Държавен вестник, бр. 31, 2008 г., стр. 26

С Т Р .  26
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  31
Приложение № 3
към чл. 30, ал. 2, т. 3
Бруцелоза
A. Серумни тестове за аглутинация
1. Стандартният аглутиниращ серум съответс-
тва на стандартния серум, приготвен от Veterinary
Laboratory Agency, Addlestone, Weybridge, England.
Ампулата съдържа 1000 IU от аглутинация,
получена чрез лиофилизиране на 1 ml говежди
серум.
2. Стандартният серум се доставя от
Bundesgesundheitsamt, Berlin.
3. Степента на бруцелозна аглутинация в серум
се изразява в международни аглутиниращи едини-
ци за един милилитър (т.е. серум X = 80 IU/ml).
4. Бавната серумна аглутинация в епруветки се
отчита при 50 или 75 % аглутинация, като изпол-
званият антиген е бил титриран при същите усло-
вия както стандартния серум.
5. Аглутиниращите стойности на различните
антигени по отношение на стандартния серум тряб-
ва да бъдат в следните граници:
—ако отчитането е правено при 50 %: между 1/
600 и 1/1000;
—ако отчитането е правено при 75 %: между 1/
500 и 1/750.
6. Weybridge щам № 99 и USDA 1119 или всеки
друг щам с еквивалентна чувствителност се изпол-
зва за приготвяне на антигена за употреба в епру-
веткова аглутинация (бавен метод).
7. Използваната култивационна среда за запаз-
ване на щама в лабораторията и за произвеждане
на антигена трябва да бъде такава, че да не съдейс-
тва за бактериалното разпадане (S—R); предпочи-
та се използването на картофен агар.
8. Бактериалната емулсия се изготвя от физио-
логичен разтвор NaCl 0,85 % фенолизирана при
0,5 %. Формол не се използва.
9. За официалното тестване на антигени отго-
варят следните официални институти:
a) Германия: Bundesgesundheitsamt, Berlin;
б) Белгия: Institut national de recherches
veterinaires, Brussels;
в) Франция: Laboratoire central de recherches
veterinaires, Alfort;
г) Великото херцогство Люксембург: институт
на доставящата държава;
д) Италия: Istituto superiore di sanitа, Rome;
е) Нидерландия: Instituut voor Dierhonderij en
Diergezondheid (ID-DLO), Lelystad;
ж) Дания: Statens Veterinaere Sеrumlaboratorium,
Copenhagen V;
з) Ирландия: Veterinary Research Laboratory,
Department of Agriculture and Food, Dublin;
и) Обединено кралство:
—Великобритания: Veterinary Laboratory
Agency, Addlestone, Weybridge, England,
—Северна Ирландия: Veterinary Research
Laboratory, Stormont, Belfast;
й) Гърция: Кentro Kthniatrikvn Idrsmatvn,
Neapolevx 25, 153 10 Aqhna;
к) Испания: Centro Nacional de Brucelosis;
Laboratorio de Sanidad y Produccion Animal de Santa
Fe (Granada);
л) Португалия: Laboratoria Nacional de
Investigacao Veterinаria, Lisbon;
м) Австрия: Bundesanstalt fur Tierseuchen-
bekampfung, Modling;
н) Финландия: Elainlaakinta-ja elintarvikelaitos,
Helsinki-anstalten for veterinarmedicin och livsmedel,
Helsingfors;
о) Швеция: Statens veterinarmedicinska anstalt,
Uppsala.
10. Антигени могат да бъдат доставяни в кон-
центрирано състояние, при условие че факторът
на разреждане, който ще бъде използван, е посо-
чен на етикета на епруветката.
11. За да се извърши един серумен тест за аглу-
тинация, се приготвят за всеки серум най-малко
три разреждания. Разрежданията на съмнителен
серум се правят по такъв начин, че реакцията в
границата на заразяване да се отчита в средната
епруветка. Ако има положителна реакция в тази
епруветка, съмнителният серум съдържа най-мал-
ко 30 международни единици на аглутинация на
един милилитър.
Б. Реакция за свързване на комплемента
1. Стандартният серум е като по т. А.1 от при-
ложението. В допълнение към неговото съдържа-
ние в международни аглутиниращи единици 1 ml
от въпросния лиофилизиран говежди серум тряб-
ва да съдържа 1000 чувствителни единици, които
свързват комплемента. Тези чувствителни едини-
ци са EИО чувствителни единици.
2. Стандартният серум се доставя от
Bundesgesundheitsamt, Berlin.
3. Равнището на антитела в серума, който свър-
зва комплемента, трябва да бъде изразено в EИО
чувствителни единици (например: серум X = 60
EИО чувствителни единици на милилитър).
4. Серум, съдържащ 20 или повече EИО чувст-
вителни единици (т.е. активност, равна на 20 % от
тази на стандартния серум) на милилитър, се счи-
та за положителен.
5. Серумите трябва да бъдат дезактивирани,
както следва:
a) говежди серум: 56 до 60°C за 30 до 50 min;
б) свински серум: 60°C за 30 до 50 min.
6. За приготвянето на антигена се използва
Weybridge щам № 99 или USDA щам 1119. Антиге-
нът представлява бактериална суспензия във фи-
зиологичен серум при 0,85 % или в разтвор с кон-
центрация на веронал.
7. За да се изпълни тестът за реакцията, следва
да се използва допълнителна доза, по-висока от
минималната, необходима за цялостна хемолиза.
8. При изпълнението на тест за реакция за свър-
зване на комплемента всеки път се правят следни-
те проверки:
a) контрол на антикомплементния ефект на
серума;
б) контрол на антигена;
в) контрол на чувствителни червени кръвни
телца;
г) контрол на комплемента;
д) контрол чрез използване на положителен
серум за чувствителност при започването на ре-
акцията;
е) контрол на специфичността на реакцията чрез
използване на отрицателен серум.
9. Надзорът и официалният контрол на стан-
дартни серуми и антигени се извършват от органи-
те, посочени в раздел A, т. 9 на приложението.