Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 45

Б Р О Й  109
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  45
3. Реагенти:
3.1. метанол;
3.2. ацетонитрил, клас HPLC;
3.3. вода, клас HPLC;
3.4. разтвор на натриев двуводороден фос-
фат, с = 0,1 mol/l—разтварят се 13,80 g монохид-
рат на натриев двуводороден фосфат във вода
(3.3) в мерителна колба 1000 ml, долива се до
отметката вода (3.3) и се смесва;
3.5. разтвор на натриев перхлорат, с = 1,6
mol/l—разтварят се 224,74 g монохидрат на нат-
риев перхлорат във вода (3) в мерителна колба
1000 ml и се долива до отметката вода (3) и се
смесва;
3.6. мобилна фаза за HPLC (виж забележка
9.1)—смес на ацетонитрил (3.2), разтвор на нат-
риев двуводороден фосфат (3.4) и разтвор на
натриев перхлорат (3.5), 450 + 450 + 100 (v + v
+ v), преди употреба се филтрира през мембра-
нен филтър 0,22 µm (4.3) и се дегазира разтво-
рът (напр. в ултразвукова вана (4.4) най-малко
15 min);
3.7. еталонен разтвор: чист ампролиум, 1-
[(4-амино-2-пропилпиримидин-5-ил)метил]-2-
метил-пиридиниум хлорид хидрохлорид, Е 750
(виж 9.2);
3.7.1. изходен еталонен разтвор на ампроли-
ум 500 µg/ml—претеглят се с точност 0,1 mg 50
mg ампролиум (3.7) в мерителна колба 100 ml,
разтварят се в 80 ml метанол (3.1) и колбата се
поставя за 10 min в ултразвукова вана (4.4); след
ултразвуковата обработка разтворът се довеж-
да до стайна температура, долива се вода до
отметката и се смесва; при температура под 4 °С
разтворът е стабилен в продължение на един
месец;
3.7.2. междинен еталонен разтвор на ампро-
лиум, 50 µg/ml—5 ml от изходния еталонен раз-
твор (3.7.1) се пипетират в мерителна колба 50
ml, допълва се до отметката с екстракционния
разтворител (3.8) и се смесва. При температура
под 4 °С разтворът е стабилен в продължение на
един месец;
3.7.3. калибриращи разтвори—прехвърлят се
0,5;  1 и 2 ml от междинния еталонен разтвор
(3.7.2) в няколко мерителни колби 50 ml. До-
пълват се до отметката с мобилна фаза (3.6) и
се смесва. Тези разтвори съответстват 0,5; 1 и
2 µg ампролиум на ml. Те се приготвят непос-
редствено преди употреба;
3.8. екстракционен разтворител—смес мета-
нол (3.1)-вода 2 + 1 (v + v).
4. Апарати:
4.1. оборудване HPLC с инжекционна систе-
ма, подходяща за инжектиране на обеми от
100 µl;
4.1.1. течна хроматографска колона 125 mm
Ч 4 mm, катионен обмен, пълнеж Nucleosil 10
SA, 10 µm или еквивалентен;
4.1.2. УВ детектор с регулиране дължината
на вълната или диоден полеви детектор;
4.2. мембранен филтър, материал PTFE,
0,45 µm;
4.3. мембранен филтър, 0,22 µm;
4.4. ултразвукова вана;
4.5. механичен вибратор или магнитна бър-
калка.
5. Процедура
5.1. Общи положения
5.1.1. Празна проба храна
За осъществяване на теста на възстановява-
не (5.1.2) трябва да се анализира празна проба
храна,  за да се провери отсъствието на ампро-
лиум и на субстанции, които оказват влияние.
Празната проба храна трябва да бъде подобна
по вид на пробата и ампролиум или субстанци-
ите, които оказват въздействие.
5.1.2. Тест за възстановяване
Трябва да се извърши тест за възстановява-
не чрез анализиране на празна проба храна, към
който е било добавено количество ампролиум,
подобно на наличното в пробата. За да се полу-
чи концентрация 100 mg/kg, 10 ml от изходния
еталонен разтвор (3.7.1) се прехвърлят в ерлен-
майерова колба 250 ml и разтворът се изпарява
до около 0,5 ml. Прибавят се 50 g от празната
проба храна, разбърква се добре и се оставя за
10 min, като отново се разбърква няколко пъти,
преди да се пристъпи към екстракцията (5.2).
Алтернативно, ако няма на разположение
празна проба храна, подобна на пробата (вж.
5.1.1), тестът на възстановяване може да се
извърши чрез метода добавяне на еталон. В този
случай пробата, която трябва да се анализира,
се подсилва с количество ампролиум, подобно
на това, което вече се съдържа в пробата. Тази
проба се анализира заедно с неподсилената
проба и възстановяването се изчислява чрез из-
важдане.
5.2. Екстракция
5.2.1. Предварително приготвени смеси (съдър-
жание < 1% ампролиум) и животински храни
С точност до 0,01 g се претеглят 5 до 50 g от
пробата в зависимост от съдържанието на ам-
пролиум  в ерленмайерова колба 500 ml, приба-
вят се 200 ml екстракционен разтвор (3.8). Кол-
бата се поставя за 15 min  в ултразвукова вана
(4.4). Колбата се изважда от ултразвуковата
вана, разбърква се с вибратора или бъркалката
(4.5) в продължение на 1 h. Аликватът на екст-
ракта се разрежда с мобилната фаза (3.6) до
съдържание на ампролиум от 0,5 до 2 µg/ml и се
смесва (виж забележка 9.3) 5 до 10 ml от този
разреден разтвор се филтрират през мембранен
филтър (4.2). Продължава се с определяне с
помощта на HPLC (5.3).
5.2.2. Предварително приготвени смеси (съ-
държание  і 1% ампролиум)
С точност до 0,001 g се претеглят 1 до 4 g от
предварително приготвената смес  в зависимост
от съдържанието на ампролиум  в ерленмайе-
рова колба 500 ml, прибавят се 200 ml екстрак-
ционен разтвор (3.8). Колбата се поставя за
15 min  в ултразвукова вана (4.4). Колбата се
изважда от ултразвуковата вана, разбърква се с
вибратора или бъркалката (4.5) в продължение