Държавен вестник, бр. 68, 2014 г., стр. 88

СТР.  88	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
БРОЙ  68
5.3. Стъклена епруветка (2х15 сm) със запу­
шалка на винт.
5.4. Водна баня, нагласена на 60 °С.
5.5. Стъклена спринцовка от 10 cm3 (ml) с 
мембранен филтър (диаметър на порите 0,45 µm).
6. Процедура
6.1. Приготвяне на пробата
6.1.1. Приготвяне на проба без вътрешен 
стандарт
В стъклена епруветка (т. 5.3) се претегля около 
1 g с точност 0,001 g от пробата (M). Прибавят се 
0,5 cm3 (ml) фосфорна киселина (т. 4.4) и 9,5 cm3 
(ml) етанол (т. 4.1).
Епруветката се затваря и се разклаща енер­
гично. Ако е необходимо, епруветката се поставя 
на водна баня, нагрята до 60 °С (т. 5.4), за 5 min 
за пълно разтваряне на липидната фаза. Охлажда 
се бързо на течаща вода. Част от разтвора се 
филтрува през мембранен филтър (т. 5.5). Фил­
тратът се хроматографира същия ден.
6.1.2. Приготвяне на проба с вътрешен стандарт
В стъклена епруветка (т. 5.3) се претегля 1 g 
с точност 0,001 g от пробата (M). Прибавят се 
0,5 cm3 (ml) фосфорна киселина (т. 4.4), 0,50 cm3 
(ml) от разтвора на вътрешен стандарт (т. 4.6) и 
9,0 cm3 (ml) етанол (т. 4.1).
Епруветката се затваря и се разклаща енергич­
но. Ако е необходимо, епруветката се поставя на 
водна баня, нагрята до 60 °С (т. 5.4), за 5 min за 
разтваряне на липидната фаза. Охлажда се бързо 
на течаща вода. Част от разтвора се филтрува 
през мембранен филтър (т. 5.5). Филтратът се 
хроматографира същия ден.
6.2. Условия за газова хроматография
Препоръчват се следните работни условия:
Колона
Тип – неръждаема стомана
Дължина – 2 m
Диаметър – 1/8'' 
Пълнеж – 10 % SPTM 1000 (или еквивалент­
на) + 1 % H3PO4 върху Chromosorb WAW 100 до 
120 mesh.
Температура
Инжектор – 200 °С
Колона – 120 °С
Детектор – 200 °С
Газ носител – азот
Скорост на потока – 25 cm3 (ml)/min.
6.3. Хроматография
6.3.1. Стандартна крива
В серия мерителни колби от 20 cm3 (ml) 
се поставят съответно 0,25; 0,50; 1,00; 2,00 и 
4,00 cm3 (ml) разтвор на пропионова киселина 
(т. 4.5). Във всяка колба се добавя с пипета 
1,00 cm3 (ml) от разтвора на вътрешен стандарт 
(т. 4.6), доливат се до марката с етанол (т. 4.1) 
и се разбъркват. 
Приготвените по този начин разтвори съдър­
жат М' mg/cm3 (ml) 2-метилпропионова киселина 
като вътрешен стандарт (т.е. 1 mg/cm3 (ml) и р/4, 
р/2, р, 2р и 4р mg/cm3 (ml) пропионова киселина 
(т.е. 0,25; 0,50; 1,00; 2,00 и 4,00 mg/cm3 (ml).
Инжектират се по 1 µl от всеки от тези раз­
твори и се построява стандартна крива, като на 
абсцисата се нанасят отношенията на масите на 
пропионовата киселина към 2-метилпропионо­
вата киселина, а по ординатата – отношенията 
на съответните площи на пиковете им.
За всеки разтвор се правят по три инжектира­
ния и се изчислява средната площ на пиковете.
6.3.2. Определяне
Инжектира се 1 µl от филтрата на пробата по 
т. 6.1.1. Получената хроматограма се сравнява 
с тези на стандартните разтвори (т. 6.3.1). Ако 
пикът има приблизително същото време на за­
държане както 2-метилпропионовата киселина, 
се сменя вътрешният стандарт. Ако не се на­
блюдава пречене, се инжектира 1 µl от филтрата 
на пробата (т. 6.1.2) и се измерват площите на 
пика на пропионовата киселина и на пика на 
вътрешния стандарт.
Правят се три инжектирания за всеки разтвор 
и се изчислява средната площ на пиковете.
7. Изчисления
7.1. От стандартната крива, получена в т. 6.3.1, 
се отчита отношението на масите К, съответ­
стващо на отношението на площите на пиковете, 
получени в т. 6.3.2.
7.2. От така полученото отношение на масите 
се изчислява съдържанието на пропионова ки­
селина (x) в % (M/M), използвайки формулата:
 
,
където:
К е съотношение, изчислено в т. 7.1;
М' – масата на вътрешния стандарт, т. 4.6 в g;
М – масата на пробата, претеглена в т. 6.1.2 в g.
Резултатът се закръглява до втория знак.
8. Повторяемост *
За съдържание на пропионова киселина 2 % 
(M/M) разликата между резултатите от две ус­
поредни определяния на една и съща проба не 
трябва да надвишава 0,12 %.
*Забележка. Виж ISO 5725.
ХХХVІІ. ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОПРЕДЕ­
ЛЯНЕ НА ХИДРОХИНОН, ХИДРОХИНОН 
МОНОМЕТИЛОВ ЕТЕР, ХИДРОХИНОН МО­
НОЕТИЛОВ ЕТЕР И ХИДРОХИНОН МОНО­
БЕНЗИЛОВ ЕТЕР В КОЗМЕТИЧНИ ПРОДУКТИ
А. ИДЕНТИФИКАЦИЯ
1. Област на приложение
Методът се отнася за откриване и идентифи­
кация на хидрохинон, хидрохинон монометилов 
етер, хидрохинон моноетилов етер и хидрохинон 
монобензилов етер (монобензон) в козметични 
продукти за осветляване на кожата.
2. Принцип
Хидрохинонът и неговите етери се идентифи­
цират чрез тънкослойна хроматография (ТСХ).
3. Реактиви
Всички реактиви трябва да са с квалификация 
„чист за анализ“ (ч.з.а), а водата – дестилирана 
или с еквивалентна чистота.
3.1. Етанол, 96 % (V/V).
3.2. Хлороформ.
3.3. Диетилов етер.