Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 76

С Т Р .  76
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  109
3.9. ацетатен буферен разтвор, с = 0,01 mol/ l,
рН = 6,0—0,82 g натриев ацетат се разтварят
(3.7) в 700 ml вода (3.8) и се коригира стойност-
та на рН до 6 с оцетна киселина (6.3). Прехвър-
ля се в мерителна колба от 1000 ml, долива се до
отметката вода (3.6) и се смесва.
3.10. Мобилна фаза за HPLC.
Смесват се 825 ml разтвор на ацетатен буфер
(3.9) със 175 ml ацетонитрил (3.2). Филтрира се
през филтър 0,22 µm (4.5) и разтворът се дегази-
ра (напр. чрез ултразвукова обработка в про-
дължение на 10 min).
3.11.Еталонна субстанция
Чист карбадокс—метил 3-(2-хиноксалинил-
метилен)карбазат N1,N4-диоксид, Е 850.
3.11.1. Изходен еталонен разтвор на карба-
докс, 100 µg/ml (вж. т. 5 Процедура)
С точност до 0,1 mg се претеглят 25 mg ета-
лонна субстанция карбадокс (3.11) в мерителна
колба от 250 ml. Разтваря се в метанол-ацето-
нитрил (3.5) в ултразвукова вана (4.7). След ул-
тразвуковото третиране разтворът се довежда
до стайна температура, долива се до отметката
с метанол-ацетонитрил (3.5) и се смесва. Кол-
бата се обвива с алуминиево фолио или се из-
ползва колба от тъмно стъкло и се съхранява в
хладилник. При температура под 4 °С разтво-
рът е стабилен в продължение на един месец.
3.11.2. Калибриращи разтвори
2, 5, 10 и 20 ml от изходния еталонен разтвор
се прехвърлят (3.11.1) в няколко калибрирани
колби от 100 ml. Добавят се 30 ml вода, добавя
се до отметката метанол-ацетонитрил (3.5) и се
смесва. Колбата се обвива с алуминиево фолио.
Тези разтвори отговарят съответно на 2, 5, 10 и
20 µg/ml карбадокс. Калибриращите разтвори
се приготвят непосредствено преди употреба.
Забележка. За определяне на карбадокс в животински
храни, съдържащи по-малко от 10 mg/kg, се приготвят
калибриращи разтвори с концентрация под 2,0 µg/ml.
3.12.Смес вода-[метанол-ацетонитрил] (3.5),
300 + 700 (v + v)
Смесват се 300 ml вода със 700 ml смес на
метанол-ацетонитрил (3.5).
4. Апарати
4.1. лабораторен вибратор или магнитна
бъркалка;
4.2. стъклено влакнеста филтърна хартия
(Whatman GF/A или еквивалентен);
4.3. стъклена колона (дължина 300 до 400
mm, вътрешен диаметър приблизително 10 mm)
със синтерована стъклена фрита и отвеждащ
клапан.
Забележка. Могат да бъдат използвани също стъкле-
на колона със спирателен кран или стъклена колона с
конусен край. В този случай в долния край се слага тапа
от стъклена вата и се уплътнява с помощта на стъклена
пречка.
4.4. HPLC оборудване с инжекционна систе-
ма, подходяща за инжектиране на обеми от 20 µl;
4.4.1 течна хроматографска колона: 300 mm
Ч 4 mm, С18,10 µm пълнеж или еквивалентна;
4.4.2. УВ детектор с регулиране на дължина-
та на вълната или диоден полеви детектор, ра-
ботещи в обхвата 225—400 nm;
4.4. мембранен филтър, 0,22 µm;
4.5. мембранен филтър, 0,45 µm;
4.6. ултразвукова вана.
5. Процедура
Забележка. Карбадоксът е чувствителен на светли-
на. Всички процедури се извършват при намалена свет-
лина или се използват тъмни стъкленици или стъклени-
ци, увити в алуминиево фолио.
5.1. Общи положения
5.1.1. Празна проба храна
За осъществяване на теста на възстановява-
не (5.1.2) се анализира празна проба храна,  за
да се провери отсъствието на карбадокс и на
субстанции, които оказват влияние. Празната
проба храна трябва да бъде подобна по вид на
пробата и при анализа не трябва да се открият
карбадокс или субстанции, които оказват въз-
действие.
5.1.2. Тест за възстановяване
Извършва се тест за възстановяване чрез
анализиране на празна проба храна, която е била
подсилена чрез добавяне на  количество карба-
докс, подобно на наличното в пробата. За да се
получи концентрация 50 mg/kg, 15 ml от изход-
ния еталонен разтвор (3.11.1) се  прехвърлят в
ерленмайерова колба от 200 ml и разтворът се
изпарява в азотен поток до около 0,5 ml. При-
бавят се 10 g от празната проба храна, разбър-
ква се добре и се оставя за 10 min, като отново
се разбърква няколко пъти, преди да се пристъ-
пи към екстракцията (5.2).
Алтернативно, ако няма на разположение
празна проба храна, подобна на пробата (вж.
5.1.1), тестът на възстановяване може да се
извърши чрез метода добавяне на еталон. В този
случай пробата, която трябва да се анализира,
се подсилва с количество карбадокс, подобно
на това, което вече се съдържа в пробата. Тази
проба се анализира заедно с неподсилената
проба и възстановяването се изчислява чрез
изваждане.
5.2. Екстракция
5.2.1. Животински храни
С точност до 0,01 g се претеглят приблизи-
телно 10 g от пробата и се прехвърлят в ерлен-
майерова колба от 200 ml. Добавят се 15 ml вода,
смесва се и се уравновесява за 5 min. Добавят се
35 ml метанол-ацетонитрил (3.5), слага се запу-
шалка и се разтръсква в продължение на 30 min
на вибратора или се разбърква с магнитната
бъркалка (4.1). Разтворът се филтрира през
стъклено влакнеста филтърна хартия (4.2). Този
разтвор се запазва за етапа на пречистване (5.3).
5.2.2. Предварително приготвени смеси (0,1
до 2% ампролиум) и животински храни
С точност до 0,01 g се претегля приблизително
1 g от несмляната проба и се прехвърля в ер-
ленмайерова колба от 200 ml. Добавят се 15 ml
вода, смесва се и се уравновесява за 5 min. Доба-
вят се 35 ml метанол-ацетонитрил (3.5), слага се
запушалка и се разтръсква в продължение на 30
min на вибратора или се разбърка с магнитната
бъркалка (4.1). Разтворът се филтрира през стък-
лено влакнеста филтърна хартия (4.2). Отпипе-