Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 49

Б Р О Й  109
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  49
2. Принцип
Пробата се екстрахира с ацетонитрил. Екс-
трактът се пречиства върху алуминиев окис и
се филтрува. Аликвота от филтрата се изпарява
до сухо. Остатъкът се разтваря в диметилфор-
мамид и се обработва с етилендиамин, с който
образува пурпурен комплекс. Динитолмидът се
определя спектрофотометрично при 560 nm.
3. Реактиви:
3.1. Ацетонитрил, 85 % (о/о)—смесват се 850
ml чист ацетонитрил и 150 ml вода. Сместа се
дестилира преди употреба, като се събира фрак-
цията, която кипи между 75 и 77 °C.
3.2. Алуминиев окис за колонна хроматогра-
фия—накалява се при 750°C най-малко два часа,
охлажда се в ексикатор и се съхранява в бутил-
ка от кафяво стъкло с шлифова запушалка.
Преди употреба се навлажнява, както следва: в
бутилка от кафяво стъкло се поставят 10 g алу-
миниев окис и 0,7 ml вода, бутилката се запуш-
ва, нагрява се 5 min на кипяща водна баня, като
енергично се разклаща, оставя се да се охлади,
като разклащането се продължава; активност-
та се проверява, като се подлага на анализ, за-
почвайки от т. 5.1, определено количество от
стандартния разтвор (3.6). Добивът от динитол-
мид трябва да бъде 100±2%.
3.3. N,N-диметилформамид, 95% (о/о)—смес-
ват се 95 ml N,N-диметилформамид, ч.з.а., и 5,0
ml вода;
3.4. Диаминоетан, ч.з.а., с максимално вод-
но съдържание 2%.
3.5. Стандартна субстанция—чист 3,5-динит-
ро-о-толуамид, отговарящ на следната харак-
теристика:
точка на топене: 177°C;
молекулярен екстинкционен коефициент при
248 nm в ацетонитрил—13,1 при 10,3;
молекулярен екстинкционен коефициент при
266 nm в N,N-диметилформамид—10,1 при 10,3.
3.6. Стандартен разтвор—претеглят се с точ-
ност до 0,1 mg 40 mg от стандартната субстан-
ция (3.5) и се разтварят с ацетонитрил (3.1) в
мерителна колба от 200 ml. Обемът се допълва
със същия разтворител и се смесва. 20 ml се
разреждат до 100 ml с ацетонитрил (3.1) в мери-
телна колба и се смесват. 1 ml от този разтвор
съдържа 40 mg динитолмид.
4. Апаратура:
4.1. конична колба от 250 ml с шлифова запу-
шалка;
4.2. обратен хладник с шлифова свръзка;
4.3. шот-филтър G3 с диаметър 60 mm;
4.4. вакуумфилтър (такъв като апарат на
Witt);
4.5. водна баня, регулирана на 50°C;
4.6. спектрофотометър с кювети от 10 mm.
5. Процедура
5.1. Екстракция и пречистване
10 g фино раздробена и хомогенизирана про-
ба се претеглят с точност  до 1 mg. За концент-
рати и премикси се претегля 1 g с точност 1 mg.
Порцията за изследване се поставя в конична
колба от 250 ml (4.1) и се добавят 65 ml ацето-
нитрил (3.1). Смесва се, монтира се обратният
хладник (4.2) към колбата и се нагрява на водна
баня (4.5) за 30 min, като непрекъснато се раз-
клаща. Охлажда се под струя студена вода.
Добавят се 20 g алуминиев окис (3.2), охлажда
се 3 min и се оставя да се утаи.
Мерителна колба от 100 ml се поставя във
филтрувалния апарат (4.4), закрепва се шотфил-
търът (4.3) и разтворът се филтрува при изс-
мукване. Неразтворените остатъци в колбата
се пренасят във филтъра с няколко ml ацето-
нитрил (3.1) и се изсмуква до сухо. Вакуумът се
освобождава. Остатъкът върху филтъра се ре-
суспендира в няколко ml ацетонитрил (3.1) и се
филтрува отново. Тази операция се повтаря,
докато обемът на филтрата достигне до около
95 ml. Долива се до 100 ml с ацетонитрил (3.1) и
се смесва. Ако е необходимо,  аликвотът се раз-
режда с ацетонитрил (3.1) така, че да се получи
разтвор, съдържащ от 5 до 15 mg динитолмид
на 1 ml.
5.2. Развитие на цветната реакция и измер-
ване на оптическата плътност
В три бехерови чаши от 50 ml, съответно А, Б
и В, се пипетират по 4 ml от разтвора, получен в
т. 5.1. Само в чаша В се добавя 1 ml от стандар-
тния разтвор (3.6). Трите чаши се поставят на
водна баня (4.5) в камина с добра вентилация и
се изпаряват до сухо в поток на сух въздух. Трите
чаши се охлаждат при стайна температура.
В чаша А се добавят 10 ml N,N-диметилфор-
мамид (3.3) и по 2 ml в чашите Б и В. Оставят се
за няколко минути, като се разбъркват по мал-
ко, докато остатъкът се разтвори напълно. След
това в чашите Б и В се добавя по 8 ml диамино-
етан (3.4) и се разбърква. Точно 5 min след до-
бавянето на диаминоетана оптическата плът-
ност на трите разтвора се измерва на спектро-
фотометър (4.6) при 560 nm срещу N,N-диме-
тилформамид (3.3).
6. Пресмятане на резултатите
Съдържанието на динитолмид в mg/kg про-
ба се получава по формулата:
(ЕВ - ЕА) / (ЕС - ЕВ) * F / W * 1000 ,
където:
ЕА е оптическата плътност на разтвор А
(празна проба);
ЕВ—оптическата плътност на разтвор В
(проба за анализиране);
ЕС—оптическата плътност на разтвор С
(вътрешен стандарт);
W—теглото на порцията за изследване в гра-
мове;
F—коефициент на разреждане (възможно
направено в т. 5.1).
7. Повторяемост
Разликата между резултатите от две пара-
лелни определяния, проведени на една и съща
проба, не трябва да надвишават: