Държавен вестник, бр. 19, 2006 г., стр. 63

Б Р О Й  19
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  63
3. След отделяне на кръвен серум той се пре-
лива в стерилни стъклени флакони и плътно се
затваря.
4. Пробата кръвен серум се съхранява дълбоко
замразена във фризер.
5. За вирусологично изследване се вземат: цял
далак, един бъбрек и тонзили (или ретрофаренги-
ални лимфни възли), които се изпращат в лабора-
торията в охладено състояние. При невъзможност
взетите проби от вътрешни органи се поставят в
полиетиленов плик и се съхраняват до транспор-
тирането им в лабораторията по КЧС във фризер.
6. Кръвните проби и пробите от вътрешни ор-
гани се идентифицират чрез номера, които се опис-
ват в придружителното писмо.
7. Пробите се транспортират до лабораторията
в хладилна чанта, придружени от писмо, издадено
от официален ветеринарен лекар.
Схема за вземане на кръвни проби от свине
Брой животни:
Брой кръвни проби:
До 9 бр. свине
2
От 10 до 49 бр. свине
5
От 50 до 99 бр. свине
7
От 100 до 199 бр. свине
10
От 200 до 399 бр. свине
15
От 400 до 999 бр. свине
20
Схема за вземане на проби за серологично и
вирусологично изследване от свине по време на
клане и извършване на месопреглед в кланици
Брой животни:
Брой проби:
От 1 до 9 бр. свине
5
От 10 до 29 бр. свине
10
От 30 до 49 бр. свине
25
От 50 до 99 бр. свине
50
От 100 до 200 бр. свине
70
IV. Доказване на вируса
1. Пряк имунофлуоресцентен метод за доказ-
ване на антиген
Методът се прилага за детекция на КЧС ан-
тиген в криосрезове от сливици, далак, бъбреци
или дисталните части на илеума. Органите, съб-
рани от няколко животни, се събират и транс-
портират без консерванти, охладени, но не зам-
разени. Криосрезовете се обработват директно с
анти-КЧС-имуноглобулин, конюгиран с флуорес-
цеин-изотиоцианат (ФИГЦ), и се наблюдават
чрез флуоресцентен микроскоп. Сливиците са
най-подходящият орган, защото първи се инфек-
тират с вируса, независимо от начина на заразя-
ване. В случаите на субакутни и хронични форми
най-често положителен е илеумът и е единст-
веният орган, който дава положителна флуо-
ресцентна реакция.
Процедура
Във всяка от сериите криосрезове от органи се
изследват положителни и отрицателни срезове:
—отразяват се кубчета от органите приблизи-
телно с размери 1 Ч 1 Ч 0,5 cm и се закрепват с
дестилирана вода към криостатната масичка;
—замразяват се в криобара на криостата;
—срязват се криосрезове с дебелина не повече
от 4 µl и се залепят върху покривни стъкла с голе-
мина 10 Ч 32 mm;
—криосрезовете се фиксират за 10 min в хла-
дилна камера в ацетон и се изсушават за 20 min
при 37 °С;
—криосрезовете се промиват еднократно с ПБС
за 5 min;
—КЧС конюгатът се разрежда в работно раз-
реждане, покрива се криосрезът и се инкубира за
30 min при 37 °С;
—след промиване с ПБС криосрезовете се об-
работват с Евансово синьо в концентрация 1:20 000
за 10 min;
—трикратно промиване за по 5 min с ПБС и
еднократно—с дестилирана вода;
—криосрезовете върху покривните стъкла се
отцеждат върху филтърна хартия, залепят се на
предметно стъкло с глицеринов буфер, след което
се наблюдават на флуоресцентен микроскоп.
Същата процедура се прилага и при използване
на прекия имунофлуоресцентен метод за доказва-
не на вирус в клетъчни култури.
2. Биологична проба
Биологичната проба се извършва в определена
от НВМС база.
Биологичната проба се провежда върху три
прасета на 3—5-месечна възраст, ваксинирани
срещу КЧС, най-малко 30—50 дни преди залага-
нето и върху три неваксинирани прасета на съ-
щата възраст.
Прасетата се инокулират интрамускулно с по
2 ml 1:10 емулсия от далак и лимфни възли на бол-
но или умряло със съмнение за КЧС прасе.
Опитните прасета се наблюдават в продълже-
ние на 30 дни при ежедневно термометриране и
строга охрана.
При умиране на всичките 6 прасета с клинични
признаци и патологоанатомични изменения за
класическа и африканска чума по свинете диагно-
зата е положителна за африканска чума.
При умиране само на контролните неваксини-
рани прасета диагнозата е положителна за КЧС.
3. ELISA за откриване на гликопротеин ЕRNS/
gp 44/48/ на вируса на класическата чума по свинете
Плаките на кита са покрити с моноклонални
антитела срещу гликопротеина Еrns на вируса на
КЧС. В случай на присъствие на този гликопроте-
ин в серума или плазмата, или тъканносвързан Еrns
произтича специфично свързване с моноклонал-
ните антитела от плаката. Несвързаните компо-
ненти се отмиват, добавя се свързан с пероксидаза
(белязан) анти-Еrns-конюгат, който се свързва с
комплекса антиген-антитяло върху плаката. Не-
свързаният конюгат се отмива и се добавя хромо-
ген. Степента на цветната реакция е правопропор-
ционална на количеството кликопротеин Еrns в
пробата. Диагностичната стойност на реакцията
се проверява чрез сравняване на оптичната плът-
ност в ямките с пробите и в тези с положителна и
отрицателна контрола.
Процедура
Всички реагенти се темперират.
Разтворите за миене на плаките и разредители-
те на пробите, конюгата и контролите се разреж-
дат съгласно описанието.