Държавен вестник, бр. 72, 2016 г., стр. 132

СТР.  132	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
БРОЙ  72
В Референтната лаборатория на Общността е 
извършено генно типизиране на вирусни изолати 
от България. 
Описание на целите, които са поставени по 
отношение на методите за изследване, и групите 
животни, които ще бъдат изследвани, са посочени 
в Глава 7.1.1.1). 
4.4.6.3.3. Описание на лабораторните тестове, 
използвани в България.
Серология – основни принципи и диагностич-
на стойност
При свинете, заразени с вируса на болестта 
КЧС, антитела могат да се открият в кръвния се-
рум две-три седмици след заразяването. При оз-
дравели свине защитните и неутрализиращи анти-
тела се откриват в течение на години и през целия 
живот. При болни животни в крайна фаза поня-
кога се откриват антитела. При хронично болни 
свине антитела се откриват в продължение на ня-
колко дни в края на първия месец след заразява-
нето. Заразените в утробата прасета са имунотоле-
рантни към вируса и не произвеждат специфични 
антитела. През първите дни след раждане могат да 
се открият майчини антитела, които се доказват 
при здравите прасенца без виремия до около две 
седмици. Ако се открият антитела при прасета над 
тримесечна възраст, е малко вероятно антителата 
да са с произход от майката. 
Откриването на антитела срещу вируса на 
болестта КЧС в серумни или плазмени проби 
позволява да се потвърди диагнозата на болестта 
КЧС в съмнителните стопанства, да се установи 
периодът от началото на заразяването в огнище-
то и да се вземат мерки за наблюдение и надзор. 
Серологичните изследвания служат най-вече за 
откриване на болестта КЧС в наскоро заразен 
животновъден обект. 
Малък брой засегнати свине с нисък титър на 
антитела говори за скорошна инфекция (две-три 
седмици). Голям брой засегнати свине с високи ти-
три на антитела означава, че вирусът е проникнал 
в животновъдния обект най-малко преди месец. 
Местонахождението на серопозитивните свине в 
обекта може да даде полезна информация за начи-
на, по който вирусът на болестта КЧС е проникнал 
в обекта.
Въпреки това е необходимо да се направи точ-
на оценка и интерпретация на резултатите от се-
рологичните изследвания, като се отчетат всички 
клинични, вирусологични и епизоотични данни в 
рамките на изследването, което се провежда в слу-
чай на съмнение или потвърждение на наличието 
на болестта КЧС.
Вирус-неутрализационна 
реакция 
(ВНР) 
и 
ELISA са най-подходящи за серологична диагно-
стика на болестта КЧС. Качеството и ефикасност-
та на серологичната диагностика, извършвана от 
националната лаборатория, непрекъснато се кон-
тролира чрез междулабораторен сравнителен тест, 
организиран периодично от Референтната лабора-
тория на Европейския съюз.
ВНР се базира на определяне на неутрализира-
що действие на антителата в серумна проба върху 
вируса, изразена като неутрализираща степен от 
50 %. 
Известно количество от вируса на болестта 
КЧС се инкубира при 37 °C в степенно разреден 
серум. Приготвя се серумен разтвор в разреждане 
1 към 10. Когато е необходима пълна титрация, 
се приготвят серумни разтвори 1 към 2 и 1 към 
5. Всеки един от така приготвените серумни раз-
твори се смесва с равен обем суспензия на вируса, 
съдържаща 100 инфекциозни дози (TCID 50).
След инкубирането със сместа се заразяват кле-
тъчни култури, които се инкубират от 3 до 5 дни. 
След този инкубационен период културите се фик-
сират и всяко намножаване на вирус се открива 
чрез имунно маркиране (имунопероксидазна или 
имунофлуоресцентна реакция). 
Резултатите от ВНР се изразяват с реципрочна-
та стойност на началното разреждане на серума, 
при което половината от заразените клетъчни кул-
тури (краен титър 50 %) не показват размножаване 
на вируса (няма специфично маркиране). Прави се 
оценка на титъра между две разреждания. Край-
ното разреждане е ефективното разреждане на се-
рума по време на неутрализиращата реакция след 
прибавянето на вируса, но без добавяне на клетъч-
на суспензия.
ВНР е най-чувствителният и най-надеждният 
метод за откриване на антитела срещу вируса на 
болестта КЧС. Препоръчва се извършване на се-
рологично изследване както на отделни животни, 
така и на стада. Изследването позволява да се от-
крият и антитела с кръстосана неутрализация.
Прилагането на ВНР за откриване на антитела 
срещу вируса на Мукозна болест – вирусната диа-
рия по говедата и Бордерова болест по овцете, се 
основава на същите принципи и се използва за 
извършване на диференциална диагноза на болес-
тта КЧС. 
Щамовете на вируса, които се използват във 
вирус-неутрализационната реакция, трябва да от-
говарят на препоръките на референтната лабора-
тория на Европейския съюз.
Разработени са различни варианти на ELISA 
с използване на специфични моноклонални анти-
тела – конкурентен (блокиращ) метод и неконку-
рентна ELISA.
Конкурентният (блокиращ) метод обикнове-
но се основава на моноклонални антитела. Ако 
серумната проба съдържа антитела срещу вируса 
на болестта КЧС, свързването на моноклоналното 
тяло, съчетано с пероксидаза, с антигена на вируса 
води до намаляване на цветовата екстинция. 
В НРЛ се работи с два типа на гореспоменатите 
ELISA тестове: за доказване на Е2 антитела и за 
Еrns антитела срещу вируса на КЧС, произведени 
от швейцарската фирма BOMMELI. При работа с 
тях се спазват всички инструкции на производи-
теля.
При неконкурентната ELISA свързването на се-
румните антитела с антигена се сравнява директно 
с помощта на антитела, съчетани с пероксидаза.
Националната лаборатория редовно извършва 
контрол на чувствителността и специфичността 
на всички партиди от ELISA, като използва набор 
референтни серуми, предоставени от референтна-
та лаборатория на Европейския съюз. Този набор 
включва:
– серуми от свине в начална фаза на инфекция 
с вируса на болестта КЧС (до 21 дни от ин-
фектирането);
– серуми от оздравяващи животни (след дваде-
сет и първия ден от инфекцията);