Държавен вестник, бр. 101, 2005 г., стр. 139

Б Р О Й  101
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  139
Подвижна фаза: ацетонитрил/ацетатен буфер
(2.15).
Скоростта на подвижната фаза през колоната
се нагласява на 2,0±0,5 cm3 (ml)/min. Детекторът
се настройва на 240 nm.
4.2.1. Стандартна крива.
В течния хроматограф (3.2) се дозират по 10 µl
от всеки от стандартните разтвори на консерван-
тите (2.17). За всеки разтвор се определя отноше-
нието между височината на пиковете на изследва-
ните консерванти към височината на пика на вът-
решния стандарт, получени от хроматограмите.
Построява се графика за всеки консервант, като се
нанасят отношенията на височините на пика спря-
мо съответните концентрации на всеки стандар-
тен разтвор.
Проверява се дали получените зависимости за
всеки стандартен разтвор са линейни.
4.2.2. Определяне.
В течния хроматограф се дозират 10 µl от екс-
тракта на пробата (4.1.1) и се записва хроматогра-
мата. Дозират се 10 µl от стандартния разтвор на
консерванти (2.17) и се записва хроматограмата.
Сравняват се получените хроматограми. Ако в
хроматограмата на екстракта на пробата (4.1.1)
няма пик с приблизително същото време на задър-
жане както това на 2-метоксибензоената кисели-
на (препоръчвания вътрешен стандарт), в течния
хроматограф се дозират 10 µl от екстракта на про-
бата с добавен вътрешен стандарт (4.1.2) и се за-
писва хроматограмата.
Ако на хроматограмата на екстракта от проба-
та (4.1.1) се наблюдава пречещ пик, който има
време на задържане като на 2-метоксибензоената
киселина, трябва да се избере друг подходящ вът-
решен стандарт. (Ако един от изследваните кон-
серванти отсъства от хроматограмата, този кон-
сервант може да бъде използван като вътрешен
стандарт.)
Получените хроматограми на стандартния раз-
твор и на разтвора на пробата трябва да отговарят
на следните изисквания:
—Разделянето на пиковете в най-лошо разде-
лената двойка трябва да бъде не по-малко от 0,90
(за дефиниция на коефициента на разделяне виж
фиг. 1).
Ако не е постигнато необходимото разделяне,
трябва да се използва по-ефективна колона или
друга по състав подвижна фаза, чийто подбор про-
дължава до задоволяване на изискванията.
—Коефициентът на асиметрия (AS) на всички
получени пикове трябва да бъде в интервала от 0,9
до 1,5 (за дефиниция на коефициента на асиметрия
виж фиг. 2). Препоръчва се хроматограмата за
определяне коефициента на асиметрия да се за-
писва при скорост най-малко 2 cm/min.
—Базовата линия трябва да бъде стабилна.
5. Изчисления
За изчисляване на концентрацията на кисели-
ните-консерванти в разтвора на пробата се използ-
ват отношенията на височините на пиковете на
изследваните консерванти към височината на пика
на вътрешния стандарт (2-метоксибензоена кисе-
лина) от стандартната крива.
Фиг. 1. Коефициент на разделяне на пиковете
Фиг. 2. Коефициент на асиметрия на пика
Съдържанието на бензоена киселина, 4-хидро-
ксибензоена киселина, сорбинова киселина или са-
лицилова киселина се изчислява в % (M/M) (xi) по
формулата:
100 Ч 20 Ч Мґ
Мґ
xi %(M/M) = –––––––– = –––– ,
106 Ч M
500 Ч M
където:
М е масата на изпитваната проба (4.1.2) в g;
М/ —концентрацията на консерванта в екстрак-
та на пробата (4.1.2), получена от стандартната
крива, в µg/cm3 (ml).
6. Повторяемост (1)
За съдържание на 4-хидроксибензоена кисели-
на 0,40 % разликата между резултатите от две ус-
поредни определяния на една и съща проба не тряб-
ва да надхвърля по абсолютна стойност 0,035 %.
За съдържание на бензоена киселина 0,50 %
разликата между резултатите от две успоредни
определяния на една и съща проба не трябва да
надхвърля по абсолютна стойност 0,050 %.
За съдържание на салицилова киселина 0,50 %
разликата между резултатите от две успоредни
определяния на една и съща проба не трябва да
надхвърля по абсолютна стойност 0,045 %.
За съдържание на сорбинова киселина 0,60 %
разликата между резултатите от две успоредни
определяния на една и съща проба не трябва да
надхвърля по абсолютна стойност 0,035 %.
7. Забележки
7.1. Резултатите от проведения тест за допус-
тими отклонения от методиката показват, че ко-
личеството сярна киселина, която се добавя при