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Efecto del micrositio en una plantación de olivillo, petrillo y canelo en el Parque Nacional de Fray Jorge.

El bosque de Fray Jorge corresponde a una comunidad boscosa laurifoliada heterogénea que, debido a su uso histórico y a un eventual cambio climático, se encuentra en estado de degradación. Por esto, la Corporación Nacional Forestal ha realizado plantaciones experimentales con vegetación del lugar. Esta investigación tiene el propósito de estudiar el efecto de las condiciones del micrositio sobre el establecimiento de una plantación de olivillo, petrillo y canelo. El área de estudio se ubicó hacia el norte del Parque Nacional Fray Jorge en un sector boscoso mal conservado y fuertemente fragmentado. En el área de estudio se estableció una plantación mixta con las tres especies dominantes del dosel arbóreo del bosque: olivillo (Aextoxicon punctatum), petrillo (Myrceugenia correifolia) y canelo (Drimys winteri). La preparación del suelo se realizó mediante el método puntual de casillas. La plantación se estableció ubicando cada planta en un sitio protegido por plantas nodrizas de la vegetación natural del lugar. Se estudió el ambiente del sector de plantación mediante un análisis de información mutua. Además, se evaluó el crecimiento y nivel de daño de las plantas después de una temporada de crecimiento. Se concluyó que los factores de mayor información mutua especie – descriptor fueron litera, ubicación cardinal de la protección vertical, forma protección lateral interna y ubicación radial de la protección vertical. De las tres especies plantadas olivillo obtuvo la mayor sobrevivencia y crecimiento, luego petrillo y finalmente canelo fue la especie peor evaluada. El análisis de regresión múltiple reveló que las respuestas estudiadas para las tres especies se encuentran más asociadas al tamaño y calidad inicial de las plantas que al efecto aportado por los descriptores ambientales.
Caracterización del combustible en plantaciones de pino radiata sometidas a diferentes esquemas de manejo. Estudios de caso: Empresa Forestal Monteaguila S. A.

La presente memoria está referida a la caracterización de los niveles de peligro que representan los materiales vegetales dispuestos en plantaciones de pino radiata sometidas a diferentes esquema de manejo. Para lo cual se aborda el estudio de las propiedades físicas y la resistencia al control existentes, como base para su posterior calificación como modelos de combustibles. Todo ello, con el propósito de facilitar la toma de decisiones para prevenir la ocurrencia y propagación de incendios forestales por medio del Manejo de los Combustibles.
Evaluación de un ensayo de silvicultura intensiva en plantación de pino insgine (Pinus radiata D. Don) en un suelo arenoso de la VIII Región.

Este estudio consistió en realizar una evaluación de un ensayo de silvicultura intensiva, en una plantación de pino insigne (Pinus radiata D. Don) en un suelo arenoso de la VIII región. El tipo de suelo corresponde a la serie Coreo.
Crecimiento en la altura de renovales de Lenga (Nothofagus pumilio (Poepp. er Endl.) Krasse) en Monte Alto (XII Región) en función de la calidad del sitio.

En este trabajo se estudió el crecimiento de un renoval de lenga según la calidad de distintos sitios estimada por la altura de los árboles remanentes de un floreo antiguo. También se propusieron metodologías alternativas para estimar este crecimiento: análisis de clúster y agrupación en zonas geográficas.
Síntesis y evaluación farmacológica de nuevos derivados piperazinil benzo[b]tiofenos con potencial afinidad serotoninérgica por el receptor 5-HT1A

La depresión constituye un trastorno del estado anímico, que se expresa con una pérdida manifiesta del interés o de las actividades placenteras del vivir, atribuidas fundamentalmente a una alteración en la neurotransmisión serotoninérgica. En esta tesis, se abordó la síntesis y ensayos farmacológicos exploratorios de nuevos derivados de piperazinil benzo[b]tiofenos como potenciales ligandos del receptor serotoninérgico 5HT1A. Específicamente, se sintetizaron los derivados (I), (II) y (III), por reacción de adición de Michael asistida por microondas de derivados de benzotiofenopiperazinas sobre el aceptor de Michael: 1-(4,7-dimetoxibenzo[b]tiofen-2-il)-2-propen-1-ona. Los compuestos I, II y III fueron obtenidos con buenos rendimientos (75 – 86%) y en cortos periodos de reacción. La afinidad de los nuevos compuestos sintetizados por los receptores serotoninérgicos, fueron evaluados in vitro mediante ensayos de competencia frente al radioligando 3[H]-8-OH-DPAT en homogenizado de corteza cerebral de rata. Todos los ligandos estudiados desplazaron menos del 50% de la unión, a la concentración establecida de 1 μM, exhibiendo una afinidad moderada por el sitio de unión para los compuestos I= 32%, II = 14% y III = 39% y una baja afinidad para el compuesto IV = 1.6%, en comparación con el 92% de desplazamiento de la unión que exhibió el ligando 8-OH-DPAT a la misma concentración
 Depression is a common mental disorder consisting in depressed mood with a lack of interest and pleasure in activities of daily living and mainly attributed to a disorder in the serotonergic neurotransmission. The present thesis encompassed the synthesis and pharmacological assays of new piperazinyl benzothiophenes as potential 5-HT1A receptor ligands. The synthesized compounds (I), (II), (III), were obtained by a microwave – assisted Michael addition reaction of piperazine benzothiophenes in the presence of 1- (4,7-dimetho-xybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-propen-1-one acting as Michael’s acceptor. Compounds (I-III), were obtained in good yield (75-86%), with short reaction times. The affinity of the new compounds, was evaluated in vitro through radioligand binding assays, carried out in homogenized rat cerebral cortex, using 3[H]-8-OH-DPAT as standard radioligand. The studied compounds showed a moderate affinity I: 32%, II = 14% y III = 39% and 1.6% (IV) against the 92% displacement exhibited for the 8-OHDPAT
Manejo de los factores condicionantes de la formación de acrilamida durante la elaboración de papas fritas tipo chips

El consumo de papas fritas, que mundialmente crece generando grandes volúmenes de venta y que representa un negocio con perspectiva de seguir desarrollándose aún más, se ve violentamente amenazado a partir del momento en que las investigaciones científicas del área alimenticia, anuncian la presencia de fuertes cantidades de acrilamida (AA) en aquellos alimentos ricos en carbohidratos y sometidos a altas temperaturas como son el hormeo y la fritura. El presente estudio tuvo por tanto como finalidad ir en la búsqueda de menores valores de AA en papas fritas tipo chips. Se estudió por tanto, el efecto de diferentes tratamientos aplicados antes de la fritura, como también el provocado por distintas temperaturas de fritura empleadas. Las temperaturas estudiadas fueron de 120, 150 y 180º C; los pre-tratamientos fueron el escaldado, la inmersión en ácido cítrico 1% y un tratamiento combinado de éstos dos últimos. También se estudió la posible incidencia de incorporar en el flujo de trabajo, un lavado con agua destilada durante 1 min. Los resultados indicaron que lavar con agua destilada, significó la reducción del aminoácido asparragina en un 42%, de los azúcares reductores en un 28% y de AA en papas fritas en un 15%. Los pre-tratamientos también afectaron el contenido final de AA, siendo el más drástico de ellos, el pre-tratamiento escaldado/ácido cítrico 1%; es decir, aquel que condujo a un descenso mayor en la cantidad final de AA, que para la temperatura de 180º C fue un 48%, para 150º C un 94% y para 120º C se logró un descenso de un 71%. Al comparar los resultados logrados por las distintas temperaturas, se apreció que en el pre-tratamiento control, el descenso de temperatura (desde 180 a 120º) significó una reducción del contenido de AA de un 78%; cuando se realizó escaldado, el descenso logrado fue un 89%; de un 94% cuando se aplicó la inmersión en ácido cítrico 1% y de un 88% en el pre-tratamiento combinado Por tanto, al comparar el efecto de los pre-tratamientos con el de bajar la temperatura el resultado es mucho menor con éste último factor. Ambos métodos juntos darían el óptimo esperado. El test de aceptabilidad arrojó que la mayor aceptabilidad correspondió a las papas chips con más alto contenido de AA, por tratarse de un producto parecido a la oferta habitual del mercado y aquellas con menor contenido de AA obtuvieron la valoración “ni me gusta ni me disgusta”, lo cual indica que hay factores sensoriales que se podrían mejorar para modificar su aceptabilidad. En esta tesis fue posible reducir tanto el nivel de precursores de la AA en la materia prima, como también el contenido de AA en las papas fritas tipo chips
Generación y caracterización de células dendríticas tolerogénicas en pacientes con artritis reumatoide

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad sistémica autoinmune que se caracteriza por la inflamación crónica y progresiva de las articulaciones sinoviales llevando a la destrucción del cartílago y hueso articular. En la AR existe consenso que el proceso autoinmune involucra una presentación anormal de auto-antígenos por parte de células presentadoras de antígeno o células dendríticas (DC), que llevaría a la activación de células T CD4+ auto-reactivas, secretoras de interferón gamma e interleuquina (IL)-17, que inducen en los macrófagos, la secreción de IL-1, IL-6 y factor de necrosis tumoral Durante la última década, el desarrollo de técnicas para generar gran número de DC in vitro junto con el entendimiento del rol de las DC en la tolerancia periférica, han permitido producir DC con propiedades tolerogénicas y reguladoras. En este contexto, en esta Tesis se generaron in vitro DC de pacientes AR a partir de células mononucleares de sangre periférica (PBMC), mediante el cultivo en presencia de IL-10 se buscó generar DC con propiedades tolerogénicas. Estas células se caracterizaron fenotípicamente mediante citometría de flujo y morfológicamente mediante microscopía confocal, además se caracterizaron en cuanto a expresión de citoquinas proinflamatorias y antiinflamatorias; por último se realizaron ensayos funcionales in vitro de fagocitosis de inhibición de la alo-proliferación. Como resultado, se generaron DC de pacientes AR con características tolerogénicas utilizando IL-10, estas células poseen una menor expresión en superficie celular de los marcadores CD83, CD40 y CD86 y las moléculas MHC clase II con relación a las DC maduras. Expresan en su superficie el receptor de quimioquinas CCR7, lo cual nos indica que son células con capacidad de migración a órganos linfoides secundarios. El uso de IL-10 permite generar DC productoras de TGF e IL-10, con una baja producción de IL-12 en relación a las DC maduras. Por último, estas DC poseen una elevada capacidad endocítica y una disminuida capacidad de inducción de alo-proliferación. También es importante destacar que estas DC no difieren a las generadas a partir de PBMC de individuos normales en cuanto a las características fenotípicas y funcionales ya mencionadas. Por lo tanto, estos resultados sugieren que en los pacientes AR, las DC se pueden modular hacia un fenotipo tolerogénico, lo cual podría transformarse en una estrategia terapéutica a considerar.
Rol de la insulina en la vía neural hipotálamo-ovario en un modelo de ovario poliquístico inducido por estrés crónico

El estrés crónico, en combinación con la sobrealimentación y la falta de ejercicio, contribuye al desarrollo del síndrome metabólico, aumentando el riesgo de enfermedades cardiovasculares y diabetes tipo 2. Se ha demostrado que el estrés afecta a cada componente del síndrome metabólico y entre ellos, al síndrome de ovario poliquístico (SOP), principal causa de infertilidad en mujeres en edad fértil. Hemos descrito que el estrés por frío crónico en ratas provoca cambios morfológicos en los folículos ováricos similares a los encontrados en el SOP. Para conocer si este modelo de estrés está asociado a cambios metabólicos, determinamos la sensibilidad a insulina y el efecto de esta hormona sobre la actividad nerviosa ovárica (factor involucrado en la génesis y mantención del SOP) y por ende, si el estrés es un factor potencial en el desarrollo del SOP. A nivel metabólico, los animales sometido a estrés por frío crónico aumentaron la sensibilidad a la insulina, determinada mediante el clamp hiperinsulinémico euglicémico. Al mismo tiempo, estos animales aumentaron su ingesta alimenticia, manteniendo la misma ganancia de peso que sus respectivos controles. La actividad nerviosa simpática ovárica aumentó cuando los ovarios de animales control fueron incubados con insulina, sin embargo, no hubo cambio en los ovarios de ratas estresadas. Estos resultados sugirieron una resistencia a la insulina tejido específico, la cual fue apoyada al determinar el nivel de mRNA y proteína IRS-1 y GLUT-4. Ambas moléculas de la ruta de señalización intracelular de insulina, disminuyeron en los ovarios de las ratas sometidas a estrés, siendo las células de la teca-intersticial en las que se observó preferencialmente esta disminución. Al administrar insulina intracerebroventricular (ICV), la actividad nerviosa ovárica no fue modificada, ni ocurrieron cambios en el desarrollo folicular, sin embargo, las ratas estresadas infundidas con insulina ICV no disminuyeron la ganancia de peso, la glicemia ni la insulinemia, como lo hicieron sus respectivos controles, apoyando una pérdida de sensibilidad a insulina hipotalámica inducida por el estrés. Los resultados obtenidos en este trabajo demuestran que el estrés por frío crónico intermitente provoca una resistencia a la insulina que es tejido específica, y que la insulina tiene un efecto estimulador de la actividad nerviosa simpática ovárica. Probablemente, la resistencia insulínica en ovario e hipotálamo son en parte responsables de los cambios en la función reproductiva y metabólica de la condición poliquística inducida por estrés crónico.
Síntesis y actividad biológica de posibles moduladores del receptor nicotínico de acetilcolina

Los receptores nicotínicos de acetilcolina (RnACo están distribuidos a través del sistema nervioso central (SNC) y el sistema nervioso periférico (SNP), siendo los mejor estudiados los de la placa neuromuscular. Además de su localización en neuronas, los RnACo son encontrados en células endocrinas y en células clásicamente no excitables. En 2004 se reportó que los alcaloides desformilflustrabromina (1) y N1 -prenildesformilflustrabromina (2) aislados del briozoo Flustra foliacea presentaron afinidad por el RnACo en ensayos de desplazamiento de radioligando. Lo más interesante de este estudio fue la selectividad de estos compuestos frente a los subtipos α4β2 y α7, ya que 1 fue activo frente al primer subtipo pero inactivo frente al segundo, mientras que 2 fue inactivo frente al primer subtipo y activo frente al segundo. En trabajos más recientes se demostró que 1 actúa como modulador alostérico positivo frente al subtipo α4β2, y actúa como antagonista frente al subtipo α7, mientras que 2 actúa como antagonista del subtipo α4β2 y es un modulador alostérico positivo del subtipo α7. En este trabajo se presenta la síntesis de estos alcaloides así como sus derivados desbromados, una serie de graminas, triptaminas y homotriptaminas relacionadas con ellos y sus yodometilatos. Los compuestos sintetizados fueron ensayados por la metodología de desplazamiento del radioligando (±)-[3H]epibatidina para determinar su afinidad por el RnACo, subtipo α4β2. Los compuestos que presentaron mayor afinidad por el RnACo, subtipo α4β2 fueron los yodometilatos que en su mayoría exhibieron valores de Ki submicromolares. Los más activos fueron ensayados en células que expresan el RnACo, subtipo α9α10 utilizando la metodología de fijación de voltaje con dos electrodos, la que permitió establecer que éstos actúan como antagonistas de este receptor. Se realizaron también estudios de modelamiento molecular por medio de “docking” para establecer el posible sitio de unión de los compuestos activos en el RnACo, subtipo α4β2 de los cuales se puede inferir que el sitio de unión sería similar al reportado en la literatura para carbamilcolina y nicotina. Simulaciones de dinámica molecular del RnACo, subtipo α9α10 con acetilcolina, nicotina y α-conotoxina RgIA arrojaron resultados que permiten postular la identidad de los residuos aminoacídicos importantes en la interacción de estos ligandos con el receptor.
Caracterización de la isla genómica IG-asnT de Salmonella enterica y su papel en la interacción del serovar Enteritidis con macrófagos murinos

Salmonella Enteritidis es actualmente el serovar de Salmonella más prevalente a nivel mundial. Mediante el análisis bioinformático de los genomas de distintos serovares de Salmonella identificamos una región genómica que se encuentra presente en S. Enteritidis, así como en S. Gallinarum y S. Dublin (serovares filogenéticamente cercanos a S. Enteritidis). Esta región corresponde a una Isla de Patogenicidad, la cual denominamos IG-asnT. Resultados obtenidos en nuestro laboratorio sugieren que varias de las proteínas codificadas en IG-asnT de S. Enteritidis participarían en la colonización de órganos internos de ratón en un modelo de virulencia in vivo. Entre ellas se encuentran proteínas estructurales de un pilus tipo IV (SEN1977), una proteína involucrada en movilización de plasmidios (SEN1980) y TlpA (TIR-like protein A), la cual presenta un dominio con homología a proteínas que participan en respuestas inflamatorias de células del sistema inmune. Debido a que la capacidad de Salmonella para sobrevivir en los macrófagos de su hospedero es un factor indispensable para su diseminación sistémica y la posterior colonización de órganos blanco, en este proyecto nos propusimos determinar si la isla IG-asnT codifica productos génicos que cumplen un papel en la interacción de S. Enteritidis con macrófagos murinos y definir si al menos uno de ellos participa en la producción y/o secreción de la proteína TlpA. Para esto, se estudió la capacidad de varias mutantes de genes presentes en IG-asnT para sobrevivir al interior de macrófagos murinos, de las cuales las mutantes SEN1977, SEN1980 y tlpA presentaron una capacidad disminuida de supervivencia en estos macrófagos en comparación a la cepa silvestre. Por otra parte, nuestros resultados indican que tlpA participa en el proceso que lleva a la muerte celular de los macrófagos infectados con S. Enteritidis. Pudimos determinar que TlpA se produce en distintas condiciones de cultivo in vitro, además de expresarse al interior de los macrófagos infectados. El resto de los genes presentes en la isla no participan en la expresión ni en la producción de la proteína TlpA en las condiciones estudiadas. Estos resultados entregan nueva evidencia sobre factores de virulencia de S. Enteritidis involucrados en su adaptación a células hospederas, que podrían explicar en parte su prevalencia sobre otros serovares.
Estudio de regulación de ligandos de NKG2D por interleuquina 10 y su asociación con calreticulina, en trofoblasto y melanoma humano

NKG2D (Natural Killer Group 2, type D) es un receptor de activación de las células Natural Killer de sangre periférica (NK), uterinas (uNK) y TCD8+ humanos. Son ligandos de NKG2D (NKG2DL), las proteínas relacionadas con la cadena alfa del complejo principal de histocompatibilidad de clase I A y B (MICA y MICB) y las proteínas de unión a UL16 (ULBPs). Se han descrito variados mecanismos relacionados con la evasión tumoral y con la tolerancia fetal que involucran el control de la síntesis de los NKG2DL, los cuales se expresan principalmente en la superficie de células diana en situaciones de estrés, infección intracelular o transformación maligna. Hay antecedentes que indican que la sobreexpresión de moléculas chaperonas puede alterar el nivel de expresión en la superficie celular de proteínas de membrana, como también algunas citoquinas pueden reducir la expresión de los NKG2DL. Se postula que Calreticulina (CRT) se asocia con las moléculas MICA en células de trofoblasto y en melanoma maligno y que la expresión de los ligandos MICA está influenciada por la Interleuquina 10 (IL-10) en melanoma maligno. Mediante análisis histológicos y microscopía confocal se determinó la superposición de MICA y MICB con calreticulina, calnexina y Erp57. Además, se detectó co-inmunoprecipitación de CRT y MICA. Ambos estudios realizados en cultivos celulares de trofoblasto humano de primer trimestre y en líneas de melanoma maligno humano. Sin embargo no se detectó interacción directa entre CRT-MICA recombinantes mediante análisis de afinidad por BIAcore. Se analizó la expresión de NKG2DL y la relevancia funcional en líneas celulares humanas de melanoma en respuesta al estímulo con Interleuquina 10. Se utilizaron líneas de células malignas del melanoma tratadas con IL-10 para analizar MICA/B mediante qRT-PCR y citometría de flujo. Se demostró que IL-10 disminuye la expresión en la superficie de células de melanoma de MICA, pero no MICB. También se indicó que la regulación de MICA se produce a nivel de mRNA, de forma dosis dependiente tanto de citoquina humana recombinante como de la variante viral de la IL-10. Este estudio reveló además que la disminución la MICA por IL-10 conduce a la reducción de la lisis mediada por células citotóxicas in vitro. Esta tesis contribuye al conocimiento de las moléculas responsables del plegamiento y retención intracelular de los NKG2DL, así como al papel de la IL-10 en la expresión de NKG2DL, ambos mecanismos propios de la evasión inmune tumoral y de la tolerancia fetal.