   **1**

    *   **Allgemeine Anmerkungen**

*    *   **2**

    *   **Hygienisierende Behandlung**

*    *   **2.1**

    *   **Behandlungsverfahren zur Hygienisierung**                        (zu
        § 2 Nummer 2)

*    *   **2.2**

    *   **Anforderungen an die hygienisierende Behandlung**

*    *   2.2.1

    *   Pasteurisierung

*    *   2.2.1.1

    *   Anforderungen an die Prozessführung

*    *   2.2.1.2

    *   Prozessprüfung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

*    *   2.2.1.3

    *   Prozessüberwachung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

*    *   2.2.1.4

    *   Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer
        3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

*    *   2.2.2

    *   Aerobe hygienisierende Behandlung (thermophile Kompostierung)

*    *   2.2.2.1

    *   Anforderungen an die Prozessführung

*    *   2.2.2.2

    *   Prozessprüfung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

*    *   2.2.2.3

    *   Prozessüberwachung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

*    *   2.2.2.4

    *   Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer
        3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

*    *   2.2.3

    *   Anaerobe hygienisierende Behandlung (thermophile Vergärung)

*    *   2.2.3.1

    *   Anforderungen an die Prozessführung

*    *   2.2.3.2

    *   Ermittlung der Mindestverweilzeit

*    *   2.2.3.3

    *   Prozessprüfung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

*    *   2.2.3.4

    *   Prozessüberwachung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

*    *   2.2.3.5

    *   Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer
        3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

*    *   2.2.4

    *   Anderweitige hygienisierende Behandlung

*    *   2.2.4.1

    *   Anforderungen an die Prozessführung

*    *   2.2.4.2

    *   Prozessprüfung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

*    *   2.2.4.3

    *   Prozessüberwachung (§ 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

*    *   2.2.4.4

    *   Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer
        3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

*    *   **3**

    *   **Prüfungen der seuchen- und phytohygienischen Unbedenklichkeit**

*    *   **3.1**

    *   **Prozessprüfung**                        (zu § 3 Absatz 4 Satz 1
        Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

*    *   3.1.1

    *   Allgemeine Anforderungen

*    *   3.1.2

    *   Anlagen zur aeroben hygienisierenden Behandlung (thermophile
        Kompostierungsanlagen)

*    *   3.1.2.1

    *   Mietenkompostierung

*    *   3.1.2.2

    *   Andere Kompostierungsverfahren

*    *   3.1.3

    *   Anlagen zur anaeroben hygienisierenden Behandlung (thermophile
        Vergärungsanlagen)

*    *   **3.2**

    *   **Prozessüberwachung**                        (zu § 3 Absatz 4 Satz 1
        Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

*    *   **3.3**

    *   **Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle**                        (zu
        § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

*    *   4 ****

    *   **Methoden zur Prüfung der seuchen- und phytohygienischen
        Unbedenklichkeit**

*    *   **4.1**

    *   **Traceruntersuchungen zur Ermittlung der Mindestverweilzeit bei
        anaeroben hygienisierenden Behandlungsverfahren (thermophile
        Vergärung)**

*    *   4.1.1

    *   Traceruntersuchung mit Sporen von
        Bacillus globigii

*    *   4.1.1.1

    *   Vorbereitung

*    *   4.1.1.2

    *   Durchführung der Untersuchung

*    *   4.1.1.3

    *   Nachweismethode

*    *   4.1.1.4

    *   Mindestverweilzeit

*    *   4.1.2

    *   Traceruntersuchung mit Lithium

*    *   4.1.2.1

    *   Vorbereitung

*    *   4.1.2.2

    *   Durchführung der Untersuchung

*    *   4.1.2.3

    *   Nachweismethode

*    *   4.1.2.4

    *   Mindestverweilzeit

*    *   **4.2**

    *   **Prüfungen der Seuchenhygiene**

*    *   4.2.1

    *   Prozessprüfung

*    *   4.2.1.1

    *   Testorganismus und Grenzwert

*    *   4.2.1.2

    *   Einlageproben für aerobe hygienisierende Verfahren (thermophile
        Kompostierung)

*    *   4.2.1.3

    *   Einlageproben für anaerobe hygienisierende Verfahren (thermophile
        Vergärung)

*    *   4.2.1.4

    *   Nachweismethode

*    *   4.2.2

    *   Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle

*    *   **4.3**

    *   **Prüfungen der Phytohygiene**

*    *   4.3.1

    *   Prozessprüfung

*    *   4.3.1.1

    *   Testorganismen und Grenzwerte

*    *   4.3.1.2

    *   Testorganismus Plasmodiophora brassicae

*    *   4.3.1.2.1

    *   Herstellung der Einlageproben für aerobe hygienisierende
        Behandlungsverfahren (thermophile Kompostierung)

*    *   4.3.1.2.2

    *   Herstellung der Einlageproben für anaerobe hygienisierende
        Behandlungsverfahren (thermophile Vergärung)

*    *   4.3.1.2.3

    *   Nachweis der Infektiosität durch einen Biotest

*    *   4.3.1.3

    *   Testorganismus Tomatensamen

*    *   4.3.1.3.1

    *   Herstellung der Einlageprobe

*    *   4.3.1.3.2

    *   Bestimmung der Keimrate durch einen Biotest

*    *   4.3.1.4

    *   Testorganismus Tabakmosaikvirus bei aeroben hygienisierenden
        Behandlungsverfahren (thermophile Kompostierung)

*    *   4.3.1.4.1

    *   Herstellung der Einlageproben

*    *   4.3.1.4.2

    *   Nachweis der Infektiosität durch einen Biotest

*    *   4.3.2

    *   Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle

**1** **Allgemeine Anmerkungen**

    In diesem Anhang sind die Anforderungen und die Vorgaben an die
    hygienisierende Behandlung (Anlagen und Verfahren) und Prüfungen der
    hygienisierten Bioabfälle beschrieben.

    Werden Bioabfälle einer Behandlung zugeführt, die den Anforderungen an
    die Hygienisierung nicht entspricht (z. B. mesophile Vergärung), ist
    die hygienisierende Behandlung der Bioabfälle nach den Vorgaben dieses
    Anhangs zusätzlich durchzuführen.

    Die Anlage ist so zu führen und die Behandlung ist so durchzuführen,
    dass eine Rekontamination der hygienisierend behandelten Materialien
    vermieden wird.

**2** **Hygienisierende Behandlung**

**2.1** **Behandlungsverfahren zur Hygienisierung**                    (zu § 2
    Nummer 2)

    Die hygienisierende Behandlung der Bioabfälle erfolgt durch

    a)  Pasteurisierung (Nummer 2.2.1),

    b)  aerobe hygienisierende Behandlung (thermophile Kompostierung) (Nummer
        2\.2.2),

    c)  anaerobe hygienisierende Behandlung (thermophile Vergärung) (Nummer
        2\.2.3) oder

    d)  anderweitige Hygienisierungsbehandlung (Nummer 2.2.4).

**2.2** **Anforderungen an die hygienisierende Behandlung**

2.2.1 Pasteurisierung

    Die Pasteurisierung kann vor oder nach einer zusätzlichen,
    insbesondere biologisch stabilisierenden Behandlung (z. B. mesophile
    Vergärung) durchgeführt werden.

2.2.1.1 Anforderungen an die Prozessführung

    Vor der Pasteurisierung sind die Bioabfälle auf eine Teilchengröße mit
    einer Kantenlänge (zweidimensional) von jeweils maximal 12 mm zu
    zerkleinern. Das Material ist bei der Erhitzung zu homogenisieren und
    muss einen Wassergehalt aufweisen, der einen hinreichenden
    Wärmeübergang zwischen und innerhalb der Teilchen gewährleistet.

    Die Prozesssteuerung in Pasteurisierungsanlagen muss für die
    Hygienisierung der Bioabfälle so vorgenommen werden, dass eine
    Temperatur von mindestens 70 °C über einen zusammenhängenden Zeitraum
    von mindestens 1 Stunde auf das gesamte Material einwirkt.

2.2.1.2 Prozessprüfung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

    Für Pasteurisierungsanlagen ist keine Prozessprüfung gemäß Nummer 3.1
    erforderlich; stattdessen sind Pasteurisierungsanlagen vor der
    Inbetriebnahme durch die zuständige Behörde, ggf. unter Hinzuziehung
    eines Sachverständigen, technisch abzunehmen (§ 3 Absatz 5 Satz 3).
    Die zuständige Behörde stellt eine Abnahmebescheinigung aus, wenn sie
    festgestellt hat, dass die Pasteurisierungsanlage die Anforderungen an
    die Prozessführung nach Nummer 2.2.1.1 erfüllt und mit den
    erforderlichen Einrichtungen und Geräten ausgestattet ist,
    insbesondere mit

    a)  Geräten zur Überwachung der Temperatur,

    b)  Geräten zur ständigen Aufzeichnung der Messergebnisse und

    c)  einem angemessenen Sicherheitssystem zur Vermeidung einer
        unzulänglichen Erhitzung.

2.2.1.3 Prozessüberwachung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

    Die Prozessüberwachung ist nach den Vorgaben der Nummer 3.2
    durchzuführen.

2.2.1.4 Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer
    3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

    Die Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle sind nach den Vorgaben der
    Nummer 3.3 und den Methoden gemäß Nummer 4.2.2 (Seuchenhygiene) und
    Nummer 4.3.2 (Phytohygiene) durchzuführen.

2.2.2 Aerobe hygienisierende Behandlung (thermophile Kompostierung)

2.2.2.1 Anforderungen an die Prozessführung

    Die Prozesssteuerung in Kompostierungsanlagen muss für die
    Hygienisierung der Bioabfälle so vorgenommen werden, dass über mehrere
    Wochen ein thermophiler Temperaturbereich und eine hohe biologische
    Aktivität bei günstigen Feuchte- und Nährstoffverhältnissen sowie eine
    optimale Struktur und Luftführung gewährleistet sind. Der Wassergehalt
    soll mindestens 40 % betragen und der pH-Wert um 7 liegen. Im Verlauf
    der aeroben hygienisierenden Behandlung muss eine Temperatur von
    mindestens 55 °C über einen möglichst zusammenhängenden Zeitraum von 2
    Wochen, von 60 °C über 6 Tage oder von 65 °C über 3 Tage auf das
    gesamte Rottematerial einwirken.

2.2.2.2 Prozessprüfung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

    Für Kompostierungsanlagen zur Hygienisierung ist die Prozessprüfung
    nach den Vorgaben der Nummer 3.1.1 und der Nummer 3.1.2 durchzuführen.

    Zur Verwendung von Testorganismen (Test- und Indikatorkeime) und zur
    Prüfung ihrer Abtötung oder Inaktivierung sind folgende Methoden
    anzuwenden:

    a)  für die Seuchenhygiene die Methoden gemäß Nummer 4.2.1 (außer Nummer
        4\.2.1.3) und

    b)  für die Phytohygiene die Methoden gemäß Nummer 4.3.1 (außer Nummer
        4\.3.1.2.2).

2.2.2.3 Prozessüberwachung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

    Die Prozessüberwachung ist nach den Vorgaben der Nummer 3.2
    durchzuführen.

2.2.2.4 Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer
    3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

    Die Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle sind nach den Vorgaben der
    Nummer 3.3 und den Methoden gemäß Nummer 4.2.2 (Seuchenhygiene) und
    Nummer 4.3.2 (Phytohygiene) durchzuführen.

2.2.3 Anaerobe hygienisierende Behandlung (thermophile Vergärung)

2.2.3.1 Anforderungen an die Prozessführung

    Die Prozesssteuerung in Vergärungsanlagen muss für die Hygienisierung
    der Bioabfälle so vorgenommen werden, dass über den zusammenhängenden
    Zeitraum der Mindestverweilzeit die Behandlungstemperatur im
    thermophilen Bereich (mindestens 50 °C) auf das gesamte Material
    einwirkt. Hierbei dürfen die bei der bestandenen Prozessprüfung (s.
    Nummer 2.2.3.3) verwendete technisch vorgegebene oder nachgewiesene
    Mindestverweilzeit (s. Nummer 2.2.3.2) und die verwendete
    Behandlungstemperatur nicht unterschritten werden.

2.2.3.2 Ermittlung der Mindestverweilzeit

    Sofern die Mindestverweilzeit im Fermenter nicht technisch mittels
    einer hydraulischen Absperrung innerhalb der Beschickungs- und
    Entnahmeintervalle vorgegeben ist, muss sie durch eine
    Traceruntersuchung nach einer Methode gemäß Nummer 4.1 vor der
    Prozessprüfung (s. Nummer 2.2.3.3) nachgewiesen werden.

    Mit der Traceruntersuchung wird diejenige Zeitspanne an der
    Vergärungsanlage zur Hygienisierung ermittelt, die alle Substratteile
    (fest und flüssig) als kürzeste Aufenthaltszeit im Fermenter haben.
    Dabei wird das zu vergärende Substrat vor der Zugabe in den Fermenter
    mit Indikatoren (Tracer) markiert. Die Mindestverweilzeit des zu
    vergärenden Materials im Fermenter ist die Zeitspanne, die bis zur
    letzten Probe ohne Befund vor erstmaligem Nachweis des Tracers
    ermittelt wurde.

    Bis zum Vorliegen der Ergebnisse der Traceruntersuchung darf bei der
    Anlage die vom Anlagenhersteller und -planer berechnete
    Mindestverweildauer nicht unterschritten werden. Damit die
    Mindestverweildauer nicht unterschritten wird, darf nach Erreichen des
    Sollfüllstandes in dem für die Hygienisierung relevanten Fermenter die
    vom Anlagenhersteller und -planer ermittelte maximale tägliche
    Inputmenge nicht dauerhaft überschritten werden. Liegt eine
    entsprechende Berechnung nicht vor, ist sie in Abstimmung mit der
    zuständigen Behörde zu erstellen, ggf. unter Hinzuziehung eines
    Sachverständigen.

2.2.3.3 Prozessprüfung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

    Für Vergärungsanlagen zur Hygienisierung ist die Prozessprüfung nach
    den Vorgaben der Nummer 3.1.1 und der Nummer 3.1.3 durchzuführen.

    Bei der Prozessprüfung ist eine im thermophilen Temperaturbereich
    (mindestens 50 °C) erforderliche Behandlungstemperatur zu verwenden.
    Die Prozessprüfung ist mit der technisch vorgegebenen oder
    nachgewiesenen Mindestverweilzeit (s. Nummer 2.2.3.2) durchzuführen.

    Zur Verwendung von Testorganismen (Test- und Indikatorkeime) und zur
    Prüfung ihrer Abtötung oder Inaktivierung sind folgende Methoden
    anzuwenden:

    a)  für die Seuchenhygiene die Methoden gemäß Nummer 4.2.1 (außer Nummer
        4\.2.1.2) sowie

    b)  für die Phytohygiene die Methoden gemäß Nummer 4.3.1.1 (außer
        Testorganismus Tabakmosaikvirus gemäß Buchstabe c), Nummer 4.3.1.2
        (außer Nummer 4.3.1.2.1) und Nummer 4.3.1.3.

    Wird die Prozessprüfung nicht bestanden, ist sie mit einer höheren
    Behandlungstemperatur oder verlängerten Mindestverweilzeit zu
    wiederholen.

2.2.3.4 Prozessüberwachung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

    Die Prozessüberwachung ist nach den Vorgaben der Nummer 3.2
    durchzuführen.

2.2.3.5 Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer
    3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

    Die Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle sind nach den Vorgaben der
    Nummer 3.3 und den Methoden gemäß Nummer 4.2.2 (Seuchenhygiene) und
    Nummer 4.3.2 (Phytohygiene) durchzuführen.

2.2.4 Anderweitige hygienisierende Behandlung

    Für ein anderweitiges hygienisierendes Behandlungsverfahren ist, ggf.
    unter Hinzuziehung eines Sachverständigen, die gleichwertige
    Wirksamkeit der Hygienisierung gemessen an den Anforderungen dieses
    Anhangs nachzuweisen (§ 3 Absatz 3 Satz 4).

2.2.4.1 Anforderungen an die Prozessführung

    Die Anforderungen an die Prozessführung zur hygienisierenden
    Behandlung der Bioabfälle sind in Abstimmung mit der zuständigen
    Behörde, ggf. unter Hinzuziehung eines Sachverständigen, so zu
    bestimmen und zu beschreiben, dass ein gleichwertiges
    Hygienisierungsniveau erreicht wird.

2.2.4.2 Prozessprüfung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5)

    Die Anforderungen an die Prozessprüfung sind in Abstimmung mit der
    zuständigen Behörde, ggf. unter Hinzuziehung eines Sachverständigen,
    so zu bestimmen und zu beschreiben, dass ein gleichwertiges
    Hygienisierungsniveau unter Berücksichtigung der Vorgaben der Nummer
    3\.1.1 sowie der Methoden gemäß Nummer 4.2.1 (Seuchenhygiene) und
    Nummer 4.3.1 (Phytohygiene) erreicht wird.

2.2.4.3 Prozessüberwachung (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

    Die Anforderungen an die Prozessüberwachung sind in Abstimmung mit der
    zuständigen Behörde, ggf. unter Hinzuziehung eines Sachverständigen,
    so zu bestimmen und zu beschreiben, dass ein gleichwertiges
    Hygienisierungsniveau unter Berücksichtigung der Vorgaben der Nummer
    3\.2 erreicht wird.

2.2.4.4 Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer
    3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

    Die Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle sind nach den Vorgaben der
    Nummer 3.3 und den Methoden gemäß Nummer 4.2.2 (Seuchenhygiene) und
    Nummer 4.3.2 (Phytohygiene) durchzuführen.

**3** **Prüfungen der seuchen- und phytohygienischen Unbedenklichkeit**

    Die hygienische Unbedenklichkeit der Bioabfälle wird festgestellt mit
    Hilfe der

    a)  Prozessprüfung gemäß § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1 i. V. m. Absatz 5
        und nach Maßgabe der Beschreibungen in Nummer 3.1,

    b)  Prozessüberwachung gemäß § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 2 i. V. m. Absatz
        6 und nach Maßgabe der Beschreibungen in Nummer 3.2 und

    c)  Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle gemäß § 3 Absatz 4 Satz 1
        Nummer 3 i. V. m. Absatz 7 und 7a und nach Maßgabe der Beschreibungen
        in Nummer 3.3.

    Die seuchen- und phytohygienischen Untersuchungen sind nach
    Möglichkeit gleichzeitig durchzuführen.

    Die behandelten Bioabfälle sind erst dann als hygienisch unbedenklich
    einzustufen, wenn alle Prüfungen gemäß den Nummern 3.1 bis 3.3
    bestanden sind.

**3.1** **Prozessprüfung**                    (zu § 3 Absatz 4 Satz 1 Nummer 1
    i. V. m. Absatz 5)

3.1.1 Allgemeine Anforderungen

    Die Prozessprüfung ist eine Untersuchung der einzelnen
    Behandlungsanlage zur Hygienisierung, die jeweils einmalig bei
    Neuerrichtung der Anlage und bei wesentlicher Änderung des Verfahrens
    durchzuführen ist. Hiermit wird die Wirksamkeit des
    Hygienisierungsverfahrens ermittelt. Dazu werden mit dem Bioabfall
    seuchen- und phytohygienisch relevante Test- oder Indikatororganismen
    in die Anlage eingebracht; anhand von Untersuchungen der behandelten
    Materialien wird dann überprüft, ob durch die Hygienisierung die
    Testorganismen abgetötet oder inaktiviert worden sind.

    Für eine anderweitige hygienisierende Behandlung (Nummer 2.2.4) sind
    die Anforderungen an die Prozessprüfung in Abstimmung mit der
    zuständigen Behörde, ggf. unter Hinzuziehung eines Sachverständigen,
    so zu bestimmen und zu beschreiben, dass ein gleichwertiges
    Hygienisierungsniveau unter Berücksichtigung der Vorgaben dieses
    Abschnitts sowie der Methoden gemäß Nummer 4.2.1 (Seuchenhygiene) und
    Nummer 4.3.1 (Phytohygiene) erreicht wird.

    Für die Prozessprüfung sind die Methoden (Probenahme, -vorbereitung,
    Untersuchungen und einzuhaltende höchstzulässige Grenzwerte) in der
    Seuchenhygiene gemäß Nummer 4.2.1 und in der Phytohygiene gemäß Nummer
    4\.3.1 und nach Maßgabe der nachfolgend für die jeweilige Anlage
    näheren Beschreibungen (s. Nummer 3.1.2 und 3.1.3) anzuwenden (§ 3
    Absatz 4 Satz 2).

    Die Prozessprüfung ist erfolgreich abgeschlossen, wenn die Grenzwerte
    gemäß Nummer 4.2.1.1 (Seuchenhygiene) und Nummer 4.3.1.1
    (Phytohygiene) in den zwei aufeinanderfolgenden Untersuchungsgängen
    jeweils nach dem für die Hygienisierung relevanten Verfahrensschritt
    nicht überschritten werden.

3.1.2 Anlagen zur aeroben hygienisierenden Behandlung (thermophile
    Kompostierungsanlagen)

    Die Prozessprüfung umfasst zwei zeitlich getrennte Untersuchungsgänge
    in einem Mindestabstand von 3 Monaten, wovon einer im Winter
    stattzufinden hat.

    Die Testorganismen werden in charakteristische Rottebereiche oder in
    die für die thermische Inaktivierung der Testorganismen
    repräsentativen Prozessabschnitte eingebracht und nach der Entnahme
    auf überlebende oder infektiöse Testorganismen geprüft.

3.1.2.1 Mietenkompostierung

    Bei jedem Untersuchungsgang werden insgesamt 60 Einzelproben
    untersucht, wovon 24 Proben auf die Prüfung der Seuchenhygiene und 36
    Proben auf die Prüfung der Phytohygiene entfallen. Die Anzahl der
    Einzelproben ergibt sich dabei wie folgt:

    a)  Bei der Prüfung der Seuchenhygiene wird 1 Testorganismus (s. Nummer
        4\.2.1) in Doppelproben in drei verschiedene Rottezonen (Rand-, Kern-
        und Basis-Bereich) sowie an vier verschiedenen Stellen der Miete
        eingebracht.

    b)  Bei der Prüfung der Phytohygiene werden 3 Testorganismen (s. Nummer
        4\.3.1) als Einzelproben in drei verschiedene Rottezonen (Rand-, Kern-
        und Basis-Bereich) sowie an vier verschiedenen Stellen der Miete
        eingebracht.

    Die Proben am Rand dürfen mit ca. 10 cm Rottegut überdeckt werden. Die
    Proben bleiben bis zum Ende der Prüfung in den jeweiligen Bereichen.

    Für kleine Anlagen mit einer jährlichen Kapazität von bis zu 3 000
    Tonnen Einsatzmaterialien ist nur ein reduzierter Untersuchungsumfang
    mit einer Halbierung der zu untersuchenden Einzelproben erforderlich.
    Dabei werden die Testorganismen nur an zwei verschiedenen Stellen der
    Miete eingebracht.

3.1.2.2 Andere Kompostierungsverfahren

    Bei jedem Untersuchungsgang werden insgesamt 60 Einzelproben
    untersucht, wovon 24 Proben auf die Prüfung der Seuchenhygiene (1
    Testorganismus, s. Nummer 4.2.1) und 36 Proben auf die Prüfung der
    Phytohygiene (3 Testorganismen, s. Nummer 4.3.1) entfallen. Die
    Testorganismen werden in charakteristische Bereiche des Rottekörpers
    eingelegt oder bei dynamischen Verfahren in geeigneten Probebehältern
    mit dem Materialstrom durch den praxisüblichen Rotte- und
    Verfahrensprozess geschleust. Die eingesetzten Probenbehälter müssen
    eine ausreichende Perforation aufweisen, so dass die
    Stoffumsetzungsbedingungen innerhalb der Probenbehälter denen des zu
    prüfenden Kompostierungsprozesses zur Hygienisierung entsprechen.

    Bei dynamischen Verfahren ist darauf zu achten, dass alle
    Prüforganismen während des gesamten Einbringvorgangs zeitlich
    möglichst gleichmäßig zugegeben werden, so dass sie sich möglichst
    homogen im Rotteaggregat verteilen. Zusätzlich muss die Form der
    verwendeten Probenbehälter sicherstellen, dass sie bezüglich des
    Verhaltens im Materialstrom und der Verweilzeit dem zu kompostierenden
    Material entsprechen.

    Sofern die spezifische Anlagentechnik die Größe der Probenbehälter
    nicht begrenzt (z. B. freie Durchgänge bei Schnecken usw.), werden
    insgesamt 12 Probenbehälter in das Rotteaggregat eingebracht
    (durchgeschleust); jeder Probenbehälter enthält

    a)  einen Testorganismus in Doppelproben zur Prüfung der Seuchenhygiene
        (s. Nummer 4.2.1) und

    b)  drei Testorganismen als Einzelproben zur Prüfung der Phytohygiene (s.
        Nummer 4.3.1).

    Ist die Einbringung (Durchschleusung) entsprechend großer
    Probenbehälter nicht möglich, müssen die Einzelproben auf eine
    entsprechend größere Anzahl kleinerer Probenbehälter verteilt werden.

    Für kleine Anlagen mit einer jährlichen Kapazität von bis zu 3 000
    Tonnen Einsatzmaterialien ist nur ein reduzierter Untersuchungsumfang
    mit einer Halbierung der zu untersuchenden Einzelproben erforderlich.
    Dabei werden statt der 12 nur 6 Probenbehälter eingebracht und
    durchgeschleust.

3.1.3 Anlagen zur anaeroben hygienisierenden Behandlung (thermophile
    Vergärungsanlagen)

    Die Prozessprüfung umfasst zwei zeitlich getrennte Untersuchungsgänge
    in einem Mindestabstand von 3 Monaten.

    Bei jedem Untersuchungsgang werden insgesamt 24 Einzelproben
    untersucht, wovon 8 Proben auf die Prüfung der Seuchenhygiene und 16
    Proben auf die Prüfung der Phytohygiene entfallen. Die Anzahl der
    Einzelproben ergibt sich dabei wie folgt:

    a)  Bei der Prüfung der Seuchenhygiene wird 1 Testorganismus (s. Nummer
        4\.2.1) in Doppelproben sowie an vier verschiedenen Stellen im
        Fermenter (bei stehenden Fermentern in vertikaler und bei liegenden
        Fermentern in horizontaler Richtung) eingebracht.

    b)  Bei der Prüfung der Phytohygiene werden 2 Testorganismen (s. Nummer
        4\.3.1 mit Ausnahme des Tabakmosaikvirus) in Doppelproben sowie an vier
        verschiedenen Stellen im Fermenter (bei stehenden Fermentern in
        vertikaler und bei liegenden Fermentern in horizontaler Richtung)
        eingebracht.

    Für kleine Anlagen mit einer jährlichen Kapazität von bis zu 3 000
    Tonnen Einsatzmaterialien ist nur ein reduzierter Untersuchungsumfang
    mit einer Halbierung der zu untersuchenden Einzelproben erforderlich.
    Dabei werden die Testorganismen nur an zwei verschiedenen Stellen im
    Fermenter eingebracht.

    Die Testorganismen werden für die technisch vorgegebene oder
    nachgewiesene Mindestverweilzeit (s. Nummer 2.2.3.2) in den Fermenter
    eingebracht und nach Entnahme untersucht.

    Für die Durchführung der Prozessprüfung müssen für die Einlage und
    Entnahme von Proben geeignete Öffnungen in den Gärbehältern vorhanden
    sein.

**3.2** **Prozessüberwachung**                    (zu § 3 Absatz 4 Satz 1
    Nummer 2 i. V. m. Absatz 6)

    Die Prozessüberwachung ist eine kontinuierliche Prüfung und
    Aufzeichnung der Temperatur während der Behandlung zur Hygienisierung.
    Hiermit wird nachgewiesen, ob während der Behandlung die für die
    Hygienisierung erforderliche Temperatur und die notwendige
    Einwirkungsdauer eingehalten wird.

    Für eine anderweitige hygienisierende Behandlung (Nummer 2.2.4) sind
    die Anforderungen an die Prozessüberwachung in Abstimmung mit der
    zuständigen Behörde, ggf. unter Hinzuziehung eines Sachverständigen,
    so zu bestimmen und zu beschreiben, dass ein gleichwertiges
    Hygienisierungsniveau unter Berücksichtigung der Vorgaben dieses
    Abschnitts erreicht wird.

    Wird in einer geschlossenen Kompostierungsanlage zur Hygienisierung
    die Temperatur im Abluftstrom der Kompostmiete gemessen und
    aufgezeichnet (§ 3 Absatz 6 Satz 3), ist die Behandlungstemperatur
    über einen anlagenspezifischen Korrekturfaktor gegenüber der direkten
    Temperaturmessung im Rottegut zu ermitteln. Der anlagenspezifische
    Korrekturfaktor ist regelmäßig durch parallele direkte
    Temperaturmessungen im Rottegut zu überprüfen. Für die
    Temperaturmessung im Abluftstrom sind die Anforderungen in Abstimmung
    mit der zuständigen Behörde, ggf. unter Hinzuziehung eines
    Sachverständigen, festzulegen.

    Die Temperaturmessungen sind in repräsentativen Zonen der für die
    Hygienisierung relevanten Prozessabschnitte oder Anlageteile
    vorzunehmen.

    Die Prozessüberwachung ist erfolgreich durchlaufen, wenn die für das
    jeweilige Verfahren vorgegebene Temperatur und Einwirkungsdauer (vgl.
    Nummer 2.2.1.1, 2.2.2.1, 2.2.3.1 und 2.2.4.1) bei der hygienisierenden
    Behandlung des Materials eingehalten wurden.

**3.3** **Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle**                    (zu § 3
    Absatz 4 Satz 1 Nummer 3 i. V. m. Absatz 7 und 7a)

    Die Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle sind regelmäßige
    Untersuchungen der Materialien nach der Behandlung zur Hygienisierung
    auf Krankheitserreger, keimfähige Samen und austriebsfähige
    Pflanzenteile.

    Die Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle erfolgen nach der
    Hygienisierungsbehandlung (s. Nummer 2) am abgabefertigen Material.
    Bei jeder Prüfung der hygienisierten Bioabfälle ist jeweils eine Probe
    in der Seuchenhygiene und in der Phytohygiene zu untersuchen.

    Für die Prüfungen sind die Methoden (Probenahme, -vorbereitung,
    Untersuchungen und einzuhaltende höchstzulässige Grenzwerte) in der
    Seuchenhygiene gemäß Nummer 4.2.2 und in der Phytohygiene gemäß Nummer
    4\.3.2 anzuwenden (§ 3 Absatz 4 Satz 2).

    Die Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle sind erfolgreich
    abgeschlossen, wenn die Grenzwerte gemäß Nummer 4.2.2 letzter Absatz
    (Seuchenhygiene) und Nummer 4.3.2 letzter Absatz (Phytohygiene) in
    keiner der entnommenen Proben überschritten werden.

**4** **Methoden zur Prüfung der seuchen- und phytohygienischen
    Unbedenklichkeit**

**4.1** **Traceruntersuchungen zur Ermittlung der Mindestverweilzeit bei
    anaeroben hygienisierenden Behandlungsverfahren (thermophile
    Vergärung)**

    Um die hygienisierende Wirkungsweise von anaeroben
    Behandlungsverfahren beurteilen zu können, ist die Kenntnis der
    Mindestverweilzeit der Abfallsuspension im Fermenter von Bedeutung.
    Muss die Mindestverweilzeit ermittelt werden, ist hierfür eine
    Traceruntersuchung durchzuführen (s. Nummer 2.2.3.2). Bei der
    Traceruntersuchung wird die Abfallsuspension vor dem Eintritt in den
    Fermenter mit Indikatoren (Tracern) markiert und deren erstmaliges
    Auftreten am Auslauf erfasst.

    Für die Traceruntersuchung in anaeroben Behandlungsanlagen zur
    Hygienisierung biologisch abbaubarer Abfälle sind biologische Tracer
    mit den Sporen von
    Bacillus globigii                    (s. Nummer 4.1.1) oder chemische
    Tracer mit Lithium (s. Nummer 4.1.2) geeignet.

4.1.1 Traceruntersuchung mit Sporen von
    Bacillus globigii

    Als biologischer Tracer werden die Sporen von
    Bacillus globigii                    verwendet. Sporen dieses
    Testbakteriums kommen natürlicherweise nicht in den biologischen
    Substraten vor, sie sind apathogen für Mensch und Tier, überstehen die
    Prozesseinwirkungen in anaeroben Behandlungsanlagen und sind
    problemlos nachweisbar.

4.1.1.1 Vorbereitung

    **Benötigte Materialien und Reagenzien**

    –   Trypton-Glucose-Bouillon (TGB),
        zur Herstellung der Impfkultur von
        Bacillus globigii                         -Sporen:
        Hefeextrakt: 2,5 g,
        Trypton: 5,0 g,
        Glucose: 1,0 g,
        Wasser (destilliert): 1 000 ml;

    –   Hefeextrakt-Agar (MYA),
        zur Herstellung von
        Bacillus globigii                         -Sporen:
        Pepton aus Fleisch: 10,0 g,
        Hefeextrakt: 2,0 g,
        Mangansulfat-Monohydrat: 0,04 g,
        Agar: 15 g,
        Wasser (destilliert): 1 000 ml;

    –   Bacillus globigii                          Stammkultur,
        zur Herstellung der
        Bacillus globigii                          Stammkulturen-
        Sporensuspension:
[^f776421_09_BJNR295500998BJNE001802116]
        Bacillus globigii                          (DSM
        No. 675 [
        Bac. Atrophaeus                         ]) oder
        Bacillus globigii                          (DSM
        1                         ) No. 2277 [
        Bac. Atrophaeus                         ]) oder
[^f776421_10_BJNR295500998BJNE001802116]
        Bacillus globigii                          (Stammsammlung der
        Universität Hohenheim
        );

    –   Zentrifuge mit einer Beschleunigung von 10 000 g.

    **Probenherstellung**

    Trypton-Glucose-Bouillon (TGB):

    Die Bouillon wird in Portionen von je 10 oder 100 ml in Prüfröhrchen
    gegeben. Es wird im Autoklaven sterilisiert. Nach der Sterilisation
    muss der pH-Wert des Mediums 7,2 (*                    0,2), gemessen
    bei 20 °C, betragen.

    Hefeextrakt-Agar (MYA):

    Der Agar wird in Roux-Flaschen oder Petrischalen gegeben. Es wird im
    Autoklaven sterilisiert. Nach der Sterilisation muss der pH-Wert des
    Mediums 7,0 (*                    0,2), gemessen bei 20 °C, betragen.

    Bacillus globigii                    Stammkulturen:

    Die
    Bacillus globigii                   -Stammkulturen (Glycerinkultur,
    Lagerungstemperatur –80 °C) werden aufgetaut und in Trypton-Glucose-
    Bouillon (TGB) bei 37 °C über 24 Stunden bebrütet.

    Aus der TGB-Bouillon werden 6 ml auf MYA-Platten übertragen; der
    Überstand wird abpipettiert. Die MYA-Platten werden bei 37 (*
    1) °C bebrütet. Nach dem dritten Bebrütungstag wird der Zustand der
    Kulturen mit Hilfe einer Sporenfärbung (z. B. Racket-Färbung)
    beurteilt. Anschließend erfolgt eine weitere Inkubation der MYA-
    Platten bei 30 °C über 7 bis 10 Tage. Danach werden die Kolonien von
    den MYA-Platten mit 3 ml sterilem destillierten Wasser (aqua dest.)
    abgeschwemmt.

    Die gewonnene Sporensuspension wird zentrifugiert (3 000
    Umdrehungen/min über 10 Minuten), der Überstand wird verworfen und das
    Pellet wird mit aqua dest. resuspendiert.

    Zur Ermittlung der Anzahl der Sporen wird die Suspension zuerst bei 75
    (*                    1) °C über 10 Minuten erhitzt, anschließend wird
    mit dem Koch´schen Oberflächenverfahren die Sporenzahl pro Milliliter
    Suspension festgestellt.

4.1.1.2 Durchführung der Untersuchung

    Der biologische Tracer wird einmalig in Form einer Sporensuspension
    gleichmäßig während eines Beschickungsintervalls dem Fermenter
    zugegeben. Es wird einer Beschickungscharge soviel Sporensuspension
    beigemischt, dass pro Gramm Fermenterinhalt mindestens 10
    6                    Sporen vorhanden sind.

    Die Konzentration der
    Bacillus globigii                   -Sporen in der Suspension ist zu
    kontrollieren.

    Nach der Zuführung der Sporensuspension erfolgt die Probennahme
    (Einzelprobe von ca. 1 kg) im Austrag so lange, bis der Tracer
    erstmals in einer Probe nachgewiesen wird, und zwar mindestens

    a)  jede Stunde bis einschließlich der 24. Stunde,

    b)  darauf folgend alle zwei Stunden bis einschließlich der 36. Stunde,

    c)  darauf folgend alle 4 Stunden bis einschließlich der 48. Stunde,

    d)  darauf folgend alle 6 Stunden.

4.1.1.3 Nachweismethode

    Aus den zu untersuchenden Proben werden zur Vorverdünnung 20 g in 180
    ml Natriumchlorid (0,9 %-ige Kochsalzlösung) eingewogen und ca. 20
    Stunden bei 4 °C auf dem Schüttler durchmischt. Nach einer
    ausreichenden Durchmischung wird je 1 ml der Probe in geometrischer
    Reihe bis zur Verdünnungsstufe 10
    -8                    in jeweils 9 ml NaCl-Lösung pipettiert.
    Anschließend werden jeweils 0,1 ml jeder Verdünnungsstufe auf zwei
    parallele Standard-I-Agarplatten pipettiert und mit einem ausgeglühten
    Drahtspatel gleichmäßig verteilt (Inkubation 37 °C/24 Stunden).

    Ausgezählt werden auf den Nährbodenplatten nur jene Kolonien, die ein
    typisches orange-rotes Wachstum zeigen.

4.1.1.4 Mindestverweilzeit

    Die Mindestverweilzeit ergibt sich aus dem Zeitraum zwischen der
    Zugabe der
    Bacillus globigii                   -Sporensuspension und der letzten
    Probe ohne Befund vor dem erstmaligen Nachweis des biologischen
    Tracers im Austrag des Fermenters.

4.1.2 Traceruntersuchung mit Lithium

4.1.2.1 Vorbereitung

    **Bestimmung der Lithium-Grundbelastung in der Abfallsuspension**

    Zunächst ist die natürliche Lithium-Grundbelastung in der
    Abfallsuspension zu bestimmen. Hierzu wird vor Prüfungsbeginn
    mindestens 5 Tage lang täglich eine repräsentative Probe am Austrag
    des Fermenters entnommen und der Lithiumgehalt bestimmt. Je nach
    Bioabfallzusammensetzung beträgt die Grundbelastung an Lithium in der
    Regel zwischen 1 und 5 mg je kg Trockenmasse.

    **Benötigte Materialien**

    Tracer:
    Lithiumhydroxid-Monohydrat

4.1.2.2 Durchführung der Untersuchung

    Für die Untersuchung ist die Lithiumkonzentration von 50 mg/kg
    Trockenmasse bezogen auf den gesamten Fermenterinhalt (vollständige
    Durchmischung) einzustellen. Die erforderliche Lithiummenge ist
    abhängig vom Fermenternutzvolumen der zu überprüfenden
    Vergärungsanlage zur Hygienisierung. Der Tracer wird in gelöster Form
    während eines Beschickungsintervalls gleichmäßig dem Fermenter
    zugegeben.

    Von dieser Lithiumsuspension ist eine Rückstellprobe bis zum Vorliegen
    der Ergebnisse aufzubewahren.

    Nach der Zuführung des Tracers erfolgt die Probennahme (Einzelprobe
    von ca. 1 kg) im Austrag so lange, bis der Tracer erstmals in einer
    Probe nachgewiesen wird (Lithiumkonzentration*
    Grundbelastung), und zwar mindestens

    a)  jede Stunde bis einschließlich der 24. Stunde,

    b)  darauf folgend alle 2 Stunden bis einschließlich der 36. Stunde,

    c)  darauf folgend alle 4 Stunden bis einschließlich der 48. Stunde,

    d)  darauf folgend alle 6 Stunden.

4.1.2.3 Nachweismethode

[^f776421_11_BJNR295500998BJNE001802116]
    Zur Ermittlung der Lithiumkonzentration werden die Proben nach DIN EN
    ISO 11885:2009
    analysiert.

4.1.2.4 Mindestverweilzeit

    Die Mindestverweilzeit ergibt sich aus dem Zeitraum zwischen der
    Zugabe des Lithiumtracers und der letzten Probe ohne
    Konzentrationserhöhung vor dem erstmaligen Nachweis des Tracers im
    Austrag des Fermenters. Der Tracer ist nachgewiesen, wenn die
    festgestellte Konzentration von Lithium die ermittelte Grundbelastung
    um die doppelte Standardabweichung übersteigt, die bei den gemäß
    Nummer 4.1.2.1 entnommenen Proben ermittelt wird.

**4.2** **Prüfungen der Seuchenhygiene**

4.2.1 Prozessprüfung

4.2.1.1 Testorganismus und Grenzwert

    Die Prozessprüfung in der Seuchenhygiene wird mit dem Testkeim
    Salmonella senftenberg W
    775                     (H
    2                     S-negativ)                    durchgeführt.

    Die Prozessprüfung ist in der Seuchenhygiene erfolgreich
    abgeschlossen, wenn in den zwei aufeinanderfolgenden
    Untersuchungsgängen jeweils nach dem für die Hygienisierung relevanten
    Verfahrensschritt in keiner Probe Salmonellen nachweisbar sind.

4.2.1.2 Einlageproben für aerobe hygienisierende Verfahren (thermophile
    Kompostierung)

    Der Testkeim
    Salmonella senftenberg W
    775                      (H
    2                     S-negativ)                    wird in Standard-
    I-Bouillon bei 37 °C über 18 bis 24 Stunden inkubiert. Die so erzeugte
    Keimsuspension soll eine Mikroorganismenkonzentration von mindestens
    10
    7                    bis 10
    8                    KBE/ml enthalten. Die Konzentration ist durch
    Vergleich mit einem Standard (z. B. McFarland) oder dem
    Oberflächenverfahren oder MPN-Verfahren (Most Probable Number) zu
    bestimmen.

    Bei der Kompostierung zur Hygienisierung wird pro Probe ca. 225 g
    frisches, homogenisiertes und zerkleinertes Bioabfallmaterial aus der
    zu überprüfenden Anlage mit 25 ml dieser Keimsuspension getränkt und
    anschließend in sterile Zwiebel- oder Kunststoffsäckchen verpackt. Die
    Einlage der Proben in das Kompostiergut erfolgt entweder in dieser
    Form oder in grob perforierten stabilen Probenbehältern, die für den
    jeweiligen Prozess geeignet sind. Nachdem der für die Hygienisierung
    relevante Verfahrensabschnitt durchlaufen ist, werden die
    Probenbehälter wieder entnommen und jeweils 50 g des homogenisierten
    Inhalts eines Probensäckchens in 450 ml gepuffertem Peptonwasser mit
    Novobiocin über 30 Minuten bei 4 °C langsam ausgeschüttelt (150 rpm)
    und anschließend über 22 (*                    2) Stunden bei 36 (*
    2) °C inkubiert. Die so erhaltene Suspensionslösung wird für die
    Identifizierung von Salmonellen benutzt.

4.2.1.3 Einlageproben für anaerobe hygienisierende Verfahren (thermophile
    Vergärung)

    Die Keimsuspension mit dem Testkeim
    Salmonella senftenberg W
    775                      (H
    2                     S-negativ)                    wird hergestellt
    wie in Nummer 4.2.1.2 Absatz 1 beschrieben.

    In Vergärungsanlagen zur Hygienisierung wird jeweils 1 ml der
    Keimsuspension von
    Salmonella senftenberg W
    775                      (H
[^f776421_12_BJNR295500998BJNE001802116]
    2                     S-negativ)                    mit
    Diffusionskeimträgern
    in den Prozess eingeschleust. Die Diffusionskeimträger werden außer
    mit 1 ml der Keimsuspension auch mit 9 ml Gärrückstand angefüllt und
    in die für die thermische Inaktivierung relevanten Prozessabschnitte
    oder Anlageteile jeweils für die ermittelte Mindestverweilzeit (s.
    Nummer 4.1) und Hygienisierungstemperatur eingebracht. Nachdem das
    Verfahren durchlaufen ist, wird der jeweilige Gesamtinhalt der
    Diffusionskeimträger (10 ml) in 90 ml gepuffertes Peptonwasser mit
    Novobiocin (Voranreicherung) gegeben, kurz geschüttelt (150 rpm) und
    über 22 (*                    2) Stunden bei 36 (*
    2) °C inkubiert. Die so erhaltene Suspensionslösung wird für die
    Identifizierung von Salmonellen benutzt.

4.2.1.4 Nachweismethode

    Vorhandene Salmonellen werden mit den Suspensionslösungen
    identifiziert, die nach den oben beschriebenen Methoden hergestellt
    worden sind (s. Nummer 4.2.1.2 und 4.2.1.3). Hierzu werden jeweils 0,1
    ml aus der gut durchmischten Voranreicherung in 10 ml
    Anreicherungsbouillon nach Rappaport bei 36 (*                    2)
    °C und bei 42 (*                    1) °C über 22 (*
    2) Stunden inkubiert. Anschließend werden Parallelausstriche auf
    Xylose-Lysin-Desoxycholat-Agar (XLD) und einem weiteren Salmonella-
    Differenzial-Nährboden mit der Nachweismöglichkeit anderer
    biochemischer Eigenschaften als XLD-Agar angelegt.
    Salmonellenverdächtige Kolonien werden auf Nutrient-Agar überimpft und
    bei 36 (*                    2) °C für 22 (*                    2)
    Stunden inkubiert. Die Identifizierung erfolgt biochemisch oder
    serologisch auf Grund der Körper- und Geißelantigene (O- und
    H-Antigene).

    Zur Kontrolle der Überlebensfähigkeit (Tenazität) des Teststammes
    werden parallel zur Prozessprüfung vier Kontrollproben hergestellt.
    Diese Kontrollproben werden nicht in das Hygienisierungsverfahren
    eingebracht, sondern während des Prüfungszeitraums in feuchtem Sand
    (z. B. Eimer mit Quarzsand, Befeuchtung mit deionisiertem Wasser) bei
    Raumtemperatur (20 bis 25 °C) gelagert und nach Abbruch der
    Prozessprüfung aufgearbeitet. Mindestens drei der vier Kontrollproben
    sollen positive Salmonellenbefunde liefern; anderenfalls ist die
    Tenazität des Teststammes nicht als ausreichend anzusehen.

4.2.2 Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle

    Für die Prüfung der hygienisierten Bioabfälle in der Seuchenhygiene
    werden aus einer gut durchmischten Sammelprobe (ca. 3 kg) jeweils 50 g
    Material nach der oben angegebenen Methode (s. Nummer 4.2.1.2) auf das
    Vorhandensein von Salmonellen untersucht. Die Sammelmischprobe setzt
    sich aus mindestens fünf verschiedenen Teilproben einer Charge des
    hygienisierend behandelten, gemäß Nummer 3.3 zu untersuchenden
    Materials zusammen.

    Die Prüfung der hygienisierten Bioabfälle ist in der Seuchenhygiene
    erfolgreich abgeschlossen, wenn in jeweils 50 g der entnommenen
    Sammelproben keine Salmonellen nachweisbar sind.

**4.3** **Prüfungen der Phytohygiene**

4.3.1 Prozessprüfung

4.3.1.1 Testorganismen und Grenzwerte

    Aus der Vielzahl von Phytopathogenen und Pflanzensamen, die im
    Ausgangsmaterial von Bioabfallbehandlungsanlagen vorkommen, werden
    folgende Leit- oder Indikatororganismen in Prozessprüfungen in der
    Phytohygiene verwendet:

    a)  Plasmodiophora brassicae                          (Kohlhernie) mit
        einer einwöchigen Wärmetoleranz von 50 °C,
        Grenzwert im Biotest: Befallsindex*                          0,5 je
        Prüfbereich,

    b)  Tomatensamen,
        Grenzwert im Biotest:*                          2 % keimfähige Samen
        je Prüfbereich,

    c)  zusätzlich bei aerober hygienisierender Behandlung (thermophile
        Kompostierung) gemäß Nummer 2.2.2:
        Tabakmosaikvirus (TMV),
        Grenzwert im Biotest:*                          4 % Restinfektiosität
        (Relativwert zur Positivkontrolle) je Prüfbereich.

    Die Prozessprüfung ist in der Phytohygiene erfolgreich abgeschlossen,
    wenn in den zwei aufeinanderfolgenden Untersuchungsgängen jeweils nach
    dem für die Hygienisierung relevanten Verfahrensschritt in den Proben
    je Prüfbereich die angegebenen Grenzwerte

    –   bei den Parametern
        Plasmodiophora brassicae                          und Tomatensamen
        nicht überschritten sowie

    –   bei dem Parameter Tabakmosaikvirus um nicht mehr als maximal 30 %
        überschritten werden.

4.3.1.2 Testorganismus Plasmodiophora brassicae

    Die Prozessprüfung in der Phytohygiene mit dem Testorganismus
    Plasmodiophora brassicae                    wird nach folgender
    beschriebener Methodik durchgeführt.

4.3.1.2.1 Herstellung der Einlageproben für aerobe hygienisierende
    Behandlungsverfahren (thermophile Kompostierung)

    Das Gallenmaterial (Infektionsmaterial mit dem Erreger
    Plasmodiophora brassicae                   ) wird bis zur Herstellung
    der Einlageproben bei –25 °C tiefgefroren. Es ist nachweislich
    infektiöses, wärmetolerantes Gallenmaterial mit dem Erreger
    Plasmodiophora brassicae                    von befallenen
    Kohlpflanzen zu verwenden. Die Wärmetoleranz ist nachgewiesen, wenn
    das Gallenmaterial bei Bebrütung von 50 °C über 7 Tage eine hohe
    Infektiosität (Befallsgrad*                    2) aufweist.

    Jede in den Kompostierungsprozess zur Hygienisierung eingesetzte Probe
    enthält 30 g Gallenmaterial, 430 g Boden und 200 g des jeweiligen
    Kompostrohmaterials. Dies entspricht einem Verhältnis von ca. 5 %
    Gallenmaterial zu 65 % Boden und 30 % Kompost. Die einzelnen
    Probenanteile werden intensiv gemischt und in rottebeständige Beutel
    (Maschenweite max. 1 x 1 mm) eingefüllt; dabei ist sicherzustellen,
    dass nichts von der Probe in den umgebenden Kompost ausgetragen wird.

    Entsprechend hergestellte Kontrollproben werden während des
    Versuchszeitraums in feuchtem, sterilisiertem Sand bei
    Zimmertemperatur gelagert.

4.3.1.2.2 Herstellung der Einlageproben für anaerobe hygienisierende
    Behandlungsverfahren (thermophile Vergärung)

    Für das zu verwendende Gallenmaterial (Infektionsmaterial mit dem
    Erreger
    Plasmodiophora brassicae                   ) gilt Nummer 4.3.1.2.1
    Absatz 1 entsprechend.

    Bei Vergärungsanlagen zur Hygienisierung werden 30 g Gallenmaterial in
    Gazebeutel (Maschenweite max. 1 x 1 mm) in die für die thermische
    Inaktivierung relevanten Prozessabschnitte oder Anlageteile
    eingebracht.

    Entsprechend hergestellte Kontrollproben werden während des
    Versuchszeitraums in feuchtem, sterilisiertem Sand bei
    Zimmertemperatur gelagert.

4.3.1.2.3 Nachweis der Infektiosität durch einen Biotest

    Eine vorhandene Restinfektion von
    Plasmodiophora brassicae                    in den Einlageproben wird
    durch die nachfolgend beschriebene Prüfung festgestellt.

    **Benötigte Materialien**

    –   Mischwanne,

    –   Messbecher (1 000 ml),

    –   Kunststofftöpfe (13 x 13 x 13 cm, ca. 1 l), passende Untersetzer,

    –   zertifiziertes Saatgut von Sarepta-Senf (
        Brassica juncea                         ),

    –   Substratdämpfer,

    –   Sand, Körnung 0,8 – 1,2 mm (z. B. Buntsandstein mit guter
        Pufferkapazität, pH-Wert ca. 6,5),

    –   Weißtorf (pH-Wert ca. 3,5),

    –   pH-Meter,

    –   Einmalhandschuhe (für jede Probe ein Paar),

    –   wasserlöslicher Volldünger (fest oder flüssig).

    **Probenaufbereitung**

    Nach Rückgewinnung aus dem geprüften Hygienisierungsverfahren werden
    die Einlageproben mit dem Erreger
    Plasmodiophora brassicae                    sorgfältig zerkleinert und
    mit einem Sand-Torfgemisch (5 Stunden bei 80 °C gedämpft) auf ein
    Volumen von 1 000 ml aufgefüllt und gut homogenisiert.

    Da der pH-Wert einen starken Einfluss auf die Infektiosität von
    Plasmodiophora brassicae                    ausübt (Optimum: pH-Wert
    6,0*                    0,2), ist der pH-Wert der hergestellten
    Substratmischung zu überprüfen und gegebenenfalls durch Erhöhung des
    Torfanteils zu korrigieren.

    **Biotest**

    Als Versuchsgefäße werden 13 x 13 x 13 cm große Kunststofftöpfe
    verwendet. Für jede reisolierte Erregerprobe, die mit dem Sand-Torf-
    Gemisch auf je 1 000 ml aufgefüllt wurde, wird ein Gefäß mit 16
    Nachweispflanzen Sarepta-Senf (
    Brassica juncea                   ) angelegt; dabei werden in jedes
    Gefäß vorgezogene Keimpflanzen (1. Laubblattbildung) einpikiert. Der
    Biotest wird als randomisierter Versuch im Gewächshaus oder in einer
    Klimakammer bei 6 000 bis 9 000 Lux und einer Temperatur von
    mindestens 20 °C aufgestellt. Die Pflanzen werden ab der dritten Woche
    wöchentlich einmal gedüngt. Die Vegetationszeit des Biotests bis zur
    Bonitur der Nachweispflanzen beträgt 4 bis 5 Wochen.

    Nach Beendigung des Biotests wird zum einen die Anzahl der befallenen
    Pflanzen gezählt und zum anderen die Wurzelgallenbildung nach einer
    Boniturskala von 0 bis 3 bewertet:

    *        *   Befallsklasse

        *   Beschreibung der Symptome

    *        *   0

        *   Keine sichtbaren Symptome

    *        *   1

        *   Leichte Gallenbildung an Haupt- und Nebenwurzeln

    *        *   2

        *   Mittlere Gallenbildung an Haupt- und Nebenwurzeln

    *        *   3

        *   Starke Gallenbildung am gesamten Wurzelsystem

    **Bewertung der Boniturnoten**

    Für jede einzelne Erregerprobe (Wiederholung) werden die Boniturnoten
    für den Befall der Einzelpflanzen (Befallsklasse = Kl) nach folgender
    Formel im Befallsindex zusammengefasst:

    *        *            ![bgbl1_2012_j0611_0010.jpg](bgbl1_2012_j0611_0010.jpg)

   Der Befallsindex für einen Prüfbereich ergibt sich aus dem
    arithmetischen Mittel des Befallsindex aller Wiederholungen
    (Erregerproben) des jeweiligen Prüfbereichs:

    *        *            ![bgbl1_2012_j0611_0020.jpg](bgbl1_2012_j0611_0020.jpg)

   Ist der Befallsindex je Prüfbereich*                    0,5, so ist
    die Prüfung bestanden.

4.3.1.3 Testorganismus Tomatensamen

    Die Prozessprüfung in der Phytohygiene mit dem Testorganismus
    Tomatensamen wird nach folgender beschriebener Methodik durchgeführt.

    Für die Herstellung der Einlageprobe und die Bestimmung der Keimrate
    durch einen Biotest werden folgende Materialien benötigt:

    –   Kunststoff-Petrischalen mit Deckel (*                          9 cm),

    –   Rundfilterpapier,

    –   Tomatensaatgut (
        Lycopersicon lycopersicum [L.] Karsten ex Farw.
        ), Sorte Saint-Pierre (Synonym: San Pedro).

4.3.1.3.1 Herstellung der Einlageprobe

    Etwa 1 g oder 400 Tomatensamen (
    Lycopersicon lycopersicum [L.] Karsten ex Farw.                   )
    der Sorte Saint-Pierre (Synonym: San Pedro) werden in einen kleinen
    Beutel aus unverrottbarem Gazestoff (Maschenweite 1 x 1 mm) gefüllt
    und vor dem Verschließen auf der gesamten Gazefläche verteilt, um eine
    möglichst geringe Schichtdicke der Tomatensamen zu erreichen. Die
    Keimfähigkeit der Tomatensamen muss vor den Untersuchungen bestimmt
    werden. Zur Prüfung darf nur Saatgut mit einer Mindestkeimfähigkeit
    von 90 % verwendet werden.

4.3.1.3.2 Bestimmung der Keimrate durch einen Biotest

    Nach Beendigung der Untersuchung wird der Testorganismus aus den
    Einlageproben entnommen und umgehend einer Keimfähigkeitsprüfung
    unterzogen.

    **Biotest**

[^f776421_15_BJNR295500998BJNE001802116]
    Die Tomatensamen werden aus der Einlageprobe entnommen und 200 Samen
    werden abgezählt. Die restlichen Samen werden 1 bis 2 Tage unter
    Wohnraumbedingungen (20 bis 50 % rel. Luftfeuchte, etwa 20 °C)
    zurückgetrocknet, luftdicht verschlossen und für etwaige
    Wiederholungen der Keimfähigkeitsbestimmung im Kühlschrank aufbewahrt
    (Rückhalteprobe). Die abgezählten Samen werden in sauberem Zustand,
    falls erforderlich abgewaschen, zur Keimfähigkeitsbestimmung
    ausgelegt, z. B. 4 x 50 Samen auf 4 Lagen angefeuchtetem Filterpapier
    in abgedeckten Petrischalen mit 9 cm Durchmesser bei 25 °C und
    Belichtung in einem geeigneten Raum oder Klimaschrank.

    Alle sieben Tage werden die gekeimten Tomatensamen so lange
    ausgezählt, bis keine weiteren Samen keimen. Als gekeimt gilt der
    Samen, bei dem die Wurzel oder der Spross sichtbar ausgetreten ist.
    Sind nach 21 Tagen keine Samen gekeimt, wird die Keimfähigkeitsprüfung
    abgeschlossen.

    **Bewertung der Ergebnisse**

    Die Gesamtzahl gekeimter Samen wird festgestellt und als Prozentsatz
    der verwendeten Samen in der geprüften Aliquote (200 Samen) angegeben.
    Die Keimfähigkeit der Tomatensamen für einen Prüfbereich ergibt sich
    aus dem arithmetischen Mittel der Keimfähigkeitsraten aller
    Wiederholungen (Erregerproben) des Prüfbereichs.

4.3.1.4 Testorganismus Tabakmosaikvirus bei aeroben hygienisierenden
    Behandlungsverfahren (thermophile Kompostierung)

    Die Prozessprüfung in der Phytohygiene mit dem Testorganismus
    Tabakmosaikvirus wird nach folgender dargestellter Methode
    durchgeführt.

    Für die Herstellung der Einlageproben und den Nachweis durch einen
    Biotest werden folgende Materialien und Reagenzien benötigt:

    –   Kunststofftöpfe mit einem Volumen von 500 ml mit Bodenlochung und
        Unterschalen,

    –   wasserlösliche Mehrnährstoffdünger,

    –   Tabaksaatgut (
        Nicotiana tabacum „Samsun“                         ),

    –   Tabaksaatgut (
        Nicotiana glutinosa L.                         ),

    –   Einheitserde 0 (EE0) als Pflanzsubstrat,

    –   Mörser und Pistill,

    –   Karborund-Bentonit-Gemisch (Verhältnis 1:1),

    –   Phosphatpuffer nach Sörensen (pH-Wert 7) oder ein entsprechendes
        handelsübliches Produkt,

    –   TMV-haltige Suspension (Pflanzenpresssaft aus TMV-infizierten
        Tabakpflanzen),

    –   Filtriergaze,

    –   handelsübliche Wattestäbchen,

    –   verschließbare Glas- oder Kunststoffgefäße,

    –   Aufbewahrungsgefäße und Feuchteschalen.

4.3.1.4.1 Herstellung der Einlageproben

    Die Vermehrung des Virus erfolgt in Tabakpflanzen (
    Nicotiana tabacum „Samsun“                    ), in denen es sich
    systemisch ausbreitet. Dazu werden die Tabakpflanzen bei 18 bis 22 °C
    unter Gewächshausbedingungen bis zum 5-Blattstadium herangezogen. Zur
    Inokulation werden 2 oder 3 untere Blätter mit einem Gemisch aus
    Karborund und Bentonit (1:1) dünn eingepudert und die TMV-haltige
    Suspension (Pflanzenpresssaft aus TMV-infizierten Tabakpflanzen) in
    0,05 mol/l Phosphatpuffer nach Sörensen oder entsprechend (pH-Wert 7)
    auf die bestäubten Blätter aufgetragen. 2 bis 3 Wochen nach der
    Inokulation können dann virushaltige Blätter mit mosaikartigen
    Verfärbungen für die Untersuchungen verwendet werden.

    Jede in den Kompostierungsprozess zur Hygienisierung eingeschleuste
    Probe enthält 10 g TMV-infizierte Tabakblätter (
    Nicotiana tabacum „Samsun“                    ), die in ein
    rottebeständiges Gazesäckchen (Maschenweite 1 x 1 mm) gefüllt werden.
    Damit die Rottebedingungen auf die TMV-infizierten Tabakblätter
    einwirken können, ist das Gazesäckchen der Einlageprobe vollständig
    mit Kompostrohmaterial zu umgeben.

    Es sind Positivkontrollen aus 10 g mit TMV-infizierten Tabakblättern (
    Nicotiana tabacum „Samsun“                    ) derselben Charge
    herzustellen, die bei –18 °C aufbewahrt werden.

4.3.1.4.2 Nachweis der Infektiosität durch einen Biotest

    Die Inaktivierung der durch den Hygienisierungsprozess der
    thermophilen Kompostierung geleiteten Erregerproben wird durch einen
    Biotest nach folgender beschriebener Methode untersucht.

    **Probenaufarbeitung**

    Nach Beendigung des hygienisierenden Verfahrensschritts (z. B.
    Entnahme nach Beendigung der Prozessprüfung auf einer thermophilen
    Kompostierungsanlage) wird die TMV-Erregerprobe von eventuell
    vorhandenen nicht verrotteten groben Bestandteilen befreit. Unter
    Zusatz von 30 ml Phosphatpuffer nach Sörensen oder entsprechend (0,05
    mol/l; pH-Wert 7) wird die Probe in einem Mörser zerkleinert. Die
    Probensuspension wird auf die Filtriergaze gegeben und ausgepresst.
    Der Probenextrakt wird in ein verschließbares Glas- oder
    Kunststoffgefäß überführt.

    Mit den mitgeführten Positiv-Kontrollproben wird in gleicher Weise
    verfahren.

    **Biotest**

    Als Nachweis für die Infektion werden die Extrakte aus den Proben und
    aus den Kontrollen auf Blätter der Testpflanze (
    Nicotiana glutinosa L.                   ) aufgetragen. Der Biotest
    wird an Nachweispflanzen durchgeführt, die sich im 6 – 8-Blattstadium
    befinden.

    Für die Inokulation der 12 reisolierten TMV-Erregerproben werden
    insgesamt 12 Nachweispflanzen benötigt, wobei je Prüfbereich vier
    Proben an vier Pflanzen getestet werden.

    An den Nachweispflanzen werden die Vegetationsspitze und die unteren
    älteren Blätter entfernt, so dass jeweils vier voll ausgebildete
    Blätter für die Inokulation an den Pflanzen verbleiben. Für die
    bessere Vergleichbarkeit bei Lokalläsionen an Pflanzen mit Blättern
    unterschiedlicher Größe und unterschiedlichen Alters ist das
    lateinische Quadrat als Versuchsanordnung zu wählen. Voraussetzung
    hierfür ist die gleiche Anzahl an TMV-Proben, Testpflanzen und
    Blättern. Bei der Prozessprüfung werden die drei charakteristischen
    Prüfbereiche des Rottekörpers in jeweils vierfacher Wiederholung
    überprüft. Das folgende Schema verdeutlicht die Versuchsanordnung der
    Halbblattmethode unter Einbeziehung der Positiv-Kontrollprobe (P) für
    die vier zu prüfenden TMV-Proben (A, B, C, D) eines Prüfbereichs:

    *        *
        *   Pflanze 1

        *   Pflanze 2

        *   Pflanze 3

        *   Pflanze 4

    *        *   Blatt-
            position

        *   Blatthälfte
            (aus Richtung
            Blattspitze)

        *   Blatthälfte
            (aus Richtung
            Blattspitze)

        *   Blatthälfte
            (aus Richtung
            Blattspitze)

        *   Blatthälfte
            (aus Richtung
            Blattspitze)

    *        *   links

        *   rechts

        *   links

        *   rechts

        *   links

        *   rechts

        *   links

        *   rechts

    *        *   1. Blatt

        *   A

        *   P

        *   P

        *   D

        *   C

        *   P

        *   P

        *   B

    *        *   2. Blatt

        *   B

        *   P

        *   P

        *   A

        *   D

        *   P

        *   P

        *   C

    *        *   3. Blatt

        *   C

        *   P

        *   P

        *   B

        *   A

        *   P

        *   P

        *   D

    *        *   4. Blatt

        *   D

        *   P

        *   P

        *   C

        *   B

        *   P

        *   P

        *   A

    Die Blätter können im Hinblick auf die durchzuführenden Behandlungen
    auf der Blattunterseite mit einem wasserfesten Filzstift
    gekennzeichnet werden. Zuerst wird immer die Untersuchungsprobe
    aufgetragen und anschließend die Kontrollprobe.

    Dann werden die Blätter der Nachweispflanzen mit einem Gemisch aus
    Karborund und Bentonit (1:1) dünn eingepudert. Die Proben- und
    Kontrollextrakte werden mit einem Wattestäbchen auf die Blätter
    aufgetragen, wobei die bestäubten Blatthälften mit dem Extrakt zweimal
    gleichmäßig mit leichtem Druck und mit Handbewegungen, die von der
    Mittelader zum Blattrand verlaufen, bestrichen werden. Dabei wird das
    Blatt mit einer Hand von der Blattunterseite her unterstützt.

    Sofort nach der Behandlung werden die Tabakblätter direkt am Spross
    abgeschnitten und die anhaftenden Karborund-/Bentonit-Reste von der
    Blattoberfläche mit Leitungswasser vollständig entfernt (Sprühflasche
    oder Brause). Für die Inkubation werden die behandelten Blätter
    entweder in ein mit Wasser gefülltes Gefäß gestellt oder in
    entsprechende Feuchteschalen gelegt. Im Anschluss werden die
    behandelten Blätter bis zur Symptomausbildung in eine Klimakammer oder
    ein klimatisiertes Gewächshaus bei 22 bis 25 °C gestellt. Während des
    Inkubationszeitraums werden die behandelten Blätter täglich für 16
    Stunden beleuchtet (Belichtungsstärke mindestens 2 000 Lux).

    Spätestens 5 Tage nach der Inokulation sind die Infektionsherde in
    Form von nekrotischen Lokalläsionen deutlich zu erkennen. Hierbei
    handelt es sich um kleine runde Flecken von 2 bis 3 mm Durchmesser,
    deren Zentren aus abgestorbenem Gewebe bestehen.

    **Bewertung der Ergebnisse**

    Für die Bewertung werden die gebildeten Läsionen einer jeden
    Blatthälfte getrennt ausgezählt. Die Auswertung erfolgt durch Addition
    der Läsionen der jeweiligen vier Blatthälften, die jeweils mit der
    Proben- und Kontrolllösung inokuliert worden sind. Die
    Restinfektiosität der Erregerproben wird prozentual in Relation zur
    Positiv-Kontrolle ausgedrückt.

    Für jede einzelne Erregerprobe (Wiederholung) wird die relative
    Restinfektion auf vier inokulierten Tabakblättern nach folgender
    Formel zusammengefasst:

    *        *            ![bgbl1_2012_j0611_0030.jpg](bgbl1_2012_j0611_0030.jpg)

   B1 = inokuliertes Blatt der ersten Pflanze
    B2 = inokuliertes Blatt der zweiten Pflanze
    B3 = inokuliertes Blatt der dritten Pflanze
    B4 = inokuliertes Blatt der vierten Pflanze
    LE = Läsionszahl der Erregerprobe
    LK = Läsionszahl der Positiv-Kontrollprobe

    Die Restinfektion [Relativwert] des Erregers Tabakmosaikvirus für
    einen Prüfbereich ergibt sich aus dem arithmetischen Mittel der
    relativen Restinfektionen aller Wiederholungen (Erregerproben) des
    jeweiligen Prüfbereichs:

    *        *            ![bgbl1_2012_j0611_0040.jpg](bgbl1_2012_j0611_0040.jpg)

   Ist die Restinfektion [Relativwert] je Prüfbereich*
    4 %, so ist die Prüfung bestanden.

4.3.2 Prüfungen der hygienisierten Bioabfälle

    Bei der Prüfung der hygienisierten Bioabfälle in der Phytohygiene wird
    der Gehalt an keimfähigen Samen und austriebsfähigen Pflanzenteilen im
    hygienisierend behandelten Material mit der Kultivierungsmethode
    bestimmt.

    Die Prüfung wird mit Material aus einer gut durchmischten Sammelprobe
    (ca. 3 kg) durchgeführt. Die Sammelmischprobe setzt sich aus
    mindestens fünf verschiedenen Teilproben einer Charge des
    hygienisierend behandelten, gemäß Nummer 3.3 zu untersuchenden
    Materials zusammen.

    **Probenvorbehandlung**

    Das Volumengewicht und der Salzgehalt des Prüfsubstrats sind zu
    bestimmen. Bei Komposten wird die Originalprobe < 10 mm gesiebt. Zu
    nasse und nicht siebfähige Komposte werden vorgetrocknet
    (Lufttrocknung). Pasteurisierte Materialien und flüssige Gärrückstände
    werden ungesiebt und als flüssiges Prüfsubstrat verwendet.

    **Benötigte Materialien**

    –   Kunststoffschalen mit Bodenlochung oder gleichwertige
        Versuchsbehältnisse,

    –   Gießmatten,

    –   Nadellochfolie,

    –   geeignetes Mischsubstrat (z. B. schwach zersetzter Hochmoortorf mit
        ca. 4 g kohlensaurem Kalk pro Liter, welches frei von keimfähigen
        Samen und austriebsfähigen Pflanzenteilen ist).

    **Durchführung**

[^f776421_17_BJNR295500998BJNE001802116]
    3 l gesiebtes (FS*                    10 mm) Prüfsubstrat werden für
    feste Proben und 0,5 l flüssiges Prüfsubstrat für flüssige Proben
    eingesetzt. Nach Bestimmung des Salzgehaltes
    wird das Prüfsubstrat mit einer geeigneten Mischkomponente (KCl-Gehalt
    = 0 g/l) so verdünnt, dass die Prüfmischung einen Salzgehalt von*
    2 g KCl pro Liter aufweist. Als Mischkomponente, die frei von
    keimfähigen Samen und austriebsfähigen Pflanzenteilen sein muss,
    eignet sich Hochmoortorf mit ca. 4 g kohlensaurem Kalk pro Liter. Die
    Prüfmischung wird in einer Schichtdicke von ca. 10 mm in
    Versuchsschalen (Kunststoffschalen mit Bodenlochung oder gleichwertige
    Behältnisse, die mit einer Gießmatte und einer Nadellochfolie als
    Verschmutzungsschutz ausgelegt sind) gleichmäßig ausgebracht, leicht
    angedrückt und durch Gießen auf volle Wasserkapazität gebracht. Danach
    werden die Versuchsbehältnisse über einen Zeitraum von 15 Tagen bei
    einer Beleuchtungsstärke von mindestens 1 000 Lux und einer Temperatur
    von 18 bis 20 °C ohne direkte Sonneneinstrahlung belassen. Der
    Wasserverlust wird regelmäßig durch Überbrausen ausgeglichen. Um eine
    Austrocknung zu vermeiden, sollen die Schalen mit Glas- oder
    Kunststoffscheiben so abgedeckt werden, dass ein Luftaustausch
    weiterhin möglich ist.

    **Berechnung**

    Nach 15 Tagen Kulturdauer werden die aufgelaufenen Pflanzen gezählt
    und ihre Anzahl wird, bezogen auf einen Liter Prüfsubstrat, auf 2
    Kommastellen genau angegeben.

    Die Prüfung der hygienisierten Bioabfälle ist in der Phytohygiene
    erfolgreich abgeschlossen, wenn der Gehalt an keimfähigen Samen und
    austriebsfähigen Pflanzenteilen maximal 2 pro Liter Prüfsubstrat ist.

    DSM: Deutsche Stammsammlung für Mikroorganismen, Marscheroder Weg 1b,
    38124 Braunschweig.
[^f776421_09_BJNR295500998BJNE001802116]:     Universität Hohenheim, Institut für Umwelt- und Tierhygiene,
    Garbenstrasse 30, 70599 Stuttgart.
[^f776421_10_BJNR295500998BJNE001802116]:     Veröffentlicht in der Beuth-Verlag GmbH, Berlin; archivmäßig gesichert
    niedergelegt beim Deutschen Patent- und Markenamt in München.
[^f776421_11_BJNR295500998BJNE001802116]:     Methode nach Schwarz, Michael, Vergleichende seuchenhygienisch-
    mikrobiologische Untersuchungen an horizontal und vertikal
    beschickten, bewachsenen Bodenfiltern mit vorgeschalteter
    Mehrkammerausfaulgrube bzw. einem als Grobstoff - Fang dienenden
    Rottebehälter (Rottefilter), S. 45, veterinärmedizinische
    Dissertation, FU Berlin, 2003; archivmäßig gesichert niedergelegt bei
    der Deutschen Nationalbibliothek in Leipzig.
[^f776421_12_BJNR295500998BJNE001802116]:     Methode nach „Internationale Vorschriften für die Prüfung von Saatgut,
    Seed Science and Technology 21, Supplement, Internationale Vereinigung
    für die Prüfung von Saatgut“ (ISTA - International Seed Testing
    Association, Hrsg.), 1993; archivmäßig gesichert niedergelegt bei der
    Deutschen Nationalbibliothek in Leipzig.
[^f776421_15_BJNR295500998BJNE001802116]:     Methode nach Methodenbuch zur Analyse organischer Düngemittel,
    Bodenverbesserungsmittel und Substrate, Kapitel III. C 2,
    Bundesgütegemeinschaft Kompost e. V. (Hrsg.), 5. Auflage 2006,
    Selbstverlag, Köln; archivmäßig gesichert niedergelegt bei der
    Deutschen Nationalbibliothek in Leipzig.
[^f776421_17_BJNR295500998BJNE001802116]: 
(zu § 2a Absatz 7, § 4 Absatz 9)

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BioAbfV
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