Държавен вестник, бр. 11, 2003 г., стр. 89

Б Р О Й  11
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  89
• Сонда с диаметър 15 mm за ЯМР изследване. В
предварително претеглена колба се прибавят 7 ml алко-
хол, получен по начина, описан в т. 3.1.2, и се претегля
с точност 0,1 mg—mA; прибавят се 3 ml вътрешен стан-
дарт (TMU) и отново се претегля с точност до 0,1 mg—
mst. Хомогенизира се с разклащане.
• Сонда за ЯМР с диаметър 10 mm. Достатъчни са
3,2 ml алкохол и 1,3 ml (TMU). Според типа на спектро-
метъра и сондата, които се използват (т. 4), се добавя
достатъчно количество от хексафлуоробензена като
субстанция за стабилизиране на честотата на ядрено-
магнитното поле.
Спектрометър
Сонда
10 mm
15 mm
7,05Т
150 µl
200 µl
9,4Т
35 µl
50 µl
3.4. Подготовка на водна проба за ЯМР изследване
с цел възможно определяне на нейното изотопно съот-
ношение.
3.4.1. Реагенти—N,N-тетраметилкарабамид—вж.
т. 3.3.1.
3.4.2.Начин на работа
В предварително тарирана колба се прехвърлят 3 ml
вода, получена както е описано в т. 3.1.2 или 3.2, и се
измерва с точност до 0,1 mg—m'E. Добавят се 4 ml вът-
решен стандарт (TMU) и се претегля с точност до 0,1
mg —m'st. Хомогенизира се чрез разклащане.
Забележка. Ако лабораторията разполага с електро-
нен умножител за определяне на изотопни съотношения,
измерването може да се проведе с този инструмент, за да
се намали натоварването на ЯМР спектрометъра. Необ-
ходимо е да се стандартизира съотношението TIV (т. 5.2)
за всички партиди вина, които се изследват.
4. Записване  на спектрите ЯМР на 2Н за алкохола
и за водата
Определяне на изотопното съотношение
4.1. Апарат
• ЯМР-спектрометър, снабден със специална деуте-
риева сонда, настроена на характерна честота Vо на
полето Bo (или за Во=7,05 Т; Vо=46,05 MHz, и за
Во=9,4 T и Vо=61,4 MHz), когато има и протоново раз-
делящ канал и канал  за стабилизиране на честотата на
ядреномагнитното поле (затворено) на флуориновата
честота. Разлагането, измерено върху спектъра, транс-
формирано без експоненциална мултипликация (т.е.
LB=0)(фиг. 2б) и изразена чрез широчината при полу-
височината на метиловия и метиленовия сигнал на ета-
нола и метиловия сигнал на (TMU), да е по-ниско от
0,5 Hz.
• Чувствителността, измерена чрез експоненциален
мултиплициращ фактор LB = 2 (фиг. 2a), да е по-голя-
ма или еквивалентна на 150 за метиловия сигнал на
етанол с алкохолно съдържание 95 обемни % (93,5
масови %). При тези условия интервалът на сигурност
за измерването на височината на сигнала, калкулиран
за 97,5% вероятност (по критерия на Стюдант-Фишер)
и 10 повторения на спектъра, е 0,35 %.
• Автоматичен пробовземач.
• Компютър и софтуер.
• Сонди за проби 15 mm или 10 mm според вида на
спектрофотометъра.
4.2. Стандартизиране на спектрометъра и проверки.
4.2.1. Стандартизиране—прави се редовно стандар-
тизиране за хомогенност и чувствителност според инс-
трукциите на производителя.
4.2.2. Проверка на валидността на проведената стан-
дартизация—използват се стандартни етаноли, означе-
ни с буквите С, V и В, които имат изотопни концентра-
ции, различни помежду си, своевременно стандартизи-
рани. Те носят следните значения:
С—алкохол от тръстикова захар или царевично
нишесте;
V—винен спирт;
В—алкохол от захар, добита от захарно цвекло.
Пробите могат да бъдат доставени от Community
Bureau of References.
Като се следва процедурата, описана в т. 4.3, се опре-
делят изотопните стойности на тези алкохоли, като се
означават по следния начин: Сmes; Vmes; Вmes (вж. т. 5.3).
Сравняват се със съответните еталонни стойности,
изобразявайки високите стойности на Сst; Vst; Вst (вж. т. 5.3).
Фиг. 2а. Спектър RMN2H на етанола на виното с
вътрешен стандарт (TMU:N,N—тетраметилурея)
Фиг. 2б. Спектър 2H на етанола, реализиран при
същите условия както на фиг. 2а, но без експоненциал-
на мултипликация (LB = 0)
Стандартното отклонение за повторяемостта, по-
лучено на средно 10 повторения на всеки един спектър,
да е по-малко от 0,01 за съотношението R и по-малко от
0,3 ppm за (D/H)I и (D/H)II.
Средните стойности, получени за различните изо-
топни параметри [R, (D/H)I, (D/H)II], да са в рамките на
стандартното отклонение на повторяемостта, дадено
за тези параметри за трите стандартни алкохоли от
C.B.Ref. Ако стойностите не са в посочените граници,
проверките се правят отново.
4.3.Условия за получаване на ЯМР спектри
Алкохолната проба се поставя в епруветка от 10 или
15 mm или се въвежда в сондата. Пробата е подготвена,
както е описано в т. 3.3 (или водната проба, подготвена,
както е описано в т. 3.4).
Условията за получаване на ЯМР спектър са след-
ните:
—постоянна температура на сондата (например
302 К);
—време за овладяване—най-малко 6,8 s за 1200 Hz
спектрална широчина (16 К памет) (около 20 ppm при
61,4 MHz, или 27 ppm при 46,1 MHz);
—импулс: 90°;
—уточняване на времето за овладяване; неговата
стойност да е от същия порядък на нарастване както
времето за подготовка на пробата (dwell time);
—параболично радиодетектиране: фиксира се оф-
сета 01 между OD и CHD референтните сигнали за ета-
нола и между HOD и (TMU)—референтните сигнали за
водата;
—определя се стойността на разделящия офсет 02
от протоновия спектър, измерен от разделящата спира-
ла бобина върху същата епруветка; добро разделяне се