# உயர் செயல்பாட்டுத் திரவ நிறச்சாரல் பிரிகை

## வகைகள்

### தலைகீழ் பிரிவு நிறச்சாரல் பிரிகை (RPC)

தலைகீழ் பிரிவு HPLC (RP-HPLC or RPC) துருவமற்ற நிலையான பிரிவு மற்றும் நீர்கலந்த, மிதமான துருவ இயங்கும் பிரிவு ஆகியவற்றைக் கொண்டிருக்கிறது. ஒரு பொதுவான நிலையான பிரிவு சிலிக்கா ஆகும். இது RMe<sub>2</sub>SiCl உடன் வினையேற்றப்பட்டது, இங்கு R என்பது C<sub>18</sub>H<sub>37</sub> அல்லது C<sub>8</sub>H<sub>17</sub> போன்ற நேரான சங்கிலி ஆல்கைல் குழு ஆகும். இந்த நிலையான பிரிவுகளுடன், வைத்திருத்தல் நேரம் அதிகமான துருவமற்ற மூலக்கூறுகளில் நீண்டதாக இருக்கும், அதேசமயம் துருவ மூலக்கூறுகள் மிகவும் விரைவில் கரைக்கப்படுகின்றன. ஒரு சோதனையாளர் இயங்கும் பிரிவுக்கு அதிக நீரைச் சேர்ப்பதன் மூலமாக வைத்திருத்தல் நேரத்தை அதிகரிக்கலாம்; இங்கு உருவாகும் நீர் தவிர்க்கும் நிலையான பிரிவுக்கான நீர் தவிர்க்கும் அனலிட்டின் கவர்ச்சி தற்போது அதிகமான நீர்நாட்டமுள்ள இயங்கும் பிரிவுக்கு வலிமைவாய்ந்த தொடர்புடையதாக இருக்கிறது. அதே போல், ஒரு சோதனையாளர் கரைதிரவங்களுக்கு அதிகக் கரிமக் கரைப்பான் சேர்ப்பதன் மூலம் வைத்திருத்தல் நேரத்தைக் குறைக்கலாம். மிகவும் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் RPC தொடர்ந்த குறிப்பிடுதல்கள் இல்லாமல் "HPLC" ஆக பொதுவாகத் தவறாகக் குறிப்பிடப்படுகிறது. மருந்துத் துறையில் RPC மருந்துகளை அவற்றின் வெளியீட்டிற்கு முன்பு தகுதி காண்பதற்காகத் தொடர்ந்து பயன்படுத்தப்படுகிறது.  
RPC நீர் தவிர்க்கும் ஆற்றல்களின் தத்துவத்தின் மீது இயங்குகிறது, இது இருதுருவ நீர் கட்டமைப்பில் உயர் சமச்சீர்மையில் இருந்து தொடங்கியது, மேலும் இது வாழ்வியலின் அனைத்து செயல்பாடுகளிலும் மிகவும் முக்கியமான பங்குவகிக்கிறது. RPC இந்த செயலெதிர்செயல் ஆற்றல்களின் அளவீட்டிற்கு அனுமதிக்கிறது. நிலையான பிரிவுக்கு அனலிட்டின் கட்டமைப்பு, நீர்கலந்த கரைதிரவத்தின் அணையும் கூறுடன் தொடர்புடைய அனலிட் மூலக்கூறின் துருவமற்ற பாகத்தைச் சுற்றிய தொடர்பு புறப்பரப்புப் பகுதிக்கு சரிசமவிகிதமாக இருக்கிறது. இந்த சால்வோபோபிக் விளைவு, அனலிட் மற்றும் C<sub>18</sub>-சங்கிலிக்கு எதிராக இரண்டின் சிக்கலான நிலை ஆகியவற்றைச் சுற்றி "துளை-குறைப்புக்கான" நீரின் ஆற்றலால் ஆதிக்கம் செலுத்தப்படுகிறது. இந்தச் செயல்பாட்டில் வெளியிடப்படும் ஆற்றல் கரைதிரவத்தின் (நீர்: 7.3 × 10<sup>−6</sup> J/cm², மெத்தனால்: 2.2 × 10<sup>−6</sup> J/cm²) புறப்பரப்பு இழுவிசைக்கு மற்றும் முறையே அனலிட் மற்றும் அணையும் கூறு ஆகியவற்றின் நீர் தவிர்க்கும் புறப்பரப்புக்கு சரிசமவிகிதமாக இருக்கிறது. நீரின் புறப்பரப்பு இழுவிசையைக் குறைப்பதற்காக இயங்கும் பிரிவினுள் குறைவான துருவக் கரைப்பான் (மெத்தனால், அசிட்டோநைட்ரில்) சேர்ப்பதன் மூலமாக வைத்திருத்தல் குறைந்துவிடலாம். பகுப்பாய்வு நடைபெறும் போது, முனைவுத்தன்மை மற்றும் நீர்கலந்த இயங்கும் பிரிவின் புறப்பரப்பு இழுவிசை ஆகியவற்றைத் தானாகவே குறைத்தலின் மூலமாக இந்த விளைவு மாறல்விகிதக் கரைத்துப்பிரித்தலில் பயன்படுத்தப்படுகிறது.  
அனலிட் மூலக்கூறின் கட்டமைப்புப் பண்புகள் அதன் வைத்திருத்தல் பண்புருக்களில் முக்கியப் பங்கு வகிக்கின்றன. பொதுவாக, அதிகமான நீர் தவிர்க்கும் புறப்பரப்புப் பகுதியுடன் (C-H, C-C மற்றும் பொதுவாக S-S போன்ற துருவமற்ற அணு பிணைப்புகள் மற்றும் மற்றவைகள்) கூடிய அனலிட்டின் விளைவாக நீண்ட வைத்திருத்தல் நேரம் தேவைப்படும். ஏனெனில் இது நீர் கட்டமைப்புடன் செயலெதிர்செயல் புரியாத மூலக்கூறின் துருவமற்ற புறப்பரப்புப் பகுதியை அதிகப்படுத்துகிறது. மற்றொரு வகையில் -OH, -NH<sub>2</sub>, COO<sup>-</sup> அல்லது -NH<sub>3</sub><sup>+</sup> போன்ற துருவக்குழுக்கள் நீருடன் நன்றாக இணைவதால் வைத்திருத்தலைக் குறைக்கின்றன. எனினும் மிகவும் பெரிய மூலக்கூறுகள், பெரிய அனலிட் புறப்பரப்பு மற்றும் அணையும் கூறின் ஆல்கைல் சங்கிலிகள் ஆகியவற்றுக்கு இடையில் முழுமையற்ற செயலெதிர்செயலை விளைவிக்கலாம். மேலும் நிலையான பிரிவின் நுண்துளைகளில் நுழைதலில் சிக்கல்கள் ஏற்படலாம்.  
வைத்திருத்தல் நேரம் நீர் தவிர்க்கும் (துருவமற்ற) புறப்பரப்புப் பகுதியில் அதிகரிக்கும். கிளைத்தச் சங்கிலி பகுதிபொருட்கள் அவற்றின் ஒத்திசைவான நேரியல்பு மாற்றியத்தைக் காட்டிலும் மிகவும் துரிதமாகக் கரைக்கப்படுகின்றன. ஏனெனில் அவற்றின் ஒட்டுமொத்த புறப்பரப்புப் பகுதி குறைவாயிருக்கும். அதேபோல் கரிமப் பகுதிபொருட்கள் C=C அல்லது C-C-மும்மடங்குப் பிணைப்பு ஆகியவற்றைக்காட்டிலும் ஒற்றை C-C-பிணைப்புகளுடன் மெதுவாகக் கரைக்கப்படும், இரட்டை அல்லது மும்மடங்குப் பிணைப்பு ஒற்றை C-C-பிணைப்பை விடக் குறுகியதாக இருக்கும்.  
இயங்கும் பிரிவு புறப்பரப்பு இழுவிசையிலிருந்து (கழுவியெடுத்தல் கட்டமைப்பில் அமைப்புமுறை ஆற்றல்) விலகி, மற்ற இயங்கும் பிரிவு மாற்றிகள் அனலிட் வைத்திருத்தலைப் பாதிக்கலாம். எடுத்துக்காட்டாக கனிம உப்புக்களின் சேர்க்கை காரணமாக, மிதமான நேரியல்பு நீர்கலந்த கரைசல்களின் புறப்பரப்பு இழுவிசையில் அதிகரிக்கிறது (ca. 1.5&nbsp;×&nbsp;10<sup>−7</sup>&nbsp;J/cm² per Mol for NaCl, 2.5&nbsp;×&nbsp;10<sup>−7</sup>&nbsp;J/cm² per Mol for (NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>), மற்றும் அனலிட்-கரைப்பான் இடைமுகத்தின் இயல்பாற்றல், புறப்பரப்பு இழுவிசையினால் கட்டுப்படுத்தப்படுவதன் காரணமாக, உப்புக்களின் சேர்க்கை வைத்திருத்தல் நேரத்தை அதிகரிப்பதற்கு வழிவகுக்கும். இந்த நுட்பம் புரதங்களின் மிதமான பிரித்தல் மற்றும் மீட்பு, மற்றும் புரதப் பகுப்பாய்வில் அவற்றின் உயிரியல் நடவடிக்கையின் பாதுகாப்பு (நீர் தவிர்க்கும் செயலெதிர்செயல் நிறச்சாரல் பிரிகை, HIC) ஆகியவற்றில் பயன்படுத்தப்படுகிறது.  
அனலிட்டின் நீர் தவிர்க்கும்தன்மையில் இது மாற்றம் ஏற்படுத்தலாம் என்றபோதும் pH இன் தாக்கம் மற்றொரு முக்கிய பகுதிபொருள் ஆகும். இந்த காரணத்திற்காக பெரும்பாலான முறைகள் pH ஐக் கட்டுப்படுத்துவதற்காக சோடியம் பாஸ்பேட் போன்ற அமிலச்செறிவுமாறா முகவர்களைப் பயன்படுத்துகின்றன. இந்த அமிலச் செறிவு மாறாக் கரைசல், pH ஐக் கட்டுப்படுத்துதல், நிலையான பிரிவின் மீது ஏதேனும் ஒரு எஞ்சிய ஆட்பட்ட சிலிக்காவின் மீது நடுநிலையான பகிர்வு மற்றும் அனலிட்டின் மீது நடுநிலையான பகிர்வுக்கான அயனி இணைதல் முகவர்களாக செயல்படல் போன்ற பல பயன்பாடுகளுக்குப் பயன்படுகிறது. அம்மோனியம் கூட்டு விளைபொருட்களின் உருவாக்கத்தின் மூலமாக சில அனலிட்டுகளின் பகுத்தலை மேம்படுத்துவதற்காக பெருமளவிலான நிறமாலையியலில் அம்மோனியம் ஃபார்மேட் பொதுவாகச் சேர்க்கப்படுகிறது. அசிட்டிக் அமிலம் அல்லது மிகவும் பொதுவாக ஃபார்மிக் அமிலம் போன்ற ஆவியாகும் கரிம அமிலம், பெருமளவிலான நிறமாலையியல், அணிவரிசை கரைதிரவ பகுப்பாய்விற்குப் பயன்படுத்தப்பட்டால் இயங்கும் பிரிவுக்கு பொதுவாக சேர்க்கப்படுகிறது. ட்ரைஃப்ளூரோஅசிட்டிக் அமிலம் பெருமளவிலான நிறமாலையியல் பயன்பாடுகளில் உணர்கருவியில் அதன் நிலைநிற்றல் மற்றும் கரைப்பான் விநியோக அமைப்பு ஆகியவற்றின் காரணமாக எப்போதாவது பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஆனால் இது மற்ற உணர்கருவிகளைப் பயன்படுத்தும் பயன்பாடுகளில் கார்பாக்சிலிக் அமிலங்கள் போன்ற அனலிட்டுகளை வைத்திருத்தலை மேம்படுத்துவதில் வலிமையான கரிம அமிலங்களில் ஒன்றாக இருந்து செயல்திறன் மிக்கதாக இருக்கலாம். பயன்பாடுகள் மூலமாக அமிலங்கள் மற்றும் அமிலச்செறிவு மாறாக் கரைசல்கள் ஆகியவற்றின் விளைவுகள் மாறுபடும், ஆனால் பொதுவாக நிறச்சாரல் பிரிகையை மேம்படுத்துகிறது.  
சாதாரண சிலிக்கா அணிவரிசைகளுடன் ஒப்பிடுகையில் தலைகீழ் பிரிவு அணிவரிசைகளை சேதப்படுத்துவது மிகவும் கடினமானது; எனினும், பல தலைகீழ் பிரிவு அணிவரிசைகள் ஆல்கைல் செறிவூட்டப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களைக் கொண்டிருக்கின்றன, மேலும் இவை அடிப்படையான சிலிக்காத் துகள்களை அழித்துவிடுவதால் இவற்றை நீர்கலந்த ஆதாரங்களுடன் **எப்போதும்** பயன்படுத்தக் கூடாது. அவற்றை நீர்கலந்த அமிலத்துடன் பயன்படுத்தலாம். ஆனால் இது HPLC உபகரணத்தின் உலோகப்பகுதிகளை அரித்து விடலாம் என்பதால் அணிவரிசையை நீண்ட நேரத்திற்கு அமிலத்துக்கு ஆட்படுத்தக் கூடாது. RP-HPLC அணிவரிசைகள் எஞ்சிய அமிலங்கள் அல்லது அமிலச்செறிவு மாறாக் கரைசல்கள் ஆகியவற்றை நீக்குவதற்கு பயன்படுத்திய பிறகு தூய்மையான கரைப்பானில் முக்கியெடுக்கப்பட வேண்டும், மேலும் கரைப்பானிற்கு ஏற்றக் கலவையில் சேமிக்கப்படவேண்டும். HPLC அணிவரிசைகளின் உலோக உட்பொருட்கள், நீடித்திருக்கும் பொருட்களைப் பிரிப்பதற்கு சிறந்த சாத்தியமுள்ள திறன் இருந்தால் குறைவாக வைக்கப்படவேண்டும். அணிவரிசையின் உலோக உட்பொருளுக்கான சிறந்த சோதனை 2,2'- மற்றும் 4,4'- பைபிரைடின் கலவை கொண்ட மாதிரியைச் செலுத்துதல் ஆகும். ஏனெனில் 2,2'-பைபி உலோகத்தை இடுக்கி இணைக்கலாம், உலோக அயனிகள் சிலிக்காவின் புறப்பரப்பின் மீது தோன்றும் போது, 2,2'-பைபிக்கான உச்ச வடிவம் வடிவஞ்சிதைந்துவிடும் (நீண்டுவிடும்)...