Държавен вестник, бр. 73, 2016 г., стр. 52

СТР.  52	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
БРОЙ  73
инфекция. Това прави NS ELISA тестовете подходя-
щи за целите на ранната диагностика. Разработва-
нето на NS ELISA метод, който да е бърз и лесен 
за изпълнение и да осигурява детекция на вируса на 
шапа без значение от серотиповата му принадлеж-
ност, позволява разграничаване на ваксинираните от 
инфектирани или реконвалесцентни животни и има 
изключителна практическа стойност. Такъв метод е 
особено подходящ за целите на превантивния акти-
вен надзор на шапа особено в страни, в които не 
се прилага ваксинация като част от стратегията им 
за борба със заболяването. Той е особено полезен и 
когато се очаква проникване на вируси на шапа от 
различни серотипове, какъвто е случаят между Бъл-
гария и Турция. Азиатската част на Република Турция 
(Анадола) от години е ендемична по отношение на 
вируса на шапа и в нея едновременно циркулират 
до три различни серологични типове на вируса (О, 
А и Азия). Използването на тази техника в лабора-
торната диагностика на заболяването в България се 
обосновава с факта, че цялата популация от прежив-
ни животни у нас не подлежи на ваксинация срещу 
шап и наличието на 280-километровата обща грани-
ца с Република Турция, а откриването на NS ELISA 
позитивни серореагенти ще бъде сигурен сигнал за 
трансгранично навлизане и циркулация на инфекция 
от шап в страната.
Фиг. 3. Серологични методи за откриване на анти-
тела срещу вируса на шапа.
Лабораторни методи за доказване на вируса 
на шапа или неговия геном
Индиректна (двойна) „сандвич“ ELISA за 
доказване на шапен антиген в теренни проби 
(афти, везикули, везикулозна течност и т.н.). 
Методът дава възможност за директно опреде-
ляне на серотиповата принадлежност на изоли-
рания теренен щам, както и отдиференциране 
от вируса на везикулозната болест по свинете 
(SVD) (Ferris, N. P., Dawson, M. 1988 и Hamblin, 
C. и сътр., 1984).
Антиген ELISA техниката доказва 70 – 80 % 
от позитивните проби, като в същото време 
на изследване може да се определи и типа на 
вирусния щам (О, А, Asia-1, SAТ-1, SAТ-2, SAТ-
3). В диференциално диагностично отношение 
той е насочен и към определяне на антигена на 
вируса на везикулозната болест по прасетата.
Полимеразно-верижна реакция в реално 
време (Real time RT-PCR)
Това е бърз и съвременен метод за качест-
вено или количествено определяне в реално 
време на таргетна секвенция от генома на ви-
руса на шапа на базата на детекция на флуорес-
центен сигнал, излъчван от различни химични 
маркери. Отчитането на сигнала се извършва 
през цялото време на анализа и позволява сле-
дене на резултата в реално време, без да е не-
обходимо да се изчаква приключване процеса 
на амплификация (end-point analysis) на реак-
цията.
По такъв начин в зависимост от етапа на 
развитие на заболяването шап в лабораторията 
могат да се използват различни техники. По-
знаването им е важно за специалистите на те-
рена, за да могат те правилно да се ориентират 
и винаги да вземат и изпращат за изследване 
подходящите проби. Времевите прозорци, из-
ползваните техники и видът на пробите могат 
да се видят на таблица 3:
Таблица 3. Времеви прозорци за различните техники за откриване на шапа и вид на подходящите 
проби (ден 0 – ден на поява на лезиите)
Поява на лезиите
-1
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
....
....
....
Техника
Проба
Клетъчни 
култури
(Антиген 
Елайза)
Епител
Серум
Мляко
RT-PCR
Епител
Серум
Мляко
Антитела
Структурна Елайза
Неструктурна Елайза
Вирус неутрализация
Период за използване на съответната техника:
Сигурна специфична реакция 
Съмнителен резултат