Държавен вестник, бр. 31, 2024 г., стр. 59

БРОЙ  31	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
СТР.  59  
в единици по Шаде,
където:
tx е времето в min, за което оптичната 
плътност достига стойност 0,235.
Времето tx се отчита от построената 
графика, отразяваща връзката между изме-
рените стойности на оптичната плътност и 
съответното време на вземане на порциите 
от инкубационната смес.
8. Методи за определяне на количеството 
на хидроксиметилфурфурола
8.1. Метод на Винклер
8.1.1. Същност на метода
Методът се основава на определяне на оп-
тичната плътност при 550 nm на оцветените 
разтвори, които се получават в резултат на 
взаимодействието между съдържащия се в 
меда хидроксиметилфурфурол, пара-толуидина 
и барбитуровата киселина.
8.1.2. Апаратура
Спектрофотометър или друг вид фотоме-
тър за измерване на оптичната плътност при 
550 nm, чаши, епруветки с обем 10 ml, пипети 
с обем 1, 2, 5 и 10 ml, мерителни колби с обем 
50 и 100 ml.
8.1.3. Реактиви
Разтвор на барбитурова киселина: претег­
лят се 500 mg барбитурова киселина и се 
разтварят в дестилирана вода на водна баня. 
Разтворът се прехвърля в мерителна колба с 
обем 100 ml и след охлаждане до температура 
20 °С се допълва до марката с вода.
Разтвор на пара-толуидин: претеглят се 10 g 
пара-толуидин (т. т. 45 °С) и се разтварят в 
50 ml изопропанол на водна баня. Разтворът 
се прехвърля в мерителна колба от 100 ml 
и се добавят 10 ml ледена оцетна киселина. 
Охлажда се и се допълва до марката с изопро-
панол. Разтворът се съхранява на тъмно поне 
24 часа преди използването и се използва в 
продължение на не повече от 3 дни, ако не 
се оцвети интензивно през това време.
Забележка. Пара-толуидинът е канцерогенен 
и представлява риск за здравето. Трябва да 
се избягва контакт с реагента. Ако е възмож-
но, трябва да се използва другият метод за 
определяне на количеството на хидроксиме-
тилфурфурола.
8.1.4. Процедура
8.1.4.1. Приготвяне на разтвора на мед
Претеглят се 10 g мед и се разтварят в 
дестилирана вода. Разтворът се прехвърля 
количествено в мерителна колба с обем 50 ml 
и се допълва с вода до марката.
Забележка. Ако разтворът на мед е мътен 
(не е достатъчно бистър), се препоръчва да 
се избистри по следния начин:
Претеглят се 10 g мед и се разтварят в 
около 20 ml дестилирана вода. Разтворът се 
прехвърля количествено в мерителна колба с 
обем 50 ml. Добавя се 1 ml разтвор на Carrez I 
(приготвен съгласно т. 8.2.4), разбърква се, 
добавя се 1 ml разтвор на Carrez II (пригот-
вен съгласно т. 8.2.4), разбърква се, допълва 
се с вода до марката и отново се разбърква. 
Разтворът се филтрува през хартиен филтър, 
като първите 10 ml се изхвърлят.
8.1.4.2. Определяне на количеството на 
хидроксиметилфурфурола
В две епруветки се поставят по 2 ml разтвор 
на мед и 5 ml разтвор на пара-толуидин. В 
едната епруветка се добавя 1 ml дестилирана 
вода (празна проба), а в другата 1 ml разтвор на 
барбитурова киселина. Реагентите се прибавят 
в интервал 1 – 2 min. Измерва се оптичната 
плътност на разтвора срещу празната проба 
в кювета от 1 cm при 550 nm 3 – 4 min след 
добавянето на барбитуровата киселина.
8.1.5. Изчисляване на резултатите
Съдържанието на хидроксиметилфурфурол 
(ХМФ) се определя по формулата:
,
където: 
А е измерената оптична плътност. 
8.2. Метод на Уайт
8.2.1. Същност на метода
Методът се базира на определяне на 
адсорбцията на хидроксиметилфурфурола в 
ултравиолетовата област при 284 nm. За да се 
избегне влиянието на други компоненти на 
меда в тази област на спектъра, се определя 
разликата в адсорбциите на чистия воден раз-
твор на мед и на същия разтвор след добавяне 
на натриев бисулфит към него. Съдържанието 
на хидроксиметилфурфурол се определя след 
изваждане от отчетената абсорбция при 284 nm 
на абсорбцията при 336 nm.
8.2.2. Апаратура
Спектрофотометър с обхват, включващ 
дължини на вълните 284 и 336 nm, 1 cm квар-
цови кювети, филтърна хартия, мембранни 
филтри за водни разтвори с размер на порите 
0,45 mm, чаши от 50 ml, мерителни колби с 
обем 50 ml, пипети, спринцовки.
8.2.3. Реактиви
Разтвор на Carrez I: 15 g калиев ферици-
анид K4 Fe (CN)6.3H2O се разтварят във вода 
и обемът на разтвора се довежда до 100 ml.
Разтвор на Carrez II: 30 g цинков ацетат 
Zn(CH3.COO)2.2H2O се разтваря във вода и 
обемът на разтвора се довежда до 100 ml.
Разтвор на натриев бисулфит, NaHSO3, 
0,20 g/100 ml: 0,20 g натриев бисулфит се разтва-
рят във вода и обемът на разтвора се довежда 
до 100 ml. Приготвя се пресен всеки ден.
8.2.4. Процедура
Подготовката на пробата мед за анализ 
може да се извърши по два метода.
Метод 1
Претеглят се 5 g мед и се разтварят в 
около 25 ml вода. Разтворът се прехвърля 
количествено в мерителна колба с обем