Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 28

С Т Р .  28
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
Б Р О Й  109
Коефициент на вариация (%) за стандартно
отклонение между лабораториите (St)
Аминокиселина
Референтен материал
Треонин Цистеин Метионин Лизин
Смесена храна за свине
4,1
9,9
7,0
3,2
n = 15
n = 17
n = 17
n = 13
Компаунд за бройлери
5,2
8,8
10,9
5,4
n = 16
n = 18
n = 18
n = 16
Белтъчен концентрат
3,8
12,3
13,0
3,0
n = 16
n = 17
n = 17
n = 15
Предварително
4,3
-
6,9
6,7
приготвена смеска
n = 16
n = 16
n = 16
n = брой участващи лаборатории.
8. Използване на референтните материали
Правилното прилагане на метода се прове-
рява чрез извършване на повтарящи измервания
на сертифицирани референтни материали, ко-
гато има такива на разположение. Препоръчва
се калибриране със сертифицирани калибрира-
ни разтвори на аминокиселини.
9. Забележки
9.1. Поради различия между анализаторите
на аминокиселини крайните концентрации на
калибрираните разтвори на еталонни аминоки-
селини (вж. 3.27.4 и 3.27.5) и на хидролизатите
(вж. 5.3.4) трябва да се вземат като насока.
Обхватът на линейна реакция на апарата
трябва да се провери за всички аминокиселини.
Еталонният разтвор се разрежда с цитратен
буфер, за да даде пикова площ в средата на об-
хвата.
9.2. Когато за анализ на хидролизатите се
използва висококачествено течно хроматограф-
ско оборудване, експерименталните условия
трябва да се оптимизират в съответствие с пре-
поръките на производителя.
9.3. При прилагането на метода за животин-
ски храни, които съдържат повече от 1% хло-
рид (концентрат, минерални храни, допълни-
телни храни), може да се случи подценяване на
метионина и трябва да се извърши специална
обработка.
ХХ. Определяне на олахиндокс
(2-[N-2’-(хидроксиетил(карбамоил]-3-метил-
хиноксалин-N1qN4-диоксид)
1. Цел и обхват
Това е метод за определяне на олахиндокс в
животински храни. Долната граница на опре-
деляне е 5 mg/kg.
2. Принцип
Пробата се извлича със смес вода-метанол.
Съдържанието на олахиндокс се определя с
висококачествен течен хроматограф обратна
фаза (HPLC), като се използва УВ детектор.
3. Реактиви:
3.1. метанол;
3.2. метанол с качество HPLC;
3.3. вода с качество HPLC;
3.4. мобилна фаза за HPLC;
смес вода (3.3)—метанол (3.2), 900 + 100 (V+V).
3.5. Еталонна субстанция: чист олахиндокс
(2-[N-2’-(хидроксиетил(карбамоил]-3-метил-
хиноксалин-N1qN4-диоксид), E 851;
3.5.1. изходен еталонен разтвор на олахин-
докс, 250 µg/ml.
Претеглят се 50 mg олахиндокс (3.5) с точ-
ност 0,1 mg в мерителна обемна колба 200 ml и
се прибавят  около 190 ml вода. След това кол-
бата се поставя за 20 min в ултразвукова вана
(4.1). След ултразвуковата обработка разтво-
рът се довежда до стайна температура, съдър-
жанието се допълва до отметката с вода и се
разбърква. Колбата се обвива с алуминиево
фолио и се съхранява в хладилник. Всеки месец
разтворите се заменят със свежи.
3.5.2. Междинен еталонен разтвор на ола-
хиндокс, 25 µg/ml
10 ml от изходния еталонен разтвор (3.5.1) се
прехвърлят в мерителна обемна колба 100 ml,
допълват се до отметката с мобилна фаза (3.4)
и се разбъркват. Колбата се обвива с алумини-
ево фолио и се съхранява в хладилник. Този
разтвор се приготвя всеки ден.
3.5.3. Калибриращи разтвори:
В няколко градуирани колби 50 ml се прех-
върлят 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 15,0 и 20,0 ml междинен
еталонен разтвор (3.5.2). Допълват се до отмет-
ката с мобилна фаза (3.4) и се размесват. Кол-
бите се обвиват с алуминиево фолио. Тези раз-
твори отговарят съответно на 0,5; 1,0; 2,5; 5,0;
7,5 и 10,0 µg олахиндокс на ml. Разтворите тряб-
ва да се приготвят всеки ден.
4. Апаратура:
4.1. ултразвукова вана;
4.2. механична бъркалка;
4.3. оборудване HPLC с УВ детектор с про-
менлива дължина на вълната или диоден де-
тектор;
4.3.1. хроматографска колона 250 mm Ч 4 mm
С18, частици 10µµm или еквивалентна;
4.4. мембранен филтър  0,45 µm.
5. Процедура
Забележка. олахиндоксът e чувствителен към свет-
лината. Всички операции се извършват при разсеяна
светлина или се използват тъмнокафяви стъкленици.
5.1. Общи положения
5.1.1. Трябва да се анализира празна проба
храна,  за да се провери отсъствието на олахин-
докс и на субстанции, които оказват влияние.
5.1.2. Извършва се тест за възстановяване
чрез анализиране на празна проба храна, към
който е било добавено количество олахиндокс,
подобно на наличното в пробата. За да се полу-
чи концентрация 50 mg/kg, 10 ml от изходния
еталонен разтвор (3.5.1) се прехвърлят в ерлен-
майерова колба от 250 ml и разтворът се кон-
центрира чрез изпаряване до около 0,5 ml. При-
бавят се 50 g от празната проба храна, разбър-
ква се добре и оставя за 10 min, като отново се
разбърква няколко пъти, преди да се пристъпи
към екстракцията (5.2).
Забележка. За целите на този метод празната проба
храна трябва да бъде подобна на тази на пробата и в нея
не трябва да се открива олахиндокс.