Държавен вестник, бр. 7, 2007 г., стр. 49

Б Р О Й  7
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  49
Тази допълнителна клауза не се изисква, ако
парчетата кости на сухоземни животни са иден-
тифицирани като парчета кости на птици или
бозайници.
9. Незадължителен протокол от анализа на
мас или масла
При анализа на мас и масла може да се из-
ползва следният протокол:
—За твърдата мас: тя трябва да се загрее
до втечняването є, например в микровълнова
печка.
—Да се вземат с пипета 40 ml масти от дъно-
то на пробата и да се накапят в центрофуга.
—Да се центрофугира за 10 минути при 4000
оборота/минута.
—Ако маста се втвърди при центрофугира-
нето, да се загрее в печката, докато пак се върне
в течно състояние. Да се центрофугира отново
за 5 минути при 4000 оборота/минута.
—С малка лъжичка или с шпатула полови-
ната от получените примеси се прехвърлят в
малка чашка на Петри или върху микроскоп-
ско предметно стъкло с цел да се открие под
микроскоп евентуалното наличие на съставки
от животински произход (мускулни влакна, пера,
парчета от кости и др.). Препоръчително е из-
ползването на парафиново олио или глицерол
като запечатващ агент (фиксатор) за микро-
скопския анализ.
—Остатъчните примеси се използват за под-
готвянето на утайката по начина, описан в
точка 6.2.
LI. Определяне съдържанието на спирами-
цин чрез дифузия в хранителна среда агар-агар
1. Цел и обхват
Методът се използва за определяне съдър-
жанието на спирамицин в храните за животни
и предварително приготвените смеси. Долната
граница на определяне е 1 mg/kg (1ррm)1.
2. Принцип
Пробата се извлича със смес на метанол/
фосфат-бикарбонатен буфер при рН 8. Извле-
кът се декантира или центрофугира и разреж-
да. Неговата антибиотична активност се опре-
деля чрез измерване на дифузията на спирами-
цин в агар-агар среда, изкуствено заразена в
Microccus luteus. Дифузията се показва чрез
формиране на зони на инхибиране на микроор-
ганизмите. Приема се, че диаметърът на тези
зони е правопропорционален на логаритъма на
антибиотичната концентрация в обхвата на
използваните антибиотични концентрации.
3. Микроорганизъм: Microсоccus luteus АТСС
9341 (NCTC 834, NCIB 8553)
3.1. Поддържане на изходна култура
В тръби, съдържащи културална хранителна
среда (4.1), се посява Microccus luteus и се слага
в инкубатор за 24 часа при 30 °С. Културата се
съхранява в хладилник при около 4 °С. Слага се
отново в инкубатор на всеки 2 седмици.
1 1 mg спирамицинова основа е еквивалентен на 3200
международни единици (UI)
3.2. Приготвяне на бактериалната суспензияа
Взема се продуктът на свежа хранителна
среда агар-агар (3.1) с 2 до 3 ml разтвор на
натриев хлорид (4.3). Тази суспензия се из-
ползва, за да се посее в 250 ml културална среда
(4.1), съдържаща се в Roux колба и се поставя
в инкубатор за 18—20 часа при 30 °С. Получе-
ното се слага в 25 ml разтвор на натриев хло-
рид (4.3) и се разбърква. Суспензията се раз-
режда до 1/10 с разтвор на натриев хлорид (4.3).
Прозрачността на суспензията трябва да бъде
около 75 %, измерена при 650 nm в клетка
1 cm спрямо разтвор на натриев хлорид (4.3).
Тази суспензия може да се съхранява една
седмица при около 4 °С.
4. Културална среда и реактиви
4.1. Културална средаб
Месен пептон
6,0 g
Триптон
4,0 g
Екстракт от дрожди
3,0 g
Месен екстракт
1,5 g
Глюкоза
1,0 g
Агар-агар
10,0 до 20,0 g
Вода
1000 ml
рН 6,5 до 6,6 (след
стерилизация).
4.2. Културална среда за извършване на ана-
лизаб
Триптон
5,0 g
Екстракт от дрожди
4,0 g
Месен екстракт
3,0 g
Агар-агар
10,0 до 20,0 g
Вода
1000 ml
рН 8,0 (след стерилизация).
4.3. Разтвор на натриев хлорид 0,8 % ( w/v).
Разтварят се 8 g натриев хлорид във вода и се
разрежда до 1000 ml и се стерилизира.
4.4. Фосфатно-бикарбонатен буфер, рН 8,0
Двукалиев водороден
фосфат К2НРO4
16,7 g
Калиев двуводороден
фосфат КН2РO4
0,5 g
Натриев водороден
карбонат NaHCO3
20,0 g
Вода до
1000 ml.
4.5. Смес на метанолов фосфатно-бикарбо-
натен буфер (4.4) 50/50 (w/v).
4.6. Стандартна субстанция
Спирамицин с известна активност (в IU).
5. Стандартни разтвори
Разтваря се точно претеглено количество
стандартна субстанция (4.6) в сместа (4.5) и се
разтваря със същата смес, за да се получи изхо-
ден разтвор, съдържащ 1000 IU спирамицин на
1 ml. Съхраняван в запушена колба при 4 °С,
този разтвор е стабилен до 5 дни.
а Могат да бъдат използвани други методи, в случай
че се установи, че при тях се получават сходни бактери-
ални суспензии.
б Може да се използва културална среда от тър-
говски характер със сходен състав, даваща същите ре-
зултати.