Държавен вестник, бр. 28, 2007 г., стр. 51

Б Р О Й  28
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  51
1
2
3
Regione Veneto Unitа Periferica
per i Servizi Fitosanitari
Verona
Италия
Nederlandse Algemene
Keuringsdienst
Emmeloord
Холандия
Plantenziektenkundige Dienst
Wageningen
Холандия
Direсзгo-Geral de Protecзг
das Culturas
Lisbon
Португалия
Centro Diagnostico de
Aldearrubia
Salamanca
Испания
Instituto Valenciano de
Investigaciones Agrarias
Valencia
Испания
Swedish University of
Agricultural Sciences
Uppsala
Швеция
(1) Учени за контакти: виж интернет страница
http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main.
Допълнение 2
Хранителни среди за изолиране и култивиране на
R. solanacearum
(а) Общи хранителни среди:
Nutrient agar (NA)
Nutrient agar (Difco)
23,0 g
Distilled water
1,0 L
Съставките се разтварят и средата се автокла-
вира при 121 °С за 15 минути.
Yeast Peptone Glucose Agar (YPGA)
Yaest extract (Difco)
5,0 g
Bacto-peptone (Difco)
5,0 g
D(+)Glucose (monohydrate)
10,0 g
Bacto-Agar (Difco)
15,0 g
Distilled water
1,0 L
Съставките се разтварят и средата се автокла-
вира при 121 °С за 15 минути.
Sucrose Peptone Agar (SPA)
Sucrose
20,0 g
Bacto-peptone (Difco)
5,0 g
K2HPO4
0,5 g
MgSO47H2O
0,25 g
Bacto-Agar (Difco)
15,0 g
Distilled water
1,0 L
pH 7,2—7,4
Съставките се разтварят и средата се автокла-
вира при 121 °С за 15 минути.
Тетразолна среда на Kelman
Casamino acids (Difco)
1,0 g
Bacto-peptone (Difco)
10,0 g
Dextrose
5,0 g
Bacto-Agar (Difco)
15,0 g
Distilled water
1,0 L
Съставките се разтварят и средата се автокла-
вира при 121 °С за 15 минути.
Средата се охлажда до 50 °С и се добавя на кап-
ки стерилизиран разтвор на 2,3,5-трифенил тетра-
золиев хлорид (Sigma) за получаване на финална
концентрация от 50 mg на L.
(б) Валидирани селективни хранителни среди:
SMSA (Englebrecht, 1994, с измененията от
Elphinstone et al., 1996)
Основна среда
Casamino acids (Difco)
1,0 g
Bacto-peptone (Difco)
10,0 g
Glycerol
5,0 ml
Bacto-Agar (Difco); виж забележка 2
15,0 g
Distilled water
1,0 L
Съставките се разтварят и средата се автокла-
вира при 121 °С за 15 минути.
Средата се охлажда до 50 °С и се добавят на
капки филтрирани и стерилизирани водни разтво-
ри на следните съставки за получаване на опреде-
лените крайни концентрации:
Crystal Violet (Sigma)
5 mg на l
Polymixsin-B-Sulphate (Sigma P-1004) 600 000 U
(около
100 mg)
на l
Bacitracin (Sigma B-0125)
1250 U
(около
25 mg) на l
Chloramphenicol (Sigma C-3175)
5 mg на l
Penicillin-G (Sigma P-3032)
825 U
(около
0,5 mg) на l
2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride
50 mg на l
(Sigma)
Забележки:
1. Използването на реагенти, различни от оп-
ределените по-горе, може да окаже влияние върху
растежа на R. solanacearum.
2. Може да се използва Oxoid Agar # 1 вместо
Bacto-Agar (Difco). В такъв случай растежът на R.
solanacearum ще се забави, въпреки че растежът на
конкурентните сапрофити може също да се реду-
цира. За появата на типичните колонии на R.
solanacearum може да са необходими 1 до 2 дни
повече, а червеното оцветяване може да е по-свет-
ло, отколкото при Bacto-Agar (Difco).
3. Увеличена концентрация на бацитрацина до
2500 U на l може да редуцира популациите от кон-
курентни бактерии, без да засегне растежа на
R. solanacearum.
Средите и разтворeните антибиотици се съхра-
няват при 4 °С на тъмно и се използват в срок от
един месец.
Преди използване по повърхността на петри-
тата не трябва да има влага.
Да се избягва прекомерно изсушаване на пет-
ритата.
Качествен контрол трябва да се осъществява
след приготвянето на всяка нова партида храни-
телна среда, като се прави посявка на суспензия
от референт на щам на R. solanacearum (виж До-
пълнение 3) и се наблюдава за появата на типич-
ни колонии след инкубиране при 28 °С за два до
пет дни.
(в) Утвърдена хранителна среда за обогатяване
SMSA Broth (Elphinstone et al., 1996)
Приготвя се като SMSA, но се изключват Bacto-
Agar и 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride.
Модифицирана Wilbrink broth (Caruso et al., 2002)
Sucrose
10 g
Proteose peptone
5 g
K2HPO4
0,5 g
MgSO4
0,25 g
NaNO3
0,25 g
Distilled water
1 L
Съставките се разтварят, средата се автокла-
вира при 121 °С за 15 минути и се охлажда до 50 °С.
Добавят се разтворените антибиотици както
при SMSA хранителна среда.