Análisis de polimorfismos genéticos del gen NOD2/CARD 15 y TLR4, asociados a enfermedades Inflamatorias Intestinales (EII) en pacientes chilenos

La Enfermedad de Crohn (EC) y la Colitis Ulcerosa (CU) enfermedades inflamatorias intestinales (EII) multifactoriales que presentan una relación genética importante. Recientemente se han descrito polimorfismos en los genes de los receptores de reconocimiento de patógenos NOD2/CARD15 y Toll tipo 4 (TLR4), que estarían involucrados en la patogénesis de las EII. No existen antecedentes descritos acerca de la frecuencia de estos polimorfismos en población latinoamericana El objetivo principal de esta tesis es determinar la frecuencia de polimorfismos Asp299Gly de TLR4 y L1007fsinC, Arg702Trp, Gly908Arg de NOD2/CARD15 en un grupo de pacientes chilenos portadores de EII. Se estudiará DNA obtenido de sangre periférica de 44 pacientes con EII (22 EC, 22 CU) y 20 controles sanos. Los polimorfismos se determinaron mediante PCR-RFLP o PCR alelo específico. Se caracterizaron ademas características clínicas y demográficas. Dentro de los pacientes diagnosticados con EC, encontramos un patrón clínico inflamatorio en 14 de ellos, 5 pacientes presentaron un fenotipo penetrante y 5 desarrollaron estenosis, en cuanto a la localización de la enfermedad en EC, un individuo manifiesto compromiso esofágico, 5 presentaron daño perianal, 7 con compromiso de íleo y 16 pacientes mostraron compromiso colónico. Pacientes diagnosticados con CU, 2 de ellos presentaron proctitis, 2 proctosigmoiditis, 4 colitis izquierda y 14 desarrollaron pancolitis. El análisis genético de NOD2/CARD15 reveló la presencia del alelo Arg702Trp, L1007fsinsC y Gly908Arg, en dos pacientes con EC, uno con EC y uno con CU, respectivamente. El alelo mutado del polimorfismo Asp299Gly del gen de TLR4 fue identificado en dos pacientes uno con EC y uno con CU. PCR y PCR-RFLP es una técnica sensible y confiable, y es considerado un excelente método de detección de polimorfismos. Este es el primer estudio genético realizado en pacientes chilenos con EII, donde se demuestra que los alelos asociados con estas patologías se presentan con una frecuencia equivalente a grupos europeos según lo publicado en estudios anteriores. Sin embargo, factores ambientales u otros polimorfismos genéticos podrían estar involucrados en la patogénesis de EII en nuestra población
 Crohn’s disease (CD) and ulcerative colitis (UC) are multifactorial diseases with a genetic background. Genes related to the innate immune response have been observed to be involved. Polymorphisms of Toll-like receptor 4 (TLR4) and CARD15/NOD2 are thought to be involved in the pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD). There is no information about the frequency of these polymorphisms in South American and Chilean populations. The main subject of this thesis is investigate the distribution of NOD2/CARD15 (Arg702Trp, Gly908Arg and Leu1007fsinsC) and TLR4 (Asp299Gly) polymorphisms in Chilean patients with IBD. DNA was obtained from 22 CD, 22 UC patients and 20 healthy individuals. Genotyping was performed by allele-specific PCR and by PCR-RFLP analysis. Clinical and demographic features were characterized. Among the CD patients, the clinical pattern was deemed inflammatory in 14, while five had penetrating and five stricturing, variants. One patient had esophageal involvement, five perianal, seven ileal and in 16 the colon was involved. Among the UC patients, two had proctitis, two proctosigmoiditis, four left-sided colitis and 14 pancolitis. NOD2/CARD15 analysis revealed the presence of the Arg702Trp allele in two CD patients (both Heterozygotes), L1007fsinsC in one CD patient (heterozygote) while Gly908Arg was found in one UC patient. The Asp299Gly TLR4 allele was identified in one UC and one CD patient. PCR and RFLP-PCR is a sensitive and reliable technique, and it is consider an excellent method to detecting genetics polymorphisms. This genetic study shows that the alleles frequently associated with IBD (L1007fsinsC, Gly908Arg and Arg702Trp in NOD2/CARD15 and Asp299Gly TLR4) have a low incidence in Chilean, IBD patients, which is similar to European populations. It is possible that, in addition to environmental factors, other genetic polymorphisms may be involved in the pathogenesis of the disease in Chilean, IBD patients