Държавен вестник, бр. 27, 2007 г., стр. 31

Б Р О Й  27
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  31
6. Janse, J. D., 1991. Infra- and intra-specific
classification of Pseudomonas solanacearum strains
using whole cell fattyacid analysis. Systematic and
Applied Microbiology 14; 335—345.
7. Janse, J. D. and J. Van Vaerenbergh. The
interpretation of the EC method for the detection of
latent ring rot infections (Corynebacterium sepedonicum)
in potato. EPPO Bull., No 17, 1987, pp. 1—10.
8. Jansing, H. and K. Rudolph, 1998. Physiological
capabilities of Clavibacter michiganensis ssp.
sepedonicus and development of a semi-selective
medium. Journal of Plant Diseases and Protection, 105,
590—601.
9. Kovacs, N., 1956. Identification of Pseudomonas
pyocyanea by the oxidase reaction. Nature, Lond.,
178, 703.
10. Klement Z.; Rudolph, K and D. C. Sands, 1990.
Methods in Phytobacteriology. Akadйmiai Kiadу,
Budapest, 568 pp.
11. Lelliott, R. A., 1966. The plant pathogenic
coryneform bacteria. J. appl. Bact., 29, 114—118.
12. Lelliott, R. A., E. Billing and A. C. Hayward,
1966. A determinative scheme for the fluorescent plant
pathogenic pseudomonads J. appl. Bact., 29, 470—489.
13. Lelliott, R. A. and P. W., Sellar, 1976. The
detection of latent ring rot (Corynebacterium
sepedonicum (Spiek. et Kotth.) Skapt. et Burkh.) in
potato stocks. EPPO Bull., 6 (2), 101—106.
14. Li, X. and S.H. de Boer, 1995. Selection of
Polymerase Chain Reaction primers from RNA
intergenic spacer region for specific detection of
Clavibacter 
michiganensis 
ssp. 
sepedonicus.
Phytopathology, 85, 837—842.
15. Mills, D., Russell, B., W. and J., W. Hanus, 1997.
Specific detection of Clavibacter michiganensis ssp.
sepedonicus by amplification of three unique DNA
sequences isolated by subtraction hybridization.
Phytopathology, 87, 8, 853—861.
16. Pastrik, K.-H. and R.A. Rainey. 1999.
Identification and differentiation of Clavibacter
michiganensis subspecies by polymerase chain reaction-
based techniques. J. Phytopathology 147; 687—693.
17. Pastrik, K.-H., 2000. Detection of Clavibacter
michiganensis ssp. sepedonicus in potato tubers by
multiplex PCR with coamplification of host DNA.
European Journal of Plant Pathology, 106, 155—165.
18. Ramamurthi, C. S., 1959. Comparative studies
on some Gram-positive phytopathogenic bacteria and
their relationship to the Corynebacteria. Mem. Cornell
agric. Exp. Sta., 366, 52 pp.
19. Schaad, W., Berthier-Schaad, Y., Sechler, A.
and Knorr, D. (1999) Detection of Clavibacter
michiganensis subsp. sepedonicus in potato tubers by
BIO-PCR and an automated real-time fluorescence
detection system. Plant Disease 83; 1095—1100.
20. Schaad, W. 2001. Laboratory guide for
identification of plant pathogenic bacteria. Schaad
[Hrsg.]. — 3. ed.; St. Paul, minnesota:, 373 pp.
21. Skerman, V. B. D., 1967. A guide to the
identification of the genera of bacteria. 2nd ed., William
and Wilkins Company, Baltimore.
22. Smith, N. C.; Hennesy, J; Stead, D.E., 2001.
Repetetive sequence-derived PCR profiling using the
BOX-A1 Ralstonia solanacearum primer for rapid
identification of plant pathogen Clavibacter
michiganensis ssp. sepedonicus. European Journal of
Plant Pathology, 107 (7), 739—748.
Доставчик: вижте интернет страницата http://
forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main
Допълнение 9
Процедура Грам оцветяване (модификация на
Hucker's) (Doetsch, 1981) (1)
Разтвор на Crystal violet
Разтворете 2 g Crystal violet в 20 ml 95 % етанол.
Разтворете 0,8 g амониев оксалат в 80 ml дести-
лирана вода.
Смесете двата разтвора.
Lugol’s iodine
Йод
1 g
Калиев йодид
2 g
Дестилирана вода
300 ml
Стрийте твърдите части заедно в хаванче с чу-
кало. Добавете към водата и разбъркайте, за да
разтворите съставките в затворен съд.
Разтвор от Safranin—за оцветяване
Разтвор с концентрация за съхранение:
Safranin O
2,5 g
95 % етанол
100 ml
Разбъркайте и съхранете.
Разредете 1:10, за да получите работен разтвор.
Процедура по оцветяване:
1. Пригответе натривки, изсушете на въздух и
ги фиксирайте чрез загряване.
2. Залейте предметното стъкло с разтвор на
кристал виолет за 1 min.
3. Изплакнете бързо на течаща вода.
4. Залейте с луголов р-р за 1 min.
5. Изплакнете на течаща вода и подсушете.
6. Обезцветете с 95 % етанол, като добавяте
внимателно капка по капка, докато спре извлича-
нето на повече цвят или потопете с леко разкла-
щане за 30 s.
7. Изплакнете на течаща вода и попийте.
8. Залейте с шафранинов разтвор до 10 s.
9. Изплакнете на течаща вода и попийте.
Грам-положителните бактерии се оцветяват във
виолетово-синьо;
Грам-отрицателните бактерии се оцветяват в
розово-червено.
(1)
Могат да се използват и търговски разтвори и ком-
плекти за оцветяване.
ЛИТЕРАТУРА
1. Anonymous, 1987. Scheme of the detection and
diagnosis of the ring rot bacterium Corynebacterium
sepedonicum in batches of potato tubers. Commission
of the European Communities, Luxembourg. Publ EUR
11288 EN, 21 pp.
2. Bradbury, J. F., 1970. Isolation and preliminary
study of bacteria from plants. Rev. Pl. Path., 49, 213—
218.
3. Dinesen, I. G., 1984. The extraction and diagnosis
of Corynebacterium sepedonicum from diseased potato
tubers. EPPO Bull. 14 (2), 147—152.
4. Doetsch, R. N., 1981. Determinative methods of
light microscopy. In: Manual of methods for general
bacteriology, American Society for Microbiology,
Washington, 21—23.
5. Hugh, R. and Leifson, F., 1953. The taxonomic
significance of fermentative versus oxidative metabolism
of carbohydrates by various gram-negative bacteria. J.
Bact., 66, 24—26.