Willemse, Danicke (2013-03)
AFRIKAANSE OPSOMMING: Multi-middel weerstandige tuberkulose (MDR-TB) word gedefinieer as weerstandigheid tot ten minste rifampisien (RIF) en isoniasied, wat deel van die eerstelyn anti-tuberkulose behandeling vorm. Mutasies in die rpoB geen, wat die β-subeenheid van die RNA polimerase enkodeer, word geassosieer met RIF weerstandigheid. S531L en H526Y rpoB mutasies kom die algemeenste voor. RIF weerstandigheids vlakke verskil egter tussen isolate met identiese rpoB mutasies, wat impliseer dat ander faktore ook 'n rol in RIF weerstandigheid speel. 'n Toename in transkripsie van die Rv1258c geen, wat 'n multi-middel effluks pomp enkodeer, is waargeneem met blootstelling aan RIF, slegs in sommige M. tuberculosis H37Rv RIF mono-weerstandige mutante and MDR kliniese isolate, maar nie in ander nie. Die faktore wat die induksie van die Rv1258c effluks pomp beïnvloed is nie goed nagevors nie. Die studie ondersoek die effek van die rpoB mutasies op die uitdrukking van die Rv1258c en whiB7,'n transkripsionele regulator van Rv1258c, gene in M. tuberculosis H37Rv in vitro gegenereerde RIF weerstandige mutante, in die teenwoordigheid en afwesigheid van RIF. Die promotor area van die M. tuberculosis H37Rv Rv1258c geen is in 'n posisie stroomop van 'n lacZ geen, wat vir β-galaktosidase enkodeer, in multi-kopie episomale en integreerende vektors ingekloneer. Die funksionaliteit van die vektor en effek van rpoB mutasies op Rv1258c promotor aktiwiteit is ondersoek in die naverwante nie-patogeniese spesies, M. smegmatis en daarna in M. tuberculosis deur β-galaktosidase essais te doen. qRT-PCR is gedoen om die effek van rpoB mutasies op die vlak van transkripsie van die natuurlike Rv1258c geen en die whiB7 geen te bestudeer. Beide die episomale en integreerende vektors was funksioneel en daar is besluit om die integreerende vektor vir daaropeenvolgende β-galaktosidase essais in M. tuberculosis te gebruik. Rv1258c promotor aktiwiteit van die S531L mutant was ongeveer 1.5 keer minder as en die van die H526Y mutant 1.5 keer hoër as die van die ongemuteerde bakterië in M. smegmatis. Soortgelyk was die Rv1258c promoter aktiwiteit van die S531L mutant ongeveer die helfde van en die van H526Y mutant ongeveer dubbel die van die ongemuteerde bakterië in M. tuberculosis 'n Soortgelyke neiging in die vlakke van Rv1258c en whiB7 transkripte van die natuurlike geen is gedurende qRT-PCR waargeneem alhoewel die verskille nie beduidend was nie. Blootstelling aan sub-inhibitoriese konsentrasies van RIF het geen effek op Rv1258c uitdrukking in die M. smegmatis of M. tuberculosis rpoB mutante gehad nie. Die rpoB mutasies het net 'n effense effek op Rv1258c en whiB7 transkrip vlakke in M. tuberculosis rpoB mutante, maar transkrip vlakke het 'n soortgelyke neiging as die Rv1258c promoter aktiwiteit getoon. Of die waargenome verskille biologies betekenisvol is, moet nog bepaal word. Indien effluks pompe as teikens vir bahandeling gebruik sou word, moet in ag geneem word dat effluks pompe moontlik verskillend uitgedruk word in verskillende rpoB mutante.
Please refer to this item in SUNScholar by using the following persistent URL: http://hdl.handle.net/10019.1/79820
Masters Degrees (Molecular Biology and Human Genetics)