Държавен вестник, бр. 63, 2023 г., стр. 66

СТР.  66	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
БРОЙ  63
3.18. Изисквания към процедурите за би-
опсиране:
3.18.1. препоръчителен метод за оплождане 
е ICSI, за да се предотврати рискът от замър-
сяване с кумулусни клетки или сперматозо-
иди; внимателно отстраняване на кумулуса 
и промиване от остатъчни сперматозоиди в 
случай на оплождане с IVF, което да мини-
мализира риска от замърсяване с майчин/
бащин генетичен материал;
3.18.2. при биопсия и работа с биопсичен 
материал повърхностите в лабораторията да са 
дезинфекцирани, да се носи работно облекло 
и да се работи с маска и ръкавици (без пудра);
3.18.3. биопсията да се осъществява съгласно 
писмена СОП, като се използват специали-
зирани среди и консумативи, оборудването 
е инсталирано и калибрирано съобразно 
изискванията;
3.18.4. преди биопсия се препоръчва отва-
рянето на зона пелуцида да се осъществява с 
помощта на безконтактен лазер; това позволява 
размерът на отвора да се регулира прецизно, 
чрез промяна в мощността и експозицията на 
лазерния лъч, което да предотврати повреди по 
полярното телце или ембрионалните клетки;
3.18.5. биопсия на полярни телца: първото 
полярно телце се биопсира между 36-ия и 
42-рия час след поставянето на hCG на паци-
ентката; второто полярно телце се биопсира 
между 18-ия и 22-рия час след оплождането 
на яйцеклетката;
3.18.6. биопсията на бластомери се провеж-
да на 3-ти ден след оплождането на стадий 8 
клетки, като се биопсират 1 – 2 бластомера;
3.18.7. биопсия на трофектодермалните 
клетки се провежда на 5-и или 6-и ден след 
оплождането, на стадий бластоциста, като се 
биопсират 5 – 10 трофектодермални клетки;
3.18.8. методът на вземане на полярно тел-
це/клетки от ембриона да бъде подбран така, 
че да се минимализира рискът от увреждане 
на ембриона, като се сведе до минимум про-
дължителността и излагането на ембриона на 
външни условия; внимателно да се промива 
ембрионът след биопсия за отстраняване на 
биопсична среда преди замразяване и кул-
тивиране;
3.18.9. култивиране на биопсирани яйце-
клетки/ембриони да става в индивидуални 
капки и при минимализиране на риска от 
разместване на ембрионите (напр. петри с 
много ямки);
3.18.10. етикетирането да бъде ясно, четливо 
и недвусмислено, така че да гарантира просле-
дяване на ембрионите и биопсичния материал; 
добре е да се въведе система за свидетел на 
критичните стъпки по идентификация;
3.18.11. при всяка биопсия се включва и 
негативна контрола, съдържаща 2,5 µl 1 % 
разтвор на PBS;
3.18.12. ребиопсия на ембрионите може да 
се направи при контаминация на пробата или 
при неуспешен анализ.
3.19. Изисквания към типа на биопсирания 
материал в зависимост от целите на ПГТ:
3.19.1. за целите на ПГТ-А се допуска из-
ползване на полярни телца (задължително 
и двете) и трофектодермални клетки; не се 
допуска използване на бластомери от 3-дневни 
ембриони;
3.19.2. за целите на ПГТ-М се допуска 
използване на единични бластомери и тро-
фектодермални клетки;
3.19.3. за целите на ПГТ-ХП се допуска 
използване на единични бластомери, трофек-
тодермални клетки; ползването на полярни 
телца (задължително и двете) се допуска в 
случаите, когато жената е носител на хромо-
зомно преустройство.
3.20. Изисквания към процедурите за съх-
ранение на биопсирания материал:
3.20.1. биопсираният материал се поставя 
в отделни стерилни етикетирани 0,2 ml еп-
руветки с 2,5 µl 1 % разтвор на PBS-PVP на 
дъното на епруветката;
3.20.2. клетките в PBS-PVP разтвор могат 
да се съхраняват за 24 часа на 2 °C до 8 °C, 
след което трябва да се съхраняват на минус 
20 °C или да се пристъпи към анализ;
3.20.3. амплифицирана ДНК от трансфе-
рирани ембриони се съхранява не по-малко 
от 1 година на минус 20 °С;
3.20.4. ако не е постигната бременност след 
трансфер или няма генетично подходящи за 
трансфер ембриони, ДНК пробите може да 
не се съхраняват.
3.21. Изисквания към процедурите за транс-
порт на биопсирания материал:
3.21.1. клетките се транспортират на лед 
след 24-часово замразяване на минус 20 °C и 
се препоръчва да се транспортират незабавно 
на следващия ден;
3.21.2. при невъзможност за незабавен 
транспорт клетките могат да се съхраняват 
на минус 25 °C до минус 15 °C до 4 седмици;
3.21.3. всяка проба се придружава от 
негативна контрола, съдържаща 2,5 µl 1 % 
разтвор на PBS;
3.21.4. епруветките се поставят в охладен 
контейнер за 0,2 ml епруветки; на дъното на 
стиропорена кутия се поставят два охладителя, 
замразени за минимум 24 часа на минус 20 °C; 
отгоре се поставя контейнерът с ембрионите; 
най-отгоре се поставят още три охладителя, 
замразени на минус 20 °C за 24 часа; не трябва 
да се използва сух лед; стиропорената кутия 
трябва да бъде сигурно затворена и поставе-
на в найлонов плик; кутията не трябва да се 
размества и обръща;
3.21.5. придружаващата пробите докумен-
тация (приемо-предавателен протокол; ин-
формирано съгласие) се поставя в найлонов 
плик с цип.