MicroRNAs que regulan la expresión de los factores de transcripción SNAIL, SLUG, ZEB1 Y TWIST reprimen la invasión, la migración y la proliferación celular en cáncer de mama.

El cáncer de mama se clasifica en distintos subtipos tumorales, cada uno de los cuales presenta diferentes características moleculares y clínicas, en especial en relación a la aparición de una metástasis y la sobrevida general. Por su parte, la metástasis corresponde a la primera causa de muerte por cáncer, siendo uno de los temas de mayor interés hoy para la investigación en cáncer. Una de las primeras evidencias de metástasis en cáncer de mama es la presencia de tumores en los nodos linfáticos cercanos al tumor, cuya detección es importante, ya que determina el tratamiento al cual será sometida la paciente. A nivel molecular, la metástasis inicia con un cambio fenotípico de las células, denominado transición epitelio-mesénquima, el cual es inducido por los factores de transcripción SNAIL, SLUG, ZEB1 y TWIST. Debido a que estos cambios en la célula deben ser plásticos y reversibles, las alteraciones epigenéticas se han visto involucradas en la transición epiteliomesénquima. Los microRNAs tienen la habilidad de regular varios genes involucrados en el desarrollo del cáncer y en la metástasis, por lo tanto, han surgido como marcadores moleculares y posibles blancos de terapia. En esta tesis se propuso identificar microRNAs, cuya expresión se encuentra alterada en cáncer de mama, y que participan en el desarrollo de la metástasis a través de la regulación de SNAIL, SLUG, ZEB1 y TWIST. Para este propósito, se realizó inmunohistoquímica en 101 tumores de mama con el fin de determinar la expresión de estos cuatro factores de transcripción. Esta información fue combinada con datos de microarreglos de expresión de microRNAs previamente realizados en este grupo de tumores. De esta forma, se identificaron 94 microRNAs que se encuentran sub-expresados en tumores con expresión de SNAIL, SLUG, ZEB1 y TWIST. Mediante análisis in silico se encontró que 33 de estos microRNAs se encuentran predichos como reguladores de la expresión de estos factores de transcripción, y seis fueron seleccionados para su validación: miR-196a, miR-202, miR-210, miR-22, miR-331 y miR-34b. Mediante ensayos de gen reportero luciferasa se confirmó la regulación de estos microRNAs sobre los blancos predichos in silico, excepto para miR-34b que no mostró efecto. Además, estos microRNAs son capaces de disminuir la migración, la invasión y/o la proliferación de la línea celular MDA-MB-231, demostrando ser microRNAs anti-metastásicos. Dos de los microRNAs analizados, miR-196a y miR-22, disminuyen los niveles endógenos de ZEB1 en el modelo celular utilizado, confirmando por primera vez a este factor de transcripción como un blanco de regulación de estos dos microRNAs en cáncer. Adicionalmente, demostramos mediante distintas aproximaciones que miR-196a, miR-202 y miR-30a regulan los niveles de CCR7, receptor de quimioquinas involucrado en la migración específica de las células hacia los nodos linfáticos. Nuestros resultados sugieren que la pérdida de expresión de los microRNAs miR-196a, miR-202, miR-210, miR-22, miR-331 y miR-34b en cáncer de mama contribuye a la formación de metástasis en los linfonodos, mediante el aumento de las características metastásicas de las células tumorales y/o de su migración dirigida hacia los nodos linfáticos cercanos al tumor.