Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 60

С Т Р .  60
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  109
Действителната активност е равна на  до-
пусканата активност и е по-голяма от отно-
сителната активност.
Ако бъде установено, че относителната ак-
тивност е извън обхвата от 0,5 до 2, опитът се
повтаря, като се извършват целесъобразни на-
пасвания към концентрациите на екстракта или
ако това не е възможно, към стандартните раз-
твори. Когато относителната активност не може
да бъде ограничена в рамките на необходимия
обхват, то всеки получен резултат трябва да се
счита за приблизителен и това трябва да се от-
бележи в крайния отчет.
Ако се приеме, че линиите не са успоредни,
определянето се повтаря. Ако все още не може
да се постигне успоредност на линиите, опреде-
лянето се счита за незадоволително.
9. Повторяемост
Разликата между резултатите на двете опре-
деляния, които се извършват на базата на една
и съща проба и от един и същ аналитик, не трябва
да надвишава:
—2 mg/kg в абсолютна стойност за съдържа-
ния на авопарцин от 2 и нагоре до 10 mg/kg;
—20 % спрямо най-високата стойност—за
съдържания от 10 до 25 mg/kg;
—5 mg/kg в абсолютна стойност—за съдър-
жания от 25 до 50 mg/kg;
—10 % спрямо най-високата стойност—за
съдържания над 50 mg/kg.
ХХХIХ. Определяне на монензин натрии
посредством дифузия в среда на агар
1. Цел и обхват
Методът се използва за определянето на
монензин натрии в храните за животните и в
предварителните смеси. Долната граница за
определянето е 10 mg/kg (10 части на хиляда).
2. Принцип
Пробата се извлича посредством 90 % мета-
нол. Екстрактът се подлага на съответни проце-
дури, в съответствие със съдържанието на мо-
нензин натрии в пробата. Антибиотичната
активност се определя, като се измери дифузи-
ята на монензин натрии в среда от агар, върху
която има посявка на бацилус субтилис. Дифу-
зията се показва чрез формирането на зони за
инхибиране на микроорганизмите. За диаметъ-
ра на тези зони се приема, че е в директно съотно-
шение спрямо логаритъма на антибиотичната
концентрация, в целия спектър на използвани-
те антибиотични концентрации. Чувствител-
ността на тази система на пробата за анализи се
намалява в присъствието на натриеви йони.
3. Микроорганизъм—  бацилус субтилис АТСС
6633 (NCIB 8054)
3.1. Поддържане на щамова култура
Прави се посявка в тръбички, съдържащи
полегати плоскости от културна среда (4.1), с
бацилус субтилис и се оставя да пренощува при
температура 30°С. Културата се съхранява в хла-
дилник при температура около 4 °С.
Нови посевки се правят ежемесечно.
3.2. Подготовка на суспензията от спори (2)
Събира се добивът от наскоро приготвената
полегата плоскост от агар (3.1) посредством 2
до 3 ml стерилна вода. Тази суспензия се изпол-
зва, за да се направи посявка върху 300 ml от
културната среда (4.1), съдържаща се в колба
на Рукс, и се оставя да престои 3 до 5 дни при
температура 30°С. Добивът се събира в 15 ml
20 % етанол (4.3), след като се проверява под
микроскоп формирането на малки спори, и се
смесва добре. Тази суспензия може да се запази
в продължение на най-малко 5 месеца при те-
мпература около 4°С.
4. Културни среди и реагенти
4.1. Културна среда
Триптофан
10 g
Екстракт от дрожди
3 g
Месо-костен екстракт
1,5 g
Глюкоза
1 g
Агар (по качество)
10—20 g
Вода
1000 ml
pH 6,5 (след стерилизация).
4.2. Среда на пробата за анализи
Глюкоза
10 g
Екстракт от мая
2,5 g
Дикалиев хидроген фосфат K2HPO4
0,69 g
Калиев дихидроген фосфат KH2PO4
0,45 g
Агар (според качеството)
10 до 20 g
Вода
1000 ml
pH 6 (след стерилизация).
Един mg натриев монензин е еквивалентен
на 1,000 единици UK.
Могат да се използват и други методи, при
условие че се установи получаването на анало-
гични суспензии от спори.
Може да се използва всяка продавана на
пазара среда с аналогичен състав, която дава
същите резултати.
4.3. Етанол 20 % (обем/обем)—разреждат се
200 ml етанол с 800 ml вода.
4.4. Метанол дехидратен.
4.5. Метанол 90 % (обем/обем)—разреждат
се 900 ml метанол (4.4) със 100 ml вода.
4.6. Метанол 50 % (обем/обем)—разреждат
се 500 ml метанол (4.4) с 500 ml вода.
4.7. Алуминиев окис, гранулиран (алкоа F,
мрежа с 20 дупки; активиран алуминий UG1:
фирма “Ланкастър и Ко.” или еквивалент).
4.8. Стандартни субстанции: натриев монен-
зин с позната активност (напр. от Международ-
ната лаборатория за биологични стандарти.
Централна ветеринарна лаборатория, Уейб-
ридж, Обединено кралство—Сърей КТ 15 3NB).
5. Апаратура
 5.1. ротационен вакуумен изпарител с 250 ml
колба с кръгло дъно;
5.2. стъклена тръбичка за хроматографски
анализ с вътрешен диаметър: 25 mm с дължина
400 mm, с един отворен край с диаметър 2 mm;
5.3. стъклена тръбичка за хроматографски
анализ с вътрешен диаметър: 11 mm с дължина
приблизително 300 mm, с един отворен край с
диаметър 2 mm.