Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 61

Б Р О Й  109
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  61
6. Стандартни решения
Разтваря се точно претеглено количество от
стандартната субстанция (4.8) в метанол (4.4),
така че да се получи основен разтвор, съдър-
жащ 800 µg натриев монензин на 1 ml. Съхранен
в затапена колба при температура 4 °С, този
разтвор остава стабилен в продължение на до
две седмици.
От този фондов разтвор се подготвят пос-
редством последователно разреждане с 50 %
метанол (4.6) следните разтвори:
S8
8 mg/l
S4
4 mg/l
S2
2 mg/l
S1
1 mg/l
7. Подготвяне на екстракта
7.1. Екстрахиране
7.1.1. Предварителни смеси
Претегля се количество от пробата с тегло
2 g, добавят се 100 ml 90 % метанол (4.5), хомо-
генизира се и се центрофугира в продължение
на няколко min. Изплувалият отгоре разтвор се
разрежда с 50 % метанол (4.6), така че да се
получи очакваното съдържание на натриев
монензин от 8 µg/ml (= U8).
7.1.2. Храни за животни с ниво на натриевия
монензин не по-малко от 50 частици на хиляда
Претегля се количество от пробата с тегло
от 10 до 20 g, добавят се 100 ml 90 % метанол
(4.5), хомогенизира се в продължение на някол-
ко min и разтворът се оставя да се утаи.
Вкарва се запушалка от стъклен памук в
тесния край на една стъклена тръбичка (5.2) и
се добавя алуминиев окис (4.7), като леко се
почуква, докато колоната достигне височина
75 до 80 mm.
Екстрактът се прелива върху колона от алу-
миниевия окис и филтратът се събира. Разреж-
дат се 30 ml от филтрата до 50 ml с вода. След
това се разрежда с 50 % метанол (4.6), така че
да се получи очакваното съдържание на натри-
ев монензин от 8 µg/ml (= U8).
7.1.3. Храни за животни с ниво на натриевия
монензин, по-малко от 50 частици на хиляда
(до една граница от 10 части на хиляда)
Претегля се проба с тегло от 10 до 20 g, до-
бавят се 100 ml 90 % метанол (4.5) и се хомоге-
низира в продължение на 15 min. Центрофугира
се, докато разтворът стане прозрачен.
За една проба, съдържаща 20 частици на
хиляда (ppm) монензин натрии, се взимат 40 ml
от изплувалата на повърхността течност. За
проба, съдържаща 10 ppm, се взимат 80 ml и се
изпаряват до изсъхване под вакуум върху рота-
ционен изпарител (5.1) при температура не
повече от 40 °С. Остатъкът се разтваря в 10 ml
90 % метанол (4.5).
Вкарва се запушалка от стъклен памук в
тесния край на една стъклена тръбичка (5.3) и
се добавя алуминиев окис (4.7), като леко се
почуква, докато стълбът достигне височина 75
до 80 mm.
Прелива се метаноловият разтвор на оста-
тъка върху стълба от алуминиевия окис и се
събира филтратът. Стълбът се измива с 10 ml
90 % метанол (4.5) и измитите разтвори се ком-
бинират с филтрата.
Разтворът се изпарява до изсъхване под ва-
куум върху ротационен изпарител (5.1) при тем-
пература не повече от 40 °С. Разтваря се остатъ-
кът в 10 ml дехидриран метанол (4.4) и се доба-
вя вода, докато се получи 20 ml. Разтворът се
центрофугира при честота на въртене не по-
малко от 4000 оборота/min в продължение на
поне 5 min. След това се прави разреждане с
50 % метанол (4.6), така че да се получи очаква-
ното съдържание на натриев монензин 8 µg/ml
(= U8).
7.2. Разтвори на пробите за анализи
От разтвор U8 се подготвят разтвори U4  (очак-
вано съдържание: 4 µg/ml), U2 (очаквано съдър-
жание: 2 µg/ml) и U1  (очаквано съдържание: 1 µg/
ml) посредством последователно разреждане
(1 + 1) с 50 % разтвор на метанол (4.6).
8. Процедура за анализиране на пробата
8.1. Посявка върху средата на пробата
Прави се посявка върху пробната среда (4.2)
със съдържащата спори суспензия (3.2) при тем-
пература 50 до 60 °С. Посредством предвари-
телни опити върху панички с пробна среда (4.2)
се определя количеството суспензия със спори,
което ще е необходимо за получаването на мак-
симално големи и чисти зони на инхибиране
при различните концентрации на натриев мо-
нензин.
8.2. Подготвяне на паничките
Осъществява се дифузия през агара върху
панички с четирите концентрации на стандар-
тния разтвор (S8, S4, S2, S1) и четирите концен-
трации на пробния разтвор (U8, U4, U2, U1).
Четирите концентрации на екстракта и стан-
дарта е необходимо да се поставят във всяка
паничка. За тази цел се избират достатъчно
големи панички, които позволяват да бъдат
направени поне осем отвора с диаметър 10 до 13
mm с разстояние не по-малко от 30 mm между
центровете в средата от агар. Опитът се про-
вежда върху панички, състоящи се от лист стък-
ло с покрит алуминий или пластмасов пръстен,
поставен отгоре, с диаметър 200 mm и височина
20 mm.
В паничките се налива количество от среда-
та (4.2), върху което е било направена посявка
в съответствие с т. 8.1, така че да се получи слой
с дебелина около 2 mm (60 mm за паничка с
дебелина 200 mm). Оставя се така, че да застане
в равна позиция, правят се отворите и в тях се
поставят точно измерени обеми от пробата за
анализи и стандартните разтвори (между 0,710
и 0,715 ml за всеки отвор, в зависимост от диа-
метъра). Всяка концентрация се прилага поне
четири пъти, така че всяко определяне да бъде
обект на оценката на 32 зони на инхибиране.
8.3. Инкубация (престой)