Държавен вестник, бр. 101, 2005 г., стр. 131

Б Р О Й  101
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  131
4.3. Хроматографска хартия Whatman или ек-
вивалентна.
4.4. УВ лампа с дължина на вълната 254 nm.
5. Процедура
5.1. Приготвяне на пробата.
В мерителна колба от 100 cm3 (ml) се претегля
1,0 g от продукта, който ще се анализира. Приба-
вят се 3 cm3 (ml) хлороформ (3.2) и се разклаща
енергично за диспергиране на продукта. Долива
се до марката с етанол (3.3) и се разклаща енер-
гично до получаване на бистър или почти бистър
разтвор.
5.2. Тънкослойна хроматография.
5.2.1. Хроматографската вана (4.2) се насища
с n-пентан (3.4), както следва: стената на ваната,
съседна на задното отделение, се облицова с хро-
матографска хартия (4.3), така че долният край
на хартията да влиза в това отделение. В задното
отделение се наливат 25 cm3 (ml) n-пентан (3.4),
като последният се сипва по откритата повърх-
ност на облицоващата хроматографска хартия.
Веднага се поставя капакът и ваната се оставя да
престои 15 min.
5.2.2. На подходящи точки на стартовата линия
на хроматографската плака (3.7) се нанасят 10 µl
от разтвора на пробата (5.1) и 10 µl от стандартния
разтвор на бензилов алкохол (3.6). Оставя се да
изсъхне.
5.2.3. В предното отделение на ваната с пипета
се поставят 10 cm3 (ml) диетилов етер (3.5) и вед-
нага след това в същото отделение се поставя пла-
ката. Бързо се поставя капакът и хроматограмата
се развива до разстояние 15 сm от стартовата ли-
ния. Плаката се изважда от хроматографската вана
и се суши при стайна температура.
5.2.4. Плаката (5.2.3) се разглежда под ултрави-
олетова светлина и се отбелязват местата на вио-
летовите петна. Плаката се напръсква с проявя-
ващ реактив (3.8) и след това се нагрява в продъл-
жение на 15 min при 120 °С. Бензиловият алкохол
се появява като тъмносиньо петно.
5.2.5. Изчислява се получената Rf стойност за
стандартния разтвор на бензилов алкохол. Тъмно-
синьо петно със същата Rf стойност, получено от
разтвора на пробата, показва присъствие на бен-
зилов алкохол.
Откриваем минимум: 0,1 µg бензилов алкохол.
Б. ОПРЕДЕЛЯНЕ
1. Област на приложение
Този метод се отнася за определянето на бензи-
лов алкохол в козметични продукти.
2. Дефиниция
Количеството на бензиловия алкохол, опреде-
лено по този метод, се изразява в % (М/М).
3. Принцип
Пробата се екстрахира с метанол и количест-
вото на бензиловия алкохол в екстракта се опреде-
ля чрез високоефективна течна хроматография
(ВЕТХ).
4. Реактиви
Всички реактиви трябва да са с квалификация
“за ВЕТХ”, а водата—бидестилирана.
4.1. Метанол.
4.2. 4-етоксифенол.
4.3. Бензилов алкохол.
4.4. Подвижна фаза : метанол (4.1)/вода = 45 :
55 (V/V).
4.5. Основен разтвор на бензилов алкохол: в
мерителна колба от 100 cm3 (ml) се претеглят около
0,1 g бензилов алкохол (4.3) с точност 0,001 g. Доли-
ва се до марката с метанол (4.1) и се разбърква.
4.6. Основен разтвор на вътрешен стандарт:
в мерителна колба от 100 cm3 (ml) се претеглят
около 0,1g 4-етоксифенол (4.2) с точност 0,001 g.
Долива се до марката с метанол (4.1) и се раз-
бърква.
4.7. Стандартни разтвори: в серия от мерител-
ни колби от 25 cm3 (ml) се поставят съответни ко-
личества от основния разтвор на бензилов алко-
хол (4.5) и от основния разтвор на вътрешен стан-
дарт (4.6) съгласно таблицата, дадена по-долу.
Доливат се до марката с метанол (4.1) и се разбър-
кват.
Тези стойности са дадени за информация и съ-
ответстват на концентрациите на стандартните
разтвори, приготвени с използване на разтвори на
бензилов алкохол (4.5) и на 4-етоксифенол (4.6),
които съдържат съответно точно 0,1 % (M/V) бен-
зилов алкохол и 0,1 % (M/V) 4-етоксифенол.
Стан-
Концентрация
Концентрация
дартен
на бензилов
на 4-етоксифенол
разтвор
алкохол
добавени
добавени
cm3 (ml) µg/cm3 (ml) cm3 (ml)
µg/cm3 (ml)
(4.5)
(4.6)
I
0,5
20
2,0
80
II
1,0
40
2,0
80
III
2,0
80
2,0
80
IV
3,0
120
2,0
80
V
5,0
200
2,0
80
5. Апаратура
5.1. Стандартно лабораторно оборудване.
5.2. Течен хроматограф (ВЕТХ) с УВ детектор
с променлива дължина на вълната и 10 µl дозатор-
на капиляра.
5.3. Аналитична колона: 250 mm Ч 4,6 mm от
неръждаема стомана с пълнеж Spherisorb ODS 5 µm
или еквивалентен.
5.4. Водна баня.
5.5. Ултразвукова вана.
5.6. Центрофуга.
5.7. Центрофужни епруветки с обем 15 сm3 (ml).
6. Процедура
6.1. Приготвяне на пробата.
6.1.1. В центрофужна епруветка (5.7) се претег-
ля около 0,1 g (М) с точност 0,001 g от пробата и се
прибавят 5 cm3 (ml) метанол (4.1).
6.1.2. Загрява се 10 min на водна баня (5.4) при
температура 50 °С, след което епруветката се пос-
тавя в ултразвукова вана (5.5), където престоява
до пълно диспергиране на пробата.
6.1.3. Охлажда се и след това се центрофугира
при 3500 rрm в продължение на 5 min.
6.1.4. Бистрата течност се прехвърля в мери-
телна колба от 25 cm3 (ml).
6.1.5. Пробата се екстрахира повторно с 5 cm3
(ml) метанол (4.1). Екстрактите се обединяват в
мерителната колба от 25 cm3 (ml).
6.1.6. В мерителната колба от 25 cm3 (ml) се
прибавят с пипета 2,0 cm3 (ml) от основния раз-
твор на вътрешен стандарт (4.6). Долива се до мар-
ката с метанол (4.1) и се разбърква. Този разтвор
се използва за определянето, описано в 6.4.