Държавен вестник, бр. 82, 2002 г., стр. 12

С Т Р .  12
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  82
3.2. Област на приложение—широк кръг заболява-
ния, които се нуждаят от изясняване на нозологичната
единица, определяне на обема на оперативната интервен-
ция и параметрите на медикаментозно и лъчелечение.
3.3. Методичен принцип. Методиките се базират на
фиксиране на тъканите, изготвяне на тънки хистоло-
гични срезове (2—5 микрона), които се оцветяват с под-
ходящи оцветители, за да се проявят на светлинно-мик-
роскопско ниво клетъчните и тъканните структури.
3.4. Техника на изготвяне на хистологичните пре-
парати. Включва следните процедури:
а) фиксация;
б) обработка на тъканите до хистологичен препарат;
в) рязане с микротом;
г) оцветяване;
д) включване.
3.4.1. Фиксация
А. Прости фиксатори:
Формалин—използва се 10 %-ов разтвор на формалин.
Приготвяне: една част 40 %-ов формалин и три час-
ти питейна вода.
Неутрален формалин—в съд се насипва калциев или
магнезиев карбонат в такова количество, че на дъното
да се образува слой с дебелина 1,5—2 см. Налива се
формалин, разклаща се енергично и се оставя да се утаи
в продължение на 24—48 часа.
Б. Сложни фиксатори:
Течност на Буен:
наситен р-р на пикринова киселина—75 мл;
40 %-ов формалин—25 мл;
ледена оцетна киселина— 5 мл;
Течност на Мюлер:
калиев бихромат—2,5 г;
натриев сулфат—1 г;
дестилирана вода—100 мл.
За по-добро разтваряне на калиевия бихромат се
препоръчва загряването му.
Течност на Ценкер (сублиматна смес):
течност на Мюлер—100 мл;
живачен двухлорид (сублимат)—5 г;
ледена оцетна киселина—5 мл.
3.4.2. Обработка на тъканните материали до мик-
роскопски препарати:
3.4.2.1. фиксация в 10 % неутрален формалин: 12—
24 часа;
3.4.2.2. промиване на течаща вода;
3.4.2.3. обезводняване в спиртове с нарастваща кон-
центрация:
а) 50 %—само промиване;
б) 70 %—2 часа в термостат;
в) 96 %—2 часа на стайна температура;
г) 96 %—12 часа на стайна температура;
3.4.2.4. последователна двукратна обработка в аце-
тон (ксилол) по един час на стайна температура;
3.4.2.5. пропиване в течен парафин при 56 °С за 10—
14 часа;
3.4.2.6. включване в парафиново блокче;
3.4.2.7. рязане на биопсичните блокчета на микро-
том с изготвяне на срезове с дебелина 2 до 5 микрона;.
3.4.2.8. депарафиниране на срезовете:
а) престой в термостат—60 мин;
б) ксилол (neo-clear)—5 мин;
в) ксилол (neo-clear)—5 мин;
г) ксилол (neo-clear)—20 мин;
3.4.2.9. отнемане на ксилол (neo-clear) в низходяща
концентрационна поредица от алкохол:
а) 96 % спирт—1—2 мин;
б) 90 % спирт—1—2 мин;
в) 80 % спирт—1—2 мин;
г) 70 % спирт—1—2 мин;
3.4.2.10. вода—2 и повече мин;
3.4.2.11. рязане на материалите:
Условията за изработване на срезовете с необходи-
мата дебелина са:
—техническа изправност на микротомите и профе-
сионална сръчност и умение на лаборанта;
—дебелината на срезовете да бъде на биопсичен мате-
риал—4 микрона; на аутопсионен материал—6 микрона;
—специални инструкции за дебелината на срезове-
те са приложени към съответните тъкани;
Всички специални оцветявания и неоцветени пре-
парати се включват в poly-L-lysine; имунохистохимич-
ните срезовете се включват при температура под 58 °С;
всички декалцирани тъкани се включват също в poly-
L-lisine и се означават с “дек.”;
всички видове фиксации без формалина се отбеляз-
ват върху препаратите.
4. Диагностициране на биопсията от патолога.
Това е най-отговорният етап при биопсичното изс-
ледване, в който проличава професионалната роля на
патолога. Изискванията за диагностиката и докумен-
тирането на биопсичното изследване са приложени в
стандарти. Тази дейност е обект на качествен контрол,
за който е разработена програма, описана в раздел IХ.
5. Написване и изпращане на готовите отговори до
клиниките и амбулаторните кабинети.
• Биопсичният отговор се написва на машина (или
на ръка) в два екземпляра; желателно е въвеждането
му в компютър.
• Готовият биопсичен отговор съдържа подпис на
диагностициращия патолог и на началника на отделе-
нието (ако биопсията е консултирана с него), както и
датата на отговарянето на биопсията.
• Оригиналният отговор се изпраща в деня на отго-
варянето от дежурния санитар в отделението (или се
предава на куриер) срещу подпис от получаващия го
лекар или медицинска сестра.
6. Запазване и архивиране на документацията по
биопсичното изследване.
• Вторият екземпляр от биопсичното писмо се запаз-
ва в номерирани папки. Препаратите от биопсичните
изследвания се съхраняват в продължение на 10 години.
• Определени служители от центъра (отделението)
подреждат за съхранение парафиновите блокчета, хис-
тологичните и цитологичните препарати. Всички мате-
риали трябва да са на достъпно място, което при нужда
да осигури лесното им намиране.
7. Интраоперативно (гефрирно) изследване.
7.1. Същност. Интраоперативното (гефрирното) из-
следване се извършва с цел бърза и по възможност точ-
на диагноза на болестния процес в хода на оперативна-
та интервенция.
7.2. Методичен принцип. Изпратените за изследва-
не материали се режат на замразяващ микротом или
криостат. Последващата обработка включва поредица
от процедури, даващи като краен резултат изготвяне на
хистологичен препарат в рамките на 10—15 мин.
7.3. Област на приложение. Най-голямо приложе-
ние интраоперативната диагностика намира в тумор-
ната патология, при граничните, злокачествените или
съмнителните за такива новообразувания, тъй като от
хистологичната диагноза, която ще постави патологът,
до голяма степен зависи по-нататъшното поведение на
клинициста (най-вече хирурга).
Стандартизирана процедура при извършване на
спешна интраоперативна морфологична консултация
Спешната биопсична дейност има за задача до 20 мин
от постъпване на материала да изготви хистологична
диагноза и я предаде на клинициста. За осъществяване
на тази задача са необходими следните условия:
1. Лекарят, назначаващ биопсията, своевременно да
уведоми дежурния патолог, че ще бъде изпратен биоп-
сичен материал.
2. Взетата биопсия се доставя в патологоанатомич-
ното отделение в свежо състояние и се придружава от
попълнено искане за хистологично изследване (прило-
жение № 3).
3. Материалът за спешно биопсично изследване се
предава лично на дежурния лекар или лаборант срещу
подпис в журнала за биопсии, в който се попълват всички
необходими данни—име на лицето, донесло биопсията,
длъжност, час на предаване и описание на материала.