Държавен вестник, бр. 23, 2010 г., стр. 72

СТР.  72	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
БРОЙ  23
2.2.3. Условия за използване на ЕЛАЙЗА за ди­
агностициране на бруцелоза по говедата
2.2.3.1. Ако се използват условията за калибри­
ране за тестовете ЕЛАЙЗА, посочени в подточки 
2.2.2.1 и 2.2.2.2, относно серумни проби, диагнос­
тичната чувствителност на ЕЛАЙЗА следва да е 
равна или по-висока от тази на RBT или CFT, като 
се вземе предвид епидемиологичната ситуация, 
при която се използват тестовете.
2.2.3.2. Ако се използват условията за калибри­
ране за тестовете ЕЛАЙЗА, посочени в подточка 
2.2.2.3, за смесени млечни проби, диагностичната 
чувствителност на ЕЛАЙЗА трябва да е равна или 
по-голяма от тази на MRT, като се вземе пред­
вид не само епидемиологичната ситуация, но и 
средният и очакваният голям брой на животните 
в животновъдните системи.
2.2.3.3. В случаите, когато тестовете ЕЛАЙЗА 
се използват за целите на сертифицирането в съот­
ветствие с член 6, параграф 1 или за установяване 
и поддържане на статута на стадо в съответствие 
с приложение А, раздел II, точка 10, смесването 
на серумни проби трябва да се извърши по такъв 
начин, че резултатите от теста да могат да бъдат 
недвусмислено свързани с отделните животни, 
включени в сместа. Всеки тест за потвърждение 
трябва да бъде проведен с проби, взети от отделни 
животни.
2.2.3.4. Методът ЕЛАЙЗА може да бъде из­
ползван върху проби от мляко, взети от събраното 
мляко от ферма с най-малко 30 % млечни крави в 
процес на лактация. Ако се използва този метод, 
трябва да бъдат взети мерки, за да се гарантира, 
че взетите за изследване проби могат да бъдат 
недвусмислено свързани с отделните животни, 
чието мляко се изследва. Всеки тест за потвърж­
дение трябва да бъде проведен с проби, взети от 
отделни животни.
2.3. Изследване чрез реакция свързване на ком­
племента (CFT)
2.3.1. Антигенът представлява бактериална 
суспензия във фенолизиран физиологичен разтвор 
(NaCl 0,85 % (m/v) и фенол 0,5 % (v/v) или във 
вероналов буфер. Антигените може да се доставят 
в концентрирано състояние, при условие че фак­
торът, който трябва да се използва за разтвора, 
е посочен на етикета на ампулата. Антигените 
трябва да се съхраняват при 4 °C и да не бъдат 
замразявани.
2.3.2. Серумите трябва да бъдат инактивирани, 
както следва:
 – говежди серум: 56 – 60 °C за 30 – 50 минути;
 – свински серум: 60 °C за 30 – 50 минути.
2.3.3. За да се получи задоволителна реакция при 
провеждането на теста, се използва допълнителна 
доза, по-висока от минималната, необходима за 
цялостна хемолиза.
2.3.4. Следните проверки трябва да бъдат пра­
вени всеки път при провеждането на изследването 
чрез реакция свързване на комплемента (CFT):
а) контрол на антикомплементния ефект на 
серума;
б) контрол на антигена;
в) контрол на чувствителните червени кръвни 
телца;
г) контрол на комплемента;
д) контрол чрез използване на положителен 
серум за чувствителност при започването на 
реакцията;
е) контрол на специфичността на реакцията 
чрез използване на отрицателен серум.
2.3.5. Изчисляване на резултатите
OIEISS съдържа 1000 международни единици 
CFT (ICFTU) на милилитър. Ако серумът OIEISS 
е тестван по даден метод, резултатът се дава като 
титър (т.е. най-високият директен разтвор на 
OIEISS, предизвикващ хемолиза от 50 %, TOIEISS). 
Резултатът от изследването за тестовия серум, даден 
като титър (TTESTSERUM), трябва да бъде изра­
зен в ICFTU на милилитър. За да се конвертира 
изражението на даден титър в ICFTU, факторът 
(F), необходим за конвертиране в ICFTU на ти­
тър от неизвестен тестов серум (TTESTSERUM), 
изпитан чрез този метод, може да бъде изчислен 
по формулата:
F = 1000 × 1/TOIEISS.
Съдържанието на международните единици CFT 
на милилитър тестов серум (ICFTUTESTSERUM) 
може да бъде изчислено по формулата:
ICFTUTESTSERUM = F × TTESTSERUM.
2.3.6. Интерпретиране на резултатите
Серум, съдържащ 20 или повече ICFTU на 
милилитър,  се счита за положителен.
2.4. Млечен ринг тест (MRT)
2.4.1. Антигенът представлява бактериална 
суспензия във фенолизиран физиологичен разтвор 
(NaCl 0,85 % (m/v) и фенол 0,5 % (v/v), оцветена 
с хематоксилин. Антигенът трябва да се съхранява 
при 4 °C и да не бъде замразяван.
2.4.2. Чувствителността на антигена трябва да 
бъде стандартизирана по отношение на OIEISS по 
такъв начин, че антигенът да произведе положи­
телна реакция при разтвор от 1/500 от OIEISS в 
отрицателно мляко, а разтворът от 1/1000 трябва 
да бъде отрицателен.
2.4.3. Ринг тестът трябва да бъде правен върху 
проби от съдържанието на всеки бидон мляко или 
върху съдържанието на всяка цистерна за мляко 
от фермата.
2.4.4. Пробите от мляко не трябва да са били 
замразявани, затопляни или разклащани силно.
2.4.5. Реакцията трябва да се извърши, като се 
използва един от следните методи:
 – върху колона от мляко, висока най-малко 
25 mm, и върху обем мляко от 1 ml, към което 
са били добавени 0,03 ml или 0,05 ml от един от 
стандартизираните оцветени антигени;
 – върху колона от мляко, висока най-малко 
25 mm, и върху обем мляко от 2 ml, към което 
са били добавени 0,05 ml от един от стандартизи­
раните оцветени антигени;
 – върху обем мляко от 8 ml, към което са били 
добавени 0,08 ml от един от стандартизираните 
оцветени антигени.
2.4.6. Сместа на мляко и антигени трябва да 
бъде инкубирана при 37 °C за 60 минути едно­
временно с положителни и отрицателни работни
стандарти. Чувствителността на теста се подобря­
ва, ако инкубацията бъде продължена при 4 °C за 
период от 16 до 24 часа.
2.4.7. Интерпретиране на резултатите:
а) отрицателна реакция: оцветено мляко, без­
цветна сметана;
б) положителна реакция:
 – идентично оцветени мляко и сметана, или
 – безцветно мляко и оцветена сметана.
2.5. Тест с буфериран бруцелозен антиген (роз 
бенгал тест (RBT)