Държавен вестник, бр. 98, 2002 г., стр. 16

С Т Р .  16
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  98
5.4.2. Интерпретиране на резултатите
Сравняват се бендовете на положителната и
отрицателната контрола с тези на изследваните
серуми. Появата на повече от два бенда показва,
че серумът е положителен за наличие на антитела
срещу вируса на АЧК.
5.5. ЕЛАЙЗА срещу неструктурните протеини
на вируса (NS3 ЕЛАЙЗА)
Тази реакция се използва, за да може да се раз-
личават антитела, получени вследствие на вакси-
нация с AHSV-4, и такива, които са инфектирани
с вирулентен вирус.
5.6. Реакция за свързване на комплемента (РСК)
РСК се използва с оглед установяването на
групово специфични антикомплементални анти-
тела срещу вируса на АЧК. Най-често като анти-
ген се използва захарно-ацетонов екстракт от миши
мозък. При отсъствие на стандартизин серум ан-
тигенът се титрира срещу местен положителен се-
рум. За контролен антиген служи миши мозък,
получен по същия начин от здрави мишки.
Серумите от коне трябва да бъдат инактивирани
на 56 °С, серумите от зебри на 60 °С, а от магарета на
62 °С за 30 мин. Тестираните серуми се разреждат
1:10 и се инактивират по посочения начин. Титраци-
ята на положителните контроли се извършва в дву-
кратни разреждания. Антигените—положителен и
контролен, се разреждат в буфер, съдържащ 4—8 ан-
тигенни единици във veronal buffered saline, съдър-
жащ 1 % gelatin (VBSG); морскосвинският компле-
мент се разрежда във VBSG до 4 CH50 (50 %
complement haemolytic units). Серумите, комплемен-
тът и антигенът се свързват поставени в 96-ямкови
плаки с равно дъно или в епруветки, поставени на 4
°C за 18 часа. Хемолизинът се разрежда в реакцията
до 2 хемолитични единици и се употребява заедно с
промити овчи еритроцити. Еритроцитите се стан-
дартизират до 3 % концентрация и се добавят в ям-
ките. Реакцията продължава с инкубация за 30 мин.
на 37 °C. Плаките се центрофугират на 200 g и се
отчита наличието на хемолиза. За контроли слу-
жат: (а) серум и комплемент (b) серум и еритроци-
ти (c) антиген и контролен, всеки с 4 CH50, 2 CH50,
and 1 CH50 от комплемента (d) антиген с еритро-
цити (e) контролен антиген с еритроцити (f) раз-
реждания на комплемента от 4 CH50, 2 CH50, and
1 CH5 и (g) еритроцити. Титърът се определя от
най-високото разреждане на серум, фиксирано от
комплемента с положителния антиген. Така ти-
тър в разреждане от 1/10 се счита за положителен,
а под 1/10—за отрицателен.
5.7. Реакция вирус неутрализация (ВНР)
ВНР се използва се определяне на серотипа.
Вирусният антиген се разрежда до 30—
100 TCID50 (50 % tissue culture infective dose) за 25 µl
и 25 µl се прибавя във всяка епруветка, съдържаща
25 µl серумни разреждания. При скирингови изслед-
вания се използва разреждане на серума до 1:10.
Сместа от серум с вирус се инкубира за 60 ми-
нути при 37 °C преди добавяне на 0,1 ml от VERO
клетъчна суспензия (200,000 клетки/ml)във всяка
епруветка.
При титрация вирусният антиген се приготвя
за тестване на четири разреждания по 25 µl на
ямка. Плаките се инкубират на 37 °C, 5 % CO2,
95 % влажност за 4—5 дни, при съдържание на
вирус 30—100 TCID50.
Плаките се фиксират и оцветяват с разтвор на
0,15 % crystal violet in 2 % glutaraldehyde, след кое-
то се промиват.
За 50 % крайна точка на титъра на серума се
изчислява по метода на Spearman-Kдrber и се оп-
ределя отрицателният log10.
Приложение № 3
към чл. 18, ал. 2, т. 2, буква “в”
Правила за дезинсекция при африканска
чума по конете
При извършване на дезинсекцията се цели уни-
щожаване на векторите (преносителите) на болест-
та АЧК. Тя включва следните мерки:
1. Мерки срещу преимагиналните стадии на
развитие на мокреците:
а) премахване на биотопите за развитие на лар-
вите на мокреците чрез отводняване на водоемите
със застояла вода (блата, мочурища, канавки, ви-
рове и др.);
б) обработване на биотопите, неподдаващи се
на мелиорация, с одобрени от НВМС ларвицидни
средства на всеки 10—14 дни от април до октомври.
2. Мерки за унищожаване на възрастните
мокреци:
а) унищожаване на мокреците в откритото
пространство в радиус 5—10 км от епизоотично-
то огнище чрез опръскване с авиотехника по ме-
тода “ултранисък обем” или чрез използване на
топъл или студен аерозол и димни шашки—из-
вършва се привечер, нощем или рано сутрин през
10—14 дни;
б) унищожаване на влетелите в помещенията
мокреци чрез опръскване, димни шашки или обга-
зяване с топъл или студен аерозол при отсъствие-
то на животните.
3. Мерки за предотвратяване влитането на мок-
реците в помещенията:
а) замрежване на прозорците със ситна мрежа
(сечение 1 мм2) и поставяне на допълнителни ле-
тящи входни врати от същата мрежа;
б) обработка на помещенията отвън с одобре-
ни от НВМС инсектицидни препарати през 10 дни.
4. Мерки за предпазване от ухапване на ед-
нокопитните животни от мокреци чрез трети-
ране на животните с подходящи инсектицидни
препарати.
Поправка. В Закона за опазване на околната среда (ДВ, бр. 91 от 2002 г.) се прави поправка—в чл. 64, ал. 1 да се
чете така:
“Чл. 64. (1) Разходването на средствата от:
1. двадесет на сто от санкциите по чл. 69;
2. таксите, събирани от Министерството на околната среда и водите по чл. 71;
3. приходи от предоставяне на информация за околната среда от Министерството на околната среда и водите,
се извършва съгласно Единната бюджетна класификация за поддържане и подобряване на материалната база, за
обучение, квалификация и материално стимулиране на Министерството на околната среда и водите при условия и по
ред, определени с наредба на министъра на околната среда и водите.”
НЕОФИЦИАЛЕН РАЗДЕЛ