Държавен вестник, бр. 31, 2008 г., стр. 27

Б Р О Й  31
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  27
10. Антигените могат да бъдат доставяни в
концентрирано състояние, при условие че факто-
рът на разреждане, който ще бъде използван, е
посочен на етикета на епруветката.
В. Ринг тест
1. Ринг тестът се провежда върху съдържание-
то на всеки бидон мляко или върху съдържанието
на всяка цистерна за мляко от фермата.
2. Стандартният антиген, който се използва,
трябва да произхожда от един от институтите, из-
броени в раздел A, т. 9, буква а—й. Препоръчва се
антигените да бъдат стандартизирани съгласно
препоръките на СЗО/ФАО.
3. Антигенът може да бъде от щам само с хема-
токсилин или тетразолиум; предпочита се изпол-
зването на хематоксилин.
4. Ако не е използвано консервиране, тестът
за реакция се извършва между 18 и 24 h от взима-
нето на пробата от кравата. Ако млякото се тес-
тва по-късно от 24 h след взимане на пробата,
тогава се използва консервация; формалин или
живачен хлорид могат да бъдат използвани като
консерванти и ако се използва едно от двете, тес-
тът се извършва в рамките на 14 дни от деня на
вземане на пробата. Формалин може да бъде до-
бавен, за да даде финална концентрация в млеч-
ната проба 0,2 % и в такъв случай съотношени-
ето между количеството мляко и разтвора на фор-
малин е най-малко 10 към 1. Разтвор от живачен
хлорид може да бъде използван вместо форма-
лин, за да даде финална концентрация в млякото
0,2 % и в такъв случай съотношението между
количеството мляко и разтвора на живачен хло-
рид трябва да е 10 към 1.
5. Тестът се изпълнява, като се използва един
от следните методи:
—върху колона от мляко най-малко 25 mm ви-
сока и върху обем от мляко 1 ml, към което е било
добавено 0,03 ml от един от стандартизираните
щамови антигени,
—върху колона от мляко най-малко 25 mm ви-
сока и върху обем от мляко 1 ml, към което е доба-
вено 0,05 ml от един от стандартизираните щамови
антигени,
—върху обем от мляко 8 ml, към което е доба-
вено 0,08 ml от един от стандартизираните щамови
антигени,
—върху колона от мляко най-малко 25 mm ви-
сока и върху обем от мляко 2 ml, към което е доба-
вено 0,05 ml от един от стандартизираните щамови
антигени.
6. Сместа от мляко и антигени се инкубира при
37 °C за не по-малко от 45 min и не повече от 60 min.
Тестът се отчита в рамките на 15 min от изважда-
нето от инкубатора.
7. Реакцията се отчита съгласно следните кри-
терии:
а) отрицателна реакция: оцветено мляко, без-
цветна сметана;
б) положителна реакция: идентично оцветени
мляко и сметана или безцветно мляко и оцветена
сметана.
Г. Тест с буфериран бруцелозен антиген
Буферираният бруцелозен антиген тест може
да бъде изпълнен по един от следните методи:
а) Ръчен тест
1. Стандартният серум е вторият междунаро-
ден стандартен серум анти-brucella abortus, който
се доставя от Ветеринарната лабораторна агенция,
Addlestone, Weybridge, Англия.
2. Антигенът се приготвя, без да се посочва
клетъчната концентрация, но неговата чувствител-
ност се стандартизира по отношение на втория
международен стандартен анти-brucella abortus
серум по такъв начин, че антигенът да произведе
положителна реакция при разреждане на серума
1:47,5 и отрицателна реакция с разреждане 1:55.
3. Антигенът се суспензира в буфериран бруце-
лозен антиген разредител при pH от 3,65 ± 0,5 и
може да бъде извлечен щам чрез употребата на
розов бенгалски оцветител.
4. За приготвяне на антигена се използва
Weybridge щам № 99 или USDA 1119 или всеки щам
с еквивалентна чувствителност.
5. За запазване на щама в лабораторията и за
произвеждане на антигена се използва култивира-
ща среда, която не стимулира бактериалното раз-
падане (S—R); би следвало да бъде използвана
картофена агар среда или методи на постоянно
култивиране.
6. Антигенът се тества срещу осем известни
положителни и отрицателни серуми в замразено и
сушено състояние.
7. Официалният надзор и контрол на стандарт-
ния серум и антиген се изпълнява от официалните
органи, изброени в раздел A, т. 9 от приложението.
8. Антигенът се доставя готов за използване.
9. Буферираният бруцелозен антиген тест се
изпълнява по следния начин:
a) една капка (0,03 ml) от антиген се поставя до
една капка (0,03 ml) от серума върху бяла пластина;
б) двете капки се смесват с апликаторна бър-
калка, първо в права линия и след това в кръгова
с диаметър 10 до 12 mm;
в) след това пластината се разклаща напред и
назад за 4 min (около 30 пъти на минута);
г) отчитанията се извършват при добра светли-
на; ако няма доказателство за аглутинация, тестът
се счита за отрицателен; всяка степен на аглутина-
ция се счита за положителна, освен ако там има
прекомерно изсушаване около краищата.
б) Автоматизиран метод
Автоматизираният метод трябва да бъде най-
малко толкова чувствителен и прецизен, колкото
е ръчният метод.
Д. Плазмен ринг тест
а) Екстракция на плазмата
Епруветката, съдържаща кръв, чието съсирва-
не е било спряно от добавянето на EDTA, се цен-
трофугира за 3 min при 3000 оборота/min и след
това се държи при 37°C за 12 до 24 h.
б) Отчитане
0,2 ml от стабилизираната плазма се поставя в
епруветка с 1 ml необработено мляко. След смес-
ване една капка (0,05 ml) от ABR антиген се добавя
и цялото се смесва отново. Използва се стандар-
тен антиген, доставен от орган по раздел A, т. 9 a).
След инкубационен период 45 min при 37 °C се
прави отчитане в рамките на 15 min. Резултатът се
разглежда като положителен, ако цветът на ринга
е станал също като или по-тъмен от този на млеч-
ната колона.