Държавен вестник, бр. 23, 2010 г., стр. 75

БРОЙ  23	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
СТР.  75  
б) даден тест серум е отрицателен, ако той не 
образува специфична утаечна линия с антигена на 
ЕЛГ и не изкривява линията на контролния серум;
в) реакцията не би могла да се разглежда като 
определяща, ако тя:
i) отчетливо изкривява линията на контролния 
серум в посока на антигена на вируса на ЕЛГ, 
без при това да формира видима утаечна линия 
с антигена; или
ii) не може да бъде отчетена нито като поло­
жителна, нито като отрицателна.
При неопределените реакции тестовете могат 
да бъдат повторени и да се използва концентри­
ран серум.
10. Може да се използва каквато и да е друга 
конфигурация или схема на разпределение, при 
условие че позволява като положителен да се 
отчете серум E05, разреден в съотношение 1:10 в 
отрицателен серум.
Б. МЕТОД ЗА СТАНДАРТИЗИРАНЕ НА 
АНТИГЕН
1. Необходими разтвори и материали:
а) 40 ml от 1,6 % агароза в буферен разтвор 
трис/HCl, моларност 0,05 M, pH 7,2 с 8,5 % NaCl;
б) 15 ml от серум от левкоза по говедата, 
съдържащ антитяло само към гликопротеини 
на вируса на левкозата по говедата, разреден в 
съотношение 1:10 в буферен разтвор трис/HCl, 
моларност 0,05 M, pH 7,2 с 8,5 % NaCl;
в) 15 ml от серум от левкоза по говедата, съдър­
жащ антитяло само към гликопротеини на вируса 
на левкозата по говедата, разреден в съотношение 
1:5 в буферен разтвор трис/HCl, моларност 0,05 M, 
pH 7,2 с 8,5 % NaCl;
г) четири пластмасови петриеви панички с 
диаметър 85 mm;
д) пробивно острие с диаметър между 4 и 6 mm;
е) референтен антиген;
ж) антиген, който подлежи на стандартизиране;
з) водна баня (56 °C).
2. Процедура:
Разтваря се агарозата (1,6 %) в буферния разтвор 
трис/HCl, като внимателно се загрява до 100 °С. 
Поставя се във водна баня при 56 °C за около 
един час. Разтворите на серума на левкозата по 
говедата също трябва да се поставят във водна 
баня при 56 °C.
Разбъркват се 15 ml от загретия на 56 °С агаро­
зен разтвор с 15 ml серум от левкоза по говедата 
(1:10), бързо се разклащат и се изливат в обем 
от по 15 ml във всяка една от двете петриеви па­
нички. Процедурата се повтаря и със серума от 
левкоза по говедата, разреден в съотношение 1:5.
Когато агарозата се е втвърдила, в нея се правят 
дупки, както следва:
Петриева панич-	
Петриева панич-
ка № 1 Серум 1:10	 ка № 2 Серум 1:10 
	
Петриева панич-	
Петриева панич-
ка № 3 Серум 1:5	
ка № 4 Серум 1:5 
	
3. Добавяне на антиген:
а) петриеви панички 1 и 3:
i) ямка A – неразреден референтен антиген;
ii) ямка B – разреден в съотношение 1:2 ре­
ферентен антиген;
iii) ямки С и Е – референтен антиген;
iv) ямка D – неразреден тест антиген;
б) петриеви панички 2 и 4:
i) ямка A – неразреден тест антиген;
ii) ямка B – разреден в съотношение 1:2 тест 
антиген;
iii) ямка C – разреден в съотношение 1:4 тест 
антиген;
iv) ямка D – разреден в съотношение 1:8 тест 
антиген.
4. Допълнителни инструкции:
а) за да може да се получи оптимално ута­
яване, експериментът трябва да се осъществи с 
два серумни разтвора (разредени в съотношение 
1:5 и 1:10);
б) ако диаметърът на утайката е прекалено 
малък и при двата разтвора, серумът трябва да 
бъде разреден допълнително;
в) ако диаметърът на утайката при двата 
разтвора е прекалено голям и слаб, трябва да се 
избере серум с по-ниска степен на разреждане;
г) крайната концентрация на агарозата трябва 
да бъде 0,8 %; тази на серумите – съответно 5 % 
и 10 %;
д) отбелязват се измерените диаметри в след­
ната координатна система: работният титър на 
тествания антиген представлява неговия разтвор, 
при който се получава диаметър, равен на полу­
чения с референтния антиген.
Диаметър (в mm)
Разтвори на антигени
В. ЕНЗИМОСВЪРЗАН ИМУНОСОРБЕНТЕН 
АНАЛИТИЧЕН ТЕСТ (ELISA) ЗА ОТКРИВАНЕ 
НА ЕНЗООТИЧНА ЛЕВКОЗА ПО ГОВЕДАТА