Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 70

С Т Р .  70
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  109
7.1.1. Ко-хроматография
Пробният екстрат се подсилва, като към него
се прибави подходящо количество от междин-
ния стандартен разтвор (3.7.2). Количеството
добавен methyl benzoquate трябва да бъде сход-
но с количество methyl benzoquate, изчислено в
пробния екстракт.
Усилва се единствено височината на methyl
benzoquate пик, като се вземат предвид както
добавеното количество, така и разтвореният
екстракт. Пиковата широчина в половината от
максималната му височина трябва да бъде в
приблизително 10% от началната широчина.
7.1.2. Диодно детектиране
Резултатите са оценени според следните
критерии:
(а) вълновата дължина на максималната
абсорбция на пробата и стандартните спектри,
регистрирана в пиковия апекс на хроматогра-
мата, трябва да попадне в същото поле на раз-
делителната сила на детектиращата система;
типично за диодния детектор е да бъде прибли-
зително в обсега на 2 nm;
(б) в обсега между 250 и 400 nm пробата и
стандартните спектри, регистрирани в пиковия
апекс на хроматограмата, не трябва да се раз-
личават от онези части на спектъра, които по-
падат в обсег 10 до 100% от относителната аб-
сорбция; критерият е изпълнен тогава, когато
налице са същите максимуми и няма регистри-
рана точка, в която отклонението между двата
спектъра да превишава 15% от абсорбцията на
стандартния аналит;
(в) в обсега между 250 и 400 nm спектрите на
възходящия наклон, апекса и низходящия нак-
лон на пика, регистриран от мострения екст-
рат, не трябва да се различават един от друг за
тези части от спектъра, които попадат в обсега
на 10 до 100% относителна абсорбция; критери-
ят е спазен тогава, когато налице са същите мак-
симуми и когато във всички регистрирани точ-
ки отклонението между спектрите не надмина-
ва 15% от абсорбцията на спектъра на апекса.
Ако един от критериите не е спазен, наличи-
ето на аналита не се потвърждава.
7.2. Повторяемост
Разликата между резултатите от двата пара-
лелно проведени опита за определяне на methyl
benzoquate съдържание в една и съща проба не
трябва да превишава: 10% спрямо по-високата
стойност на съдържание на methyl benzoquate,
между 4 и 20 mg/kg.
7.3. Възстановяване
Възстановяването за подсилена празна фу-
ражна проба трябва да бъде поне 90%.
8. Резултати от съвместно изследване
Пет проби се подлагат на анализ от 10 лабо-
ратории. За всяка една проба са проведени двой-
ни анализи. Резултатите са представени в таб-
лицата:
Празна Шрот 1 Гранули 1
Шрот 2 Гранули 2
проба
Средна (mg/kg)
n.d.
4.50
4.50
8.90
8,70
S1 (mg/kg)
n.d.
0,30
0,20
0,60
0,50
CV1 (%)
n.d.
6,70
4,40
6,70
5,70
S1 (mg/kg)
n.d.
0,40
0,50
0,90
5,70
CVR (%)
n.d.
8,90
11,00
10,10
11,00
Възстановя-
n.d.
92,00
93,00
92,00
89,00
ване (%)
n.d. - не е открито
S1—стандартно отклонение на повторяемост
CV1 —коефицент на вариация на повторяемостта
SR —стандартно отклонение на възпроизводимост
CVR —коефицент на вариация на възпроизводимостта
ХLIII. Определяне на спирамицин чрез ди-
фузия в хранителна среда агар-агар
1. Цел и обхват
Методът е за определяне на спирамицин в
животински храни и предварително приготвени
смеси. Долната граница на определяне е 1 mg/kg
(1ррm)(1).
2. Принцип
Пробата се извлича със смес на метанол/
фосфат-бикарбонатен буфер при рН 8. Извле-
кът се декантира или центрофугира и разреж-
да. Нейната антибиотична активност се опре-
деля чрез измерване на дифузията на спирами-
цин в агар-агар среда, изкуствено заразена в
Microccus luteus. Дифузията се показва чрез
формиране на зони на инхибиране на микроор-
ганизмите. Приема се, че диаметърът на тези
зони е право пропорционален на логаритъма на
антибиотичната концентрация в обхвата на
използваните антибиотични концентрации.
3. Микроорганизъм - Microccus luteus АТСС
9341 (NCTC 8340, NCIB 8553)
3.1. Поддържане на изходна култура
В тръби, съдържащи културална хранител-
на среда (4.1), се посява  Microccus luteus и се
слага в инкубатор за 24 h при 30 °С. Културата
се съхранява в хладилник при около 4 °С. Слага
се отново в инкубатор на всеки 2 седмици.
3.2. Приготвяне на бактериалната суспензия
Взема се продуктът на свежа хранителна сре-
да агар-агар (3.1) с 2 до 3 ml разтвор на натриев
хлорид (4.3). Тази суспензия се използва, за да
се посее в 250 ml културална среда (4.1), съдър-
жаща се в Roux колба и се поставя в инкубатор
за 18—20 h при 30 °С. Полученото се слага в 25
ml разтвор на натриев хлорид (4.3) и се разбър-
ква. Суспензията се разрежда до 1/10 с разтвор
на натриев хлорид (4.3). Прозрачността на сус-
пензията трябва да бъде около 75%, измерена
при 650 nm в клетка 1 cm спрямо разтвор на
натриев хлорид (4.3). Тази суспензия може да се
съхранява една седмица при около 4 °С.
4. Културална среда и реактиви
4.1. Културална среда
Месен пептон
6 g
Триптон
4 g
Екстракт от дрожди
3 g
Месен екстракт
1,5 g
Гликоза
1 g
Агар-агар
10 до 20 g