Държавен вестник, бр. 23, 2010 г., стр. 71

БРОЙ  23	
Д Ъ Р Ж А В Е Н  В Е С Т Н И К 	
СТР.  71  
следвания. Методът на полимеразната верижна 
реакция (PCR) предоставя допълнителни средства 
за откриване.
Когато е възможно, Brucella spp. следва да бъдат 
изолирани по култури, като се използват обикно­
вени или селективни среди от утробни секреции, 
абортирани ембриони, секреции от вимето или от 
определени тъкани, като лимфни възли и мъжки 
и женски репродуктивни органи.
След изолирането видовете и биоварът се 
идентифицират чрез фаголиза и/или тестове с 
окислителен метаболизъм според биохимични и 
серологични критерии и критерии, свързани с кул­
турите. PCR може да служи както за допълнителен 
метод, така и за метод за определяне на биотипа, 
основан на специфични геномни поредици.
Използваните техники и среди, тяхната стан­
дартизация и интерпретирането на резултатите 
трябва да отговарят на определеното от Наръчника 
по диагностични тестове и ваксини за сухоземни 
животни на OIE, шесто издание, 2008 г., глава 
2.4.3 (бруцелоза по говедата), глава 2.7.2 (бруце­
лоза по козите и овцете) и глава 2.8.5 (бруцелоза 
по свинете).
2. ИМУНОЛОГИЧНИ ТЕСТОВЕ
2.1. Стандарти
2.1.1. За приготвянето на всички антигени, 
използвани в роз бенгал теста (RBT), в серум аг­
лутинационния тест (SAT), в теста за фиксиране на 
комплемента (CFT) и в млечния ринг тест (MRT), 
трябва да се използва Weybridge щам № 99 или 
USDA щам 1119-3 на Brucella abortus биовар 1.
2.1.2. Стандартният референтен серум за RBT, 
SAT, CFT и MRT е международният стандартен 
референтен серум на OIE (OIEISS), наричан преди 
втори международен стандартен серум на СЗО 
срещу Brucella abortus (ISAbS).
2.1.3. Стандартните референтни серуми за 
имуноензимните методи (ЕЛАЙЗА) са:
 – серумът OIEISS;
 – слабоположителният стандартен серум 
ЕЛАЙЗА на OIE (OIEELISAWPSS);
 – силноположителният стандартен серум 
ЕЛАЙЗА на OIE (OIEELISASPSS);
 – отрицателният стандартен серум ЕЛАЙЗА 
на OIE (OIEELISANSS).
2.1.4. Стандартните референтни серуми за флу­
оресцентно-поляризационните тестове (FPA) са:
 – слабоположителният стандартен серум 
ЕЛАЙЗА на OIE (OIEELISAWPSS);
 – силноположителният стандартен серум 
ЕЛАЙЗА на OIE (OIEELISASPSS);
 – отрицателният стандартен серум ЕЛАЙЗА 
на OIE (OIEELISANSS).
2.1.5. Стандартните серуми, описани в подточки 
2.1.3 и 2.1.4, се доставят от референтната лабора­
тория на Общността за бруцелоза или Агенцията 
за ветеринарните лаборатории (VLA), Уейбридж, 
Обединеното кралство.
2.1.6. OIEISS, OIEELISAWPSS, OIEELISASPSS 
и OIEELISANSS са международни първични стан­
дарти, от които във всяка държава членка трябва 
да се установят вторични референтни национални 
стандартни серуми (работни стандарти) за всеки 
тест, посочен в подточка 2.1.1.
2.2. Имуноензимни методи (ЕЛАЙЗА) или други 
свързващи тестове за откриване на бруцелоза по 
говедата в серум или мляко
2.2.1. Материали и реагенти
Използваната техника и интерпретирането на 
резултатите трябва да са одобрени в съответствие 
с принципите, заложени в Наръчника по диагнос­
тични тестове и ваксини за сухоземни животни на 
OIE, шесто издание, 2008 г., глава 1.1.4, и трябва 
да включват поне лабораторни и диагностични 
изследвания.
2.2.2. Стандартизация на теста
2.2.2.1. Стандартизация на тестовата процедура 
за индивидуални серумни проби:
а) предварителният разтвор от 1/150 (1) от 
OIEISS или предварителният разтвор от 1/2 от 
OIEELISAWPSS, или предварителният разтвор от 
1/16 от OIEELISASPSS, реализиран в отрицателен 
серум (или в смес от отрицателни серуми), трябва 
да доведе до положителна реакция;
б) предварителният разтвор от 1/600 от 
OIEISS или предварителният разтвор от 1/8 от 
OIEELISAWPSS, или предварителният разтвор от 
1/64 от OIEELISASPSS, реализиран в отрицателен 
серум (или в смес от отрицателни серуми), трябва 
да доведе до отрицателна реакция;
в) OIEELISANSS трябва да води винаги до 
отрицателна реакция.
2.2.2.2. Стандартизация на тестовата процедура 
за серумни проби под формата на смеси:
а) предварителният разтвор от 1/150 от 
OIEISS или предварителният разтвор от 1/2 от 
OIEELISAWPSS, или предварителният разтвор от 
1/16 от OIEELISASPSS, реализиран в отрицателен 
серум (или в смес от отрицателни серуми) и разре­
ден отново в отрицателни серуми в съотношение, 
равно на броя на пробите, съставляващи сместа, 
трябва да доведе до положителна реакция;
б) OIEELISANSS трябва да води винаги до 
отрицателна реакция;
в) тестът трябва да позволява да се открие 
наличието на инфекция в отделно животно или 
в група от животни, чиито серумни проби съста­
вляват сместа.
2.2.2.3. Стандартизация на тестовата процедура 
за проби от мляко или суроватка под формата 
на смеси:
а) предварителният разтвор от 1/1000 от 
OIEISS или предварителният разтвор от 1/16 от 
OIEELISAWPSS, или предварителният разтвор от 
1/125 от OIEELISASPSS, реализиран в отрицателен
серум (или в смес от отрицателни серуми) и раз­
реден отново в отрицателно мляко от 1/10, трябва 
да доведе до положителна реакция;
б) OIEELISANSS, разреден в отрицателно мляко 
от 1/10, трябва винаги да води до отрицателна 
реакция;
(1) За целите на това приложение разтвори­
те, посочени за изготвяне на течни реагенти, са 
изразени например като 1/150, което означава 
разтвор от 1 на 150.
в) тестът трябва да позволява да се открие 
наличието на инфекция в отделно животно или 
в група от животни, чиито проби от мляко или 
суроватка съставляват сместа.