Държавен вестник, бр. 109, 2002 г., стр. 63

Б Р О Й  109
Д Ъ Р Ж А В Е Н   В Е С Т Н И К
С Т Р .  63
3.4. етилов ацетат;
3.5. оцетна киселина, глациална (във форма-
та на лед);
3.6. халофугинон—стандартна субстанция
DL-транс-7-бромо-6-хлоро-3-[3-(3-хидрокси-
2-пиперидил)ацетонил]-квиназолин-4-(3Н)-на
хидробромид, Е 764);
3.6.1. фондов стандартен разтвор на халофу-
гинон, 100 mg/ml—претеглят се с точност до
0,1 mg 50 mg халофугинон (3.6) в градуирана
колба с вместимост 500 ml, разтварят се в буфе-
рен разтвор на амониев ацетат (3.18), допълва
се до маркировката с буферен разтвор и се смес-
ва. Този разтвор остава стабилен в продълже-
ние на 3 седмици при температура 5°С, при по-
ложение че се съхранява на тъмно;
3.6.2. разтвори за калиброване—в една реди-
ца от градуирани колби с вместимост 100 ml се
прехвърлят 1, 2, 3, 4 и 6,0 ml от основния стан-
дартен разтвор на халофугинон (3.6.1). Допълва
се до маркировката с подвижна фаза (3.21) и се
смесва. Разтворите ще имат съответно концен-
трации на халофугинон  1, 2, 3, 4 и 6,0 ml. Преди
употреба тези разтвори трябва да са прясно
приготвени;
3.7. хидрохлорна (солна) киселина (r 20—в
концентрация приблизително 1,16 g/ml);
3.8. метанол;
3.9. сребърен нитрат;
3.10. натриев аскорбат;
3.11. натриев карбонат;
3.12. натриев хлорид;
3.13. EDTA (етилен-диамин-тетра-оцетна
киселина, двунатриева сол);
3.14. вода, клас HPLC;
3.15. разтвор на натриев карбонат, обем, ра-
вен на 10 g/100 ml;
3.16. натриев хлорид—наситен разтвор на
натриев карбонат, обем, равен на 5 g/100 ml;
50 g натриев карбонат се разтварят (3.11) във
вода, разрежда се до 1 l и се добавя натриев хло-
рид (3.12), докато се получи наситен разтвор;
3.17. солна киселина, приблизително 0,1 mol/l;
10 ml солна киселина се разтварят (3.7) във
вода, докато се получи 1 l;
3.18. буферен разтвор на амониев ацетат,
приблизително 0,25—разтварят се 19,3 g амо-
ниев ацетат (3.3) и 30 ml оцетна киселина (3.5)
във вода (3.14) и се разреждат до 1 l;
3.19. подготвяне на амберлит XAD-2 смола—
измива се подходящо количество амберлит (3.2)
с вода, докато бъдат отстранени всички хло-
ридни йони,  като това се индицира посредст-
вом теста със сребърен нитрат (3.20), който се
изпълнява в изхвърлената течна фаза. След това
смолата се измива с 50 ml метанол (3.8), изхвър-
ля се метанолът и се съхранява смолата под
свеж метанол;
3.20. разтвор на сребърен нитрат, приблизи-
телно 0,1 mol/l —0,17 g сребърен нитрат се разтва-
рят (3.9) в 10 ml вода;
3.21. подвижна фаза HPLC—смесват се 500 ml
ацетонитрил (3.1) с 300 ml буферен разтвор на
амониев ацетат (3.3 ) и 1,200 ml вода (3.14).
Киселинността се регулира на рН = 4,3, като се
използва оцетна киселина (3.5). Филтрира се
през филтър 0,22 mm (4.8) и разтворът се дега-
зира (напр. посредством почистване с ултраз-
вук в продължение на 10 min). Този разтвор
остава стабилен в продължение на един месец,
при положение че се съхранява на тъмно място
в затворен съд.
4. Апаратура:
4.1. ултразвукова баня;
4.2. ротационен филмов (тънкослоен) изпа-
рител;
4.3. центрофуга;
4.4. оборудване HPLC, което има детектор
на ултравиолетови лъчи с променлива дължи-
на на вълната или детектор с диодна решетка;
4.4.1. течна хроматографска колона,
300 mm > 4 mm, С 18,10 mm опаковка, или екви-
валентна колона;
4.5. стъклена колона (300 mm > 10 mm), снаб-
дена с филтър от синтеровано стъкло и спирач-
но кранче;
4.6. филтри от стъкловлакно, с диаметър
150 mm;
4.7. мембранни филтри—0,45 mm;
4.8. мембранни филтри—0,22 mm.
5. Процедура
Забележка. Халофугинонът като свободна основа е
нестабилен в разтвори на алкалин и на етилов ацетат,
ако не остане в етиловия ацетат в продължение на пове-
че от 30 min.
5.1. Общи положения
5.1.1. Анализира се храна без добавки (чиста
храна), за да се провери и удостовери това, че не
присъстват нито халофугинон, нито други вклю-
чени субстанции.
5.1.2. Провежда се тест за възстановяване,
като се анализира храната без хранителни до-
бавки, която е била подсилена посредством
добавянето на известно количество халофуги-
нон, аналогично на това, което присъства в
пробата.
За да се подсили на ниво 3 mg/kg, се добавят
300 ml от фондовия стандартен разтвор (3.6.1),
докато се получи 1 l от чистата храна, смесва се
и се изчаква 10 min, преди да се продължи с
екстрахирането (5.2).
Забележка. За целите на този метод чистата храна
трябва да е аналогична по вид на тази от пробата и при
анализа да не се открие халофугинон.
5.2. Екстрахиране
Претеглят се с точност до 0,1 mg 10 mg от
подготвената проба в центрофужна тръбичка с
вместимост 200 ml, добавят се 0,5 g натриев
аскорбат (3.10), 0,5 g EDTA (етилен-диамин-
тетра-оцетна киселина, двунатриева сол) (3.13)
и 20 ml вода и се смесва. Тръбичката се поставя
за 5 min във водна баня (80 °С). След охлаждане
до стайна температура се добавят 20 ml разтвор
на натриев карбонат (3.15) и се смесва. Неза-