Държавен вестник, бр. 68, 2014 г., стр. 67

БРОЙ  68	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
СТР.  67  
4.11. Основен разтвор на α-моноглицерил 4-аминобензоат: претегля се около 0,04 g с точност 0,001 g 
α-моноглицерил 4-аминобензоат и се поставят в мерителна колба от 100 cm3 (ml). Разтварят се в 40 cm3 
(ml) метанол (т. 4.1). Долива се до марката с буферен разтвор (т. 4.9) и се разбърква.
4.12. Основен разтвор на етил 4-аминобензоат: претегля се около 0,04g с точност 0,001 g етил 
4-аминобензоат и се поставят в мерителна колба от 100 cm3 (ml). Разтваря се в 40 cm3 (ml) метанол 
(т. 4.1). Долива се до марката с буферен разтвор (т. 4.9) и се разбърква.
4.13. Разтвор на вътрешен стандарт: претегля се около 0,05 g с точност 0,001g етил 4-хидроксибен­
зоат (т. 4.6) и се поставя в мерителна колба от 100 cm3 (ml). Разтваря се в 40 cm3 (ml) метанол (т. 4.1). 
Долива се до марката с буферен разтвор (т. 4.9) и се разбърква.
4.14. Стандартни разтвори: приготвят се четири стандартни разтвора чрез прибавяне в 100 cm3 (ml) 
подвижна фаза (т. 4.10) на горните разтвори съгласно следната таблица:
Стандартни 
разтвори
α-моноглицерил 4-амино­
бензоат
Етил 4-аминобензоат
Етил 4-хидроксибензоат
(µg/cm3 (ml)*
сm3 (ml) 
(4.11)
(µg/cm3 (ml)*
cm3 (ml) 
(4.12)
(µg/cm3 (ml)*
сm3 (ml) 
(4.13)
I
8
2
8
2
50
10
II
16
4
12
3
50
10
III
24
6
16
4
50
10
IV
40
10
20
5
50
10
(*) Тези стойности са дадени за сведение и съответстват на точните маси от т. 4.11, т. 4.12 и т. 4.13.
Забележка. Тези разтвори могат да бъдат приготвени по различен начин.
4.15. Разтвор на Carrez I: 26,5 g тетракалиев 
хексацианоферат (т. 4.5) се разтваря във вода и 
обемът се довежда до 250 cm3 (ml).
4.16. Разтвор на Carrez II: 54,9 g цинков диаце­
тат (т. 4.3) и 7,5 cm3 (ml) оцетна киселина (т. 4.4) 
се разтварят във вода и обемът се довежда до 
250 cm3 (ml).
4.17. Lichrosorb RP-18 на merck или еквива­
лентен със среден размер на частиците 5 µm.
5. Апаратура
5.1. Стандартно лабораторно оборудване.
5.2. ВЕТХ апарат, снабден с UV детектор с 
променлива дължина на вълната и термостат, 
нагласен на 45° С.
5.3. Колона от неръждаема стомана: дъл­
жина – 25 сm; вътрешен диаметър – 4,6 mm; 
пълнеж – Lichrosorb RP-18 (т. 4.17).
5.4. Ултразвукова вана.
6. Процедура
6.1. Приготвяне на пробата
6.1.1. Претегля се около 1,0 g от пробата с 
точност 0,001 g в стъклена чаша от 100 cm3 (ml) 
и се прибавят 10 cm3 (ml) метанол (т. 4.1).
6.1.2. Чашата се поставя в ултразвукова вана 
(т. 5.4) за 20 min за получаване на суспензия. Така 
получената суспензия се прехвърля количествено 
в мерителна колба от 100 cm3 (ml), използвайки 
не повече от 75 cm3 (ml) подвижна фаза (т. 4.10). 
Последователно се прибавят 1,0 cm3 (ml) разтвор 
на Carrez I (т. 4.15) и 1,0 cm3 (ml) разтвор на 
Carrez II (т. 4.16), като се разбърква след всяко 
прибавяне. Долива се до марката с подвижна 
фаза (т. 4.10), разбърква се отново и се филтрува 
през нагънат хартиен филтър.
6.1.3. В мерителна колба от 50 cm3 (ml) се 
прехвърлят с пипета 3,0 cm3 (ml) от получения 
в т. 6.1.2 филтрат и 5 cm3 (ml) от разтвора на въ­
трешен стандарт (т. 4.13). Долива се до марката 
с подвижната фаза (т. 4.10) и се разбърква. Така 
полученият разтвор се използва за провеждане 
на хроматографския анализ съгласно т. 6.2.
6.2. Хроматографиране
6.2.1. Скоростта на потока на подвижната 
фаза (т. 4.10) се нагласява на 1,2 cm3 (ml)/min, а 
температурата на колоната на 45 °С.
6.2.2. Детекторът (т. 5.2) се настройва на 274 nm.
6.2.3. С микроспринцовка в хроматографа се 
дозират най-малко два пъти 20 µl от разтвора 
(т. 6.1.3) и се измерват площите на пиковете.
6.3. Стандартна крива
6.3.1. Инжектират се 20 µl от всеки стандар­
тен разтвор (т. 4.14) и се измерват площите на 
пиковете.
6.3.2. За всяка концентрация се изчислява 
отношението между площите на пиковете на 
α-моноглицерил 4-аминобензоата и площите на 
пиковете на вътрешния стандарт. На графиката 
тези отношения се нанасят по абсцисата, а по 
ординатата се нанасят отношенията на съответ­
ните маси.
6.3.3. По същия начин се процедира и за етил 
4-хидроксибензоата.
7. Изчисления
7.1. От стандартната крива, получена съглас­
но т. 6.3, се отчитат съотношенията на масите 
(RP1, RP2), съответстващи на отношенията между 
площите на пиковете, изчислени в т. 6.2.3,
където:
RP1 е масата на α-моноглицерил 4-аминобен­
зоат към масата на етил 4-хидроксибезоата в g;
RP2 – масата на етил 4-аминобензоата към 
масата на етил 4-хидроксибензоата в g.
7.2. От получените отношения на масите се 
изчислява съдържанието на α-моноглицерил 
4-аминобензоат и етил 4-аминобензоат, изразено 
в % (M/M), съгласно формулите:
Rp % (M/M) α-моноглицерил 4-аминобензоат = 
;
Rp % (M/M) етил 4-аминобензоат = 
 ,
където:
M' е количеството на етил 4-хидроксибензоат 
(вътрешен стандарт), т. 4.12 в g;