Държавен вестник, бр. 39, 2006 г., стр. 30

С Т Р .  30
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  39
24.4. Всяко несъответствие между данните
от морфологичното и имунофенотипното изс-
ледване следва да бъде изяснено.
 24.5. Препоръчва се при невъзможност за
анализиране на пробата веднага след получава-
нето є морфологичното изследване да се извър-
ши два пъти—веднъж след получаване на про-
бата и втори път—непосредствено преди мар-
кирането є.
24.6. Имунофенотипизирането на левкемии
и лимфоми с флоуцитометрия се провежда
минимум с валидирана двуцветна имунофлуо-
ресценция (4-параметърна флоуцитометрия). С
използването на 5- или 6-параметърен анализ
се увеличава възможността за идентифициране
и характеризиране на абнормна популация в
рамките на хетерогенната проба.
24.7. Резултатите при повтарящото се анти-
тяло (антитела) в рамките на тест панела на
пациента са устойчиви (в границите на 5%),
освен ако рутинно не се получава по-голяма
разлика поради използването на различни флу-
оресцентни маркери или антитела, разпознава-
щи различни антигенни епитопи.
24.8. Тест панелът се подбира така, че да
включва поне един антиген с ярка експресия
върху повечето клетки в пробата, какъвто е CD45.
24.9. Резултатите се представят като процент
положително маркирани клетки в електронния
прозорец на предполагаемите неопластични
клетки и включват коментар за линейната при-
надлежност и степен на съзряване.
24.10. При получаване на абнормална ре-
активност (по-висок или по-нисък интензи-
тет на светене от наблюдавания върху нор-
мални клетки, аберантно съчетаване на ли-
нейно-асоциирани антигени и др.) резултатът
трябва да включва и описание (слабо или с
нисък интензитет и/или ярко или с висок ин-
тензитет, линейно-кръстосана или асинхрон-
на експресия и т.н.).
25. Флоуцитометрично определяне на броя
CD34(+) хемопоетични стволови клетки.
25.1. Лабораторията е в състояние да извър-
шва определяне на броя CD34(+) хемопоетич-
ни стволови клетки в кръв, костен мозък или
кордална кръв чрез флоуцитометрия.
25.2. Определянето на броя CD34(+) хемо-
поетични стволови клетки с флоуцитометрия
се провежда със съответно валидирана дву- или
трицветна имунофлуоресценция.
25.3. Определянето на броя CD34(+) хемопо-
етични стволови клетки чрез флоуцитометрия
не изисква включване на изотипна контрола.
25.4. Всяко двуцветно определяне на броя
CD34(+) хемопоетични стволови клетки чрез
флоуцитометрия включва CD45 и CD34 ан-
титела.
25.5. За определяне на броя CD34(+) хемо-
поетични стволови клетки чрез флоуцитомет-
рия се използват CD34 антитела само от клас II,
конюгирани с фикоеритрин, или клас III неза-
висимо от вида на конюгата.
25.6. За определяне на броя CD34(+) хемо-
поетични стволови клетки чрез флоуцитомет-
рия се използват CD45 антитела, които устано-
вяват не само всички изоформи, но и всички
гликоформи на CD45 антигена.
25.7. Анализът включва минимум 100
CD34(+)-положителни събития или не по-мал-
ко от 75 000 CD45(+)-положителни събития във
всяка епруветка.
25.8. Анализът се осъществява в две успо-
редно маркирани проби от един и същ клини-
чен материал и броят CD34(+) хемопоетични
стволови клетки се определя като средна стой-
ност от двата резултата.
25.9. Определянето на броя CD34(+) хемо-
поетични стволови клетки чрез флоуцитомет-
рия изисква стратегия на последователно опре-
деляне на електронни прозорци за анализ:
25.9.1. за анализ се използва CD45/SSC про-
зорец, базиран на слабо светеща CD45(+) попу-
лация с нисък SSC;
25.9.2. използва се CD34/SSC прозорец, ба-
зиран на силно светеща CD34(+) популация с
нисък SSC;
25.9.3. използва се FSC/SSC прозорец, бази-
ран на популация с нисък SSC и нисък, но не по-
нисък от този на лимфоцитите FSC;
25.9.4. определя се популация хемопоетични
клетки със следните характеристики: нисък SSC
и нисък FSC, но не по-нисък от този на лимфо-
цитите, силно светеща CD34(+) и слабо свете-
ща CD45(+).
25.10. Резултатът се представя като процент
CD34(+) хемопоетични стволови клетки, опре-
делен на базата на броя CD34(+) събития, отго-
варящи на критериите в 27.9.4, и броя CD45(+)
събития (и в двата случая представени като
средни стойности от анализа на две успоредно
маркирани проби).
25.11. Лабораторията има възможности за
броене на бели клетки и ДКК, необходими за
изчисление на абсолютния брой на CD34(+)
хемопоетични стволови клекти. Абсолютният
брой на CD34(+) хемопоетични стволови клет-
ки може да се калкулира и чрез индиректен
метод с частици.
26. Флоуцитометрично определяне на ин
витро алерген специфична активация / деграну-
лация на базофили.
26.1. Лабораторията е в състояние да опре-
деля ин витро алерген специфична активация/
дегранулация на базофилни гранулоцити чрез
флоуцитометрия.
26.2. Пациентите, тестирани ин витро, не
трябва да са приемали най-малко до 48 часа
преди взимането на кръвната проба антиалер-
гични лекарствени средства, като антихистами-
ни, или да са преустановили преди два месеца
приема на кортикостероиди.
26.3. На етапа стимулация на базофилите е
недопустимо замърсяване на кръвните проби с
въздушни алергени. Ин витро активацията се
извършва в чисти помещения и закрити боксове.