Държавен вестник, бр. 68, 2014 г., стр. 95

БРОЙ  68	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
СТР.  95  
Изчисляват се съотношенията на височината 
на пика на изследваните консерванти към тези 
на вътрешния стандарт и се проверява дали за 
стандартните разтвори, използвани в проце­
дурата за калибриране, се получава линейна 
зависимост.
Получените хроматограми на стандартния 
разтвор и на разтвора на пробата трябва да 
отговарят на следните изисквания:
а) Разделянето на пиковете (р) на най-лошо 
разделената двойка трябва да бъде не по-мал­
ко от 0,90 (за дефиниция на пиково разделяне 
виж фиг. 1).
Ако не е постигнато необходимото разделяне, 
трябва да се използва по-ефективна колона или 
друга по състав подвижна фаза.
б) Коефициентът на асиметрия (As) на всички 
получени пикове трябва да бъде в интервала 
от 0,9 до 1,5 (за дефиницията на коефициент на 
асиметрия виж фиг. 2).
Препоръчва се хроматограмата за определяне 
коефициента на асиметрия да се записва при 
скорост най-малко 2 cm/min.
в) Базовата линия трябва да е стабилна.
7. Изчисление
Изчисляването на концентрациите на кон­
сервантите в разтвора на пробата се извършва 
по стандартната крива (т. 6.2.2) и съотноше­
нията на височините на пиковете на изслед­
ваните консерванти към тази на вътрешния 
стандарт. Съдържанието на 2-феноксиетанол, 
1-феноксипропан-2-ол, метил 4-хидроксибен­
зоат, етил 4-хидроксибензоат, пропил 4-хидро­
ксибензоат, бутил 4-хидроксибензоат и бензил 
4-хидроксибензоат (Wi) се изчисляват като % 
(М/М) по формулата:
 
,
където:
bi е концентрацията на консерванта i в разтво­
ра на пробата, отчетена по стандартната крива 
в µg/dm3 (µg/l);
М – масата на изпитваната проба в g.
8. Повторяемост*
Виж т. 10.5.
*Забележка. Виж ISO 5725. 
Фигура 1.
Коефициент на разделяне на пиковете
Фигура 2.
Коефициент на асиметрия на пика
9. Възпроизводимост *
Виж 10.5.
*Забележка. Виж ISO 5725.
10. Забележки:
10.1. Стационарна фаза
При ВЕТХ определянето на задържането на 
веществата от пробата зависи в голяма степен 
от вида, марката и предварителната подготовка 
на неподвижната фаза. Изборът на колоната, 
която ще се използва за разделяне на изслед­
ваните консерванти, се решава от получените 
резултати за стандартните разтвори (виж т. 6.2.3). 
Други подходящи неподвижни фази за пълнеж 
на колоната са Hypersil ODS и Zorbax ODS. 
Препоръчаният състав на подвижната фаза 
също може да се оптимизира, за да се получи 
необходимото разделяне.
10.2. Дължина на вълната, при която се из­
вършва определянето.
Проверката за годността на описаната методи­
ка показва, че известна промяна в дължината на 
вълната на определяне може да окаже значителен 
ефект върху резултата, поради което този пара­
метър трябва да бъде внимателно контролиран 
при провеждане на анализа.
10.3. Пречещи влияния
При посочените условия от пробата се 
елуират и много други съединения, като кон­
серванти и козметични добавки. Времената 
на задържане на голям брой консерванти, 
описани в Приложение № V на Регламент (ЕО) 
№ 1223/2009, са цитирани в N.de Kruijf, m.A.H. 
Rijk, L.A.Pranato-Soetardhi и A. Schouten. Оп­
ределяне на консерванти в козметични проду­
кти. ІІ Високоефективна течнохроматографска 
процедура за идентифициране на консерванти 
в козметични продукти (J.Chromatography 
1989, 469, 317-318).
10.4. За да се избере подходяща аналитична 
колона, може да се използва подходяща колона 
гард.
10.5. Методът е изпитан от девет лаборато­
рии – участници, всяка от които е анализирала 
по три проби. Средните стойности от всички 
лаборатории в % М/М (m) повторяемост (r) и 
възпроизводимост (R) за трите проби са посо­
чени в таблицата: