Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 67

Б Р О Й  109
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  67
Колбата се изплаква на няколко пъти с 1 до 2 ml
от подвижната фаза и изплакнатите количест-
ва се прехвърлят в градуираната колба. Допъл-
ва се до определената черта със същия разтво-
рител и се разбърква. Една аликвотна част от
полученото вещество се филтрира през мемб-
ранни филтри 0,45 µт (4.7). Разтворът се запаз-
ва за определяне на HPLC.
5.4. Определяне на HPLC
5.4.1. Параметри
Предлагат се следните условия за провеждане
на анализа. Други условия могат да бъдат изпол-
звани, ако те дават равностойни резултати:
—течна хроматографична колона (4.4.1),
—HPLC подвижна фаза (3.8),
—скорост на изтичане—1,5 до 2 ml/min,
—вълнова дължина на детектора—317 nm,
—обем за инжектиране—20 до 50 µl.
Проверява се стабилността на хроматогра-
фичната система, като на няколко пъти се
инжектира калибрационнен разтвор (3.9.1), съ-
държащ 3,6 µg/ml, докато се постигнат постоян-
ни височини на пика и времена на задържане.
5.4.2. Калибрационна графика
Всеки от калибрационните разтвори, полу-
чени в (3.9.1), се инжектира няколко пъти и се
измерват височините (областите на пика) за
всяка концентрация. Начертава се калибраци-
онна крива, като се обозначават средните пи-
кови височини или области на калибрационни-
те разтвори по ординатите, а съответните кон-
центрации в µg за ml по абсцисите.
5.4.3. Мострен разтвор
Мостреният разтвор се инжектира няколко
пъти, като се използва същият обем като този
в калибрационните разтвори и се определя сред-
ната пикова височина (област) на робенидино-
вите пикове.
6. Изчисление на резултатите
От средната височина (област) на робениди-
новите пикове се определя концентрацията на
мострения разтвор в µg/ml на базата на калиб-
рационната графика (5.4.2).
Съдържанието на робенидин w (mg/kg) в
пробата е дадена в следната формула:
200c
W = ––– [mg/kg],
m
където:
с е концентрацията на робенидин в мостре-
ния разтвор в µg/ml;
m—масата на тестовата позиция в g.
7. Потвърждаване на резултатите
7.1. Идентичност
Идентичността на аналита може да се потвър-
ди чрез ко-хроматография или използването на
диоден детектор, с помощта на който могат да се
сравнят спектрите на мострения екстракт и ка-
либрационния разтвор (3.9.3), съдържащ 6 µg/ml.
7.1.1. Ко-хроматография
Пробният екстракт се подсилва, като към
него се прибави подходящо количество от калиб-
рационния разтвор (3.9.3). Количеството доба-
вен робенидин трябва да бъде сходно с количес-
тво робенидин, изчислено в пробния екстракт.
Усилва се единствено височината на робе-
нидиновия пик, като се вземе предвид както
добавеното количество, така и разтвореният
екстракт. Пиковата широчина в половината от
максималната му височина трябва да бъде в
приблизително 10% от началната широчина.
7.1.2. Диодно детектиране
Резултатите са оценени съгласно следните
критерии:
(а) вълновата дължина на максималната
абсорбция на пробата и стандартните спектри,
регистрирана в пиковия апекс на хроматогра-
мата, трябва да попадне в същото поле на раз-
делителната сила на детектиращата система;
що се отнася до диодния детектор, типично за
него е да бъде приблизително в обсега на 2 nm;
(б) в обсега между 250 и 400 nm пробата и
стандартните спектри, регистрирани в пиковия
апекс на хроматограмата, не трябва да се раз-
личават от онези части на спектъра, които по-
падат в обсег 10 до 100% от относителната аб-
сорбция; критерият е изпълнен тогава, когато
налице са същите максимуми и няма регистри-
рана точка, в която отклонението между двата
спректъра да превишава 15% от абсорбцията
на стандартния аналит;
(в) в обсега между 250 и 400 nm спектрите на
възходящия наклон, апекса и низходящия нак-
лон на пика, регистриран от мострения екст-
ракт, не трябва да се различават един от друг за
тези части от спектъра, които попадат в обсега
на 10 до 100% от относителната абсорбция;
критерият е спазен тогава, когато налице са
същите максимуми и когато във всички регис-
трирани точки отклонението между спектрите
не надминава 15% от абсорбцията на спектъра
на апекса.
Ако един от критериите не е спазен, наличи-
ето на аналита не се потвърждава.
7.2. Повторяемост
Разликата между резултатите от двата пара-
лелно проведени опита за определяне на робени-
диновото съдържание в една и съща проба не
трябва да превишава 10% от по-високата стой-
ност за робенидиново съдържание, по-голямо
от 15 mg/kg.
7.3. Възстановяване
Възстановяването за подсилена празна фу-
ражна проба трябва да бъде поне 85%.
8. Резултати от съвместно изследване
При организирано съвместно изследване,
проведено от 12 лаборатории, при което пред-
мет на анализ са четири фуражни проби от хра-
ната на домашни птици и зайци във формата на
шрот или гранули, като всяка проба се подлага
на двоен анализ, се получават следните резул-
тати, представени в таблицата: