Държавен вестник, бр. 68, 2014 г., стр. 78

СТР.  78	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
БРОЙ  68
3.2. Хлороформ.
3.3. Етанол, абсолютен.
3.4. n-Пентан.
3.5. Подвижна фаза: диетилов етер.
3.6. Стандартен разтвор на бензилов алкохол: 
в мерителна колба 100 cm3 (ml) се претегля 0,1 g 
бензилов алкохол (т. 3.1) и се долива до марката 
с етанол (т. 3.3). Разбърква се.
3.7. Плаки за тънкослойна хроматография, 
стъклени, 10х20 сm или 20х20 сm, покрити със 
слой от силикагел 60 F254 с дебелина 0,25 mm.
3.8. Реактив за проявяване на петната: 12-мо­
либденофосфорна киселина, 10 % (M/V) в етанол 
(т. 3.3).
4. Апаратура
4.1. Стандартно оборудване за тънкослойна 
хроматография.
4.2. Хроматографска вана с две отделения, с 
размери приблизително 8x23x24 сm.
4.3. Хроматографска хартия Whatman или 
еквивалентна.
4.4. УВ лампа с дължина на вълната 254 nm.
5. Процедура
5.1. Приготвяне на пробата
В мерителна колба от 100 cm3 (ml) се прете­
гля 1,0 g от продукта, който ще се анализира. 
Прибавят се 3 cm3 (ml) хлороформ (т. 3.2) и се 
разклаща енергично за диспергиране на проду­
кта. Долива се до марката с етанол (т. 3.3) и се 
разклаща енергично до получаване на бистър 
или почти бистър разтвор.
5.2. Тънкослойна хроматография
5.2.1. Хроматографската вана (т. 4.2) се насища 
с n-пентан (т. 3.4), както следва: стената на вана­
та, съседна на задното отделение, се облицова с 
хроматографска хартия (т. 4.3), така че долният 
край на хартията да влиза в това отделение. В 
задното отделение се наливат 25 cm3 (ml) n-пентан 
(т. 3.4), като последният се сипва по откритата 
повърхност на облицоващата хроматографска 
хартия. Веднага се поставя капакът и ваната се 
оставя да престои 15 min.
5.2.2. На подходящи точки на стартовата линия 
на хроматографската плака (т. 3.7) се нанасят 
10 µl от разтвора на пробата (т. 5.1) и 10 µl от 
стандартния разтвор на бензилов алкохол (т. 3.6). 
Оставя се да изсъхне.
5.2.3. В предното отделение на ваната с 
пипета се поставят 10 cm3 (ml) диетилов етер 
(т. 3.5) и веднага след това в същото отделение 
се поставя плаката. Бързо се поставя капакът и 
хроматограмата се развива до разстояние 15 сm 
от стартовата линия. Плаката се изважда от 
хроматографската вана и се суши при стайна 
температура.
5.2.4. Плаката (т. 5.2.3) се разглежда под ул­
травиолетова светлина и се отбелязват местата 
на виолетовите петна. Плаката се напръсква с 
проявяващ реактив (т. 3.8) и след това се нагрява 
в продължение на 15 min при 120 °С. Бензилови­
ят алкохол се появява като тъмносиньо петно.
5.2.5. Изчислява се получената Rf-стойност за 
стандартния разтвор на бензилов алкохол. Тъм­
носиньо петно със същата Rf-стойност, получено 
от разтвора на пробата, показва присъствие на 
бензилов алкохол.
Откриваем минимум: 0,1 µg бензилов алкохол.
Б. ОПРЕДЕЛЯНЕ
1. Област на приложение
Този метод се отнася за определянето на 
бензилов алкохол в козметични продукти.
2. Дефиниция
Количеството на бензиловия алкохол, опре­
делено по този метод, се изразява в % (М/М).
3. Принцип
Пробата се екстрахира с метанол и количе­
ството на бензиловия алкохол в екстракта се 
определя чрез високоефективна течна хрома­
тография (ВЕТХ).
4. Реактиви
Всички реактиви трябва да са с квалификация 
„за ВЕТХ“, а водата – бидестилирана.
4.1. Метанол.
4.2. 4-етоксифенол.
4.3. Бензилов алкохол.
4.4. Подвижна фаза: метанол (т. 4.1)/вода = 
45 : 55 (V/V).
4.5. Основен разтвор на бензилов алкохол: в 
мерителна колба от 100 cm3 (ml) се претеглят 
около 0,1g бензилов алкохол (т. 4.3) с точност 
0,001 g. Долива се до марката с метанол (т. 4.1) 
и се разбърква.
4.6. Основен разтвор на вътрешен стандарт: 
в мерителна колба от 100 cm3 (ml) се претеглят 
около 0,1g 4-етоксифенол (т. 4.2) с точност 
0,001 g. Долива се до марката с метанол (т. 4.1) 
и се разбърква.
4.7. Стандартни разтвори: в серия от мерител­
ни колби от 25 cm3 (ml) се поставят съответни 
количества от основния разтвор на бензилов 
алкохол (т. 4.5) и от основния разтвор на вътре­
шен стандарт (т. 4.6) съгласно таблицата, дадена 
по-долу. Доливат се до марката с метанол (т. 4.1) 
и се разбъркват.
Тези стойности са дадени за информация и 
съответстват на концентрациите на стандартните 
разтвори, приготвени с използване на разтвори на 
бензилов алкохол (т. 4.5) и на 4-етоксифенол (т. 4.6), 
които съдържат съответно точно 0,1 % (M/V) 
бензилов алкохол и 0,1 % (M/V) 4-етоксифенол.
Стандартен
разтвор
Концентрация на бензилов алкохол
Концентрация на 4-етоксифенол
добавени cm3 (ml)
(4.5)
µg/cm3 (ml)
добавени cm3 (ml)
(4.6)
µg/cm3 (ml)
I
II
III
IV
V
0,5
1,0
2,0
3,0
5,0
20
40
80
120
200
2,0
2,0
2,0
2,0
2,0
80
80
80
80
80