Detección de las mutaciones g.14917delT y g.12573C> ubicadas en el exón 10 del gen enamelina (ENAM) en pacientes de familias afectadas con amelogénesis imperfecta de tipo hipoplásica

Las Amelogénesis Imperfectas (AI) son desórdenes hereditarios que afectan el desarrollo del esmalte dental, provocando anomalías en su estructura y composición. Clínicamente, se pueden clasificar como AI hipoplásicas, hipocalcificadas e hipomaduras, pudiendo presentarse en forma combinada y con diversos patrones de herencia. Actualmente, se conoce que mutaciones en genes que codifican para proteínas de la matriz del esmalte como amelogenina (AMELX), enamelina (ENAM), calicreína 4 (KLK4), enamelisina (MMP-20), distal-less 3 (DLX3), miembro H de la familia con similitud de secuencia 83 (FAM83H) y proteína 72 con repetidos WD (WDR72) se asocian con varios tipos de AI. Al respecto, el gen ENAM es el candidato más adecuado de estudiar a nivel de secuencia, cuando se analizan molecularmente casos de AI hipoplásicas con patrones de herencia autosómicos dominantes y/o recesivos. El objetivo de este trabajo de tesis fue realizar un estudio clínico-radiográfico y genético molecular de cuatro familias Chilenas afectadas con AI hipoplásica, que presentaron genealogías compatibles con herencia autosómica dominante y/o recesiva. Dado que, en un trabajo anterior se logró descartar la presencia de ocho de las diez mutaciones reportadas hasta la fecha en el gen ENAM, se planteó la siguiente hipótesis: “Los pacientes analizados en este estudio, que se encuentran afectados con Amelogénesis Imperfecta de tipo hipoplásica, presentan las mutaciones g.14917delT o g.12573C>T, recientemente descritas en el exón 10 del gen enamelina (ENAM)”. Para llevar a cabo el estudio, se realizó un examen clínico a varios miembros afectados y no afectados de las familias participantes y a dos sujetos control. El diagnóstico clínico se basó en los criterios de la clasificación de Witkop CJ. y consideró los datos anamnésicos, clínico- radiográficos, histopatológicos y genealógicos de los sujetos examinados. La detección de las dos mutaciones del gen ENAM se realizó, mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y secuenciación directa de fragmentos de ADN de sujetos afectados de cada familia. 5 Las secuencias obtenidas se compararon con la secuencia de referencia del gen ENAM, usando un programa computacional. El análisis evidenció que no existían alteraciones de bases en relación a la secuencia de referencia del gen, descartándose la presencia de las mutaciones g.14917delT y g.12573C>T en el ADN genómico de los sujetos afectados de las cuatro familias analizadas. Tampoco se detectaron otras variantes de secuencias del gen ENAM en estos individuos. Estos resultados permiten descartar en estas familias, la presencia de todas las mutaciones reportadas hasta la fecha en el gen ENAM. Sin embargo, no se puede descartar la presencia de otras mutaciones en regiones de este gen no analizadas, ya sea codificantes, intrónicas o regulatorias, ni tampoco la presencia de alteraciones en otros genes causales o candidatos, o en genes aún no descritos. Los resultados de este trabajo refuerzan el hecho de que las AI son un grupo de desórdenes hereditarios de manifestación genética heterogénea, y que a pesar de ser una patología de baja prevalencia, es necesario estudiar porque ocasiona problemas estéticos, funcionales, psicológicos y sociales a los individuos que la portan