Държавен вестник, бр. 23, 2010 г., стр. 74

СТР.  74	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
БРОЙ  23
3.1.3.3. Дебелината на кожата на мястото на 
инжекцията се измерва с шублер преди инжекти­
ране и при повторния преглед.
3.1.3.4. Интерпретиране на резултатите
Силната реакция се забелязва лесно по по­
дуването и втвърдяването на съответното място.
Удебеляване на кожата от 1,5 до 2 mm се смята 
за положителна реакция на BST.
3.2. Конкурентен имуноензимен метод
(кЕЛАЙЗА)
3.2.1. Условия за използването на кЕЛАЙЗА
кЕЛАЙЗА не се използва за целите на серти­
фицирането за търговия в рамките на Общността.
Говеда, тествани с положителен резултат при 
един от другите серологични тестове, определени 
в това приложение, могат да бъдат подложени на 
кЕЛАЙЗА, за да се потвърди интерпретирането 
на резултатите от другите серологични тестове, 
особено в случаите, когато не може да се изклю­
чи кръстосана реакция между антитела и други 
бактерии в официално свободно или в свободно 
от бруцелоза стадо говеда или за да се елимини­
рат реакции, дължащи се на остатъчни антитела, 
свързани с ваксинация с ваксина S19.
3.2.2. Процедура на теста
Тестът се изпълнява в съответствие с глава 2.4.3, 
раздел В, точка 2 от Наръчника по диагностични 
тестове и ваксини за сухоземни животни на OIE, 
шесто издание, 2008 г.
4. НАЦИОНАЛНА РЕФЕФЕРЕНТНА ЛАБО­
РАТОРИЯ
4.1. Задачи и отговорности
Националната референтна лаборатория, оп­
ределена в съответствие с член 10, отговаря за:
а) одобрението на резултатите от валидираните 
проучвания, които показват достоверността на 
използваните методи в Р България;
б) определянето на максимален брой проби, 
които се вземат при използването на  изследвания 
чрез ЕЛАЙЗА метод;
в) калибриране на вторичните референтни на­
ционални серумни стандарти („работни стандарти“) 
спрямо първоначалните международни стандарти, 
посочени в т. 2.1;
д) качествени проверки на всички антигени 
и групи ЕЛАЙЗА методи, които се използват в 
държавите членки;
e) съвместно сътрудничество с националните 
референтни лаборатории за бруцелоза на държа­
вите членки.
Приложение № 4
към чл. 40
ИЗСЛЕДВАНИЯ ЗА ЕНЗООТИЧНА ЛЕВКОЗА 
ПО ГОВЕДАТА
Тестове за ензоотична левкоза по говедата се 
извършват чрез агар гел имунно-дифузионен тест 
(AGID) при условията, описани в раздели A и Б, 
или чрез ензимосвързан имуносорбентен анализ 
(ELISA) при условията, описани в раздел В. 
Агар гел имунно-дифузионният метод може 
да бъде използван само за изследване на отделни 
проби. Ако резултатите от теста бъдат оспорени, 
като бъдат надлежно представени доказателства, 
се прави допълнителна проверка посредством агар 
гел имунно-дифузионен тест.
AGID и ELISA се стандартизират спрямо E05 
серум, който е официалният стандартен серум на 
ЕС и се доставя от:
Friedrich-Loeffler-Institut
Federal Research Institute for Animal Health
Референтна лаборатория на OIE за ензоотична 
левкоза по говедата (ЕЛГ)
Südufer 10, 17493 Greifswald – Insel Riems, 
Германия
А. АГАР ГЕЛ ИМУННО-ДИФУЗИОНЕН ТЕСТ 
ЗА ЕНЗООТИЧНА ЛЕВКОЗА ПО ГОВЕДАТА
1. Антигенът, който следва да бъде използван в 
теста, трябва да съдържа гликопротеин на левкозен 
вирус по говедата. Антигенът е стандартизиран 
спрямо E05 серум.
2. Националната референтна лаборатория, опре­
делена в съответствие с член 10 за координиране 
на стандартите и методите за диагностициране 
на тестовете за ензоотична левкоза по говедата, 
следва да отговаря за калибрирането на стандарт­
ните работни антигени на лабораторията спрямо 
официалния ЕО стандартен серум (EI серум), 
осигурен от Националния ветеринарен институт 
към Техническия университет на Дания.
3. Стандартните антигени, използвани в лабо­
раторията, следва да бъдат предавани най-малко 
веднъж годишно на други лаборатории, в които 
се извършват изследвания за ЕЛГ, за тестване 
спрямо официалния ЕО стандартен серум. Освен 
чрез това стандартизиране използваният антиген 
може да се калибрира в съответствие с метода, 
описан в буква Б.
4. Реагентите за теста се състоят от:
а) антиген: антиген, който трябва да съдържа 
специфичен гликопротеин от вируса на ензоотич­
на левкоза по говедата, стандартизиран спрямо 
E05 серум;
б) тест серума;
в) известен положителен контролен серум;
г) агар гел:
– 0,8 % агар;
– 8,5 % NaCl;
– трис буферен разтвор, моларност 0,05 М, 
рН 7,2;
– 15 ml от този агар трябва да се сложат в пе­
триева паничка с диаметър 85 mm, като в резултат 
се получава 2,6 mm дълбок агарен слой.
5. В агарния слой до дъното на паничката 
трябва да се изреже тест форма, състояща се от 
седем свободни от влага ямки; формата трябва да 
се състои от една централна ямка и шест ямки в 
кръг около нея.
Диаметър на централна ямка: 4 mm.
Диаметър на периферните ямки: 6 mm.
Разстояние между централната и периферните 
ямки: 3 mm.
6. Централната ямка трябва да бъде напълнена 
със стандартния антиген. Периферните ямки с 
номера 1 и 4, посочени в раздел Б.3, се запълват 
с известния положителен серум; ямки 2, 3, 5 и 6 
се запълват с тест серумите. Ямките се запълват 
до изчезване на мениска.
7. Това води до получаване на следните ко­
личества:
– антиген: 32 μl;
– контролен серум: 73 μl;
– тест серум: 73 μl.
8. Инкубирането трябва да е с продължител­
ност 72 часа при стайна температура (между 20 
и 27 °С) в затворена влажна камера.
9. Тестът може да се отчете на 24 и 48 часа, но 
окончателният резултат не може да бъде получен 
по-рано от 72 часа:
а) даден тест серум е положителен, ако той 
образува специфична утаечна линия с антигена на 
вируса на левкозата по говедата (ЕЛГ) и образува 
непрекъсната идентична линия с контролния серум;