Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 36

С Т Р .  36
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  109
се допълва със сместа пропан-2-ол - хексан (3.1),
хомогенизира се и се оставя да престои в про-
дължение на 1 h.
Оптическата плътност се определя, както е
описано в т. 5.2 за свободния госипол. От тази
стойност се пресмята количеството на общия
госипол, както е описано в т. 6.
6. Пресмятане на резултатите
Резултатите могат да се изчислят или на база
специфичната оптическа плътност (6.1), или на
калибрираната крива (6.2).
6.1 На база специфичната оптическа плът-
ност
Специфичните оптически плътности при
описаните условия ще бъдат:
1%
свободен госипол—E –– = 625 ,
1cm
1%
общ госипол—E –– = 600 .
1cm
Съдържанието на свободен или общ госи-
пол на пробата се изчислява по формулата:
1250 E
% госипол = ––––– ,
1%
E –– PA
1cm
където:
Е е коригираната оптическа плътност, опре-
делна съгласно 5.2;
Р—пробата за тест в g;
А—аликвотната част от филтрата в ml.
6.2. На база на калибрираната крива
Подготвят се 2 серии от пет 25ml-ови граду-
ирани колби. Капват се съответно 2, 4, 6, 8 и 10
ml-ови части от стандартния разтвор на госи-
пол А (3.5) във всяка серия от колби. Обемът се
допълва до 10 ml с разтвор А (3.2). Комплекто-
ва се всяка серия с 25 ml-ова колба, съдържаща
само 10 ml от разтвора А(3.2) (празен тест).
Обемът на колбите на първата серия (вкл.
колбата с празния тест) се допълва със смес от
пропан-2-ол и хексан (3.1) до 25  ml (референтна
серия).
Прибавя се 2 ml анилин (3.4) във вторите
серии (вкл. колбите за празния тест). Загрява се
за 30 min на водна баня до получаване на цвета.
Охлажда се до стайна температура и се опреде-
лят стойностите на пропан-2-ол и хексановата
смес (3.1). Хомогенизира се и се оставя да прес-
тои 1 h (стандартна серия). Определя се вклю-
чената в 5.2 оптическа плътност (гъстота) на
разтворите в стандартните серии в сравнение с
кореспондиращите разтвори в споменатите се-
рии. Установява се калибриращата крива (ли-
ния) чрез милиметроването на оптическата
плътност към количествата на госипола (в µg).
ХХVI. Определяне на тилозин чрез дифузия
в агар
1. Цел и обхват
Този метод дава възможност за определяне
съдържанието на тилозина в продукти за из-
хранване на животни, концентрати и премикси,
когато количеството му е повече от 2 ppm.
2. Принцип
Пробата се обработва с разтвор на фосфа-
тен буфер рН 8, след което се екстрахира с
метанол. След центрофугиране екстрактът се
разрежда и неговата антибиотична активност
се определя чрез измерване дифузията на ти-
лозина в агарова среда, засята със Sarcina lutea.
Дифузията става видима по образуването на
зони на инхибиране в присъствието на микро-
организма. Диаметърът на тези зони е право
пропорционален на логаритъма на концентра-
цията на антибиотика.
3. Микроорганизъм—Sarcina lutea, ATCC
№ 9341
3.1. Поддържане на родителския щам
Инокулира се със Sarcina lutea епруветка
скосен агар с хранителна среда (4.1), рН се до-
вежда до 7,0. Инкубира се в течение на 24 h при
около 35 °C. Културата се съхранява в хладил-
ник и с нея всеки месец се реинокулира скосен
агар.
3.2. Приготвяне на бактериална суспенсия
Бактериите се събират в 2 до 3 ml физиоло-
гичен разтвор (4.4) от епруветка със скосен агар
(3.1). С тази суспенсия се инокулира колба на
Roux, съдържаща 250 ml хранителна среда (4.1),
коригирана до рН 7,0. Култивира се в продъл-
жение на 24 h при температура 35°C, след което
бактериите се събират в 25 ml физиологичен
разтвор (4.4). Суспенсията се хомогенизира и се
разрежда така, че да се получи пропускливост
на светлината 75% при 650 nm.
Тази суспенсия се съхранява в хладилник и
може да се използва една седмица.
За различните концентрации на тилозин,
които се използват, предварително се определя
количеството на инокулума, който дава възмож-
но най-големите и ясни зони на инхибиране.
Това се извършва върху стъклени плочи с ос-
новната среда за определянето (4.1). Хранител-
ната среда се инокулира при температура от 48
до 50°C.
4. Хранителна среда и реактиви
4.1. Основна среда за определянето:
глюкоза—1 g;
трипсинов пептон—10 g;
месен екстракт—1,5 g;
дрождев екстракт—3 g;
агар в зависимост от качеството—от 10 до 20 g;
дестилирана вода—до 1000 ml.
За поддържане на родителския щам и за
приготвяне на бактериалната суспенсия рН се
коригира до 7,0 непосредствено преди употре-
ба, а за определянето рН се довежда до 8,0.